CN104530256A - 透明质酸维生素e琥珀酸酯聚合物及其制备和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物及其制备和用途。具体地，透明质酸维生素E琥珀酸聚合物是维生素E琥珀酸酯通过双胺基桥链连接到主链透明质酸上，所述聚合物具有如下所示的结构式I。该维生素E琥珀酸酯安全性高、临界胶束浓度低、生物相容性好；制备工艺简单，易于大规模生产；同时载体材料在水性介质中能自组装形成胶束，可作为难溶性药物、基因、蛋白质药物口服或静脉注射给药的载体，具有较大的市场应用前景。

Description

透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物及其制备和用途

技术领域

本发明涉及一种聚合物，具体涉及一种透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物及其制备和用途

背景技术

肿瘤是影响人类健康的恶性疾病，近三十年来，世界癌症发病率以每年3-5％的速度增加。目前肿瘤的治疗策略是以化疗、手术切除、放疗和生物治疗等手段的综合治疗。其中药物化疗是治疗肿瘤应用最为广泛的手段，但是由于药物的毒副作用，在治疗的同时正常组织也受到严重的影响。如何提高化疗药物对肿瘤组织的选择性、减少其在正常组织的分布、降低其毒副作用、提高药物生物利用度是提高抗肿瘤化疗药物疗效的关键。

现有技术中针对药物的靶向性已经开发了多种药物载体，其包括：CN104056275A公开了透明质酸-聚乳酸载体的合成及其抗肿瘤药物胶束的制备方法和应用，CN103877066A公开了载多西他赛和莱菔硫烷的透明质酸修饰的聚乳酸羟基乙酸聚合物自组装纳米粒，CN104116709A公开了靶向肿瘤的抗肿瘤耐药的pH敏感聚合物胶束组合物，其中包含了疏水链段可以选自维生素E琥珀酸酯，亲水链段为具有pH敏感性的聚(2-烷基-2-噁唑啉)。但是其均存在合成困难、靶向性差，生物利用度低、疗效差等问题。

为了克服上述问题，本发明提供一种靶向性高，毒副作用低同时还具有一定抗肿瘤作用的药物载体，本发明人在现有技术中寻找可以用于载体的成分时发现了透明质酸(hyaluronic acid,简称HA)，又名“玻璃酸”，其是广泛分布于软结缔组织细胞外基质中的一种线性大分子酸性黏多糖，由葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖的双糖单元反复交替构成。

透明质酸具有低免疫原性，良好的生物相容性和生物可降解性，可以在体内调控细胞和分子的渗透以及某些细胞的分化。目前，由于透明质酸独特的理化性质和生物学特性，除了广泛应用于美容、保健、化妆品、临床医学等领域外，还广泛用于靶向递药系统载体材料的研究。透明质酸能与肿瘤细胞表面的透明质酸受体(CD44)特异性结合，因而，作为抗癌药物的靶向载体，透明质酸能更好地使药物进入到肿瘤组织，提高抗癌药物在肿瘤部位的聚集，从而有效地抑制肿瘤细胞的生长。

维生素E琥珀酸酯是天然维生素E的衍生物，能抑制肿瘤的增殖和分化，选择性地诱导肿瘤细胞凋亡，但对正常细胞和组织并没有杀伤能力。同时维生素E琥珀酸酯疏水性较强，目前市售的聚乙二醇维生素E琥珀酸酯的协同抗肿瘤作用，主要就是应用维生素E琥珀酸酯的抑制肿瘤作用以及其疏水性。

基于以上背景技术，本发明以透明质酸为亲水端，维生素E琥珀酸酯为疏水端，合成了透明质酸-桥链-维生素E琥珀酸酯的聚合物，其不但具有协同抗肿瘤作用，还具有CD44靶向性，并能装载活性药物，自组装形成纳米给药系统，应用于肿瘤的治疗。将该聚合物应用于靶向给药系统中，具有广阔的发展前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物，维生素E琥珀酸酯通过双胺基桥链到主链透明质酸上，该聚合物具有如下所示的结构式I：

其既具有透明质酸的CD44靶向性，还具有维生素E琥珀酸酯的协同抗肿瘤作用，同时由于透明质酸是亲水性的，而维生素E琥珀酸酯是疏水性的，因而该聚合物具有两亲性，能在水性介质中自组装形成纳米给药系统。

本发明的又一目的在于提供上述透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物的制备方法。

本发明的另一目的在于提供上述透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物在制备药物载体以及在制备用于抗肿瘤药物的用途。

本发明的再一目的在于提供一种靶向治疗药物，其包含作为药物载体的上述的聚合物，任选地，还包含一种或多种活性成分。

本发明的再一目的在于提供靶向治疗药物在治疗肿瘤药物中的应用。

在本发明的实施方式中，所述结构式中的R代表选自可以为-(CH₂)₂-、-(CH₂)₃-、-(CH₂)₄-、-CH(CH₃)-、-CH₂CH(CH₃)-、-CH(CH₃)CH₂-、-CH₂CH(CH₃)CH₂-等烷基及其类似物中的一种。

在本发明的实施方式中，所述透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯的结构式I’如下：

在本发明的实施方案中，所述透明质酸分子量为5000-200000Da，优选7000-1000000Da，更优选7000-14000Da。具体地，所述透明质酸分子量可以为5000Da、6000Da、7000Da、8000Da、9000Da、10000Da、12000Da、14000Da、16000Da、18000Da、20000Da、30000Da、40000Da、50000Da、60000Da、70000Da、80000Da、90000Da、100000Da、150000Da、200000Da。在本发明的实施方案中，所述维生素E琥珀酸酯在透明质酸上的取代度为1％-99％，优选为1％-50％，更优选为5％-20％，最优选为5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％。

在本发明的实施方案中，透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物的制备方法，包括如下步骤：

a)双胺基桥链-维生素E琥珀酸酯的合成：将维生素E琥珀酸酯溶于溶剂中，在催化剂作用下，与双胺基桥链发生酯化反应，得到双胺基桥链-维生素E琥珀酸酯；

b)透明质酸-双胺基桥链-维生素E琥珀酸酯的合成：将透明质酸溶于无水有机溶剂中，加入催化剂，搅拌至反应结束；然后缓慢滴加至步骤a)所得的双胺基桥链-维生素E琥珀酸酯溶液中，至反应完成后，将反应液转至透析袋中至透析结束，并通过冷冻干燥得到所述聚合物；

优选地，所述催化剂选自1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑和其中至少一种；

具体地，包括如下步骤：

a)乙二胺-维生素E琥珀酸酯的合成：将维生素E琥珀酸酯溶于二氯甲烷，在1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并三唑(Hobt)催化下，与乙二胺20-40℃N₂保护下反应，得到乙二胺-维生素E琥珀酸酯产物。

b)透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯的合成：将透明质酸溶于无水甲酰胺中，加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温搅拌反应2-4h；然后缓慢滴加透明质酸羧基摩尔数5-20倍的a)中所述的维生素E琥珀酸酯的二甲基甲酰胺溶液，50-70℃N₂保护下反应30-60h。反应完成后，将反应液转至透析袋中，室温透析3-5天，通过冷冻干燥得到白色粉末， 即透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯。

更具体地，包括如下步骤：

a)乙二胺-维生素E琥珀酸酯的合成：将维生素E琥珀酸酯溶于二氯甲烷，在1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并三唑(Hobt)催化下，与乙二胺30℃N₂保护下反应，得到乙二胺-维生素E琥珀酸酯产物。

b)透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯的合成：将透明质酸溶于无水甲酰胺中，加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温搅拌反应2-4h；然后缓慢滴加透明质酸羧基摩尔数5-20倍的a)中所述的维生素E琥珀酸酯的二甲基甲酰胺溶液，60℃N₂保护下反应48h。反应完成后，将反应液转至透析袋中，室温透析3-5天，通过冷冻干燥得到白色粉末，即透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯。

优选地，所述透明质酸中的羧基与所述维生素E琥珀酸酯的摩尔比为1：1-40，更优选地为1：5-20，最优选为1：6、1：7、1：8、1：9、1：10、1：11、1：12、1：13、1：14、1：15、1：16、1：17、1：18或1：19。

本发明所述的透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物，具有肿瘤靶向性和协同抗肿瘤作用

本发明所述的透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物，可作为难溶性药物的增溶纳米载体材料，所述纳米药物载体选自胶束、微乳、微球、微囊、纳米粒和固体脂质纳米粒等其中至少一种。其均可以采用本领域常规的方法进行制备。

优选地，形成靶向载药胶束，用于肿瘤治疗。

在本发明的实施方案中，靶向治疗药物包含本发明的聚合物，任选地，还包含一种或多种活性成分，优选所述活性成分选自抗肿瘤药物、基因或蛋白，更优选所述活性成分为阿霉素、紫杉醇、羟基喜树碱、姜黄素、小檗碱和其中的至少一种。

本发明的靶向治疗药物可以用于制备治疗肿瘤药物。

在本发明的实施方案中，所述载药胶束的制备方法包括透析法、乳化法和乳化超声法，其特征在于采用如下步骤：

在本发明的实施方案中，所述透析法是将上述的载体材料和药物同时溶于有机溶剂(如丙酮、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等)，转至透析袋中，蒸馏水透析24h，0.45μm滤膜过滤，得到载药胶束。

在本发明的实施方案中，乳化法是将上述载体材料溶于水中，加入药物的二氯甲烷或丙酮溶液，室温磁力搅拌过夜除去有机溶剂，上清液过0.45μm滤膜，得到澄清载药胶束溶液。

在本发明的实施方案中，乳化超声法是将上述的载体材料溶于水中，加入药物的二氯甲烷或丙酮溶液，室温磁力搅拌过夜除去有机溶剂，冰浴探头超声10min，上清液过0.45μm滤膜，得到澄清载药胶束溶液。

本发明具有以下有益效果：所制备的功能性纳米材料透明质酸维生素E琥珀酸酯，制备过程温和，简单易操作；所制备的纳米材料为生物可降解材料，安全无毒，具有生物相容性；所制备的纳米材料可以通过控制投料比例，而调整疏水性维生素E琥珀酸酯取代亲水性透明质酸分子中羧基的比例，而改变疏水区域所占的大小比例；所制备的载药纳米胶束，制备方法简单易行，粒径均一，包封率高，稳定性好，可作为难溶性药物的储库；所发明的两亲性聚合物具有协同抗肿瘤作用和主动靶向性，能提高肿瘤靶向性，提高抗肿瘤疗效。

附图说明

图1为维生素E琥珀酸酯-乙二胺的¹HNMR谱图。

图2为透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯聚合物的¹HNMR谱图。

图3A-3C为透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯聚合物的临界胶束浓度(图中3A为实施例2制得的聚合物的临界胶束浓度、3B为实施例3制得的聚合物的临界胶束浓度、3C为实施例4制得的聚合物的临界胶束浓度图)。

图4为透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯聚合物对耐药乳腺癌细胞(MCF-7/Adr细胞)的细胞毒性结果柱状图。

图5为载药胶束的动态光散射测定胶束粒径图。

图6为载药胶束在不同pH值条件下的体外释放曲线图。

图7为阿霉素溶液和载药胶束在MCF-7/Adr细胞上摄取结果。

图8为透明质酸对载药胶束在MCF-7细胞上CD44竞争性抑制试验结果。

图9为大鼠尾静脉注射载药胶束(DOX-NP)与阿霉素溶液(DOX-Sol)后的体内药动学曲线图。

图10为静注阿霉素载药胶束与阿霉素溶液后小鼠体内药效学曲线图。

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明，但并不因此将发明限制在所述的实施例中。

实施例1 乙二胺-维生素E琥珀酸酯的合成(NH₂-ED-VES)

维生素E琥珀酸酯(VES，0.53g，1mol)溶于20ml二氯甲烷(DCM)中，置于100ml茄型瓶中。待溶解后，加入在1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI，0.38g，2mol)和1-羟基苯并三唑(HoBt，0.14g，1mol)，冰浴下磁力搅拌1h。加入乙二胺(ED，68μl，5mol)，氮气保护下30℃反应24h。

采用核磁共振测定¹HNMR氢谱来确定实施例1中化合物的结构(如下所示)，选用溶剂为CDCl₃，结果如图1。化学位移为6.5ppm为酰胺键中-NH-CO-中的H，2.5ppm和3.5ppm分别为乙二胺中乙基-CH₂-CH₂-中的H，3.0ppm以下为维生素E琥珀酸酯中的典型H峰。

实施例2 透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯的合成(HA-ED-VES)(维生素E琥珀酸酯的取代度为5％)

HA(140mg，-COOH，0.36mM，M＝7000)溶于5ml无水甲酰胺中，50℃水浴加热磁力搅拌使其溶解，冷却至室温。加入EDC(150mg)和NHS(100mg)，冰浴下磁力搅拌2h。然后将NH₂-ED-VES(400mg，1.40mM)溶于二甲基甲酰胺中，缓慢滴加到HA混合液中。于60℃氮气环境下搅拌反应24h。反应混合液于蒸馏水透析2d，过滤，冷冻干燥，得白色粉末。

采用核磁共振测定¹HNMR来确定实施例2中化合物的结合，采用DMSO-d₆为溶剂，结果如图2所示，化学位移0.8-1.0ppm为维生素E琥珀酸酯中的-CH₃峰，而化学位移1.8-2.0ppm为透明质酸中NHCOCH₃峰。根据维生素E琥珀酸酯的-CH₃峰和透明质酸中NHCOCH₃峰的积分面积之比，得出所制备的透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物中维生素E琥珀酸酯的取代度为5％。

实施例3 透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯的合成(HA-ED-VES)(维生素E琥珀酸酯的取代度为10％)

HA(140mg，-COOH，0.36mM，M＝7000)溶于5ml无水甲酰胺中，50℃水浴加热磁力搅拌使其溶解，冷却至室温。加入EDC(150mg)和NHS(100mg)，冰浴下磁力搅拌2h。然后将NH₂-ED-VES(1.0g，3.50mM)溶于二甲基甲酰胺中，缓慢滴加到HA混合液中。于60℃氮气环境下搅拌反应24h。反应混合液于过量的蒸馏水透析2d，过滤，冷冻干燥，得白色粉末。

采用核磁共振测定¹HNMR来确定实施例3中化合物的结合，采用DMSO-d₆为溶剂，化学位移0.8-1.0ppm为维生素E琥珀酸酯中的-CH₃峰，而化学位移1.8-2.0ppm为透明质酸中NHCOCH₃峰。根据维生素E琥珀酸酯的-CH₃峰和透明质酸中NHCOCH₃峰的积分面积之比，得出所制备的透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物中维生素E琥珀酸酯的取代度为10％。

实施例4 透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯的合成(HA-ED-VES)(维生素E琥珀酸酯的取代度为15％)

HA(140mg，-COOH，0.36mM，M＝7000)溶于5ml无水甲酰胺中，50℃水浴加热磁力搅拌使其溶解，冷却至室温。加入EDC(150mg)和NHS(100mg)，冰浴下磁力搅拌2h。然后将NH₂-ED-VES(1.6g，5.55mM)溶于二甲基甲酰胺中，缓慢滴加到HA混合液中。于60℃氮气环境下搅拌反应24h。反应混合液于蒸馏水透析2d，过滤，冷冻干燥，得白色粉末。

采用核磁共振测定¹HNMR来确定实施例4中化合物的结合，采用DMSO-d₆为溶剂，化学位移0.8-1.0ppm为维生素E琥珀酸酯中的-CH₃峰，而化学位移1.8-2.0ppm为透明质酸中NHCOCH₃峰。根据维生素 E琥珀酸酯的-CH₃峰和透明质酸中NHCOCH₃峰的积分面积之比，得出所制备的透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物中维生素E琥珀酸酯的取代度为15％。

实施例5 测定聚合物的临界胶束浓度

将6×10^-6mol/L芘的无水乙醇溶液加至20ml具塞试管中，氮气流去除无水乙醇。精密称取10mg不同取代度的透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯，以蒸馏水为溶剂，配置成不同浓度透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯聚合物溶液，终浓度分别为5×10^-4、1×10^-3，5×10^-3，1×10^-2，2×10^-2，4×10^-2，8×10^-2，1×10^-1mg/ml，分别取10ml加入到芘的试管中，使芘的终浓度为6×10^-7mol/L，避光超声4h，避光放置过夜，应用荧光分光光度计测定各溶液的荧光强度。

采用芘荧光探针法测定实施例2-4所得聚合物的临界胶束浓度(CMC)，以log C(mg/ml)为横坐标，在芘激发波长336nm下，发射波长373nm和384nm处的荧光强度比值(I₃₈₄/I₃₇₃)为纵坐标作图。

结果如图3所示，曲线拐点处为聚合物的临界胶束浓度(CMC)值，取代度不同，其CMC值也有所不同，因而可以通过控制透明质酸和乙二胺-维生素E琥珀酸酯的比例，而得到不同临界胶束浓度的聚合物。

取代度(％)	CMC(μg/ml)
		5	48
10	11.8
		20	6.5

实施例6 实施例2-4聚合物的细胞毒性

以4×10⁴/ml/0.1ml/孔的处于对数生长期的MCF-7/Adr细胞埋于96孔板中，24h后将实施例2-4中制备的聚合物，以浓度5、10、20、50、100、200μg/ml加入各孔，每孔100μl，每个浓度3个平行孔，培养箱中孵育96h。孵育96h后，取出96孔板，加入50μl浓度为2mg/ml的MTT溶液，培养箱孵育4h后，甩板并用滤纸吸干残留的溶液，每孔加入200μl的DMSO溶液，于振荡器中震荡10min，用酶标仪在570nm处测定各孔的吸光度值，计算抑制率。

抑制率(％)＝(1-A_加药孔/A_空白孔)×100

实施例2-4所得聚合物对MCF-7/Adr细胞的毒性如图4所示，结果表明所合成的聚合物能抑制肿瘤细胞生长，且随着取代度的增加，其抑制作用更强，主要是由于聚合物中维生素E琥珀酸酯具有协同抗肿瘤作用。因而所合成的聚合物具有协同抗肿瘤作用。

实施例7 透析法制备阿霉素载药胶束

精密称取10mg实施例2所制备的聚合物，2mg阿霉素盐酸盐，5μl三乙胺，溶于4ml N，N-二甲基甲酰胺中，混匀溶解后，转至透析袋中，于1L蒸馏水中透析，分别于1h、2h、4h、6h、10h、12h、24h更换去离子水。透析结束后，将透析袋中的溶液转至离心管中，离心去除未包裹的药物，过0.45μm滤膜过滤，得到载药纳米胶束。载药胶束中阿霉素的包封率为40％。

实施例8 乳化法制备阿霉素载药胶束

称取2mg阿霉素盐酸盐，加入50ml茄型瓶中并用4ml甲醇溶解，加入5μl三乙胺，混匀后，旋转蒸发除去有机溶剂，并用氮气流去除残留的有机溶剂。加入0.5ml丙酮溶解，逐滴加入到溶有10mg实施例2所制备的聚合物的5ml蒸馏水中，于37℃磁力搅拌过夜，离心，过0.45μm滤膜过滤，得到载药纳米胶束。载药胶束中阿霉素的包封率为83％。

实施例9 乳化超声法制备载药胶束

称取2mg阿霉素盐酸盐，溶于4ml甲醇至50ml茄型瓶中，加入5μl三乙胺，混匀后，旋转蒸发除有机溶剂，氮气流吹干去除残留的有机溶剂。加入0.5ml丙酮溶解，逐滴加入到溶有10mg实施例2所制备的聚合物的5ml蒸馏水中，于37℃磁力搅拌过夜。冰浴下探头超声10min(超声功率200W，工作2s，间歇3s)，离心，过0.45μm滤膜过滤，得到载药纳米胶束。载药胶束中阿霉素的包封率为95％以上。

将所得载药胶束通过动态光散射测定胶束的粒径大小，结果如图5所示，动态光散射测定胶束的粒径为255.23±1.044nm，多分散性系数为0.3±0.05，表明所制备胶束的粒径均一。

实施例10 载药胶束的体外释放

采用透析法考察实施例9阿霉素载药胶束的体外释放特征。精密 量取载药胶束溶液1ml置于透析袋中，透析袋两端夹紧，置于30ml不同pH值的释放介质中(pH7.4磷酸盐缓冲液及pH6.5、pH5.5、pH4.5醋酸盐缓冲液)，于37℃恒温振荡器中以100rpm/min进行释放度考察。分别于0.5、1、2、4、6、8、10、12、24h取样1ml，并补充相应体积的释放介质，样品经0.45μm微孔滤膜过滤，HPLC测定。

由图6可知，阿霉素载药胶束中药物的体外释放具有一定的pH依赖性，pH值越低释放越快。在生理条件(pH7.4)下释放较为缓慢，表明胶束在体循环过程中稳定性较高，到达肿瘤位点之前，胶束在血液循环中能保持完整的胶束结构而较少的释放药物；当药物递送到肿瘤部位后，快速释放出药物，更好地发挥抗肿瘤疗效。

实施例11 载药胶束的细胞摄取实验

以1×10⁵cells/孔的密度将MCF-7/Adr细胞接种到24孔培养板中，培养24h待细胞贴壁后，弃去培养液，加入等浓度的阿霉素溶液和实施例9的载药胶束，分别于培养箱中培养1、2和4h。于各时间点弃去溶液，4℃的PBS终止细胞摄取，冲洗细胞单层2-3次，胰酶消化后，收集细胞，于流式细胞仪中测定细胞中摄取药物的荧光强度。

从图7中可以看出，阿霉素溶液剂和载药胶束在MCF-7/Adr细胞上的摄取具有时间依赖，同时与阿霉素溶液剂相比，载药胶束显著提高了阿霉素在MCF-7/Adr细胞的摄取。

实施例12 载药胶束的CD44靶向性

将CD44高表达的MCF-7细胞以1×10⁵cells/孔的密度接种到24孔培养板中，培养24h待细胞贴壁后，弃去培养液，以实施例9制备的载药胶束为对照，分别加入不同浓度的1、10和25mg/ml的透明质酸，孵育1h后，加入相应浓度透明质酸与载药胶束的混合物，孵育2h后，弃去溶液，4℃的PBS终止细胞摄取，冲洗细胞单层2-3次，胰酶消化后，收集细胞，于流式细胞仪中测定细胞中阿霉素的荧光强度。

结果如图8所示，从图8中可以出，不同含量的透明质酸均能降低阿霉素载药胶束的细胞摄取，由于透明质酸具有CD44靶向性，能与MCF-7细胞表面的CD44受体结合。而加入透明质酸后，载药胶束的细胞摄取量降低，主要是由于透明质酸竞争性抑制载药胶束与CD44受体的结合，进一步证明所制备的载药胶束能与MCF-7细胞表面的 CD44受体结合，具有CD44靶向性。

实施例13 载药胶束的大鼠体内药动学研究

健康雄性大鼠12只，随机分为2组，给药前进食12h，分别尾静脉注射给予阿霉素溶液剂(DOX-Sol)和实施例9所制备的载药胶束(DOX-NP)，分别于静注给药后0.03、0.08、0.17、0.33、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24h眼眶取血0.2ml，取血后立即移入肝素管中，离心10min(4000×g)，-20℃贮存直至分析。所测定的药时曲线见图9。

从图9中可以看出，给予阿霉素载药胶束后，与阿霉素溶液相比，延长了阿霉素的体内循环时间，显著增加其血药浓度，更好地提高药效。

实施例14 载药胶束体内药效学研究

以1×10⁶的处于对数生长期的4T1乳腺癌细胞，腹腔注射到SD雌性小鼠中，待小鼠腹腔充满腹水后，颈椎脱臼处死，固定于手术台上，用碘伏消毒小鼠的腹部皮肤，抽取腹水，离心重悬后，以1×10⁶个细胞密度接种到小鼠右腋窝皮下，小鼠4T1乳腺癌肿瘤模型建立。

待接种肿瘤后，肿瘤体积长到100mm³时，将小鼠随机分成3组，分别尾静脉注射给予生理盐水(模型组)、阿霉素溶液剂(DOX-Sol)和实施例9中制备的载药胶束组(DOX-NP)。每隔2天给药1次，连续给药5次，给药剂量为10mg/kg。每隔两天测定肿瘤体积，考察抑制肿瘤的效果。

由图中10可以看出，与阿霉素溶液相比，所制备的载药胶束具有更强的抗肿瘤效果。

Claims (10)

1.一种透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物，其特征在于：维生素E琥珀酸酯通过双胺基桥链连接到主链透明质酸上，所述聚合物具有如下所示的结构式I：

2.根据权利要求1所述的透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物，其特征在于：所述结构式中的R选自-(CH₂)₂-、-(CH₂)₃-、-(CH₂)₄-、-CH(CH₃)-、-CH₂CH(CH₃)-、-CH(CH₃)CH₂-和-CH₂CH(CH₃)CH₂-。

3.根据权利要求1或2所述的透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物，所述透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物为透明质酸-乙二胺-维生素E琥珀酸酯，其具有如下所示的结构式I’：

4.根据权利要求1-3中任一项所述的透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物，其特征在于，所述透明质酸的分子量范围为5000-200000Da，优选为7000-100000Da，更优选为7000-14000Da。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物，其特征在于，所述维生素E琥珀酸酯在透明质酸上的取代度为1％-99％，优选为1％-50％，更优选为5％-20％，最优选为5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的透明质酸维生素E琥珀酸酯聚合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)双胺基桥链-维生素E琥珀酸酯的合成：将维生素E琥珀酸酯溶于溶剂中，在催化剂作用下，与双胺基桥链发生酯化反应，得到双胺基桥链-维生素E琥珀酸酯；

b)透明质酸-双胺基桥链-维生素E琥珀酸酯的合成：将透明质酸溶于无水有机溶剂中，加入催化剂，搅拌至反应结束；然后缓慢滴加至步骤a)所得的双胺基桥链-维生素E琥珀酸酯溶液中，至反应完成后，将反应液转至透析袋中至透析结束，并通过冷冻干燥得到所述聚合物；

优选地，所述催化剂选自1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑及其组合；

优选地，所述透明质酸中的羧基与所述维生素E琥珀酸酯的摩尔比为1：1-40，更优选地为1：5-20。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的聚合物在制备药物载体或者在制备抗肿瘤药物中的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述药物载体为纳米药物载体，任选地，所述纳米药物载体选自胶束、微乳、微球、微囊、纳米粒、固体脂质纳米粒及其组合。

9.一种靶向治疗药物，其特征在于，包含权利要求1-5任一项所述的聚合物，任选地，还包含一种或多种活性成分，优选所述活性成分选自抗肿瘤药物、基因或蛋白，更优选所述活性成分选自阿霉素、紫杉醇、羟基喜树碱、依托普利、姜黄素、小檗碱、siRNA及其组合。

10.根据权利要求9所述的靶向治疗药物在制备治疗肿瘤药物中的用途。