CN104263857B - 一种快速检测水貂肠炎病毒的纳米pcr试剂盒及其应用 - Google Patents
一种快速检测水貂肠炎病毒的纳米pcr试剂盒及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104263857B CN104263857B CN201410514088.9A CN201410514088A CN104263857B CN 104263857 B CN104263857 B CN 104263857B CN 201410514088 A CN201410514088 A CN 201410514088A CN 104263857 B CN104263857 B CN 104263857B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- primer
- nano
- quick detection
- nano pcr
- mink enteritis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 241000702625 Mink enteritis virus Species 0.000 title claims abstract description 19
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 5
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 claims description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- 230000004087 circulation Effects 0.000 claims description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 3
- 239000002574 poison Substances 0.000 claims description 2
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 claims description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 16
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 abstract description 5
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 abstract description 3
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 241001135972 Aleutian mink disease virus Species 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241001508687 Mustela erminea Species 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 208000025906 Aleutian Mink Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 208000002648 Mink Viral Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种快速检测水貂肠炎病毒的纳米PCR试剂盒及其应用，所述的试剂盒包括：2×Nano PCR缓冲液，DNA聚合酶，引物混合物，无核酸ddH2O以及阳性质粒，所述的引物为上游引物5‑ACAAGCGGCAAGCAATCCTC‑3以及下游引物：5‑CTGCCTCTATTTCGGACCAT‑3。本发明的试剂盒提高了检测的灵敏度和缩短了反应时间，具有良好的特异性，检测灵敏度与使用重组质粒pEASY‑T1‑MEV‑NS1结果相似，灵敏度是传统PCR的100倍。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学和养殖技术领域，具体的涉及一种快速检测水貂肠炎病毒的纳米PCR试剂盒及其应用。
背景技术
水貂肠炎病毒(MEV)引起的水貂病毒性肠炎发病率和死亡率高，给养貂业带来了巨大的经济损失。然而本病没有特异的治疗方法，只能采用疫苗免疫来预防，所以对水貂病毒性肠炎的诊断显得尤为重要。目前对MEV的诊断主要是HA-HI(血凝实验-血凝抑制实验)和传统PCR方法，HA操作繁琐，耗时费力，而且需要准备猪的红血细胞；而PCR是近些年发展起来的分子生物学诊断方法，但是传统PCR灵敏度不高，因此如何提供一种高灵敏度和检测时间短的快速检测水貂肠炎病毒的试剂盒是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速检测水貂肠炎病毒的纳米PCR试剂盒及其应用，为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案：
本发明一方面涉及一种快速检测水貂肠炎病毒的纳米PCR试剂盒，其特征在于所述的试剂盒包括：2×Nano PCR缓冲液，DNA聚合酶，引物混合物，无核酸ddH2O以及阳性质粒，所述的引物为上游引物5-ACAAGCGGCAAGCAATCCTC-3以及下游引物：5-CTGCCTCTATTTCGGACCAT-3。
在本发明的一个优选实施方式中，所述的Nano PCR缓冲液包含dNTPs和Mg2+。
本发明另一方面还涉及上述纳米PCR试剂盒在制备检测水貂肠炎病毒试剂中的应用。
在本发明的一个优选实施方式中，所述的检测水貂肠炎病毒包括如下步骤：从水貂粪便中提取DNA作为检测模板，取1.0μL DNA，再加入6.0μL of2×nano PCR缓冲液,0.6μL上下游引物(10μmol/L),0.2μL of Taq DNA酶(5U/μL)补水ddH2O至12μL。同时设置本试剂盒所带的质粒作为阳性对照。在PCR仪上进行如下条件的反应:94℃,3分钟，然后94℃变性30s,54.9℃退火30s，72℃延伸15s,进行31个循环后，最终72℃后延伸10分钟。
本发明的试剂盒提高了检测的灵敏度和缩短了反应时间，具有良好的特异性，检测灵敏度与使用重组质粒pEASY-T1-MEV-NS1结果相似，灵敏度是传统PCR的100倍。
附图说明
图1：是本发明实施例提供的nanoPCR退火温度、引物浓度和质粒浓度的优化示意图；
M:DNA分子质量标准；(a)1-12:退火温度分别为48℃,48.6℃,49.4℃,50.6℃,52.2℃,53.7℃,54.9℃,56.3℃,57.8℃,58.8℃,59.5℃,和60℃。(b)1-10:引物量分别为0.1μL,0.2μL,0.3μL,0.4μL,0.5μL,0.6μL,0.7μL,0.8μL,0.9μL,和1.0μL。(c)1-10:质粒DNA量分别为0.1μL,0.2μL,0.4μL,0.6μL,0.8μL,1.0μL,1.2μL,1.4μL,1.6μL,和1.8μL；
图2：是本发明实施例提供的nanoPCR和传统PCR敏感性实验示意图；
(a)nanoPCR敏感性实验结果；(b)传统PCR敏感性实验M:DNA分子质量标准；1–9:重组质粒的量分别为8.75×108,8.75×107,8.75×106,8.75×105,8.75×104,8.75×103,8.75×102,8.75×101和8.75×100拷贝/微升；10:阴性对照；
图3是本发明实施例提供的nanoPCR特异性实验示意图；
M:DNA分子质量标准；1:水貂肠炎病毒DNA；2:犬瘟热病毒cDNA,3:水貂阿留申病毒DNA,4:健康水貂粪便DNA。
具体实施方式
若未特别说明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1：
本试剂盒组成包括：2×Nano PCR缓冲液，DNA聚合酶，引物混合物，无核酸ddH2O以及阳性质粒。
1.引物设计：使用Primer Premier5.0软件，依据MEVNS1序列(GenBank登录号为FJ592174)设计出扩增NS1部分基因序列的引物，设计了3对不同引物，分别对引物的特异性进行鉴定，用ImageJ1.46r软件对不同引物扩增条带的灰度进行分析得出第一对引物为最佳引物，其序列为5’到3’顺序：
上游：ACAAGCGGCAAGCAATCCTC；
下游：CTGCCTCTATTTCGGACCAT；
扩增长度为194bp；
本发明所使用的纳米PCR缓冲液是购买商品化的试剂盒为NanoPCR试剂盒，产品目录号是NPK20；
2.nanoPCR退火温度的优化：
采用梯度PCR仪，依次设定退火温度分别为48℃,48.6℃,49.4℃,50.6℃,52.2℃,53.7℃,54.9℃,56.3℃,57.8℃,58.8℃,59.5℃和60℃,采用20微升反应体系，经2％琼脂糖凝胶电泳鉴定结果见图1a图，用ImageJ1.46r软件对图1a各个退火温度下的条带的灰度进行分析，结果显示54.9℃时条带最亮，图片见图1a图
3.nanoPCR引物浓度的优化：
在确定最佳退货温度54.9℃的条件下，采用12μL反应体系，分别加入0.1μL,0.2μL,0.3μL,0.4μL,0.5μL,0.6μL,0.7μL,0.8μL,0.9μL,和1.0μL的10μM的引物，在加入6.0μLof2×nanobuffer,1.0μLDNA模板，0.2μL Taq酶，以及上述引物，在用ddH2O补足12μL体系。反应程序如下：94℃,3然后31个循环94℃for30s,54.9℃for30s and72℃for15s,最终72℃延伸10min.最终确定0.6μL为最佳引物量。图片见图1b。
4.nanoPCR模板(质粒)浓度的优化：
在确定最佳退货温度54.9℃，最佳引物浓度为0.6μL的条件下，采用12μL反应体系，分别加入0.1μL,0.2μL,0.4μL,0.6μL,0.8μL,1.0μL,1.2μL,1.4μL,1.6μL,和1.8μL重组质粒pEASY-T1-MEV-NS1，在加入6.0μL of2×nanobuffer,各0.6μL的上下游引物，0.2μLTaq酶，在用ddH2O补足12μL体系。反应程序如下：94℃,3然后31个循环94℃for30s,54.9℃for30s and72℃for15s,最终72℃延伸10min.
最终确定1.0μL为最模板浓度。图片见图1c图
5.nanoPCR和传统PCR敏感性实验(以重组质粒pEASY-T1-MEV-NS1为模板)
采用上述12μL体系，分别对nanoPCR和传统PCR的敏感性进行实验，对pEASY-T1-MEV-NS1质粒依次进行10倍稀释如下8.75×108,8.75×107,8.75×106,8.75×105,8.75×104,8.75×103,8.75×102,8.75×101,和8.75×100拷贝/μL，依次加入到nanoPCR和传统PCR的反应体系中。结果显示传统PCR检测限为8.75×103个拷贝/微升，而nanoPCR检测限为8.75×101个拷贝/微升。nanoPCR与传统PCR相比灵敏度可提高100倍。见图2。
6.nanoPCR特异性实验
用nanoPCR对感染水貂的常见病毒MEV，CDV(犬瘟热病毒)和AMDV(水貂阿留申病毒)进行检测，结果发现本nanoPCR只能检测出MEV，而对AMDV、正常水貂粪便以及CDV的cDNA的检测均呈现阴性，图3为纳米PCR特异性实验结果。
以上步骤为本试剂盒建立的程序，该nanoPCR与传统PCR不同之处在于在PCR反应体系内加入了纳米颗粒，从而提高了检测的灵敏度和缩短了反应时间，此为nanoPCR的特点所在。另外申请人也应用已知MEV疫苗毒(用TCID50作为衡量标准)作为模板检测了nanoPCR与传统PCR的灵敏度，与使用重组质粒pEASY-T1-MEV-NS1结果相似，nanoPCR的灵敏度是传统PCR的100倍。
从水貂粪便中提取DNA作为检测模板，取1.0μL DNA，再加入6.0μL of2×nano PCR缓冲液,0.6μL上下游引物(10μmol/L),0.2μL of Taq DNA酶(5U/μL)补水ddH2O至12μL。同时设置本试剂盒所带的质粒作为阳性对照。在PCR仪上进行如下条件的反应:94℃,3分钟，然后94℃变性30s,54.9℃退火30s，72℃延伸15s,进行31个循环后，最终72℃后延伸10分钟。申请人通过上述方法对临床的246份样本进行了检测，发现nanoPCR的阳性率比传统PCR的阳性率高(数据见下表1)。
表1
以上所述是本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种快速检测水貂肠炎病毒的纳米PCR试剂盒，其特征在于，该快速检测水貂肠炎病毒的纳米PCR试剂盒包括：2×Nano PCR缓冲液，DNA聚合酶，引物混合物，无核酸ddH20以及阳性质粒；
引物混合物为上游引物：5-ACAAGCGGCAAGCAATCCTC-3；
以及下游引物：5-CTGCCTCTATTTCGGACCAT-3；
在PCR仪上进行如下条件的反应：94℃，3分钟，然后94℃变性30s，54.9℃退火30s，72℃延伸15s，进行31个循环后，最终72℃后延伸10分钟。
2.根据权利要求1所述的快速检测水貂肠炎病毒的纳米PCR试剂盒，其特征在于，NanoPCR缓冲液包含dNTPs和Mg2+。
3.权利要求1所述的快速检测水貂肠炎病毒的纳米PCR试剂盒在制备检测水貂肠炎病毒试剂中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410514088.9A CN104263857B (zh) | 2014-09-29 | 2014-09-29 | 一种快速检测水貂肠炎病毒的纳米pcr试剂盒及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410514088.9A CN104263857B (zh) | 2014-09-29 | 2014-09-29 | 一种快速检测水貂肠炎病毒的纳米pcr试剂盒及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104263857A CN104263857A (zh) | 2015-01-07 |
| CN104263857B true CN104263857B (zh) | 2017-07-11 |
Family
ID=52155431
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410514088.9A Expired - Fee Related CN104263857B (zh) | 2014-09-29 | 2014-09-29 | 一种快速检测水貂肠炎病毒的纳米pcr试剂盒及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104263857B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104726616A (zh) * | 2015-04-14 | 2015-06-24 | 山东农业大学 | 一种快速检测水貂病毒性肠炎病毒的双重pcr方法 |
| CN107058618A (zh) * | 2017-03-10 | 2017-08-18 | 中国农业科学院特产研究所 | 牛病毒性腹泻病毒nano‑PCR检测试剂盒及其制备方法 |
| CN107058620A (zh) * | 2017-03-10 | 2017-08-18 | 中国农业科学院特产研究所 | 牛传染性鼻气管炎病毒nano‑PCR检测试剂盒及其制备方法 |
| CN107034314A (zh) * | 2017-06-14 | 2017-08-11 | 中国农业科学院特产研究所 | 鉴别mev野毒株与mevb毒株的lamp引物组、试剂盒及方法 |
| CN111321246A (zh) * | 2018-12-14 | 2020-06-23 | 中国农业科学院特产研究所 | 犬瘟热病毒纳米pcr检测试剂盒及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102181581A (zh) * | 2011-04-21 | 2011-09-14 | 中国农业科学院特产研究所 | 犬瘟热病毒、肠炎细小病毒和阿留申病毒的三重pcr试剂盒 |
| CN103224995A (zh) * | 2013-04-10 | 2013-07-31 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 一种快速鉴别和诊断猪伪狂犬病病毒强弱毒的纳米pcr检测试剂盒及其应用 |
-
2014
- 2014-09-29 CN CN201410514088.9A patent/CN104263857B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102181581A (zh) * | 2011-04-21 | 2011-09-14 | 中国农业科学院特产研究所 | 犬瘟热病毒、肠炎细小病毒和阿留申病毒的三重pcr试剂盒 |
| CN103224995A (zh) * | 2013-04-10 | 2013-07-31 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 一种快速鉴别和诊断猪伪狂犬病病毒强弱毒的纳米pcr检测试剂盒及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104263857A (zh) | 2015-01-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106947838B (zh) | 非洲猪瘟病毒非结构基因实时荧光lamp检测引物组、试剂盒及检测方法 | |
| Schulze et al. | Diagnostic approach for the differentiation of the pandemic influenza A (H1N1) v virus from recent human influenza viruses by real-time PCR | |
| CN104263857B (zh) | 一种快速检测水貂肠炎病毒的纳米pcr试剂盒及其应用 | |
| CN107630109A (zh) | 一种检测新型猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光定量pcr引物及试剂盒 | |
| CN103397107B (zh) | 牛病毒性腹泻病毒荧光定量rt-pcr检测试剂盒 | |
| CN105018646B (zh) | 一种检测牛流行热病毒的引物、探针及试剂盒 | |
| CN105861641A (zh) | 一种用于检测cho细胞dna残留的引物、试剂盒及检测方法 | |
| CN107955839A (zh) | 用于检测猪圆环病毒2型和圆环病毒3型的双重pcr引物、检测方法及试剂盒 | |
| CN112739833A (zh) | 利用巢式RPA技术检测SARS-CoV-2的引物对、探针、试剂盒及其应用 | |
| Ning et al. | Rapid detection of multiple SARS-CoV-2 variants of concern by PAM-targeting mutations | |
| CN111850134A (zh) | 一种虹鳟鱼特异性正反向引物及探针、检测试剂盒及其应用 | |
| CN107955840A (zh) | 用于检测猪口蹄疫病毒与塞内加谷病毒的双重pcr引物、检测方法及试剂盒 | |
| CN106636459A (zh) | 一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的荧光rt‑rpa特异性检测 | |
| CN106755572A (zh) | I型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒双重荧光定量pcr方法 | |
| CN109762932A (zh) | 鉴别HP-PRRSV和NADC30-like毒株的检测引物和探针、试剂盒及应用 | |
| CN106119421B (zh) | 猪蓝耳病qyyz株的荧光定量检测引物、探针及试剂盒 | |
| CN105002284A (zh) | 一种副鸡嗜血杆菌荧光定量pcr检测方法 | |
| CN107974514A (zh) | 一种用于猪a型塞内卡病毒检测的试剂、检测方法及应用 | |
| KR101236197B1 (ko) | 웨스트나일바이러스와 일본뇌염바이러스의 감별 진단 | |
| CN106521038B (zh) | 一种高灵敏度的bhv‑2实时荧光定量pcr检测方法及试剂盒 | |
| CN105018486A (zh) | 一种检测水稻细菌性条斑病菌的hda试剂盒及检测方法 | |
| CN114507752B (zh) | 一种检测汉城型汉坦病毒的试剂盒及其检测方法 | |
| CN115125313A (zh) | 一种致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌检测用引物对和CRISPR/Cas12a检测试剂盒 | |
| CN104894112B (zh) | 一种日本乙型脑炎病毒实时荧光等温扩增检测试剂盒及其引物和探针 | |
| CN110257560B (zh) | 一种用于蓝舌病病毒8型检测的试剂、检测方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: JILIN SPECIAL RESEARCH BIOLOGICAL TECHNOLOGY CO., Effective date: 20150409 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20150409 Address after: 130112 Jilin province Changchun Jingyue Economic Development Zone Industry Street No. 4899 Applicant after: INSTITUTE OF SPECIAL ANIMAL AND PLANT SCIENCES OF CAAS Applicant after: JL TEYAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY LLC Address before: 130112 Jilin province Changchun Jingyue Economic Development Zone Industry Street No. 4899 Applicant before: INSTITUTE OF SPECIAL ANIMAL AND PLANT SCIENCES OF CAAS |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20161013 Address after: 130112 Jilin province Changchun Jingyue Economic Development Zone Industry Street No. 4899 Applicant after: INSTITUTE OF SPECIAL ANIMAL AND PLANT SCIENCES OF CAAS Applicant after: JL TEYAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY LLC Applicant after: Li Lishuang Address before: 130112 Jilin province Changchun Jingyue Economic Development Zone Industry Street No. 4899 Applicant before: INSTITUTE OF SPECIAL ANIMAL AND PLANT SCIENCES OF CAAS Applicant before: JL TEYAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY LLC |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170711 |