CH675583A5 - - Google Patents

Description

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CH 675 583 A5

Description

La présente invention concerne de nouveaux dérivés des ginkgolides, un procède pour leur préparation, ainsi que des compositions pharmaceutiques en contenant.

L'invention concerne des dérivés alcoxy-1 et alcoxy-10 des ginkgolides A, B, C, J et M. Les groupes alcoxy préférés sont les groupes méthoxy et éthoxy.

L'invention concerne également un procédé pour la préparation des dérivés alcoxy-1 et alcoxy-10 des ginkgolides A, B, C, J, et M, le procédé consistant à faire reagir, dans un solvant non polaire, un ginkgo-lide A, B, C, J ou M avec un excès de diazoalcane et à séparer le mélange d'alcoxy-1 ginkgolide et d'al-coxy-10 ginkgolide qui en résulte.

Dans le procédé selon l'invention, le ginkgolide sélectionné est dissous dans le dioxane, à la concentration 1 g pour 100 ml, et le diazoalcane choisi est dissous dans de l'éther éthylique. La solution contenant le diazoalcane est lentement ajoutée à celle contenant le ginkgolide, dans la proportion de 10 équivalents de diazoalcane par équivalent de ginkgolide. Après avoir laissé le mélange réactionnel à température ambiante pendant 3 à 8 heures, on obtient un mélange d'alcoxy-1 ginkgolide et d'alcoxy-10 ginkgolide. La séparation des deux produits peut être convenablement réalisée par évaporation des solvants et élu-tion des résidus sur une colonne de gel de silice en utilisant un mélange d'acétate d'éthyle: hexane 1:1 en volume. La recristallisation à partir du chloroforme élimine le dérivé alcoxy-10 et le reste de la solution aqueuse est traitée à l'éther éthylique pour donner le dérivé alcoxy-1.

Les alcoxy ginkgolides selon l'invention présentent un intérêt dans le traitement des maladies induites par le PAF-acéther (PAF = Platelets Aggregation Factor) et l'invention concerne donc également une composition pharmaceutique comprenant un dérivé alcoxy-1 de ginkgolide A, B, C, J ou M ou un dérivé alcoxy-10 d'un des dits ginkgolides ou un mélange de deux ou plus des dits dérivés alcoxy-1 eî/ou alcoxy-10, associés avec tout diluant ou excipient pharmaceutiquement acceptable.

L'invention sera mieux comprise grâce à la description des exemples qui suivent:

Exemple 1

Méthoxv-1 et methoxv-10 ginkgolide B

A une solution de ginkgolide B dans le dioxane (1 Og/i), on ajoute lentement 10 équivalents d'une solution de diazométhane dans l'éther éthylique. Après avoir laissé le mélange sous agitation, à température ambiante, pendant plusieurs heures, on le sépare selon le procédé de l'invention décrit ci-dessus. Le méthoxy-1 ginkgolide B, dont la structure est confirmée par HPLC, est obtenu avec un rendement de 66,1% et le méthoxy-10 ginkgolide B, avec un rendement de 24,4%.

On obtient les rendements suivants en utilisant le procédé décrit ci-dessus, mais avec des ginkgolides A et C:

méthoxy-1

méthoxy-10

Ginkgolide A

56,3%

13,2%

Ginkgolide C

49,1%

16,7%

Exemple 2

Ethoxv-1 et méthoxv-10 oinkolide B

La méthode decrite à l'Exemple 1 est utilisée, mais avec du diazoéthane au lieu du diazométhane, l'éthoxy-1 ginkgolide B est obtenu avec un rendement de 63,2% et Péthoxy-10 avec un rendement de 25,7%.

On obtient les rendements suivants en utilisant le procédé décrit ci-dessus, mais avec les ginkgolides AetC:

éthoxy-1

éthoxy-10

Ginkgolide A

72,8%

20,1%

Ginkgolide C

59,2%

30,4%

La toxicité des composés selon l'invention a été testée sur des souris par voie orale.

On n'a constaté aucun décès de souris en administrant la dose maximum administrabie tant chez la souris que chez le rat.

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CH 675 583 A5

L'intérêt pharmaceutique des composés selon l'invention a été mis en évidence par les expérimentations pharmaceutiques suivantes.

1) Inhibition de l'agrégation plaauettaire sur le lapin de Nouvelle-Zélande

L'expérimentation a été conduite sur des plaquettes à partir de plasma de lapin de Nouvelle-Zélande.

Des échantillons de sang ont été prelevés par l'artère auriculaire et mis dans une solution de tampon citrate (3,8%; pH 7,4); le sang a ensuite été centrifugé pendant 15 mn à 1200 t/mn.

L'échantillon testé a été préparé dans le DMSO, puis versé sur des plaquettes riches en plasma pendant 1 mn, et une dose de 2n5 nM de PAF a été ajoutée.

La détermination est faite sur un appareil Cronolog Coultronics qui détermine le pourcentage de transmission correspondant à la valeur maximale du pic avant la désagrégation.

Le pourcentage de variation de l'inhibition est apprécié par le pourcentage de transmission calculé (témoin: DMSO pur).

Cette méthode est décrite en détail dans LABORATORY INVESTIGATIONS, Vol. 41, No. 3, p. 275, 1979, JEAN-PIERRE CAZENAVE, Dr. MED., JACQUES BENVENISTE, Dr. MED., AND J. FRASER MUSTARD, M. D., «Aggregation of Rabbits Platelets Reaction and the Arachidonate Pathway and inhi-bited by Membrane-Active Drugs».

Les résultats démontrent que les composés inhibent l'agrégation induite par 2,5 nM de PAF. Cinq tests réalisés sur des lots de chacun des cinq lapins ont permis de calculer la CI50 des divers composés en utilisant la méthode de régression linéaire.

On a trouvé les valeurs suivante pour CI50 sur les plaquettes:

Type de Ginkgolide et -OCH3 -OC2H5 position de substitution mole/l mole/l

B

-1

6,6

IO"7

1,1

10"6

B

-10

2,9

10~7

7,2

10-6

C

-1

4,2

10"6

8,5

10"6

C

-10

3,0

10-6

9,3

10-6

A

-1

4,6

10-6

8,7

10-6

A

-10

1,3

10"5

6,2

10-4

2) Bronchoconstriction anaphvlactioue chez7 le cobave passivement sensibilisé Sensibilisation passive hétérolooue

Des cobayes mâles de souche HARTLEY (400-500g) sont sensibilisés par une injection intraveineuse (IV) d'un immunsérum antiovalbumine de lapin (Cooper Biomédical, U.S.A.). Afin d'obtenir, 24 heures après, une réponse anaphylactique suffisante, les conditions suivantes d'utilisation de l'immun-sérum ont été déterminées: injection IV dans le pénis du sérum dilué au demi, sous un volume de 0,05 ml/100 g.

Mesure de la bronchoconstriction

Les cobayes sont anesthésiés à l'uréthane (2 g/kg IP). Ils sont alors trachéotomisés et ventilés par une pompe respiratoire (Ugo Basile) sous un volume de 1 ml/100 g à raison de 60 coups/mn. Un pneumothorax est pratiqué pour abolir la respiration spontanée. La résistance initiale est gardée constante à la pression de 10 cm d'eau en accord avec la méthode de Konzett et Rossler et l'air en excès est mesuré avec un transmetteur à bronchospasme (Ugo Basile) couplé à un enregistreur «Gemini» (Ugo Basile). La veine jugulaire est cathétérisée pour les administrations intraveineuses de 0.75 mg/kg (passif hétéro-logue d'ovalbumine). Les produits sont administrés par voie oraie (PO), une heure avant la stimulation antigénique, sous la forme d'une suspension en eau gommée (dose: 25 mg/kg).

Expression des résultats

La bronchoconstriction induite par l'ovaibumine est exprimée en pourcentage de la bronchoconstriction maximale obtenue par clampage de la trachée. Les résultats sont reportés dans le tableau suivant:

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CH 675 583 A5

Type de Ginkgolide et -OCH3 -OC2H5 position de substitution % %

B

-1

—49,7***

-38,3**

B

-10

-54,9***

-36,2**

C

-1

-40,1**

-39,8**

C

-10

-30,6*

-23,1*

A

-1

-32,0*

-15,1 NS

A

-10

-25,2*

-12,2 NS

NS: Non Significatif *: Significatif **: Très Significatif ***: Hautement Significatif

En thérapie humaine, les doses habituelles pour administration par voie orale sont de 0,5 g à 1 g par jour, en cachets ou gelules pendant un mois.

Par voie injectable, trois injections hebdomadaires de 0,05 à 0,2 g en solution isotonique, pendant un mois, sont recommandées.

Claims (4)

Revendications

1. Alcoxy-1 ou alcoxy-10 ginkgolides.

2. Mélange d'alcoxy-1 et alcoxy-10 ginkgolides.

3. Procédé de préparation des dérivés de ginkgolides selon la revendication 1 consistant à faire réagir une solution de dioxane du ginkgolide choisi avec une solution dans l'éther éthylique du diazoalcane approprié en excès, à température ambiante, pendant une à dix heures.

4. Composition thérapeutique pour le traitement des maladies induites par le facteur d'aggrégation pla-quettaire, PAF acéther comprenant, à titre de principe actif, une quantité suffisante d'un composé selon la revendication 1, ou d'un mélange de ceux-ci, associé à tout diluant ou excipient approprié.

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