[0001] A presente invenção refere-se a novos derivados de quinolina substituída úteis para o tratamento de doenças bacterianas, incluindo porém sem limitação doenças causadas por micobatérias patogênicas tais como Mycobacterium tuberculosis, M. bovis, M. leprae, M. aviume M. marinum, ou Estafilococos ou Estreptococos patogênicos.
Antecentes da Invenção
[0002] Mycobacterium tuberculosis é o agente causador da tuberculose (TB), uma infeção séria e potencialmente fatal mundialmente disseminada. As estimativas da Organização Mundial de Saúde indicam que mais de 8 milhões de pessoas contraem TB a cada ano, e 2 milhões de pessoas morrem de tuberculose anualmente. Na última década, os casos de TB cresceram 20% em todo o mundo com o maior índice recaindo nas comunidades mais pobres. Se estas tendências continuarem, a incidência de TB aumentará em 41% nos próximos vinte anos. Cinquenta anos desde a introdução de uma quimioterapia eficaz, a TB continua sendo depois da AIDS, a causa infecciosa predominante de mortalidade entre os adultos no mundo. Para complicar a epidemia de TB verificamos o crescente surgimento de cepas resistentes a vários fármacos, e a mortal simbiose com HIV. As pessoas que são HlV-positivo e infectadas com TB têm 30 vezes mais chance de desenvolver TB ativa do que as pessoas que são HlV-negativo e a TB é responsável pela morte uma em cada três pessoas com HIV/AIDS no mundo.
[0003] As condutas existentes para tratamento da tuberculose envolvem todas as combinações de vários agentes. Por exemplo, o regime recomendado pelo Serviço de Saúde Pública dos Estados Uni- dos ("U.S. Public Health Service") é uma combinação de isoniazid, ri- fampicina e pirazinamida por dois meses, seguida de isoniazid e ri- fampicina por mais quatro meses. Estos fármacos devem ser usadas por mais sete meses em pacientes infectados com HIV. Para pacientes infectados com cepas de M. tuberculosisresistentes a vários fármacos, agentes tais como etambutol, estreptomicina, canamicina, amicacina, capreomicina, etionamida, ciclosserina, ciprofoxaci-na e ofloxacinas são acrescentados às terapias combinadas. Não existem um agente único que seja eficaz no tratamento clínico da tuberculose, nem qualquer combinação de agentes que ofereça a possibilidade de terapia com uma duração inferior a seis meses.
[0004] Existe uma grande necessidade médica de novos fármacos que melhorem o tratamento atual possibilitando regimes que facilitem a aceitação do paciente e do fornecedor. Regimes mais curtos e aqueles que requerem menos supervisão são a melhor maneira de atingir este objetivo. A maior parte do benefício proveniente do tratamento aparece nos 2 primeiros meses, durante a fase intensiva, ou bacterici- da, quando quando quatro fármacos são dados juntos; a carga bacte- riana é bastante reduzida, e os pacientes se tornam não-contagiosos. A fase de continuação, ou esterilização, de 4 a 6 meses é necessária para eliminar os bacilos persistentes e minimizar o risco de recaída. Um fármaco esterilizante potente que reduza o tratamento para 2 meses ou menos seria extremamente benéfica. Fármacos que facilitem a aceitação requerendo menos supervisão intensiva também são necessárias. Obviamente, um composto que reduza tanto o tempo total de tratamento como a frequência de administração dos fármacos ofereceria o maior benefício.
[0005] Complicando a epidemia de TB encontramos a crescente incidência de cepas resistentes a vários fármacos ou MDR-TB. Até quatro por cento de todos os casos no mundo são considerados MDR- TB - aqueles resistentes às fármacos mais eficazes do padrão de quatro fármacos, isoniazid e rifampina. MDR-TB é letal quando não tratada e não pode ser adequadamente tratada por meio da terapia tradicional, pois o tratamento requer até 2 anos de fármacos de "segunda linha". Essos fármacos geralmente são tóxicos, caros e marginalmente eficazes. Na ausência de uma terapia eficaz, os pacientes com MDR-TB infecciosa continuam a disseminar a doença, produzindo novas infecções com cepas de MDR-TB. Existe uma grande necessidade médica de um novo fármaco com um novo mecanismo de ação, que tenha a probabilidade de demonstrar atividade contra cepas resistentes o fármacos, em particular cepas MDR.
[0006] O termo "resistente o fármacos" conforme usado acima e abaixo é um termo bastante compreendido pelo especialista em mi- crobiologia. Uma Microbactéria resistente o fármacos é uma Microbac- téria que não é mais suscetível a pelo menos um fármaco anteriormente eficaz; que tenha desenvolvido a capacidade de suportar o ataque por antibióticos por pelo menos um fármaco anteriormente eficaz. Uma cepa resistente o fármacos pode transmitir essa capacidade de resistência para sua progénie. A referida resistência pode dever-se a mutações genéticas aleatórias naa célula bacteriana o que altera sua sensibilidade a um único fármaco ou a diferentes fármacos.
[0007] Tuberculose MDR é uma forma específica de tuberculose resistente o fármacos devido a uma bactéria resistente a pelo menos isoniazid e rifampicina (com ou sem resistência a outros fármacos), que são atualmente os doios fármacos anti-TB mais potentes. Portanto, sempre que usado acima ou abaixo "resistente o fármacos" inclui resistente a vários fármacos.
[0008] Um outro fator no controle da epidemia de TB é o problema de TB latente. Apesar de décadas de programas de controle de tuberculose (TB), cerca de 2 milhões de pessoas são infectadas por M. tu- berculosis, embora assintomaticamente. Cerca de 10% desses indivíduos correm o risco de desenvolver TB ativa durante a vida. A epidemia global de TB é abastecida pela infecção de pacientes HIV com TB e pelo aumento de cepas de TB resistentes a vários fármacos (MDR- TB). A reativação da TB latente é um alto fator de risco para o desenvolvimento de doenças e é responsável por 32% dos indivíduos infectados com HIV. Para controlar a epidemia de TB, é necessário descobrir novos fármacos que eliminem os bacilos adormecidos ou latentes. A TB adormecida pode ser reativada para causar doenças por diversos fatores como supressão da imunidade do hospedeiro pelo uso de agentes imunossupressores como anticorpos contra o fator de necrose tumoral α ou interferon-y. No caso de pacientes HlV-positivos o único tratamento profilático disponível para TB latente é o regime de dois - três meses de rifampicina, pirazinamida. A eficácia do regime de tratamento ainda não está clara e além do mais o tempo dos tratamentos é uma restrição importante em ambientes de recursos limitados. Por conseguinte existe uma necessidade drástica de identificar novos fármacos, que possam agir como agentes quimioprofiláticos para indivíduos portadores de bacilos de TB latente.
[0009] Os bacilos da tuberculose penetram nos indivíduos saudáveis por inalação; eles são fagocitosados pelos macrófagos alveolares dos pulmões. Isto leva a uma resposta imune potente e à formação de granulomas, que consistem em macrófagos infectados com M. tuberculosis circundados por células T. Depois de um período de 6 - 8 semanas a resposta imune do hospedeiro causa a morte das células infectadas por necrose e o acúmulo de material caseoso com determinados bacilos extracelulares, circundados por macrófagos, células epi- teloides e camadas de tecido linfoide na periferia. No caso de indivíduos saudáveis, a maioria das microbactérias são eliminadas nesses ambientes mas uma pequena proporção de bacilos ainda sobrevivem e acredita-se que existem em um estado hipometabólico não- replicante e são tolerantes à eliminação por fármacos contra a TB como isoniazid. Esses bacilos podem ficar nos ambientes fisiológicos alterados por toda a vida do indivíduo sem apresentar quaisquer sintomas clínicos da doença. No entanto, em 10% dos casos esses bacilos latentes podem ser reativados para causar a doença. Uma das hipóteses acerca do desenvolvimento dessas bactérias persistentes é o ambiente patofisiológico em lesões humanas, a saber, tensão de oxigênio reduzida, limitação de nutrientes, e pH ácido. Foi postulado que estes fatores deixam essas bactérias fenotipicamente tolerantes os principais fármacos antimicrobacterianas.
[00010] Além do controle da epidemia de TB, há o problema emergente de resistência a agentes antibióticos de primeira linha. Alguns exemplos importantes incluem Streptococcus pneumoniae resistente à penicilina, enterococos resistentes à vancomicina, Staphylococcus aureus resistente à meticilina, salmonela multirresistente.
[00011] As consequências da resistência a agentes antibióticas são severas. As infecções causadas por micróbios resistentes não conseguem responder ao tratamento, resultando em doença prolongada e maior risco de morte. Os fracassos do tratamento também a períodos de infectividade mais longos, que aumentam o número de pessoas infectadas circulando na comunidade dessa forma expondo a população em geral ao risco de contrair uma infecção por uma cepa resistente.
[00012] Os hospitais constituem um componente crítico do problema de resistência antimicrobiana no mundo. A combinação de pacientes altamente suscetíveis, uso intensivo e prolongado de antimicrobia- nos, e infecção cruzada tem resultado em infecções com patógenos bacterianos altamente resistentes.
[00013] A automedicação com antimicrobianos constitui um outro fator importante que contribui para a resistência. Antimicrobianos au tomedicados podem ser desnecessários, frequentemente não são usados na dose adequada, ou podem não conter quantidades adequadas do fármaco ativo.
[00014] A colaboração do paciente com o tratamento recomendado constitui um outro problema importante. Os pacientes esquecem de tomar a medicação, interrompem seu tratamento quando se sentirem melhor, ou podem não conseguir arcar com o tratamento completo, dessa forma criando um ambiente ideal para os micróbios se adaptarem em vez de serem eliminados.
[00015] Devido à resistência emergente a vários antibióticos, os médicos são confrontados com infecções para as quais não existe uma terapia eficaz. A morbidade, mortalidade, e custos financeiros de tais infecções impõem um ônus crescente para os sistemas de saúde em todo o mundo.
[00016] Portanto, existe uma grande necessidade de novos compostos para tratar infecções bacterianas, especialmente infecções mi- crobacterianas que incluem infecções microbacterianas resistentes o fármacos e latentes, e também outras infecções bacterianas especialmente aquelas causadas por cepas bacterianas resistentes.
[00017] Os documentos W02004/011436, W02005/070924, W02005/070430 e W02005/075428 apresentam alguns derivados de quinolina substituída com atividade contra Mycobacteria,em particular contra Mycobacterium tuberculosis.O documento W02005/117875 descreve derivados de quinolina substituída com atividade contra cepas microbacterianas resistentes. O documento W02006/067048 descreve derivados de quinolina substituída com atividade contra tuberculose latente. Um composto particular desses derivados de quinolina substituída está descrito em Science (2005), 307, 223-227 e seu modo de ação está descrito no documento W02006/035051.
[00018] Outras quinolinas substituídas estão descritas no documen- to US-5.965.572 (Estados Unidos da América) para tratar infecções resistentes a antibióticos e no documento WOOO/34265 para inibir o crescimento de micro-organismos bacterianos.
[00019] O objetivo da presente invenção é oferecer novos compostos, em particular derivados de quinolina substituída, com a propriedade de inibir o crescimento bacteriano especialmente de Estreptococos, Estafilococos ou microbactérias e portanto úteis para o tratamento de doenças bacterianas, particularmente as doenças causadas por bactérias patogênicas tais como Streptococcus pneumonia, Staphylococcus aureusou Mycobacterium tuberculosis(incluindo a doença latente e incluindo cepas de M. tuberculosisresistentes), M. bovis, M. leprae, M. aviume M. marinum.
Sumário da Invenção
[00020] A presente invenção refere-se a novos derivados de quinolina substituída de acordo com a fórmula (la) ou (lb):
incluindo qualquer forma estereoquimicamente isomérica dos mesmos, onde p é um número inteiro igual a 1,2, 3 ou 4; q é um número inteiro igual a zero, 1, 2, 3 ou 4; R1é hidrogênio, ciano, halo, alquila, haloalquila, hidróxi, al- quilóxi, alquiltio, alquiltioalquila, arilalquila, di(arila)alquila, arila, ou Het; R2 é hidrogênio, alquilóxi, arila, arilóxi, hidróxi, mercapto, al- quiloxialquilóxi, alquiltio, mono ou di(alquila)amino, pirrolidino ou um radical de fórmula
onde Y é CH2, O, S, NH ou /V-alquila ; R3é alquila, arilalquila, arila-O-alquila, arila-alquila-O- alquila, arila, arila-arila, Het, Het-alquila, Het-O-alquila, Het-alquila-O- alquila ou
phen yl fenila R4 e R5cada um independentemente são hidrogênio, alquila ou benzila; ou R4 e R5 juntos e incluindo 0 N ao qual estão ligados podem formar um radical selecionado do grupo que consiste em pirrolidinila, 2-pirrolinila, 3-pirrolinila, pirrolila, imidazolidinila, pirazolidinila, 2- imidazolinila, 2-pirazolinila, imidazolila, pirazolila, triazolila, piperidinila, piridinila, piperazinila, imidazolidinila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, triazinila, morfolinila e tiomorfolinila, cada radical opcionalmente substituído com alquila, halo, haloalquila, hidróxi, alquilóxi, amino, mono- ou dialquilamino, alquiltio, alquiloxialquila, alquiltioalquila e pirimidinila ; R6 é aril1ou Het; R7 é hidrogênio, halo, alquila, arila ou Het; R8 é hidrogênio ou alquila; R9 é oxo; ou R8 e R9 juntos formam 0 radical -CH=CH-N=; arila é um homociclo selecionado de fenila, naftila, ace- naftila ou tetra-hidronaftila, cada um sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte sendo independentemente selecionado de hidróxi, halo, ciano, nitro, amino, mono- ou dialquilamino, alquila, C2-6alquenila opcionalmente substituída com fenila, haloalquila, alquilóxi, haloalquilóxi, carboxila, alquiloxicarbonila, amino- carbonila, morfolinila ou mono- ou dialquilaminocarbonila; aril1é um homociclo selecionado de fenila, naftila, ace- naftila ou tetra-hidronaftila, cada um sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte sendo independentemente selecionado de hidróxi, halo, ciano, nitro, amino, mono- ou dialqui- lamino, alquila, haloalquila, alquilóxi, alquiltio, haloalquilóxi, carboxila, alquiloxicarbonila, aminocarbonila, morfolinila, Het ou mono- ou dial- quilaminocarbonila; Het é urn heterociclo monocfclico selecionado de /V- fenoxipiperidinila, piperidinila, pirrolila, pirazolila, imidazolila, furanila, tienila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, isotiazolila, piridinila, pirimidinila, pirazinila ou piridazinila; ou urn heterociclo bicíclico selecionado de quinolinila, quinoxalinila, indolila, benzimidazolila, benzoxazolila, ben- zisoxazolila, benzotiazolila, benzisotiazolila, benzofuranila, benzotieni- la, 2,3-di-hidrobenzo[1,4]dioxinila ou benzo[1,3]dioxolila; cada heterociclo monocíclico e bicíclico sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte independentemente selecionado de halo, hidróxi, alquila ou alquilóxi; contanto que se R3 for alquila, arilalquila, arila, Het, Het- alquila ou
phenyl, ent§0 R6 θ Hθt; fenila substituída com Het; naftila substituída com Het; ou acenaftila ou tetra-hidronaftila, cada um sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte sendo independentemente selecionado de hidróxi, halo, ciano, nitro, amino, mono- ou dialquilamino, alquila, haloalquila, alquilóxi, alquiltio, haloalquilóxi, carboxila, alquiloxicarbonila, amino-carbonila, morfolinila, Het ou mono- ou dialquilaminocarbonila; os N-óxidos dos mesmos, os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos ou os solvatos dos mesmos.
[00021] Sempre que usado neste relatório, o termo "compostos de fórmula (la) ou (lb)" ou "compostos de acordo com a invenção" também inclui seus sais farmaceuticamente aceitáveis ou as formas de seus N-óxidos.
[00022] Os compostos de fórmula (la) e (lb) são interrelacionados pelo fato de que por exemplo um composto de acordo com a fórmula (lb), com R9igual a oxo e R8igual a hidrogênio, é o equivalente tauto- mérico de um composto de acordo com a fórmula (la) com R2 igual a hidróxi (tautomerismo ceto-enólico).
[00023] Na definição de Het, este inclui todas as formas isoméricas possíveis dos heterociclos, por exemplo, pirrolila compreende 1H- pirrolila e 2H-pirrolila.
[00024] Os arila, aril1ou Het listados nas definições dos substituintes dos compostos de fórmula (la) ou (lb) (vide por exemplo R3) mencionados acima ou abaixo podem estar ligados ao restante da molécula de fórmula (la) ou (lb) através de qualquer átomo de carbono ou he- teroátomo do anel conforme apropriado, se não especificado em contrário. Assim, por exemplo, quando Het é imidazolila, ele pode ser 1- imidazolila, 2-imidazolila, 4-imidazolila entre outros.
[00025] As linhas traçadas dos substituintes aos sistemas de anel indicam que a ligação pode estar presa a qualquer dos átomos adequados do anel.
[00026] Os sais farmaceuticamente aceitáveis mencionados acima ou abaixo compreendem as formas de sais de adição de ácido atóxi- cas e terapeuticamente ativos que os compostos de acordo com a fórmula (la) ou fórmula (lb) são capazes de formar. Os referidos sais de adição de ácido podem ser obtidos por tratamento da forma de base dos compostos de acordo com a fórmula (la) ou fórmula (lb) com ácidos apropriados, por exemplo ácidos inorgânicos, por exemplo ácido halídrico, em particular ácido clorídrido, ácido bromídrico, ácido sul- fúrico, ácido nítrico e ácido fosfórico; ácidos orgânicos, por exemplo ácido acético, ácido hidroxiacético, ácido propanoico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido malônico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido benzenossulfôni- co, ácido p-toluenossulfônico, ácido ciclâmico, ácido salicíclico, ácido p-aminosalicílico e ácido pamoico.
[00027] Os compostos de fórmula (la) ou (lb) contendo prótons ácidos podem ser convertidos em suas formas de sais de adição de metal ou amina atóxicos e terapeuticamente ativos por tratamento com bases orgânicas e inorgânicas apropriadas. Os sais farmaceuticamente aceitáveis mencionados acima ou abaixo também compreendem as formas de sais de adição de metal ou amina atóxicos e terapeuticamente ativos (formas de sais de adição de base) que os compostos de fórmula (la) ou (lb) são capazes de formar. As formas de sais de adição de base apropriadas compreendem, por exemplo, os sais de amónio, os sais de metais alcalinos e de metais alcalinos-terrosos, por exemplo os sais de lítio, sódio, potássio, magnésio, cálcio entre outros, sais com bases orgânicas, por exemplo aminas primárias, secundárias e terciárias alifáticas e aromáticas tais como metilamina, etilamina, propilamina, isopropilamina, os quatro isômeros de butilamina, dimeti- lamina, dietilamina, dietanolamina, dipropilamina, di-isopropilamina, di- n-butilamina, pirrolidina, piperidina, morfolina, trimetilamina, trietilami- na, tripropilamina, quinuclidina, piridina, quinolina e isoquinolina, a benzatina, /V-metila-D-glucamina, 2-amino-2-(hidroximetila)-1,3- propanodiol, sais de hidrabamina, e sais com aminoácidos tais como, por exemplo, arginina, lisina entre outros.
[00028] Ao contrário, as referidas formas de sais de adição de ácido ou de base podem ser convertidas nas formas livres por tratamento com uma base ou ácido apropriado.
[00029] O termo sal farmaceuticamente aceitável também compreende os sais de amónio quaternário (aminas quaternárias) que os compostos de fórmula (la) ou (lb) são capazes de formar por reação entre um nitrogênio básico de um composto de fórmula (la) ou (lb) e um agente quaternizante apropriado, tal como, por exemplo, um Ci- βalquila halogeneto, arilCi-θalquila halogeneto, Ci-ealquilcarbonila halo- geneto, arilcarbonila halogeneto, HetCi-ealquila halogeneto ou Hetcar- bonila halogeneto opcionalmente substituídos, por exemplo metila io- deto ou benzila iodeto. De preferência, Het representa um heterociclo monocíclico selecionado de furanila ou tienila; ou um heterociclo bicíclico selecionado de benzofuranila ou benzotienila; cada heterociclo monocíclico ou bicíclico podendo ser opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte independentemente selecionado do grupo que consiste em halo, alquila e arila. De preferência, o agente quarternizado é Ci-ealquila halogeneto. Outros reagentes com grupos deslocáveis satisfatórios também podem ser usados, tais como trifluormetanossulfonatos de Ci-βalquila, metanossulfonatos de Ci- βalquila, e p-toluenossulfonatos de Ci-ealquila. Uma amina quaternária possui um nitrogênio com carga positiva. Contraíons farmaceuticamente aceitáveis incluem cloro, bromo, iodo, trifluoracetato, acetato, triflato, sulfato, sulfonato. De preferência, o contraíon é iodo. O contraíon escolhido pode ser introduzido usando resinas trocadoras de íons.
[00030] O termo solvato compreende os hidratos e as formas de adição de solvente que os compostos de fórmula (la) ou (lb) são capazes de formar, assim como os sais dos mesmos. Exemplos de tais formas são por exemplo hidratos, alcoolatos entre outros.
[00031] No contexto deste pedido, um composto de acordo com a invenção inerentemente compreende todas as formas estereoquimi- camente isoméricas dos mesmos. O termo "formas estereoquimica- mente isoméricas" usado acima ou abaixo define todas as formas es- tereoisoméricas possíveis que os compostos de fórmula (la) e (lb), e seus /V-óxidos, sais farmaceuticamente aceitáveis ou derivados fisiolo- gicamente funcionais podem ter. A menos que de outra forma mencionado ou indicado, a designação química dos compostos denota a mis- tura de todas as formas estereoquimicamente isoméricas possíveis.
[00032] Em particular, os centros estereogênicos podem ter a configuração R ou S; os substituintes em radicais (parcialmente) saturados cíclicos bivalentes podem ter a configuração cisou trans.Os compostos que contêm ligações duplas podem ter uma estereoquímica E (contrária) ou Z (juntamente) na referida ligação dupla. Os termos cis, trans, R, S, E e Z são bastante conhecidos pelo versado na técnica.
[00033] As formas estereoquimicamente isoméricas dos compostos de fórmula (la) e (lb) são obviamente abrangidas pelo escopo desta invenção.
[00034] De interesse especial são os compostos de fórmula (la) ou (lb) que são estereoquimicamente puros.
[00035] Segundo as convenções da nomenclatura CAS, quando dois centros estereogênicos de configuração absoluta conhecidas estão presentes em uma molécula, um identificador R ou S é atribuído (com base na norma de sequência de Cahn-Ingold-Prelog) ao centro quiral de numeração mais baixa, o centro de referência. A configuração do segundo centro estereogênico é indicada usando identificadores relativos [R*,R* ] ou [R*,S*], onde R* é sempre especificado como o centro de referência e [/?*,/?*] indica centros com a mesma quiralida- de e [R*,S*] indica centros de quiralidade diferentes. Por exemplo, se o centro quiral de numeração mais baixa na molécula tiver uma configuração S e o segundo centro for R, o estereoidentificador será especificado por S-[/?*,S*]. Se "α"e "β"são usados: a posição do substituinte de maior prioridade no átomo de carbono assimétrico no sistema de anel com o número de anel mais baixo arbitrariamente está sempre na posição "α"do plano médio determinado pelo sistema de anel. A posição do substituinte de maior prioridade no outro átomo de carbono assimétrico no sistema de anel em relação à posição do substituinte de maior prioridade no átomo de referência é denominada "a", se ela esti- ver no mesmo lado do plano médio determinado pelo sistema de anel, ou "β",se ela estiver no outro lado do plano médio determinado pelo sistema de anel.
[00036] Quando uma forma estereoisomérica específica está indicada, isto significa que a referida forma é substancialmente livre, isto é, associada a menos de 50%, de preferência menos de 20%, mais preferivelmente menos de 10%, ainda mais preferivelmente menos de 5%, mais preferivelmente aainda menos de 2% e mais preferivelmente menos de 1% dos outros isômeros. Portanto, quando um composto de fórmula (la) ou (lb) estiver, por exemplo, especificado como (R,S), isto significa que o composto é substancialmente livre do isômero (S,R).
[00037] Os compostos de fórmula (la) e (lb) e alguns dos compostos intermediários invariavelmente possuem pelo menos dois centros estereogênicos em sua estrutura que podem levar a pelo menos 4 estruturas estereoquimicamente diferentes.
[00038] Os compostos de fórmula (la) e (lb) podem ser sintetizados na forma de misturas, em particular misturas racêmicas, de enantiôme- ros que podem ser separados seguindo-se procedimentos de resolução conhecidos na técnica. Os compostos racêmicos de fórmula (la) e (lb) podem ser convertidos nas formas de sal diastereomérico correspondentes por reações com um ácido quiral adequado. As referidas formas de sal diastereomérico são subseqüentemente separadas, por exemplo, cristalização seletiva ou fracionada e os enantiômeros são liberados dali por um álcali. Uma maneira alternativa de separar as formas enantioméricas dos compostos de fórmula (la) e (lb) envolve cromatografia líquida usando uma fase estacionária quiral. As referidas formas estereoquimicamente isoméricas puras também podem ser derivados das formas estereoquimicamente isoméricas puras correspon-dentes dos materiais de partida apropriados, contanto que a reação ocorra de forma estereoespecífica. De preferência se um estereoisô- mero específico for desejado, o referido composto será sintetizado por métodos de preparação estereoespecíficos. Estes métodos vão vantajosamente empregar materiais de partida enantiomericamente puros.
[00039] As formas tautoméricas dos compostos de fórmula (la) ou (lb) compreendem os compostos de fórmula (la) ou (lb) onde, por exemplo, um grupo enol é convertido em um grupo ceto (tautomerismo ceto-enólico). As formas tautoméricas dos compostos de fórmula (la) e (lb) ou dos intermediários da presente invenção estão abrangidas pelo âmbito desta invenção.
[00040] As formas de /V-óxido dos presentes compostos compreendem os compostos de fórmula (la) ou (lb) onde um ou vários átomos de nitrogênio terciário são oxidados para dar o chamado /V-óxido.
[00041] Os compostos de fórmula (la) e (lb) podem ser convertidos nass formas de /V-óxido correspondentes seguindo-se procedimentos conhecidos na técnica para converter um nitrogênio trivalente na forma de seu /V-óxido. A referida reação de /V-oxidação geralmente pode ser realizada por reação do material de partida de fórmula (la) ou (lb) com um peróxido orgânico ou inorgânico apropriado. Peróxidos inorgânicos apropriados compreendem, por exemplo, peróxido de hidrogênio, peróxidos de metal alcalino ou de metal alcalino-terroso, por exemplo, peróxido de sódio, peróxido de potássio; peróxidos orgânicos apropriados compreendem peroxiácidos tais como, por exemplo, ácido ben- zenocarboperoxoico ou ácido benzenocarboperoxoico halo substituído, por exemplo ácido 3-clorobenzenocarboperoxoico, ácidos peroxoalca- noicos, por exemplo ácido peroxoacético, alquila hidroperóxidos, por exemplo t-butila hidroperóxido. Solventes adequados são, por exemplo, água, alcóois inferiores, por exemplo etanol entre outros, hidrocar- bonetos, por exemplo tolueno, cetonas, por exemplo, 2-butanona, hi- drocarbonetos halogenados, por exemplo diclorometano, e misturas destes solventes.
[00042] No contexto deste pedido, um composto de acordo com a invenção inerentemente compreende todas as combinações isotópicas de seus elementos químicos. No contexto deste pedido, um elemento químico, em particular quando mencionado em relação a um composto de acordo com a fórmula (la) ou (lb), compreende todos os isótopos e misturas isotópicas desse elemento, seja ocorrendo naturalmente ou sinteticamente produzido, seja com abundância natural ou em uma forma isotopicamente enriquecida. Em particular, quando mencionamos hidrogênio, fica entendido que ele se refere a 1H, 2H, 3H e misturas dos mesmos; quando mencionamos carbono, fica entendido que ele se refere a 11C, 12C, 13C, 14C e misturas dos mesmos; quando mencionamos nitrogênio, fica entendido que ele se refere a 13N, 14N, 15N e misturas dos mesmos; quando mencionamos oxigênio, fica entendido que ele se refere a 14O, 15O, 16O, 17O, 18O e misturas dos mesmos; quando mencionamos flúor, fica entendido que ele se refere a 18F, 19F e misturas dos mesmos.
[00043] Um composto de acordo com a invenção, portanto, compreende inerentemente um composto com um ou mais isótopos de um ou mais elementos, e misturas dos mesmos, inclusive um composto radioativo, também chamado composto radiomarcado, onde um ou mais átomos não-radioativos foram substituídos por um de seus isótopos radioativos. Pelo termo "composto radiomarcado"entende-se qualquer composto de acordo com a invenção (la) ou (lb), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou uma forma de /V-óxido do mesmo, que contém pelo menos um átomo radioativo. Por exemplo, um composto pode ser marcado com isótopos radioativos emissores de positron ou com isótopos radioativos emissores de gama. Para técnicas de ligação de radioligando (ensaio com receptor de membrana), o átomo 3H ou o átomo 125l é o átomo escolhido para ser substituído. Para imagem,os isótopos radioativos emissores de positron (PET) mais comumente usados são 11C, 18F, 15O e 13N, todos eles sendo produzidos por acelerador e tendo meias-vidas de 20, 100, 2 e 10 minutos, respectivamente. Como as meias-vidas desses isótopos radioativos são muito curtas, só é viável usá-los em instituições que possuem um acelerador no local de sua produção, limitando assim seu uso. Os mais amplamente usados desses isótopos são 18F, 99mTc, 201TI e 123l. A manipulação desses isótopos radioativos, sua produção, isolamento e incorporação em uma molécula são conhecidos pelo versado na técnica.
[00044] Em particular, o átomo radioativo é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio e halogênio. De preferência, o átomo radioativo é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, carbono e halogênio.
[00045] Em particular, o isótopo radioativo é selecionado do grupo que consiste em 3H, 11C, 18F, 122l, 123l, 125l, 1311, 75Br, 76Br, 77Br e 82Br. De preferência, o isótopo radioativo é selecionado do grupo que consiste em 3H, 11C e 18F.
[00046] No contexto deste pedido, alquila é um radical de hidrocar- boneto saturado de cadeia reta ou ramificada tendo de 1 a 6 átomos de carbono; ou é um radical de hidrocarboneto saturado cíclico tendo de 3 a 6 átomos de carbono; ou é um radical de hidrocarboneto satu-rado cíclico tendo de 3 a 6 átomos de carbono ligado a um radical de hidrocarboneto saturado de cadeia reta ou ramificada tendo de 1 a 6 átomos de carbono; onde cada átomo de carbono pode ser opcionalmente substituído com ciano, hidróxi, Ci-ealquilóxi ou oxo. De preferência alquila é um radical de hidrocarboneto saturado de cadeia reta ou ramificada tendo de 1 a 6 átomos de carbono; ou é um radical de hidrocarboneto saturado cíclico tendo de 3 a 6 átomos de carbono; onde cada átomo de carbono pode ser opcionalmente substituído com hidroxila ou Ci-ealquilóxi.
[00047] De preferência, alquila é metila, etila ou ciclo-hexilmetila, mais preferivelmente metila ou etila.
[00048] Uma modalidade interessante de alquila em todas as definições usadas acima ou abaixo é Ci-θalquila que representa um radical de hidrocarboneto saturado de cadeia reta ou ramificada tendo de 1 a 6 átomos de carbono tal como por exemplo metila, etila, propila, 2- metila-etila, pentila, hexila entre outros. Um subgrupo preferido de Ci- εalquila é Ci^alquila que representa um radical de hidrocarboneto saturado de cadeia reta ou ramificada tendo de 1 a 4 átomos de carbono tal como por exemplo metila, etila, propila, 2-metila-etila entre outros.
[00049] No contexto deste pedido, C2-ealquenila é um radical de hidrocarboneto de cadeia reta ou ramificada tendo de 2 a 6 átomos de carbono contendo uma ligação dupla tal como etenila, propenila, bute- nila, pentenila, hexenila entre outros; Ca-βcicloalquila é um radical de hidrocarboneto saturado cíclico tendo de 3 a 6 átomos de carbono e é genérico para ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila.
[00050] No contexto deste pedido, halo é um substituinte selecionado do grupo que consiste em flúor, cloro, bromo e iodo e haloalquila é um radical de hidrocarboneto saturado de cadeia reta ou ramificada tendo de 1 a 6 átomos de carbono ou um radical de hidrocarboneto saturado cíclico tendo de 3 a 6 átomos de carbono ou um radical de hidrocarboneto saturado cíclico tendo de 3 a 6 átomos de carbono ligado a um radical de hidrocarboneto saturado de cadeia reta ou ramificada tendo de 1 a 6 átomos de carbono; onde um ou mais átomos de carbono são substituídos com um ou mais átomos de halogênio. De preferência, halo é bromo, flúor ou cloro; em particular cloro ou bromo. De preferência, haloalquila é poli-haloCi-βalquila que é definido como mon Ci-6alquila o- ou poli-halossubstituído, por exemplo, metila com um ou mais átomos de flúor, por exemplo, difluorometila ou trifluoro- metila, 1,1-difluoro-etila entre outros. No caso de mais de um átomo de halogênio estar preso a um grupo alquila ou Ci-βalquila dentro da defi- nição de haloalquila ou poli-haloCi-ealquila, eles podem ser iguais ou diferentes.
[00051] Uma primeira modalidade interessante refere-se a um com- posto de fórmula (la) ou (lb) onde p é um número inteiro igual a 1, 2, 3 ou 4; q é um número inteiro igual a zero, 1, 2, 3 ou 4; R1 é hidrogênio, ciano, halo, alquila, haloalquila, hidróxi, al- quilóxi, alquiltio, alquiltioalquila, arilalquila, di(arila)alquila, arila, ou Het; R2 é hidrogênio, alquilóxi, arila, arilóxi, hidróxi, mercapto, alquiloxialquilóxi, alquiltio, mono ou di(alquila)amino, pirrolidino ou um radical de fórmula
onde Y é CH2, O, S, NH ou /V-alquila; R3 é alquila, arilalquila, arila-O-alquila, arila-alquila-O- alquila, arila, Het, Het-alquila, Het-O-alquila, Het-alquila-O-alquila ou
fenila R4 e R5 cada um independentemente são hidrogênio, alqui- la ou benzila; ou R4 e R5 juntos e incluindo 0 N ao qual estão ligados podem formar um radical selecionado do grupo que consiste em pirrolidinila, 2-pirrolinila, 3-pirrolinila, pirrolila, imidazolidinila, pirazolidinila, 2- imidazolinila, 2-pirazolinila, imidazolila, pirazolila, triazolila, piperidinila, piridinila, piperazinila, imidazolidinila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, triazinila, morfolinila e tiomorfolinila, cada radical opcionalmente substi- tuído com alquila, halo, haloalquila, hidróxi, alquilóxi, amino, mono- ou dialquilamino, alquiltio, alquiloxialquila, alquiltioalquila e pirimidinila; R6 é aril1ou Het; R7 é hidrogênio, halo, alquila, arila ou Het; R8 é hidrogênio ou alquila; R9 é oxo; ou R8 e R9 juntos formam o radical -CH=CH-N=; arila é urn homociclo selecionado de fenila, naftila, ace- naftila ou tetra-hidronaftila, cada uma sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte sendo independentemente selecionado de hidróxi, halo, ciano, nitro, amino, mono- ou dialqui- lamino, alquila, haloalquila, alquilóxi, haloalquilóxi, carboxila, alquiloxi- carbonila, aminocarbonila, morfolinila ou mono- ou dialquilaminocarbo- nila; aril1é urn homociclo selecionado de fenila, naftila, ace- naftila ou tetra-hidronaftila, cada um sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte sendo independentemente selecionado de hidróxi, halo, ciano, nitro, amino, mono- ou dialqui- lamino, alquila, haloalquila, alquilóxi, alquiltio, haloalquilóxi, carboxila, alquiloxicarbonila, aminocarbonila, morfolinila, Het ou mono- ou dial- quilaminocarbonila; Het é urn heterociclo monocíclico selecionado de N- fenoxipiperidinila, piperidinila, pirrolila, pirazolila, imidazolila, furanila, tienila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, isotiazolila, piridinila, pirimidinila, pirazinila ou piridazinila; ou urn heterociclo bicíclico selecionado de quinolinila, quinoxalinila, indolila, benzimidazolila, benzoxazolila, ben- zisoxazolila, benzotiazolila, benzisotiazolila, benzofuranila, benzotieni- la, 2,3-di-hidrobenzo[1,4]dioxinila ou benzo[1,3]dioxolila; cada heterociclo monocíclico e bicíclico sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte independentemente selecionado de halo, hidróxi, alquila ou alquilóxi; contanto que se R3 for alquila, arilalquila, arila, Het, Het- alquila ou '
, entã0 R6 £ Hθt; fenila substituída com Het; naftila substituída com Het; ou acenaftila ou tetra-hidronaftila, ca- da um sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte sendo independentemente selecionado de hidróxi, halo, ciano, nitro, amino, mono- ou dialquilamino, alquila, haloalquila, alquilóxi, alquiltio, haloalquilóxi, carboxila, alquiloxicarbonila, amino- carbonila, morfolinila, Het ou mono- ou dialquilaminocarbonila.
[00052] Uma segunda modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) onde p é um número inteiro igual a 1, 2, 3 ou 4; q é um número inteiro igual a zero, 1, 2, 3 ou 4; R1 é hidrogênio, ciano, halo, Ci-βalquila, poli-haloCi- ealquila, hidróxi, Ci-ealquilóxi, Ci-βalquiltio, Ci-βalquiloxiCi-βalquila, Ci- ealquiltioCi-ealquila, hidroxiCi-ealquila, arilCi-ealquila, di(arila)Ci-6alquila, arila, ou Het; R2 é hidrogênio, Ci-ealquilóxi, arila, arilóxi, hidróxi, mercapto, Ci-ealquiloxiCi-ealquilóxi, Ci-ealquiltio, mono ou di(Ci-6alquila)amino, pirrolidino ou um radical de fórmula
onde Y é CH2, O, S, NH ou /V-Ci-6alquila; R3 é Ci-βalquila, Ca-βcicloalquila, arilC-i-θalquila, arila-O- Ci-βalquila, arilCi-βalquila-O-Ci-βalquila, arila, arila-arila, Het, Het-Ci- ealquila, Het-0-Ci-βalquila ou HetCi-βalquila-O-Ci-βalquila, ou
R4 e R5 cada um independentemente são hidrogênio, Ci-ealquila ou benzila; ou R4 e R5 juntos e incluindo 0 N ao qual estão ligados podem formar um radical selecionado do grupo que consiste em pirrolidinila, 2-pirrolinila, 3-pirrolinila, pirrolila, imidazolidinila, pirazolidinila, 2- imidazolinila, 2-pirazolinila, imidazolila, pirazolila, triazolila, piperidinila, piridinila, piperazinila, imidazolidinila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, triazinila, morfolinila e tiomorfolinila, cada radical opcionalmente substituído com Ci-βalquila, halo, poli-haloCi-βalquila, hidróxi, Ci-ealquilóxi, amino, mono- ou di(Ci-6alquila)amino, Ci-βalquiltio, Ci-βalquiloxiCi- βalquila, Ci-βalquiltioCi^alquila e pirimidinila; R6é aril1 ou Het; R7é hidrogênio, halo, Ci-βalquila, arila ou Het; R8é hidrogênio ou Ci-βalquila; R9é oxo; ou R8 e R9 juntos formam o radical -CH=CH-N=; arila é urn homociclo selecionado de fenila, naftila, acenafti- la ou tetra-hidronaftila, cada um sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte sendo independentemente selecionado de hidróxi, halo, ciano, nitro, amino, mono- ou di(Ci- βalquila)amino, Ci-βalquila, C2-βalquenila opcionalmente substituída com fenila, poli-haloCi-βalquila, Ci-ealquilóxi, haloCi-βalquiloxi, carboxi- la, Ci-βalquiloxicarbonila, aminocarbonila, morfolinila ou mono- ou di(Ci-βalquila)aminocarbonila; aril1é urn homociclo selecionado de fenila, naftila, acenafti- la ou tetra-hidronaftila, cada um sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte sendo independentemente selecionado de hidróxi, halo, ciano, nitro, amino, mono- ou di(Ci- βalquila)amino, Ci-βalquila, poli-haloCi-βalquila, Ci-βalquiloxi, Ci- βalquiltio, haloCi-βalquiloxi, carboxila, Ci-βalquiloxicarbonila, aminocarbonila, morfolinila, Het ou mono- ou di(Ci-βalquila)aminocarbonila; Het é urn heterociclo monocíclico selecionado de N- fenoxipiperidinila, piperidinila, pirrolila, pirazolila, imidazolila, furanila, tienila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, isotiazolila, piridinila, pirimidinila, pirazinila ou piridazinila; ou urn heterociclo bicíclico selecionado de quinolinila, quinoxalinila, indolila, benzimidazolila, benzoxazolila, ben- zisoxazolila, benzotiazolila, benzisotiazolila, benzofuran ila, benzotieni- la, 2,3-di-hidrobenzo[1,4]dioxinila ou benzo[1,3]dioxolila; cada heterociclo monocíclico e bicíclico sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte independentemente selecionado de halo, hidróxi, Ci-θalquila ou Ci-ealquilóxi; contanto que se R3for Ci-6alquila, Cs-βcicloalquila, arilCi- βalquila, arila, Het, Het-Ci-βalquila ou '
, enfã0R6θ Het; fenila substituída com Het; naftila substituída com Het; ou acenaf- tila ou tetra-hidronaftila, cada um sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte sendo independentemente selecionado de hidróxi, halo, ciano, nitro, amino, mono- ou di(Ci- 6alquila)amino, C-i-βalquila, poli-haloCi-θalquila, C-i-ealquilóxi, Ci- βalquiltio, haloCi-βalquiloxi, carboxila, Ci-ealquiloxicarbonila, aminocarbonila, morfolinila, Het ou mono- ou di(Ci-6alquila)aminocarbonila.
[00053] Uma terceira modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) onde p é um número inteiro igual a 1, 2, 3 ou 4; q é um número inteiro igual a zero, 1, 2, 3 ou 4; R1 é hidrogênio, ciano, halo, Ci-βalquila, poli-haloCi- βalquila, hidróxi, Ci-ealquilóxi, Ci-βalquiltio, Ci-βalquiloxiCi-ealquila, Ci- ealquiltioCi-ealquila, hidroxiCi-ealquila, arilCi-ealquila, di(arila)Ci-6alquila, arila, ou Het; R2 é hidrogênio, Ci-ealquilóxi, arila, arilóxi, hidróxi, mercapto, Ci-6alquiloxiCi-6alquilóxi, Ci-βalquiltio, mono ou di(Ci-6alquila)amino, pirrolidino ou um radical de formula
onde Y é CH2, O, S, NH ou A/-Ci-ealquila; R3 é Ci-ealquila, Ca-βcicloalquila, arilCi-βalquila, arila-O-Ci- βalquila, arilCi-βalquila-O-Ci-βalquila, arila, Het, Het-Ci-βalquila, Het-O- Ci-βalquila ou HetCi-βalquila-O-Ci-βalquila, ou
R4 e R5cada um independentemente são hidrogênio, Ci- βalquila ou benzila; ou R4 e R5 juntos e incluindo o N ao qual estão ligados podem formar um radical selecionado do grupo que consiste em pirrolidinila, 2-pirrolinila, 3-pirrolinila, pirrolila, imidazolidinila, pirazolidinila, 2- imidazolinila, 2-pirazolinila, imidazolila, pirazolila, triazolila, piperidinila, piridinila, piperazinila, imidazolidinila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, triazinila, morfolinila e tiomorfolinila, cada radical opcionalmente substituído com Ci-ealquila, halo, poli-haloCi-ealquila, hidróxi, Ci-ealquilóxi, amino, mono- ou di(Ci-ealquila)amino, Ci-ealquiltio, Ci-ealquiloxiCi- βalquila, Ci-ealquiltioCi-ealquila e pirimidinila; R6 é aril1ou Het; R7 é hidrogênio, halo, Ci-ealquila, arila ou Het; R8 é hidrogênio ou Ci-ealquila; R9 é oxo; ou R8 e R9 juntos formam o radical -CH=CH-N=; arila é um homociclo selecionado de fenila, naftila, acenaf- tila ou tetra-hidronaftila, cada um sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte sendo independentemente selecionado de hidróxi, halo, ciano, nitro, amino, mono- ou di(Ci- βalquila)amino, Ci-βalquila, poli-haloCi-θalquila, Ci-ealquilóxi, haloCi- ealquilóxi, carboxila, Ci-ealquiloxicarbonila, aminocarbonila, morfolinila ou mono- ou di(Ci-ealquila)aminocarbonila; aril1é um homociclo selecionado de fenila, naftila, acenaf- tila ou tetra-hidronaftila, cada um sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte sendo independentemente selecionado de hidróxi, halo, ciano, nitro, amino, mono- ou di(Ci- βalquila)amino, Ci-ealquila, poli-haloCi-ealquila, Ci-ealquilóxi, Ci- βalquiltio, haloCi-βalquiloxi, carboxila, Ci-βalquiloxicarbonila, a min oca r- bonila, morfolinila, Het ou mono- ou di(Ci-βalquila)aminocarbonila; Het é urn heterociclo monocíclico selecionado de N- fenoxipiperidinila, piperidinila, pirrolila, pirazolila, imidazolila, furanila, tienila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, isotiazolila, piridinila, pirimidinila, pirazinila ou piridazinila; ou urn heterociclo bicíclico selecionado de quinolinila, quinoxalinila, indolila, benzimidazolila, benzoxazolila, ben- zisoxazolila, benzotiazolila, benzisotiazolila, benzofuranila, benzotieni- la, 2,3-di-hidrobenzo[1,4]dioxinila ou benzo[1,3]dioxolila; cada heterociclo monocíclico e bicíclico sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte independentemente selecionado de halo, hidróxi, Ci-ealquila ou Ci-ealquilóxi; contanto que se R3for Ci-βalquila, Ce-ecicloalquila, arilCi- z / fenila, ealquila, arila, Het, Het-Ci-ealquila ou '
então R6 é Het; fenila substituída com Het; naftila substituída com Het; ou acenaftila ou tetra-hidronaftila, cada um sendo opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte sendo independentemente selecionado de hidróxi, halo, ciano, nitro, amino, mono- ou di(Ci-βalquila)amino, Ci-βalquila, poli-haloCi-βalquila, Ci-ealquilóxi, Ci-βalquiltio, haloCi-βalquiloxi, carboxila, Ci- βalquiloxicarbonila, aminocarbonila, morfolinila, Het ou mono- ou di(Ci- βalquila)aminocarbonila.
[00054] Uma quarta modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante onde R1 é hidrogênio, halo, arila, Het, alquila ou alquilóxi; mais particularmente R1 é hidrogênio ou halo. Mais preferivelmente, R1 é halo, em particular bromo.
[00055] Uma quinta modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo meneio- nado acima como modalidade interessante onde p é igual a 1.
[00056] Uma sexta modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante onde R2 é hidrogênio, alquilóxi ou alquiltio, em particular hidrogênio, Ci-ealquilóxi ou Ci- ealquiltio. Mais particularmente, R2 é Ci-ealquilóxi, de preferência meti- lóxi.
[00057] Uma sétima modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante onde R3 é arila-O-Ci- βalquila, arilCi-βalquila-O-Ci-βalquila, arila, arila-arila, Het, Het-Ci- ealquila, Het-O-Ci-ealquila, HetCi-ealquila-O-Ci-ealquila; em particular R3 é arila-O-Ci-ealquila, arilCi-βalquila-O-Ci-βalquila, Het-Cvealquila, Het-O-Ci-ealquila, HetCi-ealquila-O-Ci-ealquila; mais particularmente R3 é arila-0-Ci-βalquila, arilCi-βalquila-O-Ci-βalquila, arila-arila, Het-O-Ci- ealquila, HetCi-ealquila-O-Ci-ealquila; ainda mais particularmente R3 é arila-0-Ci-βalquila, arilCi-βalquila-O-Ci-βalquila, Het-O-Ci-ealquila ou HetCi-ealquila-O-Ci-ealquila; ou R3 é arila-0-Ci-βalquila ou arilCi- ealquila-O-Ci-ealquila; ou R3 é arila.
[00058] Uma oitava modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante onde q é igual a 1, 3 ou 4.
[00059] Uma nona modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante onde R4 e R5 cada um independentemente representam hidrogênio ou Ci-ealquila, em particular Ci- ealquila, mais particularmente metila ou etila. De preferência R4 e R5 são metila.
[00060] Uma décima modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo meneio- nado acima como modalidade interessante onde R4 e R5 junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados formam um radical selecionado do grupo que consiste em piperidino, piperazino, morfolino, imi- dazolila, triazolila, cada um dos referidos anéis opcionalmente substituído com Ci-βalquila; mais particularmente piperidino, piperazino ou morfolino, cada um dos referidos anéis opcionalmente substituído com Ci-4alquila; ainda mais particularmente piperidino ou piperazino opcionalmente substituído com Ci-4alquila.
[00061] Uma décima primeira modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante onde R6 é Het ou fenila opcionalmente substituída; em particular Het, ou fenila opcionalmente substituída com halo, ciano, Het ou Ci-ealquilóxi; mais particularmente Het, ou fenila opcionalmente substituída com halo ou Het onde Het representa de preferência piridila, tienila, furanila, quinolinila ou pirazolila, cada um dos referidos anéis representando Het sendo opcionalmente substituído com Ci-βalquila; ainda mais particularmente benzo[1,3]dioxolila, ou fenila opcionalmente substituída com halo ou Het onde Het representa de preferência piridila, tienila, furanila, quinolinila ou pirazolila, cada um dos referidos anéis representando Het sendo opcionalmente substituído com Ci-ealquila.
[00062] Uma décima segunda modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante onde R7 é hidrogênio.
[00063] Uma décima terceira modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante onde o composto é um composto de fórmula (la).
[00064] Uma décima quarta modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante onde o composto é um composto de fórmula (lb) e onde R8 é hidrogênio e R9 é oxo.
[00065] Uma décima quinta modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante onde o composto é um composto de fórmula (lb), em particular onde R8 é alquila, mais preferivelmente Ci-βalquila, por exemplo metila.
[00066] Uma décima sexta modalidade interessante é um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante onde arila é naftila ou fenila, mais preferivelmente fenila, cada um opcionalmente substituído com um ou dois substituintes selecionados de halo, por exemplo cloro; ciano; alquila por exemplo metila; ou alquilóxi, por exemplo metilóxi; ou Het, por exemplo piridila, tienila, furanila, quinolinila ou imidazolila, cada um dos referidos anéis representando Het sendo opcionalmente substituído com Ci-ealquila.
[00067] Uma décima sétima modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante onde R1 é colocado na posição 6 do anel quinolina.
[00068] No contexto deste pedido, o anel quinolina dos compostos de fórmula (la) ou (lb) é numerado da seguinte maneira:
[00069] Uma décima oitava modalidade interessante é o uso de um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante para a produção de um medicamento para o tratamento de uma infecção bacteriana com uma bactéria gram-positiva e/ou uma bactéria gram-negativa, de preferência uma infecção bacteriana com uma bactéria gram-positiva.
[00070] Uma décima nona modalidade interessante é o uso de um composto de fórmula (la) ou (lb) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante para a produção de um medicamento para o tratamento de uma infecção bacteriana onde o composto de fórmula (la) ou (lb) tem um IC90 < 15 pl/ml contra pelo menos uma bactéria, em particular uma bactéria gram-positiva; de preferência um IC90 < 10 ]Lil/ml; mais preferivelmente um IC90 < 5 pl/rnl; o valor de IC90 sendo determinado da maneira descrita mais adiante.
[00071] Uma vigésima modalidade interessante refere-se a um composto de fórmula (la) ou qualquer subgrupo do mesmo mencionado acima como modalidade interessante onde uma ou mais, de preferência todas, das definições a seguir se aplicam: R1 é hidrogênio ou halo; em particular hidrogênio ou bromo; R2 é alquilóxi, em particular Ci-ealquilóxi; mais particularmente metilóxi; R3 é arila-O-Ci-ealquila, arilCi-βalquila-O-Ci-βalquila, arila, ou arila-arila; R4 e R5 são Ci-θalquila; em particular metila; ou R4 e R5 junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados formam um radical selecionado do grupo que consiste em piperidino ou piperazino, cada um dos referidos anéis opcionalmente substituído com Ci-ealquila; R6 é Het ou fenila opcionalmente substituída; em particular Het, ou fenila opcionalmente substituída com halo ou Het; mais particularmente benzo[1,3]dioxolila, furanila, ou fenila opcionalmente substituída com halo ou Het onde Het representa piridila, tienila, furanila, quinolinila ou pirazolila, cada um dos referidos anéis representando Het sendo opcionalmente substituído com Ci-βalquila; R7 é hidrogênio; q é 1, 3 ou 4; p é 1.
[00072] De preferência, nos compostos de fórmula (la) e (lb) ou qualquer subgrupo dos mesmos mencionados acima como modalidade interessante, o termo "alquila"representa Ci-ealquila, mais preferivelmente Ci^alquila, e o termo haloalquila representa poli-haloCi- ealquila.
[00073] De preferência, o composto de fórmula (la) ou (lb) é uma mistura particular de enantiômeros (doravante indicada como um dias- tereoisômero A ou B particular) e por conseguinte é substancialmente livre dos outros diastereoisômeros. No caso de o composto de fórmula (la) ou (lb) ter dois centros quirais isto significa que o composto é uma mistura, em particular uma mistura racêmica, dos enantiômeros (R,S) e (S,R) ou uma mistura, em particular uma mistura racêmica, do enan- tiômero (R,R) e (S,S). Doravante, as misturas, em particular, as misturas racêmicas de 2 enantiômeros estão indicadas como diastereoisô- mero A ou B. Se a mistura racêmica é indicada como A ou B depende de ele o primeiro a ser isolado no protocolo de síntese (isto é, A) ou o segundo (isto é, B). Mais preferivelmente, o composto de fórmula (la) ou (lb) é um enantiômero particular (substancialmente livre dos outros enantiômeros). No casode o composto de fórmula (la) ou (lb) ter dois centros quirais isto significa que o composto é o enantiômero (R,S), (S,R), (R,R) ou (S,S). Doravante, os referidos enantiômeros particulares são indicados como A1, A2, B1 ou B2. Se o enantiômero é indicado como A1, A2, B1 ou B2 depende de ele o primeiro ou o segundo (1 ou 2) a ser isolado no protocolo de síntese e do fato de ele ser separado do diastereoisômero A (A1, A2) ou B (B1, B2).
[00074] Os compostos preferidos da presente invenção são selecionados de
incluindo qualquer forma estereoquimicamente isomérica dos mesmos, um N-óxido do mesmo, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um solvato do mesmo.
[00075] Em particular os compostos de fórmula (la) ou (lb) preferidos são os compostos 7, 9, 10 e 29 (vide Tabelas mais adiante); um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, um solvato dos mesmos ou um /V-óxido dos mesmos, ou os compostos 29, 23, 34, 11, 4, 52, e 30 (vide Tabelas mais adiante); um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, um solvato dos mesmos ou um /V-óxido dos mesmos.
FARMACOLOGIA
[00076] Os compostos de acordo com a invenção surpreendente mente mostraram-se adequados para o tratamento de uma infecção bacteriana inclusive uma infecção microbacteriana, particularmente as doenças causadas por microbactérias patogênicas tais como Mycobacterium tuberculosis(incluindo a forma latente e resistente o fármacos da mesma), M. bovis, M. leprae, M. avium, M. leprae e M. mari- num. A presente invenção portanto também se refere aos compostos de fórmula (la) ou (lb) definidos acima, aos sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, aos solvatos dos mesmos ou às formas de N- óxido dos mesmos, para uso como medicamento, em particular para uso como medicamento para o tratamento de uma infecção bacteriana inclusive uma infecção microbacteriana.
[00077] Além disso, a presente invenção também se refere ao uso de um composto de fórmula (la) ou (lb), os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, os solvatos dos mesmos ou as formas de N- óxido dos mesmos, assim como qualquer uma das composições farmacêuticas dos mesmos descritas mais adiante para a produção de um medicamento para o tratamento de uma infecção bacteriana inclusive uma infecção microbacteriana.
[00078] Por conseguinte, em um outro aspecto, a invenção oferece um método de tratamento de um paciente que sofre de, ou corre o risco de contrair, uma infecção bacteriana, inclusive uma infecção microbacteriana, que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ou composição farmacêutica de acordo com a invenção.
[00079] Além de sua atividade contra microbactérias, os compostos de acordo com a invenção também são ativos contra outras bactérias. Em geral, os patógenos bacterianos podem ser classificados como pa- tógenos gram-positivos ou gram-negativos. Compostos antibióticos com atividade contra patógenos gram-positivos e gram-negativos geralmente são considerados compostos com amplo espectro de ativida- de. Os compostos da presente invenção são considerados ativos contra patógenos bacterianos gram-positivos e/ou gram-negativos, em particular contra patógenos bacterianos gram-positivos. Em particular, os presentes compostos são ativos contra pelo menos uma bactéria gram-positiva, de preferência contra várias bactérias gram-positivas, mais preferivelmente contra uma ou mais bactérias gram-positivas e/ou uma ou mais bactérias gram-negativas.
[00080] Os presentes compostos possuem atividade bactericida ou bacteriostática.
[00081] Exemplos de bactérias aeróbicas e anaeróbicas gram- positivas e gram-negativas incluem Estafilococos, por exemplo S. aureus; Enterococos, por exemplo E. faecalis; Estreptococos, por exemplo S. pneumoniae, S. mutans, S. pyogens;Bacilos, por exemplo Bacillus subtilis;Listeria, por exemplo Listeria monocytogenes; Haemophilus, por exemplo H. influenza;Moraxella, por exemplo M. catarrhalis; Pseudomonas, por exemplo Pseudomonas aeruginosa;e Escherichia, por exemplo E. coli.
[00082] Patógenos gram-positivos, por exemplo Estafilococos, En- terococos e Estreptococos são particularmente importantes por causa do desenvolvimento de cepas resistentes que tanto são difíceis de tratar como difíceis de erradicar por exemplo de uma ambiente hospitalar uma vez estabelecidos. Exemplos de tais cepas são Staphylococcus aureusresistente à meticilina (MRSA), estafilocos coagulase negativos resistentes à meticilina (MRCNS), Streptococcus pneumoniaeresistente à penicilina e Enterococcus faecium resistente a vários fármacos.
[00083] Os compostos da presente invenção também apresentam atividade contra cepas bacterianas resistentes.
[00084] Os compostos da presente invenção são especialmente ativos contra Streptococcus pneumoniae e Staphylococcus aureus, inclusive Staphylococcus aureusresistente tal como por exemplo Sta- phylococcus aureusresistente à meticilina (MRSA).
[00085] Por conseguinte, a presente invenção também se refere ao uso de um composto de fórmula (la) ou (lb), dos sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, dos solvatos dos mesmos ou das formas de N-óxido dos mesmos, assim como de qualquer uma das composições farmacêuticas do mesmo descrito mais adiante para a produção de um medicamento para o tratamento de uma infecção bacteria- na que inclui uma infecção causada por Estafilococos e/ou Estreptoco- cos.
[00086] Por conseguinte, em um outro aspecto, a invenção oferece um método para tratar um paciente que sofre de, ou com risco de contrair, uma infecção bacteriana, que inclui uma infecção causada por Estafilococos e/ou Estreptococos, que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ou composição farmacêutica de acordo com a invenção.
[00087] Sem querer nos ressaltar a qualquer teoria, ensinamos que a atividade dos presentes compostos repousa na inibição da F1F0 ATP sintase, em particular na inibição do complexo F0 da FIFO ATP sintase, mais particularmente na inibição da subunidade c do complexo F0 da F1F0 ATP sintase, levando à eliminação das bactérias por depleção dos níveis de ATP celular das bactérias. Por conseguinte, em particular, os compostos da presente invenção são ativos contra bactérias cuja viabilidade dependendo do funcionamento apropriado da F1F0 ATP sintase.
[00088] Infecções bacterianas que podem ser tratadas pelos presentes compostos incluem, por exemplo, infecções do sistema nervoso central, infecções do ouvido externo, infecções do ouvido médio, tais como otite média aguda, infecções dos seios do crânio, infecções oculares, infecções da cavidade oral, tais como infecções dos dentes, gengivas e mucosa, infecções do trato respiratório superior, infecções do trato respiratório inferior, infecções genitourinárias, infecções gastrointestinais, infecções ginecológicas, septicemia, infecções das articulações e ossos, infecções de pele e das estruturas da pele, endo- cardite bacteriana, queimaduras, profilaxia antibacteriana de cirurgia, e profilaxia antibacteriana em pacientes imunossuprimidos, tais como pacientes que recebem quimioterapia contra câncer, ou pacientes com órgão transplantado.
[00089] Sempre que mencionado acima ou abaixo neste relatório, que os compostos podem tratar uma infecção bacteriana isto significa que os compostos podem tratar uma infecção com uma ou mais cepas bacterianas.
[00090] A invenção também se refere a uma composição compreendendo um veículo farmaceuticamente aceitável e, como componente ativo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a invenção. Os compostos de acordo com a invenção podem ser formulados em várias formas farmacêuticas para fins de administração. Como composições apropriadas podemos mencionar to-das as composições usualmente empregadas para administração sistêmica de fármacos. Para preparar as composições farmacêuticas desta invenção, uma quantidade eficaz do composto particular, opcionalmente na forma de sal de adição, como o componente ativo é combinado em mistura íntima com um veículo farmaceuticamente aceitável, veículo este que pode ter uma ampla variedade de formas dependendo da forma de preparação desejada para administração. Essas composições farmacêuticas são desejáveis em forma de dosagem unitária adequada, em particular, para administração por via oral ou por injeção parenteral. Por exemplo, na preparação das composições em forma de dosagem oral, é possível empregar qualquer um dos meios farmacêuticos usuais tais como, por exemplo, água, glicóis, óleos, alcóois entre outros no caso de preparações líquidas orais tais como suspensões, xaropes, elixires, emulsões e soluções; ou veículos sólidos tais como amidos, açúcares, caulim, diluentes, lubrificantes, aglutinantes, agentes desintegrantes entre outros no caso de pós, pílulas, cápsulas e comprimidos. Por sua facilidade de administração, comprimidos e cápsulas representam as formas de unidade de dosagem orais mais vantajosas em cujo caso são obviamente empregados veículos farmacêuticos sólidos. Para composições parenterais, o veículo usualmente compreende água estérila, pelo menos em grande parte, embora outros componentes, por exemplo, para auxiliar a solubilidade, possam ser incluídos. Podem ser, por exemplo, preparadas soluções injetáveis nas quais o veículo compreende solução salina, solução de glicose ou uma mistura de solução salina e solução de glicose. Tam-bém podem ser preparadas suspensões injetáveis em cujo caso veículos líquidos apropriados, agentes suspensores entre outros podem ser empregados. Também estão incluídas preparações na forma sólida que se destinam a ser convertidas, imediatamente antes do uso, em preparações na forma líquida.
[00091] Dependendo do modo de administração, a composição farmacêutica de preferência vai compreender de 0,05 a 99% em peso, mais preferivelmente de 0,1 a 70% em peso, ainda mais preferivelmente de 0,1 a 50% em peso dos componentes ativos, e, de 1 a 99,95% em peso, , mais preferivelmente de 30 a 99,9 % em peso, ain-da mais preferivelmente de 50 a 99,9% em peso de um veículo farmaceuticamente aceitável, todas as percentagens com base no peso total da composição.
[00092] A composição farmacêutica pode adicionalmente conter vários outros componentes conhecidos na técnica, por exemplo, um lubrificante, um agente estabilizante, um agente tamponante, um agente emulsificante, um agente regulador da viscosidade, um tensoativo, um preservativo, um flavorizante ou um corante.
[00093] É especialmente vantajoso formular as composições farmacêuticas acima mencionadas em uma forma de dosagem unitária para facilidade de administração e uniformidade da dosagem. Forma de dosagem unitária conforme usada neste relatório refere-se a unidades fisicamente distintas adequadas como dosagens unitárias, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de componente ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado associado ao veículo farmacêutico requerido. Exemplos de tais formas de dosagem unitárias são comprimidos (que incluem comprimidos sulcados ou revestidos), cápsulas, pílulas, envelopes de pó, pastilhas farmacêuticas, supositórios, soluções ou suspensões injetáveis entre outros, e múltiplos segregados dos mesmos. A dosagem diária do composto de acordo com a invenção, naturalmente, vai variar com o composto empregado, o modo de administração, o tratamento desejado e a doença microbacteriana indicada. No entanto, em geral, resultados satisfatórios serão obtidos quando o composto de acordo com a invenção for administrado a uma dosagem diária não superior a 1 grama, por exemplo na faixa de 10 a 50 mg/kg de peso corporal.
[00094] Dado o fato de que os compostos de fórmula (la) ou Fórmula (lb) são ativos contra infecções bacterianas, os presentes compostos podem ser combinados com outros agentes antibacterianos para combater de forma eficaz as infecções bacterianas.
[00095] Portanto, a presente invenção também se refere a uma combinação de (a) um composto de acordo com a invenção, e (b) um ou mais outros agentes antibacterianos.
[00096] A presente invenção também se refere a uma combinação de (a) um composto de acordo com a invenção, e (b) um ou mais outros agentes antibacterianos, para uso como medicamento.
[00097] A presente invenção também se refere ao uso de uma combinação ou composição farmacêutica definida diretamente acima para o tratamento de uma infecção bacteriana.
[00098] Uma composição farmacêutica compreendendo um veículo farmaceuticamente aceitável e, como componente ativo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de (a) um composto de acordo com a invenção, e (b) um ou mais outros agentes antibacterianos, também está abrangida pela presente invenção.
[00099] A proporção em peso de (a) o composto de acordo com a invenção e (b) os outros agentes antibacterianos quando dados como uma combinação pode ser determinada pelo versado na técnica. A referida proporção e a dosagem exata e a frequência de administração dependem do composto de acordo com a invenção particular e dos outros agentes antibacterianos usados, da condição particular sendo tratada, da severidade da condição sendo tratada, da idade, peso, sexo, dieta, tempo de administração e condição física geral do paciente particular, do modo de administração assim como de outros medicamentos que o indivíduo esteja tomando, como sabem os especialistas na técnica. Além disso, é evidente que a quantidade diária eficaz pode ser diminuída ou aumentada dependendo da resposta da pessoa tra-tada e/ou dependendo da avaliação do médico que prescreve os compostos da presente invenção. Uma proporção em peso particular para o presente composto de fórmula (la) ou (lb) e um outro agente antibac- teriano pode variar de 1/10 a 10/1, mais particularmente de 1/5 a 5/1, ainda mais particularmente de 1/3 a 3/1.
[000100] Os compostos de acordo com a invenção e um ou mais outros agentes antibacterianos podem ser combinados em uma única preparação ou eles podem ser formulados em preparações separadas de modo que possam ser administrados simultaneamente, separadamente ou sequencialmente. Assim sendo, a presente invenção também se refere a um produto contendo (a) um composto de acordo com a invenção, e (b) um ou mais outros agentes antibacterianos, como uma preparação combinada para uso simultâneo, separado ou sequencial no tratamento uma infecção bacteriana.
[000101] Os outros agentes antibacterianos que podem ser combinados com os compostos de fórmula (la) ou (lb) são por exemplo agentes antibacterianos conhecidos na técnica. Os outros agentes antibacterianos compreendem antibióticos do grupo da β-lactama tais como penicilinas naturais, penicilinas semissintéticas, cefalosporinas naturais, cefalosporinas semissintéticas, cefamicinas, 1-oxacefemas, ácidos clavulânicos, penemas, carbapenemas, nocardicinas, mo- nobactamas; tetraciclinas, anidrotetraciclinas, antraciclinas; aminogli- cosídeos; nucleosídeos tais como W-nucleosídeos, C-nucleosídeos, nucleosídeos carbocíclicos, blasticidina S; macrolídeos tais como ma- crolídeos com 12 membros no anel, macrolídeos com 14 membros no anel, macrolídeos com 16 membros no anel; ansamicinas; peptídios tais como bleomicinas, gramicidinas, polimixinas, bacitracinas, antibióticos peptídicos de anel grande contendo ligações lactona, actinomici- nas, amfomicina, capreomicina, distamicina, enduracidinas, micamici- na, neocarzinostatina, stendomicina, viomicina, virginiamicina; ciclo- heximida; cicloserina; variotina; sarcomicina A; novobiocina; griseoful- vina; cloranfenicol; mitomicinas; fumagilina; monensinas; pirrolnitrina; fosfomicina; ácido fusídico; D-(p-hidroxifenila)glicina; D-fenilglicina; enodiinas.
[000102] Antibióticos específicos que podem ser combinados com os presentes compostos de fórmula (la) ou (lb) são por exemplo benzil- penicilina (potássio, procaína, benzatina), fenoximetilpenicilina (potássio), feneticilina potássio, propicilina, carbenicilina (dissódico, fenila sódico, indanila sódico), sulbenicilina, ticarcilina dissódico, meticilina sódica, oxacilina sódica, cloxacilina sódica, dicloxacilina, flucloxacilina, ampicilina, mezlocilina, piperacilina sódica, amoxicilina, ciclacilina, hec- tacilina, sulbactama sódica, cloridrato de talampicilina, cloridrato de bacampicilina, pivmecilinama, cefalexina, cefaclor, cefaloglicina, cefa- droxila, cephradina, cefroxadina, cefapirina sódica, cefalotina sódica, cefacetrila sódico, cefsulodina sódica, cefaloridina, cefatrizina, cefope- razona sódica, cefamandol, cloridrato de vefotiam, cefazolina sódica, ceftizoxima sódica, cefotaxima sódica, cloridrato de cefmenoxima, ce- furoxima, ceftriaxona sódica, ceftazidima, cefoxitina, cefmetazol, cefo- tetano, latamoxef, ácido clavulânico, imipenema, aztreonama, tetraci- clina, cloridrato de clortetraciclina, demetilclortetraciclina, oxitetracicl i- na, metaciclina, doxiciclina, rolitetraciclina, minociclina, cloridrato de daunorubicina, doxorubicina, aclarubicina, sulfato de canamicina, be- canamicina, tobramicina, sulfato de gentamicina, dibecacina, amicaci- na, micronomicina, ribostamicina, sulfato de neomicina, sulfato de pa- romomicina, sulfato de estreptomicina, di-hidrostreptomicina, destomi- cina A, higromicina B, apramicina, sisomicina, sulfato de netilmicina, cloridrato de espectinomicina, sulfato de astromicina, validamicina, ca- sugamicina, polioxina, blasticidina S, eritromicina, estolato de eritromi- cina, fosfato de oleandomicina, tracetiloleandomicina, quitasamicina, josamicina, espiramicina, tilosina, ivermectina, midecamicina, sulfato de bleomicina, sulfato de peplomicina, gramicidina S, polimixina B, ba- citracina, sulfato de colistina, metanossulfonato sódico de colistina, en- ramicina, micamicina, virginiamicina, sulfato de capreomicina, viomici- na, enviomicina, vancomicina, actinomicina D, neocarzinostatina, bes- tatina, pepstatina, monensina, lasalocid, salinomicina, anfotericina B, nistatina, natamicina, tricomicina, mitramicina, lincomicina, clindamici- na, cloridrato de palmitato de clindamicina, flavofosfolipol, ciclosserina, pecilocina, griseofuIvina, cloranfenicol, palmitato de cloranfenicol, mi- tomicina C, pirrolnitrina, fosfomicina, ácido fusidico, bicozamicina, tia- mulina, sicanina.
[000103] Outros agentes microbacterianos que podem ser combinados com os compostos de fórmula (la) ou (lb) são por exemplo rifam- picina (=rifampina); isoniazid; pirazinamida; amicacina; etionamida; etambutol; estreptomicina; ácido para-aminossalicflico, ciclosserina; capreomicina; canamicina; tioacetazona; PA-824; quinolo- nas/fluorquinolonas tais como por exemplo moxifloxacina, gatifloxaci- na, ofloxacina, ciprofloxacina, esparfloxacina; macrolídeos tais como por exemplo claritromicina, clofazimina, amoxicilina com ácido clavulâ- nico; rifamicinas; rifabutina; rifapentina; os compostos descritos no documento W02004/011436.
PREPARAÇÃO GERAL
[000104] Os compostos de acordo com a invenção geralmente podem ser preparados por uma sucessão de etapas, cada uma delas sendo conhecida pelo versado na técnica.
[000105] Os materiais de partida e os intermediários são compostos que ou se encontram comercialmente disponíveis ou podem ser preparados de acordo com os procedimentos reacionais convencionais geralmente conhecidos na técnica. Por exemplo, os compostos de fórmula (la) ou (lb) podem ser preparados de acordo com os métodos descritos nos documentos WO 2004/011436, W02005/070924, W02005/070430 ou W02005/075428, cujos conteúdos aqui incorporados a título de referência.
[000106] Em particular, os compostos de fórmula (la) ou (lb) podem ser preparados por reação de um intermediário de fórmula (Ha) ou (Ilb) com um intermediário de fórmula (III) de acordo com o esquema reacional a seguir (1): Esquema 1
usando nBuLi em uma mistura de uma base adequada, tai como por exemplo di-isopropila amina, e um solvente adequado, tal como por exemplo tetra-hidrofurano, onde todas as variáveis são como definidas na fórmula (la) ou (lb). Agitação pode aumentar a velocidade da reação. A reação pode ser convenientemente realizada a uma temperatura variando entre -20 e -70°C.
[000107] Os compostos de fórmula (la) ou (lb) em que R6 representa fenila substituída com Het, e em que R3 representa alquila, arilalquila, arila, Het, Het-alquila ou '
, 0i-θfθfjdθ R3sencio re presentado por R3' e os referidos compostos sendo representados pela fórmula (la-1) ou (lb-1), podem ser preparados por reação de um intermediário de fórmula (IV-a) ou (IV-b) em que W1 representa um grupo de saída adequado, tal como por exemplo halo, por exemplo cloro ou bromo, com Het-B(OH)2 na presença de um catalisador adequado, tal como por exemplo Pd(PPh3)4, na presença de uma base adequada, tal como por exemplo NaaCOa, e um solvente adequado, tal como por exemplo tolueno ou 1,2-dimetoxietano (DME) e um álcool, por exemplo metanol de acordo com o esquema reacional a seguir (2): Esquema 2
[000108] Os compostos de fórmula (la) ou (b) em que q é igual a 2, 3 ou 4, os referidos compostos sendo representados pela fórmula (la- 2) ou (lb-2), podem ser preparados por reação de um intermediário de fórmula (V-a) ou (V-b) em que q' é 0, 1 ou 2, com uma amina primária ou secundária HNR4R5 na presença de um catalisador adequado, tal como por exemplo Rh(cod)2BF4, opcionalmente na presença de um segundo catalisador (para a redução), tal como por exemplo lr(cod)2BF4, na presença de um ligante adequado, tal como por exemplo Xantphos, em um solvente adequado, tal como por exemplo tetra- hidrofurano e um álcool, por exemplo metanol, na presença de CO e H2 (sob pressão) à temperatura elevada. Esta reação é de preferência feita para intermediários de fórmula (V) em que q' é 1.
[000109] Os compostos de fórmula (la) ou (lb) também podem ser preparados por reação de um intermediário de fórmula (Vl-a) ou (Vl-b) em que W2 representa um grupo de saída adequado, tal como por exemplo halo, por exemplo cloro ou bromo, com uma amina primária ou secundária adequada HNR4R5, opcionalmente na presença de um
solvente adequado, tal como por exemplo acetonitrila.
[000110] Consideramos que o versado na técnica sabe explorar as temperaturas, as diluições, e os tempos de reação apropriados para otimizar as reações acima para obter um composto desejado.
[000111] Os compostos de fórmula (la) ou (lb) podem ainda ser preparados por conversão dos compostos de fórmula (la) ou (lb) uns nos outros de acordo com reações de transformação de grupos conhecidas na técnica.
[000112] Os compostos de fórmula (la) ou (lb) podem ser convertidos nas formas de N-óxido correspem quentes seguindo procedimentos conhecidos na técnica para converter um nitrogênio trivalente na forma de seu N-óxido. A referida reação de A/-oxidação geralmente pode ser realizada por reação do material de partida de fórmula (la) ou (lb) com um pe- róxido orgânico ou inorgânico apropriado. Peróxidos inorgânicos apropriados compreendem, por exemplo, peróxido de hidrogênio, peróxidos de metal alcalino ou de metal alcalino-terroso, por exemplo peróxido de sódio, peróxido de potássio; peróxidos orgânicos apropriados podem compreender peróxi ácidos tais como, por exemplo, ácido benzenocarboperoxoico ou ácido benzenocarboperoxoico halo substituído, por exemplo ácido 3-clorobenzenocarboperoxoico, ácidos peroxoalcanoicos, por exemplo ácido peroxoacético, alquilhidroperóxidos, por exemplo ter-butila hidrope- róxido. Solventes adequados são, por exemplo, água, alcóois inferiores, por exemplo etanol e outros; hidrocarbonetos, por exemplo tolueno, ceto- nas, por exemplo 2-butanona, hidrocarbonetos halogenados, por exemplo diclorometano, e misturas destes solventes.
[000113] Os compostos de fórmula (la) ou (lb) em que R1 representa halo, por exemplo bromo, podem ser convertidos em um composto de fórmula (la) ou (lb) em que R1 representa Het, por reação com Het- B(OH)2 na presença de um catalisador adequado, tal como por exemplo Pd(OAc)2 ou Pd(PPh3)4, na presença de uma base adequada, tal como por exemplo K3PO4 ou Na2CO3, e um solvente adequado, tal como por exemplo tolueno ou 1,2-dimetoxietano (DME).
[000114] Igualmente, os compostos de fórmula (la) ou (lb) nos quais R1 é halo, por exemplo bromo, podem ser convertidos em compostos de fórmula (la) ou (lb) nos quais R1é alquila, por exemplo metila, por tratamento com um agente alquilante apropriado tal como CH3B(OH)2 ou (CH3)4Sn na presença de um catalisador adequado, tal como por exemplo Pd(PPh3)4, em um solvente adequado tal como por exemplo tolueno ou 1,2-dimetoxietano (DME).
[000115] Os compostos de fórmula (la) ou (lb) em que R1 é halo, em particular bromo, podem ser convertidos em um composto de fórmula (la) ou (lb) em que R1 é hidrogênio, por reação com HCOONH4 na presença de um catalisador adequado tal como por exemplo paládio sobre carvão vegetal, e na presença de um solvente adequado, tal como por exemplo um álcool, por exemplo metanol. As mesmas con-dições reacionais podem ser usadas para converter um composto de fórmula (la) ou (lb) em que R4 é benzila em um composto de fórmula (la) ou (lb) em que R4 é hidrogênio.
[000116] Os compostos de fórmula (la) ou (lb) em que R6 representa fenila substituída com halo, podem ser convertidos em um composto de fórmula (la) ou (lb) em que R6 representa fenila substituída com Het, por reação com Het-B(OH)2 na presença de um catalisador adequado, tal como por exemplo Pd(PPh3)4, na presença de uma base adequada, tal como por exemplo Na2COs, e um solvente adequado, tal como por exemplo tolueno ou 1,2-dimetoxietano (DME) e um álcool, por exemplo metanol.
[000117] Um composto de fórmula (la) em que R2 representa methó- xi, pode ser convertido no composto de fórmula (lb) correspem quente em que R8 é hidrogênio e R9 é oxo, por hidrólise na presença de um ácido adequado, tal como por exemplo ácido clorídrico, e um solvente adequado, tal como por exemplo dioxano.
[000118] Os compostos de fórmula (la) ou (lb) também podem ser convertidos em uma amina quaternária por reação com um agente quaternizante adequado, tal como, por exemplo, um Ci-ealquila halo- geneto opcionalmente substituído,Ci-ealquila halogeneto, Ci- βalquilcarbonila halogeneto, arilcarbonila halogeneto, Het1Ci-6alquila halogeneto ou Hefcarbonila halogeneto, por exemplo metila iodeto ou benzila iodeto, na presença de um solvente adequado, tal como por exemplo acetona em que Het1 representa furanila ou tienila; ou um heterociclo bicíclico selecionado de benzofuranila ou benzotienila; cada heterociclo monocíclico e bicíclico podendo ser opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes, cada substituinte independentemente selecionado do grupo que consiste em halo, Ci-βalquila e arila. As referidas aminas quaternárias são representdas pela fórmula abaixo em que R10 representa Ci-βalquila, Ci-θalquilcarbonila, arilCi-θalquila, arilcarbonila, Het1Ci-βalquila ou Hefcarbonila e em que A’ representa um contraíon farmaceuticamente aceitável, tal como por exemplo iodeto.
[000119] É evidente que nas reações acima e nas reações a seguir, os produtos reacionais podem ser isolados do meio reacional e, se necessário, ainda purificados de acordo com metodologias geralmente conhecidas na técnica, tais como extração, cristalização e cromatografia. É evidente ainda que produtos reacionais que existem em mais de umaa forma enantiomérica, podem ser isolados de sua mistura por técnicas conhecidas, em particular cromatografia preparatória, tal como HPLC preparatória, cromatografia quiral. Diastereoisômeros individuais ou enantiômeros individuais também podem ser obtidos por cromatografia com fluido supercrítico (SCF).
[000120] Os materiais de partida e os intermediários são compostos que ou se encontram comercialmente disponíveis ou podem ser prepa- rados de acordo com procedimentos reacionais convencionais geralmente conhecidos na técnica. Por exemplo, os intermediários de fórmula (ll-a) ou (II b) ou (III) podem ser preparados de acordo com os métodos descritos nos documentos W02004/011436, W02005/070924, W02005/070430 ou W02005/075428, cujos conteúdos estão aqui incorporados a título de referência.
[000121] Em particular, os intermediários de fórmula (Ha) podem ser preparados de acordo com o esquema reacional a seguir (3): Esquema 3
em que todas as variáveis são como definidas na formula (la). O esquema reacional (3) compreende a etapa (a) na qual uma anilina apropriadamente substituída é reagida com cloreto de acila apropriado tal como por exemplo cloreto de 3-fenilpropionila, cloreto de 3-fluorobenzenopropionila ou cloreto de p-clorobenzenopropionila, na presença de uma base adequada, tal como trietilamina, e um solvente inerte à reação adequado, tal como cloreto de metileno ou dicloreto de etileno. A reação pode ser convenientemente realizada a uma temperatura variando entre a temperatura ambiente e a temperatura de refluxo. Em uma etapa seguinte (b) o aduto obtido na etapa (a) é reagido com cloreto de fosforila (POCh) na presença de N,/V-dimetilformamida (formilação de Vilsmeier-Haack seguida de ciclização). A reação pode ser convenientemente realizada a uma temperatura variando entre a temperatura ambiente e a temperatura de refluxo. Em uma etapa seguinte (c-1), um grupo R2 específico, em que R2 é por exemplo um radical Ci-6alquilóxi é introduzido por reação do composto intermediário obtido na etapa (b) com ’O-Ci-βalquila na presença de um solvente adequado, tal como por exemplo HO-Ci-βalquila. O intermediário obtido na etapa (b) também pode ser convertido em um intermediário em que R2 é por exemplo um radical Ci-ealquiltio por reação com S=C(NH2)2 na presença de um solvente adequado, tal como por exemplo um álcool, por exemplo etanol, ou uma mistura de álco- ol/água, opcionalmente na presença de uma base adequada, tal como por exemplo KOH, (vide etapa (c-2)) seguida por reação com Ci- ealquila-l na presença de uma base adequada, tal como por exemplo K2CO3 e um solvente adequado, tal como por exemplo 2-propanona (vide etapa (d)). O intermediário obtido na etapa (b) também pode ser convertido em um intermediário em que R2 é -N(R2a)(alquila) em que R2a é hidrogênio ou alquila, por reação com com um sal adequado de NH(R2a)(alquila) na presença de uma base adequada, tal como por exemplo carbonato de potássio, e um solvente adequado, tal como por exemplo acetonitrila (etapa (c-3)). O intermediário obtido na etapa (b) também pode ser convertido em um intermediário em que R2 é Ci- 6alquiloxiCi-6alquilóxi opcionalmente substituído com C-i-ealquilóxi, o referido R2 sendo representado por R2b, por reação com Ci- ealquiloxiCi-eyalquilOH opcionalmente substituído com Ci-ealquilóxi, na presença de NaH e um solvente adequado, tal como por exemplo te- tra-hidrofurano (etapa (c-4)).
[000122] Os intermediários de fórmula (Ha) em que R2 e R7 representam hidrogênio, os referidos intermediários sendo representados pela fórmula (lla-5), podem ser preparados de acordo com o esquema reacional (4) a seguir, em que em uma primeira etapa (a) uma indol-2,3- diona substituída é reagida com um 3-fenilpropionaldído opcionalmente substituído na presença de uma base adequada tal como hidróxido de sódio (reação de Pfitzinger), depois do que o composto de ácido carboxílico é descarboxilado em uma etapa seguinte (b) à alta temperatura na presença de um solvente inerte à reação adequado tal como éter difeníl ico. Esquema 4
[000123] Os intermediários de fórmula (Ha) em que R6 representa Het, os referidos intermediários sendo representados pela fórmula (Ha- 6), podem ser preparados de acordo com o esquema reacional 4a a seguir. Esquema 4a
[000124] O esquema reacional (4a) compreende a etapa (a) na qual uma porção quinolina apropriada é reagido com Het-C(=O)-H usando nBuLi em uma mistura de uma base adequada, tal como por exemplo 2,2,6,6-tetrametilpiperidina, e um solvente adequado, tal como por exemplo tetra-hidrofurano. Agitação pode aumentar a velocidade da reação. A reação pode ser convenientemente realizada a uma temperatura variando entre -20 e -70 °C. Em uma etapa seguinte (b), o produto obtido na etapa (a) é convertido em um intermediário de fórmula (lla-6) por reação com um ácido adequado, tal como por exemplo ácido trifluoracético, e triisopropilsilano, na presença de um solvente adequado, tal como por exemplo cloreto de metileno.
[000125] Os intermediários de fórmula (llb), em particular (llb-1) ou (llb-2), podem ser preparados de acordo com o esquema reacional (5) a seguir. Esquema 5
[000126] O esquema reacional (5) compreende a etapa (a) na qual a porção quinolina é convertida na porção quinolinona por reação com um ácido adequado, tal como por exemplo ácido clorídrico. Em uma etapa seguinte (b), um substituinte R8 é introduzido por reação do intermediário obtido na etapa (a) com um agente alquilante adequado, tal como por exemplo alquila iodeto, por exemplo metila iodeto, na presença de uma base adequada, tal como por exemplo NaOH ou cloreto de benziltrietilamônio, um solvente adequado, tal como por exemplo tetra-hidrofurano.
[000127] Os intermediários de fórmula (lib) em que R8 e R9 são tomados juntos para formar o radical -CH=CH-N=, os referidos intermediários sendo representados pela fórmula (llb-3), podem ser preparados de acordo com o esquema reacional (6) a seguir. Esquema 6
[000128] O esquema reacional (6) compreende a etapa (a) na qual o intermediário é reagido com NH2-CH2-CH(OCH3)2. Em uma etapa seguinte (b), a porção imidazolila fundida é formada por reação com ácido acético na presença de um solvente adequado, tal como por exemplo xileno.
[000129] Os intermediários de fórmula (III) são compostos ou se encontram comercialmente disponíveis ou podem ser preparados de acordo com procedimentos reacionais convencionais geralmente conhecidos na técnica. Por exemplo, os intermediários de fórmula (III) podem ser preparados de acordo com o esquema reacional (7) a seguir: Esquema 7
[000130] O esquema reacional (7) compreende a etapa (a) na qual R3, em particular um arila apropriadamente substituído, mais particularmente um fenila apropriadamente substituído, é reagido por reação de Friedel-Craft com um cloreto de acila apropriado tal como cloreto de 3-cloropropionila ou cloreto de 4-clorobutirila, na presença de um ácido de Lewis adequado, tal como por exemplo AlCh, FeCh, SnCk, TiCk ou ZnCh e um solvente inerte à reação adequado, tal como cloreto de metileno ou dicloreto de etileno. A reação pode ser convenientemente realizada a uma temperatura variando entre a temperatura ambiente e a temperatura de refluxo. Em uma etapa seguinte (b), um grupo amino (-NR4R5) é introduzido por reação do intermediário obtido na etapa (a) com uma amina primária ou secundária (HNR4R5).
[000131] Os intermediários de fórmula (III) também podem ser preparados de acordo com o esquema reacional (7a) a seguir: Esquema 7a
[000132] O esquema reacional (7a) compreende a etapa (a) na qual R3-W4, em que W4 representa um grupo de saída adequado, tal como por exemplo halo, por exemplo cloro ou bromo, em particular um arila apropriadamente substituído, mais particularmente um naftila apropriadamente substituído, por exemplo 2-bromo-naphthalene, é reagido com um cloreto de acila apropriado tal como cloreto de 3- cloropropionila ou cloreto de 4-clorobbutirila ou cloreto de 5-bromo- pentanoila, na presença de Mg, I2 e um solvente adequado, tal como por exemplo tetra-hidrofurano. A reação pode ser convenientemente realizada a uma temperatura variando entre a temperatura ambiente e a temperatura de refluxo. Em uma etapa seguinte (b), um grupo amino (-NR4R5) é introduzido por reação do intermediário obtido na etapa (a) com uma amina primária ou secundária (HNR4R5) na presença de um solvente adequado, tal como por exemplo acetonitrila, e uma base adequada, tal como por exemplo K2CO3.
[000133] Os intermediários de fórmula (III) também podem ser preparados de acordo com o esquema reacional (8) a seguir: Esquema 8
[000134] O esquema reacional (8) compreende a etapa (a) na qual R3-C(=O)-H, por exemplo um arilcarboxaldeído apropriadamente substituído, mais particularmente um fenila ou naftilcarboxaldeído apropriadamente substituído, é reagido com um composto intermediário apropriado tal como por exemplo 1-bromo-4-clorobutano, na presença de um reagente de Grignard e um solvente adequado, tal como por exemplo éter dietílico, tetra-hidrofurano. A reação pode ser convenientemente realizada a uma temperatura baixa por exemplo 5°C. Em uma etapa seguinte (b), uma oxidação é realizada na presença de reagente de Jones em um solvente adequado, tal como por exemplo acetona. Em uma etapa seguinte (c), um grupo amino (-NR4R5) é introduzido por reação do composto intermediário obtido na etapa (b) com uma amina primária ou secundária HNR4R5 na presença de um solvente adequado, tal como por exemplo acetonitrila, e uma base adequada, tal como por exemplo K2CO3.
[000135] Alternativamente, os intermediários de fórmula (III) podem ser preparados de acordo com o esquema reacional (9) a seguir: Esquema 9
[000136] O esquema reacional (9) compreende a etapa (a) na qual por exemplo um ácido adequado é reagido com NH(CH3)(OCH3) na presença de 1,1'-carbonildiimidazol e um solvente adequado, tal como por exemplo CH2CI2. Em uma etapa seguinte (b), o produto obtido na etapa (a) é reagido com um reagente de Grignard adequado, por exemplo brometo de 4-clorobutila magnésio, na presença de um solvente adequado, tal como por exemplo tetra-hidrofurano. Em uma etapa seguinte (c), um grupo amino (-NR4R5) é introduzido por reação do intermediário obtido na etapa (b) com uma amina primária ou secundária HNR4R5 na presença de um solvente adequado, tal como por exemplo acetonitrila, e uma base adequada, tal como por exemplo K2CO3.
[000137] Alternativamente, os intermediários de fórmula (III) em que q é 1, os referidos intermediários sendo representados pela fórmula (lll-a), podem ser preparados de acordo com o esquema reacional (10) a seguir: Esquema 10
[000138] O esquema reacional (10) compreende a etapa na qual um derivado acetílico adequado de R3 tal como por exemplo acetilci- clo-hexano, é reagido com paraformaldeído e uma amina primária ou secundária adequada HNR4R5, de preferência na forma de seu sal, na presença de um ácido adequado, tal como por exemplo ácido clorídrico entre outros, e um solvente adequado, tal como por exemplo um álcool, por exemplo etanol.
[000139] Os intermediários de fórmula (III) em que R3 representa R3a'-CH2-CH2- (que é possível para os intermediários de fórmula (III) em que R3 representa alquila, arilalquila, arila-O-alquila, arila-alquila-O- alquila, Het-alquila, Het-O-alquila ou Het-alquila-O-alquila e R3a' é o mesmo que R3 porém com menos 2 átomos de carbono na cadeia al quila presa ao restante da molécula e em que q representa 1, os referidos intermediários sendo representados pela fórmula (lll-b), podem ser preparados de acordo com o esquema reacional (11) a seguir: Esquema 11
[000140] O esquema reacional (11) compreende a etapa (a) em que um aldeído adequado é reagido com acetone na presença de uma base adequada, tal como por exemplo hidróxido de sódio. Em uma etapa seguinte (b), o produto obtido na etapa (a) é reagido com uma amina primária ou secundária HNR4R5 na presença de CH2(=O), um ácido adequado, tal como por exemplo ácido clorídrico entre outros, e um solvente adequado, tal como por exemplo um álcool, por exemplo etanol. Em uma etapa seguinte (c), o produto obtido na etapa (b) é hi- drogenado (H2) na presença de um catalisador adequado, tal como por exemplo paládio sobre carvão vegetal, e um solvente adequado, tal como por exemplo água e um álcool, por exemplo etanol.
[000141] Os intermediários de fórmula (III) em que R3 representa um fenila halo substituído, podem ser convertidos em um intermediário de fórmula (III) em que R3 representa fenila substituída com arila, por reação com ácido arilborônico na presença de uma base adequada, tal como por exemplo fosfato de potássio, um catalisador adequado, tal como por exemplo acetato de paládio, e um ligante adequado, tal co- mo por exemplo 2-diciclo-hexilfosfino-2',6'-dimetoxibifenila, em um solvente apropriado, tal como por exemplo tolueno.
[000142] Os intermediários de fórmula (III) em que R3 representa um fenila halo substituído, também podem ser convertidos em um intermediário de fórmula (III) em que R3 representa fenila substituída com C2-βalquenila opcionalmente substituída com fenila, por reação com um C2-6alqueno apropriado, tal como por exemplo estireno, na presença de uma base adequada, tal como por exemplo trietilamina, um catalisador adequado, tal como por exemplo acetato de paládio, e um ligante adequado, tal como por exemplo tri-o-tolilfosfina, em um solvente apropriado, tal como por exemplo DMF.
[000143] Os intermediários de fórmula (IV-a) ou (IV-b) podem ser preparados de acordo com o procedimento reacional descrito no esquema (1) acima ou de acordo com os procedimentos descritos no documento WO 2004/011436. Os intermediários de fórmula (V-a) podem ser preparados de acordo com o esquema reacional (12) a seguir: Esquema 12
[000144] O esquema reacional (12) compreende a etapa de reagir uma quinolina apropriadamente substituída em que W3 representa um grupo de saída adequado, tal como por exemplo halo, por exemplo bromo, com uma desoxibenzoína apropriadamente substituída na presença de um catalisador adequado, tal como por exemplo diacetato de paládio, um ligante adequado, tal como por exemplo X-PHOS, uma base adequada, tal como por exemplo carbonato de césio, um solvente adequado, tal como por exemplo xileno, em um fluxo de N2. Em uma etapa seguinte (b), 0 produto obtido na etapa (a) é reagido com um reagente de Grignard adequado (por exemplo CH2=CH-(CH2)q-Mg-Br, tal como por exemplo brometo de alilmagnésio), em um solvente adequado, tal como por exemplo tetra-hidrofurano.
[000145] Os intermediários de fórmula (V-b) podem ser preparados da mesma maneira.
[000146] Os intermediários de fórmula (Vl-a) podem ser preparados de acordo com o esquema reacional (13) a seguir: Esquema 13
no esquema reacional (13), um intermediário de fórmula (II- a) é reagido com um intermediário de fórmula (VII), para sua síntese referimo-nos aos esquemas 7, 8 e 9, na presença de n-BuLi em um solvente adequado, tal como por exemplo tetra-hidrofurano, e uma base adequada, tal como por exemplo di-isopropila amina. Agitação pode aumentar a velocidade da reação. A reação pode ser convenientemente realizada a uma temperatura variando entre -20 e -70°C.
[000147] Os intermediários de fórmula (Vl-b) podem ser preparados da mesma maneira.
[000148] Os exemplos a seguir ilustram a presente invenção sem limitá-la.
PARTE EXPERIMENTAL
[000149] A configuração estereoquímica absoluta dos átomos de carbono estereogênicos ou a configuração na ligação dupla de alguns compostos ou intermediários não foi determinada experimentalmente. Nesses casos a forma estereoquimicamente isomérica que foi isolada primeiro é indicada por "A" e a segunda por "B", sem qualquer outra referência à configuração estereoquímica real. No entanto, as referidas formas isoméricas "A" e "B" podem ser inequivocadamente caracterizadas pelo versado na técnica, usando métodos conhecidos na técnica tais como, por exemplo, RMN. Consideramos que o versado na técnica sabe reconhecer ométodo mais apropriado para determinar a configuração estereoquímica real.
[000150] No caso de "A" e "B" serem misturas estereoisoméricas, em particular misturas de enantiômeros, eles podem ser ainda separados e com isso as respectivas primeiras frações isoladas são indicadas por "A1"respectivamente "B1" e as segundas por "A2"respectivamente "B2", sem qualquer outra referência à configuração estereoquímica real. As referidas formas, entretanto, as referidas formas isoméricas "A1", "A2" e "B1", "B2", em particular as referidas formas enantioméri- cas "A1", "A2" e "B1", "B2", podem ser inequivocadamente caracterizadas pelo versado na técnica, usando métodos conhecidos na técnica tais como, por exemplo, difração de raios X.
[000151] Em alguns casos, quando um composto final ou um intermediário, indicado como um diastereoisômero ou enantiômero particular, é convertido em um outro composto final/intermediário, este último pode herdar a indicação para diastereoisômero (A,B) ou enantiômero (A1, A2, B1, B2) do primeiro.
[000152] Doravante "DMF" significa /V,N-dimetilformamida, "THF" significa tetra-hidrofurano, "TEMPO" significa 2,2,6,6-tetrametila-1- piperidinilóxi, "DIPE" significa éter di-isopropílico e "DCM" significa di- clorometano. A. Preparação dos compostos intermediários Exemplo A1 a. Preparação do intermediário 1
[000153] Cloreto de 4-clorobenzenopropanoila (0,466 mol) foi adicionado lentamente a 5°C a uma solução de 4-bromobenzenamina (0,388 mol) em EtsN (70 ml) e CH2CI2 (700 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. H2O foi adicionada. O precipitado foi removido por filtração, lavado com H2O e seco. O resíduo foi recristalizado a partir de éter dietílico. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: 110 g de intermediário 1 (83 %) (p.f. 194°C). b. Preparação do intermediário 2
[000154] POCI3 (192,6 ml) foi adicionado lentamente a 5°C à DMF (35,4 ml). Intermediário 1 (preparado de acordo com A1.a) (0,296 mol) foi adicionado. A mistura foi agitada a 80°C por 12 horas, despejada lentamente em gelo e extraída com CH2CI2. A camada orgânica foi separada, seca (MgSOzi), filtrada e o solvente foi evaporado. O produto foi usado sem purificação posterior. Rendimento: 150 g de inter-mediário 2. c. Preparação do intermediário 3
[000155] Uma mistura de intermediário 2 (preparado de acordo com A1 .b) (0,409 mol) e uma solução de CHsONa a 30% em CH3OH (300 ml) e CH3OH (300 ml) foi agitada e refluxada por 15 horas. A mistura foi despejada em gelo e extraída com CH2CI2. A camada orgânica foi separada, seca (MgSCU), filtrada e 0 solvente foi evaporado. O resíduo (150 g) foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (eluente: ciclo-hexano/CH2Cl2 90/10; 35-70 pm). As frações puras foram recolhidas e o solvente foi evaporado. O resíduo foi cristalizado a partir de éter dietílico. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: 27 g de intermediário 3 (18 %) (p.f. 100°C). d. Preparação do intermediário 21
[000156] O Intermediário 21 foi preparado de acordo com o mesmo protocolo que o intermediário 3 (descrito em A1 .c). e. Preparação do intermediário 15
[000157] Uma mistura de
(73 g) (preparado de acordo com A1b), 200 ml de metanol anidro e 100 ml de uma solução 5 M de metilato de sódio foi aquecida ao refluxo com agitação por 2 dias. O precipitado formado foi removido por filtração, lavado com metanol e água, e seco ao ar. O resíduo foi purificado por cromatografia (SÍO2, eluente: clorofórmio 100%). Rendimento: 53 g de intermediário 15(87%, p.f. = 102-103°C). Exemplo A2 a-1. Preparação do intermediário 4
[000158] 1,1'-carbonildiimidazol (24 g, 0,148 mol) foi adicionado aos poucos a uma mistura de ácido fenoxiacético (15 g, 0,0985 mol; CAS [122-59-8]) em CH2CI2 (150 ml) enquanto era resfriado em um banho de gelo a 5°C. A mistura foi agitada por 1 hora a 5°C e cloridrato de N,O-dimetilhidroxilamina (14,4 g, 0,148 mol) foi adicionado e a sus- pensão foi agitada à temperatura por 20 horas. A mistura foi despejada em HC11 N e extraída com CH2CI2. A camada orgânica foi lavada com K2CO3 10 %, seca em MgSCX filtrada, e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (eluente: CH2CI2). As frações puras foram recolhidas e o solvente foi evaporado. Rendimento: 16,6 g de intermediário 4 (86 %). a-2. Preparação do intermediário 5
[000159] O intermediário 5 foi preparado de acordo com o mesmo procedimento que aquele descrito para o intermediário 4 em A2.a-1, partindo de ácido 4-metilfenóxi acético [940-64-7]. Rendimento: 98 %. a-3. Preparação do intermediário 11
[000160] O Intermediário 11 foi preparado de acordo com o mes- mo procedimento que aquele descrito para o intermediário 4 em A2.a- 1, partindo de ácido benziloxiacético [30379-55-6]. Rendimento: 95 %. b-1. Preparação do intermediário 6
[000161] Uma solução de 1-bromo-4-clorobutano (12,65 ml, 0,110 mol) em THF/éter dietílico (50/50, 100 ml) foi adicionada lentamente a uma solução de magnésio (2,68 g, 0,110 mol) em THF (30 ml) man- tendo um refluxo de éter dietílico. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 30 minutos eees resfriada a 5°C. Uma solução de inter- mediário 4 (16,56 g, 0,0848 mol) em THF (35 ml) foi adicionada. A mis- tura reacional foi então agitada a 50 °C por 4 horas, e resfriada para a temperatura ambiente. A mistura foi hidrolisada com NH4CI 10%, e ex- traída com EtOAc. A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada, e o solvente foi evaporado. O resíduo foi usado sem purificação posterior. Rendimento: 19 g de intermediário 6 (99 %). b-2. Preparação do intermediário 7
[000162] O intermediário 7 foi preparado de acordo com o mesmo procedimento que aquele descrito para o intermediário 6 em A2.b-1, partindo do intermediário 5 e 1-bromo-4-clorobutano. Rendimento: 98 %. b-3. Preparação do intermediário 12
[000163] O Intermediário 12 foi preparado de acordo com o mesmo procedimento que aquele descrito para o intermediário 6 em A2.b- 1, partindo do intermediário 11 e 1-bromo-4-clorobutano. Rendimento: 90 %. c-1. Preparação do intermediário 8
[000164] Uma solução de intermediário 6 (9,6 g, 0,0423 mol), 1- metilpiperazina (4,7 ml, 0,0423 mol) e carbonato de potássio (6,4 g, 0,0465 mol) em acetonitrila (100 ml) foi aquecida por 18 horas a 80°C e em seguida resfriada para a temperatura ambiente. A mistura foi despejada em água, e éter dietílico foi adicionado. A camada orgânica foi acidificada ccom HCI 1 N e extraída com éter dietílico. Em seguida a camada aquosa obtida foi basificada com NaOH 3 N e extraída com éter dietílico. A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada, e o solvente foi evaporado. O resíduo foi usado sem purificação posterior. Rendimento: 3,82 g de intermediário 8 (31 %). c-2. Preparação do intermediário 9
[000165] O Intermediário 9 foi preparado de acordo com o mesmo procedimento que aquele descrito para o intermediário 8 em A2.C-1, também partindo do intermediário 6. Rendimento: 33 %. c-3. Preparação do intermediário 10
[000166] O Intermediário 10 foi preparado de acordo com o mesmo procedimento que aquele descrito para o intermediário 8 em A2.c- 1, partindo do intermediário 7. Rendimento: 33 %. c-4. PreparaçãodoJntermediário 13
[000167] O Intermediário 13 foi preparado de acordo com o mesmo procedimento que aquele descrito para o intermediário 8 em A2.C-1, partindo do intermediário 12. Rendimento: 27 %. c-5. Preparação do intermediário 14
[000168] O Intermediário 14 foi preparado de acordo com o mesmo procedimento que aquele descrito para o intermediário 8 em A2.C-1, partindo do intermediário 7. Rendimento: 31 %. c-6. Preparação do intermediário 23
[000169] O Intermediário 23 foi preparado de acordo com o mesmo procedimento que aquele descrito para o intermediário 8 em A2.c- 1, partindo do intermediário 12. Rendimento: 31 %. Exemplo A3 a. Preparação do intermediário 22
[000170] A uma solução agitada de reagente de Grignard a 5°C, preparada a partir de aparas de Mg (0,14 mol) e 1-bromo-4- clorobutano (0,14 mol) em éter dietílico (150 ml), foi adicionada em gotas uma solução de 2-naftilcarboxaldeído (0,0935 mol) em THF (150 ml). Depois de a mistura ser agitada por 4 horas a 5°C uma solução de cloreto de amónio (10% aquosa) foi adicionada lentamente. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio, filtrada, e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (eluente: ciclo-hexano/EtOAc : 90/10; 15-40 pm). As frações puras foram recolhidas e o solvente foi evaporado. Rendimento: 8,2 g de intermediário 22 (35 %). b. Preparação do intermediário 16
[000171] Reagente de Jones (0,024 mol), preparado por dissolução de 40 g de CrOs em 80 ml de água e 20 ml de ácido sulfúrico concen- trado, foi adicionado em gotas a uma solução resfriada de intermediá- rio 22 (0,061 mol) em acetona (120 ml). Depois da adição, a mistura reacional foi agitada por 1 hora a 0°C. Água foi adicionada e a mistura foi extraída com éter dietílico. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio, filtrada, e o solvente foi evaporado . Rendimento: 3,8 g de intermediário 16 (96 %). c. Preparação do intermediário 17
[000172] Uma mistura de intermediário 16 (0,0308 mol), cloridrato de dimetilamina (0,123 mol) e carbonato de potássio (0,154 mol) em acetonitrila (150 ml) foi agitada ao refluxo por uma noite. Em seguida a mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente, despejada em água e extraída com éter dietílico. A camada orgânica foi extraída com HCI 1 N, a camada aquosa resultante foi basificada com NaOH 3 N e extraída com éter dietílico, lavada com salmoura, seca em MgSCU, filtrada, e o solvente foi evaporado. Rendimento: 4,2 g de intermediário 17(53%). Exemplo A4 Preparação do intermediário 20
[000173] Uma mistura de 4-acetila-1-benzoilpiperidina (0,0086 mol; [33037-82-0]), formaldeído (0,0133 mol), cloridrato de dimetilamina (0,026 mol) e HCI concentrado (1 gota) em EtOH (30 ml) foi agitada e refluxada por 72 horas. O solvente foi evaporado. O resíduo foi recu- perado em CH2Cl2/H2O/NaOH 3 N. A camada orgânica foi separada, seca (MgSCU), filtrada, e o solvente foi evaporado. O resíduo (11,7 g) foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 95/5/0,1; 20-45 pm). As frações puras foram recolhidas e o solvente foi evaporado. Rendimento: 5,5 g de interme- diário 20 (44 %; óleo). Exemplo A5 a-1. Preparação do intermediário 18
(mixture of dia A and dia B)
[000174] Uma solução de intermediário 15 (0,00661 mol) em THF (20 ml) foi adicionada a uma solução de di-isopropilamida de lítio (comercialmente disponível, 2 M em THF/heptano, 0,00793 mol) em THF (27 ml) a -70°C. A mistura foi agitada a -70°C por 2 horas. Uma solu ção de intermediário 17 (0,00661 mol) em THF (20 ml) foi adicionada. A mistura foi agitada a -70°C por 3 horas. Água foi adicionada e a mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (eluente: CH2CI2/CH3OH 50/1; 15-40 pm). As frações puras foram re-colhidas e o solvente foi evaporado. Rendimento: Intermediário 18 (uma mistura de dia A e dia B) (30%). a-2. Preparação do intermediário 19
[000175] O Intermediário 19 foi preparado de acordo com o mesmo protocolo que o intermediário 18 (descrito em A5.a-1). Exemplo A6 a. Preparação do intermediário 24
[000176] nBuLi 1,6 M em hexano (7,8 ml, 0,0124 mol) foi adicionado lentamente a -20°C em um fluxo de N2 a uma solução de 2,2,6,6- tetrametilpiperidina (2,1 ml, 0,0124 mol) em THF (32 ml). A mistura foi agitada a -20°C por 20 minutos, e em seguida resfriada a -70 °C. Uma solução de 6-bromo-2-metoxiquinolina (CAS 99455-05-7) (2,5 g, 0,0104 mol) em THF (24 ml) foi adicionada lentamente. A mistura foi agitada a -70 °C por 90 minutos. Uma solução de 3- furancarboxaldeído (1,2 g, 0,0124 mol) em THF (18 ml) foi adicionada lentamente. A mistura foi agitada por uma noite à temperatura ambiente, hidrolisada com água gelada, e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca em MgSO4, filtrada, e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica- gel (eluente: ciclo-hexano/EtOAc: 50/50; 15-40 pm). As frações desejadas foram recolhidas e o solvente foi evaporado. Rendimento: 1,46 g de intermediário 24 (rendimento: 39 %) como um sólido branco. b. Preparação do intermediário 25
[000177] Ácido trifluoracético (2,3 ml; 0,003 mol) foi adicionado a uma solução de intermediário 24 (0,5 g; 0,0015 mol) e triisopropilsilano (6,1 ml; 0,003 mol) em CH2CI2 (15 ml). A mistura foi agitada por uma noite à temperatura ambiente, hidrolisada com água gelada, e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca em MgSO4, filtra- da, e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromato- grafia em coluna sobre sílica-gel (eluente: ciclo-hexano/EtOAc de 100/0 a 0/100; 15-40pm). As frações desejadas foram recolhidas e 0 solvente foi evaporado. 0,30 g de intermediário 25 (rendimento: 61 %) como um sólido amarelo pálido. Exemplo A7 a. Preparação do intermediário 26
[000178] Uma mistura de 1-(3-bromofenila)-5-cloro-1 -pentanona (18,0 g; 0,07 mol), cloridrato de dimetilamina (22,8 g; 0,28 mol), e carbonato de potássio (47,7 g, 0,35 mol) em acetonitrila (25 ml) foi agitada ao refluxo por 48 horas, e em seguida foi resfriada para a temperatura ambiente, despejada em água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio, filtrada e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi recuperado em Dl PE e o precipitado foi removido por filtração e seco a vácuo. Rendimento: 16,8 g de intermediário 26 (90 %). b-1. Preparação do intermediário 27
[000179] Em um balão de três gargalos em um fluxo de N2 foram introduzidos ácido 4-clorofenilborônico (2,49 g; 15,9 mmols), fosfato de potássio (4,5 g; 21,2 mmols), acetato de paládio (72 mg; 0,32 mmol) e 2-diciclo-hexilfosfino-2',6'-dimetoxibifenila (275 mg; 0,67 mmol). Em seguida, 21,2 ml de tolueno anidro foi adicionado via uma seringa. Depois de 2 minutos, o intermediário 26 (3,0 g; 10,6 mmols) foi adicio-nado e a mistura foi agitada por 3 horas a 100 °C. A reação foi resfriada bruscamente com água e diluída com diclorometano. A camada orgânica foi então lavada com água e salmoura, seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica-gel (CH2CI2/CH3OH/NH4OH de 97/3/0,3 a 90/10/1). Rendimento: 2,27 g (68 %) de intermediário 27. b-2. Preparação do intermediário 28
[000180] O Intermediário 28 foi preparado de acordo com o mesmo procedimento que aquele descrito para o intermediário 27 (em A7.b-1), partindo do intermediário 26 e ácido fenilborônico no lugar de ácido 4-clorofenilborônico. Rendimento: 61 %. b-3. Preparação do intermediário 29
[000181] O Intermediário 29 foi preparado de acordo com o mesmo procedimento que aquele descrito para o intermediário 27 (em A7.b-1), partindo do intermediário 26 e ácido 4-metoxifenilborônico no lugar de ácido 4-clorofenilborônico. Rendimento: 85 %. b-4. Preparação do intermediário 30
[000182] O Intermediário 30 foi preparado de acordo com o mesmo procedimento que aquele descrito para o intermediário 27 (em A7.b-1), partindo do intermediário 26 e ácido 4-metilfenilborônico no lugar de ácido 4-clorofenilborônico. Rendimento: 79 %. Exemplo A8 a-1. Preparação do intermediário 31
[000183] Em um balão de fundo redondo foram introduzidos acetato de paládio (71,8 mg;0,32 mmol); tri-o-tolilfosfina (289 mg; 0,95 mmol) e 30 ml de DMF. Depois de 2 minutos, 3,0 g (10,6 mmols) de intermediário 26, 1,3 g (12,7 mmols) de estireno e 2,2 ml (15,9 mmols) de trieti- lamina foram adicionados à solução agitada. Em seguida, a mistura reacional foi aquecida a 100°C por uma noite. A mistura foi despejada em água gelada e diluída com acetato de etila. A camada aquosa foi então lavada três vezes com acetato de etila e as frações orgânicas reunidas foram lavadas com água e salmoura, secas em sulfato de magnésio, filtradas e concentradas. O produto bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica-gel (CH2CI2/CH3OH/NH4OH from 97/3/0,3 to 90/10/1). Rendimento: 2,75 g de intermediário 31 (85 %; isômero (E)). a-2. Preparação do intermediário 36
[000184] O Intermediário 36 foi preparado de acordo com 0 mesmo procedimento que aquele descrito para o intermediário 31 (vide A8.a- 1), partindo do intermediário 34 (see A9.c). Exemplo A9 a. Preparação do intermediário 32
[000185] Em um balão de três gargalos em um fluxo de N2 foram introduzidos magnésio (4,8 g, 0,202 mol) em 15 ml de THF e uma quantidade catalítica de I2. Algumas gotas de 1-bromo-5-cloropentano foram adicionadas para iniciar a reação. Depois de a solução ter perdido sua cor, mais 1-bromo-5-cloropentano (26,6 ml, 0,2 mol) em 75 ml de THF foi adicionado em gotas mantendo a temperatura a cerca de 10 °C. A mistura foi agitada por 1 hora a esta temperatura. Em seguida a solução de 3-bromobenzaldeído (15,8 ml, 1,35 mol) em 75 ml de THF foi adicionada em gotas a 10 °C e a mistura foi agitada por meio dia à temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente com cloreto de amónio aquoso (solução a 10%), diluída com acetato de etila e filtrada em Celite. A camada orgânica foi então lavada com água e salmoura, seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica-gel (ciclo- hexano/EtOAc 80/20). Rendimento: 15 g de intermediário 32 (38 %). b. Preparação do intermediário 33
[000186] Em um balão de fundo redondo foram agitados o intermediário 32 (15,0 g; 51,4 mmols) e TEMPO (80 mg;0,51 mmol) em 30 ml_ de DCM. Em seguida, a solução aquosa de periodato de sódio (30 ml; 13,2 g; 61,7 mmols) e brometo de sódio (0,52 g; 5,1 mmols) foi adicionada à mistura reacional que foi vigorosamente agitada por 24 horas à temperatura ambiente. A reação foi diluída com água e DCM. A camada orgânica foi então lavada com sulfato de sódio, seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada. Rendimento 14,83 g de intermediário 33 (100 %). c. Preparação do intermediário 34
[000187] Uma mistura de intermediário 33 (14,83 g; 51,2 mmols), cloridrato de dimetilamina (16,7 g, 0,21 mol) e carbonato de potássio (36,2 g, 0,26mol) em acetonitrila (150 ml) foi agitada ao refluxo por 48 horas e foi em seguida resfriada para a temperatura ambiente. A mistura foi despejada em água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio, filtrada e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi recuperado em Dl PE e o precipitado foi removido por filtração e seco a vácuo. Rendimento: 16,8 g de intermediário 34 (97 %). d. Preparação do intermediário 35
[000188] O Intermediário 35 foi preparado de acordo com o mesmo procedimento que aquele descrito para o intermediário 27 (A7.b-1), partindo do intermediário 34 e ácido fenilborônico. Rendimento: 11 %. B. Preparação dos compostos Exemplo B1 Preparação dos compostos 3 e 4
[000189] nBuLi 1,6 M em hexano (4,3 ml, 0,0069 mol) foi adicionado lentamente a -20°C em um fluxo de N2 a uma solução de di- isopropilamina (0,97 ml, 0,0069 mol) em THF (12 ml). A mistura foi agitada a -20°C por 20 minutos, e em seguida resfriada a -70 °C. Uma solução de intermediário 3 (1,89 g, 0,00575 mol) em THF (20 ml) foi adicionada lentamente. A mistura foi agitada a -70°C por 90 minutos. Uma solução de intermediário 9 (1,625 g, 0,0069 mol) em THF (17 ml) foi adicionada lentamente. A mistura foi agitada a -70°C por 3 horas, hidrolisada a -30°C com água gelada, e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca em MgSO4, filtrada, e o solvente foi evaporado. O resíduo foi primeiro purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (15-40pm, 90g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 95%/5%/0,5%) e em seguida a purificação foi realizada com SFC, em uma coluna de 2-etilpiridina (6pm; 20x150 mm). A fase móvel foi CO2 / metanol (+0,5% V/V de Isopropilamina) 93/7 V/V. Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. As frações foram cristalizadas separadamente a partir de éter di-isopropílico, dando 0,21 g de composto 3 (diastereoisômero A; rendimento: 6,2 %; espuma branca) e 0,23 g de composto 4 (diastereoisômero B; rendimento: 6,8 %; p.f.: 118°C; sólido branco). Exemplo B2 Preparação dos compostos 21 e 22
[000190] nBuLi 1,6 M em hexano (4,1 ml, 0,00658 mol) foi adicionado lentamente a -20°C em um fluxo de N2 a uma solução de di- isopropilamina (0,92 ml, 0,00658 mol) em THF (11 ml). A mistura foi agitada a -20°C por 20 minutos, e em seguida resfriada a -70°C. Uma solução de intermediário 3 (1,98 g, 0,00547 mol) em THF (20 ml) foi adicionada lentamente. A mistura foi agitada a -70°C por 90 minutos. Uma solução de intermediário 8 (1,91 g, 0,00658 mol) em THF (19 ml) foi adicionada lentamente. A mistura foi agitada a -70°C por 3 horas, hidrolisada a -30°C com água gelada, e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca em MgSO4, filtrada, e o solvente foi evaporado. O resíduo foi primeiro purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel Kromasila (5pm, 19x150 mm; CH2CI2/CH3OH/NH4OH 96/4/0,4 V/V/V) e em seguida em uma coluna Sunfire® C18 da Waters (5 pm19 x 150 mm) com uma taxa de fluxo de 20 ml/min. Duas fases móveis (fase móvel A: 100 % de Metanol; fase móvel B: 100 % de carbonato ácido de amónio 63mM pH=8(em água ultra pura) foram em-pregadas para produzir uma condição de gradiente de 87 % de A, 13 % de B a 100 % de A em 14 minutos, e reequilibradas com as condições iniciais por 6 minutos. Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. As duas frações foram cristalizadas separadamente a partir de éter di-isopropílico, dando 0,045 g de composto 21 (diastereoisômero A; rendimento: 1,3 %; espuma branca) e 0,23 g de com- posto 22 (diastereoisômero B; rendimento: 1,3 %; p.f.: 158°C; sólido branco). Exemplo B3 Preparação dos compostos 27 e 28
[000191] nBuLi 1,6 M em hexano (5,3 ml, 0,0085 mol) foi adicionado lentamente a -20°C em um fluxo de N2 a uma solução de di- isopropilamina (1,2 ml, 0,0085 mol) em THF (15 ml). A mistura foi agitada a -20°C por 20 minutos, e em seguida resfriada a -70°C. Uma solução de 6-bromo-2-metoxi-3-(fenilmetila)-quinolina (composto in-termediário 3 (Ex. A3) do documento W02004/011436) (2,32 g, 0,00708 mol) em THF (23 ml) foi adicionada lentamente. A mistura foi agitada a -70°C por 90 minutos. Uma solução de intermediário 23 (2,6 g, 0,0085 mol) em THF (26 ml) foi adicionada lentamente. A mistura foi agitada a -70°C por 3 horas, hidrolisada a -30°C com água gelada, e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca em MgSO4, filtrada, e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado duas vezes por cromatografia em coluna de sílica-gel (15-40pm, 300g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH 93/7/0,1 v/v/v). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. As frações foram cristalizadas separadamente a partir de DIPE, dando 0,38 g de composto 27 (diastereoisômero A; rendimento: 8,6 %; espuma branca) e 0,21 g de composto 28 (diastereoisômero B; rendimento: 4,8 %; p.f.: 122°C; sólido branco). Exemplo B4 a) Preparação dos compostos 25 e 26
[000192] nBuLi 1,6 M em hexano (4,99 ml, 0,0079 mol) foi adicionado em gotas a -20°C a uma solução de di-isopropilamina (0,0079 mol) em THF (13 ml) em um fluxo de N2. A mistura foi agitada a -20°C por 20 minutos, e em seguida resfriada para -70°C. Uma solução de 6-bromo-2-metoxi-3-(fenilmetila)-quinolina (composto intermediário 3 (Ex. A3) do documento W02004/011436) (0,0065 mol) em THF (22ml) foi adicionada. A mistura foi agitada a -70°C por 90 minutos. Uma solução de intermediário 13 (0,0079 mol) em THF (20 ml) foi adicionada. A mistura foi agitada a -70°C por 2 horas, em seguida despejada em gelo a -30°C e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca (MgSO4), filtrada e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado duas vezes por cromatografia em coluna de sílica-gel (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 95/5/0,1 to 93/7/0,1; 15-40pm). Três frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. Rendimento: 0,5 g de fração 1, 0,41 g de fração 2 e 0,37 g de fração 3. A fração 1 e a fração 3 foram cristalizadas a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: 0,33 g de composto 25 (8,3 %; dia A) e 0,25 g de composto 26 (6,3 %; dia B). b) Preparação dos compostos 1 e 2
[000193] Os Compostos 1 e 2 foram preparados de acordo com o procedimento para os compostos 25 e 26 da maneira descrita em B4.a, porém usando o intermediário 9 (no lugar do intermediário 13) e usando um procedimento de tratamento diferente. A camada orgânica separada foi lavada com NaCI aquoso saturado, seca (MgSC>4), filtrada e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 95/5/0,1; 15-40|um), em seguida em kromasila (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 96/4/0,4; 5|um). Três frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. A primeira fração desejada foi cristalizada a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: Composto 1 (8,5 %; dia A; p.f.: 148°C). A segunda fração desejada foi cristalizada a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: Composto 2 (1,9 %; dia B; p.f.: 151 °C). c) Preparação dos compostos 19 e 20
[000194] Os Compostos 19 e 20 foram preparados de acordo com o procedimento para os compostos 25 e 26 da maneira descrita em B4.a, porém usando o intermediário 8 (no lugar do intermediário 13) e usando um procedimento de tratamento diferente. A camada orgânica separada foi lavada com NaCI aquoso saturado, seca (MgSO4), filtrada e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 95/5/0,1; 15-40pm), em seguida em kromasila (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 96/4/0,4 a 91/9/0,9; 5pm). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. A fração 1 foi cristalizada a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: Composto 19 (7,3 %; dia A). A fração 2 foi cristalizada a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: Composto 20 (5,9 %; dia B; p.f.: 144°C). d) Preparação dos compostos 23 e 24
[000195] Os Compostos 23 e 24 foram preparados de acordo com o procedimento para os compostos 25 e 26 da maneira descrita em B4.a, porém usando o intermediário 10 (no lugar do intermediário 13) e usando um procedimento de tratamento diferente. Depois de remoção do solvente da camada orgânica separada, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 95/5/0,1). As frações puras foram recolhidas e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre Kromasila (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 96/4/0,4; 5gm). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. Os dois resíduos foram cristalizados a partir de Dl PE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: Composto 23 (3,1 %; dia A) e composto 24 (2,1 %; dia B) (p.f.: 168°C). e) Preparação dos compostos 5 e 6
[000196] Os Compostos 5 e 6 foram preparados de acordo com o mesmo procedimento usado para os Compostos 23 e 24, porém usando o intermediário 14 (no lugar do intermediário 10). Procedimento de tratamento: O resíduo foi primeiro purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 95/5/0,1; 15-40pm), e em seguida em uma coluna Kromasila (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 96/4/0,4; 5pm). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. A fração 1 foi cristalizada a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: Composto 5 (5,8 %; p.f.: 146°C; dia A). A fração 2 foi cristalizada a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e seco, dando o composto 6 (1,1 %; p.f.: 130 °C; dia B). Exemplo B5 a. Preparação dos compostos 14 e 15
[000197] O Intermediário 18 (mistura de dia A e B) (0,00103 mol) foi dissolvido em dimetoxietano (1,5 ml) e CH3OH (1,5 ml). NazCOa (solução 2,0 M em água), ácido tiofeno-2-borônico (0,00154 mol) e Pd(PPh3)2Cl2 (0,00005 mol) foram adicionados a esta solução. A mistura reacional foi agitada em um forno micro-ondas a 90°C por 2 x 9 minutos (P = 300 W). Em seguida a mistura foi resfriada para a temperatura ambiente e despejada em H2O. CH2CI2 foi adicionado e a mistura foi filtrada por um pequeno chumaço de Celite. O filtrado foi decantado e a camada orgânica foi seca (MgSO4), filtrada e o solvente foi evaporado. Purificação de coluna: O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (eluente: CH2CI2/CH3OH 50/1). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. Rendimento: 0,070 g de composto 14 (dia A, 12 %) e 0,135 g de composto 15 (dia B, 22 %). b. Preparação dos compostos 12 e 13
[000198] Os Compostos 12 e 13 foram preparados de acordo com o procedimento para os compostos 14 e 15 da maneira descrita em B5.a, partindo do intermediário 18 e ácido furan-3-borônico. Purificação de coluna: O resíduo foi primeiro purificado por cromatografia instantânea (eluente: CH2CI2/CH3OH 50/1), mas os Compostos 12 e 13 não foram separados. Portanto, esta mistura de diastereoisômeros foi ainda purificada com um tratamento adicional: O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre Kromasila (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH de 96/4/0,4 a 91/9/0,9; 10pm). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. A fração 1 foi cristalizada a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Ren-dimento: Composto 13 (37 mg; p.f.: 197°C; dia A). A fração 2 foi cristalizada a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e seco composto 12 (29 mg; dia B). c. Preparação dos compostos 10 e 11
[000199] Os Compostos 10 e 11 foram preparados de acordo com o procedimento para os compostos 14 e 15 da maneira descrita em B5.a, partindo do intermediário 18 e 1-metila-4-(4,4,5,5-tetrametila- 1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pirazol. Purificação de coluna: O resíduo foi primeiro purificado por cromatografia instantânea (eluente: CH2CI2/CH3OH 50/1), mas os Compostos 11 e 10 não foram separados. Portanto, esta mistura de diastereoisômeros foi ainda purificada com um tratamento adicional: O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre Kromasila (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH de 96/4/0,4 a 91/9/0,9; 10 pim). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. A fração 1 foi cristalizada a partir de Dl PE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: Composto 11 (15 mg; dia A). A fração 2 foi cristalizada a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e seco, dando o composto 10 (12 mg; p.f.:190°C; dia B). d. Preparação dos compostos 8 e 9
[000200] Os Compostos 8 e 9 foram preparados de acordo com o procedimento para os compostos 14 e 15 da maneira descrita em B5.a, partindo do intermediário 19 (0,7 g, 0,00119 mol) e ácido 4- piridineborônico (0,221 g, 0,00180 mol). Purificação de coluna: Depois de remoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna instantânea (eluente: de CH2CI2/CH3OH 50/1 + 1% de EtaN a CH2CI2/CH3OH 48/1 + 1% de Et3N a CH2CI2/CH3OH 46/1 + 1% de Et3N a CH2CI2/CH3OH 45/1 + 1% de EtsN). Os dois diastereoisômeros foram separados nestas condições. Os produtos foram secos (vácuo, temperatura ambiente) e cristalizados a partir de éter, dando sólidos brancos. Rendimento: Composto 8 (58 mg; 8 %; dia A) e composto 9 (169 mg; 24 %; dia B). e. Preparação do composto 7 e 7b
[000201] O Composto 7 foi preparado de acordo com o procedimento para o composto 14 da maneira descrita em B5.a, partindo do intermediário 18 e ácido 3-piridineborônico. Purificação de coluna: Depois de remoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (eluente: CH2Cl2/MeOH 50/1). A fração desejada foi recolhido e o solvente foi evaporado, dando 0,045 g de composto 7 (dia A) e 0,030 g de composto 7b (dia B).
[000202] Procedimento de coluna alternativo: O resíduo também pode ser separado em diastereoisômeros por cromatografia em coluna sobre Kromasila (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 96/4/0,4 a 91/9/0,9; 10pm). f. Preparação do composto 16
[000203] O Composto 16 foi preparado de acordo com o procedimento para o composto 14 da maneira descrita em B5.a, partindo do intermediário 19 e ácido 3-quinolineborônico. Purificação de coluna: O resíduo foi primeiro purificado por cromatografia instantânea (eluente: CH2CI2/CH3OH 50/1), e em seguida o resíduo foi ainda purificado sobre Kromasila (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 96/4/0,4 a 91/9/0,9; 10pm). a segunda fração foi cristalizada a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: Composto 16 (16 mg; p.f.:141°C; dia B). q. Preparação dos compostos 43 e 48
[000204] Os Composto composto 48 (dia B) rados de acordo com o procedimento para os compostos 14 e 15 da maneira descrita em B5.a, partindo do intermediário 18 e ácido 4-piridineborônico. Purificação de coluna: O resíduo foi primeiro purificado por cromatografia instantânea (eluente: CH2CI2/CH3OH de 50/1 a 40/1), mas os Compostos 43 e 48 não foram separados. Portanto, esta mistura de diastereoisômeros foi ainda purificada com um tratamento adicional: O resíduo foi purificado por cro-matografia em coluna sobre sílica-gel (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 96/4/0,4 a 91/9/0,9; 10pm). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. Rendimento: Composto 43 (dia A; 2,2 % de rendimento) e composto 48 (dia B; 5,8 % de rendimento; p.f.: 210 °C). h. Preparação dos compostos 49 e 50
[000205] Os Compostos 49 e 50 foram preparados de acordo com o procedimento para os compostos 14 e 15 da maneira descrita em B5.a, partindo do intermediário 18 e ácido 3-quinolineborônico. Purificação de coluna: O resíduo foi primeiro purificado por cromatografia instantânea (eluente: CH2CI2/CH3OH 50/1) para remover as impurezas, mas os Compostos 49 e 50 não foram separados. Portanto, esta mistura de diastereoisômeros foi ainda purificada com cromatografia de fase reversa (coluna XBridge™ C18 da Waters (5 pm; 30 x 150 mm) com uma taxa de fluxo de 40 ml/min. Duas fases móveis (fase móvel A: 100 % de acetonitrila; fase móvel B: 100 % de carbonato ácido de amónio 63 mM pH=10,2 (em água ultra pura) foram empregadas para produzir uma condição de gradiente de 80 % de A, 20 % de B a 100 % de A em 14 minutos, e reequilibradas com as condições iniciais por 6 minutos. As frações desejadas foram recolhidas e o solvente foi evaporado. Rendimento: Composto 50 (9,6 %, dia A) e composto 49 (12 %, dia B). Exemplo B7 Preparação dos compostos 29 e 30
[000206] nBuLi 1,6 M em hexano (2,24 ml, 0,0036 mol) foi adicionado lentamente a -20°C em um fluxo de N2 a uma solução de di- isopropilamina (0,503 ml, 0,0036 mol) em THF (8 ml). A mistura foi agitada a -20°C por 20 minutos, e em seguida resfriada a -70°C. Uma solução de intermediário 21 (0,003 mol) em THF (10 ml) foi adicionada lentamente. A mistura foi agitada a -70°C por 90 minutos. Uma solu ção de 3-(dimetilamino)-1-fenila-1-propanone (0,64g, 0,0036 mol) em THF (7 ml) foi adicionada lentamente. A mistura foi agitada a -70°C por 3 horas, hidrolisada a -30°C com água gelada, e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca em MgSO4, filtrada, e o solvente foi evaporado. O resíduo (1,5 g) foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (SiOz 15-40pm, eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 99/1/0,1). As frações puras foram recolhidas e o solvente foi evaporado. Os produtos foram cristalizados a partir de MeOH para dar 0,088 g de composto 30 (dia A; rendimento: 4 %, p.f.: 159°C) e 0,110 g de composto 29 (dia B; rendimento: 5 %, p.f.: 186°C). Exemplo B8 a. Preparação dos compostos 51 e 52
[000207] Di-isopropilamina de lítio (1,7 ml de uma solução 2,0 M em THF/heptano; 0,0034 mol) foi dissolvida em THF (10 ml; seco) e resfriada com um banho de gelo a -70 °C. O Intermediário 25 (0,836 g, 0,0026 mol) foi adicionada em gotas como uma solução em THF (8 ml; seco) e a mistura foi agitada por 2 horas a -70 °C. Em seguida 3- (dimetilamino)-1-fenila-1-propanona (0,466 g, 0,0026 mol) foi adicionada em gotas como uma solução em THF (3,72 ml; seco) e a mistura reacional foi agitada por 3 horas a -70 °C. Em seguida H2O foi adicionada (resfriando bruscamente) a -70 °C, seguida de EtOAc. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgSO4), filtrada e o solvente foi evaporado. Purificação de colu-na: O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (eluente: ciclo-hexano/2-propanol/NH4OH 97/3/0,2). As frações desejadas foram recolhidas e o solvente foi evaporado. Rendimento: 0,081 g de composto 52 (dia A; 3,6 %) e composto 51 (dia B; 6%). b. Preparação dos compostos 53 e 54
[000208] Os Compostos 53 e 54 foram preparados de acordo com o procedimento para os compostos 51 e 52 da maneira descrita em B8.a, partindo de 1-(dimetilamino)-5-(4-fluorofenila)-3-pentanona (preparada da mesma maneira descrita em J.Am.Chem.Soc., 1950, 72, 718-721). Purificação de coluna: O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 96/4/0,4 a 91/9/0,9; 10pm). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. Rendimento: Composto 53 (12 %; p.f.: 122 °C; dia A) e composto 54 (12 %; p.f.: 129 °C; dia B). Exemplo B9 a. Preparação dos compostos 33 e 34
[000209] nBuLi 1,6 M em hexano (8,6 ml, 0,014 mol) foi adicionado lentamente a -20°C em um fluxo de N2 a uma solução de di- isopropilamina (1,9ml, 0,014mol) em THF (5ml). A mistura foi agitada a -20°C por 20 minutos, e em seguida resfriada a -70°C. Uma solução de 6-bromo-2-metoxi-3-(fenilmetila)-quinolina (1,81 g, 0,0055 mol) em THF (15ml) foi adicionada lentamente. A mistura foi agitada a -70 °C por 90 minutos. Uma solução de intermediário 27 (2,27 g, 0,0072 mol) em THF (20 ml) foi adicionada lentamente. A mistura foi agitada a -70 °C por 1 hora, hidrolisada a -30 °C com água gelada, e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca em MgSO4, filtrada, e 0 solvente foi evaporado. O resíduo (4,3 g) foi purificado por cromatografia em coluna (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 95/5/0,5). Duas frações foram recolhidas e 0 solvente foi evaporado. As duas frações foram cristalizadas separadamente a partir de éter di-isopropílico, dando 0,049 g de composto 33 (diastereoisômero A; rendimento 3 %) como um sólido branco e 0,32 g de composto 34 (diastereoisômero B; rendimento 2 %) como um sólido branco. b. Preparação dos compostos 31 e 32
[000210] Os Compostos 31 e 32 foram preparados de acordo com o procedimento para os compostos 33 e 34 da maneira descrita em B9.a, porém usando o intermediário 28 (no lugar do intermediário 27) e usando um procedimento de coluna diferente: O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 96/4/0,5; 15-40pm). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. A fração 1 foi cristalizada a partir de 2-propanona/ácido 2-butenodioico (E), para obter o sal de ácido fumá- rico. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: Composto 31 (86 mg; dia A; sal de ácido fumárico). A fração 2 foi cristalizada a partir de 2-propanona/ácido 2-butenodioico (E), para obter o sal de ácido fumárico. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: Composto 32 (72 mg; dia B; sal de ácido fumárico). c. Preparação dos compostos 38 e 39
[000211] Os Compostos 38 e 39 foram preparados de acordo com o procedimento para os compostos 33 e 34 da maneira descrita em B9.a, porém usando 0 intermediário 29 (no lugar do intermediário 27) e usando um procedimento de coluna diferente: O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre kromasila (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH de 97/3/0,3 a 95/5/0,5; 10pm). Duas frações impuras de dia A e dia B foram recolhidas e o solvente foi evaporado. As frações de dia A e dia B foram purificadas separadamente por cromatografia de fase reversa (coluna Xbridge™ C18 da Waters (5 pm; 30 x 150 mm) com uma taxa de fluxo de 40 ml/min. Duas fases móveis (fase móvel A: 100 % de metanol; fase móvel B: 100 % de carbonato ácido de amónio 63mM (5g/l) pH=10,2 (em água ultra pura) foram em-pregadas para produzir uma condição de gradiente de 90 % de A, 10 % de B a 100 % de A em 14 minutos, e reequilibradas com as condi ções iniciais por 6 minutos. A fração 1 foi cristalizada a partir de Dl PE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: Composto 38 (216 mg; 5 %; dia A). A fração 2 foi cristalizada a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: Composto 39 (281 mg; 6 %; dia B). d. Preparação dos compostos 40 e 42
[000212] Os Compostos 40 e 42 foram preparados de acordo com o procedimento para os compostos 33 e 34 da maneira descrita em B9.a, porém usando intermediário 30 (no lugar do intermediário 27) e usando um procedimento de coluna diferente: O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre kromasila (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 97/3/0,1; 10|im). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. A fração 1 foi cristalizada a partir de 2- propanona/ácido 2-butenodioico (E), para obter 0 sal de ácido fumárico. O precipitado foi removido por filtração e seco .Rendimento: Composto 42 (485 mg; 10 %; dia A; sal de ácido fumárico). A fração 2 foi cristalizada a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: Composto 40 (295 mg; 7 %; dia B). e. Preparação dos compostos 35 e 36
[000213] Os Compostos 35 e 36 toram preparados de acordo com o procedimento para os compostos 33 e 34 da maneira descrita em B9.a, porém usando o intermediário 35 (no lugar do intermediário 27) e usando um procedimento de coluna diferente: O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre kromasila (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 97/3/0,5; 10pm). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado. A fração 1 e a fração 2 foram ambas purificadas por cromatografia quiral SFC (2-etilpiridina 150x21 mm, eluente: CO2/MeOH/2-propilamina 85/15/0,3).Rendimento: Composto 35 (15 mg; dia A) e composto 36 (21 mg; dia B). f. Preparação dos compostos 37 e 56
[000214] O Composto 37 foi preparado de acordo com o procedimento para os compostos 33 e 34 da maneira descrita em B9.a, porém usando o intermediário 36 (no lugar do intermediário 27) e usando um procedimento de coluna diferente: O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre kromasila (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 95/5/0,5; 10jim). A primeira fração foi recolhida e o solvente foi evapo rado. A fração 1 foi cristalizada a partir de 2-propanona/ácido 2- butenodioico (E), para obter o sal de ácido fumárico. O precipitado foi removido por filtração e seco .Rendimento: 230 mg de composto 37 (Dia A; sal de ácido fumárico; (E)). A fração 2 foi cristalizada a partir de Dl PE. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: 16 mg de composto 56 (Dia B; (E) + 6% de (Z)). Exemplo B10 Preparação dos compostos 41,45, 46, 47, 44 e 55
[000215] Os Compostos 45, 46, 47 e 44 foram preparados de acordo com o procedimento para os compostos 33 e 34 da maneira descrita em B9.a , porém usando o intermediário 31 (no lugar do intermediário 27) e usando um procedimento de coluna diferente. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (eluente: CH2CI2/CH3OH/NH4OH 97/3/0,3; 15-40gm). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado, dando 2,6 g de composto 55 (22 %; Dia A (E) (Fração 1)) e 3,0 g de composto 41 (25 %; Dia B (E)( Fração 2).
[000216] Para obter os enantiômeros correspem quentes, o composto 55 foi purificado por cromatografia quiral SFC (cromatografia com fluido supercrítico) (ChiralPak AD-H, 250x21 mm, eluente: CO2/2- propanol/2-propilamina 60/40/0,3). Duas frações foram recolhidas e o solvente foi evaporado, dando 0,673 g de composto 45 (enantiômero A1; rendimento 6 %) e 0,712 g de composto 46 (enantiômero A2; ren-dimento 6 %). Para obter os enantiômeros correspem quentes, o composto 41 foi purificado por cromatografia quiral SFC (ChiralPak AD-H 250x21 mm, eluente: CO2/2-propanol/2-propilamina 70/30/0,3). Duas frações foram recolhidas e 0 solvente foi evaporado. O enantiô- mero B1 foi cristalizado a partir da primeira fração de 2- propanona/ácido 2-butenodioico (E), para obter o sal de ácido fumárico. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: 0,690 g de composto 47 (enantiômero B1; rendimento 4 %; sal de ácido fumárico). O enantiômero B2 foi cristalizado a partir da segunda fração de 2-propanona/ácido 2-butenodioico (E), para obter o sal de ácido fumárico. O precipitado foi removido por filtração e seco. Rendimento: 1,489 g de composto 44 (Rendimento: 10 %; sal de ácido fumárico; B2).
[000217] As Tabelas 1 a 4 listam compostos de fórmula (la) de acordo com a presente invenção e que foram preparados de acordo com um dos procedimentos acima (Ex. N°).
[000218] Para vários compostos, os pontos de fusão foram obtidos com uma bancada quente de Kofler, consistindo em uma chapa aquecida com gradiente de temperatura linear, um ponteiro deslizante e uma escala de temperatura em graus Celsius. Tabela 1 :
Tabela 2 :
Tabela 3 :
Tabela 4 :
Métodos analíticos
LCMS
[000219] A massa de alguns compostos foi registrada com LCMS (cromatografia líquida associada à espectrometria de massa). Os métodos usados estão descritos abaixo.
Procedimento geral A
[000220] A medição por HPLC foi realizada usando um sistema Alliance HT 2795 (Waters) compreendendo uma bomba quaternária com desgaseificador, um classificador automático, um detector com sistema de diodo (DAD) e uma coluna conforme especificado nos métodos respectivos abaixo, a coluna é mantida a uma temperatura de 30°C. O fluxo da coluna foi dividido para um espectrômetro de MS. O detector de MS foi configurado com uma fonte de ionização por "electrospray". A voltagem da agulha capilar foi 3,15 kV e a temperatura da fonte foi mantida em 110 °C no ZQ™ (espectrômetro de massa de quadrupolo simples Zspray™ da Waters). Nitrogênio foi usado como o gás nebulizador. A aquisição de dados foi feita com um sistema de dados Wa- ters-Micromass MassLynx-Openlynx.
Procedimento geral B
[000221] A medição por LC foi realizada usando um sistema Acqui- ty UPLC (Waters) compreendendo uma bomba binária, um organizador de amostras, um aquecedor de coluna (ajustado em 55 °C), um detector com sistema de diodo (DAD) e uma coluna conforme especificado nos métodos respectivos abaixo. O fluxo da coluna foi dividido para um espectrômetro de MS. O detector de MS foi configurado com uma fonte de ionização por "electrospray". Os espectros de massa foram adquiridos por varredura de 100 a 1000 em 0,18 segundo usando um tempo de demora de 0,02 segundo. A voltagem da agulha capilar foi 3,5 kV e a temperatura da fonte foi mantida em 140 °C. Nitrogênio foi usado como o gás nebulizador. A aquisição de dados foi feita com um sistema de dados Waters-Micromass MassLynx-Openlynx.
Procedimento geral C
[000222] A medição por HPLC foi realizada usando um sistema de cromatografia líquida Agilent série 1100 compreendendo uma bomba binária com desgaseificador, um classificador automático, um forno de coluna, um detector de UV e uma coluna conforme especificado nos métodos respectivos abaixo. O fluxo da coluna foi dividido para um espectrômetro de MS. O detector de MS foi configurado com uma fonte de ionização por "electrospray". A voltagem capilar foi 3 kV, a temperatura do quadrupolo foi mantida em 100°C e a temperatura dessolvata- ção foi 300 °C. Nitrogênio foi usado como o gás nebulizador. A aquisição de dados foi feita com um sistema de dados Agilent Chemstation.
Procedimento geral D
[000223] A medição por LC foi realizada usando um sistema de UPLC (cromatografia líquida de ultra eficiência) Acquity (Waters) compreendendo uma bomba binária com desgaseificador, um classificador automático, um detector com sistema de diodo (DAD) e uma coluna conforme especificado nos métodos respectivos abaixo, a coluna é mantida a uma temperatura de 40°C. O fluxo da coluna foi levado para um detector de MS. O detector de MS foi configurado com uma fonte de ionização por "electrospray". A voltagem da agulha capilar foi 3 kV e a temperatura da fonte foi mantida em 130 °C no Quattro (espectrô- metro de massa de quadrupolo triplo da Waters). Nitrogênio foi usado como o gás nebulizador. A aquisição de dados foi feita com um sistema de dados Waters-Micromass MassLynx-Openlynx.
Método 1
[000224] Além do procedimento geral A: HPLC de fase reversa foi realizada em uma coluna Sunfire C18 (3,5 pm, 4,6 x 100 mm) com uma taxa de fluxo inicial de 0,8 ml/min. Duas fases móveis (fase móvel A: 35 % de acetato de amónio 6,5 mM + 30 % de acetonitrila + 35 % de ácido fórmico (2 ml/l); fase móvel B: 100 % de acetonitrila) foram empregadas para produzir uma condição de gradiente de 100 % de A (retenção por 1 minuto) a 100% de B em 4 minutos, retenção a 100 % de B a uma taxa de fluxo de 1,2 ml/min por 4 minutos e reequilibradas com as condições iniciais por 3 minutos. Um volume de injeção de 10 pl foi usado. A voltagem do cone foi 20 V para o modo de ionização positivo e negativo. Os espectros de massa foram adquiridos por varredura de 100 a 1000 em 0,4 segundo usando um atraso de "inters- can" de 0,3 segundo.
Método 2
[000225] Além do procedimento geral A: HPLC de fase reversa foi realizada em uma coluna Sunfire C18 (3,5 pm, 4,6 x 100 mm) com uma taxa de fluxo inicial de 0,8 ml/min. Duas fases móveis (fase móvel A: 25 % de acetato de amónio 7mM + 50 % de acetonitrila +25 % de ácido fórmico (2ml/l); fase móvel B: 100 % de acetonitrila) foram empregadas para produzir uma condição de gradiente de 100 % de A (retenção por 1 minuto) a 100 % de B em 4 minutos, retenção a 100 % de B a uma taxa de fluxo de 1,2 ml/min por 4 minutos e reequilibradas com as condições iniciais por 3 minutos). Um volume de injeção de 10 pl foi usado. A voltagem do cone foi 20 V para o modo de ionização positivo e negativo. Os espectros de massa foram adquiridos por varredura de 100 a 1000 em 0,4 segundo usando um atraso de "inters- can" de 0,3 segundo.
Método 3
[000226] Além do procedimento geral B: UPLC de fase reversa (cromatografia líquida de ultra eficiência) foi realizada em uma coluna C18 de híbrido de etilsiloxano/sílica ligado por meio de ponte (BEH) (1,7 pm, 2,1 x 50 mm; Waters Acquity) com uma taxa de fluxo de 0,8 ml/min. Duas fases móveis (fase movei A: 0,1 % de ácido fórmico em FW/metanol 95/5; fase móvel B: metanol) foram usadas para produzir uma condição de gradiente de 95 % de A e 5 % de B a 5 % de A e 95 % de B em 1,3 minuto e retenção por 0,2 minuto. Um volume de injeção de 0,5 pl foi usado. A voltagem do cone foi 10 V para o modo de ionização positiva e 20 V para o modo de ionização negativa.
Método 4
[000227] Além do procedimento geral C: HPLC de fase reversa foi realizada em uma coluna C18 YMC-Pack ODS-AQ (4,6 x 50 mm) com uma taxa de fluxo de 2,6 ml/min. Foi usada uma variação de gradiente de 95 % de água e 5 % de acetonitrila a 95 % de acetonitrila em 7,30 minutos e a retenção se deu por 1,20 minuto. Os espectros de massa foram adquiridos por varredura de 100 a 1000. O volume de injeção foi 10 pl. A temperatura da coluna foi 35 °C.
Método 5
[000228] Além do procedimento geral A: HPLC de fase reversa foi realizada em uma coluna Sunfire C18 (3,5 pm, 4,6 x 100 mm) com uma taxa de fluxo inicial de 0,8 ml/min. Duas fases móveis (fase móvel A: 35 % de acetato de amónio 6,5 mM + 30 % de acetonitrila + 35 % de ácido fórmico (2 ml/l); fase móvel B: 100 % de acetonitrila) foram empregadas para produzir uma condição de gradiente de 100 % de A (retenção por 1 minuto) a 100% de B em 4 minutos, retenção a 100 % de B a uma taxa de fluxo de 1,2 ml/min por 4 minutos e reequilibradas com as condições iniciais por 3 minutos. Um volume de injeção de 10 pl foi usado. O modo de ionização positiva foi usado com quatro voltagens de cone diferentes (20,40,50,55 V). Os espectros de massa foram adquiridos por varredura de 100 a 1000 em 0,4 segundo usando um atraso de "interscan" de 0,1 segundo.
Método 6
[000229] Além do procedimento geral D: UPLC de fase reversa foi realizada em uma coluna Waters Acquity BEH (híbrido de etilsiloxa- no/sílica ligado por meio de ponte) C18 (1,7 pm, 2,1 x 100 mm) com uma taxa de fluxo de 0,35 ml/min. Duas fases móveis (fase móvel A: 95 % de acetato de amónio 7 mM / 5 % de acetonitrila; fase móvel B: 100 % de acetonitrila) foram empregadas para produzir uma condição de gradiente de 90 % de A e 10 % de B (retenção por 0,5 minutos) a 8 % de A e 92 % de B em 3,5 minutos, retenção por 2 min e de volta para as condições iniciais em 0,5 min, retenção por 1,5 minutos. Um volume de injeção de 2 pl foi usado. As voltagens do cone foram 20, 30, 45, 60 V para o modo de ionização positiva. Os espectros de massa foram adquiridos por varredura de 100 a 1000 em 0,2 segundo usando um atraso de "interscan" de 0,1 segundo.
Método 7
[000230] Além do procedimento geral D: UPLC de fase reversa foi realizada em uma coluna Thermo Hypersila Gold C18 (1,9 pm, 2,1 x 100 mm) com uma taxa de fluxo de 0,40 ml/min. Duas fases móveis (fase móvel A: 95 % de acetato de amónio 7 mM / 5 % de acetonitrila; fase móvel B: 100 % de acetonitrila) foram empregadas para produzir uma condição de gradiente de 72 % de A e 28 % de B (retenção por 0,5 minutos) a 8 % de A e 92 % de B em 3,5 minutos, retenção por 2 min e de volta para as condições iniciais em 0,5 min, retenção por 1,5 minutos. Um volume de injeção de 2 pl foi usado. As voltagens do cone foram 20, 30, 45, 60 V para o modo de ionização positiva. Os espectros de massa foram adquiridos por varredura de 100 a 1000 em 0,2 segundo usando um atraso de "interscan" de 0,1 segundo.
Método 8
[000231] Além do procedimento geral D: UPLC de fase reversa foi realizada em uma coluna Waters Acquity BEH (híbrido de etilsiloxa- no/sílica ligado por meio de ponte) C18 (1,7 pm, 2,1 x 100 mm) com uma taxa de fluxo de 0,35 ml/min. Duas fases móveis (fase móvel A: 100 % de acetato de amónio 7 mM; fase móvel B: 100 % de acetonitrila) foram empregadas para produzir uma condição de gradiente de 75 % de A e 25 % de B (retenção por 0,5 minutos) a 8% de A e 92 % de B em 3,5 minutos, retenção por 2 minutos e reequilibradas com as condições iniciais por 2 minutos. Um volume de injeção de 2 pl foi usado. As voltagens do cone foram 20, 30, 45, 60 V para o modo de ionização positiva. Os espectros de massa foram adquiridos por varredura de 100 a 1000 em 0,2 segundo usando um atraso de "interscan" de 0,1 segundo.
Método 9
[000232] Além do procedimento geral D: UPLC de fase reversa foi realizada em uma coluna Thermo Hypersila Gold C18 (1,9 pm, 2,1 x 100 mm) com uma taxa de fluxo de 0,50 ml/min. Duas fases móveis (fase móvel A: 95 % de acetato de amónio 7 mM / 5 % de acetonitrila; fase móvel B: 100 % de acetonitrila) foram empregadas para produzir uma condição de gradiente de 40 % de A e 60 % de B (retenção por 0,5 minutos) a 5 % de A e 95 % de B em 3,5 minutos, retenção por 2 min e de volta para as condições iniciais em 0,5 min, retenção por 1,5 minutos. Um volume de injeção de 2 pl foi usado. As voltagens do co- ne foram 20, 30, 45, 60 V para o modo de ionização positiva. Os espectros de massa foram adquiridos por varredura de 100 a 1000 em 0,2 segundo usando um atraso de "interscan" de 0,1 segundo.
Método 10
[000233] Além do procedimento geral A: HPLC de fase reversa foi realizada em uma coluna Varian Pursuit Diphenyl (5 pm, 4 x 100 mm) com uma taxa de fluxo de 0,8 ml/min. Duas fases móveis (fase móvel A: 100 % de acetato de amónio 7 mM; fase móvel B: 100 % de acetonitrila) foram empregadas para produzir uma condição de gradiente de 80 % de A , 20 % de B (retenção por 0,5 minutos) a 90 % de B em 4,5 minutos, 90 % de B por 4 minutos e reequilibradas com as condições iniciais por 3 minutos. Um volume de injeção de 10 pl foi usado. As voltagens do cone foram 20, 40, 50, 55 V para o modo de ionização positiva. Os espectros de massa foram adquiridos por varredura de 100 a 1000 em 0,3 segundo usando um atraso de "interscan" de 0,05 segundo.
[000234] Quando um composto é uma mistura de isômeros que dão picos diferentes no método de LCMS, apenas o tempo de retenção do componente principal está dada do tabela de LCMS. Tabela 5: LCMS: (MH+), íon molecular protonado (da base livre), e tempo de retenção (Rt, em minutos)
Rotação ótica
[000235] A rotação ótica foi medida usando um polarímetro. [D]D20 indica a rotação ótica medida com luz no comprimento de onda na linha D de sódio (589 nm) a uma temperatura de 20°C. O curso da célula é 1 dm. Atrás do valor real estão mencionados a concentração e o solvente da solução que foi usada para medir a rotação ótica (vide Tabela 6). Tabela 6 : Dados de rotação ótica
D. Exemplos farmacológicos
D.1. Método in vitro para testar compostos contra M. tuberculosis.
[000236] Placas de microtitulação de plástico, 96 poços, estéreis e de fundo plano foram enchidas com 100 pl de meio de caldo de Middlebrook (1x). Subsequentemente, soluções de estoque (10 x concentração de teste final) de compostos foram adicionadas em volumes de 25 pl a uma série de poços duplos na coluna 2 para permitir a avaliação de seus efeitos no crescimento bacteriano. Diluições seriadas um para cinco foram feitas diretamente nas placas de microtitulação da coluna 2 a 11 usando um sistema de robô customizado (Zymark Corp., Hopkinton, MA). As pontas das pipetas foram trocadas a cada 3 diluições para minimizar erros de pipetagem com compostos muito hidro- fóbicos. Amostras de controle não tratadas com (coluna 1) e sem (coluna 12) inóculo foram incluídas em cada placa de microtitulação. Aproximadamente 5000 CFU por poço de Mycobacterium tuberculosis (cepa H37RV), em um volume de 100 pl em meio de caldo de Middlebrook (1x), foram adicionadas às fileiras A a H, exceto a coluna 12. O mesmo volume do meio de caldo sem inóculo foi adicionado à coluna 12 na fileira A a H. As culturas foram incubadas a 37°C por 7 dias em uma atmosfera umidificada (incubadora com válvula de ar aberta e ventilação contínua). Um dia antes do término da incubação, 6 dias depois da inoculação, Resazurina (1:5) foi adicionada a todos os poços em um volume de 20 pl e as placas foram incubadas por mais 24 horas a 37°C. No 7° dia o crescimento bacteriano foi quantificado por fluorimetria.
[000237] A fluorescência foi lida em um fluorímetro controlado por computador (Spectramax Gemini EM, Molecular Devices) a um comprimento de onda de excitação de 530 nm e em um comprimento de onda de emissão de 590 nm. A inibição de crescimento percentual obtida pelos compostos foi calculada de acordo com métodos tradicionais e expressa como IC90 (pg/ml) que define a concentração inibitória de 90% para o crescimento bacteriano. Os resultados estão mostrados na Tabela 7.
D.2. Método in vitro para testar compostos quanto à atividade antibac- teriana contra cepa M. SmeamatisATCC607.
[000238] Placas de microtitulação de plástico, 96 poços, estéreis e de fundo plano foram enchidas com 180 pl de água desionizada estéri- la, suplementada com 0,25 % de BSA. Subsequentemente, soluções de estoque (7,8 x concentração de teste final) de compostos foram adicionadas em volumes de 45 pl a uma série de poços duplos na coluna 2 para permitir a avaliação de seus efeitos no crescimento bacteriano. Diluições seriadas um para cinco (45 pl em 180 pl) foram feitas diretamente nas placas de microtitulação da coluna 2 a 11 usando um sistema de robô customizado (Zymark Corp., Hopkinton, MA). As pontas das pipetas foram trocadas a cada 3 diluições para minimizar erros de pipetagem com compostos muito hidrofóbicos. Amostras de contro-le não tratadas com (coluna 1) e sem (coluna 12) inoculo foram incluídas em cada placa de microtitulação. Aproximadamente 250 CFU por poço de inoculo de bactéria, em um volume de 100 pl em meio de caldo de Mueller-Hinton 2,8x, foram adicionadas às fileiras A to H, exceto a coluna 12. O mesmo volume do meio de caldo sem inoculo foi adicionado à coluna 12 na fileira A a H. As culturas foram incubadas a 37°C por 48 horas em uma atmosfera umidificada de 5% de CO2 (incubadora com válvula de ar aberta e ventilação contínua). No final da incubação, dois dias depois da inoculação, o crescimento bacteriano foi quantificado por fluorimetria. Em seguida azul de Alamar (10x) foi adicionado a todos os poços em um volume de 20 pl e as placas foram incubadas por mais 2 horas a 50°C.
[000239] A fluorescência foi lida em um fluorímetro controlado por computador (Cytofluor, Biosearch) a um comprimento de onda de excitação de 530 nm e um comprimento de onda de emissão de 590 nm (ganho 30). A inibição de crescimento percentual obtida pelos compostos foi calculada de acordo com métodos tradicionais e expressa como IC90 (pg/ml) que define a concentração inibitória de 90% para o cres-cimento bacteriano. Os resultados estão mostrados na Tabela 7.
D.3. Método in vitro para testar compostos quanto à atividade antibac- teriana contra várias cepas não microbacterianas
Preparação de suspensões bacterianas para testar a suscetibilidade:
[000240] As bactérias usadas neste estudo foram cultivadas por uma noite em baloões contendo 100 ml de caldo de Mueller-Hinton (Becton Dickinson - cat. n° 275730) em água desionizada estérila, com agitação, a 37 °C. Estoques (0,5 ml/tubo) foram armazenados a -70 °C até o momento de uso. As titulações de bactérias foram feitas em placas de microtitulação para detectar o TCID50, em que o TCID50 representa a diluição que dá origem a crescimento bacteriano em 50 % das culturas inoculadas. Em geral, um nível de inoculo de aproximadamente 100 TCID50 foi usado para testar a suscetibilidade.
Teste de suscetibilidade antibacterina: determinação do IC90
Ensaio em placas de microtitulação
[000241] Placas de microtitulação de plástico, 96 poços, estéreis e de fundo plano foram enchidas com 180 pl de água desionizada estérila, suplementada com 0,25 % de BSA. Subsequentemente, soluções de estoque (7,8 x concentração de teste final) de compostos foram adicionadas em volumes de 45 pl na coluna 2. Diluições seriadas um para cinco (45 pl em 180 pl) foram feitas diretamente nas placas de microtitulação da coluna 2 até atingir a coluna 11. Amostras de controle não tratadas com (coluna 1) e sem (coluna 12) inóculo foram incluídas em cada placa de microtitulação. Dependendo do tipo de bactéria, aproximadamente 10 a 60 CFU por poço de inóculo de bactéria (100 TCID50), em um volume de 100 pl em meio de caldo de Mueller- Hinton 2,8x, foram adicionadas às fileiras A a H, exceto a coluna 12. O mesmo volume do meio de caldo sem inóculo foi adicionado à coluna 12 nas fileiras A a H. As culturas foram incubadas a 37°C por 24 horas em uma atmosfera normal (incubadora com válvula de ar aberta e ventilação contínua). No final da incubação, um dia depois da inoculação, o crescimento bacteriano foi quantificado por fluorimetria. Em seguida resazurina (0,6 mg/ml) foi adicionada em um volume de 20 pl a todos os poços 3 horas depois da inoculação, e as placas foram novamente incubadas por uma noite. Uma mudança na cor de azul para rosa indicou o crescimento de bactérias.
[000242] A fluorescência foi lida em um fluorímetro controlado por computador (Cytofluor Biosearch) a um comprimento de onda de excitação de 530 nm e um comprimento de onda de emissão de 590 nm. A inibição de crescimento % obtida pelos compostos foi calculada de acordo com métodos tradicionais. O IC90 (expresso em pg/ml) foi definido como a concentração inibitória de 90 % para o crescimento bacte-riano. Os resultados estão mostrados na Tabela 7.
Método da diluição em ágar.
[000243] Os valores de MIC99 (a concentração mínima para obter 99% de inibição para o crescimento bacteriano) podem ser determinados realizando-se 0 método da diluição em ágar tradicional de acordo com os padrões* da NCCLS em que o meio usado inclui ágar de Muel- ler-Hinton. * Clinical laboratory standard institute. 2005. Methods for dilution Antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grows Aerobically: approved standard -sixth edition
Ensaio de "time kill"
[000244] A atividade bactericida ou bacteriostática dos compostos pode ser determinada em um ensaio de "time kill"usando o método de microdiluição em caldo *. Em um ensaio de "time kill"em Staphylococcus aureuse S. aureusresistente à meticilina (MRSA), o inóculo de partida de S. aurues e MRSA é 106 CFU / ml em caldo de Muller Hinton. Os compostos antibacterianos são usados a uma concentração de 0,1 a 10 vezes o MIC (isto é, IC90 determinado em um ensaio em placas de microtitulação). Os poços que não recebem agente antibacteri- ano constituem o controle de crescimento da cultura. As placas contendo o micro-organismo e os compostos de teste são incubadas a 37°C. Depois de 0, 4, 24, e 48 horas de incubação as amostras são removidas para determinação das contagens viáveis por diluição seri-ada (10-1 a 10'6) em PBS estérila e plaqueamento (200 pl) em ágar de Mueller Hinton. As placas são incubadas a 37°C por 24 horas e o número de colônias é determinado. As curvas de extermínio podem ser construídas representando-se graficamente o log-ioCFU por ml versus o tempo. Um efeito bactericida normalmente é definido como 3-logio diminuição no número de CFU por ml comparado ao inóculo não tratado. O efeito de transferência potencial dos fármacos é removido por diluições seriadas e contagem das colônias na diluição mais alta usada para plaqueamento. * Zurenko,G.E. et al.In vitro activities of U-100592 and U-100766, novel oxazolidinone antibacterial agents. Antimicrob. Agents Chemother. 40, 839-845 (1996).
Determinação dos níveis de ATP celular
[000245] Para analisar a alteração na concentração total de ATP celular (usando o kit de bioluminescência de ATP, Roche), são realizados ensaios desenvolvendo-se uma cultura de estoque de S. aureus (ATCC29213) em balões com 100 ml de Mueller Hinton e incubando- se a mesma em um agitador-incubadora por 24 horas a 37 °C (300 rpm). Medir a OD405 nm e calcular a CFU/ml. Diluir as culturas até 1 x 106 CFU/ml (concentração final para medir 0 ATP: 1 x 105 CFU/100 pl por poço e adicionar 0 composto de teste a 0,1 a 10 vezes o MIC (isto é, o IC90 determinado no ensaio em placas de microtitulação). Incubar estes tuvos por 0, 30 e 60 minutos a 300 rpm e 37°C. Usar 0,6 ml de suspensão bacteriana dos tubos com tampa de pressão e adicionar a um outro tubo de eppendorf de 2 ml. Adicionar 0,6 ml de reagente de lise celular (kit da Roche), centrifugar à velocidade máxima e incubar por 5 minutos à temperatura ambiente. Esfriar em gelo. Deixar o lumi- nômetro esquentar até 30°C (Luminoskan Ascent Labsystems com in- jetor). Encher uma coluna (= 6 poços) com 100 pl da mesma amostra. Adicionar 100 pl de reagente de Luciferase a cada poço usando o sistema injetor. Medir a luminescência por 1 segundo. Tabela 7 : Valores de IC90 (pg/ml).
STA 29213 significa Staphylococcus aureus (ATCC29213); SPN 6305 significa Streptococcus pneumoniae (ATCC6305); MSM 607 significa M. Smegmatis (ATCC607); ATCC significa American type tissue cultu re.