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BRPI0615962A2 - uso de um composto selecionado do grupo que consiste em um inibidor proteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidor lisossomal, um inibidor do trasporte de proteìna do er ao golgi, um inibidor de chaperonina hsp90, um ativador da resposta a choque térmico, um inibidor de glicosidade, e um inibidor de histona deacetilase, uso de 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e um composto selecionado do grupo que consiste em um inibidor proteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidor lissosomal, um inibidor do transporte de proteìna do er ao golgi, um inibidor de chaperonina hsp90, um ativador de resposta a choque térmico, um inibidor de glicosidase, e um inibidor de histona deacetilase, método para aumentar a quantidade de um conformação bioquimicamente funcional de uma proteìna em uma célula, composição farmacêutica para o tratamento de um pcd ocular, composição farmacêutica para o tratamento de retinite pigmentosa, kit para o tratamento de um pcd ocular, kit para o tratamento de retinite pigmentosa, método para a identificação de um composto útil para o tratamento de um indivìduo que tem um pcd ocular, método para a identificação de um composto útil para o tratamento de um indivìduo que tem retinite pigmentosa, uso de um inibidor proteassomal ou um inibidor de autofagia e método para a produção de uma proteìna recombinante em uma conformação bioquimicamente funcional - Google Patents

uso de um composto selecionado do grupo que consiste em um inibidor proteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidor lisossomal, um inibidor do trasporte de proteìna do er ao golgi, um inibidor de chaperonina hsp90, um ativador da resposta a choque térmico, um inibidor de glicosidade, e um inibidor de histona deacetilase, uso de 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e um composto selecionado do grupo que consiste em um inibidor proteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidor lissosomal, um inibidor do transporte de proteìna do er ao golgi, um inibidor de chaperonina hsp90, um ativador de resposta a choque térmico, um inibidor de glicosidase, e um inibidor de histona deacetilase, método para aumentar a quantidade de um conformação bioquimicamente funcional de uma proteìna em uma célula, composição farmacêutica para o tratamento de um pcd ocular, composição farmacêutica para o tratamento de retinite pigmentosa, kit para o tratamento de um pcd ocular, kit para o tratamento de retinite pigmentosa, método para a identificação de um composto útil para o tratamento de um indivìduo que tem um pcd ocular, método para a identificação de um composto útil para o tratamento de um indivìduo que tem retinite pigmentosa, uso de um inibidor proteassomal ou um inibidor de autofagia e método para a produção de uma proteìna recombinante em uma conformação bioquimicamente funcional Download PDF

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BRPI0615962A2
BRPI0615962A2 BRPI0615962-1A BRPI0615962A BRPI0615962A2 BR PI0615962 A2 BRPI0615962 A2 BR PI0615962A2 BR PI0615962 A BRPI0615962 A BR PI0615962A BR PI0615962 A2 BRPI0615962 A2 BR PI0615962A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
inhibitor
protein
retinal
cis
treatment
Prior art date
Application number
BRPI0615962-1A
Other languages
English (en)
Inventor
Shalesh Kaushal
Syed Mohammed Noorwez
Original Assignee
Univ Florida
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by Univ Florida filed Critical Univ Florida
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Abstract

USO DE UM COMPOSTO SELECIONADO DO GRUPO QUE CONSISTE EM UM INIBIDOR PROTEASSOMAL, UM INIBIDOR DE AUTOFAGIA, UM INIBIDOR LISOSSOMAL, UM INIBIDOR DO TRANSPORTE DE PROTEíNA DO ER AO GOLGI, UM INIBIDOR DE CHAPERONINA HSP9O, UM ATIVADOR DA RESPOSTA A CHOQUE TéRMICO, UM INIBIDOR DE GLICOSIDASE, E UM INIBIDOR DE HISTONA DEACETILASE, USO DE 11- CIS-RETINAL OU 9-CIS-RETINAL E UM COMPOSTO SELECIONADO DO GRUPO QUE CONSISTE EM UM INIBIDOR PROTEASSOMAL,UM INIBIDOR DE AUTOFAGIA, UM INIBIDOR LISSOSOMAL, UM INIBIDOR DO TRANSPORTE DE PROTEìNA DO ER AO GOLGI, UM INIBIDOR DE CHAPERONINA HSP9O, UM ATIVADOR DE RESPOSTA A CHOQUE TéRMICO, UM INIBIDOR DE GLICOSIDASE, E UM INIBIDOR DE HISTONA DEACETILASE, MéTODO PARA AUMENTAR A QUANTIDADE DE UM CONFORMAçAO BIOQUIMICAMENTE FUNCIONAL DE UMA PROTEìNA EM UMA CéLULA, COMPOSIçAO FARMACEUTICA PARA O TRATAMENTO DE UM PCD OCULAR, COMPOSIçAO FARMACEUTICA PARA O TRATAMENTO DE RETINITE PIGMENTOSA, KIT PAPA O TRATAMENTO DE UM PCD OCULAR, KIT PARA O TRATAMENTO DE RETINITE PIGMENTOSA, MéTODO PARA A IDENTIFICAçAO DE UM COMPOSTO úTIL PARA O TRATAMENTO DE UM INDIVìDUO QUE TEM UM PCD OCULAR, MéTODO PARA A IDENTIFICAçAO DE UM COMPOSTO úTIL PARA O TRATAMENTO DE UM INDIVìDUO QUE TEM RETINITE PIGMENTOSA, USO DE UM INIBIDOR PROTEASSOMAL OU UM INIBIDOR DE AUTOFAGIA E MéTODO PARA A PRODUçAO DE UMA PROTEìNA RECOMBINANT EM UMA CONFORMAçAO BIOQUIMICAMENTE FUNCIONAL A invenção caracteriza composições e métodos que são úteis para o tratamento ou a prevenção de uma doença de conformação de proteína em um indivíduo corrigindo as proteínas in vivo. Além disso, a invenção apresenta composições e métodos que são úteis para expressar uma proteína recombinante em uma conformação bioquimicamente funcional.

Description

USO DE UM COMPOSTO SELECIONADO DO GRUPO QUECONSISTE EM UM INIBIDOR PROTEASSOMAL, UM INIBIDOR DEAUTOFAGIA, UM INIBIDOR LISOSSOMAL, UM INIBIDOR DO TRANSPORTEDE PROTEÍNA DO ER AO GOLGI, UM INIBIDOR DE CHAPERONINA HSP90,UM ATIVADOR DA RESPOSTA A CHOQUE TÉRMICO, UM INIBIDOR DEGLICOSIDASE, E UM INIBIDOR DE HISTONA DEACETILASE, USO DE 11-CIS-RETINAL OU 9-CIS-RETINAL E UM COMPOSTO SELECIONADO DOGRUPO QUE CONSISTE EM UM INIBIDOR PROTEASSOMAL, UM INIBIDORDE AUTOFAGIA, UM INIBIDOR LISSOSOMAL, UM INIBIDOR DOTRANSPORTE DE PROTEÍNA DO ER AO GOLGI, UM INIBIDOR DECHAPERONINA HSP90, UM ATIVADOR DE RESPOSTA A CHOQUE TÉRMICO,UM INIBIDOR DE GLICOSIDASE, E UM INIBIDOR DE HISTONADEACETILASE, MÉTODO PARA AUMENTAR A QUANTIDADE DE UMCONFORMAÇÃO BIOQUIMICAMENTE FUNCIONAL DE UMA PROTEÍNA EM UMACÉLULA, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA O TRATAMENTO DE UM PCDOCULAR, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA O TRATAMENTO DE RETINITEPIGMENTOSA, KIT PARA O TRATAMENTO DE UM PCD OCULAR, KIT PARAO TRATAMENTO DE RETINITE PIGMENTOSA, MÉTODO PARA AIDENTIFICAÇÃO DE UM COMPOSTO ÚTIL PARA O TRATAMENTO DE UMINDIVÍDUO QUE TEM UM PCD OCULAR, MÉTODO PARA A IDENTIFICAÇÃODE UM COMPOSTO ÚTIL PARA O TRATAMENTO DE UM INDIVÍDUO QUE TEMRETINITE PIGMENTOSA, USO DE UM INIBIDOR PROTEASSOMAL OU UMINIBIDOR DE AUTOFAGIA E MÉTODO PARA A PRODUÇÃO DE UMAPROTEÍNA RECOMBINANT EM UMA CONFORMAÇÃO BIOQUIMICAMENTEFUNCIONAL
REFERÊNCIA REMISSIVA A PEDIDOS CORRELATOSO presente pedido de patente reivindica o benefíciodo.seguinte Pedido de Patente Norte-americano Provisório U.S.n°. 60/703.068, o qual foi depositado em 27 de julho de 2005,cujo conteúdo é incorporado na presente invenção a título dereferência.
DECLARAÇÃO DE DIREITOS ÃS INVENÇÕES ELABORADAS SOB PESQUISAPATROCINADA PELO GOVERNOO presente trabalho foi suportado por uma Concessãodo National Eye Institute, a Concessão n° . EY016070-01. 0governo pode ter determinados direitos sobre a invenção.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
As proteínas devem se dobrar em sua conformaçãotridimensional correta para atingir a sua função biológica. Aconformação nativa de um polipeptídeo é codificada dentro desua seqüência de aminoácido primária e até mesmo uma únicamutação em uma seqüência de aminoácido pode prejudicar acapacidade de uma proteína de atingir a sua conformaçãoapropriada. Quando as proteínas não se dobram corretamente,os efeitos biológicos e clínicos podem ser devastadores. Aagregação e o dobramento incorreto da proteína são osprincipais contribuintes para muitas doenças humanas, taiscomo a retinite pigmentosa autossomal dominante, o mal deAlzheimer, a deficiência de Dl-antitripsina, a fibrosecística, o diabetes nefrogênico insípido e as infecçõesmediadas por príons. A doença pode resultar de deficiênciasno nível de uma proteína cuja função seja requerida em umcaminho bioquímica particular, tal como na fibrose cística,onde as mutações no regulador de condutância de transmembranada fibrose cística (CFTR), um canal de cloreto ativado porcAMP expresso na membrana apical das células epiteliais,afetam a sua capacidade de serem produzidas, processadas edirecionadas à membrana plasmática, onde a sua função érequerida. Em outros distúrbios de dobramento incorreto deproteína, a doença resulta por causa dos efeitos citotóxicosda proteína mal-dobrada, tal como no mal de Alzheimer onde aagregação de placas amilóides causa danos neuronais.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO
A invenção apresenta composições e métodos que sãoúteis para o tratamento ou a prevenção de uma Doença deConformação de Proteína ao corrigir as proteínas mal-dobradasin vivo, e métodos para intensificar a expressão de proteínasrecombinantes em uma célula eucariótica, onde a proteínarecombinante é expressa em uma conformação bioquimicamentefuncional.
Em um aspecto, a invenção apresenta de maneirageral métodos para o tratamento de um indivíduo (por exemplo,um mamífero, tal como um ser humano) que tem um distúrbio deconformação de proteína (PCD) (por exemplo, deficiência deαΐ-antitripsina, fibrose cística, mal de Huntington, mal deParkinson, mal de Alzheimer, diabetes nefrogênico insípido,câncer e mal de Jacob-Creutzfeld). O método envolve aadministração de um ou mais dos seguintes compostos: uminibidor proteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidorlisossomal, um inibidor do transporte de proteínas do RE aoGolgi, um inibidor do protetor de Hsp90, um ativador daresposta a choque térmico, um inibidor de glicosidase e uminibidor de desacetilase de histona, em que o composto éadministrado em uma quantidade suficiente para tratar oindivíduo. Em uma realização, o PCD é um PCD ocularselecionado do grupo que consiste em retinite pigmentosa,degeneração macular relacionada com a idade, glaucoma,distrofias corneais, retinosquise, mal de Stargardt, gângliosautossomais dominantes, e distrofia macular de Best. Em umaoutra realização, o método envolve adicionalmente aadministração de 11-cis-retinal, 9-cis-retinal ou um isômerotravado de sete anéis de 11-cis-retinal ao indivíduo. Acombinação de pelo menos um desses compostos e 11-cis-retinal, 9-cis-retinal ou um isômero travado de sete anéis de11-cis-retinal é particularmente útil para o tratamento daretinite pigmentosa e da degeneração macular relacionada coma idade.
Em outras realizações, onde o PCD é a fibrosecística, o método envolve adicionalmente a administração deum agente selecionado do grupo que consiste em antibióticos,vitaminas A, D, Ee suplementos de K, bronquiodiIatação comalbuterol, dornase e ibuprofeno; em que o PCD é o mal deHuntington, o método envolve adicionalmente a administraçãode um agente selecionado do grupo que consiste emhaloperidol, fenotiazina, reserpina, tetrabenazina,amantadina e co-enzima QlO; onde o PCD é o mal de Parkinson,o método envolve adicionalmente a administração de um agenteselecionado do grupo que consiste em levodopa, amantadina,bromocriptina, pergolida, apomorfina, benserazida, lisurida,mesulergina, lisurida, lergotrila, memantina, metergolina,piribedila, tiramina, tirosina, fenilalanina, mesilato debromocriptina, mesilato de pergolida, anti-histamínicos,antidepressivos e inibidores da oxidase de monoamina; onde oPCD é o mal de Alzheimer, o método envolve adicionalmente aadministração de um agente selecionado do grupo que consisteem donepezil, rivastigmina, galantamina e tacrina; onde o PCDé o diabetes nefrogênico insípido o método envolveadicionalmente a administração de um agente selecionado dogrupo que consiste em clorotiazida/hidroclorotiazida,amilorida e indometacina; e onde o PCD é o câncer, o métodoenvolve adicionalmente a administração de um agenteselecionado do grupo que consiste em acetato de abiraterona,altretamina, anidrovinblastina, auristatina, bexaroteno,bicalutamida, BMS184476, 2,3,4,5,6-pentafIuoro-N-(3-fluoro-4-metoxifenil)benzeno sulfonamida, bleomicina, N,N-dimetil-L-valil-L-valil-N-metil-L-valil-L-prolil-l-L-prolin-t-butilamida, caquectina, cemadotina, clorambucil,ciclofosfamida, 31,41-dideidro-41-deoxi-81-norvin-caleucoblastina, docetaxol, doxetaxel, carboplatina,carmustina (BCNU), cisplatina, criptoficina, ciclofosfamida,citarabina, dacarbazina (DTIC), dactinomicina, daunorubicina,dolastatina, doxorubicina (adriamicina) , etoposide, 5-fluorouracila, finasterida, flutamida, hidroxiuréia ehidroxiureiataxanos, ifosfamida, liarozol, lonidamina,lomustina (CCNU), mecloretamina (mostarda de nitrogênio) ,melfalano, isetionato de mivobulina, rizoxina, sertenef,estreptozocina, mitomicina, metotrexato, nilutamida,onapristona, paclitaxel, prednimustina, procarbazina,RPR109881, fosfato de estramustina, tamoxifeno, tasonermina,taxol, tretinoína, vinblastina, vincristina, sulfato devindesina e vinflunina.
Em um aspecto correlacionado, a invenção apresentaum método para o tratamento de um indivíduo diagnosticadocomo portador de retinite pigmentosa. O método envolve aadministração ao indivíduo de 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal; e a administração de pelo menos um compostoadicional selecionado do grupo que consiste em: um inibidorproteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidorlisossomal, um inibidor do transporte de proteínas do RE aoGolgi, um inibidor do protetor de Hsp90, um ativador daresposta ao choque térmico, um inibidor de glicosidase e uminibidor de desacetilase de histona, onde 11-cis-retinal ou9-cis-retinal e o composto são administrados simultaneamenteou dentro de quatorze dias entre as administrações emquantidades suficientes para tratar o indivíduo.
Em várias realizações dos aspectos acima, 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e o composto são administradosdentro de vinte e quatro horas entre as administrações,dentro de cinco, dez ou quatorze dias entre asadministrações; ou são administrados simultaneamente. Emoutras realizações dos aspectos acima, 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e o composto são administrados ao olho (porexemplo, intra-ocularmente). Em outras realizações dosaspectos acima, 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e o compostosão incorporados em uma composição que confere a liberação alongo prazo (por exemplo, uma microesfera, uma nanoesfera ouuma nanoemulsão) ou a sua liberação a longo prazo é obtidamediante o uso de um dispositivo de aplicação de droga. Emoutras realizações dos aspectos acima, o método compreendeadicionalmente a administração de um suplemento de vitamina A.
Contudo, em um outro aspecto, a invenção apresentaum método para aumentar a quantidade de uma conformaçãobioquimicamente funcional de uma proteína em uma célula. 0método envolve a colocação de uma célula em contato com umaquantidade eficaz de pelo menos um composto selecionado dogrupo que consiste em: um inibidor proteassomal, um inibidorde autofagia, um inibidor lisossomal, um inibidor dotransporte de proteínas do RE ao Golgi, um inibidor doprotetor de Hsp90, um ativador da resposta ao choque térmico,um inibidor de glicosidase e um inibidor de desacetilase dehistona; e a identificação de um aumento na quantidade de umaconformação bioquimicamente funcional da proteína. Em umarealização, o método envolve adicionalmente a colocação dacélula em contato com 11-cis-retinal, 9-cis-retinal ou umisômero travado de sete anéis de 11-cis-retinal. Em uma outrarealização, a célula (por exemplo, uma célula de mamífero ouhumana in vitro ou in vivo) compreende uma proteína mutante(por exemplo, opsina, miocilina, lipofuscina, pigH3) queforma um agregado ou uma proteína de fibrila.
Contudo, em um outro aspecto, a invenção apresentauma composição farmacêutica para o tratamento de um PCDocular que compreende uma quantidade eficaz de 11-cis-retinalou de 9-cis-retinal e uma quantidade eficaz de pelo menos umcomposto adicional selecionado do grupo que consiste em uminibidor proteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidorlisossomal, um inibidor do transporte de proteínas do RE aoGolgi, um inibidor do protetor de Hsp90, um ativador daresposta ao choque térmico, um inibidor de glicosidase e uminibidor de desacetilase de histona em um excipientefarmaceuticamente aceitável.
Contudo, em um outro aspecto, a invenção apresentauma composição farmacêutica para o tratamento da retinitepigmentosa que compreende uma quantidade eficaz de 11-eis-retinal ou de 9-cis-retinal e uma quantidade eficaz de pelomenos um composto adicional selecionado do grupo que consisteem um inibidor proteassomal, um inibidor de autofagia, uminibidor lisossomal, um inibidor do transporte de proteínasdo RE ao Golgi, um inibidor do protetor de Hsp90, um ativadorda resposta ao choque térmico, um inibidor de glicosidase eum inibidor de desacetilase de histona em um excipientefarmaceuticamente aceitável.
Em um outro aspecto, a invenção apresenta um kitpara o tratamento de um PCD ocular. O kit inclui umaquantidade eficaz de 11-cis-retinal ou de 9-cis-retinal e umaquantidade eficaz de pelo menos um composto adicionalselecionado do grupo que consiste em um inibidorproteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidorlisossomal, um inibidor do transporte de proteínas do RE aoGolgi, um inibidor do protetor de Hsp90, um ativador daresposta ao choque térmico, um inibidor de glicosidase e uminibidor de desacetilase de histona.
Contudo, em um outro aspecto, a invenção apresentaum kit para o tratamento da retinite pigmentosa. O kit incluiuma quantidade eficaz de 11-cis-retinal ou de 9-cis-retinal euma quantidade eficaz de pelo menos um composto adicionalselecionado do grupo que consiste em um inibidorproteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidorlisossomal, um inibidor do transporte de proteínas do RE aoGolgi, um inibidor do protetor de Hsp90, um ativador daresposta ao choque térmico, um inibidor de glicosidase e uminibidor de desacetilase de histona.
Contudo, em um outro aspecto, a invençãocaracteriza um método para a identificação de um compostoútil para tratar um indivíduo que tem um PCD ocular. 0 métodoenvolve a colocação de uma célula in vitro que expressa aproteína mal-dobrada em contato com um composto candidato; ea determinação do rendimento da proteína corretamente dobradarecuperada a partir da célula em relação a uma célula decontrole, onde um aumento no rendimento da proteínacorretamente dobrada na célula contatada identifica umcomposto útil para tratar um indivíduo que tem um PCD.
Contudo, em um outro aspecto, a invenção apresentaum método para a identificação de um composto útil paratratar um indivíduo que tem retinite pigmentosa. 0 métodoenvolve a colocação de uma célula que expressa a proteínamal-dobrada in vitro em contato com (i) 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e (ii) em um composto candidato; e a determinaçãodo rendimento da proteína corretamente dobrada recuperada apartir da célula relativa a uma célula de controle, onde umaumento no rendimento da proteína corretamente dobrada nacélula contatada identifica um composto útil para tratar umindivíduo que tem a retinite pigmentosa. Em uma realização, aproteína mal-dobrada (por exemplo, opsina) compreende umamutação (tal como uma mutação de P23H).
Contudo, em um outro aspecto, a invenção apresentaum método para o tratamento de um indivíduo que tem umdistúrbio de conformação de proteína (PCD). 0 método envolvea administração ao indivíduo de um inibidor proteassomal oude um inibidor de autofagia em quantidades suficientes paratratar o indivíduo.
Contudo, em um outro aspecto, a invenção apresentaum método para o tratamento de um indivíduo que tem retinitepigmentosa. 0 método envolve a administração ao indivíduo deum inibidor proteassomal ou de um inibidor de autofagia (porexemplo, 3-metiladenina) em quantidades suficientes paratratar o indivíduo. Em uma realização, o inibidorproteassomal é um inibidor reversível do proteassomo (porexemplo, MG132). Em uma outra realização, o inibidor deautofagia é selecionado do grupo que consiste em 3-metiladenina, 3-metil adenosina, adenosina, ácido ocadáico,Aribosídeo de mercaptopurina (N6-MPR), análogo de adenosinaaminotiolado, ribosídeo de 5-amino-4-imidazol carboxamida(AICAR) e bafilomicina Al.
Contudo, em um outro aspecto, a invenção apresentaum método para a produção de uma proteína recombinante em umaconformação bioquimicamente funcional. O método envolve acolocação de uma célula (por exemplo, uma célula eucariótica,uma célula de levedura, uma célula de mamífero) que expressaa proteína recombinante em contato com um compostoselecionado do grupo que consiste em um inibidorproteassomal, um inibidor de autofagia, em um inibidorlisossomal, um inibidor do transporte de proteínas do RE aoGolgi, um inibidor do protetor de Hsp90, um ativador daresposta ao choque térmico, um inibidor de glicosidase e uminibidor de desacetilase de histona,· e o isolamento daproteína recombinante da célula, onde o método produz umaproteína recombinante em uma conformação bioquimicamentefuncional. Em uma realização, o método envolve adicionalmentea medição da atividade biológica da proteína. Em uma outrarealização, a atividade biológica é detectada utilizando umensaio enzimático ou então espectrofotometricamente. Em umaoutra realização, o método envolve adicionalmente a colocaçãoda célula em contato com ll-cis-retinal (por exemplo, umisômero travado de sete anéis de ll-cis-retinal).Em várias realizações de qualquer um dos aspectosacima, o inibidor proteassomal (por exemplo, um inibidorreversível do proteassomo) é qualquer um ou mais de MG 132,lactocistina, clasto-lactocistina-beta-lactona, PSI, MG-115,MG-101, N-Acetil-Leu-Leu-Met-CHO, N-carbobenzoil-Gly-Pro-Phe-Leu-CHO, N-carbobenzoil-Gly-Pro-Ala-Phe-CHO, N-carbobenzoil-Leu-Leu-Phe-CHO, e os sais ou análogos dos mesmos; o inibidorde autofagia é um ou mais de 3-metiladenina, 3-metiladenosina, adenosina, ácido ocadáico, ribosídeo de N6-mercaptopurina [Ne- MPR) , ribosídeo de 5-amino-4-imidazolcarboxamida (AICAR), bafilomicina Al, e os sais ou análogosdos mesmos; o inibidor lisossomal é um ou mais entreleupeptina, trans-epoxisacinil-L-leucilamida-(4-guanidino) -butano, éster metílico de L-metionina, cloreto de amônio,metilamina, cloroquina, e os sais ou análogos dos mesmos; oinibidor do transporte de proteínas do RE ao Golgi é abrefeldina A, e os sais ou análogos dos mesmos; o inibidor doprotetor de Hsp90 é um ou mais dos antibióticos dentreansamicina benzoquinona, Geldanamicina, 17-alilamino-17-demetoxigeldanamicina, radicicol, novobiocina e um inibidorHsp90 que se ligue à cavidade de ATP/ADP de Hsp90, e os saisou análogos dos mesmos; o ativador da resposta ao choquetérmico é selecionado do grupo que consiste em celastrol,éster metílico de celastrol, diacetato de diidrocelastrol,éster butílico de celastrol e diidrocelastrol; o inibidor deglicosidase é qualquer um ou mais entre cloridreto deaustralina, castanoespermina, 6-acetamido-6-deoxi-castanoespermina, cloridreto de deoxifuconojirimicina (DFJ),deoxinojirimicina (DNJ), cloridreto dedeoxigalactonojirimicina (DGJ), cloridreto dedeoximannojirimicina (DMJ), 2R,5R-Bis(hidroximetil)-3R,4R-diidróxi pirrolidina (DMDP), cloridreto de 1,4-dideóxi-l, 4-imino-D-manitol, cloridreto de 3R,4R,5R,6R)-3,4,5,6-tetraidróxi azepano, 1,5-dideoxi-l,5-imino-xilitol,cifunensina, N-butildeoxinojirimicina (BDNJ), N-nonil DNJ(NDNJ), n-hexil DNJ (HDNJ), N-metildeoxinojirimicina (MDNJ),e os sais ou análogos dos mesmos; o inibidor de desacetilasede histona é qualquer um ou mais entre Scriptaid, Composto 8APHA, Apicidina, butirato de sódio, (-)-Depudecina, Sirtinol,tricostatina A, e os sais ou análogos dos mesmos. Em váriasrealizações de qualquer um dos aspectos acima, o PCD ocular équalquer condição entre degeneração macular relacionada com aidade, retinite pigmentosa, glaucoma, distrofias corneais,retinosquise, mal de Stargardt, gânglios autossomaisdominantes ou distrofia macular de Best, ou qualquer outradoença ocular caracterizada pela deposição de agregados ou defibrilas da proteína dentro de uma célula do olho. Em váriosaspectos, a proteína mutante que forma esses agregados oufibrilas inclui a opsina, a miocilina, a lipofuscina ouBJGH3pigH3. Em outras realizações de qualquer um dos aspectosacima, o tema compreende uma mutação que afeta o dobramentoda proteína (por exemplo, uma mutação em uma opsina, tal comouma mutação de P23H).
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
As Figuras IA e IB são espectros de absorbância quemostram o efeito de MG132 e de 11-cis-retinal na absorbânciado mutante P23H e da rodopsina do tipo selvagem,respectivamente.
As Figuras 2A e 2B são espectros de absorbância quemostram o efeito de 3-metiladenina e de 11-cis-retinal naabsorbância do mutante P23H e da rodopsina do tipo selvagem.
As Figuras 3A e 3B são espectros de absorbância quemostram o efeito do cloreto de amônio e de 11-cis-retinal naabsorbância do mutante P23H e da rodopsina do tipo selvagem.As Figuras 4A e 4B são espectros de absorbância quemostram o efeito da brefeldina A e de 11-cis-retinal naabsorbância do mutante P23H e da rodopsina do tipo selvagem.
As Figuras 5A e 5B são espectros de absorbância quemostram o efeito de Geldanamicina e de 11-cis-retinal naabsorbância do mutante P23H e da rodopsina do tipo selvagem.
As Figuras 6A e 6B são espectros de absorbância quemostram o efeito de Celastrol e de 11-cis-retinal naabsorbância do mutante P23H e da rodopsina do tipo selvagem.
As Figuras 7A e 7B são espectros de absorbância quemostram o efeito de diidro-celastrol e de 11-cis-retinal naabsorbância do mutante P23H e da rodopsina do tipo selvagem.
As Figuras 8A e 8B são espectros de absorbância quemostram o efeito de Scriptaid e de 11-cis-retinal naabsorbância do mutante P23H e da rodopsina do tipo selvagem.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Definições
Por "doença conformacional de proteína" entenda-seuma doença ou um distúrbio cuja patologia esteja relacionadaà presença de uma proteína mal-dobrada. Em uma realização,uma doença conformacional de proteína é cautilizada quando aproteína mal-dobrada interfere na atividade biológica normalde uma célula, um tecido ou um órgão.
Por "inibidor proteassomal" entenda-se um compostoque reduz uma atividade proteassomal, tal como a degradaçãode uma proteína ubiquinada.
Por "inibidor de autofagia" entenda-se um compostoque reduz a degradação de um componente celular por umacélula em que o componente reside.
Por "inibidor lisossomal" entenda-se um compostoque reduz a digestão intracelular das macromoléculas por umlisossomo. Em uma realização, um inibidor lisossomal diminuia atividade proteolítica de um lisossomo.Pelo "inibidor do transporte de proteína RE-Golgi"entenda-se um composto que reduz o transporte de uma proteínado RE ao Golgi ou do Golgi ao RE.
Por "inibidor do protetor de Hsp90" entenda-se umcomposto que reduz a atividade do protetor de Hsp90. Em umarealização, o inibidor altera a proteína que liga a umacavidade de ATP/ADP de Hsp90.
Por "ativador da resposta ao choque térmico"entenda-se um composto que aumenta a atividade protetora ou aexpressão de um componente da caminho de choque térmico. Oscomponentes da caminho de choque térmico incluem, mas semficar a eles limitados, HsplOO, Hsp90, Hsp70, Hsp60, Hsp40 eelementos pequenos da família de HSP.
Por "inibidor de glicosidase" entenda-se umcomposto que reduz a atividade de uma enzima que divide umaligação glicosídica.
Por "inibidor de desacetilase de histona" entenda-se um composto que reduz a atividade de uma enzima quedesacetila uma histona.
Por "reduz" ou "aumenta" entenda-se uma alteraçãonegativa ou positiva, respectivamente, de pelo menos 10%,25%, 50%, 75% OU 100%.
Por "conformação bioquimicamente funcional"entenda-se uma proteína que tem uma estrutura terciária quepermite que a proteína seja biologicamente ativa. Quando umaproteína mutante supõe uma conformação bioquimicamentefuncional, a sua atividade biológica é aumentada.Conseqüentemente, uma proteína mutante que tem umaconformação bioquimicamente funcional pode, até certo grau,substituir funcionalmente uma proteína do tipo selvagem.
Métodos da Invenção
Em uma realização, a presente invenção apresentamétodos para o tratamento de uma doença e/ou distúrbios ousintomas da mesma, os quais compreendem a administração deuma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composiçãofarmacêutica que compreende um composto das fórmulas napresente invenção a um indivíduo (por exemplo, um mamíferotal como um ser humano). Desse modo, uma realização apresentaum método para o tratamento de um indivíduo que sofre ou ésuscetível a uma doença de conformação de proteína ou umdistúrbio ou um sintoma da mesma. O método inclui a etapa deadministração ao mamífero de uma quantidade terapêutica deuma quantidade de um composto na presente invenção suficientepara tratar a doença ou o distúrbio ou o sintoma da mesma,sob condições que a doença ou o distúrbio sejam tratados.
Os métodos na presente invenção incluem aadministração ao indivíduo (incluindo um indivíduoidentificado como estando com necessidade de tal tratamento)de uma quantidade eficaz de um composto descrito na presenteinvenção ou de uma composição descrita na presente invençãopara produzir tal efeito. A identificação de um indivíduo comnecessidade de tal tratamento pode residir no julgamento deum indivíduo ou de um profissional de cuidados com a saúde, epode ser subjetiva (por exemplo, opinião) ou objetiva (porexemplo, mensurável por um método de teste ou dediagnóstico).
Conforme empregados na presente invenção, os termos"tratar", "que trata", "tratamento" e outros ainda referem-seà redução ou à melhoria de um distúrbio e/ou dos sintomasassociados com o mesmo. Deve ser apreciado, embora nãoimpossibilitado, que o tratamento de um distúrbio ou de umacondição não requeira que o distúrbio, a condição ou ossintomas associados com o mesmo sejam completamenteeliminados.
Conforme empregados na presente invenção, os termos"impede", "que impede", "prevenção", "tratamento profilático"e outros ainda referem-se à redução da probabilidade dedesenvolver um distúrbio ou uma condição em um indivíduo, quenão tenha, mas esteja em risco ou suscetível de desenvolverum distúrbio ou uma condição.
Os métodos terapêuticos da invenção (que incluem otratamento profilático) em geral compreendem a administraçãode uma quantidade terapeuticamente eficaz dos compostos napresente invenção, tal como um composto das fórmulas napresente invenção a um indivíduo (por exemplo, animal,humano) com necessidade do mesmo, incluindo um mamífero,particularmente um ser humano. Tal tratamento seráadministrado apropriadamente aos indivíduos, particularmentea seres humanos, que sofrem de, têm, são suscetíveis a ouestão em risco de ter uma doença, um distúrbio ou um sintomada mesma. A determinação desses indivíduos "em risco" podeser feita por meio de qualquer determinação objetiva ousubjetiva por um teste de diagnóstico ou pela opinião de umindivíduo ou de um profissional de cuidados com a saúde (porexemplo, teste genético, marcador de enzima ou de proteína,Marcador (tal como definido na presente invenção), históricofamiliar, e outros ainda). Os compostos na presente invençãotambém podem ser utilizados no tratamento de quaisquer outrosdistúrbios em que o dobramento da proteína (incluindo odobramento incorreto) possa estar implicado.
A invenção apresenta composições e métodos que sãoúteis para corrigir as proteínas mal-dobradas in vivo. Asproteínas mal-dobradas podem interferir na função normal dacélula e podem resultar em uma Doença Conformacional deProteína (PCD) humana. As PCDs incluem a deficiência de □□-antitripsina, fibrose cística, mal de Huntington, mal deParkinson, mal de Alzheimer, diabetes nefrogênico insípido,câncer e distúrbios relacionados aos príons (por exemplo, omal de Jacob-Creutzfeld). As composições e os métodos dainvenção são particularmente úteis para a prevenção ou otratamento de PCDs oculares, incluindo a retinite pigmentosa,degeneração macular relacionada com a idade, glaucoma,distrofias corneais, retinosquise, mal de Stargardt, gângliosautossomais dominantes, distrofia macular de Best edistrofias corneais. As composições da invenção podem serutilizadas para o tratamento da PCD, o retardamento da mortede células afetadas, o alivio dos sintomas cautilizados pelaPCD ou a prevenção de que uma PCD seja iniciada em primeirolugar.
A invenção é geralmente baseada na descoberta que11-cis-retinal em combinação com um inibidor proteassomal, uminibidor de autofagia, um inibidor lisossomal, um inibidor dotransporte de proteínas do RE ao Golgi, um inibidor doprotetor de Hsp90, um ativador da resposta ao choque térmicoou um inibidor de desacetilase de histona pode ser utilizadopara corrigir a conformação da proteína opsina mal-dobrada oupara aumentar a quantidade de proteína corretamente dobradaem uma célula. Especificamente, o 11-cis-retinal emcombinação com o inibidor proteassomal MG132, o inibidor deautofagia 3-metiladenina, o cloreto de amônio do inibidorlisossomal, o inibidor do transporte do RE-Golgi brefeldinaA, o inibidor Geldanamicina Hsp90, o ativador da resposta aochoque térmico Celastrol ou o inibidor de desacetilase dehistona Scriptaid permitiram que uma proteína de opsina domutante P23H assumisse uma conformação bioquimicamentefuncional e se associasse com 11-cis-retinal para formar arodopsina. Além disso, o inibidor proteassomal MG132 e oinibidor autofágico de 3-metil adenina foram utilizadosindependentemente para corrigir a conformação de opsina domutante P23H e permitir que formasse a rodopsina.
Inibidores ProteassomaisO proteassomo 26S é uma protease multicatalíticaque divide as proteínas ubiquinadas em peptídeos curtos. Osinibidores proteassomais são uma classe de compostos quepodem ser utilizados independentemente ou em combinação com11-cis-retinal, 9-cis-retinal ou um isômero travado de seteanéis de 11-cis-retinal para o tratamento de PCD. MG-132 é uminibidor proteassomal que pode ser utilizadoindependentemente ou em combinação com 11-cis-retinal, 9-cis-retinal ou um isômero travado de sete anéis de 11-cis-retinal. MG-132 é particularmente útil para o tratamento daretinite pigmentosa e outras doenças oculares relacionadas ãagregação de proteínas ou ao dobramento incorreto deproteínas. Outros inibidores proteassomais úteis nos métodosda invenção incluem a lactocistina (LC), clasto-lactocistina-beta-lactona, PSI (N-carbobenzoil-Ile-Glu-(OtBu)-Ala-Leu-CHO), MG-132 (N-carbobenzoil-Leu-Leu-Leu-CHO). MG-115 (N-c arboben ζ oil-Leu-Leu-Nva-CHO), MG-IOl (N-Acetyl-Leu-Leu-norLeu-CHO), ALLM (N-Acetyl-Leu-Leu-Met-CHO), N-carbobenzoil-Gly-Pro-Phe-Leu-CHO, N-carbobenzoil-Gly-Pro-Ala-Phe-CHO, N-carbobenzoil-Leu-Leu-Phe-CHO, e os sais ou análogos dosmesmos. Outros inibidores proteassomais e os seus usos sãodescritos por exemplo, na Patente U.S. N°. 6.492.333.
Inibidores da Autofagia
A autofagia é um mecanismo evolucionariamenteconservado para a degradação de componentes celulares nocitoplasma e serve como um mecanismo de sobrevivência decélulas em células que estão no estado de inanição. Durante aautofagia, partes do citoplasma se tornam encapsuladas pelasmembranas celulares, formando os vacúolos autofágicos que sefundem eventualmente com os lisossomos para terem os seusconteúdos degradados. Os inibidores de autofagia podem serutilizados independentemente ou em combinação com 11-cis-retinal, 9-cis-retinal ou um isômero travado de sete anéis de11-cis-retinal para o tratamento de PCD. 0 inibidor deautofagia 3-metil adenina é particularmente útil para otratamento da retinite pigmentosa ou outras doenças ocularesrelacionadas a proteínas mal-dobradas ou à agregação deproteínas. Os inibidores da autofagia úteis nos métodos dainvenção incluem, mas sem ficar a eles limitados, 3-metiladenina, 3-metil adenosina, adenosina, ácido ocadáico,ribosídeo de N^mercaptopurina (i^"MPR) , um análogo deadenosina aminotiolado, ribosídeo de 5-amino-4-imidazol docarboxamida (AICAR), bafilomicina Al, e os sais ou osanálogos dos mesmos.
Inibidores Lisossomais
0 lisossomo é um sítio principal de degradaçãocelular da proteína. A degradação das proteínas que entram nacélula pela endocitose mediada pelo receptor ou pelapinocitose e das proteínas da membrana plasmática ocorre noslisossomos. Os inibidores lisossomais, tais como cloreto deamônio, leupeptina, trans-epoxisacinil-L-leucilamida-(4-guanidino) butano, éster metílico de L-metionina, cloreto deamônio, metilamina, cloroquina, e os sais ou análogos dosmesmos, são úteis em combinação com 11-cis-retinal, 9-cis-retinal ou um isômero travado de sete anéis de 11-cis-retinalpara o tratamento de PCD.
Inibidores do Transporte do RE-Golgi
As proteínas recém sintetizadas entram na caminhosecretória biossintética no RE. Para sair do RE, as proteínasdevem ser corretamente dobradas. As proteínas que são mal-dobradas são retidas no RE. Os inibidores do transporte doRE-Golgi são úteis para o tratamento de PCD. A brefeldina A éum inibidor do transporte do RE-Golgi exemplificadora que éútil nos métodos da invenção.
Inibidores do Protetor de HSP90A proteína de choque térmico 90 (Hsp90) éresponsável por proteger as proteínas envolvidas nasinalização, proliferação e sobrevivência de células e éessencial para a estabilidade conformacional e para ofuncionamento de uma série de proteínas. Os inibidores deHsp-90 são úteis em combinação com 11-cis-retinal, 9-cis-retinal ou um isômero travado de sete anéis de 11-cis-retinalpara o tratamento de PCD. Os inibidores de Hsp-90 incluemantibióticos de ansamicina benzoquinona, tais como ageldanamicina e 17-alilamino-17-demetoxigeldanamicina (17-AAG) , que se ligam especificamente a Hsp90, alteram suafunção e promovem a degradação proteolítica de proteínas dosubstrato. Outros inibidores de Hsp-90 incluem, mas sem ficara eles limitados, radicicol, novobiocina e qualquer inibidorde Hsp90 que se ligue à cavidade de ATP/ADP de Hsp90.Ativadores da Resposta ao Choque Térmico
O celastrol, um triterpeno de metídeo de quinona,ativa a resposta humana ao choque térmico. Em combinação com11-cis-retinal, 9-cis-retinal ou um isômero travado de seteanéis de 11-cis-retinal, celastrol e outros ativadores daresposta ao choque térmico são úteis para o tratamento dePCD. Os ativadores da resposta ao choque incluem, mas semficar a eles limitados, celastrol, éster metílico decelastrol, diacetato de diidrocelastrol, éster butílico decelastrol, diidrocelastrol, e os sais ou os análogos dosmesmos.
Inibidores da Desacetilase de Histona
A regulação da expressão de genes é mediada pordiversos mecanismos, incluindo as modificações pós-translacionais das histonas pela acetilação e desacetilaçãodinâmicas. As enzimas responsáveis pelos processosreversíveis de acetilação/desacetilação sãoacetiltransferases de histona (HATs) e desacetilases dehistona (HDACs), respectivamente. Os inibidores dedesacetilase de histona incluem Scriptaid, Composto 8 APHA,Apicidina, butirato de sódio, (-)-Depudecina7 Sirtinol,tricostatina A, e os sais ou análogos dos mesmos.
Inibidores de Glicosidase
Os inibidores de glicosidase são uma classe decompostos que são úteis para o tratamento de uma doença deconformação de proteína, particularmente quando administradosem combinação com 11-cis-retinal, 9-cis-retinal ou um isômerotravado de sete anéis de 11-cis-retinal. A castanoespermina,que é um poliidróxi alcalóide isolado a partir de fontes deplantas, inibe a hidrólise enzimática do glicosídeo. Acastanoespermina e seus derivados são particularmente úteispara o tratamento de um PCD, tal como a retinite pigmentosa.
Também são úteis nos métodos da invenção outros inibidores deglicosidase, incluindo o cloridreto de australina, a 6-acetamido-6-deoxi-castanoespermina, que é um inibidorpoderoso de hexosaminidases, o cloridreto dedeoxifuconojirimicina (DFJ), a deoxinojirimicina (DNJ), queinibe a glicosidase I e II, o cloridreto dedeoxigalactonojirimicina (DGJ), que inibe a D.-D-galactosidase, o cloridreto de deoximannojirimicina (DMJ), a2R,5R-bis(hidroximetil)-3R,4R-diidroxipirrolidina (DMDP),também conhecida como 2,5-dideoxi-2,5-imino-D-manitol, ocloridreto de 1,4-dideoxi-l,4-imino-D-manitol, o cloridretode 3R,4R,5R,6R)-3,4,5, 6-tetraidróxi azepano, que inibe a b-N-acetilglucosaminidase, o 1,5-dideóxi-l,5-imino-xilitol, queinibe a β-glicosidase e Cifunensina, um inibidor demanosidase 1. Também são úteis em combinação com 9-cis-retinal ou 11-cis-retinal N-butildeoxinojirimicina (BDNJ), N-nonil DNJ (NDNJ), N-hexil DNJ (HDNJ), N-metildeoxinojirimicina (MDNJ) e outros inibidores deglicosidase conhecidos no estado da técnica. Os inibidores deglicosidase estão disponíveis comercialmente, por exemplo,junto à Industrial Research Limited (Wellington, NovaZelândia) e os métodos de utilização são descritos, porexemplo, nas Patentes U.S. N°. 4.894.388, 5.043.273,5 5.103.008, 5.844.102 e 6.831.176; e na Publicação de PatenteU.S. N°. 20020006909.
Distúrbios Oculares de Conformação de Proteínas
As composições da invenção são particularmenteúteis para o tratamento de virtualmente qualquer distúrbioocular de conformação de proteínas (PCD). Tais distúrbios sãocaracterizados pela acumulação de proteínas mal-dobradas comoagregados de proteínas ou fibrilas dentro do olho. A retinitepigmentosa é um PCD ocular exemplificador que está associadocom o dobramento incorreto de uma opsina (por exemplo, aopsina P23H) (N° . de Acesso no GenBank NM_000539 eNP_000530), bem como com mutações na anidrase carbônica IV(CA4) (N°. de Acesso no GenBank NM_000717 e NP_000708)(Rebello et al., Proc Acad Natl Sci EUA. 27 de abril de 2004;101(17): 6617-22). CA4 é uma proteína ancorada emglicosilfosfatidilinositol que é altamente expressa noscoriocapilares do olho humano. Uma mutação de R14W faz comque a proteína CA4 seja dobrada incorretamente e os pacientesque portam essa mutação sofrem de retinite pigmentosaautossomal dominante. As composições da invenção que aumentama quantidade de CA4 em uma conformação bioquimicamentefuncional são úteis para o tratamento da retinite pigmentosaautossomal dominante associada com as mutações no polipeptídeo CA4.
A retinosquise juvenil ligada por X (RS) é um outroPCD ocular. A RS é uma causa comum de degeneração macularjuvenil em homens. As mutações em RSl (NM_000330, NP_000321)ou a retinosquesina, são responsáveis pela retinosquiseligada por X, uma degeneração macular comum de início precoceem homens que resulta em uma divisão das camadas internas daretina e em perda grave de visão. As mutações em RSl rompem odobramento da proteína (J Biol Chem 18 de março de 2005;280 (11) : 10721-30) . As composições da invenção que aumentam aquantidade de RSl em uma conformação bioquimicamentefuncional são úteis para o tratamento da retinosquise.
O glaucoma é um PCD ocular que está associado comas mutações na miocilina. A miocilina é uma glicoproteínasecretada de função desconhecida que é expressa de maneiraonipresente em muitos órgãos humanos, incluindo o olho. Asmutações na proteína miocilina causam uma forma de glaucoma,uma causa principal de cegueira em todo o mundo. Asmiocilinas mutantes se acumulam no retículo endoplasmático decélulas transfectadas como agregados insolúveis (Aroca-Aguilar et al. , Biol Chem. 3 de junho de 2005; 280(22):21043-51; N°. de Acesso no GenBank NM_000261 e NP_000252). Ascomposições da invenção que aumentam a quantidade demiocilina em uma conformação bioquimicamente funcional sãoúteis para o tratamento de glaucoma associado à miocilina.
A degeneração macular do tipo Stargardt é um PCDocular que está associado com as mutações em EL0VL4. EL0VL4(alongamento de ácidos graxos de cadeia muito longa 4) é umelemento da família ELO das proteínas envolvidas nabiossíntese de ácidos graxos de cadeia muito longa. Asmutações em EL0VL4 foram identificadas em pacientes comdegeneração macular do tipo Stargardt autossómal dominante(STGD3/adMD). As proteínas mutantes EL0VL4 se acumulam comoagregados grandes dentro das células transfectadas (Graysonet al., J. Biol Chem. 21 de julho de 2005; Epub) (N°. deAcesso no GenBank NM_022726 e NP_073563). As composições dainvenção que aumentam a quantidade de EL0VL4 em umaconformação bioquimicamente funcional são úteis para otratamento da degeneração macular do tipo Stargardt.A Malattia Leventinese (ML) e a distrofia retinalde colméia de Doyne (DHRD) referem-se a dois PCDs autossomaisdominantes que são caracterizados por depósitos amarelo-esbranquiçados conhecidos como gânglios que se acumulamabaixo do epitélio de pigmento retinal (RPE). O EFEMPldesempenha um papel na formação de gânglios retinais e estáenvolvido na etiologia da degeneração macular (Stone et al.,Nat Genet, junho de 1999 ; 22(2): 199-202) (Números de Acessono GenBank NM_004105 e NP_004096). 0 mutante EFEMPl é mal-dobrado e foi retido dentro das células. As composições dainvenção que aumentam a quantidade de EFEMPI em umaconformação bioquimicamente funcional são úteis para otratamento de gânglios autossomais dominantes.
A distrofia macular de Best é um PCD autossomaldominante que é cauzada por mutações em VMD2 (hBESTl), quecodifica a Bestrofina, canais de Cl(-) (Gomez et al., DNASeq., dezembro de 2001; 12(5-6):431-5) (Números de Acesso noGenBank NM_004183 e NP_004174). Mutações na bestrofinaprovavelmente causam o dobramento incorreto da proteína. Ascomposições da invenção que aumentam a quantidade debestrofina corretamente dobrada são úteis para o tratamentoda distrofia macular de Best.
As distrofias corneais ligadas a 5q31 são PCDsautossomais dominantes que são caracterizadas pela acumulaçãoprogressiva de depósitos de proteína dependente de idade nacórnea seguida pela deficiência visual. Foi verificado que asmutações no gene BIGH3 (N°. de Acesso no GenBank: NM_000358),também denominadas TGFBI (fator de crescimento transformadorinduzido por □.) são responsáveis por este grupo inteiro decondições. As substituições em Arg-124, assim como outrosresíduos, resultam na deposição específica da córnea daproteína codificada (N°. de Acesso no GenBank NP_000349)através de passagens de agregação distintos que envolvem oturnover alterado da proteína no tecido corneal. Ascomposições da invenção que aumentam a quantidade de proteínacorretamente dobrada de TGFBI são úteis para o tratamento dedistrofias corneais ligadas a 5q31.
Em uma realização, a invenção apresenta um métodopara monitorar o progresso do tratamento. 0 método inclui aetapa de determinação de um nível de marcador diagnóstico(Marcador) (por exemplo, qualquer alvo delineado na presenteinvenção modulado por um composto, uma proteína ou umindicador do mesmo da presente invenção, etc.) ou a mediçãode diagnóstico (por exemplo, seleção, ensaio) em um indivíduoque sofre ou é suscetível a um distúrbio ou sintomas do mesmoassociados com o dobramento da proteína (incluindo odobramento incorreto), em que o indivíduo recebe umaquantidade terapêutica de um composto na presente invençãosuficiente para tratar a doença ou os sintomas da mesma. Onível do Marcador determinado no método pode ser comparadoaos níveis conhecidos do Marcador em controles normaissaudáveis ou em outros pacientes atingidos para estabelecer ostatus da doença do indivíduo. Em realizações preferidas, umsegundo nível do Marcador no indivíduo é determinado em umponto de tempo posterior à determinação do primeiro nível eos dois níveis são comparados para monitorar o curso dadoença ou a eficácia da terapia. Em determinadas realizaçõespreferidas, um nível de pré-tratamento do Marcador noindivíduo é determinado antes do início do tratamento decomeço de acordo com a presente invenção; esse nível de pré-tratamento do Marcador pode então ser comparado ao nível doMarcador no indivíduo depois que o tratamento é iniciado,para determinar a eficácia do tratamento.
Composições Farmacêuticas
A presente invenção apresenta preparadosfarmacêuticos que compreendem compostos conjuntamente comveículos farmaceuticamente aceitáveis, em que os compostospropiciam a geração de uma proteína mutante em umaconformação bioquimicamente funcional. Tais preparados têmaplicações terapêuticas e profiláticas. Em uma realização,uma composição farmacêutica inclui 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal em combinação com pelo menos um composto adicionalque é um inibidor proteassomal, um inibidor de autofagia, uminibidor lisossomal, um inibidor do transporte de proteínasdo RE ao Golgi, um inibidor do protetor de Hsp90, um ativadorda resposta ao choque térmico, um inibidor de glicosidase ouum inibidor de desacetilase de histona. 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e o segundo composto são formulados juntos ouseparadamente. Em uma outra realização, uma composiçãofarmacêutica inclui um inibidor proteassomal ou um inibidorde autofagia. Os compostos da invenção podem seradministrados como parte de uma composição farmacêutica. Ascomposições devem ser estéreis e devem conter uma quantidadeterapeuticamente eficaz dos polipeptídeos em uma unidade depeso ou de volume apropriada para a administração a umindivíduo. As composições e as combinações da invenção podemfazer parte de um pacote farmacêutico, em que cada um doscompostos está presente em quantidades de dosagemindividuais.
As composições farmacêuticas da invenção a seremutilizadas para a administração profilática ou terapêuticadevem ser estéreis. A esterilidade é facilmente obtidaatravés da filtração através das membranas de filtraçãoestéreis (por exemplo, membranas com 0,2 Dm), pela irradiaçãogama ou por quaisquer outros meios apropriados conhecidospelos elementos versados na técnica. As composiçõesterapêuticas de polipeptídeo são colocadas geralmente em umrecipiente que tem uma porta de acesso estéril, por exemplo,um saco ou frasco de solução intravenosa que tem umbloqueador perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica.Essas composições serão normalmente armazenadas emrecipientes unitários ou de doses múltiplas, por exemplo,ampolas ou frascos vedados, como uma solução aquosa ou comouma formulação liofilizada para reconstituição.
Os compostos podem ser combinados, opcionalmente,com um excipiente farmaceuticamente aceitável. 0 termo"excipiente farmaceuticamente aceitável", tal como empregadona presente invenção, significa uma ou mais cargas sólidas oulíquidas compatíveis, diluentes ou substâncias deencapsulação que são apropriadas para a administração a umser humano. 0 termo "veículo" denota um ingrediente orgânicoou inorgânico, natural ou sintético, com o qual o ingredienteativo é combinado para facilitar a administração. Oscomponentes das composições farmacêuticas também podem sermisturados com as moléculas da presente invenção e entre si,de uma maneira tal que não haja nenhuma interação queprejudique substancialmente a eficácia farmacêutica desejada.
Os compostos da presente invenção podem sercontidos em um excipiente farmaceuticamente aceitável. 0excipiente contém de preferência quantidades menores deaditivos tais como as substâncias que intensificam aisotonicidade e a estabilidade química. Tais materiais sãoatóxicos aos receptores nas dosagens e concentraçõesempregadas e incluem tampões tais como o fosfato, o citrato,o succinato, o acetato, o lactato, o tartarato, e outrosácidos orgânicos ou seus sais; tris-hidróxi metil aminometano(TRIS), bicarbonato, carbonato, e outras bases orgânicas eseus sais; antioxidantes, tais como o ácido ascórbico;polipeptídeos com baixo peso molecular (por exemplo, menos deaproximadamente dez resíduos), por exemplo, poliarginina,polilisina, poliglutamato e poliaspartato; proteínas, taiscomo a albumina do soro, a gelatina ou as imunoglobulinas;polímeros hidrofílicos, tais como a polivinil pirrolidona(PVP), polipropileno glicóis (PPGs) e polietileno glicóis(PEGs); aminoácidos, tais como a glicina, ácido glutâmico,ácido aspártico, histidina, lisina ou arginina;
monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos queincluem a celulose ou seus derivados, glicose, manose,sacarose, dextrinas ou derivados sulfatados de carboidrato,tais como a heparina, o sulfato de condroitina ou o sulfatode dextrano; íons de metais polivalentes, tais como íons demetais divalentes que incluem íons de cálcio, íons demagnésio e íons de manganês; agentes quelantes, tais como oácido etilenodiamina tetraacético (EDTA); álcoois de açúcar,tais como o manitol ou o sorbitol; contra-íons, tais como osódio ou o amônio; e/ou tensoativos não-iônicos, tais como ospolissorbatos ou poloxâmeros. Outros aditivos também podemser incluídos, tais como estabilizantes, antimicrobianos,gases inertes, reabastecedores de fluidos e de nutrientes(isto é, dextrose de Ringer), reabastecedores de eletrólitos,e outros ainda, que podem estar presentes em quantidadesconvencionais.
As composições, tal como descrito acima, podem seradministradas em quantidades eficazes. Uma quantidade eficazirá depender do modo de administração, da condição particularque está sendo tratada e do resultado desejado, ela tambémpode depender do estágio da condição, da idade e da condiçãofísica do indivíduo, da natureza da terapia simultânea, setal existir, e de fatores similares conhecidos pelo clínicomédico. Para aplicações terapêuticas, essa quantidade ésuficiente para atingir um resultado medicamente desejável.
Com respeito a um indivíduo que tem uma doença ouum distúrbio de conformação de proteínas, uma quantidadeeficaz é suficiente para aumentar o nível de. uma proteínacorretamente dobrada em uma célula. Com respeito a umindivíduo que tem uma doença ou um distúrbio relacionado auma proteína mal-dobrada, uma quantidade eficaz é umaquantidade suficiente para estabilizar, retardar ou reduzirum sintoma associado com uma patologia. Geralmente, as dosesdos compostos da presente invenção devem ser deaproximadamente 0,01 mg/kg por dia a aproximadamente 1000mg/kg por dia. Espera-se que doses que variam deaproximadamente 50 a aproximadamente 2000 mg/kg sejamapropriadas. Doses mais baixos irão resultar de determinadosformas de administração, tal como a administraçãointravenosa. Caso uma resposta em um indivíduo sejainsuficiente nas doses iniciais aplicadas, doses maiselevadas (ou doses eficazmente mais elevadas por uma via deaplicação mais localizada e diferente) podem ser empregadasaté o ponto em que a tolerância do paciente permitir.Contempla-se que doses múltiplas por dia atingem os níveissistêmicos apropriados de uma composição da presenteinvenção.
Uma variedade de vias de administração édisponível. Os métodos da invenção, falando de maneira geral,podem ser praticados utilizando qualquer modo deadministração que seja medicamente aceitável, significandoqualquer modo que produza níveis eficazes dos compostosativos sem causar efeitos clinicamente adversos inaceitáveis.Em uma realização preferida, uma composição da invenção éadministrada intra-ocularmente. Outros modos de administraçãoincluem as vias oral, retal, tópica, intraocular, bucal,intravaginal, intracisternal, intracerebroventricular,intratraqueal, nasal, transdermal, implantes em/dentro ou avia parenteral. O termo "parenteral" inclui subcutanêo,intratecal, intravenoso, intramuscular, intraperitoneal ouinfusão. As composições que compreendem uma composição dainvenção podem ser adicionadas a um fluido fisiológico, talcomo o humor intravitreal. Para a administração ao SNC, umavariedade de técnicas está disponível para promover atransferência da terapêutica através da barreirahematoencefálica incluindo o rompimento por cirurgia ou porinjeção, drogas que transientemente abrem contato deaderência entre as células endoteliais da vasculatura do SNCe os compostos que facilitam a translocação através de taiscélulas. A administração oral pode ser preferida para otratamento profilático por causa da conveniência ao pacientebem como pela programação de dosagem.
As composições farmacêuticas da invenção,opcionalmente, podem conter adicionalmente uma ou maisproteínas adicionais conforme desejado, incluindo proteínasdo plasma, proteases e outro material biológico, contanto quenão cause efeitos adversos quando da administração a umindivíduo. As proteínas ou o material biológico apropriadospodem ser obtidos do plasma humano ou de mamífero porqualquer um dos métodos de purificação conhecidos edisponíveis aos elementos versados na técnica; a partir desobrenadantes, extratos ou lisatos de cultura de tecidorecombinante, vírus, levedura, bactérias ou similares quecontém um gene que expressa uma proteína humana ou demamífero que é introduzida de acordo com técnicas de DNArecombinante padrão; ou a partir de líquidos biológicoshumanos (por exemplo, sangue, leite, linfa, urina ousimilares) ou a partir de animais transgênicos que contêm umgene que expresse uma proteína humana que é introduzida deacordo com as técnicas transgênicas padrão.
As composições farmacêuticas da invenção podemcompreender um ou mais compostos de tamponamento do pH paramanter o pH da formulação em um nível predeterminado quereflita o pH fisiológico, tal como na faixa deaproximadamente 5,0 a aproximadamente 8,0. 0 composto detamponamento do pH utilizado na formulação liquida aquosapode ser um aminoácido ou uma mistura de aminoácidos, talcomo a histidina ou uma mistura de aminoácidos tais como ahistidina e a glicina. Alternativamente, o composto detamponamento do pH é de preferência um agente que mantém o pHda formulação em um nível predeterminado, tal como na faixade aproximadamente 5,0 a aproximadamente 8,0 e que nãoquelata os íons de cálcio. Os exemplos ilustrativos de taiscompostos de tamponamento do pH incluem, mas sem ficar a eleslimitados, íons de imidazol e de acetato. 0 composto detamponamento do pH pode estar presente em qualquer quantidadeapropriada para manter o pH da formulação em um nívelpredeterminado.
As composições farmacêuticas da invenção tambémpodem conter um ou mais agentes de modulação osmótica, istoé, um composto que modula as propriedades osmóticas (porexemplo, a tonicidade, a osmolalidade e/ou a pressãoosmótica) da formulação a um nível que seja aceitável àcorrente sangüínea e às células sangüíneas de indivíduosreceptores. O agente de modulação osmótica pode ser um agenteque não quelata íons de cálcio. 0 agente de modulaçãoosmótica pode ser qualquer composto conhecido ou disponívelaos elementos versados na técnica para modular aspropriedades osmóticas da formulação. 0 elemento versado natécnica pode determinar empiricamente a adequabilidade de umdado agente de modulação osmótica para o uso na formulação dainvenção. Os exemplos ilustrativos de tipos apropriados deagentes de modulação osmótica incluem, mas sem ficar a eleslimitados: sais, tais como o cloreto de sódio e o acetato desódio; açúcares, tais como a sacarose, a dextrose e omanitol; aminoácidos, tal como a glicina; e as misturas de umou de mais destes agentes e/ou tipos de agentes. 0(s)agente(s) de modulação osmótica pode(m) estar presente(s) emqualquer concentração suficiente para modular as propriedadesosmóticas da formulação.
As composições que compreendem um composto dapresente invenção podem conter íons de metais multivalentes,tais como ions de cálcio, íons de manganês e/ou íons demagnésio. Qualquer íon de metal multivalente que ajuda aestabilizar a composição e que não afeta adversamente osindivíduos receptores pode ser utilizado. 0 elemento versadona técnica, com base nesses dois critérios, pode determinaros íons de metal apropriados empiricamente, e as fontesapropriadas de tais íons de metal são conhecidas e incluem ossais inorgânicos e orgânicos.
As composições farmacêuticas da invenção tambémpodem ser uma formulação líquida não-aquosa. Qualquer líquidonão-aquoso apropriado pode ser empregado, contanto quepropicie estabilidade aos agentes ativos contidos no mesmo.De preferência, o líquido não-aquoso é um líquidohidrofílico. Os exemplos ilustrativos de líquidos não-aquososapropriados incluem: glicerol; sulfóxido de dimetila (DMSO);polidimetilsiloxano (PMS); etileno glicóis, tais como oetileno glicol, o dietileno glicol, o trietileno glicol, opolietileno glicol ("PEG") 200, PEG 300 e PEG 400; e ospropileno glicóis, tais como o dipropileno glicol, otripropileno glicol, o polipropileno glicol ("PPG") 425, PPG725, PPG 1000, PPG 2000, PPG 3000 e PPG 4000.
As composições farmacêuticas da invenção tambémpodem ser uma formulação líquida misturada aquosa/não-aquosa.Qualquer formulação líquida não-aquosa apropriada, tais comoaquelas descritas acima, pode ser empregada junto comqualquer formulação líquida aquosa, tais como aquelasdescritas acima, contanto que a formulação líquida misturadaaquosa/não-aquosa propicie estabilidade ao composto contidona mesma. De preferência, o líquido não-aquoso em talformulação é um líquido hidrofílico. Os exemplos ilustrativosde líquidos não-aquosos apropriados incluem: glicerol; DMSO;PMS; etileno glicóis, tais como PEG 200, PEG 300 e PEG 400; epropileno glicóis, tais como PPG 425, PPG 725, PPG 1000, PPG2000, PPG 3000 e PPG 4000.
As formulações estáveis apropriadas podem permitira armazenagem dos agentes ativos em um estado líquidocongelado ou descongelado. As formulações líquidas estáveispodem ser armazenadas a uma temperatura de pelo menos -70°C,mas também podem ser armazenadas a temperaturas mais elevadasde pelo menos 0°C ou entre aproximadamente 0°C eaproximadamente 42°C, dependendo das propriedades dacomposição. 0 elemento versado na técnica geralmente sabe queas proteínas e os polipeptídeos são sensíveis às mudanças nopH, na temperatura e em uma multiplicidade de outros fatoresque podem afetar a eficácia terapêutica.
Em determinadas realizações, uma via deadministração desejável pode ser efetuada por meio deaerossol pulmonar. As técnicas para a preparação dos sistemasde aplicação em aerossol que contêm polipeptídeos são bemconhecidas pelos elementos versados na técnica. Geralmente,tais sistemas devem utilizar componentes que não danifiquemsignificativamente as propriedades biológicas dos anticorpos,tais como a capacidade de ligação ao parátopo (vide, porexemplo, Sciarra e Cutie, "Aerosols," em Remington1SPharmaceutical Sciences, 18a edição, 1990, páginas 1694-1712;incorporado a título de referência). Os elementos versadosna técnica podem modificar facilmente vários parâmetros econdições para produzir aerossóis de polipeptídeo semrecorrer à experimentação imprópria.
Outros sistemas de aplicação podem incluir sistemasde aplicação de liberação com o passar do tempo, de liberaçãoretardada ou de liberação prolongada. Tais sistemas podemevitar administrações repetidas das composições da invenção,aumentando a conveniência ao indivíduo e ao médico. Muitostipos de sistemas de aplicação de liberação são disponíveis econhecidos pelos elementos versados na técnica. Eles incluemsistemas base de polímero tais como polilactídeos (PatenteU.S. N°. 3.773.919; Patente Européia N°. 58.481),poli(lactídeo-glicolídeo), copolioxalatos, policaprolactonas,poliesteramidas, poliortoésteres, ácidos poliidróxibutíricos, tal como o ácido poli-D-(-)-3-hidróxi butírico(Patente Européia N°. 133.988), copolímeros de ácido L-glutâmico e gama-etil-L-glutamato (Sidman, K. R. et al. ,Biopolymers 22:547-556), poli(metacrilato de 2-hidroetila) ouetileno acetato de vinila (Langer, R. et al. , J. Biomed.Mater. Res. 15: 267-277; Langer, R. Chem. Tech. 12: 98-105) epolianidretos. Outros exemplos de composições de liberaçãoprolongada incluem matrizes de polímero semi-permeáveis naforma de artigos moldados, por exemplo, películas oumicrocápsulas. Os sistemas de aplicação também incluemsistemas de não-polímeros que são: lipídeos que incluemesteróis tais como o colesterol, os ésteres de colesterol eos ácidos graxos ou gorduras neutras tais como di- mono- etriglicerídeos; sistemas de liberação de hidrogel, tal como ohidrogel bio-reabsorvível derivado biologicamente (isto é,hidrogéis de quitina ou hidrogéis de quitosana); sistemassilásticos; sistemas baseados em peptídeos; revestimentos decera; tabletes comprimidos que utilizam aglutinantes eexcipientes convencionais; implantes parcialmente fundidos; eoutros ainda. Os exemplos específicos incluem, mas sem ficara eles limitados:(a) sistemas erosionais em que o agente écontido em uma forma dentro de uma matriz, tais como aquelasdescritas nas Patentes U.S. N°. 4.452.775, 4.667.014,4.748.034 e 5.239.660 e (b) sistemas difusionais em que umcomponente ativo permeia a uma taxa controlada a partir de umpolímero, tal como descrito nas Patentes U.S. N°. 3.832.253 e3.854.480.
Um outro tipo de sistema de aplicação que pode serutilizado com os métodos e as composições da invenção é umsistema de dispersão coloidal. Os sistemas de dispersãocoloidal incluem sistemas baseados em lipídeos que incluememulsões óleo-em-água, micelas, micelas misturadas elipossomos. Os lipossomos são vasos artificiais da membrana,os quais são úteis como um vetor de aplicação in vivo ou invitro. Os vasos unilamelares grandes (LUV), que variam notamanho de 0,2 - 4,0 D.m, podem encapsular macromolécuiasgrandes dentro do interior aquoso e são aplicados às célulasem uma forma biologicamente ativa (Fraley, R. ePapahadjopoulos, D., Trends Biochem. Sci 6: 77-80).
Os lipossomos podem ser alvejados a um tecidoparticular ao acoplar o lipossomo a um ligando específico talcomo um anticorpo, um açúcar, um glicolipídeo ou uma proteínamonoclonal. Os lipossomos estão comercialmente disponíveisjunto à Gibco BRL, por exemplo, como LIPOFECTIN™ eLIPOFECTACE™, que são formados de lipídeos catiônicos taiscomo N-[1-(2,3-dioleilóxi)-propil]-Ν,N,N-cloreto detrimetilamônio (DOTMA) e dimetil brometo de dioctadecilamônio(DDAB). Os métodos para a elaboração de lipossomos são bemconhecidos no estado da técnica e foram descritos em muitaspublicações, por exemplo, em DE 3.218.121; Epstein et al.,Proc. Natl. Acad. Sei. (EUA) 82: 3688-3692 (1985); Hwang etal., Proc. Natl. Acad. Sei. (EUA) 77: 4030-4034 (1980); EP52.322; EP 36.676; EP 88.046; EP 143.949; EP 142.641; Pedidode Patente Japonês 83-118008; Patente U.S. N°. 4.485.045 e4.544.545; e EP 102.324. Os lipossomos também foram revistospor Gregoriadis, G., Trends Biotechnol., 3: 235-241).
Um outro tipo de veículo é uma micropartícula ou umimplante biocompatível que é apropriado para o implante noreceptor mamífero. Os implantes bioerodíveis exemplificadoresque são úteis de acordo com este método são descritos noPedido Internacional PCT N°. PCT/US/03307 (Publicação WO N°.95/24929, intitulada "Polymeric Gene Delivery System").
PCT/US/03 07 descreve matrizes poliméricas biocompativeis, depreferência biodegradáveis para conter um gene exógeno sob ocontrole de um promotor apropriado. As matrizes poliméricaspodem ser utilizadas para conseguir a liberação prolongada dogene ou do produto exógeno do gene no indivíduo.
A matriz polimérica está de preferência na forma deuma micropartícula tal como uma microesfera (em que um agenteé disperso em toda uma matriz polimérica sólida) ou umamicrocápsula (em que um agente é armazenado no núcleo de umescudo polimérico). As microcápsulas dos polímerosantecedentes que contêm drogas são descritas, por exemplo, naPatente U.S. N°. 5.075.109. Outras formas de matrizpolimérica para conter um agente incluem películas,revestimentos, géis, implantes e stents. 0 tamanho e acomposição do dispositivo da matriz polimérica sãoselecionados para resultar em cinética de liberação favorávelno tecido em que a matriz é introduzida. 0 tamanho da matrizpolimérica adicional é selecionado de acordo com o método deaplicação que deve ser utilizado. De preferência, quando umavia em aerossol é utilizada, a matriz polimérica e acomposição são abrangidas em um veículo tensoativo. Acomposição da matriz polimérica pode ser selecionada para terambas as taxas de degradação favoráveis e também ser formadade um material que seja bioaderente, para aumentaradicionalmente a eficácia de transferência. A composição damatriz também pode ser selecionada para não se degradar, masem vez disso, para ser liberada por meio de difusão duranteum período de tempo prolongado. 0 sistema de aplicação tambémpode ser uma microesfera biocompatível que seja apropriadapara aplicação local específica de sítio. Tais microesferassão descritas em Chickering, D. E., et al. , Biotechnol.Bioeng., 52: 96-101; Mathiowitzf E., et al., Nature 386: 410-414 .
Ambas as matrizes poliméricas biodegradáveis e não-biodegradáveis podem ser utilizadas para aplicar ascomposições da invenção ao indivíduo. Tais polímeros podemser polímeros naturais ou sintéticos. 0 polímero éselecionado com base no período de tempo em que a liberação édesejada, geralmente da ordem de algumas horas a um ano oumais. Tipicamente, a liberação durante um período que variaentre algumas horas e três a doze meses é a mais desejável. 0polímero está opcionalmente na forma de um hidrogel que podeabsorver até aproximadamente 90% de seu peso em água eadicionalmente, é opcionalmente reticulado com íonsmultivalentes ou outros polímeros.
Os polímeros sintéticos exemplificadores que podemser utilizados para formar o sistema de aplicaçãobiodegradável incluem: poliamidas, policarbonatos,polialquilenos, polialquileno glicóis, óxidos depolialquileno, tereftalatos de polialquileno, álcooispolivinílicos, éteres polivinílicos, ésteres polivinílicos,haletos polivinílicos, polivinil pirrolidona,poliglicolídeos, polissiloxanos, poliuretanos e co-polímerosdos mesmos, alquil celulose, hidróxi alquil celulose, éteresde celulose, ésteres de celulose, nitrocelulose, polímeros deésteres acrílicos e metacrílicos, metil celulose, etilcelulose, hidróxi propil celulose, hidróxi propil metilcelulose, hidróxi butil celulose, acetato de celulose,propionato de celulose, acetato de butirato de celulose,acetato de ftalato de celulose, carbóxi etil celulose,triacetato de celulose, sal de sulfato de sódio de celulose,poli(metacrilato de metila), poli(metacrilato de etila),poli(metacrilato de hexila), poli(metacrilato de isobutila),poli(metacrilato de hexila), poli(metacrilato de isodecila),poli(metacrilato de laurila), poli(metacrilato de fenila),poli(acrilato de metila), poli(acrilato de isopropila),poli(acrilato de isobutila), poli(acrilato de octadecila) ,polietileno, polipropileno, poli(etileno glicol), óxido depoli(etileno), tereftalato de poli(etileno), álcooispoli(vinilicos), acetato de polivininila, cloretopolivinilico, poliestireno, polivinil pirrolidona e polímerosde ácido láctico e de ácido glicólico, polianidridos,poli(orto)éster, ácido poli(bútico), ácido poli(valérico) epoli(lactídeo-cocaprolactona) e polímeros naturais tais comoo alginato e outros polissacarídeos que incluem o dextrano ea celulose, colágeno, derivados químicos dos mesmos(substituições, adições de grupos químicos, por exemplo,alquila, alquileno, hidroxilações, oxidações e outrasmodificações feitas rotineiramente pelos elementos versadosna técnica), albumina e outras proteínas hidrofílicas, zeínae outras prolaminas e proteínas hidrofóbicas, copolímeros emisturas dos mesmos. Em geral, estes materiais se degradampela hidrólise ou pela exposição enzimática à água in vivo,pela erosão da superfície ou em massa.
Métodos de Aplicação Ocular
As composições da invenção (por exemplo, inibidorproteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidorlisossomal, um inibidor do transporte de proteínas do RE aoGolgi, um inibidor do protetor de Hsp90, um ativador daresposta ao choque térmico ou um inibidor de desacetilase dehistona) são particularmente apropriadas para o tratamento dedoenças oculares de conformação de proteínas, tais como oglaucoma, a retinite pigmentosa, a degeneração macularrelacionada com a idade, distrofias corneais, a retinosquise,o mal de Stargardt, gânglios autossomais dominantes e adistrofia macular de Best.
Em uma abordagem, as composições da invenção sãoadministradas através de um dispositivo ocular apropriadopara o implante direto no vítreo do olho. As composições dainvenção podem ser fornecidas em composições de liberaçãoprolongada, tais como aquelas descritas, por exemplo, nasPatentes U.S. N°. 5.672.659 e 5.595.760. Foi verificado quetais dispositivos propiciam uma liberação controlada eprolongada de várias composições para tratar o olho sem riscode efeitos colaterais locais e sistêmicos prejudiciais. Umobjetivo do presente método ocular de aplicação é amaximização da quantidade de droga contida em um dispositivoou em um implante intraocular ao minimizar seu tamanho a fimde prolongar a duração do implante. Vide, por exemplo, asPatentes U.S. N°. 5.378.475; 6.375.972 e 6.756.058 e asPublicações U.S. 20050096290 e 200501269448. Tais implantespodem ser implantes biocompatíveis e/ou biodegradáveis oupodem ser implantes não-biodegradáveis. Os implantes ocularesbiodegradáveis são descritos, por exemplo, na Publicação dePatente U.S. N°. 20050048099. Os implantes podem serpermeáveis ou impermeáveis ao agente ativo e podem serintroduzidos em uma câmara do olho, tais como as câmarasanterior ou posterior, ou podem ser implantados na esclera,no espaço transcoroidal ou na região avascularizada externaao vitreo. Alternativamente, uma lente de contato que ajacomo um depósito para composições da invenção também pode serutilizada para a aplicação da droga.
Em uma realização preferida, o implante pode serposicionado sobre uma região avascular, tal como na esclera,para permitir a difusão transcleral da droga ao sítio detratamento desejado, por exemplo, o espaço e a máculaintraocular do olho. Além disso, o sítio de difusãotranscleral fica de preferência na proximidade da mácula. Osexemplos de implantes para a aplicação de uma composiçãoincluem, mas sem ficar a eles limitados, os dispositivos
descritos nas Patentes U.S N0 3.416 53 0; 3 828 777;4.014. 335; 4 .300.557 4.327. 725 4.853. 224 ; 4 946 450;4.997. 652; 5.147.647 5.164 . 188 5.178. 63 5; 5 300,114; 5 . 322. 691; 5.403.901 5.443 . 505 5.466 . 466; 5 .476 511;5.516. 522; 5.632.984 5 . 679. 666 5 . 710 165; 5 725 4 93;5 . 743. 274 ; 5.766 . 242 5 . 766. 619 5 . 770 592; 5 . 773 019;5.824 . 072; 5.824.073 5.830. 173 5 . 836 935; 5 .869 079,5.902. 5 98 ; 5.904.144 5.916. 584 6 . 001 386; 6 . 074 661;6 .110 485; 6.126.687; 6.146.366 ; 6. 251.090; e 6. 299 895 e nopedido de patente WO 01/30323 e no pedido de patente WO
01/28474, os quais são incorporados na presente invenção atitulo de referência.
Os exemplos incluem, mas sem ficar a eleslimitados, os seguinte: um sistema de aplicação de droga deliberação prolongada que compreende um reservatório internoque compreende uma quantidade eficaz de um agente eficaz naobtenção de um efeito fisiológico ou farmacológico local ousistêmico desejado, um tubo interno impermeável à caminho doagente, sendo que o tubo interno tem uma primeira e segundaextremidades e cobre pelo menos uma porção do reservatóriointerno, sendo que o tubo interno é feito sob medida e éformado de um material de modo que o tubo interno possasuportar seu próprio peso, um elemento impermeávelposicionado na primeira extremidade do tubo interno, sendoque o elemento impermeável impede a caminho do agente parafora do reservatório através da primeira extremidade do tubointerno e um elemento permeável posicionado na extremidadeexterna do tubo segundo, sendo que o elemento permeávelpermite a difusão do agente fora do reservatório através daextremidade interna do segundo tubo; um método para aadministração de um composto da invenção a um segmento de umolho, sendo que o método compreende a etapa de implante de umdispositivo de liberação prolongada para aplicar o compostoda invenção ao vítreo do olho ou de um dispositivoimplantável, liberação prolongada para a administração de umcomposto da invenção a um segmento de um olho; um dispositivode liberação de droga prolongada que compreende: a) um núcleoda droga que compreende uma quantidade terapeuticamenteeficaz de pelo menos um primeiro agente eficaz na obtenção deum efeito diagnóstico ou eficaz na obtenção de um efeitofisiológico ou farmacológico local ou sistêmico desejado; b)pelo menos um copo unitário essencialmente impermeável àcaminho do agente que cerca e define um compartimento internopara aceitar o núcleo da droga, sendo que o copo unitáriocompreende uma extremidade superior aberta com pelo menos umsulco de reentrância em torno de pelo menos uma porção daextremidade superior aberta do copo unitário; c) um pluguepermeável que é permeável à caminho do agente, sendo que oplugue permeável é posicionado na extremidade superior abertado copo unitário, sendo que o sulco interage com o pluguepermeável mantendo-o em posição e fechando a extremidadesuperior aberta, o plugue permeável permite a caminho doagente fora do núcleo da droga, através do plugue permeável epara fora da extremidade superior aberta do copo unitário; ed) pelo menos um segundo agente eficaz na obtenção de umefeito diagnóstico ou eficaz na obtenção de um efeitofisiológico ou farmacológico local ou sistêmico desejado; ouum dispositivo de liberação de droga prolongada quecompreende: um núcleo interno que compreende uma quantidadeeficaz de um agente que tem uma solubilidade desejada e umacamada de revestimento do polímero, sendo que a camada dopolímero é permeável ao agente, em que a camada derevestimento do polímero cobre completamente o núcleointerno.
Outras abordagens para a aplicação ocular incluem ouso de lipossomos para alvejar um composto da presenteinvenção ao olho e de preferência às células epiteliais dopigmento retinal e/ou membrana de Brach. Por exemplo, ocomposto pode ser complexado com os lipossomos na maneiradescrita acima e este complexo de composto/lipossomo éinjetado em pacientes com uma doença ocular, utilizando ainjeção intravenosa para dirigir o composto ao tecido ou àcélula ocular desejada. A injeção direta do complexo dolipossomo em proximidade às células epiteliais do pigmentoretinal ou à membrana de Brach também pode fornecer oalvejamento do complexo com algumas formas de PCD ocular. Emuma realização especifica, o composto é administrado atravésde aplicação intraocular prolongada (tal como VITRASERT ouENVISION). Em uma realização específica, o composto éaplicado por meio de injeção subtenons posterior. Em umaoutra realização específica, as partículas de microemulsãoque contêm as composições da invenção são aplicadas ao tecidoocular para a extração de lipídeos da membrana de Brach, dascélulas epiteliais do pigmento retinal ou de ambas.
As nanopartículas constituem um sistema de veículocoloidal que foi demonstrado que melhora a eficácia da drogaencapsulada ao prolongar a vida média do soro. Asnanopartículas de cianoacrilatos de polialquila (PACAs) sãoum sistema coloidal de aplicação de droga do polímero queestá em desenvolvimento clínico, tal como descrito por Stellaet al. , J. Pharm. Sci., 2000. 89: páginas 1452-1464; Briggeret al., Int. J. Pharm., 2 001. 214: páginas 3 7-42; Calvo etal. , Pharm. Res., 2001. 18: páginas 1157-1166; e Li et al. ,Biol. Pharm. Bull., 2001. 24: páginas 662-665. Os ácidos depoli(hidroxila) biodegradáveis, tais como os copolímeros depoli(ácido láctico) (PLA) e de poli(glicolídeo láctico)(PLGA) estão sendo utilizados extensivamente em aplicaçõesbiomédicas e receberam a aprovação do FDA para determinadasaplicações clinicas. Além disso, as nanopartículas de PEG-PLGA têm muitas características de veículo desejáveis,inclusive (i) que o agente a ser encapsulado compreende umafração razoavelmente elevada do peso (carregamento) dosistema de veículo total; (ii) que a quantidade de agenteutilizada na primeira etapa do processo de encapsulação éincorporada no veículo final (a eficiência de captura) em umnível razoavelmente elevado; (iii) que o veículo pode sercongelado a seco e ser reconstituído na solução semagregação; (iv) que o veículo é biodegradável; (v) que osistema de veículo é de tamanho pequeno; e (vi) que o veículointensifica a persistência das partículas.
As nanopartículas são sintetizadas utilizandovirtualmente qualquer escudo biodegradável conhecido noestado da técnica. Em uma realização, um polímero, tal comopoli (ácido láctico) (PLA) ou poli(ácido láctico-glicólico)(PLGA) é utilizado. Tais polímeros são biocompatíveis ebiodegradáveis e estão sujeitos às modificações que aumentamdesejavelmente a eficácia fotoquímica e o período decirculação da nanopartícula. Em uma realização, o polímero émodificado com um grupo terminal de ácido carboxílico (COOH)que aumenta a carga negativa da partícula e limita desse modoa interação com aptâmeros de ácido nucléico carregadosnegativamente. As nanopartículas também são modificadas compolietileno glicol (PEG), que também aumenta a vida média e aestabilidade das partículas em circulação. Alternativamente,o grupo COOH é convertido em um éster de N-hidróxisuccinimida (NHS) para a conjugação covalente aos aptâmerosmodificados por amina.Os polímeros biocompatíveis úteis na composição enos métodos da invenção incluem, mas sem ficar a eleslimitados, poliamidas, policarbonatos, polialquilenos,polialquileno glicóis, óxidos de polialquileno, tereftalatosde polialquileno, álcoois polivinílicos, éterespolivinílicos, ésteres polivinílicos, haletos polivinílicos,polivinil pirrolidona, poliglicolídeos, polissiloxanos,poliuretanos e copolímeros dos mesmos, alquil celulose,hidróxi alquil celulose, éteres de celulose, ésteres decelulose, nitrocelulose, polímeros de ésteres acrílicos emetacrílicos, metil celulose, etil celulose, hidróxi propilcelulose, hidróxi propil metil celulose, hidróxi butil metilcelulose, acetato de celulose, propionato de celulose,butirato de acetato de celulose, ftalato de acetato decelulose, carbóxi etil celulose, triacetato de celulose, salde sódio de sulfato de celulose, poli(metacrilato de metila),poli(metacrilato de etila), poli(metacrilato de isobutila),poli(metacrilato de hexila), poli(metacrilato de isodecila),poli(metacrilato de laurila), poli(metacrilato de fenila),poli(acrilato de metila), poli(acrilato de isopropila),poli(acrilato de isobutila), poli(acrilato de octadecila),polietileno, polipropileno, poli(etileno glicol), óxido deH poli(etileno), tereftalato de poli(etileno), álcooispoli(vinílicos), acetato poli(vinílico), cloretopolivinílico, poliestireno, polivinil pirrolidona, ácidospoliialurônicos, caseína, gelatina, glutina, polianidridos,ácido poliacrílico, alginato, quitosana, poli(metacrilato demetila), poli(metacrilato de etila), poli(metacrilato debutila), poli(metacrilato de isobutila), poli(metacrilato dehexila), poli(metacrilato de isodecila), poli(metacrilato delaurila), poli(metacrilatode fenila), poli(acrilato demetila), poli(acrilato de isopropila), poli(acrilato deisobutila), poli(acrilato de octadecila), e as combinações dequalquer um destes. Em uma realização, as nanopartículas dainvenção incluem polímeros de PEG-PLGA.
As composições da invenção também podem seraplicadas topicamente. Para a aplicação tópica, ascomposições são fornecidas em qualquer excipientefarmaceuticamente aceitável que seja aprovado para aaplicação ocular. De preferência, a composição é aplicada naforma de gotas à superfície do olho. Para algumas aplicações,a aplicação da composição é baseada na difusão dos compostosatravés da córnea ao interior do olho.
Os elementos versados na técnica irão reconhecerque os melhores regimes de tratamento para o uso doscompostos da presente invenção para o tratamento de um PCDocular podem ser diretamente determinados. Esta não é umaquestão de experimentação, mas sim de otimização, a qual éexecutada rotineiramente nas artes médicas. Os estudos invivo em camundongos pelados freqüentemente fornecem um pontode início a partir do qual se começa a otimizar os regimes dedosagem e de aplicação. A freqüência das injeções seráinicialmente uma vez por semana, tal como foi feito em algunsestudos com camundongos. No entanto, essa freqüência pode serfavoravelmente ajustada de um dia ou quinzenalmente ou até ummês, dependendo dos resultados obtidos a partir dasexperimentações clínicas iniciais e das necessidades de umpaciente particular.
As quantidades de dosagem humana podem serinicialmente determinadas ao extrapolar a quantidade decomposto utilizada nos camundongos, como um elemento versadona técnica reconhece que é rotineira no estado da técnica amodificação da dosagem para os seres humanos comparados aosmodelos animais. Em determinadas realizações previstas em quea dosagem pode variar entre aproximadamente 1 mg decomposto/kg de peso corpóreo a aproximadamente 5.000 mg/kg depeso corpóreo; ou de aproximadamente 5 mg/Kg de peso corpóreoa aproximadamente 4.000 mg/Kg de peso corpóreo ou deaproximadamente 10 mg/Kg de peso corpóreo a aproximadamente3.000 mg/Kg de peso corpóreo; ou de aproximadamente 50 mg/Kgde peso corpóreo a aproximadamente 2.000 mg/Kg de pesocorpóreo; ou de aproximadamente 100 mg/Kg de peso corpóreo aaproximadamente 1.000 mg/Kg de peso corpóreo; ou deaproximadamente 15 0 mg/Kg de peso corpóreo a aproximadamente500 mg/Kg de peso corpóreo. Em outras realizações, essa dosepode ser de aproximadamente 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 150,200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750,800, 850, 900, 950, 1.000, 1.050, 1.100, 1.150, 1.200, 1.250,1.300, 1.350, 1.400, 1.450, 1.500, 1.600, 1.700, 1.800,1.900, 2.000, 2.500, 3.000, 3.500, 4.000, 4.500, 5.000 mg/kgde peso corpóreo. Em outras realizações, está previsto quedoses mais elevadas podem ser utilizadas, sendo que taisdoses podem ficar compreendidas na faixa de aproximadamente 5mg de composto/kg de peso a aproximadamente 20 mg decomposto/kg de peso. Em outras realizações, as doses podemser de aproximadamente 8, 10, 12, 14, 16 ou 18 mg/Kg de pesocorpóreo. Naturalmente que essa quantidade de dosagem podeser ajustada para cima ou para baixo, como é feitorotineiramente em tais protocolos de tratamento, dependendodos resultados das experimentações clínicas iniciais e dasnecessidades de um paciente particular.
Ensaios de Seleção
Conforme discutido na presente invenção, asproteínas mal-dobradas freqüentemente interferem na funçãobiológica normal das células e causam PCD. Em muitos casos, aacumulação de proteínas mal-dobradas causa danos celulares ecitotoxicidade dos agregados de proteína. Os compostos úteiscorrigem ou impedem o dobramento incorreto de proteínas aoaumentar a quantidade de uma proteína mutante que esteja emuma conformação bioquimicamente ativa. Qualquer número demétodos está disponível para realizar ensaios de seleção paraidentificar tais compostos. Em uma abordagem, uma proteínamutante que não adota uma conformação de proteína do tiposelvagem é expressa em uma célula (por exemplo, uma célula invitro ou in vivo); a célula entra em contato com um compostocandidato; e o efeito do composto na conformação da proteínamutante é testado utilizando qualquer método conhecido noestado da técnica ou descrito na presente invenção. Umcomposto que aumenta o rendimento da presente proteínacorretamente dobrada na célula contatada relativamente a umacélula do controle que não entre em contato com o composto éconsiderado útil nos métodos da invenção. Um aumento naquantidade de uma proteína corretamente dobrada é testado,por exemplo, ao medir a absorção da proteína em umcomprimento de onda característico (por exemplo, 500 nm paraa rodopsina), ao medir uma diminuição na agregaçãointracelular da proteína ao medir uma diminuição nacitotoxicidade, ao medir a mitigação de um fenótiporelacionado a PCD ou ao medir um aumento na atividadebiológica da proteína utilizando qualquer método padrão (porexemplo, atividade enzimática, associação com um ligando). Emuma abordagem relacionada, a seleção é realizada na presençade 11-cis-retinal, 9-cis-retinal ou um análogo ou um derivadodos mesmos. Os compostos úteis aumentam a quantidade deproteína em uma conformação bioquimicamente funcional em pelomenos 10%, 15% ou 20%, ou de preferência em 25%, 50% ou 75%;ou com a máxima preferência em pelo menos 100%, 200%, 300% ouaté mesmo 4 00%.
Caso desejado, a eficácia do composto identificadoé testada em um modelo animal que tem um PCD (por exemplo, ummodelo animal de retinite pigmentosa, fibrose cística, mal deHuntington, mal de Parkinson, mal de Alzheimer, diabetesnefrogênico insípido, câncer (por exemplo, câncer relacionadoàs mutações de p53) e distúrbios relacionados a príons (porexemplo, mal de Jacob-Creutzfeld).
Compostos de Teste e Extratos
Em geral, os compostos com a capacidade de aumentara quantidade de uma proteína corretamente dobrada em umacélula são identificados a partir de grandes bibliotecas deprodutos naturais ou de extratos sintéticos (ou semi-sintéticos) ou a partir de bibliotecas químicas de acordo comos métodos conhecidos no estado da técnica. Os elementosversados no campo da descoberta e do desenvolvimento dedrogas irão compreender que a fonte precisa dos extratos oucompostos de teste não é essencial ao(s) procedimento(s) deseleção da invenção. Conseqüentemente, virtualmente qualquernúmero de extratos ou compostos químicos pode ser selecionadoutilizando os métodos descritos na presente invenção. Osexemplos de tais extratos ou compostos incluem, mas sem ficara eles limitados, extratos à base de plantas, extratosfúngicos, procarióticos à base de animais, caldos defermentação e sintéticos, bem como a modificação de compostosexistentes. Numerosos métodos também estão disponíveis para ageração da síntese aleatória ou dirigida (por exemplo, semi-síntese ou síntese total) de qualquer número de compostosquímicos, incluindo, mas sem ficar a eles limitados,compostos à base de sacarídeos, lipídeos, peptídeos e ácidonucléico. As bibliotecas de compostos sintéticos estãocomercialmente disponíveis junto a Brandon Associates(Merrimack, Ν. H.) e Aldrich Chemical (Milwaukee, Wis.).
Alternativamente, as bibliotecas de compostos naturais naforma de extratos bacterianos, fúngicos, de plantas e deanimais estão comercialmente disponíveis junto a uma série defontes, incluindo Biotics (Sussex, Reino Unido), Xenova(Slough, Reino Unido), Harbor Branch Oceangraphics (Institute(Ft. Pierce, Fia.) e PharmaMar, EUA (Cambridge, Mass.). Alémdisso, as bibliotecas produzidas natural ou sinteticamentesão produzidas, caso desejado, de acordo com os métodosconhecidos no estado da técnica, por exemplo, por meio dosmétodos padrão de extração e de fracionamento. Além disso,caso desejado, qualquer biblioteca ou composto é facilmentemodificado utilizando métodos químicos, físicos oubioquímicos padrão.
Além disso, os elementos versados na técnica dedescoberta e desenvolvimento de drogas compreendem facilmenteque os métodos para a desreplicação (por exemplo, adesreplicação taxonômica, a desreplicação biológica e adesreplicação química, ou qualquer combinação das mesmas) oua eliminação das réplicas ou repetições dos materiais jáconhecidos por sua atividade de correção de proteínas mal-dobradas devem ser empregados sempre que possível.
Quando se verifica que um extrato bruto corrige aconformação de uma proteína mal-dobrada e um fracionamentoadicional do extrato de ligação positivo, é necessário isolaros constituintes químicos responsáveis pelo efeito observado.
Desse modo, o objetivo da extração, do fracionamento e doprocesso de purificação é a caracterização e a identificaçãocuidadosas de uma entidade química dentro do extrato brutoque aumenta o rendimento de uma proteína corretamentedobrada. Os métodos de fracionamento e de purificação de taisextratos heterógenos são conhecidos no estado da técnica.Caso desejado, os compostos mostrados como sendo agentesúteis para o tratamento de qualquer patologia relacionada auma proteína mal-dobrada ou à agregação de proteínas sãomodificados quimicamente de acordo com os métodos conhecidosno estado da técnica.
Terapias de CombinaçãoAs composições da invenção úteis para o tratamentode um PCD (por exemplo, retinite pigmentosa, mal deHuntington, mal de Parkinson, mal de Alzheimer, diabetesnefrogênico insípido, câncer e distúrbios relacionados aprions, tal como o mal de Jacob-Creutzf eld) podem, casodesejado, ser administradas em combinação com qualquerterapia padrão conhecida no estado da técnica. Para aretinite pigmentosa, as terapias padrão incluem suplementosde vitamina A. No caso do mal de Parkinson, as terapiaspadrão incluem a administração de qualquer um ou mais doseguinte: agonistas do receptor de dopaminalevodopa/carbidopa, amantadina, bromocriptina, pergolida,apomorfina, benserazida, lisurida, mesulergina, lisurida,lergotrila, memantina, metergolina, piribedila, tiramina,tirosina, fenilalanina, mesilato de bromocriptina, mesilatode pergolida; outras terapias padrão incluem anti-histaminicos, antidepressivos, agonistas de dopamina,inibidores de oxidase de monoamina. Para o mal de Huntington,as terapias padrão incluem a administração de qualquer um oumais do seguinte: haloperidol, fenotiazina, reserpina,tetrabenazina, amantadina e co-enzima QlO. Para o mal deAlzheimer, as terapias padrão incluem a administração dequalquer um ou mais do seguinte: donepezil (Aricept),rivastigmina (Exelon), galantamina (Razadyne) e tacrina(Cognex). Para o diabetes nefrogênico insípido, as terapiaspadrão incluem a administração de qualquer um ou mais doseguinte: clorotiazida/hidroclorotiazida, amilorida eindometacina. Para o câncer, as terapias padrão incluem aadministração de qualquer um ou mais do seguinte: acetato deabiraterona, altretamina, anidrovinblastina, auristatina,bexarotena, bicalutamida, BMS184476, 2,3,4,5,6-pentafIuoro-N-(3-fluoro-4-metoxifenil)benzeno sulfonamida, bleomicina, N,N-dimetil-L-valil-L-valil-N-metil-L-valil-L-prolil-l-L-prolina-t-butilamida, caquectina, cemadotina, clorambucil,ciclofosfamida, 31,41-dideidro-41-deóxi-8'-norvin-caleucoblastina, docetaxol, doxetaxel, ciclofosfamida,carboplatina, carmustina (BCNU), cisplatina, criptoficina,citarabina, dacarbazina (DTIC), dactinomicina, daunorubicina,dolastatina, doxorubicina (adriamicina), etoposide, 5-fluorouracila, finasterida, flutamida, hidróxi uréia ehidróxi uréia taxanos, ifosfamida, liarozol., Ionidamina,lomustina (CCNU), mecloretamina (mostarda de nitrogênio) ,melfalano, isetionato de mivobulina, rizoxina, sertenef,estreptozocina, mitomicina, metotrexato, nilutamida,onapristona, paclitaxel, prednimustina, procarbazina,RPR109881, fosfato de estramustina, tamoxifeno, tasonermina,taxol, tretinoina, vinblastina, vincristina, sulfato devindesina e vinflunina.
Kits
A invenção apresenta kits para o tratamento ou aprevenção de um PCD ou de sintomas do mesmo. Em umarealização, o kit inclui um pacote farmacêutico quecompreende uma quantidade eficaz de 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e qualquer um ou mais dos seguintes: um inibidorproteassomal (por exemplo, MG132), um inibidor de autofagia(por exemplo, 3-metiladenina) , um inibidor lisossomal (porexemplo, cloreto de amônio), um inibidor do transporte deproteínas do RE ao Golgi (por exemplo, brefeldina A) , uminibidor do protetor de Hsp90 (por exemplo, Geldanamicina) ,um ativador da resposta ao choque térmico (por exemplo,Celastrol), um inibidor de glicosidase (por exemplo,castanoespermina) e um inibidor de desacetilase de histona(por exemplo, Scriptaid). De preferência, as composiçõesestão presentes na forma de dosagem unitária. Em algumasrealizações, o kit compreende um recipiente estéril quecontém uma composição terapêutica ou profilática; taisrecipientes podem ser caixas, ampolas, garrafas, frascos,tubos, saquinhos, bolsas, embalagens de bolhas ou outrasformas apropriadas de recipientes conhecidas no estado datécnica. Tais recipientes podem ser feitos de plástico,vidro, papel laminado, folha de metal ou de outros materiaisapropriados para conter medicamentos.
Caso desejado, as composições da invenção ou ascombinações das mesmas são fornecidas juntamente com asinstruções para a administração a um indivíduo que tem ouestá em risco de desenvolver um PCD. As instruções deverãoincluir geralmente as informações sobre o uso dos compostospara o tratamento ou a prevenção de um PCD. Em outrasrealizações, as instruções incluem pelo menos um dosseguintes: a descrição do composto ou da combinação decompostos; a programação e a administração de dosagem para otratamento de um PCD ou de sintomas do mesmo; precauções;avisos; indicações; contra-indicações; informações sobresuperdosagem; reações adversas; a farmacologia animal;estudos clínicos; e/ou referências. As instruções podem serimpressas diretamente no recipiente (quando presente) ou comouma etiqueta aplicada ao recipiente ou como uma folhinha, umpanfleto, um cartão ou um folheto separado fornecido em oucom o recipiente.
Os seguintes exemplos são fornecidos para ilustrara invenção, não para limitar a mesma. Os elementos versadosna técnica irão compreender que as construções específicasfornecidas abaixo podem ser alteradas de várias maneiras,consistentemente com a invenção acima descrita enquanto retémas propriedades essenciais dos compostos ou das combinaçõesdos mesmos.
Expressão do Polipeptídeo Recombinante
Uma vez que as composições da invenção aumentam arecuperação dos polipeptídeos recombinantes que têm umaconformação bioquimicamente ativa, elas são geralmente úteispara intensificar a expressão de virtualmente qualquerpolipeptídeo recombinante conhecido no estado da técnica. Emparticular, as composições da invenção são úteis paraintensificar a recuperação dos polipeptideos biologicamenteativos que tendem a formar agregados de proteínas inativas ouque formam corpos de inclusão. Para intensificar arecuperação das formas biologicamente ativas de taisproteínas, pelo menos uma ou mais das composições da invençãosão adicionadas ao meio de uma célula recombinante (porexemplo, uma célula eucariótica, uma célula de mamífero ouuma célula de levedura) que expressa a proteína nesse momentoem que a síntese da proteína é induzida. Tais composiçõesincluem um inibidor proteassomal, um inibidor de autofagia,um inibidor lisossomal, um inibidor do transporte deproteínas do RE ao Golgi, um inibidor do protetor de Hsp90,um inibidor de glicosidase, um ativador da resposta ao choquetérmico ou um inibidor de desacetilase de histona. Paraaumentar a expressão de uma opsina recombinante ou mutante,11-cis-retinal ou 9-cis-retinal podem ser adicionados ao meioquando da indução.
Em geral, os polipeptideos recombinantes sãoproduzidos pela transformação de uma célula hospedeiraapropriada com toda ou uma parte de uma molécula de ácidonucléico que codifica um polipeptídeo ou fragmento da mesmaem um veículo de expressão apropriado. Os elementos versadosno campo da biologia molecular irão compreender que qualquerum de uma ampla variedade de sistemas de expressão pode serutilizado para formar a proteína recombinante. A célulahospedeira precisa utilizada não é essencial à invenção. Umpolipeptídeo recombinante pode ser produzido em virtualmentequalquer hospedeiro eucariótico (por exemplo, Saccharomycescerevisiae, células de inseto, por exemplo, células Sf21, ouem células de mamífero, por exemplo, célula NIH 3T3, heLa oude preferência COS) . Tais células estão disponíveis junto auma ampla faixa de fontes (por exemplo, American Type CultureCollection, Rockland, Md. ; vide também, por exemplo, Ausubelet al., Current Protocol in Molecular Biology, New York: JohnWiley and Sons , 1997) . O método de transfecção e a escolhado veículo de expressão irão depender do sistema hospedeiroselecionado. Os métodos de transformação são descritos, porexemplo, em Ausubel et al. (supra); os veículos de expressãopodem ser escolhidos a partir daqueles fornecidos, porexemplo, em Cloning Vectors: A Laboratory Manual (Ρ. H.Pouwels et al., 1985, Supl. 1987).
Uma variedade de sistemas de expressão existe paraa produção de polipeptídeos recombinantes. Os vetores deexpressão úteis para produzir tais polipeptídeos incluem, semlimitação, vetores cromossomais, epissomais e derivados devírus, por exemplo, vetores derivados de plasmídeosbacterianos, de bacteriófagos, de transpossons, epissomos delevedura, de elementos de inserção, de elementos cromossomaisde levedura, de vírus tais como baculovírus, papova vírus,tais como SV4 0, vírus de varíola bovina, adenovírus, vírusfowl pox, vírus e retrovírus de pseudo-hidrofobia, e osvetores derivados de combinações dos mesmos.
Uma vez que o polipeptídeo recombinante é expresso,é isolado, por exemplo, utilizando cromatografia deafinidade. Em um exemplo, um anticorpo (por exemplo,produzido tal como descrito na presente invenção) criadocontra um polipeptídeo pode ser unido a uma coluna e serutilizado para isolar o polipeptídeo recombinante. A Iise e ofracionamento de células que abrigam polipeptídeos antes dacromatografia de afinidade podem ser executados por métodospadrão (vide, por exemplo, Ausubel et al. , supra) . Uma vezisolada, a proteína recombinante pode, caso desejado, seradicionalmente purificada, por exemplo, por meio decromatografia líquida de alto desempenho (vide, por exemplo,Fisher, Laboratory Techniques In Biochemistry and MolecularBiology, eds., Work and Burdon, Elsevier, 1980).
EXEMPLOS
A retinite pigmentosa (RP) compreende um grupoheterogêneo de distúrbios retinais herdados que conduzem àmorte do fotorreceptor de haste. A morte dos fotorreceptoresresulta na cegueira noturna e na visão em túnel subseqüentedevido à perda progressiva da visão periférica nos pacientesque sofrem de retinite pigmentosa. Entre 20-25% dos pacientescom Retinite Pigmentosa Autossomal Dominante (RPAD) têm umamutação no gene da rodopsina, sendo que a mutação mais comumé o P23H. A mutação de P23H resulta em uma proteína deopsina mal-dobrada que não se associa com 11-cis-retinal. Aproteína mal-dobrada de P23H é retida dentro das células,onde forma agregados (Saliba et. al. 2002. JCS 115:2907-2918;Illing et. al. 2002. JBC 277: 34150-34160). Essecomportamento de agregação classifica algumas mutações da RP,incluindo o P23H, como os distúrbios de conformação deproteínas (PCD).
Embora os seguintes exemplos se refiram ao uso daproteína mutante de P23H para a identificação dos compostosque reduzem a agregação da proteína mal-dobrada e aumentam orendimento da proteína corretamente dobrada, a invenção não édesse modo limitada. Os compostos identificados como sendoúteis para aumentar o rendimento de P23H corretamente dobradoem uma célula são não somente úteis para o tratamento daretinite pigmentosa. Tais compostos estão propensos aaumentar o rendimento de qualquer proteína mal-dobrada e sãogeralmente úteis para o tratamento de virtualmente qualquerdistúrbio de conformação de proteínas.O resgate de proteínas mal-dobradas e agregadas temsido cada vez mais demonstrado com a utilização de protetoresfarmacológicos específicos. Os inibidores de enzimacompetitivos também têm sido utilizados como protetoresfarmacológicos, chamados algumas vezes de protetores químicosespecíficos em doenças que incluem Fabry, GMl-gangliosidose,Gaucher, Tay-sachs e RP 17. Para determinar se a inibição dosprocessos utilizados geralmente pelas células para odobramento, o transporte e a degradação de proteínas poderiaaumentar o rendimento de proteínas corretamente dobradas emuma célula, os compostos exemplificadores das seguintesclasses foram testados: inibidores proteassomais, inibidoresde autofagia, inibidores lisossomais, inibidores dotransporte de proteínas do RE ao Golgi, inibidores deprotetor de Hsp90, ativadores da resposta ao choque térmico,inibidores de glicosidase e inibidores de desacetilase dehistona.
Os estudos precedentes mostraram que o cromóforonativo de 11-cis-retinal promove quantitativamente odobramento in vivo e a estabilização da opsina de P23H, como9-cis-retinal e um isômero travado de sete anéis de 11-cis-retinal (Noorwez et. al. J. Biol Chem, 18 de abril de 2003;278(16) : 14442-50). Como a proteína de tipo selvagem, aproteína mutante de P23H resgatada formou pigmento, adquiriua glicosilação madura e foi transportada à superfície dacélula. No presente estudo, o efeito dos inibidores de váriasenzimas celulares e os caminhos que podem participar dodestino intracelular da opsina de P23H são analisados.
Exemplo 1: Uma linhagem de células que expressa a opsina deP23H foi utilizada para testar o dobramento da proteína.
As opsinas mutantes de P23H e do tipo selvagemforam expressas separadamente em linhagens de células HEK2 93estáveis indutíveis por tetraciclina na presença de 11-cis-retinal e de vários inibidores. Em vinte e oito horas, asproteínas dobradas foram purificadas por imunoafinidade eforam quantificadas pela espectroscopia visível de UV. Aquantidade total de proteína de opsina foi testada a 280 nm.
A quantidade de rodopsina presente em uma conformaçãobioquimicamente funcional foi testada a 500 nm. A microscopiade imunofluorescência também foi executada para determinar aposição celular das proteínas.
Exemplo 2: A inibição proteassomal alimentou a recuperação deP23H corretamente dobrado.
MG132, um inibidor reversível do proteassomo, foiadicionado ao meio de cultura da linhagem de células HEK293descrita no Exemplo 1 no momento da indução. A inibiçãoproteassomal resultou na recuperação de mais de 200-250% derodopsina tal como mostrado na Figura IA. Por outro lado, orendimento da rodopsina do tipo selvagem aumentou em somente35-40% (Figura 1B).
Exemplo 3: A inibição da autofagia aumentou a recuperação deP23H corretamente dobrado.
A autofagia foi bloqueada nas células HEK2 93 doExemplo 1 ao adicionar 3-metiladenina ao meio de cultura nomomento da indução. Isto conduz a um aumento de 350-400% narecuperação da rodopsina de P23H sendo que somente 50-60%mais da rodopsina do tipo selvagem foram recuperados (Figuras2A e 2B) .
Exemplo 4: A inibição lisossomal alimentou a recuperação deP23H corretamente dobrado.
O cloreto de amônio, um inibidor lisossomal, foiadicionado ao meio de cultura das células HEK293 do Exemplo 1no momento em que a síntese da proteína de P23H foi induzida.
De um modo interessante, a inibição lisossomal conduziu a umaumento de 30% na recuperação da rodopsina de P23H e em umaumento de 10% na recuperação da rodopsina do tipo selvagem(Figuras 3A e 3B).
Exemplo 5: 0 bloqueio do transporte do RE ao Golgi aumentou orendimento de P23H corretamente dobrado.
o transporte anterógrado das proteínas do ER ao
Golgi foi bloqueado nas células HEK2 93 do Exemplo 1 aoadicionar a brefeldina A no momento da indução. Essetratamento resultou em um aumento de duas vezes no rendimentoda rodopsina de P23H (Figura 4A). 0 aumento correspondente norendimento para a rodopsina do tipo selvagem foi deaproximadamente 60% (Figura 4B).
Exemplo 6: A inibição de Hsp90 aumentou a recuperação de P23Hcorretamente dobrado.
Um inibidor específico do protetor de Hsp90,Geldanamicina, foi adicionado ao meio de cultura de célulasHEK2 93 descritas no Exemplo 1 no momento da indução. Aadministração de Geldanamicina às células que expressam asopsinas do tipo selvagem e as opsinas de P23H conduz a umaumento de 60% na recuperação da rodopsina de P23H (Figura5A) . Houve somente um aumento insignificante na recuperaçãoda rodopsina do tipo selvagem (Figura 5B).
Exemplo 7: A ativação da resposta ao choque térmico alimenta orendimento de P23H corretamente dobrado.
A resposta ao choque térmico foi ativada nascélulas HEK2 93 do Exemplo 1 ao adicionar Celastrol no momentoda indução. Esse tratamento resultou em um aumento de 4 0% narodopsina de P23H (Figura 6A) . 0 celastrol teve um efeitomuito menor na recuperação da rodopsina do tipo selvagem (~5-7%) (Figura 6B).
Exemplo 8: 0 diidro-celastrol alimentou a recuperação dasrodopsinas do tipo selvagem e das rodopsinas de P23H.
o efeito de um diidro-celastrol, um derivado decelastrol, na recuperação da rodopsina de P23H foi testadonas células HEK293 do Exemplo 1. 0 diidro-celastrol aumentoua recuperação das rodopsinas do tipo selvagem e dasrodopsinas de P23H em aproximadamente 5-10% (Figuras 7A e7B) .
Exemplo 9: A inibição da desacetilase de histona aumentou arecuperação das rodopsinas do tipo selvagem e das rodopsinasde P23H.
Um inibidor de desacetilase de histona, Scriptaid,foi adicionado ao meio de cultura das células HEK293descritas no Exemplo 1 no momento da indução. O Scriptaidaumentou a recuperação das rodopsinas do tipo selvagem e dasrodopsinas de P23H em aproximadamente 30% (Figuras 8A e 8B) .Exemplo 10: 11-cis-retinal intensificou o resgate de opsinasna presença de inibidores.
Conforme mostrado na Tabela 1, cada um dosseguintes inibidores aumentou a recuperação das rodopsinasdobradas na presença de 11-cis-retinal: glicosidase 1 & 2(Castanoespermina), o transporte anterógrado do RE ao Golgi(Brefeldina A), Hsp90 (Geldanamicina), o proteassomo (MG132),autofagia (3-MA) e os lisossomos (cloreto de amônio). MG132 e3-metiladenina mostraram o efeito mais drástico narecuperação das rodopsinas dobradas.
Tabela 1: Efeito dos Inibidores na Recuperação da Rodopsina
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Para determinar se o efeito dos inibidores requer apresença do protetor especifico de 11-cis-retinal, cada umdos inibidores foi testado sozinho. MG132, que é um inibidorproteassomal, aumentou a recuperação da rodopsinacorretamente dobrada de P23H em 150% na ausência de 11-cis-retinal. 3-metiladenina, que é um inibidor autofágico,aumentou a recuperação da rodopsina corretamente dobrada deP23H em 200% na ausência de 11-cis-retinal. Rendimentosreduzidos de opsinas corretamente dobradas de P23H foramrecuperados quando as células cresceram na presença de outrosinibidores sem a adição de 11-cis-retinal.
A mutação de P23H desestabiliza a opsina e causa asua agregação dentro da célula. P23H incorretamente dobrado éincapaz de ligar seu ligando natural, 11-cis-retinal. Aadição de 11-cis-retinal ao meio de cultura de células queexpressam o mutante de P23H torna o ligando acessível aosintermediários de opsina de dobramento anterior e um aumentode 5-6 vezes no rendimento da rodopsina é conseguido. Esseefeito é específico para o mutante e nenhum efeito é vistoquando 11-cis-retinal é adicionado aos meios de células queexpressam a opsina do tipo selvagem. A combinação de 11-cis-retinal e de cada um entre um inibidor proteassomal, uminibidor de autofagia, um inibidor lisossomal, um inibidor dotransporte de proteínas do RE ao Golgi, um inibidor doprotetor de Hsp90, um ativador da resposta ao choque térmicoou um inibidor de desacetilase de histona aumentou arecuperação de P23H em uma conformação bioquimicamentefuncional.
Uma proteína de P23H que tem uma conformaçãobioquimicamente funcional exibe a atividade biológica daproteína do tipo selvagem em um ensaio funcional. Porexemplo, uma proteína de P23H, quando expressa tal comodescrito na presente invenção, pode ser ativada pela luz e seconverte em metarodopsina II. Essa conversão é monitoradaespectrofotometricamente. Além disso, uma proteína de P23H,quando expressa tal como descrito na presente invenção, podeser isolada como parte de uma membrana celular. Quando atransducina é adicionada à membrana isolada que contém P23H,a proteína de P23H pode ativar a transducina da proteína Gheterotrimérica e provocar a troca de GDP por GTP por umasubunidade de transducina. Em um modelo animal de retinitepigmentosa, espera-se que a administração das composições dainvenção (por exemplo, 11-cis-retinal em combinação comqualquer um ou mais de um inibidor proteassomal, um inibidorde autofagia, um inibidor lisossomal, um inibidor dotransporte de proteínas do RE ao Golgi, um inibidor doprotetor de Hsp90, um ativador da resposta ao choque térmico,um inibidor de glicosidase ou um inibidor de desacetilase dehistona) recupere ou elimine funcionalmente os sintomasassociados com o fenótipo da retinite pigmentosa.
Material e Métodos
Linhagens de Células e Condições de Cultura
As linhagens de células HEK293 que expressam aopsina de P23H do tipo selvagem estável foram geradas nosistema Flp-In T-Rex (Invitrogen). As células HEK293cresceram em meios com glicose elevada em DMEM suplementadoscom 10% de soro bovino fetal, solução . antibiótica-antimicótica, 5 Dg/ml de blasticidina e higromicina a 370C napresença de CO2 a 8%.
Indução da Produção de Opsina e Adição de Inibidores
As linhagens de células HEK2 93 que expressam aopsina foram colocadas para atingir a afluência e foraminduzidas com 1 Dg/ml de tetraciclina após uma mudança demeio. 10 DM de 11-cis-retinal foram adicionados imediatamenteapós a indução sob uma luz vermelha e os inibidores foramadicionados simultaneamente nas concentrações mostradas naTabela 2 (abaixo).
Tabela 2
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As placas foram incubadas por vinte e oito horas.10 DM de retinal foram aplicados vinte e quatro horas após aprimeira aplicação, sob luz vermelha.
Colheita de Células e Purificação de Rodopsina.
Vinte e oito horas após a indução e administraçãodo inibidor, as células HEK293 foram colhidas e a rodopsinafoi essencialmente purificada tal como descrito em Noorwezet. al. (J. Biol Chem, 16 de abril de 2004; 279 (16): 16278-84). As varreduras espectrofotométricas foram feitas em umespèctrofotômetro Varian Cary 50.
Outras Realizações
A partir da descrição acima, ficará evidente quevariações e modificações podem ser feitas na invençãodescrita na presente invenção para serem adotadas em váriosusos e condições. Tais realizações também estão dentro doâmbito das reivindicações seguintes.
A recitação de uma lista de elementos em qualquerdefinição de uma variável na presente invenção incluidefinições dessa variável como qualquer elemento oucombinação única (ou sub-combinação) dos elementoscorrelacionados. A recitação de uma realização na presenteinvenção inclui essa realização como qualquer realizaçãoúnica ou em combinação com quaisquer outras realizações oupartes da mesma.
Todas as patentes e publicações mencionadas nesterelatório descritivo são incorporadas na presente invenção atítulo de referência até a mesma extensão como se cadapatente e publicação independenteespecificamente e individualmente paratítulo de referência.
fosse indicadaser incorporada a

Claims (113)

1. USO DE UM COMPOSTO SELECIONADO DO GRUPO QUECONSISTE EM UM INIBIDOR PROTEASSOMAL, UM INIBIDOR DEAUTOFAGIA, UM INIBIDOR LISOSSOMAL, UM INIBIDOR DO TRANSPORTEDE PROTEÍNA DO ER AO GOLGI, UM INIBIDOR DE CHAPERONINA HSP90,UM ATIVADOR DA RESPOSTA A CHOQUE TÉRMICO, UM INIBIDOR DEGLICOSIDASE, E UM INIBIDOR DE HISTONA DEACETILASE,caracterizado por ser na fabricação de um medicamento paratratar um indivíduo que tem um distúrbio de conformação deproteína (PCD), tratamento este que consiste em administraruma quantidade suficiente do composto para tratar oindivíduo.
2. USO, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o PCD é um PCD ocularselecionado do grupo que consiste em retinite pigmentosa,degeneração macular relacionada com a idade, glaucoma,distrofias corneais, retinosquise, mal de Stargardt, gângliosdominantes autossomais, e distrofia macular de Best.
3. USO, de acordo com a reivindicação 2,caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente 11-cis-retinal, 9-cis-retinal, ou um isômero travado de seteanéis de 11-cis-retinal.
4. USO, de acordo com a reivindicação 2,caracterizado pelo fato de que o PCD ocular é retinitepigmentosa ou degeneração macular relacionada com a idade.
5. USO DE 11-CIS-RETINAL OU 9-CIS-RETINAL E UMCOMPOSTO SELECIONADO DO GRUPO QUE CONSISTE EM UM INIBIDORPROTEASSOMAL, UM INIBIDOR DE AUTOFAGIA, UM INIBIDORLISSOSOMAL, UM INIBIDOR DO TRANSPORTE DE PROTEÍNA DO ER AOGOLGI, UM INIBIDOR DE CHAPERONINA HSP90, UM ATIVADOR DERESPOSTA A CHOQUE TÉRMICO, UM INIBIDOR DE GLICOSIDASE, E UMINIBIDOR DE HISTONA DEACETILASE, caracterizado por ser nafabricação de um medicamento para tratar um indivíduodiagnosticado como tendo retinite pigmentosa, tratamento esteque consiste em administrar simultaneamente 11-cis-retinal ou-9-cis-retinal e o composto ou dentro de quatorze dias deintervalo entre si em quantidades suficientes tratar oindivíduo.
6. USO, de acordo com a reivindicação 5,caracterizado pelo fato de que 11-cis-retinal é um isômerotravado de sete anéis de 11-cis-retinal.
7. USO, de acordo com a reivindicação 1 ou 5,caracterizado pelo fato de que o indivíduo compreende umamutação que afeta a multiplicação de proteína.
8. USO, de acordo com a reivindicação 7,caracterizado pelo fato de que a mutação é em uma opsina.
9. USO, de acordo com a reivindicação 8,caracterizado pelo fato de que a opsina compreende umamutação de P23H.
10. USO, de acordo com a reivindicação 1 ou 5,caracterizado pelo fato de que o inibidor proteassomal éselecionado do grupo que consiste em MG132, lactocistina,clasto-lactocistin-beta-lactona, PSI, MG-115, MG-101, N-Acetil-Leu-Leu-Met-CHO, N-carbobenzoil-Gli-Pro-Fe-Leu-CHO, N-carbobenzoi1-Gli-Pro-Ala-Fe-CHO, N-carbobenzoil-Leu-Leu-Fe-CHO, e sais ou análogos destes.
11. USO, de acordo com a reivindicação 10,caracterizado pelo fato de que o inibidor proteassomal é uminibidor reversível de proteassoma.
12. USO, de acordo com a reivindicação 11,caracterizado pelo fato de que o inibidor proteassomalreversível é MG132.
13. USO, de acordo com a reivindicação 1 ou 5,caracterizado pelo fato de que o inibidor de autofagia éselecionado do grupo que consiste em 3-metil adenina, 3-metiladenosina, adenosina, ácido ocadaico, J^-mercaptopurinariboside (N6-MPR), 5-amino-4-imidazol carboxamida riboside(AICAR), bafilomicina Al, e os sais ou análogos destes.
14. USO, de acordo com a reivindicação 13,caracterizado pelo fato de que o inibidor de autofagia é a 3-metil adenina.
15. USO, de acordo com a reivindicação 1 ou 5,caracterizado pelo fato de que o inibidor lisossomal éselecionado do grupo que consiste em leupeptina, trans-epoxisaccinil-L-leucilamida-(4-guanidino)butano, éstermetílico de L-metionina, cloreto de amônio, metilamina,cloroquina, e os sais ou análogos destes.
16. USO, de acordo com a reivindicação 15,caracterizado pelo fato de que o inibidor lisossomal é ocloreto de amônio.
17. USO, de acordo com a reivindicação 1 ou 5,caracterizado pelo fato de que o inibidor do transporte daproteína do ER ao Golgi é brefeldin A e os sais ou análogosdestes.
18. USO, de acordo com a reivindicação 1 ou 5,caracterizado pelo fato de que o inibidor de chaperoninaHsp90 é selecionado do grupo que consiste em antibióticos debenzoquinona ansamicina, Geldanamicina, 17-alilaminol7-demetoxigeldanamicina, radicicol, novobiocina, e um inibidorde Hsp90 que se liga ao bolso de Hsp90 ATP/ADP, e os sais ouanálogos destes.
19. USO, de acordo com a reivindicação 18,caracterizado pelo fato de que o inibidor do patrocinador dHsp90 é a Geldanamicina.
20. USO, de acordo com a reivindicação 1 ou 5,caracterizado pelo fato de que um ativador de resposta achoque térmico é selecionado do grupo que consiste emCelastrol, éster metílico de celastrol, diacetato dediidrocelastrol, éster butílico de celastrol, ediidrocelastrol.
21. USO, de acordo com a reivindicação 20,caracterizado pelo fato de que o ativador de resposta achoque térmico é o Celastrol.
22. USO, de acordo com a reivindicação 20,caracterizado pelo fato de que o ativador de resposta dechoque térmico é o diidrocelastrol.
23. USO, de acordo com a reivindicação 1 ou 5, oinibidor de glicosidase é selecionado do grupo que consisteem cloridreto de australina, castanospermina, 6-Acetamido-6-deoxi-castanospermina, cloridreto de deoxifaconojirimicina(DFJ), deoxinojirimicina (DNJ), cloridreto dedeoxigalactonojirimicina (DGJ), cloridreto dedeoximannojirimicina (DMJ), cloridreto de 2R,5R-Bis(hidroximetil)-3R, 4R-diidroxipirrolidina (DMDP),cloridreto de 1,4-Dideoxi-1,4-imino-D-manitol, cloridreto de-3R,4R,5R,6R-3,4,5,6-Tetraidroxiazepano, 1,5-Dideoxi-l,5-imino-xilitol, Kifunensine, N-butildeoxinojirimicina (BDNJ),N-nonil DNJ (NDNJ), N-hexil DNJ (HDNJ), N-metildeoxinojirimicina (MDNJ), e os sais ou análogos destes.
24. USO, de acordo com a reivindicação 20,caracterizado pelo fato de que o inibidor de glicosidase é acastanospermina.
25. USO, de acordo com a reivindicação 1 ou 5, oinibidor de histona deacetilase é selecionado do grupo queconsiste em Scriptaid, APHA composto 8, Apicidina, butiratode sódio, (-)-Depudecina, Sirtinolf tricostatina A, e os saisou análogos destes.
26. USO, de acordo com a reivindicação 25,caracterizado pelo fato de que o inibidor de histonadeacetilase é Scriptaid.
27. USO, de acordo com a reivindicação 3 ou 5,caracterizado pelo fato de que o dito tratamento consiste emadministrar 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e o compostodentro de um intervalo de dez dias entre si.
28. USO, de acordo com a reivindicação 27,caracterizado pelo fato de que o dito tratamento consiste emadministrar 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e o compostodentro de um intervalo de cinco dias entre si.
29. USO, de acordo com a reivindicação 28,caracterizado pelo fato de que o dito tratamento consiste emadministrar 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e o compostodentro de um intervalo de vinte e quatro horas entre si.
30. USO, de acordo com a reivindicação 29,caracterizado pelo fato de que o dito tratamento consiste emadministrar 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e o compostosimultaneamente.
31. USO, de acordo com a reivindicação 30,caracterizado pelo fato de que o dito tratamento consiste emadministrar 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e o composto ao olho.
32. USO, de acordo com a reivindicação 31,caracterizado pelo fato de que a administração é intra-ocular.
33. USO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 30-32, caracterizado pelo fato de que cada umdentre 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e o composto éincorporado em uma composição que propicia a sua liberação alongo prazo.
34. USO, de acordo com a reivindicação 30,caracterizado pelo fato de que a composição é umamicroesfera, uma nanoesfera, ou uma nanoemulsão.
35. USO, de acordo com a reivindicação 34,caracterizado pelo fato de que a liberação a longo prazo éatravés de um dispositivo de aplicação da droga.
36. USO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 5-36, caracterizado pelo fato de que o ditotratamento compreende adicionalmente a administração de umsuplemento de vitamina A.
37. USO. de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o PCD é selecionado do grupoque consiste na deficiência de □□-antitripsina, fibrosecistica, mal de Huntington, mal de Parkinson, mal deAlzheimer, diabetes insipidus nefrogênico, câncer, e mal deJacob-Creutzfeld.
38. USO, de acordo com a reivindicação 37,caracterizado pelo fato de que o PCD é a fibrose cistica eque compreende adicionalmente a administração de um agenteselecionado do grupo que consiste em antibióticos,suplementos de vitaminas A, D, EeK, bronchodilatação dealbuterol, dornase, e ibuprofen.
39. USO, de acordo com a reivindicação 38,caracterizado pelo fato de que o PCD é o mal de Huntington eque compreende adicionalmente a administração de um agenteselecionado do grupo que consiste em haloperidol,fenotiazina, reserpina, tetrabenazina, amantadina, e co-enzima QlO.
40. USO, de acordo com a reivindicação 37,caracterizado pelo fato de que o PCD é o mal de Parkinson eque compreende adicionalmente a administração de um agenteselecionado do grupo que consiste em levodopa, amantadina,bromocriptina, pergolide, apomorfina, benserazide, lisuride,mesulergine, lisuride, lergotrile, memantine, metergoline,piribedil, tiramina, tirosina, fenilalanina, mesilato debromocriptina, mesilato e pergolide, anti-histamines,antidepressivos, e inibidores de monoamina oxidase.
41. USO, de acordo com a reivindicação 37,caracterizado pelo fato de que o PCD é o mal de Alzheimer, eque compreende adicionalmente a administração de um agenteselecionado do grupo que consiste em donepezil, rivastigmina,galantamina, e tacrina.
42. USO. de acordo com a reivindicação 37,caracterizado pelo fato de que o PCD é o diabetes insipidusnefrogênico e que compreende adicionalmente a administraçãode um agente selecionado do grupo que consiste emclorotiazida/hidroclorotiazida, amiloride, e indometacina.
43. USO, de acordo com a reivindicação 37,caracterizado pelo fato de que o PCD é o câncer, e quecompreende adicionalmente a administração de um agenteselecionado do grupo que consiste em acetato de abiraterone,altretamina, anidrovinblastine, auristatin, bexarotene,bicalutamide, BMS184476,2,3,4,5,6-pentafIuoro-N-(3-fluoro-4-metoxifenil)benzeno sulfonamida, bleomicina, N,N-dimetil-L-valil-N-metil-L-valil-L-prolil-l-Lprolina-t-butilamida,caquectina, cemadotin, clorambucil, ciclofosfamida, 3',4'-dideidro-41-deoxi-81-norvin- caleucoblastina, docetaxol,doxetaxel, ciclofosfamida, carboplatina, carmustine (BCNU),cisplatina, criptoficina, citarabine, dacarbazine (DTIC),dactinomicina, daunorubicina, dolastatina, doxorubicina(adriamicina), etoposide, 5-fluorouracil, finasteride,flutamide, hidroxiuréia e hidroxiuréiataxanes, ifosfamide,liarozole, lonidamine, lomustine (CCNU), mecloretamine(mostarda de nitrogênio), melfalan, isetionato de mivobulin,rizoxin, sertenef, estreptozocina, mitomicina, metotrexate,nilutamida, onapristone, paclitaxel, prednimustine,procarbazine, RPR109881, fosfato de estramustine, tamoxifen,tasonermina, taxol, tretinoina, vinblastine, vincristine,sulfato de vindesine, e vinflunina.
44 . MÉTODO PARA AUMENTAR A QUANTIDADE DE UMCONFORMAÇÃO BIOQUIMICAMENTE FUNCIONAL DE UMA PROTEÍNA EM UMACÉLULA, sendo que o método é caracterizado pelo fato decompreender:a) a colocação de uma célula em contato com umaquantidade eficaz de pelo menos um composto selecionado dogrupo que consiste em: um inibidor proteassomal, um inibidorde autofagia, um inibidor lisossomal, um inibidor dotransporte da proteína do ER ao Golgi, um inibidor dechaperonina Hsp90, um ativador da resposta a choque térmico,um inibidor de glicosidase, e um inibidor de histonadeacetilase; eb) a identificação de um aumento na quantidade deuma conformação bioquimicamente funcional da proteína.
45. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 44,caracterizado pelo fato de que o método compreendeadicionalmente a colocação da célula em contato com 11-cis-retinal, 9-cis-retinal, ou um isômero travado de sete anéisde 11-cis-retinal.
46. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 45,caracterizado pelo fato de que a célula compreende umaproteína mutante que forma a um agregado ou uma fibrila.
47. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 46,caracterizado pelo fato de que a célula compreende umaproteína de opsina mutante.
48. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 46,caracterizado pelo fato de que a célula compreende umaproteína de miocilina mutante.
49. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 46,caracterizado pelo fato de que a célula compreende umaproteína de lipofuscina mutante.
50. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 46,caracterizado pelo fato de que a célula compreende umaproteína de β-Η3 mutante.
51. MÉTODO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 44-50, caracterizado pelo fato de que a célulaé in vitro.
52. MÉTODO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 44-50, caracterizado pelo fato de que a célulaé in vivo.
53. MÉTODO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 44-52, caracterizado pelo fato de que a célulaé uma célula de mamífero.
54. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 53,caracterizado pelo fato de que a célula é uma célula humana.
55. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA 0 TRATAMENTO DEUM PCD OCULAR, caracterizada pelo fato de compreender umaquantidade eficaz de 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e umaquantidade eficaz de pelo menos um composto adicionalselecionado do grupo que consiste em um inibidor proteasomal,um inibidor de autofagia, um inibidor lisossomal, um inibidordo transporte de proteína do ER ao Golgi, um inibidor dechaperonina Hsp90, um ativador de resposta a choque térmico,um inibidor de glicosidase e um inibidor de histonadeacetilase em um excipiente farmaceuticamente aceitável.
56. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA 0 TRATAMENTO DERETINITE PIGMENTOSA, caracterizada pelo fato de compreenderuma quantidade eficaz de 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal euma quantidade eficaz de pelo menos um composto adicionalselecionado do grupo que consiste um inibidor proteassomal,um inibidor de autofagia, um inibidor lisossomal, um inibidordo transporte de proteína do ER ao Golgi, um inibidor dechaperonina Hsp90, um ativador da resposta a choque térmico,um inibidor de glicosidase e um inibidor de histonadeacetilase em um excipiente farmaceuticamente aceitável.
57. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 55ou 56, caracterizada pelo fato de que o inibidor proteassomalé selecionado do grupo que consiste em MG132, lactocistina,ciasto-lactocistin-beta-clasto-lactocistin-beta-lactona, PSI,MG-115, MG-101, N-Acetil-Leu-Leu-Met-CHO, N-carbobenzoil-Gli-Pro-Fe-Leu-CHO, N-carbobenzoil-Gli-Pro-Ala-Fe-CHO, N-carbobenzoil-Leu-Leu-Fe-CHO, e os sais ou análogos destes.
58. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 57,caracterizada pelo fato de que o inibidor proteassomal é uminibidor reversível de proteasoma.
59. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 55ou 56, caracterizada pelo fato de que o inibidor proteassomalreversível é MG132.
60. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 55ou 56, caracterizada pelo fato de que o inibidor de autofagiaé selecionado do grupo que consiste em 3-metil adenina, 3-metil adenosina, adenosina, ácido ocadaico, N^-mercaptopurinariboside (I\7*-MPR) , 5-amino-4-imidazol carboxamida riboside(AICAR), bafilomicin Al, e os sais ou análogos destes.
61. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 60,caracterizada pelo fato de que o inibidor de autofagia é a 3-metil adenina.
62. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 55ou 56, caracterizada pelo fato de que o inibidor lisossomal éselecionado do grupo que consiste em leupeptina, transp-epoxisaccinil-L-leucilamida-(4-guanidino)butano, éstermetílico de L-metionina, cloreto de amônio, metilamina,cloroquina, e os sais ou análogos destes.
63. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 62,caracterizada pelo fato de que o inibidor lisossomal é ocloreto de amônio.
64. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 55ou 56, caracterizado pelo fato de que o inibidor dotransporte de proteína do ER ao Golgi é brefeldin A e os saisou análogos deste.
65. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 55ou 56, caracterizada pelo fato de que o inibidor dechaperonina Hsp90 é selecionado do grupo que consiste emantibióticos consistindo de benzoquinona ansamicina,Geldanamicina, 17-alilamino-17-demetoxigeldanamicina,radicicol, novobiocina, e um inibidor de Hsp90 que se liga aobolso de Hsp90 ATP/ADP, e os sais ou análogos destes.
66. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 65,caracterizada pelo fato de que o inibidor de chaperoninaHsp90 é a Geldanamicina.
67. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 55ou 56, caracterizada pelo fato de que um ativador da respostaa choque térmico é selecionado do grupo que consiste emCelastrol, éster metiIico de celastrol, diacetato dediidrocelastrol, éster butílico de celastrol, e diidrocelastrol.
68. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 67,caracterizada pelo fato de que o ativador da resposta achoque térmico é o Celastrol.
69. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 67,caracterizada pelo fato de que o ativador da resposta achoque térmico é o diidrocelastrol.
70. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 55ou 56, caracterizada pelo fato de que o inibidor deglicosidase é selecionado do grupo que consiste em cloridretode australina, castanospermine, 6-Acetamido-6-deoxi-castanospermine, cloridreto de deoxifuconojirimicina (DFJ),deoxinojirimicina (DNJ), cloridreto dedeoxigalactonojirimicina (DGJ), cloridreto dedeoximannojirimicina (DMJ), cloridreto de 2R,5R-Bis(hidroximetil)-3R,4R-diidroxipirrolidina (DMDP),cloridreto de 1,4-Dideoxi-l,4-imino-D-manitol, cloridreto de3R, 4R, 5R, 6R-3,4,5,6-Tetraidroxiazepane, 1,5-Dideoxi-1,5-imino-xilitol, Kifunensine, N-butildeoxinojirimicina (BDNJ),N-nonil DNJ (NDNJ), N-hexil DNJ (HDNJ), N-metildeoxinojirimicina (MDNJ), e os sais ou análogos destes.
71. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 70,caracterizada pelo fato de que o inibidor de glicosidase écastanospermine.
72. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 55ou 56, caracterizada pelo fato de que o inibidor de histonadeacetilase é selecionado do grupo que consiste em Scriptaid,APHA composto 8, Apicidina, butirato de sódio, (-)-Depudecin,Sirtinol, Tricostatin A, e sais ou análogos destes.
73. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 72,caracterizada pelo fato de que o inibidor de histonadeacetilase é Scriptaid.
74. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 55-73, caracterizada pelo fato de que o PCDocular é selecionado do grupo que consiste em degeneraçãomacular relacionada com a idade, retinite pigmentosa,glaucoma, distrofia corneal, retinosquise, mal de Stargardt,gânglios dominantes autossomais, ou distrofia macular deBest.
75. KIT PARA 0 TRATAMENTO DE UM PCD OCULAR, sendoque o kit é caracterizado pelo fato de compreender:uma quantidade eficaz de 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal; euma quantidade eficaz de pelo menos um compostoadicional selecionado do grupo que consiste em um inibidorproteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidorlisossomal, um inibidor do transporte de proteína do ER aoGolgi, um inibidor de chaperonina Hsp90, um ativador daresposta a choque térmico, um inibidor de glicosidase e uminibidor de histona deacetilase.
76. KIT PARA. O TRATAMENTO DE RETINITE PIGMENTOSA,sendo que o kit é caracterizado pelo fato de compreender:uma quantidade eficaz de 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal; euma quantidade eficaz de pelo menos um compostoadicional selecionado do grupo que consiste em um inibidorproteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidorlisossomal, um inibidor do transporte de proteína do ER aoGolgi, um inibidor de chaperonina Hsp90, um ativador daresposta a choque térmico, um inibidor de glicosidase e uminibidor de histona deacetilase.
77. KIT, de acordo com a reivindicação 75 ou 76,caracterizado pelo fato de que o inibidor proteassomal éselecionado do grupo que consiste em MG132, lactocistina,clasto-lactocistin-beta-lactona, PSI, MG-115, MG-101, N-Acetil-Leu-Leu-Met-CHO, N-carbobenzoil-Gli-Pro-Fe-Leu-CHO, N-carbobenzoil-Gli-Pro-Ala-Fe-CHO, N-carbobenzoil-Leu-Leu-Fe-CHO, e os sais ou análogos destes.
78. KIT, de acordo com a reivindicação 75 ou 76,caracterizado pelo fato de que o inibidor proteassomal é uminibidor reversível de proteasoma.
79. KIT, de acordo com a reivindicação 78,caracterizado pelo fato de que o inibidor proteassomalreversível é MG132.
80. KIT, de acordo com a reivindicação 75 ou 76,caracterizado pelo fato de que o inibidor de autofagia éselecionado do grupo que consiste em 3-metil adenina, 3-metiladenosina, adenosina, ácido ocadaico, .N^-mercaptopurinariboside (N6-MPR), 5-amino-4-imidazol carboxamida riboside(AICAR), bafilomicin Al, e os sais ou análogos destes.
81. KIT, de acordo com a reivindicação 80,caracterizado pelo fato de que o inibidor de autofagia é a 3-metil adenina.
82. KIT, de acordo com a reivindicação 75 ou 76,caracterizado pelo fato de que o inibidor lisossomal éselecionado em que do grupo que consiste em leupeptina,trans-epoxisaccinil-L-leucilamida-(4-guanidino)butano, éstermetílico de L-metionina, cloreto de amônio, metilamina,cloroquina, e os sais ou os análogos destes.
83. KIT, de acordo com a reivindicação 82,caracterizado pelo fato de que o inibidor lisossomal é ocloreto de amônio.
84. KIT, de acordo com a reivindicação 75 ou 76,caracterizado pelo fato de que o inibidor do transporte deproteína do ER ao Golgi é o brefeldin A e os sais ou osanálogos deste.
85. KIT, de acordo com a reivindicação 75 ou 76,caracterizado pelo fato de que o inibidor de chaperoninaHsp90 é selecionado do grupo que consiste em antibióticos debenzoquinona ansamicina, Geldanamicina, 17-alilamino-17-demetoxigeldanamicina, radicicol, novobiocina, e um inibidorde Hsp90 que se liga ao bolso de Hsp90 ATP/ADP, e os sais ouanálogos destes.
86. KIT, de acordo com a reivindicação 85,caracterizado pelo fato de que o inibidor de chaperoninaHsp90 é a Geldanamicina.
87. KIT, de acordo com a reivindicação 75 ou 76,caracterizado pelo fato de que um ativador da resposta achoque térmico é selecionado do grupo que consiste emCelastrol, éster metílico de celastrol, diacetato dediidrocelastrol, éster butílico de celastrol, ediidrocelastrol.
88. KIT, de acordo com a reivindicação 87,caracterizado pelo fato de que o ativador da resposta achoque térmico é o Celastrol.
89. KIT, de acordo com a reivindicação 87,caracterizado pelo fato de que o ativador da resposta achoque térmico é o diidro-celastrol.
90. KIT, de acordo com a reivindicação 75 ou 76,caracterizado pelo fato de que o inibidor de glicosidase éselecionado do grupo que consiste em cloridreto deaustralina, castanospermine, 6-Acetamido-6-deoxi-castanospermine, cloridreto de deoxifuconojirimicina (DFJ),deoxinojirimicina (DNJ), cloridreto dedeoxigalactonojirimicina (DGJ), cloridreto dedeoximannojirimicina (DMJ), cloridreto de 2R,5R-Bis(hidroximetil)-3R,4R-diidroxipirrolidina (DMDP) , 1,4-Dideoxi-1,4-imino-D-manitol, cloridreto de 3R,4R,5R,6R--3,4,5,6-Tetrahidroxiazepane, 1,5-Dideoxi-l,5-imino-xilitol,Kifunensine, N-butildeoxinojirimicina (BDNJ), N-nonil DNJ(NDNJ), N-hexil DNJ (HDNJ), N-metildeoxinojirimicina (MDNJ),e os sais ou análogos destes.
91. KIT, de acordo com a reivindicação 90,caracterizado pelo fato de que o inibidor de glicosidase écastanospermine.
92. KIT, de acordo com a reivindicação 75 ou 76,caracterizado pelo fato de que o inibidor de histonadeacetilase é selecionado do grupo que consiste em Scriptaid,APHA composto 8, Apicidin, butirato de sódio, (-)-Depudecin,Sirtinol, Trichostatin A, e os sais ou análogos destes.
93. KIT, de acordo com a reivindicação 92,caracterizado pelo fato de que o inibidor de histonadeacetilase é Scriptaid.
94. MÉTODO PARA A IDENTIFICAÇÃO DE UM COMPOSTOÚTIL PARA O TRATAMENTO DE UM INDIVÍDUO QUE TEM UM PCD OCULAR,sendo que o método é caracterizado pelo fato de compreender:a) a colocação de uma célula in vitro que expressauma proteína erroneamente multiplicada em contato com umcomposto candidato; eb) a determinação do rendimento da proteínacorretamente multiplicada recuperada da célula em relação auma célula de controle, em que um aumento no rendimento daproteína corretamente multiplicada nas células contatadasidentifica um composto útil para o tratamento de um indivíduoque tem um PCD.
95. MÉTODO PARA A IDENTIFICAÇÃO DE UM COMPOSTOÚTIL PARA O TRATAMENTO DE UM INDIVÍDUO QUE TEM RETINITEPIGMENTOSA, sendo que o método é caracterizado pelo fato decompreender:a) a colocação de uma célula que expressa umaproteína erroneamente multiplicada in vitro em contato com(i) 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal, e(ii) um composto candidato; eb) a determinação do rendimento da proteínacorretamente multiplicada recuperada da célula em relação auma célula de controle, em que um aumento no rendimento daproteína corretamente multiplicada na célula contatadaidentifica um composto útil para o tratamento de um indivíduoque tem retinite pigmentosa.
96. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 94 ou-95, caracterizado pelo fato de que 11-cis-retinal é umisômero travado de sete anéis de 11-cis-retinal.
97. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 94 ou-95, caracterizado pelo fato de que a proteína erroneamentemultiplicada compreende uma mutação.
98. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 94 ou-95, caracterizado pelo fato de que a proteína erroneamentemultiplicada é uma opsina.
99. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 98,caracterizado pelo fato de que a opsina compreende umamutação de P23H.
100. USO DE UM INIBIDOR PROTEASSOMAL OU UM INIBIDORDE AUTOFAGIA, caracterizado por ser na preparação de ummedicamento para tratar um indivíduo que tem um distúrbio deconformação de proteína (PCD), tratamento este que consisteem administrar quantidades suficientes de um inibidorproteassomal ou um inibidor de autofagia para tratar umindivíduo.
101. USO DE UM INIBIDOR PROTEASSOMAL OU UM INIBIDORDE AUTOFAGIA, caracterizado por ser na preparação de ummedicamento para tratar um indivíduo que tem retinitepigmentosa, tratamento este que consiste em administrarquantidades suficientes de um inibidor proteassomal ou uminibidor de autofagia para tratar um indivíduo.
102. USO, de acordo com a reivindicação 100 ou 101,caracterizado pelo fato de que o inibidor proteassomal é uminibidor reversível de proteasoma.
103. USO, de acordo com a reivindicação 102,caracterizado pelo fato de que o inibidor proteassomalreversível é MG132.
104. USO, de acordo com a reivindicação 100 ou 101,caracterizado pelo fato de que o inibidor de autofagia éselecionado do grupo que consiste em 3-metil adenina, 3-metiladenosina, adenosina, ácido ocadaic, 2^-mercaptopurinariboside (N6-MPR), um análogo de adenosina aminotiolado, 5-amino-4-imidazol carboxamida riboside (AICAR), e bafilomicinAl.
105. USO, de acordo com a reivindicação 104,caracterizado pelo fato de que o inibidor de autofagia é a 3-metil adenina.
106. MÉTODO PARA A PRODUÇÃO DE UMA PROTEÍNARECOMBINANT EM UMA CONFORMAÇÃO BIOQUIMICAMENTE FUNCIONAL,sendo que o método é caracterizado pelo fato de compreender:a) a colocação de uma célula que expressa aproteína recombinante em contato com um composto selecionadodo grupo que consiste em um inibidor proteassomal, uminibidor de autofagia, um inibidor lisossomal, um inibidor dotransporte de proteína do ER ao Golgi, um inibidor dechaperonina Hsp90, um ativador da resposta a choque térmico,um inibidor de glicosidase e um inibidor de histonadeacetilase; eb) o isolamento da proteína recombinante da célula,em que o método produz uma proteína recombinante em umaconformação bioquimicamente funcional.
107. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 107,caracterizado pelo fato de compreender adicionalmente amedição da atividade biológica da proteína.
108. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 107,caracterizado pelo fato de que a atividade biológica édetectada utilizando um ensaio enzimático.
109. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 107,caracterizado pelo fato de que a atividade biológica édetectada espectrofotometricamente.
110. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 107,caracterizado pelo fato de compreender adicionalmentecontatando a célula com 11-cis-retinal.
111. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 107,caracterizado pelo fato de que a célula é uma célulaeucariótica.
112. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 111,caracterizado pelo fato de que a célula é uma célula delevedura.
113. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 111,caracterizado pelo fato de que a célula é uma célula demamífero.
BRPI0615962-1A 2005-07-27 2006-07-27 uso de um composto selecionado do grupo que consiste em um inibidor proteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidor lisossomal, um inibidor do trasporte de proteìna do er ao golgi, um inibidor de chaperonina hsp90, um ativador da resposta a choque térmico, um inibidor de glicosidade, e um inibidor de histona deacetilase, uso de 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e um composto selecionado do grupo que consiste em um inibidor proteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidor lissosomal, um inibidor do transporte de proteìna do er ao golgi, um inibidor de chaperonina hsp90, um ativador de resposta a choque térmico, um inibidor de glicosidase, e um inibidor de histona deacetilase, método para aumentar a quantidade de um conformação bioquimicamente funcional de uma proteìna em uma célula, composição farmacêutica para o tratamento de um pcd ocular, composição farmacêutica para o tratamento de retinite pigmentosa, kit para o tratamento de um pcd ocular, kit para o tratamento de retinite pigmentosa, método para a identificação de um composto útil para o tratamento de um indivìduo que tem um pcd ocular, método para a identificação de um composto útil para o tratamento de um indivìduo que tem retinite pigmentosa, uso de um inibidor proteassomal ou um inibidor de autofagia e método para a produção de uma proteìna recombinante em uma conformação bioquimicamente funcional BRPI0615962A2 (pt)

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WO (1) WO2007014327A2 (pt)

Families Citing this family (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2007241622A1 (en) 2006-04-24 2007-11-01 Academisch Medisch Centrum Improved treatment of cystic fibrosis
AU2007253900A1 (en) 2006-05-16 2007-11-29 Amicus Therapeutics, Inc. Assays for diagnosing and evaluating treatment options for fabry disease
GB0614947D0 (en) * 2006-07-27 2006-09-06 Isis Innovation Epitope reduction therapy
US20080051380A1 (en) 2006-08-25 2008-02-28 Auerbach Alan H Methods and compositions for treating cancer
US9999618B2 (en) 2007-04-26 2018-06-19 Amicus Therapeutics, Inc. Dosing regimens for the treatment of lysosomal storage diseases using pharmacological chaperones
AU2008245578A1 (en) * 2007-04-26 2008-11-06 Amicus Therapeutics, Inc. Dosing regimens for the treatment of lysosomal storage diseases using pharmacological chaperones
WO2009100037A1 (en) * 2008-02-01 2009-08-13 The Scripps Research Institute Methods for treating a condition characterized by dysfunction in protein homeostasis
WO2009114729A2 (en) * 2008-03-14 2009-09-17 Irm Llc Compounds, compositions and methods for treating lysosomal storage diseases and disorders
CA2753195C (en) 2009-02-23 2015-06-02 United Therapeutics Corporation Iminosugars and methods of treating viral diseases
KR20170117614A (ko) * 2009-02-24 2017-10-23 유나이티드 세러퓨틱스 코오포레이션 이미노슈가 및 아레나바이러스성 감염을 치료하는 방법
CN101869568A (zh) * 2009-04-27 2010-10-27 中国医学科学院基础医学研究所 细胞自噬(ⅱ型细胞凋亡)作用抑制剂的用途
US8426445B2 (en) 2009-06-12 2013-04-23 United Therapeutics Corporation Iminosugars and methods of treating bunyaviral and togaviral diseases
CA2772875A1 (en) * 2009-09-04 2011-03-10 United Therapeutics Corporation Methods of treating orthomyxoviral infections
CN105748476A (zh) * 2009-09-04 2016-07-13 联合治疗公司 亚氨基糖以及治疗丝状病毒性疾病的方法
ES2485623T3 (es) * 2009-09-04 2014-08-13 United Therapeutics Corporation Procedimiento para el tratamiento de infecciones por poxvirus
US10175251B2 (en) * 2010-04-13 2019-01-08 M-Lab Gmbh Diagnostic methods for glaucoma
US20110268722A1 (en) * 2010-04-22 2011-11-03 Siegelin Markus D Combination therapies with mitochondrial-targeted anti-tumor agents
KR101351181B1 (ko) 2010-05-11 2014-01-14 가천대학교 산학협력단 단핵식세포계 세포 내에서 ａｇｅ-알부민의 합성 저해 또는 분비 저해에 의한 세포사 유도 저해 방법
KR101249268B1 (ko) * 2010-08-03 2013-03-29 건국대학교 산학협력단 3-메틸아데닌을 유효성분으로 포함하는 난모세포의 감수분열 저해 및 동기화 조성물 및 그 방법
CA2808866A1 (en) * 2010-08-20 2012-02-23 The Hospital For Sick Children Compositions and methods for treatment of cystic fibrosis and diseases associated with aberrant protein cellular processing
WO2012087336A1 (en) * 2010-12-23 2012-06-28 Genentech, Inc. Autophagy inducer and inhibitor combination therapy for the treatment of neoplasms
WO2012162535A1 (en) * 2011-05-24 2012-11-29 Lixte Biotechnology, Inc. Use of phosphatase inhibitors or histone deacetylase inhibitors to treat diseases characterized by loss of protein function
US20150005254A1 (en) * 2011-06-27 2015-01-01 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Methods for treating ocular inflammatory disorders
CN102349926B (zh) * 2011-10-17 2014-08-13 成都科尔医药技术有限公司 丹皮酚及其衍生物和芍药苷组合的医药新用途
WO2013129315A1 (ja) 2012-02-27 2013-09-06 ロート製薬株式会社 網膜疾患の予防、改善、又は治療剤
FR2993461B1 (fr) * 2012-07-19 2014-08-08 Genethon Utilisation de composes modifiant l'epigenome pour le traitement des maladies genetiques musculaires liees a une anomalie de conformation proteique
CN102890156A (zh) * 2012-09-26 2013-01-23 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 一种人体液hsp70胶体金标检测试纸条及其制备方法
DE102013110608A1 (de) * 2013-09-26 2015-03-26 Florian Lang Substanz zur Hemmung von Gewebskalzifizierung, Gewebsfibrosierung und altersassoziierten Erkrankungen
CN113018437A (zh) 2014-04-04 2021-06-25 首尔大学校产学协力团 用于预防或治疗神经退行性疾病的基于石墨烯纳米结构体的药物组合物
WO2016162229A1 (en) 2015-04-10 2016-10-13 Capsugel Belgium N.V. Abiraterone acetate lipid formulations
CN105148276B (zh) * 2015-09-22 2018-11-20 深圳市第二人民医院 抑制Claudin-5降解阻止缺血性血脑屏障损伤的保护剂
CN105343107A (zh) * 2015-12-03 2016-02-24 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院 雷公藤红素在制备防治视网膜退行性改变相关疾病药物中的应用
US11446265B2 (en) 2016-06-15 2022-09-20 Targa Biomedical Reagents, compositions and methods for improving viability and function of cells, tissues and organs
CN109843327B (zh) 2016-07-07 2022-05-13 小利兰·斯坦福大学托管委员会 抗体佐剂缀合物
JP6752270B2 (ja) 2016-07-19 2020-09-09 アミカス セラピューティックス インコーポレイテッド Ｅｒｔナイーブ患者及びｅｒｔ経験患者におけるファブリー病の処置
AU2017302660B2 (en) 2016-07-29 2023-04-20 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating prostate cancer
WO2018089861A1 (en) * 2016-11-11 2018-05-17 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for the treatment of cancer and metabolic diseases
SG11201907490XA (en) * 2017-02-27 2019-09-27 Regeneron Pharma Non-human animal models of retinoschisis
TWI770184B (zh) 2017-06-01 2022-07-11 瑞士商愛杜西亞製藥有限公司 N-丁基脫氧半乳糖野尻黴素(N-butyldeoxygalactonojirimycin)之結晶型
CN108295084A (zh) * 2018-01-24 2018-07-20 深圳大学 清除海马神经元细胞中β-淀粉样蛋白的方法
CN110812483A (zh) * 2018-08-08 2020-02-21 中国科学院上海生命科学研究院 稳定细胞骨架系统在视网膜色素变性疾病治疗中的应用
JP2022525594A (ja) 2019-03-15 2022-05-18 ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド Ｈｅｒ２を標的とする免疫結合体
EP3981472A4 (en) * 2019-06-05 2023-05-03 University of Tsukuba NEUROLOGICAL FUNCTION REGULATOR
TW202126643A (zh) 2019-09-27 2021-07-16 日商武田藥品工業股份有限公司 雜環化合物
CN118251230A (zh) * 2021-09-13 2024-06-25 加利福尼亚大学董事会 用锌转运蛋白7抑制神经退行性变

Family Cites Families (101)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB890638A (en) * 1957-06-11 1962-03-07 Albert B Chatzinoff Compositions for combating retinitis pigmentosa
US3196078A (en) * 1962-01-30 1965-07-20 Ortho Pharma Corp Process for combating retinits pigmentosa
US3416530A (en) 1966-03-02 1968-12-17 Richard A. Ness Eyeball medication dispensing tablet
US3854480A (en) 1969-04-01 1974-12-17 Alza Corp Drug-delivery system
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US3828777A (en) 1971-11-08 1974-08-13 Alza Corp Microporous ocular device
US3832253A (en) 1973-03-21 1974-08-27 Baxter Laboratories Inc Method of making an inflatable balloon catheter
US4014335A (en) 1975-04-21 1977-03-29 Alza Corporation Ocular drug delivery device
US4263428A (en) 1978-03-24 1981-04-21 The Regents Of The University Of California Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same
US4300557A (en) 1980-01-07 1981-11-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Method for treating intraocular malignancies
DE3169595D1 (en) 1980-11-10 1985-05-02 Gersonde Klaus Method of preparing lipid vesicles by ultrasonic treatment, the use of this method and apparatus for its application
US4327725A (en) 1980-11-25 1982-05-04 Alza Corporation Osmotic device with hydrogel driving member
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
JPS58118008A (ja) 1982-01-06 1983-07-13 Nec Corp デ−タ処理装置
DE3374837D1 (en) 1982-02-17 1988-01-21 Ciba Geigy Ag Lipids in the aqueous phase
DE3218121A1 (de) 1982-05-14 1983-11-17 Leskovar, Peter, Dr.-Ing., 8000 München Arzneimittel zur tumorbehandlung
US4667014A (en) 1983-03-07 1987-05-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Nonapeptide and decapeptide analogs of LHRH, useful as LHRH antagonists
EP0102324A3 (de) 1982-07-29 1984-11-07 Ciba-Geigy Ag Lipide und Tenside in wässriger Phase
US4452775A (en) 1982-12-03 1984-06-05 Syntex (U.S.A.) Inc. Cholesterol matrix delivery system for sustained release of macromolecules
CA1200416A (en) 1983-05-13 1986-02-11 Societe Des Produits Nestle S.A. Food process
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
DE3483949D1 (de) 1983-09-26 1991-02-21 Udo Dr Med Ehrenfeld Mittel und erzeugnis fuer die diagnose und therapie von tumoren sowie zur behandlung von schwaechen der zelligen und humoralen immunabwehr.
US4615885A (en) 1983-11-01 1986-10-07 Terumo Kabushiki Kaisha Pharmaceutical composition containing urokinase
US5147647A (en) 1986-10-02 1992-09-15 Sohrab Darougar Ocular insert for the fornix
US5322691A (en) 1986-10-02 1994-06-21 Sohrab Darougar Ocular insert with anchoring protrusions
US5075109A (en) 1986-10-24 1991-12-24 Southern Research Institute Method of potentiating an immune response
US4792558A (en) * 1987-05-29 1988-12-20 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Castanospermine for inhibiting tumor metastasis
US4997652A (en) 1987-12-22 1991-03-05 Visionex Biodegradable ocular implants
US4853224A (en) 1987-12-22 1989-08-01 Visionex Biodegradable ocular implants
US4894388A (en) 1988-12-22 1990-01-16 Monsanto Company Glycosidase inhibitors and use thereof
DE3905050A1 (de) 1989-02-18 1990-08-30 Lohmann Therapie Syst Lts Therapeutisches system zur verzoegerten und gesteuerten transdermalen oder transmucosalen verabreichung von wirkstoffen (ii)
US4946450A (en) 1989-04-18 1990-08-07 Biosource Genetics Corporation Glucan/collagen therapeutic eye shields
US5103008A (en) 1989-08-17 1992-04-07 Monsanto Company Compound, N-butyl-deoxynojirimycin-6-phosphate
US5043273A (en) 1989-08-17 1991-08-27 Monsanto Company Phosphorylated glycosidase inhibitor prodrugs
US5164188A (en) 1989-11-22 1992-11-17 Visionex, Inc. Biodegradable ocular implants
JPH04167172A (ja) 1990-10-31 1992-06-15 Nec Corp ベクトルプロセッサ
US5290892A (en) 1990-11-07 1994-03-01 Nestle S.A. Flexible intraocular lenses made from high refractive index polymers
US5378475A (en) 1991-02-21 1995-01-03 University Of Kentucky Research Foundation Sustained release drug delivery devices
US5112607A (en) * 1991-06-05 1992-05-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Potentiation of immunotoxin action by Brefeldin A
US5770592A (en) 1991-11-22 1998-06-23 Alcon Laboratories, Inc. Prevention and treatment of ocular neovascularization using angiostatic steroids
US5679666A (en) 1991-11-22 1997-10-21 Alcon Laboratories, Inc. Prevention and treatment of ocular neovascularization by treatment with angiostatic steroids
US5178635A (en) 1992-05-04 1993-01-12 Allergan, Inc. Method for determining amount of medication in an implantable device
FR2690846B1 (fr) 1992-05-05 1995-07-07 Aiache Jean Marc Forme galenique pour administration oculaire et procede de preparation.
US5672659A (en) 1993-01-06 1997-09-30 Kinerton Limited Ionic molecular conjugates of biodegradable polyesters and bioactive polypeptides
WO1995003009A1 (en) 1993-07-22 1995-02-02 Oculex Pharmaceuticals, Inc. Method of treatment of macular degeneration
US5443505A (en) 1993-11-15 1995-08-22 Oculex Pharmaceuticals, Inc. Biocompatible ocular implants
US5516522A (en) 1994-03-14 1996-05-14 Board Of Supervisors Of Louisiana State University Biodegradable porous device for long-term drug delivery with constant rate release and method of making the same
WO1995024929A2 (en) 1994-03-15 1995-09-21 Brown University Research Foundation Polymeric gene delivery system
US5710165A (en) 1994-07-06 1998-01-20 Synthelabo Use of polyamine antagonists for the treatment of glaucoma
US5844102A (en) 1994-07-07 1998-12-01 University Of Maryland Baltimore County Glycohydrolase inhibitors, their preparation and use thereof
US5595760A (en) 1994-09-02 1997-01-21 Delab Sustained release of peptides from pharmaceutical compositions
AUPM897594A0 (en) 1994-10-25 1994-11-17 Daratech Pty Ltd Controlled release container
EP0788351B1 (en) 1994-11-10 2003-02-05 The University of Kentucky Research Foundation Implantable refillable controlled release device to deliver drugs directly to an internal portion of the body
US5725493A (en) 1994-12-12 1998-03-10 Avery; Robert Logan Intravitreal medicine delivery
US5869079A (en) 1995-06-02 1999-02-09 Oculex Pharmaceuticals, Inc. Formulation for controlled release of drugs by combining hydrophilic and hydrophobic agents
US5773019A (en) 1995-09-27 1998-06-30 The University Of Kentucky Research Foundation Implantable controlled release device to deliver drugs directly to an internal portion of the body
US5824073A (en) 1996-03-18 1998-10-20 Peyman; Gholam A. Macular indentor for use in the treatment of subretinal neovascular membranes
US5743274A (en) 1996-03-18 1998-04-28 Peyman; Gholam A. Macular bandage for use in the treatment of subretinal neovascular members
US5904144A (en) 1996-03-22 1999-05-18 Cytotherapeutics, Inc. Method for treating ophthalmic diseases
US6299895B1 (en) 1997-03-24 2001-10-09 Neurotech S.A. Device and method for treating ophthalmic diseases
JPH1036289A (ja) * 1996-07-24 1998-02-10 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd 神経細胞の変性または死滅抑制剤
US5880116A (en) * 1996-12-13 1999-03-09 Neurocal International Use of celastrol to treat alzheimer's disease
DE69827138T2 (de) 1997-08-11 2006-02-23 Allergan, Inc., Irvine Steriles Retinoid enthaltendes biodegradierbares Implantat mit verbesserter Biokompatibilität und Verfahren zu dessen Herstellung
US5902598A (en) 1997-08-28 1999-05-11 Control Delivery Systems, Inc. Sustained release drug delivery devices
US5968921A (en) * 1997-10-24 1999-10-19 Orgegon Health Sciences University Compositions and methods for promoting nerve regeneration
US20040234505A1 (en) * 1998-09-23 2004-11-25 Stuart Naylor Polynucleotide constructs and uses thereof
WO2000018390A1 (fr) * 1998-09-28 2000-04-06 Hsp Research Institute, Inc. Inducteurs d'expression de proteine de choc thermique
US6146366A (en) 1998-11-03 2000-11-14 Ras Holding Corp Device for the treatment of macular degeneration and other eye disorders
US6492333B1 (en) 1999-04-09 2002-12-10 Osteoscreen, Inc. Treatment of myeloma bone disease with proteasomal and NF-κB activity inhibitors
US6416777B1 (en) 1999-10-21 2002-07-09 Alcon Universal Ltd. Ophthalmic drug delivery device
US6331313B1 (en) 1999-10-22 2001-12-18 Oculex Pharmaceticals, Inc. Controlled-release biocompatible ocular drug delivery implant devices and methods
US6544957B2 (en) * 2000-01-04 2003-04-08 The Johns Hopkins University Methods and reagents for facilitating transcription
WO2001052830A2 (en) * 2000-01-20 2001-07-26 Washington University METHODS TO TREAT α-1-ANTITRYPSIN DEFICIENCY
AU2001247848A1 (en) 2000-03-31 2001-10-15 Michigan State University Process for the preparation of 1,5-dideoxy-1,5-imino hexitols from oximes or imines
US6375972B1 (en) 2000-04-26 2002-04-23 Control Delivery Systems, Inc. Sustained release drug delivery devices, methods of use, and methods of manufacturing thereof
EP1347741B1 (en) 2001-01-03 2009-01-21 Bausch & Lomb Incorporated Sustained release drug delivery devices with multiple agents
US20020183388A1 (en) * 2001-02-01 2002-12-05 Gudas Lorraine J. Use of retinoids plus histone deacetylase inhibitors to inhibit the growth of solid tumors
WO2002094259A1 (en) * 2001-05-03 2002-11-28 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Compounds that inhibit hsp90 and stimulate hsp70 and hsp40, useful in the prevention or treatment of diseases associated with protein aggregation and amyloid formation
US20040132825A1 (en) * 2002-03-04 2004-07-08 Bacopoulos Nicholas G. Methods of treating cancer with HDAC inhibitors
CN1711086A (zh) * 2002-11-12 2005-12-21 爱尔康公司 用于治疗眼的退化性疾病的组蛋白脱乙酰酶抑制剂
WO2004043352A2 (en) * 2002-11-12 2004-05-27 Alcon, Inc. Histone deacetylase inhibitors for the treatment of ocular neovascular or edematous disorders and diseases
US20080004311A1 (en) * 2002-11-12 2008-01-03 Alcon, Inc. Histone deacetylase inhibitors for treating degenerative diseases of the eye
WO2004050027A2 (en) * 2002-12-02 2004-06-17 Genvec, Inc. Materials and methods for treating ocular-related disorders
US20050048099A1 (en) 2003-01-09 2005-03-03 Allergan, Inc. Ocular implant made by a double extrusion process
US20040220267A1 (en) * 2003-02-07 2004-11-04 Devlin J. P. Derivatives of pentacyclic nortriterpene quinone methides as compounds useful in the treatment of inflammatory, neurodegenerative, and neoplastic diseases
EP2324823A3 (en) * 2003-03-14 2011-11-16 University of Washington Retinoid replacements and opsin agonists and methods for the use thereof
US7381440B2 (en) * 2003-06-06 2008-06-03 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Biological laser printing for tissue microdissection via indirect photon-biomaterial interactions
US7012063B2 (en) * 2003-06-13 2006-03-14 Children's Medical Center Corporation Reducing axon degeneration with proteasome inhibitors
CL2004001996A1 (es) 2003-08-08 2005-05-06 Eyetech Pharmaceuticals Inc Aptameros anti-vegf (factor de crecimiento endotelial vascular) con bloqueo nucleotidico 5'-5' o 3'-3' invertido, composicion que lo contiene, util para trastornos de neovascularizacion.
WO2005050170A2 (en) * 2003-11-17 2005-06-02 Auburn University Methods and compositions for inhibiting intracellular aggregate formation
US7718697B2 (en) * 2003-12-17 2010-05-18 Alcon, Inc. Method for treating glaucoma comprising administering α-lipoic acid
US20060121039A1 (en) * 2004-12-07 2006-06-08 Alcon, Inc. Use of agents that prevent the generation of amyloid-like proteins and/or drusen, and/or use of agents that promote sequestration and/or degradation of, and/or prevent the neurotoxic effects of such proteins in the treatment of macular degeneration
ES2311763T3 (es) * 2004-03-11 2009-02-16 Asan Laboratories Company (Cayman), Limited Uso de los inhibidores de la histona de acetilasa para incrementar la ganancia terapeutica en radioterapia y quimioterapia.
FR2868852B1 (fr) 2004-04-09 2006-06-30 Airbus France Sas Procede pour assurer la securite d'un aeronef volant horizontalement a faible vitesse
US8510225B2 (en) 2004-09-01 2013-08-13 Research In Motion Limited Split channel authenticity queries in multi-party dialog
WO2006078774A2 (en) * 2005-01-19 2006-07-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Regulation of autophagy and cell survival
US20100087474A1 (en) * 2005-04-27 2010-04-08 University Of Florida Materials and methods for enhanced degradation of mutant proteins associated with human disease
EP2069390A4 (en) * 2006-07-27 2009-12-30 Univ Florida OPSIN STABILIZING COMPOUNDS AND METHODS OF USE
EP2069391A4 (en) * 2006-07-27 2009-12-30 Univ Florida COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING OR PREVENTING EYE DRYING

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