BR112021001683A2

BR112021001683A2 - anticorpos anti-cxcr2 e usos dos mesmos

Info

Publication number: BR112021001683A2
Application number: BR112021001683-0A
Authority: BR
Inventors: Doris Shim Siew Chen; Lynn Dorothy Poulton; Adam Clarke; David Jose Simon Laine; Matthew Pollard; Bridget Ann Cooksey; Anthony Doyle; Jason William Gill
Original assignee: Cephalon, Inc.
Priority date: 2018-08-01
Filing date: 2019-07-31
Publication date: 2021-05-04
Also published as: US12018084B2; MX2021001305A; SG11202100663VA; EP3830124A1; CN112955463A; US20240301076A1; JP2021532789A; US11332534B2; IL280321A; US20220348671A1; CA3108071A1; AU2019312576A1; JP2024026724A; KR20210041586A; CN112955463B; WO2020028479A1; US20200040089A1; JP7473531B2

Abstract

São divulgadas neste documento moléculas de anticorpo humano que se ligam imunoespecificamente ao CXCR2 humano. As moléculas de anticorpo humano divulgadas são antagonistas potentes e seletivos das funções de CXCR2 e evitam o recrutamento de neutrófilos para os tecidos sem esgotar fortemente o número de neutrófilos circulantes. Composições farmacêuticas, moléculas de ácido nucleico, vetores, células e usos dos anticorpos divulgados também são fornecidos.

Description

“ANTICORPOS ANTI-CXCR2 E USOS DOS MESMOS”

REFERÊNCIA REMISSIVA A PEDIDOS RELACIONADOS

[0001] Este pedido reivindica o benefício da data de depósito do Pedido Provisório U.S. nº 62/713.095, depositado em 1 de agosto de 2018, cuja divulgação é incorporada por meio deste por referência em sua totalidade.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[0002] O pedido instantâneo contém uma Listagem de Sequências que foi depositada eletronicamente em formato ASCII e é incorporada por meio deste por referência em sua totalidade. A cópia de ASCII, criada em 30 de julho de 2019, é denominada 102085_005304_SL e tem 279.927 bytes.

CAMPO TÉCNICO

[0003] O presente pedido é dirigido a moléculas de anticorpos humanos que se ligam imunoespecificamente ao CXCR2 humano.

ESTADO DA TÉCNICA

[0004] Os neutrófilos são os leucócitos mais abundantes no sangue. São células efetoras importantes da imunidade inata, com papel primordial na eliminação de patógenos extracelulares. No entanto, se o recrutamento de neutrófilos para o tecido for inadequadamente controlado, a infiltração crônica e a ativação de neutrófilos podem resultar na liberação persistente de mediadores inflamatórios e proteinases que causam danos evidentes aos tecidos.

[0005] A migração e ativação de neutrófilos é moderada através da interação do receptor de quimiocina CXC 1 (CXCR1) e receptor de quimiocina CXC 2 (CXCR2) na membrana plasmática do neutrófilo com quimiocinas ELR + CXC (CXCL1, 2, 3, 5, 6, 7 e 8). O CXCR2 atua como um receptor de alta afinidade para todas as quimiocinas ELR + CXC e desempenha um papel fundamental na mobilização e recrutamento de neutrófilos e monócitos do sangue para o tecido. As quimiocinas CXCL6, 7 e 8 também interagem com o CXCR1, que modula a atividade de explosão respiratória e a liberação de protease dos neutrófilos, e que é fundamental para a imunidade a bactérias e fungos.

[0006] O aumento da contagem de neutrófilos no escarro foi associado a fenótipos associados ao aumento da gravidade da asma, insensibilidade aos corticosteroides e obstrução crônica do fluxo de ar. A neutrofilia das vias aéreas aumenta durante as exacerbações agudas da asma. A neutrofilia das vias aéreas também é uma característica de todos os fenótipos clínicos da doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), incluindo COPD com predominância de enfisema, COPD com exacerbações frequentes e COPD com evidência de alta atividade de eosinófilos. O grau de neutrofilia das vias aéreas também se correlaciona com a gravidade da doença e a taxa de declínio fisiológico. As proteinases de neutrófilos, especialmente a elastase de neutrófilos, estão implicadas em todas as características patológicas da COPD. As proteinases liberadas pelos neutrófilos também estão associadas ao desenvolvimento de enfisema, contribuem para a destruição da matriz extracelular e estão associadas à hipersecreção de muco. Essas associações sugerem que a infiltração de neutrófilos nas vias aéreas pode ter um papel crucial nos processos fisiopatológicos subjacentes à asma grave e COPD.

[0007] CXCL1, CXCL5 e CXCL8 são quimiocinas de ligação a CXCR2 que estão implicadas no recrutamento de neutrófilos. CXCL1, CXCL5 e CXCL8 são regulados positivamente na inflamação das vias aéreas crônica e elevados no escarro ou no material de biópsia brônquica de indivíduos com asma neutrofílica grave ou COPD. Antagonizar a ativação de quimiocinas de CXCR2 oferece uma estratégia terapêutica potencial, reduzindo o recrutamento de neutrófilos para os tecidos e patologias mediadas por neutrófilos associadas a essas doenças inflamatórias.

[0008] Os receptores de quimiocinas, entretanto, têm se mostrado alvos difíceis de antagonizar seletivamente. Apesar das dificuldades no desenvolvimento de compostos com uma especificidade de alvo desejável e atividade antagonista, vários antagonistas de CXCR2 de moléculas pequenas provaram ser eficazes em modelos animais de inflamação. Os ensaios clínicos em humanos de antagonistas de CXCR2 de molécula pequena em indivíduos com asma neutrofílica ou COPD não demonstraram ampla eficácia, embora os estudos de neutrofilia de expectoração induzida por ozônio e lipopolissacarídeo inalado em indivíduos humanos normais tenham demonstrado eficácia marcante. Apenas uma melhora modesta na função pulmonar basal (FEV 1) foi observada em pacientes com COPD que eram fumantes, quando comparados com ex-fumantes. Até o momento, todos os ensaios clínicos publicados usaram antagonistas do CXCR2 de moléculas pequenas. O mais estudado é a danirixina (GSK1325756), um antagonista de CXCR2 reversível e seletivo (IC 50 para ligação de CXCL8 = 12,5 nM), que também mostrou bloquear a regulação positiva de CD11b em neutrófilos. (Ver, por exemplo, Miller et al., BMC Pharmacol Toxicol 2015; 16: 18). Danirixina não conseguiu atingir os desfechos primários em um ensaio de Fase IIb para COPD. Outras moléculas seletivas de CXCR2 incluem SB-566933 (Lazaar et al., Br. J. Clin. Pharmacol. 2011; 72: 282- 293) e AZD5069, que é seletivo para CXCR2 (> 150 vezes menos potente nos receptores de CXCR1 e de CCR2b) e não tem efeito na expressão de CD11b induzida por C5a, LTB4 ou fMLP) (Nicolls et al., J. Pharmacol Exp. Ther. 2015; 353: 340-350). As moléculas que inibem quer CXCR2 quanto CXCR1 incluem navarixina (SCH 527123, MK-7123; Todd et al., Pulm Pharmacol Ther. Dezembro de 2016; 41: 34-39) e ladarixina (DF2156A; Hirose et al., J Genet Syndr Gene Ther 2013, S3). Essas moléculas estão sendo investigadas para várias indicações, incluindo COPD, asma e outras doenças inflamatórias do pulmão, câncer e muito mais.

[0009] Em alguns estudos, o uso de antagonistas de CXCR2 de moléculas pequenas resultou em uma redução indesejável acentuada dos neutrófilos circulantes (neutropenia), o que potencialmente limita a dose tolerável de tais agentes. A neutropenia pode ser o resultado do antagonista não ser completamente específico para o CXCR2 e/ou se o antagonista foi ativo em todos os ligantes de ligação do CXCR2. CXCL8 e quimiocinas CXC relacionadas, por exemplo, têm um papel significativo na mobilização de granulócitos maduros para o sangue periférico e, consequentemente, o forte antagonismo desses ligantes em CXCR2 pode impedir a migração normal de neutrófilos para o sangue. Por outro lado, o antagonismo preferencial da via a jusante envolvendo a sinalização do fluxo de cálcio após a ligação do ligante ao CXCR2 pode antagonizar os níveis indesejáveis de migração de neutrófilos para os pulmões, enquanto retém a capacidade desejável dos neutrófilos para serem mobilizados para o sangue.

SUMÁRIO

[0010] São divulgadas neste documento moléculas de anticorpo humano que se ligam imunoespecificamente ao CXCR2 humano. As moléculas de anticorpo humano divulgadas são antagonistas mais seletivos de CXCR2 do que os antagonistas de CXCR2 de moléculas pequenas atualmente descritos, antagonistas mais potentes de CXCL1 e ativação de CXCL5 de CXCR2 do que os antagonistas de anticorpos atualmente descritos de CXCR2, e antagonizam o recrutamento de neutrófilos em tecidos sem esgotar fortemente os números de neutrófilos circulantes. As moléculas de anticorpo humano podem compreender CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada de SEQ ID NO: 167 e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 da SEQ ID NO: 168 ou a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NO: 226 e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 da SEQ ID NO: 227, e inibem a ativação de CXCR2 humano por CXCL1 humano ou CXCL5 humano. Em certas modalidades, as moléculas de anticorpo humano divulgadas são capazes de inibir a ativação de CXCR2 por CXCL1 ou CXCL5 em um indivíduo sem induzir neutropenia prolongada severa.

[0011] As composições farmacêuticas que compreendem as moléculas de anticorpo humano também são fornecidas.

[0012] Também são divulgadas moléculas de ácido nucleico que codificam as moléculas de anticorpo humano, vetores que compreendem as moléculas de ácido nucleico e células transformadas para expressar as moléculas de anticorpo humano.

[0013] Métodos de prevenção ou tratamento de neutrofilia em um tecido periférico de um indivíduo, como neutrofilia das vias aéreas, também são divulgados neste documento. Também são divulgados neste documento métodos de redução de monócitos em um tecido periférico de um indivíduo. Também são divulgados métodos para reduzir a eosinofilia em um tecido periférico de um indivíduo.

[0014] Também são divulgados neste documento métodos de redução da inflamação das vias aéreas aguda, métodos de prevenção ou redução da inflamação das vias aéreas crônica, por exemplo, em bronquiectasia, métodos de redução da carga tumoral, métodos de interromper ou retardar o crescimento de um câncer, métodos de redução da dor crônica, métodos de prevenção ou redução da neuroinflamação, como na esclerose múltipla, métodos de redução da inflamação no fígado, métodos de redução da inflamação no pâncreas ou métodos de redução dos sintomas de diabetes tipo I. Os métodos compreendem a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz de qualquer uma das moléculas de anticorpo humano divulgadas ou qualquer uma das composições farmacêuticas divulgadas para tratar ou prevenir a condição divulgada no indivíduo.

[0015] Também são fornecidas as moléculas de anticorpos humanos ou composições farmacêuticas divulgadas para uso na prevenção ou tratamento de neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda. Também é fornecida o uso de moléculas de anticorpos humanos ou composições farmacêuticas na fabricação de um medicamento para a prevenção ou tratamento de neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0016] O sumário, bem como a seguinte descrição detalhada, é melhor compreendido quando lido em conjunto com os desenhos anexos. Com o propósito de ilustrar as moléculas, métodos e usos de anticorpos humanos divulgados, são mostrados nos desenhos modalidades exemplares das moléculas, métodos e usos de anticorpos humanos; no entanto, as moléculas de anticorpo humano, métodos e usos não estão limitados às modalidades específicas divulgadas. Nos desenhos:

[0017] A FIG. 1A e FIG. 1B ilustram os resultados de um estudo de inibição de resposta à dose exemplar de ativação induzida por CXCL8 de CXCR2 por anticorpos anti-CXCR2 divulgados exemplares conforme medido no ensaio baseado em células Tango™.

[0018] A FIG. 2 ilustra um gráfico de pontos que mostra a atividade de ligação de anticorpos anti-CXCR2 divulgados exemplares para CXCR2 humano nativo expresso por neutrófilos humanos e CXCR2 de cinomolgus nativo expresso por neutrófilos cinomólogos. A atividade de ligação do anticorpo foi quantificada como valores de intensidade de fluorescência médios (MFI) obtidos de 4 a 8 amostras independentes.

[0019] A FIG. 3 ilustra os resultados de um estudo de resposta à dose exemplar da inibição da ativação mediada por CXCL1 de CXCR2 por anticorpos anti-CXCR2 selecionados, conforme medido no ensaio baseado em células Tango™.

[0020] A FIG. 4A e FIG. 4B ilustra um alinhamento de sequência de aminoácidos de variantes de BKO-4A8 exemplares com potência semelhante ao BKO-4A8 parental e fornece uma sequência de consenso. A FIG. 4A = sequências de cadeia pesada variável (BKO-4A8 SEQ ID NO: 17; sequência de consenso SEQ ID NO: 167); FIG. 4B = sequências de cadeia leve variáveis (BKO-4A8 SEQ ID NO: 18; sequência de consenso SEQ ID NO: 168). O posicionamento das CDRs dentro dessas sequências está de acordo com Kabat. Consequentemente, o 53º resíduo de aminoácido no alinhamento na FIG. 4A é numerado 52a de acordo com Kabat (embora a variante G52aD tenha uma alteração de G para D no 53º resíduo, o resíduo é denominado 52a). Da mesma forma, na FIG. 4B, o 96º resíduo de aminoácido é denominado 95a. A FIG. 4A divulga SEQ ID NOs: 17, 53-75 e 167 e as sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 169 - 171, respectivamente, em ordem de aparecimento. A FIG. 4B divulga SEQ ID NOs: 18, 76 - 97 e 168 e as sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 172 - 174, respectivamente, em ordem de aparecimento.

[0021] A FIG. 5A e FIG. 5B ilustram um alinhamento de sequência de aminoácidos de variantes BKO-4A8 combinatórias exemplares (abreviadas "Var") com BKO-4A8 parental e fornece uma sequência de consenso com base nessas variantes. A FIG. 5A = sequências de cadeia pesada variável (BKO-4A8 SEQ ID NO: 17; sequência de consenso SEQ ID NO: 226); FIG. 5B = sequências de cadeia leve variáveis (BKO-4A8 SEQ ID NO: 18; sequência de consenso SEQ ID NO: 227). A FIG. 5A divulga SEQ ID NOs: 17, 98-108, 163-165, e 226 e as sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 228 - 230, respectivamente, em ordem de aparecimento. A FIG. 5B divulga SEQ ID NOs: 18, 109 - 110 e 227 e as sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 201 e 231 - 232, respectivamente, em ordem de aparecimento.

[0022] A FIG. 6A e FIG. 6B ilustram os resultados de um estudo de inibição de resposta à dose de (FIG. 6A) CXCL1- e (FIG. 6B) ativação de CXCR2 mediada por CXCL8 por anticorpos anti-CXCR2 selecionados BKO-4A8 e os anticorpos otimizados BKO-4A8-101c, BKO-4A8-103c, BKO-4A8-104c e BKO- 4A8-105c conforme medido no Tango ™ ensaio baseado em células.

[0023] A FIG. 7 ilustra os resultados de um estudo de inibição de resposta à dose de ativação mediada por quimiocina ELR + CXC de CXCR2 pelo anticorpo anti-CXCR2 divulgado BKO-4A8-101c conforme medido no ensaio baseado em células Tango™.

[0024] A FIG. 8 ilustra os resultados de um estudo de inibição de resposta à dose de ativação mediada por CXCL1-, CXCL5- e CXCL8 de CXCR2 pelo anticorpo anti-CXCR2 divulgado BKO-4A8-101c conforme medido em um ensaio de fluxo de cálcio.

[0025] A FIG. 9 ilustra a atividade de ligação de CXCR2 humano do anticorpo anti-CXCR2 divulgado BKO-4A8 formatado em regiões constantes de IgG humana diferentes, conforme determinado por análise de citometria de fluxo.

[0026] A FIG. 10 ilustra os resultados de um estudo de inibição de resposta à dose de ativação mediada por CXCL8 do anticorpo anti-CXCR2 divulgado BKO-4A8 formatado em regiões constantes de IgG humana diferentes, conforme medido no ensaio baseado em células Tango™.

[0027] A FIG. 11 ilustra resultados de estudos de ligação do anticorpo anti-CXCR2 BKO-4A8-101c com uma variedade de membros da família CXCR humanos. Os resultados demonstraram que BKO-4A8-101c apenas se ligou a CXCR2 entre os membros da família CXCR humanos.

[0028] A FIG. 12A e FIG. 12B ilustram um perfil de ligação exemplar de BKO-4A8-101c (histograma sombreado) a células hematopoiéticas de sangue periférico humano fenotipicamente definidas avaliadas por citometria de fluxo (N = 8), incorporando controles de isotipo (histograma não sombreado de IgG humana). A expressão foi alta em neutrófilos (FIG. 12A), enquanto os monócitos (FIG. 12B) expressou níveis intermediários de CXCR2.

[0029] A FIG. 13A, FIG. 13B e FIG. 13C ilustram os resultados de uma sensibilização subcutânea e desafio intranasal (no dia 14) usando antígeno de ácaro da poeira doméstica (HDM), que induziu características de inflamação alérgica aguda (semelhante à asma) nos pulmões de camundongos transgênicos CXCR2 humanos. Especificamente, os camundongos de desafio a seguir demonstraram uma inflamação pulmonar multifocal moderada a marcada com eosinófilos e hiperplasia de células caliciformes bronquiolar leve a moderada em comparação com camundongos de controle (nativo) que tinham pouca ou nenhuma inflamação. O tratamento com BKO-4A8-mIgG resultou em uma redução na gravidade da patologia, incluindo reduções significativas nos neutrófilos pulmonares (FIG. 13A) e contagens de eosinófilos pulmonares (FIG. 13B) e pontuação de densidade do muco (FIG. 13C) em comparação com o veículo.

[0030] A FIG. 14A e FIG. 14B ilustram os resultados da atividade anti-CXCR2 do anticorpo BKO-4A8-101c em um modelo de macaco cinomólogo de inflamação pulmonar aguda. A inalação de aerossol de lipopolissacarídeo (LPS) (no dia 0) induziu com sucesso características de inflamação neutrofílica aguda nos pulmões de macacos cinomólogos. O tratamento com anticorpo anti-

CXCR2 BKO-4A8-101c (1 mg/ kg) 1 hora antes do desafio com LPS no dia 0 resultou em uma redução significativa nas contagens de neutrófilos de lavagem bronco-alveolar 24 horas após o desafio com LPS. (FIG. 14A) As contagens de neutrófilos do sangue periférico não foram impactadas por três administrações repetidas de BKO-4A8-101c dadas em dois intervalos semanais nos Dias 0, 14 e 28. Mediana e intervalo do grupo mostrados, N = 4. (FIG. 14B)

[0031] A FIG. 15A, FIG. 15B e FIG. 15C mostram inibição seletiva da suprarregulação induzida por quimiocinas de CD11b em neutrófilos humanos enriquecidos. O anticorpo anti-CXCR2 inibiu significativamente a resposta a CXCL1 (p = 0,0002) (FIG. 15A) e CXCL5 (p = 0,0001) (FIG. 15B). O anticorpo anti-CXCR2 foi significativamente mais inibidor do que o antagonista 5 de molécula pequena nos mesmos ensaios (p <0,0058) (FIG. 15A-B). A suprarregulação de CD11b mediada por CXCL8 foi reduzida por um antagonista de CXCR1 (dados não mostrados), mas não por anticorpo anti-CXCR2 ou antagonista 5 (FIG. 15C).

DESCRIÇÃO DETALHADA DE MODALIDADES ILUSTRATIVAS

[0032] As moléculas, métodos e usos de anticorpos humanos divulgados podem ser compreendidos mais facilmente por referência à seguinte descrição detalhada tomada em conexão com as figuras anexas, que fazem parte desta divulgação. Deve ser entendido que as moléculas, métodos e usos de anticorpos humanos divulgados não estão limitados às moléculas, métodos e usos de anticorpos humanos específicos descritos e/ou mostrados neste documento, e que a terminologia usada neste documento é com o propósito de descrever modalidades a título de exemplo apenas e não se destinam a ser limitantes das moléculas de anticorpo humano reivindicadas, métodos e usos.

[0033] A menos que especificamente indicado de outra forma, qualquer descrição quanto a um possível mecanismo ou modo de ação ou razão para melhoria deve ser apenas ilustrativa, e as moléculas, métodos e usos de anticorpo humano divulgadas não devem ser restringidos pela exatidão ou incorreção de qualquer tal mecanismo sugerido ou modo de ação ou razão para melhoria.

[0034] Ao longo deste texto, as descrições referem-se a moléculas de anticorpos humanos e métodos de uso das referidas moléculas de anticorpos humanos. Quando a divulgação descreve ou reivindica uma característica ou modalidade associada com uma molécula de anticorpo humano, tal característica ou modalidade é igualmente aplicável aos métodos de uso da referida molécula de anticorpo humano. Da mesma forma, quando a divulgação descreve ou reivindica uma característica ou modalidade associada com um método de uso de uma molécula de anticorpo humano, tal característica ou modalidade é igualmente aplicável à molécula de anticorpo humano.

[0035] Quando uma faixa de valores numéricos é citada ou estabelecida neste documento, a faixa inclui os pontos finais dos mesmos e todos os números inteiros e frações individuais dentro da faixa, e também inclui cada uma das faixas mais estreitas ali formadas por todas as várias combinações possíveis desses pontos finais e internos inteiros e frações para formar subgrupos do grupo maior de valores dentro do intervalo declarado na mesma medida como se cada um desses intervalos mais estreitos fosse explicitamente citado. Quando uma faixa de valores numéricos é declarada neste documento como sendo maior do que um valor declarado, a faixa é, no entanto, finita e é limitada em sua extremidade superior por um valor que é operável dentro do contexto da invenção, conforme descrito neste documento. Quando uma faixa de valores numéricos é declarada neste documento como sendo menor do que um valor declarado, a faixa é, no entanto, limitada em sua extremidade inferior por um valor diferente de zero. Não se pretende que o escopo da invenção seja limitado aos valores específicos citados ao definir uma faixa. Todas as faixas são inclusivas e combináveis.

[0036] Deve ser apreciado que certas características das moléculas, métodos e usos de anticorpo humano divulgadas que são, para clareza, descritos neste documento no contexto de modalidades separadas,

também podem ser fornecidos em combinação em uma única modalidade. Por outro lado, várias características das moléculas, métodos e usos de anticorpo humano divulgadas que são, por brevidade, descritos no contexto de uma única modalidade, também podem ser fornecidos separadamente ou em qualquer sub combinação.

[0037] Vários termos relacionados a aspectos da descrição são usados ao longo do relatório descritivo e reivindicações. Esses termos devem ter seu significado comum na técnica, a menos que indicado de outra forma. Outros termos definidos especificamente devem ser interpretados de uma maneira consistente com as definições fornecidas neste documento.

[0038] Conforme usado neste documento, as formas singulares "um", "uma" e "o/a" incluem o plural.

[0039] O termo "cerca de" quando usado em referência a faixas numéricas, cortes ou valores específicos é usado para indicar que os valores citados podem variar em até 10% do valor listado. Como muitos dos valores numéricos usados neste documento são determinados experimentalmente, deve ser entendido por aqueles versados na técnica que tais determinações podem, e muitas vezes irão, variar entre diferentes experimentos. Os valores usados neste documento não devem ser considerados excessivamente limitantes em virtude desta variação inerente. Assim, o termo "cerca de" é usado para abranger variações de ± 10% ou menos, variações de ± 5% ou menos, variações de ± 1% ou menos, variações de ± 0,5% ou menos, ou variações de ± 0,1% ou menos do valor especificado. Quando os valores são expressos pelo uso do antecedente "cerca de", será entendido que o valor particular forma outra modalidade.

[0040] A referência a um valor numérico específico inclui pelo menos esse valor específico, a menos que o contexto dite claramente o contrário.

[0041] O termo "compreendendo" se destina a incluir exemplos abrangidos pelos termos "consistindo essencialmente em" e "consistindo em"; da mesma forma, o termo "consistindo essencialmente em" se destina a incluir exemplos abrangidos pelo termo "consistindo em".

[0042] Conforme usado neste documento, "em que a molécula de anticorpo inibe a ativação induzida por CXCL1 de CXCR2 ou ativação induzida por CXCL5 de CXCR2" e frases semelhantes referem-se à capacidade das moléculas de anticorpo humano divulgadas de reduzir a ativação de CXCR2 induzida por CXCL1 ou induzida por CXCL5, conforme determinado em um recrutamento de β-arrestina em um ensaio baseado em células Tango™ em cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 92%, cerca de 95%, cerca de 97% ou cerca de 100% em comparação com o nível de CXCL1- e/ ou ativação de CXCR2 induzida por CXCL5 na ausência das moléculas de anticorpo humano divulgadas e com um IC50 de 0,08 a 0,5 nM a uma concentração de 1,5-3,4 nM para CXCL1 e de 47,7 a 150 nM para CXCL5.

[0043] Conforme usado neste documento, "tratamento" e termos semelhantes referem-se a pelo menos um de redução da gravidade e/ ou frequência dos sintomas, eliminação dos sintomas, melhoria ou eliminação da causa subjacente dos sintomas, redução da frequência ou probabilidade dos sintomas e/ ou seus causa subjacente e/ ou melhoria ou reparação de danos causados, direta ou indiretamente, pelas condições ou distúrbios descritos. O tratamento também pode incluir o prolongamento da sobrevivência em comparação com a sobrevivência esperada de um indivíduo que não recebe as moléculas de anticorpo humano divulgadas ou composições farmacêuticas compreendendo as mesmas.

[0044] Conforme usado neste documento, "prevenção" e termos semelhantes se referem a medidas profiláticas ou de manutenção. Os indivíduos para recebimento de tais medidas profiláticas ou de manutenção incluem aqueles que estão em risco de ter as condições ou distúrbios descritos devido a, por exemplo, predisposição genética ou fatores ambientais, ou aqueles que foram tratados previamente por terem as condições ou distúrbios descritos e estão recebendo doses terapeuticamente eficazes das moléculas de anticorpo humano divulgadas ou composições farmacêuticas como um medicamento de manutenção (por exemplo, para manter baixos níveis de neutrófilos pulmonares).

[0045] Conforme usado neste documento, "administrar ao indivíduo" e termos semelhantes indicam um procedimento pelo qual as moléculas de anticorpo humano divulgadas ou composições farmacêuticas compreendendo as mesmas são injetadas em/ fornecidas a um paciente de modo que células, tecidos ou segmentos do corpo de alvo o indivíduo é contactado com as moléculas de anticorpo humano divulgadas.

[0046] A frase "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade das moléculas de anticorpo humano divulgadas ou composições farmacêuticas compreendendo as mesmas, conforme descrito neste documento, eficazes para atingir um resultado biológico ou terapêutico ou profilático específico, tal como, mas não limitado a, biológico ou terapêutico resultados divulgados, descritos ou exemplificados neste documento. A quantidade terapeuticamente eficaz pode variar de acordo com fatores como o estado de doença, idade, sexo e peso do indivíduo, e a capacidade da composição de causar uma resposta desejada em um indivíduo. Indicadores exemplares de uma quantidade de efeito terapêutico incluem, por exemplo, bem- estar melhorado do indivíduo, uma redução na neutrofilia em um ou mais tecidos periféricos, como uma redução na neutrofilia das vias aéreas, uma redução no número de monócitos em um ou mais tecidos periféricos, uma redução da inflamação aguda das vias aéreas, uma redução da inflamação crônica das vias aéreas, por exemplo em bronquiectasia, uma redução de uma carga tumoral, crescimento interrompido ou retardado de um câncer, uma redução na dor crônica, uma redução na neuroinflamação, como em esclerose, redução da inflamação no fígado, redução da inflamação no pâncreas ou diminuição dos sintomas do diabetes tipo I.

[0047] Conforme usado neste documento, "veículo farmaceuticamente aceitável" ou "excipiente farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer material que, quando combinado com um ingrediente ativo (tal como as moléculas de anticorpo humano divulgadas), permite que o ingrediente retenha a atividade biológica e não é reativo com o sistema imunológico do indivíduo. Exemplos incluem, mas não estão limitados a, qualquer um dos veículos farmacêuticos padrão, como solução salina tamponada com fosfato, água e vários tipos de agentes umectantes (como polissorbato 20, polissorbato 80 e sais de tris (hidroximetil) aminometano (" Tris ”), como os sais de cloridrato, acetato, maleato e lactato. Também podem ser adicionados como agentes estabilizadores os aminoácidos (como histidina, glutamina, glutamato, glicina, arginina), açúcares (como sacarose, glicose, trealose), quelantes (por exemplo, ETDA) e antioxidantes (por exemplo, cisteína reduzida). Os diluentes preferenciais para administração por aerossol ou parenteral são solução salina tamponada com fosfato ou solução salina normal (0,9%). As composições compreendendo tais veículos são formuladas por métodos convencionais bem conhecidos (ver, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990; and Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000). Em modalidades particulares, a composição farmacêutica é uma composição para administração parenteral.

[0048] O termo "indivíduo", conforme usado neste documento, pretende significar macacos, como macacos cinomólogos e humanos, e mais preferencialmente humanos. "Indivíduo" e "paciente" são usados indistintamente neste documento.

[0049] O termo "anticorpo" e termos semelhantes têm um sentido amplo e incluem moléculas de imunoglobulina, incluindo anticorpos monoclonais, fragmentos de anticorpos, anticorpos biespecíficos ou multiespecíficos, anticorpos diméricos, tetraméricos ou multiméricos e anticorpos de cadeia única. As imunoglobulinas podem ser atribuídas a cinco classes principais, nomeadamente IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, dependendo da sequência de aminoácidos do domínio constante da cadeia pesada. IgA e IgG são ainda subclassificados como os isotipos IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. As cadeias leves de anticorpos de qualquer espécie de vertebrado podem ser atribuídas a um de dois tipos claramente distintos, nomeadamente kappa (κ) e lambda (λ), com base nas sequências de aminoácidos dos seus domínios constantes.

[0050] "Fragmento de anticorpo" refere-se a uma porção de uma molécula de imunoglobulina que retém as propriedades de ligação ao antígeno específicas do anticorpo de comprimento total parental (isto é, fragmento de ligação ao antígeno do mesmo). Fragmentos de anticorpo exemplares compreendem regiões determinantes de complementaridade da cadeia pesada (HCDR) 1, 2 e 3 e regiões determinantes de complementaridade da cadeia leve (LCDR) 1, 2 e 3. Outros fragmentos de anticorpo exemplares compreendem uma região variável da cadeia pesada (VH) e uma região variável da cadeia leve (VL). Os fragmentos de anticorpo incluem, sem limitação: um fragmento Fab, um fragmento monovalente que consiste nos domínios VL, VH, constante leve (CL) e constante pesada 1 (CH1); um fragmento F(ab)2, um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfeto na região de dobradiça; e um fragmento Fv que consiste nos domínios VL e VH de um único braço de um anticorpo. Os domínios VH e VL podem ser projetados e ligados entre si por meio de um ligante sintético para formar vários tipos de projetos de anticorpos de cadeia única, onde os domínios VH/ VL se emparelham intramolecularmente, ou intermolecularmente nos casos em que os domínios VH e VL são expressos por anticorpos de cadeia única de construtos separados, para formar um sítio de ligação ao antígeno monovalente, tal como Fv de cadeia simples (scFv) ou diacorpo; descrito por exemplo em Int'l Pat. Pub. nº WO1998/ 044001, WO1988/ 001649, WO1994/ 013804 e WO1992/ 001047. Estes fragmentos de anticorpo são obtidos usando técnicas bem conhecidas dos versados na técnica, e os fragmentos são rastreados quanto à utilidade da mesma maneira que os anticorpos de comprimento total.

[0051] Cada região variável da cadeia pesada ou da cadeia leve do anticorpo consiste em quatro regiões de "estrutura" (FRs) que se alternam com três "Regiões Determinantes de Complementaridade" (CDRs), na sequência FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4 (de terminais amino a carboxi). As três CDRs no VH são identificadas como HCDR1, HCDR2, HCDR3 e as três CDRs no VL são identificadas como LCDR1, LCDR2, LCDR3, respectivamente. A localização e o tamanho das CDRs são definidos com base em regras que identificam regiões de variabilidade de sequência dentro das regiões variáveis de imunoglobulina (Wu and Kabat J Exp Med 132:211-50, 1970; Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991). Resíduos de aminoácidos dentro de uma região variável podem ser numerados de acordo com o esquema de Kabat (ibid.) "Estruturas" ou "regiões de estrutura" são as sequências restantes de uma região variável diferente daquelas definidas como CDRs.

[0052] "Anticorpo humano" refere-se a um anticorpo com regiões variáveis de cadeia pesada e leve em que tanto a estrutura quanto os sítios de ligação ao antígeno são derivados de sequências de origem humana. Se o anticorpo contém uma região constante, a região constante também é derivada de sequências de origem humana. Um anticorpo humano compreende regiões variáveis de cadeia pesada ou leve que são "derivadas de" sequências de origem humana se as regiões variáveis do anticorpo forem obtidas de um sistema que usa imunoglobulina de linha germinativa humana ou genes de imunoglobulina humana reorganizados. Tais sistemas incluem bibliotecas de genes de imunoglobulinas humanas exibidas em fagos e animais não humanos transgênicos, como camundongos ou ratos, portadores de loci de imunoglobulina humana. "Anticorpo humano" pode conter diferenças de aminoácidos em comparação com a linha germinal humana ou sequências de imunoglobulina reorganizadas devido, por exemplo, a mutações somáticas de ocorrência natural ou introdução intencional de substituições na estrutura ou sítios de ligação ao antígeno. Normalmente, um "anticorpo humano" é pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntico na sequência de aminoácidos a uma sequência de aminoácidos codificada por uma linha germinativa humana ou gene de imunoglobulina reorganizado. Em alguns casos, um "anticorpo humano" pode conter sequências estruturais de consenso derivadas de análises de sequência estrutural humana, por exemplo, conforme descrito em Knappik et al., J Mol Biol 296: 57-86, 2000, ou HCDR3 sintético incorporado no gene da imunoglobulina humana bibliotecas apresentadas no fago, como descrito em, por exemplo, Shi et al., J Mol Biol 397: 385-96, 2010 e Int'l Pat. Pub. nº WO2009/ 085462.

[0053] Os anticorpos humanos, embora derivados de sequências de imunoglobulinas humanas, podem ser gerados usando sistemas tais como exibição de fago incorporando CDRs sintéticas e/ ou estruturas sintéticas e/ ou podem ser submetidos a mutagênese in vitro para melhorar as propriedades do anticorpo nas regiões variáveis ou nas regiões constantes ou ambas, resultando em anticorpos que não existem naturalmente dentro do repertório da linha germinativa de anticorpos humanos in vivo.

[0054] "Anticorpo monoclonal" refere-se a uma população de moléculas de anticorpo de uma composição molecular substancialmente única. Uma composição de anticorpo monoclonal exibe uma especificidade de ligação única e afinidade para um epítopo particular, ou no caso de um anticorpo monoclonal biespecífico, uma especificidade de ligação dupla para dois epítopos distintos. O anticorpo monoclonal, portanto, refere-se a uma população de anticorpos com uma composição de aminoácidos única em cada cadeia pesada e leve, exceto por possíveis alterações bem conhecidas, como a remoção da lisina C-terminal da cadeia pesada do anticorpo e variações de processamento em que há clivagem incompleta da sequência líder N-terminal que é produzida na célula e normalmente clivada após a secreção. Por exemplo, a Patente U.S. 8241630 descreve um anticorpo comercial em que 5-15% da população de anticorpos retém a sequência líder. Os anticorpos monoclonais podem ter glicosilação heterogênea dentro da população de anticorpos. O anticorpo monoclonal pode ser monoespecífico ou multiespecífico, ou monovalente, bivalente ou multivalente. Um anticorpo biespecífico está incluído no termo anticorpo monoclonal.

[0055] "Epítopo" refere-se a uma porção de um antígeno ao qual um anticorpo se liga especificamente. Os epítopos geralmente consistem em agrupamentos de superfície quimicamente ativos (como polares, não polares ou hidrofóbicos) de porções, como aminoácidos ou cadeias laterais de polissacarídeos e podem ter características estruturais tridimensionais específicas, bem como características de carga específicas. Um epítopo pode ser composto de aminoácidos contíguos e/ou descontíguos que formam uma unidade espacial conformacional. Para um epítopo descontínuo, os aminoácidos de porções diferentes da sequência linear do antígeno vêm em estreita proximidade no espaço tridimensional por meio da dobra da molécula de proteína.

[0056] "Variante" refere-se a um polipeptídeo ou polinucleotídeo que difere de um polipeptídeo de referência ou um polinucleotídeo de referência por uma ou mais modificações, por exemplo, substituições, inserções ou deleções.

[0057] A frase "liga imunoespecificamente" refere-se à capacidade das moléculas de anticorpo humano divulgadas de se ligar preferencialmente ao seu alvo (CXCR2 no caso de "anticorpo anti-CXCR2) sem ligar preferencialmente outras moléculas da família CXCR em uma amostra contendo uma população mista de moléculas. As moléculas de anticorpo humano que se ligam imunoespecificamente ao CXCR2 são substancialmente livres de outros anticorpos com diferentes especificidades antigênicas (por exemplo, um anticorpo anti-CXCR2 é substancialmente livre de anticorpos que se ligam especificamente a outros antígenos além do CXCR2). As moléculas de anticorpo que se ligam imunoespecificamente ao CXCR2 humano, no entanto, podem ter reatividade cruzada com outros antígenos, como ortólogos de CXCR2 humano, incluindo Macaca fascicularis (macaco cinomólogos) CXCR2. As moléculas de anticorpo divulgadas neste documento são capazes de se ligar imunoespecificamente ao CXCR2 humano produzido naturalmente e ao CXCR2 humano que é produzido de forma recombinante em células de mamífero ou procarióticas.

[0058] Conforme usado neste documento, “neutropenia grave, sustentada” refere-se a uma contagem de neutrófilos de sangue periférico absoluto (ANC) menor que 0,4 x 109 células/ L durante mais de 2 semanas. Neutropenia grave, sustentada pode ser classificada da seguinte forma: • Grau 1 indica um evento leve (0,8 - 1,0 x 109 células/L) • Grau 2 indica um evento moderado (0,6 - 0,8 x 109 células/L) • Grau 3 indica um evento grave (0,4 - 0,6 x 109 células/ L) • Grau 4 indica um evento potencialmente fatal (menos de 0,4 x 109 células/L) (Veja Division of AIDS (DAIDS) National Institute of Allergy and Infectious Diseases National Institutes of Health US Department of Health and Human Services Table for Grading the Severity of Adult and Pediatric Adverse Events, Version 2.0 November 2014).

[0059] As seguintes abreviaturas são usadas neste documento: cadeia pesada variável (VH); cadeia leve variável (VL); região determinante de complementaridade (CDR); CDR de cadeia pesada (HCDR); CDR de cadeia leve (LCDR); Receptor de quimiocina CXC2 (CXCR2); e ligante de quimiocina 1, 2, 3, 5, 6, 7 e 8 (CXCL1, 2, 3, 5, 6, 7 e 8).

[0060] As moléculas de anticorpo divulgadas podem compreender uma ou mais substituições, deleções ou inserções, na estrutura e/ ou regiões constantes. Em algumas modalidades, uma molécula de anticorpo IgG4 pode compreender uma substituição S228P. S228 (numeração de resíduos de acordo com o índice EU) está localizado na região de dobradiça da molécula de anticorpo IgG4. A substituição da serina (“S”) por uma prolina (“P”) serve para estabilizar a dobradiça do IgG4 e prevenir a troca do braço Fab in vitro e in vivo. Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo podem compreender uma ou mais modificações que aumentam a meia-vida in vivo das moléculas de anticorpo.

Por exemplo, em certas modalidades, o anticorpo pode compreender uma substituição M252Y, uma substituição S254T e uma substituição T256E (coletivamente referida como a substituição "YTE"). M252, S254 e T256 (numeração de resíduos de acordo com o índice EU) estão localizados no domínio CH2 da cadeia pesada.

A substituição desses resíduos por tirosina ("Y"), treonina ("T") e glutamato ("E"), respectivamente, protege as moléculas de anticorpo da degradação lisossomal, aumentando assim a meia-vida sérica das moléculas de anticorpo.

Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo podem compreender uma deleção do resíduo de lisina C-terminal da cadeia pesada.

A deleção do resíduo de lisina C-terminal da cadeia pesada reduz a heterogeneidade das moléculas de anticorpo quando produzidas por células de mamíferos.

Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo podem compreender uma combinação de substituições, deleções ou inserções.

Por exemplo, em alguns aspectos, as moléculas de anticorpo divulgadas podem compreender uma substituição S228P e uma deleção de um resíduo de lisina C- terminal da cadeia pesada.

Sabe-se que as regiões constantes de anticorpos de diferentes classes estão envolvidas na modulação das funções efetoras do anticorpo, tais como citotoxicidade celular dependente do anticorpo (ADCC), citotoxicidade dependente do complemento (CDC) e fagocitose dependente do anticorpo (ADP). Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo divulgadas podem compreender uma ou mais substituições, deleções ou inserções nas regiões constantes que modulam uma ou mais funções efetoras do anticorpo, tais como redução ou ablação de uma ou mais funções efetoras.

Outras alterações que afetam as funções efetoras dos anticorpos e a meia-vida de circulação são conhecidas.

Ver, por exemplo, Saunders KO “Conceptual Approaches to Modulating Antibody Effector Functions and Circulation Half-Life” Front.

Immunol. (2019) 10: 1296. Moléculas de anticorpos humanos

[0061] São divulgadas neste documento moléculas de anticorpo humano que se ligam imunoespecificamente ao CXCR2 humano.

As moléculas de anticorpo humano podem compreender CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada de SEQ ID NO: 167 e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 da SEQ ID NO: 168 e inibem a ativação de CXCR2 por CXCL1 ou CXCL5. Conforme fornecido na Tabela 19 e FIG. 4A e 4B, SEQ ID NOS: 167 e 168 representam uma região variável de cadeia pesada de consenso e uma região variável de cadeia leve, respectivamente (SEQ ID NO: 167 = "VH de consenso " e SEQ ID NO: 168 = "VL de consenso"), das moléculas de anticorpo humano divulgadas.

As sequências de CDR de consenso são fornecidas como SEQ ID NOs: 169, 170, 171, 172, 173 e 174. A numeração nos nomes das sequências de CDR divulgadas, a menos que indicado de outra forma, é de acordo com Kabat.

Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo humano podem compreender: a CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SX1X2X3S em que: X1 é S, Q, H, L, W ou Y; X2 é T ou A; e X3 é M, Q, D, H ou W conforme fornecido na SEQ ID NO: 169; a CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de AX4SX5X6X7RX8TYYADSVKG em que: X4 é I ou H; X5 é G ou D; X6 é R, S ou Q; X7 é G ou D; e X8 é N ou S conforme fornecido na SEQ ID NO: 170; a CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de QX10X11X12 em que: X10 é M, A, Q ou K; X11 é G ou D; e X12 é Y, S ou K conforme fornecido na SEQ ID NO: 171; A CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de IGTSSDVGGYNYVS conforme fornecido em SEQ ID NO: 172; a CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de X13VX14X15X16PS em que: X13 é E ou D; X14 é N, D ou S; X15 é K, A, D ou H; e X 16 é R ou Q conforme fornecido na SEQ ID NO: 173; e o CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SSX17AGX18NX19FGX20 em que: X17 é Y ou A; X18 é N, A, S, K, L, W ou Y; X19 é N, Q, D, H, K, L ou Y; e X20 é V, A ou K conforme fornecido na SEQ ID NO:

174.

[0062] As moléculas de anticorpo humano podem compreender CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada de SEQ ID NO: 226 e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 da SEQ ID NO: 227. Conforme fornecido na Tabela 19 e FIG. 5A e 5B, SEQ ID NO: 226 e 227 representam uma região variável de cadeia pesada de consenso e uma região variável de cadeia leve, respectivamente (SEQ ID NO: 226 = "VH de consenso " e SEQ ID NO: 227 = "VL de consenso"), das moléculas de anticorpo humano divulgadas. As sequências de CDR de consenso são fornecidas como SEQ ID NOs: 228, 229, 230, 201, 231 e 232. Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo humano podem compreender: a CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SSTX21S em que X21 é M ou Q conforme fornecido em SEQ ID NO: 228; o CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de AISGX23GX24X25TYYADSVKG em que: X23 é R ou S; X24 é R ou G; e X25 é N ou S conforme fornecido na SEQ ID NO: 229; a CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de QX28GY em que: X28 é M, K ou A, conforme fornecido na SEQ ID NO: 230; A CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de IGTSSDVGGYNYVS conforme fornecido em SEQ ID NO: 201; a CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de EVX30KRPS em que: X30 é N ou S conforme fornecido na SEQ ID NO: 231; e a CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SSYAGX31NNFGV em que: X31 é N ou S conforme fornecido na SEQ ID NO:

232.

[0063] As moléculas de anticorpo humano divulgadas podem compreender uma combinação das CDRs da cadeia pesada e da cadeia leve fornecidas na Tabela 1. Em algumas modalidades, por exemplo, a molécula de anticorpo humano pode compreender uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 175-185, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 186-192, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 194-200, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 201, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 202-209, e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 210-225. Tabela 1. Sequências de CDR de cadeia pesada e de cadeia leve

Cadeia de anticorpo com substituição (ões) identificada (s) CDR1 CDR2 CDR3 pela posição de Kabat SEQ ID NO:

Regiões Variáveis de HC 4A8 VH S32Q SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 53 176 186 194

4A8 VH S32H SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 54 177 186 194

4A8 VH S32L SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 55 178 186 194

4A8 VH S32W SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 56 179 186 194

4A8 VH S32Y SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 57 180 186 194

4A8 VH T33A SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 58 181 186 194

4A8 VH M34Q SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 59 182 186 194

4A8 VH M34D SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 60 183 186 194

4A8 VH M34H SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 61 184 186 194

4A8 VH M34W SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 62 185 186 194

4A8 VH I51H SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 63 175 187 194

4A8 VH G52aD SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 64 175 188 194

4A8 VH R53S SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 65 175 189 194

4A8 VH R53Q SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 66 175 190 194

4A8 VH G54D SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 67 175 191 194

4A8 VH N56S SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 68 175 192 194

4A8 VH M96A SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 70 175 186 195

4A8 VH M96Q SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 71 175 186 196

4A8 VH M96K SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 72 175 186 197

4A8 VH G101D SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 73 175 186 198

4A8 VH Y102S SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 74 175 186 199

4A8 VH Y102K SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 75 175 186 200

4A8 VH M34Q, N56S SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 98) 182 192 194

4A8 VH M34Q, A40P, SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: N56S 182 192 194 (SEQ ID NO: 99) 4A8 VH M34Q, A40P, SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: N56S, R75K 182 192 194 (SEQ ID NO: 100) 4A8 VH M34Q, A40P, SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: N56S, M96K 182 192 197 (SEQ ID NO: 101)

4A8 VH M34Q, A40P, SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: N56S, R75K, M96K 182 192 197 (SEQ ID NO: 102)

4A8 VH M34Q, A40P, SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: N56S, R75K, I94K, 182 192 197 M96K (SEQ ID NO: 103) 4A8 VH M34Q, A40P, SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: N56S, I94K, M96K 182 192 197 (SEQ ID NO: 104)

4A8 VH M34Q, N56S, SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: M96K 182 192 197 (SEQ ID NO: 105) 4A8 VH M34Q, N56S, SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: R75K, M96K 182 192 197 (SEQ ID NO: 106)

4A8 VH I94K, M96K SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 107) 175 186 197 4A8 VH M34Q, A40P, SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: N56S, R75K, M96A 182 192 195 (SEQ ID NO: 108)

Regiões Variáveis LC 4A8 VL E50D SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 76 201 203 210

4A8 VL N52D SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 77 201 204 210

4A8 VL N52S SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 78 201 205 210

4A8 VL K53A SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 79 201 206 210

4A8 VL K53D SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 80 201 207 210

4A8 VL K53H SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 81 201 208 210

4A8 VL R54Q SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 82 201 209 210

4A8 VL Y91A SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 83 201 202 211

4A8 VL N94A SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 84 201 202 212

4A8 VL N94S SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 85 201 202 213

4A8 VL N94K SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 86 201 202 214

4A8 VL N94L SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 87 201 202 215

4A8 VL N94W SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 88 201 202 216

4A8 VL N94Y SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 89 201 202 217

4A8 VL N95aQ SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 90 201 202 218 4A8 VL N95aD SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 91 201 202 219 4A8 VL N95aH SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 92 201 202 220 4A8 VL N95aK SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 93 201 202 221 4A8 VL N95aL SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 94 201 202 222 4A8 VL N95aY SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 95 201 202 223 4A8 VL V97A SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 96 201 202 224 4A8 VL V97K SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 97 201 202 225 4A8 VL N52S, N94S SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 109) 201 205 213 4A8 VL D41G, N52S, SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: N94S 201 205 213 (SEQ ID NO: 110) Posições de resíduos de substituições definidas de acordo com Kabat.

[0064] Em alguns aspectos, a molécula de anticorpo humano pode compreender: uma cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de: SEQ ID NO: 176, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 194, respectivamente;

SEQ ID NO: 178, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 181, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 182, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 183, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 184, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 185, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 187 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 188 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 190 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 192 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 195, respectivamente;

SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 196, respectivamente; SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 197, respectivamente; SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 199, respectivamente; ou SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 200, respectivamente; e uma cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 210, respectivamente.

[0065] Em alguns aspectos, a molécula de anticorpo humano pode compreender: uma cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, e uma cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de: SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, e SEQ ID NO: 210, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 204, e SEQ ID NO: 210, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 205, e SEQ ID NO: 210, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 206, e SEQ ID NO: 210, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 207, e SEQ ID NO: 210, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 208 e SEQ ID NO: 210, respectivamente;

SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 209, e SEQ ID NO: 210, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 211, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 212, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 213, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 214, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 215, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 216, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 217, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 218, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 219, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 220, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 221, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 222, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 223, respectivamente; SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 224, respectivamente; ou

SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 e SEQ ID NO: 225, respectivamente.

[0066] Em alguns aspectos, a molécula de anticorpo humano pode compreender: uma cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de: SEQ ID NO: 182, SEQ ID NO: 192 e SEQ ID NO: 194, respectivamente; SEQ ID NO: 182, SEQ ID NO: 192 e SEQ ID NO: 197, respectivamente; SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 186 e SEQ ID NO: 197, respectivamente; ou SEQ ID NO: 182, SEQ ID NO: 192 e SEQ ID NO: 195, respectivamente; e uma cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 205, e SEQ ID NO: 213, respectivamente.

[0067] As moléculas de anticorpo humano podem compreender a cadeia pesada CDR1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, a CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 192, a CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 195, a CDR1 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 201, a CDR2 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 205, e a CDR3 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 213.

[0068] Conforme fornecido na Tabela 19 e FIG. 4A e 4B, SEQ ID NO: 167 e 168 representam uma região variável de cadeia pesada de consenso e uma região variável de cadeia leve, respectivamente (SEQ ID NO: 167 = "VH de consenso " e SEQ ID NO: 168 = "VL de consenso"), das moléculas de anticorpo humano divulgadas. Assim, as moléculas de anticorpo humano divulgadas podem compreender a região variável da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSX1X2X3SWVRQAPGKGLEWVS AX4SX5X6X7RX8TYYADSVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAX9 QX10X11X12WGQGILVTVSS em que: X1 é S, Q, H, L, W ou Y; X2 é T ou A; X3 é M, Q, D, H ou W; X4 é I ou H; X5 é G ou D; X6 é R, S ou Q; X7 é G ou D; X8 é N ou S; X9 é I ou K; X10 é M, A, Q ou K; X11 é G ou D; e X12 é Y, S ou K conforme fornecido na SEQ ID NO: 167 e a região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSDVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYX1 3VX14X15X16PSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSX17AGX18NX 19FGX20FGGGTKLTVL em que: X13 é E ou D; X14 é N, D ou S; X15 é K, A, D ou H; X16 é R ou Q; X17 é Y ou A; X18 é N, A, S, K, L, W ou Y; X19 é N, Q, D, H, K, L ou Y; e X20 é V, A ou K conforme fornecido na SEQ ID NO: 168. Os resíduos sublinhados representam as CDRs de consenso conforme divulgado acima.

[0069] As moléculas de anticorpo humano podem compreender a região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSSTX21SWVRQX22PGKGLEWVS AISGX23GX24X25TYYADSVKGRFTISRDNSX26NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAX 27QX28GYWGQGILVTVSS em que: X21 é M ou Q; X22 é A ou P; X23 é R ou S; X24 é R ou G; X25 é N ou S; X26 é R ou K; X27 é I ou K; e X28 é M, K ou A conforme fornecido na SEQ ID NO: 226 e a região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSDVGGYNYVSWYQQHPX29KAPKLMIY EVX30KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGX31NNFG VFGGGTKLTVL em que: X29 é D ou G; X30 é N ou S; e X31 é N ou S conforme fornecido na SEQ ID NO: 227. Os resíduos sublinhados representam as CDRs de consenso conforme divulgado acima.

[0070] As moléculas de anticorpo humano podem compreender:

a) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; b) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; c) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 100 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; d) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 101 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; e) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 102 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; f) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 103 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; g) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 104 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; h) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 105 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; i) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 106 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; j) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 107 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110;

k) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 108 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; l) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 162 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; m) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 163 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; n) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 164 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; o) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 165 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; ou p) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 166 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110.

[0071] Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo humano compreendem: a) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 108 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; b) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 162 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; c) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 163 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110;

d) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 164 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; e) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 165 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; ou f) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 166 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110.

[0072] As moléculas de anticorpo humano podem compreender a região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 108 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110.

[0073] As moléculas de anticorpo humano divulgadas podem compreender uma região constante de cadeia pesada de IgG1, IgG2 ou IgG4 humana. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo humano compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1 humana. As regiões constantes de cadeia pesada de IgG1 humana adequadas incluem, por exemplo, a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 122 ou 124. Em alguns aspectos, a região constante da cadeia pesada de IgG1 humana compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 122. Em alguns aspectos, a região constante da cadeia pesada de IgG1 humana compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 124. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo humano compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG2 humana. Em alguns aspectos, a região constante da cadeia pesada de IgG2 humana compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 120. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo humano compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG4 humana. As regiões constantes de cadeia pesada de IgG4 humana adequadas incluem, por exemplo, a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 116 ou 118. Em algumas modalidades, a região constante da cadeia pesada de IgG4 humana compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 116. Em alguns aspectos, a região constante da cadeia pesada de IgG4 humana compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 118. Em algumas modalidades, a região constante da cadeia pesada de IgG4 humana compreende uma substituição de S228P. Em algumas modalidades, a região constante da cadeia pesada de IgG4 humana compreende substituições M252Y, S254T e T256E. Em algumas modalidades, a região constante de IgG4 compreende a deleção do resíduo de lisina do terminal carboxila em relação à IgG4 de tipo selvagem.

[0074] As moléculas de anticorpo humano podem compreender uma região constante da cadeia leve lambda (λ) humana ou uma região constante da cadeia leve kappa (κ) humana. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo humano compreende uma região constante de cadeia leve lambda II (λ2) humana.

[0075] As moléculas de anticorpo humano podem compreender uma região constante da cadeia pesada de IgG1 humana e uma região constante da cadeia leve de lambda II humana. As moléculas de anticorpo humano podem compreender uma região constante da cadeia pesada de IgG2 humana e uma região constante da cadeia leve de lambda II humana. As moléculas de anticorpo humano podem compreender uma região constante da cadeia pesada de IgG4 humana e uma região constante da cadeia leve de lambda II humana.

[0076] As moléculas de anticorpo humano podem ser um anticorpo de comprimento total ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Os fragmentos de ligação ao antígeno adequados incluem, por exemplo, um fragmento Fab, um fragmento F(ab)2 ou um anticorpo de cadeia única. As moléculas de anticorpo humano divulgadas antagonizam seletivamente o CXCR2 humano, inibindo assim a ativação de CXCR2 induzida por CXCL1 ou CXCL5. As moléculas de anticorpo humano divulgadas também podem inibir parcialmente a ativação induzida por CXCL8 de CXCR2. As moléculas de anticorpo humano divulgadas também podem exibir uma ou mais das seguintes propriedades: a) inibir o fluxo de cálcio induzido por CXCL1 em uma linhagem celular otimizada de cálcio do receptor de quimiocina CXCR2 humano HTS002C - CHEMISCREEN™ com um IC50 de 0,8 a 2,4 a uma concentração de CXCL1 de 1,5 a 3,4 nM; b) não inibe substancialmente o fluxo de cálcio induzido por CXCL8 em uma linhagem celular otimizada de cálcio do receptor de quimiocina CXCR2 humano HTS002C - CHEMISCREEN™; c) inibir o recrutamento de β-arrestina induzido por CXCL1 ou CXCL5 em um ensaio baseado em células TangoTM com um IC50 de 0,08 a 0,5 nM a uma concentração de 1,5-3,4 nM para CXCL1 e de 47,7 a 150 nM para CXCL5; ou d) reduzir a neutrofilia das vias aéreas em um indivíduo com neutrofilia das vias aéreas sem causar neutropenia grave e prolongada.

[0077] Composições farmacêuticas compreendendo qualquer uma das moléculas de anticorpo humano divulgadas neste documento também são fornecidas. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas podem compreender qualquer uma das moléculas de anticorpo humano divulgadas neste documento em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0078] Também são fornecidas moléculas de ácido nucleico que codificam qualquer uma das moléculas de anticorpo humano divulgadas neste documento. Polinucleotídeos exemplares que codificam um anticorpo humano ou fragmento do mesmo, conforme descrito neste documento, são fornecidos como SEQ ID NOS: 233-247. Polinucleotídeos exemplares que codificam as regiões constantes da cadeia pesada do anticorpo humano são fornecidos como SEQ ID NOS: 248-256.

[0079] Vetores compreendendo as moléculas de ácido nucleico divulgadas neste documento também são divulgados.

[0080] Além disso, são fornecidas células transformadas para expressar qualquer uma das moléculas de anticorpo humano divulgadas neste documento. Métodos de tratamento e usos

[0081] Os antagonistas de CXCR2 têm sido objeto de estudos, incluindo ensaios clínicos, para uma variedade de condições que envolvem patologias associadas à inflamação neutrofílica e/ ou monocítica e certos cânceres que expressam CXCR2 ou nos quais há um elemento de supressão de neutrófilos de um anticâncer resposta. Antagonistas de CXCR2 de moléculas pequenas foram, por exemplo, desenvolvidos para: (a) COPD (ver, por exemplo, Miller, B. et al., (2017). Late Breaking Abstract – “Danirixin (GSK1325756) improves respiratory symptoms and health status in mild to moderate COPD – results of a 1 year first time in patient study.” European Respiratory Journal, 50); (b) influenza (ver, por exemplo, o estudo NCT02469298 descrito em ClinicalTrials.gov entitled "Safety, Tolerability and Clinical Effect of Danirixin in Adults With Influenza"); (c) bronquiectasia (ver, por exemplo, De Soyza et al., (2015) “A randomised, placebo-controlled study of the CXCR2 antagonist AZD5069 in bronchiectasis.” Eur Respir J, 46, 1021-32); (d) fibrose cística (ver, por exemplo, Moss et al., (2013). “Safety and early treatment effects of the CXCR2 antagonist SB-656933 in patients with cystic fibrosis.” J Cyst Fibros, 12, 241-8); (e) asma grave (ver, por exemplo, Nair et al., (2012) “Safety and efficacy of a CXCR2 antagonist in patients with severe asthma and sputum neutrophils: a randomized, placebo-controlled clinical trial.” Clin Exp Allergy, 42, 1097-103); e (f) câncer de próstata (ver, por exemplo, o número de estudo NCT03177187 descrito em ClinicalTrials.gov intitulado “Combination Study of AZD5069 and Enzalutamide”).

[0082] Além disso, há evidências de que o antagonismo de CXCR2 pode ser benéfico em doenças das vias aéreas superiores crônicas, como rinossinusite crônica (ver, por exemplo, Tomassen et al., (2016) “Inflammatory endotypes of chronic rhinosinusitis based on cluster analysis of biomarkers.” J Allergy Clin Immunol, 137, 1449-1456 e4); em doenças vasculares, incluindo lesão de isquemia-reperfusão (Stadtmann e Zarbock, (2012), “CXCR2: From Bench to Bedside.” Front Immunol, 3, 263) e doença arterial coronariana (ver, por exemplo, Joseph et al., (2017) “CXCR2 Inhibition - a novel approach to treating Coronary heart Disease (CICADA): study protocol for a randomised controlled trial.” Trials, 18, 473); na dor crônica (ver, por exemplo, Silva et al., (2017) “CXCL1/CXCR2 signaling in pathological pain: Role in peripheral and central sensitization.” Neurobiol Dis, 105, 109-116); em condições neuroinflamatórias (ver, por exemplo, Veenstra and Ransohoff, (2012) “Chemokine receptor CXCR2: physiology regulator and neuroinflammation controller?” J Neuroimmunol, 246, 1-9) incluindo esclerose múltipla (ver, por exemplo, Pierson et al., (2018) “The contribution of neutrophils to CNS autoimmunity.” Clin Immunol, 189, 23-28) e doença de Alzheimer (ver, por exemplo, Liu et al., (2014) “Neuroinflammation in Alzheimer's disease: chemokines produced by astrocytes and chemokine receptors.” Int J Clin Exp Pathol, 7, 8342-55); em esteatohepatite alcoólica e não alcoólica (ver, por exemplo, French et al., (2017) “The role of the IL-8 signaling pathway in the infiltration of granulocytes into the livers of patients with alcoholic hepatitis.” Exp Mol Pathol, 103, 137-140 and Ye et al., (2016) “Lipocalin-2 mediates non- alcoholic steatohepatitis by promoting neutrophil-macrophage crosstalk via the induction of CXCR2.” J Hepatol, 65, 988-997); na pancreatite (ver, por exemplo, Steele et al., (2015) “CXCR2 inhibition suppresses acute and chronic pancreatic inflammation.” J Pathol, 237, 85-97); no diabetes (ver, por exemplo, Citro et al., (2015) “CXCR1/2 inhibition blocks and reverses type 1 diabetes in mice.” Diabetes, 64, 1329-40); e em vários tipos de câncer (ver, por exemplo, Liu et al., (2016) “The CXCL8-CXCR1/2 pathways in cancer.” Cytokine Growth Factor Rev,

31, 61-71). A doença de Behçet é caracterizada pela ativação de neutrófilos e também foi associada ao CXCR2 (Qiao et al., “CXCR2 Expression on neutrophils is upregulated during the relapsing phase of ocular Behcet disease” Curr Eye Res. 2005; 30: 195-203).

[0083] Os métodos compreendem a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer uma das moléculas de anticorpo humano divulgadas neste documento ou das composições farmacêuticas divulgadas neste documento para tratar ou prevenir a condição de inflamação descrita neste documento. Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo humano ou composições farmacêuticas que as compreendem são administradas em uma quantidade terapeuticamente eficaz para tratar a neutrofilia das vias aéreas, conforme determinado, por exemplo, por contagens de neutrófilos no escarro ou inflamação pulmonar aguda. Em tais modalidades, os indivíduos que recebem as moléculas de anticorpo humano ou composições farmacêuticas compreendendo as mesmas têm neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda. Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo humano ou composições farmacêuticas que compreendem as mesmas são administradas em uma quantidade terapeuticamente eficaz para prevenir a neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda. Em tais modalidades, os indivíduos que recebem as moléculas de anticorpo humano ou composições farmacêuticas compreendendo as mesmas estão em risco de ter neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda devido a, por exemplo, predisposição genética ou fatores ambientais, ou foram tratados anteriormente por terem neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda e estão recebendo, ou devem receber, doses terapeuticamente eficazes das moléculas de anticorpo humano divulgadas ou composições farmacêuticas como um medicamento de manutenção (por exemplo, para manter níveis baixos de neutrófilos pulmonares).

[0084] Também são fornecidas as moléculas de anticorpo humano divulgadas ou as composições farmacêuticas divulgadas para uso na prevenção ou tratamento de neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda, como é o uso de qualquer uma das moléculas de anticorpo humano divulgadas ou qualquer uma das composições farmacêuticas divulgadas na fabricação de um medicamento para a prevenção ou tratamento de neutrofilia em um tecido periférico, neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda ou crônica.

[0085] A neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda ou ambas são doença pulmonar obstrutiva crônica, asma neutrofílica grave ou ambas.

[0086] Em pelo menos um modelo experimental, os anticorpos descritos neste documento foram observados para inibir a migração de eosinófilos para o pulmão em resposta a estímulos inflamatórios. Consequentemente, os anticorpos são úteis para o tratamento de doenças inflamatórias caracterizadas por eosinofilia, como asma eosinofílica, rinite alérgica, doenças de pele, infecções fúngicas e parasitárias, doenças autoimunes (como doenças inflamatórias do intestino, neuromielite óptica, penfigóide bolhoso, miocardite autoimune, cirrose biliar primária, granulomatose eosinofílica com alguma síndrome de polangiite (Churg-Strauss) cânceres e distúrbios da medula óssea.

[0087] Sem estar limitado pela teoria, a capacidade dos anticorpos CXCR2 presentes em bloquear a migração eosinofílica para os pulmões é surpreendente porque os eosinófilos não têm o receptor CXCR2. Para que as células inflamatórias migrem para um determinado sítio, elas devem primeiro cruzar o revestimento dos vasos sanguíneos, que são constituídos por células endoteliais, que são conhecidas por expressar CXCR2. Consequentemente, os anticorpos são ainda capazes de inibir a migração de células por meio de efeitos nas células endoteliais.

[0088] A capacidade de afetar as células endoteliais também indica que os anticorpos presentes podem ser capazes de afetar a angiogênese e metástase, o que é importante no câncer. Portanto, é fornecido neste documento um método para o tratamento de câncer.

EXEMPLOS

[0089] Os exemplos a seguir são fornecidos para descrever melhor algumas das modalidades divulgadas neste documento. Os exemplos destinam- se a ilustrar, não a limitar, as modalidades divulgadas. Métodos Gerais Geração de plasmídeos para produção de anticorpos

[0090] As sequências de aminoácidos da região variável foram retraduzidas em sequências de DNA antes da síntese de novo do DNA resultante. Genes de região variável de cadeia pesada sintetizados foram subclonados em um vetor de expressão contendo uma sequência de polinucleotídeos que codifica uma região constante de IgG4 humana compreendendo a substituição estabilizadora de dobradiça central S228P (SEQ ID NO: 118). Genes de região variável de cadeia leve lambda sintetizados foram subclonados em um vetor de expressão contendo uma sequência de polinucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da região constante de cadeia leve lambda humana (SEQ ID NO: 134). Genes de região variável de cadeia leve kappa sintetizados foram subclonados em um vetor de expressão contendo uma sequência de polinucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da região constante de cadeia leve kappa humana (SEQ ID NO: 135). Expressão transitória de anticorpos usando o sistema Expi293F ™

[0091] Os anticorpos foram produzidos por co-transfecção de plasmídeos pesados e leves de anticorpos em células Expi293™ (Life Technologies). Para cada transfecção de 20 mL, 3,6 x 10 7 células foram necessárias em 20 mL de Expi293™ Expression Medium. As transfecções foram realizadas usando o reagente ExpiFectamine™ 293 de acordo com as instruções do fabricante.

[0092] Os anticorpos foram coletados por centrifugação (3000 xg durante 20 minutos) entre 72 horas e 84 horas após a transfecção. A menos que indicado de outra forma, todos os anticorpos foram produzidos como IgG4 humano incorporando a substituição de estabilização de dobradiça S228P. Purificação e troca de tampão de anticorpos

[0093] Os anticorpos foram purificados do material coletado de transfecções transitórias usando resina de proteína A (MabSelect ™ SuRe™, GE Healthcare) de acordo com as instruções do fabricante.

[0094] Após a eluição, os anticorpos foram trocados por tampão de ácido cítrico para PBS de Sorensen, pH 5,8 (KH2PO4 a 59,5 mM, Na2HPO4.2H2 a 0 7,3 mM, NaCl a 150 mM) usando colunas de dessalinização PD-10 (52-1308- 00 BB, GE Healthcare) contendo 8,3 mL de resina Sephadex ™ G-25. Transfecção transitória de membros da família CXCR em células Expi293F ™

[0095] As células Expi293F ™ (Life Technologies) foram transfectadas transitoriamente, usando o vetor de expressão de mamífero disponível comercialmente pTT5 (Durocher, 2002) contendo um polinucleotídeo que codifica: CXCR1 humano (SEQ ID NO: 133); CXCR2 humano (SEQ ID NO: 125); CXCR3 humano (SEQ ID NO: 128); CXCR4 humano (SEQ ID NO: 129); CXCR5 humano (SEQ ID NO: 130); CXCR6 humano (SEQ ID NO: 131); CXCR7 humano (SEQ ID NO: 132); ou CXCR2 de macaco cinomólogos (SEQ ID NO: 127).

[0096] Para cada 10 mL de transfecção, complexos de lipídeo-DNA foram preparados diluindo 10µg de DNA de plasmídeo em Meio de Soro Reduzido Opti-MEM™ I (Cat. No. 31985-062) para um volume total de 1,0 mL. 54µL de reagente ExpiFectamine™ 293 foram diluídos em meio Opti-MEM™ I para um volume total de 1,0 mL. As transfecções foram realizadas de acordo com as instruções do fabricante. As células foram incubadas em uma incubadora a 37°C com uma atmosfera umidificada de 8% de CO2 em ar em um agitador orbital girando a 200 rpm. Aproximadamente 18-24 horas após a transfecção, a viabilidade de células foi avaliada e as células transfectadas coletadas para uso.

Ensaios de ligação de citometria de fluxo usando células Expi293F ™ transfectadas transitoriamente

[0097] As células coletadas foram ressuspensas em tampão FACS (1x PBS + 0,5% (p/ v) albumina de soro bovino (BSA) + EDTA a 2 mM pH 7,2). Aproximadamente 2 x 105 células foram adicionadas por cavidade em uma placa de fundo redondo de 96 cavidades. As células foram sedimentadas por centrifugação a 400g durante 5 minutos a 4°C e os sobrenadantes descartados. 25µL de cada anticorpo teste ou anticorpo de controle foram adicionados às células e incubados por 30 minutos a 4°C. As células foram lavadas duas vezes em 100µL de tampão FACS seguido por centrifugação a 400g durante 5 minutos a 4°C.

[0098] Para detecção, 50μL de anticorpo secundário (Tabela 2) foram adicionados às amostras relevantes. Os anticorpos comercialmente disponíveis que se ligam aos membros da família CXCR transfectados foram usados como controles positivos para assegurar que as células expressavam os receptores. As células foram lavadas duas vezes em 200µL de tampão FACS seguido por centrifugação a 400g por 5 minutos a 4℃. Antes da aquisição da amostra, as células foram ressuspensas em 100μL de tampão FACS. As amostras foram adquiridas usando o amostrador de alto rendimento em um citômetro FACSCanto™II (Beckton-Dickinson). Tabela 2. Reagentes usados para análise de citometria de fluxo Reagentes Catálogo Fornecedor Diluições de número fabricante finais recomendad as CXCR1-FITC anti-humano FAB330F Sistemas de P&D 1 em 10 CXCR2-FITC anti-humano 551126 BD Biosciences 1 em 5 CXCR3-FITC anti-humano 558047 BD Biosciences 1 em 10 CXCR4-FITC anti-humano 561735 BD Biosciences 1 em 10 CXCR5-FITC anti-humano 558112 BD Biosciences 1 em 10

Reagentes Catálogo Fornecedor Diluições de número fabricante finais recomendad as CXCR6-PE anti-humano 356004 BioLegend 1 em 20 CXCR7-PE anti-humano 331104 Bio Legend 1 em 20 IgG4 humana, kappa I4639-1MG Sigma-Aldrich 10μg/ mL (controle de isotipo) IgG anti-humano específico F9512-2ML Sigma-Aldrich 1 em 200 Fc - FITC Ig anti-humano de anticorpo 316610 BioLegend 1 em 20 λ de cadeia leve - APC CXCR2-APC anti-humano 320710 BioLegend 1 em 20 CXCR2 Anti-humano -Alexa FAB331R- Sistemas de P&D 1 em 20 Fluor™ 647 100 CXCR2 anti-humano 555932 BD Biosciences CXCR2 anti-humano MAB331 Sistemas de P&D 7AAD 559925 BD Biosciences 1 em 50 Ensaio de potência baseado em células CXCR2 humanas

[0099] Ensaio baseado em células Tango™ CXCR2 : A linhagem celular repórter disponível comercialmente Tango™ CXCR2- bla U2OS foi usada para avaliar a capacidade dos anticorpos de inibir a ativação do CXCR2 por CXCL8 e CXCL1 (ThermoFisher Scientific, Austrália). As células foram descongeladas, propagadas, cultivadas e congeladas de acordo com as instruções do fabricante.

[0100] Preparação de células Tango ™ CXCR2-bla U2OS para uso em ensaios baseados em células : O protocolo do fabricante foi alterado para fazer uso de placas de 96 cavidades em vez de placas de 384 cavidades. Resumidamente, as células em divisão foram coletadas um dia antes do uso. As células foram coletadas e ressuspensas em meio de ensaio (100% FreeStyle ™ Expression Medium; Life Technologies; Cat # 12338-018) a uma densidade celular viável de 312.500 células/ mL. 128 μL de suspensão de células foram adicionados por cavidade em placas tratadas com cultura de tecido de fundo transparente com 96 cavidades. As células foram incubadas por 16-20 horas a 37℃ em uma atmosfera de 5% de CO2 antes do uso em ensaios.

[0101] Procedimento de ensaio Tango ™ : Os ensaios foram configurados e executados conforme descrito no protocolo do fabricante. Os agonistas usados em ambos os ensaios de potência agonista e antagonista são fornecidos na Tabela 3. Para ensaios antagonistas, agonistas foram usados em concentrações na faixa de EC50-EC80 Os ensaios foram lidos usando um leitor de placa de fluorescência FlexStation® 3 (Molecular Devices) configurado com os parâmetros fornecidos na Tabela 4. A razão de emissão azul/ verde para cada cavidade foi calculada dividindo os valores de emissão azul pelos valores de emissão verdes. Todas as curvas de inibição foram ajustadas usando uma dose- resposta de quatro parâmetros usando GraphPad Prism ™ (Versão 7.01). Tabela 3. Agonistas usados em ensaios de potência baseados em células Agoni Ensaio Tango™ Ensaio de fluxo de sta EC50 (nM) cálcio EC50 (nM) Huma Catálogo no Fabricante Número Meio Faixa Meio Faixa CXCL Miltenyi 130-108- 2,3 1,5 - 3,4 2,62 0,7 - 6,7 1 Biotec 974 dados CXCL Sistemas de 276-GB 33,3 15 - 45,7 37,02 insuficien 2 P&D tes CXCL Sistemas de 277-GG 11,9 6,0 - 22,7 12,25 10 - 18 3 P&D CXCL Sistemas de 47,7 - 10,3 - 254-XB 97,7 39,17 5 P&D 150 20,5 CXCL Sistemas de 26,8 - 333-GC 9,4 5,6 - 12,4 28,94 6 P&D 32,4 CXCL Sistemas de 15,3 - 393-NP 39,6 7,14 5,3 - 9 7 P&D 77,2 CXCL Miltenyi 130-108- 2,2 1,6 - 4,0 3,2 0,9 - 6,5 8 Biotec 979

Tabela 4. Configurações do leitor de placa de fluorescência Flexstation® 3 Varredura 1 (azul) Varredura 2 (verde) Filtro de Excitação 409/20 nm 409/20 nm Filtro de Emissão 460/40 nm 530/30 nm Preparações de sangue periférico

[0102] Buffy coat humano integral, frações enriquecidas com PBMC preparadas a partir de buffy coat de sangue periférico humano ou sangue total de macaco cinomólogo foram usados para análise da atividade de ligação do anticorpo por citometria de fluxo. Resumidamente, o sangue não foi tratado ou diluído 1:1 em solução salina tamponada com fosfato (PBS) filtrada estéril à temperatura ambiente. Amostras de 30 mL foram colocadas em camadas sobre 15 mL de Lymphoprep ™ (Stem Cell Technologies, cat # 07851). As células mononucleares do sangue periférico (PBMC) foram enriquecidas por centrifugação à temperatura ambiente a 700g durante 30 minutos sem travagem. A camada de PBMC foi isolada e as células lavadas em PBS contendo EDTA a 2 mM com centrifugação de baixa velocidade a 200g, para remover a contaminação de plaquetas. Sangue total ou frações de células enriquecidas com PBMC foram ressuspensas em solução de lise de glóbulos vermelhos (BioLegend, 420301). As contagens de células viáveis foram determinadas e as células ressuspensas a 1x107 células por mL em tampão FACS (1x PBS + 0,5% (p/ v) BSA + EDTA 2 mM pH 7,2).

[0103] Ensaios de ligação de citometria de fluxo usando sangue total ou preparações enriquecidas com PBMC: Os ensaios de ligação para detectar CXCR2 em populações de neutrófilos do sangue usando anticorpos de teste foram realizados essencialmente como descrito para os ensaios usando células Expi293F™ transfectadas transitoriamente. A ligação de anticorpos ao CXCR2 humano na superfície dos neutrófilos foi medida usando o anticorpo anti- CXCR2 conjugado diretamente ao fluoróforo aloficocianina (APC). Anticorpos de controle de isotipo correspondentes foram incluídos para comparação. As células foram incubadas com anticorpos específicos de linhagem e 2 µg/ mL de anticorpo anti-CXCR2 conjugado com APC ou controle de isotipo preparado em BSA/ PBS a 3% gelado por um mínimo de 30 minutos a 4°C. O anticorpo anti- CXCR2 comercial (clone 48331 (R&D Systems FAB331A)) foi usado como um controle positivo. As populações de neutrófilos foram identificadas por granularidade e tamanho característicos e ligação positiva de anticorpos comercialmente disponíveis contra CD10 (Biolegend, clone Hl10a, número de catálogo 312204). As células foram lavadas e fixadas (tampão de fixação BioLegend, 420801) antes da análise. O nível de fluorescência na superfície de células foi medido por citometria de fluxo. Usando este método, os anticorpos anti-CXCR2 de teste foram detectados ligando-se a neutrófilos de macacos cinomólogos e humanos. Geração de camundongos transgênicos CXCR2 humanos

[0104] Camundongos knock-in hCXCR2 foram gerados pelo uso de recombinação homóloga em células-tronco embrionárias (ES) para inserir o CXCR2 humano no exon 1 do gene CXCR2 de camundongo. O único exon de codificação de CXCR2 humano foi inserido em um vetor com braços 5‘ e 3' homólogo à localização genômica do exon de codificação de camundongo de CXCR2, fornecendo origem a uma estrutura de gene que codificou para CXCR2 humano, mas manteve a não codificação de camundongo e elementos regulatórios. Este vetor foi eletroporado em células ES de camundongo C57Bl/ 6 que foram incorporadas em blastocistos de camundongo C57Bl/ 6 e transplantadas em camundongos fêmeas pseudo-gestante. Os filhotes foram retrocruzados com a estirpe C57Bl/ 6 parental e os descendentes selecionados por Southern blot para transmissão da linha germinativa do gene CXCR2 humano. Camundongos heterozigotos para CXCR2 humano foram intercruzados para fornecer uma linha de CXCR2 humano homozigótica e o fenótipo foi confirmado por análise de ligação de anticorpos CXCR2 anti-camundongo e anti- humano por citometria de fluxo.

Anticorpo comparador e antagonistas de CXCR2 de molécula pequena

[0105] O antagonista 1 é o anticorpo HY29GL, conforme descrito em Int'l Pub. nº WO2015/ 169811 A2 (VH e VL das sequências 20 e 29 daquela referência). O antagonista 2 é o anticorpo CX1_5, conforme descrito em Int'l Pub. nº WO2014/ 170317 A1 (VH e VL das sequências 115 e 114 daquela referência). O antagonista 3 é o clone 48311 do anticorpo anti-CXCR2 (sistemas R&D, número de catálogo MAB331-500). O antagonista 4 é o clone 6C6 do anticorpo anti-CXCR2 (BD Biosciences, número de catálogo 555932). O antagonista 5 é o antagonista de molécula pequena do CXCR2 Danirixina. O antagonista 6 é o antagonista de molécula pequena do CXCR2 SCH 527123. Exemplo 1 - Geração de anticorpos anti-CXCR2 Geração de anticorpos anti-CXCR2 com regiões variáveis humanas

[0106] Ratos transgênicos projetados para expressar anticorpos com regiões variáveis humanas (conforme divulgado em Int'l Pub. nº WO2008/ 151081) foram usados para criar anticorpos contra CXCR2 humano. Resumidamente, os animais foram submetidos à imunização genética semanal usando um plasmídeo que codifica a sequência de aminoácidos do CXCR2 humano (SEQ ID NO: 125) até que os títulos de anticorpos contra CXCR2 humano fossem obtidos, conforme medido por citometria de fluxo usando células HEK-293 transientemente transfectadas positivas para CXCR2. Produção e expansão de hibridomas que expressam anticorpos anti- CXCR2

[0107] Para gerar hibridomas que produziram anticorpos monoclonais para CXCR2 humano, esplenócitos e/ ou células de nódulos linfáticos de animais com os títulos anti-CXCR2 mais altos foram isolados e fundidos a células de mieloma de camundongo (ATCC, CRL-1580). As células foram plaqueadas a aproximadamente 1 x 105 células/ mL em placas de microtitulação de fundo plano, seguido por uma incubação de duas semanas em meio seletivo (10% FCS e 1x HAT (Sigma)). Os hibridomas foram expandidos por passagem em série através de quatro mudanças de meio em placas de 96 cavidades (estágios de 96 cavidades 1 a 4), então, quando necessário, expandidos em frascos T25 e T75. Durante o processo de expansão de hibridoma, os sobrenadantes foram monitorados quanto à atividade de ligação de CXCR2 por ELISA baseado em células (cELISA) em células transitoriamente transfectadas para expressar CXCR2 humano ou CXCR2 murino (SEQ ID NOs: 125 ou 126, respectivamente). Os anticorpos ligados foram detectados usando um anticorpo secundário de cabra anti-IgG-HRP de rato (Southern Biotech, # 3030-05).

[0108] Um painel de hibridomas foi gerado usando nódulos linfáticos e células do baço de ratos transgênicos projetados para expressar sequências da região variável humana. Um ELISA celular (cELISA) foi usado para detectar a atividade de ligação do CXCR2 humano em sobrenadantes tomados durante o processo de expansão para os hibridomas (Tabela 5). Os hibridomas que retiveram a expressão de anticorpos que se ligaram ao CXCR2 após várias passagens foram selecionados para sequenciamento de DNA. Tabela 5. Ligação de sobrenadantes de hibridoma a células transfectadas CXCR2 humano ou CXCR2 de camundongo conforme determinado por cELISA CLONE cELISA usando sobrenadante de hibridoma de ratos com regiões variáveis humanas CXCR2 humano CXCR2 Murino % de Positivo* % de Positivo* BKO-1A1 38% 6% BKO-1B10 75% 4% BKO-1C1 3% 5% BKO-1C6 88% 5% BKO-1D1 67% 7% BKO-1D5 46% 6% BKO-1D9 85% 5% BKO-1E3 3% 6%

CLONE cELISA usando sobrenadante de hibridoma de ratos com regiões variáveis humanas CXCR2 humano CXCR2 Murino % de Positivo* % de Positivo* BKO-1H3 41% 3% BKO-2A3 3% 3% BKO-2B10 79% 5% BKO-2C2 77% 5% BKO-2D1 28% 4% BKO-2D8 100% 7% BKO-2E4 80% 7% BKO-2F6 11% 3% BKO-2G4 83% 4% BKO-2G7 75% 3% BKO-2G10 139% 4% BKO-2H4 2% 3% BKO-2H7 23% 5% BKO-3A9 2% 4% BKO-3C3 8% 10% BKO-3D3 3% 6% BKO-3D6 2% 3% BKO-3E3 107% 3% BKO-3F4 86% 42% BKO-3F5 5% 5% BKO-3F6 6% 5% BKO-3G11 61% 7% BKO-3H11 24% 5% BKO-4A4 32% 7% BKO-4A5 2% 7% BKO-4A8 110% 5% BKO-4A10 11% 5% BKO-4B2 107% 6% BKO-4B7 2% 3% BKO-4B11 103% 7%

CLONE cELISA usando sobrenadante de hibridoma de ratos com regiões variáveis humanas CXCR2 humano CXCR2 Murino % de Positivo* % de Positivo* BKO-4C1 97% 6% BKO-4E8 53% 7% BKO-4F10 118% 7% BKO-4F11 77% 8% BKO-4G3 2% 2% BKO-4G4 93% 3% BKO-4H5 81% 4% BKO-4H6 108% 4% BKO-4H11 4% 6% BKO-5A5 66% 5% BKO-5B8 53% 5% BKO-5C4 101% 5% BKO-5E8 109% 8% BKO-5F9 2% 4% BKO-5F10 119% 4% BKO-5G6 103% 4% BKO-5G11 101% 22% BKO-5H1 4% 7% BKO-5H4 5% 8% BKO-6A1 60% 6% BKO-6A2 4% 7% BKO-6A3 8% 7% BKO-6B8 53% 4% BKO-6C2 3% 6% BKO-6C4 39% 5% BKO-6D10 2% 4% BKO-6E4 79% 3% BKO-6F3 44% 6% BKO-6G1 101% 4% BKO-6H1 52% 5%

CLONE cELISA usando sobrenadante de hibridoma de ratos com regiões variáveis humanas CXCR2 humano CXCR2 Murino % de Positivo* % de Positivo* BKO-7A3 21% 8% BKO-7A9 2% 4% BKO-7B1 15% 5% BKO-7B2 84% 4% BKO-7C11 73% 4% BKO-7D8 67% 6% BKO-7D9 5% 7% BKO-7E4 4% 6% BKO-7E7 94% 12% BKO-7F3 95% 7% BKO-7F11 2% 3% BKO-7G1 21% 3% BKO-7G2 2% 8% BKO-7G10 104% 26% BKO-7H7 3% 7% BKO-7H8 105% 7% BKO-7H11 4% 9% BKO-8B6 95% 6% BKO-8C2 5% 8% BKO-8C4 124% 6% BKO-8D2 11% 7% BKO-8D4 38% 7% BKO-8F3 56% 3% BKO-8G3 114% 6% BKO-8H8 104% 7% BKO-8H10 81% 8% BKO-9A8 124% 8% BKO-9C3 56% 7% BKO-9C4 2% 3% BKO-9E7 2% 3%

CLONE cELISA usando sobrenadante de hibridoma de ratos com regiões variáveis humanas CXCR2 humano CXCR2 Murino % de Positivo* % de Positivo* BKO-9G1 66% 4% BKO-9G6 34% 8% BKO-9H5 4% 7% BKO-10A2 25% 5% BKO-10B4 109% 6% BKO-10D1 2% 6% BKO-10D8 30% 10% BKO-10F3 7% 4% BKO-10G10 89% 4% BKO-10H6 6% 6% Controle 100% 100% positivo Controle 4% 8% negativo *Unidades de fluorescência em relação ao controle positivo (100%) Sequenciamento de anticorpos produzidos por células de hibridoma

[0109] Os domínios variáveis de anticorpos foram isolados por reação em cadeia da polimerase de transcrição reversa (RT-PCR) usando RNA produzido a partir de pellets de células de hibridoma não clonais como um modelo. O RNA foi isolado das placas de hibridomas usando um kit de purificação de RNA total de 96 cavidades GENELUTE ™ (Sigma # RTN9602, RTN9604) de acordo com o protocolo do fabricante. Para RT-PCR padrão, o RNA foi transcrito reversamente em cDNA usando um primer oligo (dT) e um kit AccuScript PfuUltra® II RT-PCR (Agilent # 600184). As reações de síntese de cDNA foram montadas de acordo com o protocolo do fabricante e a síntese de cDNA realizada a 42°C por 30 minutos. Para uso na amplificação 5’-rápida de extremidades de CDNA (5’-RACE) PCR, o RNA foi transcrito reversamente em cDNA usando um kit SMARTer® RACE (Takara) de acordo com as instruções do fabricante para dar cDNA pronto para 5’-RACE.

[0110] A amplificação das regiões variáveis de anticorpos humanos do painel de hibridomas foi realizada por PCR usando PfuUltraII (Agilent) ou polimerases de DNA de alta fidelidade Q5 (NEB) de acordo com as instruções do fabricante. As cadeias pesadas do painel de hibridoma foram amplificadas usando pares de iniciadores específicos para a sequência de DNA da região constante da cadeia pesada de roedores e as sequências de DNA das sequências líderes da cadeia pesada humana. As regiões variáveis da cadeia leve lambda do painel de hibridoma foram amplificadas de forma semelhante usando pares de iniciadores específicos para a sequência de DNA da região constante lambda humana e as sequências de DNA das sequências líderes da cadeia lambda humana.

[0111] A concentração do DNA purificado resultante foi avaliada usando um espectrofotômetro Nanodrop. A sequenciação de Sanger dos fragmentos de PCR foi realizada utilizando oligos concebidos para se ligarem internamente nos amplicon da cadeia pesada ou leve. As sequências de DNA resultantes foram conceitualmente traduzidas em sequências de aminoácidos para análise posterior antes de seu uso na geração de cadeia de anticorpo de comprimento total. Os anticorpos com sequências de aminoácidos únicas foram selecionados para conversão em anticorpos humanos de comprimento total. Anticorpos monoclonais recombinantes com ligação ao CXCR2 humano

[0112] Os hibridomas selecionados daqueles que secretaram anticorpo que se ligou ao CXCR2 (como descrito na Tabela 5) foram sequenciados para identificar o DNA da região variável e aminoácidos usando RT-PCR como descrito acima. Estas regiões variáveis de anticorpos foram então geradas por síntese de genes e subclonadas em vetores de expressão de mamíferos, conforme descrito em Métodos Gerais. Os anticorpos foram produzidos por co-expressão de plasmídeos de cadeia pesada e leve em células

Expi293F™ e purificados por cromatografia em coluna de proteína A, conforme descrito em Métodos Gerais.

Quando várias cadeias pesadas e/ ou leves foram identificadas a partir das mesmas células de hibridoma, cada cadeia pesada foi emparelhada com cada cadeia leve e os anticorpos resultantes receberam o sufixo a, b, c, etc.

Os anticorpos purificados foram dessalinizados em PBS de Sorensen pH 5,8 e testados por citometria de fluxo para ligação a células Expi293F™ transfectadas com CXCR2 humano ou CXCR1 humano e células Expi293F™ falsamente transfectadas. 26 anticorpos que se ligaram ao CXCR2 humano, mas não ao CXCR1 humano ou às células Expi293F™ transfectadas falsamente, foram identificados a partir do painel de hibridoma para posterior caracterização.

Essas sequências de anticorpos são fornecidas na Tabela 6. Tabela 6. Sequências de anticorpos com uma região variável humana que ligam o CXCR2 humano, mas não estão intimamente relacionadas com células CXCR1 humano ou Expi293F ™ transfectadas falsamente

Nome do VH VL Anticorpo (SEQ ID NO) (SEQ ID NO) BKO-1A1 BKO_1A1_VH BKO_1A1_VL (SEQ ID NO: 1) (SEQ ID NO: 2) BKO-1B10 BKO_1B10_VH BKO_1B10_VL (SEQ ID NO: 3) (SEQ ID NO: 4) BKO-1D1 BKO_1D1_VH BKO_1D1_VL (SEQ ID NO: 5) (SEQ ID NO: 6) BKO-1H3 BKO_1H3_VH BKO_1H3_VL (SEQ ID NO: 7) (SEQ ID NO: 8) BKO-2D8 BKO_2D8_VH BKO_2D8_VL (SEQ ID NO: 9) (SEQ ID NO: 10) BKO-3A9_b BKO_3A9_VH BKO_3A9_L3_E03_VL (SEQ ID NO: 11) (SEQ ID NO: 12)

Nome do VH VL Anticorpo (SEQ ID NO) (SEQ ID NO) BKO-3D6 BKO_3D6_VH BKO_3D6_L6_G06_VL (BKO_5H4_VL) (SEQ ID NO: 13) (SEQ ID NO: 14) BKO-3F4 BKO_3F4_VH BKO_3F4_L11_A11_VL (SEQ ID NO: 15) (SEQ ID NO: 16) BKO-4A8 BKO_4A8_VH BKO_4A8_VL (SEQ ID NO: 17) (SEQ ID NO: 18) BKO-4F10 BKO_4F10_VH BKO_4F10_VL (SEQ ID NO: 19) (SEQ ID NO: 20) BKO-5E8 BKO_5E8_H5_C05_VH BKO_5E8_L3_C03_VL (SEQ ID NO: 21) (SEQ ID NO: 22) BKO-5G11 BKO_5G11_VH BKO_5G11_VL (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 24) BKO-5G6_c BKO_5G6_VH BKO_5G6_L12_E12_VL (SEQ ID NO: 25) (SEQ ID NO: 26) BKO-6A1_b BKO_6A1_H4_A04_VH BKO_6A1_E10_VL (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 28) BKO-6A2_a BKO_6A2_H1_B01_VH BKO_6A2_L6_A06_VL (SEQ ID NO: 29) (SEQ ID NO: 30) BKO-7C11 BKO_7C11_H6_B06_VH BKO_7C11_G01_VL (SEQ ID NO: 31) (SEQ ID NO: 32) BKO-7G10_a BKO_7G10_H1_B01_VH BKO_7G10_L6_E06_VL (SEQ ID NO: 33) (SEQ ID NO: 34) BKO-7H8_b BKO_7H8_H3_C03_VH BKO_7H8_L10_F10_VL (SEQ ID NO: 35) (SEQ ID NO: 36) BKO-8B6 BKO_8B6_VH BKO_8B6_VL (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 38)

Nome do VH VL Anticorpo (SEQ ID NO) (SEQ ID NO) BKO-8C4 BKO_8C4_VH BKO_8C4_VL (SEQ ID NO: 39) (SEQ ID NO: 40) BKO-8G3_b BKO_8G3_H4_D04_VH BKO_8G3_L1_G01_VL (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 42) BKO-8H10 BKO_8H10_VH BKO_8H10_VL (SEQ ID NO: 43) (SEQ ID NO: 44) BKO-8H8_b BKO_8H8_H5_E05_VH BKO_8H8_L7_H08_VL (SEQ ID NO: 45) (SEQ ID NO: 46) BKO-9A8 BKO_9A8_H3_F03_VH BKO_9A8_L1_H02_VL (SEQ ID NO: 47) (SEQ ID NO: 48) BKO-9C3_a BKO_9C3_H8_G08_VH BKO_9C3_L1_F01_VL (SEQ ID NO: 49) (SEQ ID NO: 50) BKO-10G10 BKO_10G10_VH BKO_10G10_VL (SEQ ID NO: 51) (SEQ ID NO: 52) Exemplo 2 - Caracterização funcional de ocorrências anti-CXCR2 Ligação a CXCR2 de macaco cinomólogos

[0113] Todos os anticorpos recombinantes que se ligaram ao CXCR2 humano, mas não ao CXCR1 humano ou às células Expi293 ™ transfectadas falsamente, foram testados quanto à ligação ao CXCR2 de cinomólogos (SEQ ID NO: 127) usando células Expi293F™ transientemente transfectadas com um plasmídeo que codifica a proteína CXCR2 de cinomólogos como descrito neste documento. Os anticorpos com níveis detectáveis de ligação a CXCR2 cinomólogos foram caracterizados adicionalmente. Ligação a outros membros da família CXCR humanos

[0114] Anticorpos de reação cruzada CXCR2 humano e de macaco cinomólogo foram testados por citometria de fluxo para ligação a outros membros da família CXCR humanos - CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6 e CXCR7 usando células Expi293F™ transitoriamente transfectadas com um plasmídeo que codifica CXCR3 humano (SEQ ID NO: 128), CXCR4 (SEQ ID NO: 129), CXCR5 (SEQ ID NO: 130), CXCR6 (SEQ ID NO: 131) ou CXCR7 (SEQ ID NO: 132). Os anticorpos que não eram seletivos para CXCR2 foram excluídos de análises posteriores. Inibição da ativação mediada por CXCL8 de CXCR2 humano

[0115] Os anticorpos foram testados em um ensaio baseado em células Tango™ CXCR2 usando CXCL8 humano como um agonista, conforme descrito em Métodos Gerais. Oito anticorpos inibiram a ativação induzida por CXCL8 de CXCR2, como mostrado na FIG. 1A e 1B. Um anticorpo 6C6 anti- CXCR2 disponível comercialmente (BD Biosciences; "BD6C6") foi usado como um controle positivo nestes ensaios. Ligação de anticorpos a CXCR2 humano expresso por PBMCs humanos e CXCR2 de cinomólogos expresso por PBMC s de cinomólogos

[0116] Os oito anticorpos que inibiram a ativação mediada por CXCL8 de CXCR2 foram testados quanto à ligação a CXCR2 nativo expresso em PBMCs humanos e de cinomólogo. Dois anticorpos, BKO-4A8 e BKO- 8G3_b, demonstraram alta atividade de ligação para CXCR2 humano e de cinomólogos, enquanto um terceiro, BKO-9C3_a, exibiu níveis substanciais de ligação para CXCR2 humano e níveis acima da média de ligação para CXCR2 de cinomólogos, como mostrado na FIG. 2. Inibição da ativação mediada por CXCL1 de CXCR2 humano

[0117] Os anticorpos BKO-4A8, BKO-8G3_b, e BKO-9C3 foram testados em um ensaio baseado em células Tango ™ CXCR2 usando CXCL1 como um agonista, conforme descrito em Métodos Gerais. O anticorpo BKO-4A8 foi consistentemente o mais potente dos anticorpos testados neste formato. A inibição típica da ativação de CXCL1 de curvas CXCR2 para esses anticorpos são mostradas abaixo da FIG. 3.

Exemplo 3 - Otimização da sequência de aminoácidos do anticorpo anti-CXCR2 BKO-4A8

[0118] Variantes da região variável da cadeia pesada e leve do anticorpo anti-CXCR2 BKO-4A8 foram construídas em uma tentativa de otimizar a sequência desta molécula para estabilidade e capacidade de fabricação.

[0119] Variantes do anticorpo BKO-4A8, cada uma compreendendo uma única substituição de aminoácido, foram produzidas conforme descrito abaixo. Um sumário dessas variantes é fornecido na Tabela 7. Tabela 7. Variantes de BKO-4A8 Cadeia de Região variável Substituição Anticorpo Sequência ID NO: CDR1 pesada S32Q 53 S32D 136 S32H 54 S32L 55 S32W 56 S32Y 57 T33A 58 M34Q 59 M34D 60 M34H 61 M34W 62 S35Q 137 S35D 138 S35K 139 CDR2 pesada A50S 140 I51H 63 G52aD 64 R53S 65 R53Q 66 G54D 67 R55Q 141 R55D 142 R55H 143 N56S 68 CDR3 pesada I94K 69 M96A 70 M96S 144

M96Q 71 M96D 145 M96H 146 M96K 72 M96L 147 M96W 148 M96Y 149 G101D 73 Y102S 74 Y102Q 150 Y102D 151 Y102K 75 CDR2 leve E50D 76 V51D 152 V51Y 153 N52D 77 N52S 78 K53A 79 K53D 80 K53H 81 R54Q 82 R54D 154 CDR3 leve Y91A 83 Y91S 155 Y91H 156 N94A 84 N94S 85 N94H 157 N94K 86 N94L 87 N94W 88 N94Y 89 N95aS 158 N95aQ 90 N95aD 91 N95aH 92 N95aK 93 N95aL 94 N95aW 159 N95aY 95 V97A 96 V97S 160

V97D 161 V97K 97 Geração de plasmídeos que codificam variantes de anticorpos por mutagênese dirigida ao sítio

[0120] Os plasmídeos que codificam cadeias de anticorpos que requerem alterações de um único aminoácido foram preparados por replicação dirigida por iniciador mutagênico das cadeias de plasmídeo usando uma DNA polimerase de alta fidelidade. Este processo usou DNA de plasmídeo de cadeia dupla superenrolada como molde e dois iniciadores de oligonucleotídeos sintéticos complementares, ambos contendo a mutação desejada. Os iniciadores oligonucleotídeos, cada um complementar às fitas opostas do plasmídeo, foram estendidos durante o ciclo de PCR sem deslocamento do iniciador, resultando em cópias do plasmídeo mutado contendo nicks escalonados. Após o ciclo de PCR, a reação de PCR foi tratada usando a enzima de restrição DpnI. DpnI corta preferencialmente o DNA do vetor original, deixando as fitas recém-sintetizadas intactas.

[0121] Para gerar variantes que incorporam múltiplas substituições de aminoácidos que requerem iniciadores oligonucleotídeos mutagênicos com mais de quarenta bases de comprimento, o processo acima foi repetido para introduzir as alterações sequencialmente ou os genes foram sintetizados de novo por montagem de oligonucleotídeos sintéticos. Todas as sequências de DNA de construção foram confirmadas por sequenciamento de DNA de Sanger antes do uso. Geração de plasmídeos que codificam variantes de anticorpos por síntese de polinucleotídeos

[0122] As sequências de aminoácidos da região variável foram retraduzidas em sequências de DNA usando a tecnologia GeneOptimizer® antes da síntese do DNA resultante de novo por montagem de oligonucleotídeos sintéticos (GeneArt, Alemanha). Polinucleotídeos que codificam regiões variáveis de cadeia pesada sintetizadas emparelhadas com a região constante de IgG4 humana compreendendo a substituição de estabilização de dobradiça central S228P (SEQ ID NO: 118) foram subclonados em um vetor de expressão. Os polinucleotídeos que codificam genes da região variável da cadeia leve lambda sintetizados foram subclonados em um vetor de expressão que codifica uma região constante da cadeia leve lambda humana (SEQ ID NO: 134). Ligação de variantes BKO-4A8 a CXCR2

[0123] Cada cadeia pesada variante foi co-expressa com a cadeia leve parental e vice-versa. Os anticorpos resultantes foram purificados e testados em ensaios de ligação CXCR2 em relação ao anticorpo BKO-4A8 parental como descrito neste documento. Variantes de anticorpos que tinham níveis semelhantes de ligação ao BKO-4A8 parental são mostradas na Tabela

8. Tabela 8. Variantes de ponto BKO-4A8 com ligação CXCR2 semelhante ao BKO-4A8 parental Sequência de Mudança de Cadeia de região variável dobra na ligação Substituição Anticorpo ID NO: em relação a BKO-4A8 CDR1 pesada S32Q 53 1,71 S32H 54 0,86 S32L 55 1,33 S32W 56 0,83 S32Y 57 1,33 T33A 58 1,30 M34Q 59 1,00 M34D 60 1,60 M34H 61 0,80 M34W 62 1,17 CDR2 pesada I51H 63 1,80 G52aD 64 1,18 R53S 65 1,00 R53Q 66 0,64 G54D 67 1,00 N56S 68 1,0 CDR3 pesada I94K# 69 0,7

M96A 70 1,5 M96Q 71 1,5 M96K 72 1,0 G101D 73 1,0 Y102S 74 1,5 Y102K 75 1,3 CDR2 leve E50D 76 2,0 N52D 77 1,7 N52S 78 1,0 K53A 79 1,4 K53D 80 1,4 K53H 81 1,4 R54Q 82 1,6 CDR3 leve Y91A 83 1,7 N94A 84 1,0 N94S 85 1,0 N94K 86 1,33 N94L 87 0,88 N94W 88 0,63 N94Y 89 0,50 N95aQ 90 1,0 N95aD 91 2,3 N95aH 92 1,3 N95aK 93 1,0 N95aL 94 1,7 N95aY 95 1,7 V97A 96 1,7 V97K 97 1,0 # é um resíduo de estrutura que flanqueia CDR3 pesada

[0124] Um alinhamento das sequências de cadeia pesada variável e sequências de cadeia leve variável das variantes de anticorpo acima são mostrados na FIG. 4A e FIG. 4B, respectivamente. A cadeia pesada variável de consenso ("consenso VH"; SEQ ID NO: 167) e cadeia leve variável de consenso ("VL de consenso"; SEQ ID NO: 168) também são fornecidos nessas figuras. Variantes de ponto de BKO-4A8 com potência semelhante a BKO-4A8 na inibição da ativação de CXCL1 ou CXCL8 de CXCR2

[0125] Dezesseis variantes de anticorpos que mostram níveis semelhantes de ligação de CXCR2 ao BKO-4A8 parental foram testadas em ensaios de potência usando CXCL1 ou CXCL8 como agonista, conforme descrito nos Métodos Gerais. Doze anticorpos tinham potência semelhante ao BKO-4A8 parental, conforme mostrado na Tabela 9. Os alinhamentos de sequência de aminoácidos destas variantes em relação às sequências parentais das cadeias pesada e leve são fornecidos na FIG. 4A e 4B. Tabela 9. Variantes de ponto BKO-4A8 com potência semelhante a BKO-4A8 na inibição da ativação mediada por CXCL1 ou CXCL8 de CXCR2 Cadeia de Substituição Região Ensaio Tango IC 50 (nM) Anticorpo variável SEQ CXCL1 CXCL8 ID NO: BKO-4A8 - 17 0,177 0,112 M34Q 59 0,242 0,0776 CDR1 pesado M34H 61 0,186 0,107 CDR2 pesada N56S 68 0,158 0,129 I94K # 69 0,078 0,071 M96A 70 0,140 0,126 CDR3 pesada M96Q 71 0,330 0,140 M96K 72 0,135 0,091 CDR2 leve N52S 78 0,214 0,126 CDR3 leve N94S 85 0,149 0,169 N94K 86 0,123 0,113 N94Y 89 0,164 0,105 N95aQ 90 0,213 0,084 # é um resíduo de estrutura que flanqueia CDR3 pesada Variantes combinatórias de BKO-4A8

[0126] Três aminoácidos de estrutura não germinativa foram substituídos de volta àqueles vistos na sequência de linha germinativa humana mais próxima - R75K de cadeia pesada e I94K e D41G de cadeia leve. A substituição A40P também foi introduzida na estrutura 2 da cadeia pesada.

[0127] Um painel de variantes combinatórias compreendendo duas ou mais substituições de aminoácidos foi projetado para examinar se era possível otimizar ainda mais essas sequências. A Tabela 10 descreve um total de duas variantes de cadeia leve e onze variantes de cadeia pesada que foram produzidas. Os alinhamentos de sequência de aminoácidos com a cadeia pesada variável e a cadeia leve variável BKO-4A8 parental são ilustrados na FIG. 5A e 5B, respectivamente.

A cadeia pesada variável de consenso ("consenso VH"; SEQ ID NO: 226) e cadeia leve variável de consenso ("VL de consenso"; SEQ ID NO: 227) também são fornecidos nessas figuras.

Tabela 10. Variantes Combinatórias de BKO-4A8

Cadeia Variante: Substituições (em função de BKO-4A8) (em relação à região variável HC parental de SEQ ID NO: 17 ou região variável LC parental de SEQ ID NO: 18)

Pesada 1 M34Q, N56S (SEQ ID NO: 98)

2 M34Q, A40P, N56S (SEQ ID NO: 99)

3 M34Q, A40P, N56S, R75K (SEQ ID NO: 100)

4 M34Q, A40P, N56S, M96K (SEQ ID NO: 101)

5 M34Q, A40P, N56S, R75K, M96K (SEQ ID NO: 102)

6 M34Q, A40P, N56S, R75K, I94K, M96K (SEQ ID NO: 103)

7 M34Q, A40P, N56S, I94K, M96K (SEQ ID NO: 104)

8 M34Q, N56S, M96K (SEQ ID NO: 105)

9 M34Q, N56S, R75K, M96K (SEQ ID NO: 106)

10 I94K, M96K

(SEQ ID NO: 107) 101 M34Q, A40P, N56S, R75K, M96A (SEQ ID NO: 108) Leve b N52S, N94S (SEQ ID NO: 109) c D41G, N52S, N94S (SEQ ID NO: 110)

[0128] Cada cadeia pesada foi co-expressa com cada cadeia leve para produzir uma variante de anticorpo com sequência otimizada. Os anticorpos foram purificados e testados quanto à atividade de ligação de CXCR2 conforme descrito em Métodos Gerais. A maioria das variantes de anticorpos combinatórios reteve atividade de ligação de CXCR2 semelhante ao anticorpo parental BKO-4A8, como mostrado na Tabela 11. Tabela 11. Sumário dos valores de EC50 de dados de ligação CXCR2 usando variantes combinatórias Nome do Mudança (s) Mudança (s) de EC50 de Melhoria Anticorpo de VH VL ligação a de dobra CXCR2 sobre 4A8 (nM) WT 1b M34Q, N56S N52S, N94S 0,3 1,33 (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 98) 109) 1c D41G, N52S, 0,3 1,33 N94S (SEQ ID NO: 110) 4A8 N/A N/A 0,4 N/A controle para VH1 2b N52S, N94S 0,4 1,25

Nome do Mudança (s) Mudança (s) de EC50 de Melhoria Anticorpo de VH VL ligação a de dobra CXCR2 sobre 4A8 (nM) WT

M34Q, A40P, (SEQ ID NO: N56S 109) 2c (SEQ ID NO: D41G, N52S, 0,3 1,67 99) N94S (SEQ ID NO: 110) 4A8 N/A N/A 0,5 N/A controle para VH2 3b M34Q, A40P, N52S, N94S 0,1 4 N56S, R75K (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 109) 100) 3c D41G, N52S, 0,2 2 N94S (SEQ ID NO: 110) 4A8 N/A N/A 0,4 N/A controle para VH3 4b M34Q, A40P, N52S, N94S 0,4 1,25 N56S, M96K (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 109) 101) 4c D41G, N52S, 0,4 1,25 N94S (SEQ ID NO: 110) 4A8 N/A N/A 0,5 N/A controle para VH4 5b M34Q, A40P, N52S, N94S 0,4 1,25 N56S, R75K, (SEQ ID NO: M96K 109)

5c (SEQ ID NO: D41G, N52S, 0,4 1,25 102) N94S (SEQ ID NO: 110) 4A8 N/A N/A 0,5 N/A controle para VH5 6b M34Q, A40P, N52S, N94S 0,4 1,00 N56S, R75K, (SEQ ID NO: I94K, M96K 109) (SEQ ID NO: 6c D41G, N52S, 0,9 0,44 103) N94S (SEQ ID NO: 110) 4A8 N/A N/A 0,4 N/A controle para VH6 7b M34Q, A40P, N52S, N94S 0,8 0,63 N56S, I94K, (SEQ ID NO: M96K 109) (SEQ ID NO: 7c D41G, N52S, 1 0,50 104) N94S (SEQ ID NO: 110) 4A8 N/A N/A 0,5 N/A controle para VH7 8b M34Q, N56S, N52S, N94S N/A N/A M96K (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 109) 105) 8c D41G, N52S, N/A N/A N94S

Nome do Mudança (s) Mudança (s) de EC50 de Melhoria Anticorpo de VH VL ligação a de dobra CXCR2 sobre 4A8 (nM) WT (SEQ ID NO: 110) 4A8 N/A N/A 0,6 N/A controle para VH8 9b M34Q, N56S, N52S, N94S 0,3 3,00 R75K, M96K (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 109) 106) 9c D41G, N52S, 6,4 0,14 N94S (SEQ ID NO: 110) 4A8 N/A N/A 0,9 N/A controle para VH9 10b I94K, M96K N52S, N94S 0,3 1,67 (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 107) 109) 10c D41G, N52S, 0,5 1,00 N94S (SEQ ID NO: 110) Controle N/A N/A 0,5 N/A 4A8 para VH10

[0129] Outras seis variantes combinatórias de cadeia pesada compreendendo quatro ou mais substituições de aminoácidos foram produzidas conforme fornecido na Tabela 12. Os alinhamentos da sequência de aminoácidos com a cadeia pesada BKO-4A8 parental são ilustrados na FIG. 5A. Cada cadeia pesada foi co-expressa com a cadeia leve c (SEQ ID NO: 110) para produzir uma variante de anticorpo. Os anticorpos foram purificados e testados quanto à atividade de ligação de CXCR2 conforme descrito em Métodos Gerais. A atividade de ligação de CXCR2 foi reduzida no anticorpo 102c e no anticorpo 106c. Tabela 12. Sumário dos valores de EC50 de dados de ligação CXCR2 usando variantes combinatórias Nome do Mudança (s) de VH EC50 de Ligação Ligação Anticorpo ligação a máxima máxima CXCR2 (MFI) (Porcent (nM) agem MFI de 4A8 WT) M34Q, A40P, N56S, R75K, 101c M96A 3,05 55048 89% (SEQ ID NO: 108) M34Q, A40P, N56S, R75K, 102c M96E 8,70 32980 53% (SEQ ID NO: 162) M34Q, A40P, R53S, R55G, 103c N56S, R75K 5,15 44445 72% (SEQ ID NO: 163) Controle 4A8 para N/A 1,58 62074 N/A 101c-103c M34Q, A40P, R53S, R55G, 104c N56S, R75K, M96K 6,45 45097 54% (SEQ ID NO: 164) M34Q, A40P, R53S, R55G, 105c N56S, R75K, M96A 5,73 42741 52% (SEQ ID NO: 165) M34Q, A40P, R53S, R55G, 106c N56S, R75K, M96E > 100 11633 N/A (SEQ ID NO: 166) Controle 4A8 para N/A 3,82 82797 N/A 104c-106c

[0130] Os anticorpos testados em ensaios de potência usando CXCL1 ou CXCL8 como agonista, conforme descrito nos Métodos Gerais. As variantes do anticorpo combinatório 103c, 104c e 105c demonstraram potência reduzida em comparação com o anticorpo parental, enquanto a variante 101c demonstrou potência melhorada em comparação com o anticorpo parental como mostrado na Tabela 13 e FIG. 6A e 6B. Tabela 13. Sumário dos valores de EC50 de dados de potência CXCR2 usando variantes combinatórias Melhoria Melhoria de Nome CXCL8 CXCL1 de dobra dobra do Mudança (s) de VH IC50 IC50 CXCL8 CXCL1 Anticor (VH SEQ ID NO) (nM) (nM) sobre 4A8 sobre 4A8 po

WT WT M34Q, A40P, N56S, 101c R75K, M96A 0,28 0,63 2,39 1,49 (SEQ ID NO: 108) M34Q, A40P, R53S, 103c R55G, N56S, R75K 1,25 2,40 0,53 2,55 (SEQ ID NO: 163) M34Q, A40P, R53S, R55G, N56S, R75K, 104c M96K 0,75 2,17 0,88 0,43 (SEQ ID NO: 164) M34Q, A40P, R53S, R55G, N56S, R75K, 105c M96A 1,85 4,00 0,36 0,24 (SEQ ID NO: 165) Control N/A 0,66 94 N/A N/A e 4A8

[0131] O anticorpo 101c que compreende a região variável da cadeia pesada "101" e a região variável da cadeia leve "c" foi selecionado para avaliação em ensaios de potência baseados em células devido às suas propriedades observadas favoráveis. O anticorpo 101c foi renomeado para BKO- 4A8-101c. BKO-4A8-101c compreendeu cinco substituições de otimização de cadeia pesada e três de cadeia leve. A comparação de BKO-4A8 com BKO-4A8- 101c em ensaios de potência baseados em células medindo sua capacidade de inibir a ativação mediada por CXCL1 ou CXCL8 de CXCR2 sugeriu que as alterações de sequência para otimizar BKO-4A8-101c também aumentaram sua potência em relação ao BKO- 4A8 parental, conforme ilustrado na FIG. 6A e 6B. Exemplo 5 - Caracterização da atividade antagonista anti-CXCR2 Caracterização da inibição de BKO-4A8-101c do recrutamento de β- arrestina mediado por ligante

[0132] A linhagem celular CXCR2 Tango™ humana foi usada para avaliar a capacidade do anticorpo BKO-4A8-101c para inibir o recrutamento de β-arrestina para CXCR2 ativado por agonista. Todos os ligantes ELR humanos + CXCR2 quimiocina foram testados em ensaios de resposta à dose de antagonista utilizando calculados valores de EC50 de agonista. BKO-4A8-101c foi capaz de inibir a sinalização de β-arrestina mediada por CXCR2 induzida por todas as quimiocinas ELR + CXCL, com valores de IC 50 comparáveis obtidos para todos os agonistas testados (Tabela 14). BKO-4A8-101c inibiu completamente a ativação de CXCR2 humano por CXCL1, 2, 3, 5 e 6 humano de uma maneira dependente da dose, mas inibiu apenas parcialmente CXCL7 e CXCL8 na mesma faixa de dose. Dados representativos de quatro experimentos independentes são mostrados na FIG. 7.

[0133] Sem desejar ser limitado por qualquer mecanismo de ação proposto, é proposto que a atividade antagonista seletiva observada fornece uma janela terapêutica para permitir a inibição substancialmente completa da migração de neutrófilos mediada por CXCL1 e CXCL5 da circulação para o tecido sem afetar substancialmente a migração de neutrófilos mediados por CXCL8 da medula óssea para a circulação. A inibição parcial da β-arrestina mediada por CXCL8 no ensaio repórter demonstra que a via de internalização do receptor mediada por β-arrestina é funcional.

Tabela 14. Atividade antagonista de BKO-4A8-101c CXCR2 em um ensaio repórter de β-arrestina mediado por ligante (n = 7-13) IC50 nM % De inibição máxima Ligantes Hu Meio Faixa Meio Hu CXCL1 0,27 0,08 - 0,42 98 Hu CXCL2 0,36 0,23 - 0,44 100 Hu CXCL3 0,39 0,30 - 0,46 96 Hu CXCL5 0,30 0,11 - 0,47 98 Hu CXCL6 0,28 0,16 - 0,38 98 Hu CXCL7 0,44 0,29 - 0,62 76 Hu CXCL8 0,34 0,18 - 0,66 78 Caracterização da inibição de BKO-4A8-101c do fluxo de cálcio mediado por ligante

[0134] Uma das vias de sinalização a jusante da ativação do CXCR2 que tem um papel na quimiotaxia celular é caracterizada pela mobilização de cálcio (fluxo). A capacidade de BKO-4A8-101c para inibir o fluxo de cálcio induzido pelo ligante CXCR2 humano foi testada na linhagem celular otimizada de cálcio do receptor de quimiocina CXCR2 humano HTS002C - CHEMISCREEN™ comercialmente disponível. Todos os ligantes ELR humanos + CXCR2 quimiocina foram testados em ensaios de resposta à dose de antagonista utilizando calculados valores de EC50 de agonista.

[0135] BKO-4A8-101c inibiu fortemente o fluxo de cálcio induzido por CXCL1 humano, 2, 3, 5 e 6 de uma maneira dependente da dose, mas apenas inibiu fracamente CXCL7 e inibiu marginalmente CXCL8 na mesma faixa de dose, como mostrado na Tabela 15. Dados representativos são mostrados para CXCL1, CXCL5 e CXCL8 (FIG. 8).

[0136] A resposta de quimiotaxia de neutrófilos é conhecida por ser mediada pela mobilização de cálcio ativada por CXCR2. Sem desejar ser limitado a qualquer modo de ação proposto, a atividade antagonista seletiva fornecida pelos anticorpos divulgados neste documento fornece potencialmente uma janela terapêutica para permitir a inibição substancialmente completa da migração de neutrófilos mediada por CXCL1 e CXCL5 para os pulmões sem impactar substancialmente a mediada por CXCL8 migração de neutrófilos da medula óssea para a circulação. Isso pode permitir o bloqueio da patologia mediada por neutrófilos em sítios de inflamação crônica sem necessariamente prejudicar as funções antimicrobianas mediadas por neutrófilos basais. Tabela 15. Sumário dos valores de IC50 médios de BKO- 4A8-101c para quimiocinas ELR + humano em CXCR2 humano em um ensaio de fluxo de cálcio (N = 4-9) IC50 nM % De inibição máxima Ligantes Hu Meio Faixa Meio Hu CXCL1 1,55 0,84 - 2,31 91 Hu CXCL2 1,62 0,75 - 2,30 88 Hu CXCL3 0,63 0,25 - 1,15 52 Hu CXCL5 1,03 N.A.a 81 Hu CXCL6 1,71 1,57 - 2,00 81 Hu CXCL7 2,14 0,47 - 5,5 43 Hu CXCL8 N.D.b - 9 a Dados insuficientes.

b N.D. Sem inibição ou dados que não se ajustassem à análise de ajuste da curva de resposta à dose de quatro pontos. Exemplo 6 - A ligação in vitro e a atividade funcional dos anticorpos anti-CXCR2 são independentes da região Fc

[0137] Regiões variáveis da cadeia pesada de BKO-4A8 foram formatadas em diferentes regiões constantes de IgG humana, conforme fornecido na Tabela 16. A capacidade dos anticorpos purificados para se ligarem ao CXCR2 humano foi rotineiramente avaliada em células Expi293F ™ transfectadas transitoriamente para expressar CXCR2 humano (SEQ ID NO: 125). A ligação de BKO-4A8 e variantes das mesmas foi detectada por incubação de anticorpo lambda de cadeia leve de IgG anti-humano conjugado com fluorocromo. A atividade de ligação dos anticorpos testados, quantificada como intensidade fluorescente média, era independente da região Fc do anticorpo como ilustrado na FIG. 9. Tabela 16. Variantes de cadeia pesada de BKO-4A8 Variante de cadeia Cadeia pesada pesada BKO-4A8 SEQ ID NO BKO-4A8 IgG4 * 115 BKO-4A8 IgG4 117 BKO-4A8 IgG2* 119 BKO-4A8 IgG1* 121 BKO-4A8 IgG1 123 *refere-se a um Fc modificado

[0138] A linhagem celular repórter disponível comercialmente Tango™ CXCR2-bla U2OS (ThermoFisher Scientific) foi usada para avaliar a capacidade dos anticorpos anti-CXCR2 para inibir o recrutamento de β-arrestina para CXCR2 ativado por agonista. Os agonistas foram fornecidos no seu ensaio de EC50 para os ensaios de concentração de antagonista. As curvas de resposta à dose demonstraram que a atividade funcional de BKO-4A8 não foi impactada pela modificação de sequência na região Fc, com atividade antagonista comparável evidente para todos os anticorpos avaliados, como ilustrado na FIG.

10. Exemplo 7- Especificidade do anticorpo anti-CXCR2 BKO-4A8- 101c

[0139] A especificidade do anticorpo anti-CXCR2 BKO-4A8-101c foi testada avaliando a atividade de ligação em células Expi293F™ transitoriamente transfectadas para expressar membros da família CXCR humanos intimamente relacionados, conforme ilustrado na FIG. 11. As sequências dos membros da família CXCR humanos testados são fornecidas na Tabela 19. A ligação de BKO- 4A8-101c e variantes das mesmas foi detectada por incubação de anticorpo de IgG anti-humano conjugado com fluorocromo. Verificou-se que o anticorpo anti- CXCR2 BKO-4A8-101c se ligava forte e exclusivamente a CXCR2 humano. Exemplo 8 - Ensaios de ligação de citometria de fluxo usando células de sangue primárias

[0140] Para caracterizar ainda mais o anticorpo anti-CXCR2 BKO- 4A8-101c, a capacidade de ligar CXCR2 em neutrófilos foi testada em sangue humano anticoagulado. A ligação foi medida usando BKO-4A8-101c diretamente conjugado com fluoróforo APC. Anticorpos de controle de isotipo correspondente conjugados com APC foram incluídos para comparação. As células foram incubadas com anticorpos específicos de linhagem e 2µg/ mL de anticorpo anti- CXCR2 conjugado com APC ou controle de isotipo. O nível de fluorescência na superfície de células foi medido por citometria de fluxo. Detritos celulares e células não viáveis foram excluídos com base nas características de dispersão de luz e incorporação de corante de viabilidade fixável Zombie Violet (BioLegend, 423113). Subconjuntos de células hematopoéticas foram identificados com base na expressão de CD45 juntamente com tamanho característico (dispersão direta, FSC) e granularidade (dispersão lateral, SSC) em associação com a expressão de marcadores fenotípicos como segue: Linfócitos T = CD3; Linfócitos B = CD20; Monócitos = CD14; e linfócitos natural killer = CD56 (ou linfócitos CD3- CD20- CD16 +). Os granulócitos foram identificados de acordo com o tamanho e granularidade e a ausência de ligação de marcadores específicos de linhagem: CD3, CD19, CD20, CD56 e CD14. Os neutrófilos foram ainda distinguidos por altos níveis de expressão de CD16 e CD177, enquanto os eosinófilos foram identificados com base na expressão de Siglec-8. Usando este método BKO- 4A8-101c ligou neutrófilos (FIG. 12A) e monócitos (FIG. 12B) de sangue humano. Um anticorpo comercial anti-CXCR2 (BioLegend 5E8/ CXCR2) foi usado como controle positivo no experimento.

Exemplo 9 - A capacidade de anticorpos purificados para inibir a resposta funcional mediada por CXCR2 induzida por agonista em relação ao comparador anticorpos e pequenas moléculas Caracterização da inibição de BKO-4A8-101c do recrutamento de β- arrestina mediado por ligante em relação aos reagentes comparadores

[0141] A capacidade de BKO-4A8-101c para bloquear a sinalização de CXCR2 ativada por ligante foi comparada com anticorpos comparadores e moléculas pequenas (consulte Métodos Gerais) no ensaio de recrutamento de β-arrestina Tango™ CXCR2 (Thermo), usando os ligantes humanos CXCL1, CXCL5, e CXCL8 em valores calculados de EC50.

[0142] BKO-4A8-101c inibiu a atividade funcional da β-arrestina mediada por CXCR2 induzida por um painel de ligantes CXCR2 conhecidos, com valores de IC50 comparáveis para diferentes ligantes. O anticorpo demonstrou inibição seletiva de ligante de recrutamento de β-arrestina dependente de CXCR2 com inibição completa de CXCL1- e CXCL5 e inibição parcial de recrutamento de β-arrestina induzido por CXCL8 (faixa de 70-80%) como mostrado na Tabela 17.

[0143] A potência de inibição de BKO-4A8-101c da sinalização de β-arrestina mediada por CXCL1 e CXCL5 foi semelhante ou superior à observada para outros anticorpos comparadores e moléculas pequenas. Com base nos valores de IC50, BKO-4A8-101c mostrou ser 2 a 39 vezes mais potente na inibição da ativação de β-arrestina mediada por ligante CXCL1 ou CXCL5 do que anticorpos antagonistas de CXCR2 comparadores ou moléculas pequenas, mas apenas um inibidor incompleto de ativação induzida por CXCL8 de CXCR2. A inibição completa da β-arrestina mediada por CXCL8 na atividade repórter demonstra que a via de internalização do receptor mediada por β-arrestina é funcional.

Tabela 17. Sumário dos valores de IC50médios de antagonistas de CXCR2 para quimiocinas ELR + humanas em CXCR 2 humano em um ensaio de recrutamento de β-arrestina Composto CXCL1 CXCL5 CXCL8 IC50 % De IC50 nM % De IC50 nM % De (nM) inibição (nM) inibição (nM) inibição máxima máxima máxima BKO-4A8- 0,38 97 0,34 98 0,34 78 101c Antagonista 1,20 98 0,80 98 0,58 97 1 Antagonista 1,14 93 0,56 96 0,82 74 2 Antagonista 14,80 85 8,12 96 N.D.a 82 3 Antagonista 1,47 96 0,75 99 1,01 94 4 Antagonista 2,77 99 1,75 99 1,23 99 5 Antagonista 0,71 99 0,29 97 1,22 98 6 a N.D. Sem inibição ou dados que não se ajustassem à análise de ajuste da curva de resposta à dose de quatro pontos. Caracterização da inibição de BKO-4A8-101c da mobilização de cálcio

[0144] A capacidade dos antagonistas de inibir a ativação de CXCR2 da mobilização de cálcio induzida por CXCL1 e CXCL8 foi avaliada nas linhagens celulares estáveis otimizadas de cálcio do receptor de quimiocina CXCR2 humano HTS002C - CHEMISCREEN™ comercialmente disponível (Eurofins Pharma Discovery Services). Ligantes CXC foram fornecidos no seu ensaio de concentração de EC50 (ver Tabela 3) para os ensaios de antagonista. O kit de ensaio de cálcio Fluo-4 NW (Life Technologies) foi usado de acordo com o protocolo do fabricante para medição na célula de mobilização de cálcio, que foi lido usando um sistema de triagem celular de alto rendimento FLIPR Tetra (Dispositivos moleculares). O pico de resposta menos a resposta basal de cada cavidade foi usada para determinar curvas de resposta à dose de inibição que se ajustam a uma equação logística de quatro parâmetros e valores de IC 50.

[0145] A capacidade de BKO-4A8-101c para bloquear o fluxo de cálcio induzida pelo ligando foi comparada com os anticorpos comparadores e moléculas pequenas (Tabela 18) usando os ligantes CXCL1 e CXCL8 humanos em valores de EC50 calculados. Os valores de IC 50 de pelo menos 3 repetições independentes são mostrados em Tabela 18. BKO-4A8-101c foi um antagonista de CXCL1 equivalente ou mais potente do que os anticorpos comparadores e moléculas pequenas e inibiu fortemente o fluxo de cálcio induzido por CXCL1 humano. Em contraste, BKO-4A8-101c e outros anticorpos comparadores não inibiram substancialmente o fluxo de cálcio induzido por CXCL8, enquanto os antagonistas de CXCR2 de molécula pequena do comparador provaram ser capazes de inibir completamente o fluxo de cálcio induzido por CXCL8 neste ensaio. A resposta de quimiotaxia de neutrófilos mediada por CXCR2 é dependente da mobilização de cálcio. Sem desejar ser limitado por qualquer mecanismo de ação proposto, a atividade antagonista seletiva observada com BKO-4A8-101c fornece uma janela terapêutica para permitir a inibição substancialmente completa da migração de neutrófilos mediada por CXCL1 e CXCL5 para o tecido, sem impactar substancialmente CXCL8- migração mediada da medula óssea. Essa seletividade de ligante também pode afetar os gradientes de quimiocina que conduzem as respostas quimiotáticas dos neutrófilos. Tabela 18. Sumário dos valores de IC50 de antagonistas CXCR2 humanos para quimiocinas ELR + humanas em CXCR2 humano em um ensaio de fluxo de cálcio Composto CXCL1 CXCL8 % De % De IC50 (nM) inibição IC50 (nM) inibição máxima máxima BKO-4A8- 1,47 93 N.D.a 9 101c

Antagonista 1 N.D.a 28 N.D.a 8 Antagonista 2 1,02 79 N.D.a 3 Antagonista 3 30,74 37 N.D.a 18 Antagonista 4 1,29 93 N.D.a 1 Antagonista 5 48,94 95 115,12 97 Antagonista 6 8,46 96 16,09 98 aN.D. Sem inibição ou dados que não se ajustassem à análise de ajuste da curva de resposta à dose de quatro pontos. Exemplo 10 - Inibição mediada por anti-CXCR2 da neutrofilia pulmonar em um modelo de camundongo com asma grave

[0146] Camundongos sensibilizados desafiados com extrato intranasal de ácaros da poeira doméstica (HDM) desenvolvem um perfil inflamatório com eosinofilia pulmonar mista e neutrofilia associada à hiperplasia de células caliciformes. Um modelo de asma grave foi relatado anteriormente usando o antagonista de molécula pequena CXCR2 SCH527123 em doses de 10 e 30 mg/ kg (como discutido em YOUNG, A., et al., The Effect of the CXCR1/ 2 Antagonist SCH257123 in a Mouse Model of Asma grave. Experimental Biology 2016 Meeting, 2016 San Diego, USA: The FASEB Journal, 1202.10) conhecido por trabalhar em modelos de camundongo de inflamação neutrofílica (como discutido em CHAPMAN, R. W., et al., A novel, orally active CXCR1/2 receptor antagonist, Sch527123, inhibits neutrophil recruitment, mucus production, and goblet cell hyperplasia in animal models of pulmonary inflammation. J Pharmacol Exp Ther, (2007) 322, 486-93). O pré-tratamento com 10 e 30 mg/ kg de SCH527123 inibiu apenas o número de células de neutrófilos em um máximo de 30% no BAL, o que não foi significativamente diferente quando comparado ao grupo tratado com ácaros da poeira doméstica (HDM) -veículo (conforme discutido em Young et al., supra).

[0147] O anticorpo anti-CXCR2 BKO-4A8-mIgG1 (SEQ ID NOs: 113 e 114) foi gerado formatando as cadeias pesadas e leves variáveis de BKO-4A8 em uma região constante de IgG1 de camundongo com função efetora reduzida. Camundongos knock-in de hCXCR2 fêmeas foram submetidos à sensibilização com 50μg de HDM em adjuvante de Freund completo (CFA) administrado por injeção subcutânea no dia 0 e desafio intranasal com 50 mg de HDM sem CFA no dia 14. Os animais foram tratados com veículo ou BKO-4A8-mIgG1 (10 mg/ kg) por meio de injeção intraperitoneal nos dias 5 e 12. As respostas inflamatórias foram caracterizadas no ponto final no dia 16 por contagens de células totais e diferenciais no fluido de lavagem broncoalveolar (BAL) do pulmão direito. O pulmão esquerdo foi fixado em formol a 10% para avaliação histopatológica e produção de muco.

[0148] O tratamento com anticorpo anti-CXCR2 BKO-4A8-mIgG1 antes do desafio com HDM resultou em uma redução na gravidade da doença, incluindo uma redução significativa (> 60%) nas contagens de eosinófilos BAL (p = 0,017) e neutrófilos (p = 0,028) e hiperplasia de células caliciformes reduzida (p = 0,0052), quando comparado ao grupo de controle tratado com veículo, como mostrado na FIG. 13A, 13B e 13C. A avaliação estatística foi realizada usando um teste t não paramétrico não pareado de Mann-Whitney com outliers identificados usando o teste de Grubbs (Alpha = 0,01) para discernir diferenças estatisticamente significativas entre o veículo e os grupos de tratamento. Todas as análises estatísticas foram realizadas usando GraphPad PrismTM 7.01

[0149] A redução no número de eosinófilos BAL neste modelo é surpreendente. A capacidade do BKO-4A8-mIgG1 de suprimir a migração eosinofílica apóia sua utilidade no tratamento de doenças de eosinofilia, como asma eosinofílica, além de condições neutrofílicas. Exemplo 11 - Inflamação pulmonar aguda induzida por LPS em macaco cinomólogos

[0150] Macacos cinomólogos machos nativos biológico (ou seja, não administrados anteriormente) foram randomizados em grupos que receberam veículo ou o anticorpo anti-CXCR2 BKO-4A8-101c administrado por administração intravenosa em uma dose de 1 mg/ kg nos dias 0, 14 e 28. Uma hora após o tratamento dos anticorpos de teste no dia 0, os animais foram expostos a lipopolissacarídeo bacteriano aerossolizado (LPS) por inalação de 20 μg/ L por 5 minutos (dose total de 20 μg/ kg). Este é um modelo bem estabelecido de inflamação pulmonar aguda. As respostas inflamatórias foram caracterizadas 24 horas após a exposição ao LPS por contagens de células totais e diferenciais de fluido de lavagem broncoalveolar do pulmão esquerdo e comparadas com contagens correspondentes de animais nativos no dia 14 de pré-tratamento. O sangue foi coletado em vários pontos de tempo para contagem de células diferencial e o soro coletado para análise farmacocinética.

[0151] Um único tratamento de aerossol LPS induziu um influxo de neutrófilos para o pulmão em animais tratados com veículo. O pré-tratamento com 1 mg/ kg do anticorpo anti-CXCR2 BKO-4A8-101c inibiu marcadamente a neutrofilia pulmonar induzida por LPS em macacos cinomólogos, como ilustrado na FIG. 14A. O tratamento foi bem tolerado sem perda de peso corporal. O tratamento com BKO-4A8-101c não induziu alterações mensuráveis nas contagens de neutrófilos no sangue após a repetição da dosagem de anticorpos, como ilustrado na FIG. 14B.

[0152] A sinalização do CXCR2 está envolvida no movimento dos neutrófilos para fora da medula óssea e para os tecidos periféricos em resposta às quimiocinas produzidas por células residentes no tecido após estresse, lesão ou infecção. CXCR2 se liga a múltiplas quimiocinas implicadas no recrutamento de neutrófilos e inflamação crônica, incluindo CXCL1, CXCL5 e CXCL8. Essas quimiocinas também estão elevadas em pacientes com asma neutrofílica grave e COPD. BKO-4A8-101c mostrou ser um antagonista potente e específico da sinalização mediada por CXCR2. Sem desejar ser limitado por qualquer mecanismo de ação proposto, com base em seu perfil in vitro e sua potência no macaco cinomólogos, a atividade antiinflamatória de BKO-4A8-101c parece ser mediada via antagonismo de CXCL1 e mediado por CXCL5 Sinalização CXCR2. Estes dados suportam o conceito de que o receptor CXCR2 é o receptor de quimiocina predominante que controla a migração de neutrófilos para os pulmões em condições inflamatórias e são consistentes com a falta de eficácia marcada de um anticorpo anti-CXCL8 neutralizante humanizado administrado a pacientes com DPOC (conforme discutido em MAHLER, D. A., et al., Efficacy and safety of a monoclonal antibody recognizing interleukin-8 in COPD: a pilot study. Chest, (2004) 126, 926-34), uma abordagem que inibiria apenas parcialmente o eixo inflamatório CXCR1/ CXCR2. Um componente da atividade anti-inflamatória de BKO-4A8-101c pode ser mediado por células endoteliais e epiteliais, porque a expressão de CXCR2 nesses tipos de células também foi implicada no recrutamento de neutrófilos e lesão pulmonar (conforme discutido em REUTERSHAN, J., et al., Critical role of endothelial CXCR2 in LPS-induced neutrophil migration into the lung. J Clin Invest, (2006) 116, 695-702). A eficácia in vivo demonstrada de BKO-4A8-101c na inibição da migração de neutrófilos do pulmão em resposta ao desafio de LPS sem afetar os números de neutrófilos circulantes ou quaisquer outros parâmetros de segurança medidos pode ser uma consequência de sua especificidade requintada e atividade antagonista seletiva. Exemplo 12 - Anticorpo anti-CXCR2 ocupa eficientemente o receptor CXCR2 e suprime seletivamente as respostas de neutrófilos mediadas por CXCR2

[0153] Os ensaios de ocupação do receptor medem a ligação de uma molécula ou fármaco específico a um receptor expresso em uma célula específica. Este é um ensaio quantitativo que pode ser usado para avaliar a ligação ao receptor e outras características farmacodinâmicas.

[0154] A ocupação do receptor foi examinada em uma linhagem celular que expressa CXCR2 humano e neutrófilos humanos enriquecidos com sangue total. Pelo menos 85% dos receptores CXCR2 estavam ocupados com 2µg/ mL de anticorpo. Esta quantidade foi suficiente para suprimir o fluxo de cálcio induzido por CXCL1 em mais de 85% em células otimizadas de cálcio do receptor de quimiocina CXCR2 humano HTS002C - CHEMISCREEN ™ (resultados não mostrados).

[0155] Embora 2 µg/ mL de anticorpo tenham sido suficientes para antagonizar eficazmente a sinalização mediada por CXCR2, essa quantidade não interferiu com as funções dos neutrófilos. Os quimioatraentes alvo C5a e fMLF ligam-se ao receptor C5a (CD88) e FPR1, respectivamente. Ambos os agentes induzem a quimiotaxia e a expressão de CD11b, um marcador amplamente aceito de ativação de neutrófilos em resposta à infecção e inflamação. O anticorpo CXCR2 não suprimiu a supraregulação de neutrófilos CD11b ou quimiotaxia em resposta a C5a e fMLF (resultados não mostrados).

[0156] 10 µg/ mL (70nM) de anticorpo CXCR2 antagonizou potente e especificamente as respostas mediadas por CXCR2 a CXCL1 (p <0,0002, FIG. 15A) e CXCL5 (p <0,0001, FIG. 15B) em neutrófilos humanos isolados (a 95%) de sangue total. O anticorpo CXCR2 a 70nM demonstrou maior potência neste ensaio do que a molécula pequena do Antagonista 5 (danirixina) usada a 1400nM. Isto se compara com relatórios anteriores que o Agonista 5 inibiu a expressão de superfície de neutrófilos ex vivo induzida por CXCL1 de CD11b com um IC50 de 69 ng/ mL [156 nM] e IC90 de 620 ng/ mL (faixa de 158-1080 ng/ mL) [1400 nM, (faixa 356 - 2443 nM)] (Miller et al. “The pharmacokinetics and pharmacodynamics of danirixin (GSK1325756) − a selective CXCR2 antagonist − in healthy adult subjects” BMC Pharmacology and Toxicology 2015; 16).

[0157] Nem o CXCR2 nem o Antagonista 5 impactaram significativamente a resposta dos neutrófilos ao CXCL8 neste ensaio (FIG. 15C). CXCL8 se liga a CXCR1 e CXCR2.

[0158] Estes dados demonstram que o anticorpo CXCR2 é um inibidor potente e seletivo de CXCR2 em neutrófilos humanos.

[0159] Aqueles versados na técnica apreciarão que numerosas mudanças e modificações podem ser feitas nas modalidades preferencias da invenção e que tais mudanças e modificações podem ser feitas sem se afastar do escopo da invenção. Pretende-se, portanto, que as reivindicações anexas cubram todas as variações equivalentes que caiam dentro do verdadeiro alcance e escopo da invenção.

[0160] As divulgações de cada patente, pedido de patente e publicação citada ou descrita neste documento são incorporadas neste documento por referência, em sua totalidade.

MODALIDADES

[0161] A seguinte lista de modalidades se destina a complementar, em vez de deslocar ou substituir, as descrições anteriores. Modalidade 1. Molécula de anticorpo humano que se liga imunoespecificamente ao CXCR2 humano, caracterizado pelo fato de que a molécula de anticorpo compreende: a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NO: 167 e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 da SEQ ID NO: 168; ou a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NO: 226 e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 da SEQ ID NO: 227 e em que a molécula de anticorpo inibe a ativação induzida por CXCL1 de CXCR2 ou ativação induzida por CXCL5 de CXCR2. Modalidade 2. A molécula de anticorpo humano da modalidade 1, em que: a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 169, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 170, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 171, a CDR1 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 172, a CDR2 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 173, e a CDR3 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 174; ou a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 228, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 229, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 230, a CDR1 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 201, a CDR2 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 231, e a CDR3 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 232 Modalidade 3. A molécula de anticorpo humano de acordo com a modalidade 1 ou 2, em que: a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 167 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 168; ou a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 226 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 227. Modalidade 4. A molécula de anticorpo humano da modalidade 3, em que: a) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; b) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; c) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 100 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; d) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 101 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; e) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 102 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110;

f) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 103 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; g) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 104 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; h) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 105 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; i) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 106 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; j) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 107 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; k) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 108 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; l) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 162 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; m) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 163 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; n) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 164 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; o) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 165 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; ou p) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 166 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110. Modalidade 5. A molécula de anticorpo humano da modalidade 4, em que: a) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 108 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; b) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 162 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; c) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 163 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; d) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 164 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; e) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 165 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; ou f) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 166 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110. Modalidade 6. A molécula de anticorpo humano, de acordo com a modalidade 1 ou 2, em que a cadeia pesada CDR1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 192, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 195, a CDR1 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 201, a CDR2 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

205, e a CDR3 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 213. Modalidade 7. A molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 6, em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 108 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

110. Modalidade 8. A molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 7, em que o anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1 humana. Modalidade 9. A molécula de anticorpo humano, de acordo com a modalidade 8, em que a região constante da cadeia pesada de IgG1 humana compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 122 ou 124. Modalidade 10. A molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 7, em que o anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG2 humana. Modalidade 11. A molécula de anticorpo humano, de acordo com a modalidade 10, em que a região constante da cadeia pesada de IgG2 humana compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 120. Modalidade 12. A molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 7, em que o anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG4 humana. Modalidade 13. A molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 12, em que a molécula de anticorpo é um fragmento Fab, um fragmento F(ab)2 ou um anticorpo de cadeia única. Modalidade 14. Uma composição farmacêutica que compreende a molécula de anticorpo humano definida de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13.

Modalidade 15. Uma molécula de ácido nucleico que codifica a molécula de anticorpo humano, definida de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13. Modalidade 16. Um vetor que compreende a molécula de ácido nucleico, definida de acordo com a modalidade 15. Modalidade 17. Uma célula transformada para expressar a molécula de anticorpo humano definida de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13. Modalidade 18. Um método de tratamento ou prevenção de neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda em um indivíduo, o método que compreende: administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz da molécula de anticorpo humano definida de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13 ou a composição farmacêutica definida de acordo com a modalidade 14 para prevenir ou tratar a neutrofilia das vias aéreas ou inflamação aguda do pulmão.

Modalidade 19. Um método, de acordo com a modalidade 18, em que a neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda ou ambas são doença pulmonar obstrutiva crônica, asma neutrofílica grave ou ambas.

Modalidade 20. A molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13, ou composição farmacêutica, de acordo com a modalidade 14, para uso como medicamento.

Modalidade 21. A molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13, ou composição farmacêutica, de acordo com a modalidade 14 para uso na prevenção ou tratamento de neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda.

Modalidade 22. Uso da molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13 ou a composição farmacêutica, de acordo com a modalidade 14, na preparação de um medicamento para a prevenção ou tratamento de neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda.

Modalidade 23. O uso, de acordo com qualquer uma das modalidades 21 ou 22, em que a neutrofilia das vias aéreas, inflamação pulmonar aguda ou ambas são doença pulmonar obstrutiva crônica, asma neutrofílica grave ou ambas.

Modalidade 24. Um método para bloquear a quimiotaxia de neutrófilos que compreende a exposição de neutrófilos ao anticorpo humano definido de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13. Modalidade 25. O método, de acordo com a modalidades 24, em que a quimiotaxia é a migração de neutrófilos para o pulmão.

Modalidade 26. Um método para bloquear a sinalização de CXCR2 em resposta a CXCR1 e/ou CXCR5, em uma célula que expressa a sinalização de CXCR2, que compreende a exposição de células ao anticorpo humano definido de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13.

Tabela 19. Sequências Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência BKO-1A1 SEQ ID NO: 1 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGG SEQ ID NO: 2 SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSL

SIRTSSYYWGWIRQPPGKGLEYIGSIYY RYYYASWYQQKPGQAPVLVIYDENSR (BKO_1A1_VH) SGTTYYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSL (BKO_1A1_VL) PSGIPDRFSGSSSGNTASLSITGTQAE

KMSSVTAADSAVYYCARHGRVREVPP DEADYYCNSRDTSGNHWAFGGGTKLT

FDYWGQGTLVTVSS VL BKO-1B10 SEQ ID NO: 3 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGG SEQ ID NO: 4 SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSL

SIRTSSYYWGWIRQPPGKGLEYIGSIYY RYYYASWYQQKPGQAPVLVIYDENSR (BKO_1B10_VH SGTTYYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSL (BKO_1B10_VL) PSGIPDRFSGSSSGNTASLRITGTQAE ) KLSSVTAADTAVYYCARHGRVREVPPF DEADYYCNSRDTSGNHWAFGGGTKLT

DYWGQGTLVTVSS VL BKO-1D1 SEQ ID NO: 5 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASKL SEQ ID NO: 6 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSS

TFKNSAMSWVRQAPGKGLEWVSAITG DVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEV (BKO_1D1_VH) SGGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY (BKO_1D1_VL) NKRPSGVPARFSGSKSGNTASLTVSG

LQMNSLRAEDTAIYYCAIQMGYWGQGI LQAEDEADYYCSSYAGSNNFGVFGGG

LVTVSS TKLTVL BKO-1H3 SEQ ID NO: 7 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 8 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSS

TLSRSSTSWVRQTPGKGLEWVSAISGS DVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDV (BKO_1H3_VH) GGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYL (BKO_1H3_VL) SNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGL

QMNSLRAEDTAVYYCAIQLGYWGQGIL QAEDEADYYCSSYTSSSTWVFGGGTK VTVSS LTVL

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência BKO-2D8 SEQ ID NO: 9 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG SEQ ID NO: 10 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSS

YTFTSSTMSWVRQAPGKGLEWVTAIS DIGGYNYVSWYQQHPGKAPKLVIYEVN (BKO_2D8_VH) GRGGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTL (BKO_2D8_VL) MRPSGVPARFSGSKSGNTASLTVSGL

YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQLGNWGQ QAEDEADYYCSSYAGNDNFGVFGGGT

GILVTVSS KLSVL BKO-3A9_b SEQ ID NO: 11 QVQVQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGD SEQ ID NO: 12 QSALTQPASASGSPGQSITISCTGTSS

SVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRT DVGNYNRVSWYQQHPGKVPKLMIYEG (BKO_3A9_VH) YYRSKWYNDYAVSLKRRITIRPDTSRN (BKO_3A9_L3_E SKRPSGISNRFSGSKSGNTASLTISGL HFSLHLSSVTPEDTAVYYCVRAYCGGG 03_VL) QPEDEADYFCCSYAGSNTLVFGGGTK

SCLDYWGQGTLVTVSS LTVL BKO-3D6 SEQ ID NO: 13 EVQLVESGGDLVQPGRSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 14 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKL

TFDDYAMHWVRQAPGKGLKWVSGITW GDKYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKR (BKO_3D6_VH) NSGNKRYADSVKGRFTISRDNAKNSLY (BKO_3D6_L6_G PSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAM LQMNSLRAEDTALYYCAKDMKGSGTY 06_VL DEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVL FPAFDYWGQGTLVTVSS (BKO_5H4_VL)) BKO-3F4 SEQ ID NO: 15 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGL SEQ ID NO: 16 QSALTQPPSASGSPGQSVTMSCTGTS (BKO_3F4_VH) TFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISG (BKO_3F4_L11_ SDVGGYNYVTWYQQHPGKAPKLMIYE SGGKIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYL A11_VL) VSKRPSGVPARFSGSKSGNTASLTVS

QMNSLRAEDTAVYYCAIQVGYWGQGT GLQAEDEADYYCSSYAGPNNFGVFGG

LVTVSS GTKLTVL BKO-4A8 SEQ ID NO: 17 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 18 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS

TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV (BKO_4A8_VH) RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (BKO_4A8_VL) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência

LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG LQAEDEADYYCSSYAGNNNFGVFGGG

ILVTVSS TKLTVL BKO-4F10 SEQ ID NO: 19 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG SEQ ID NO: 20 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSS

YTFTGYYIHWVRQAPGQGLEWMGRFN DVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDV (BKO_4F10_VH PNNGGTNYAQRFQGRVTMTRDTSISTA (BKO_4F10_VL) SNRPSGISNRFSGSKSGNTASLTISGL ) YMELSRLRSDDTAVYYCARGPTIRLWF QAEDEADYYCSSYTSSSTWVFGGGTK

DNWFDSWGQGTLVTVSS LTVL BKO-5E8 SEQ ID NO: 21 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 22 SYELTQPPSVSVSPGQTANITCSGDTL

TFSSYAMSWVRQAPGRGLEWVSAIRG GDKFACWYQQKPGQSPVLVIYQDTKR (BKO_5E8_H5_ SGAGTYYADSMKGRFTISRDNSKDTLY (BKO_5E8_L3_C PSGIPERFSGSKSGITATLTISGTQAMD C05_VH) LLMNSLRAEDTAVYYCSKLEAVSGTGK 03_VL) EADFYCQAWNSRGVVFGGGTRLTVL

YFQHWGQGTLVTVSS BKO-5G11 SEQ ID NO: 23 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGF SEQ ID NO: 24 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSS

TFSNYAMTWVRQAPGKGLEWVSAISG DVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIFEV (BKO_5G11_V RGSRTYYADSVKGRFTISRDTSKNTLYL (BKO_5G11_VL) SKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG H) QMNSLRAEDTAVYYCAKMDYWGQGTL LQAEDEADYYCSSYAGSNNFGVFGGG

VTVSS TKLTVL BKO-5G6_c SEQ ID NO: 25 QVQLVQSGAEVTKPGASVKVSCKASG SEQ ID NO: 26 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSS

YTFTGYYIHWVRQAPGQGLEWMGRFN DVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDV (BKO_5G6_VH) PNNGGTNYAQRFQGRVTMTRDTSISTA (BKO_5G6_L12_ SNRPSGISNRFSGSKSGNTASLTISGL YMELSRLRSDDTAVYYCARGPTIRLWF E12_VL) QAEDEADYYCSSYTSSSTWVFGGGTT

DNWFDSWGQGTLVTVSS LTVL

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência BKO-6A1_b SEQ ID NO: 27 QVQLKQWGAGLLKPSETLSLTCAVYG SEQ ID NO: 28 SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSL

GSFSGYYWTWIRQPPGKGLEWIGEINH RSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNR (BKO_6A1_H4_ SGSTNYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSL (BKO_6A1_E10_ PSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAE A04_VH) KLRSVTAADTAVYYCARGEVRGLITLY VL) DEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLT

WYFDVWGRGSLVTVSS VL BKO-6A2_a SEQ ID NO: 29 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASG SEQ ID NO: 30 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKL

FTFSTYDIHWVRQAPGKGLEWVAVIWY GDKYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKR (BKO_6A2_H1_ DGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY (BKO_6A2_L6_A PSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAM B01_VH) LQMNSLRAEDTAVYYCARDEGYNYGY 06_VL) DEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVL

GGYWGQGTLVTVSS BKO-7C11 SEQ ID NO: 31 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYG SEQ ID NO: 32 SSELTQGPAVSVALGQTVRITCQGNSL

GSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEINH RFYYASWYQQRPGQAPILVIYDKNNRP (BKO_7C11_H6 SRNTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLK (BKO_7C11_G01 SGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAED _B06_VH) LSSVTAADTAVYYCARGEVRGVFTLYW _VL) EADYYCNSRDSSGYYMIFGGGTKLTVL

YFDVWGRGTLVTVSS BKO-7G10_a SEQ ID NO: 33 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGF SEQ ID NO: 34 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSS

TFSNYAMTWVRQAPGKGLEWVSAISG DVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIFEV (BKO_7G10_H1 RGSRTYYADSVKGRFTISRDTSKNTLYL (BKO_7G10_L6_ SKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG _B01_VH) QMNSLRAEDTAVYYCAKMDYWGQGTL E06_VL) LQAEDEADYYCSSYAGSNNFGVFGGG

VTVSS TKLTVL BKO-7H8_b SEQ ID NO: 35 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG SEQ ID NO: 36 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSS

YTFTSSTMSWVRQAPGKGLEWVTAIS DIGGYNYVSWYQQHPGKAPKLVIYEVN (BKO_7H8_H3_ GRGGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTL (BKO_7H8_L10_ MRPSGVPARFSGSKSGNTASLTVSGL C03_VH) F10_VL)

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência

YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQLGNWGQ QAEDEADYYCSSYAGNDNFGVFGGGT

GILVTVSS KLSVL BKO-8B6 SEQ ID NO: 37 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 38 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSS

TFSSNAMSWVRQAPGKGLEWVSAISN DVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMMYE (BKO_8B6_VH) SGRSTYYADSVKGRFTISRDSSKNTLYL (BKO_8B6_VL) VSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVS

LMNSLRAEDSAVYYCAIKLGYWGQGSL GLQAEDEADYYCSSYAGSDNFGVFGG

VTVSS GTRLTVL BKO-8C4 SEQ ID NO: 39 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGG SEQ ID NO: 40 SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSL

SIRTSSYYWGWIRQPPGKGLEYIGSIYY RYYYASWYQQKPGQAPVLVIYDENSR (BKO_8C4_VH) SGTTYYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSL (BKO_8C4_VL) PSGIPDRFSGSSSGNTASLRITGTQAE

KLSSVTAADTAVYYCARHGRVREVPPF DEADYYCNSRDTSGNHWAFGGGTKLT

DYWGQGTLVTVSS VL BKO-8G3_b SEQ ID NO: 41 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 42 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSS

TFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAITG DVGGYNYVSWYQQHPGKVPKLVIYEV (BKO_8G3_H4_ SGGSTYYADSVKGRFTISRDKSKNTLY (BKO_8G3_L1_G SKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG D04_VH) LQMNSLRAEDTAVYYCAIRLGYWGQG 01_VL) LQAEDEADYYCSSYAGSNNFGVFGGG

SLVTVSS TKLTVL BKO-8H10 SEQ ID NO: 43 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG SEQ ID NO: 44 QSALTQPPSASGSPGQSVTISFTGTSR

YTFTGYYIHWVRQAPGQGLEWMGRIK DVGDYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEV (BKO_8H10_VH PDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSITTA (BKO_8H10_VL) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG ) YMELSRLRSDDTAVYYCARGGSGWDY LQAEDEADYYCSSYAGSNTYVFGTGT

WGQGTLVTVSS KVTVL BKO-8H8_b SEQ ID NO: 45 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGL SEQ ID NO: 46 QSALTQPPSASGSPGQSVTMSCTGTS

TVSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISG SDVGGYNYVTWYQQHPGKAPKLVIYE

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência (BKO_8H8_H5_ SGGKIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYL (BKO_8H8_L7_H VSKRPSGVPVRFSGSKSGNTASLTVS E05_VH) QMNSLSAEDTAVYYCAIQVGYWGQGT 08_VL) GLQAEDEADYYCSSYAGPNNFGIFGG

LVTVSS GTKLTVL BKO-9A8 SEQ ID NO: 47 EVQLLESGGGLVQTGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 48 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSS

TFSSNTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG DVGAYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEV (BKO_9A8_H3_ SGGRTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLY (BKO_9A8_L1_H TKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG F03_VH) LQMHSLRAEDTAVYYCAIQLGSWGQGI 02_VL) LQAEDEADYYCSSYAGNNNFGVFGGG

LVTVSS TKLTVL BKO-9C3_a SEQ ID NO: 49 EVQVLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG SEQ ID NO: 50 QSALTQPPSASGSPGQSVIISCTGTSS

FTFRSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS DVGGYNYVSWYQQHPGKVPKLMIYEV (BKO_9C3_H8_ GSGGSTYYADSVKGRFTISRDKSKNTL (BKO_9C3_L1_F SKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG G08_VH) YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQLGYWGQ 01_VL) LQAEDEADYYCTSYAGSNNFGVFGGG

GTLVTVSS TKLTVL BKO-10G10 SEQ ID NO: 51 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGG SEQ ID NO: 52 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSS

SIRRSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSFY DVGGYNYVSWCQQHPGKAPKIMIFDV (BKO_10G10_V NSGNTYYKPSLKSRVAISVDTPKNQFSL (BKO_10G10_VL SNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGL H) KLSSVTAADTAVYYCARGYSSGGFDP ) QAEDEADYYCSSYTSSSTWVFGGGTR

WGQGTLVTVSS LTVL Variantes BKO-4A8 simples aa SEQ ID NO: 53 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 54 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG

TFSSQTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSHTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS (4A8 VH S32Q) RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH S32H) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL

LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ

ILVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: 55 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 56 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG

TFSSLTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSWTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência (4A8 VH S32L) RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH S32W) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL

LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ

ILVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: 57 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 58 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG

TFSSYTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS (4A8 VH S32Y) RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH T33A) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL

LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ

ILVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: 59 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 60 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG

TFSSSTQSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTDSWVRQAPGKGLEWVSAIS (4A8 VH M34Q) RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH M34D) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL

LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ

ILVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: 61 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 62 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG

TFSSSTHSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTWSWVRQAPGKGLEWVSAIS (4A8 VH M34H) RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH M34W) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL

LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ

ILVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: 63 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 64 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG

TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAHSG FTFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS (4A8 VH I51H) RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH G52aD) DRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL

LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ

ILVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: 65 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 66 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG

TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS (4A8 VH R53S) SGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH R53Q) GQGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL

LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ ILVTVSS GILVTVSS

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência SEQ ID NO: 67 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 68 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG

TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS (4A8 VH G54D) RDRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH N56S) GRGRSTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL

LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ

ILVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: 69 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 70 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG

TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS (4A8 VH I94K) RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH M96A) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL

LQMNSLRAEDTAVYYCAKQMGYWGQ YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQAGYWGQ

GILVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: 71 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 72 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG

TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS (4A8 VH M96Q) RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH M96K) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL

LQMNSLRAEDTAVYYCAIQQGYWGQGI YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQKGYWGQ

LVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: 73 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 74 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG

TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS (4A8 VH RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH Y102S) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL G101D) LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMDYWGQGI YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGSWGQ

LVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: 75 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 76 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS

TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYDV (4A8 VH RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VL E50D) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG Y102K) LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGKWGQG LQAEDEADYYCSSYAGNNNFGVFGGG

ILVTVSS TKLTVL SEQ ID NO: 77 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 78 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS

VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVD DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV (4A8 VL N52D) KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL N52S) SKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência

AEDEADYYCSSYAGNNNFGVFGGGTK LQAEDEADYYCSSYAGNNNFGVFGGG

LTVL TKLTVL SEQ ID NO: 79 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 80 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS

VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV (4A8 VL K53A) ARPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL K53D) NDRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG

AEDEADYYCSSYAGNNNFGVFGGGTK LQAEDEADYYCSSYAGNNNFGVFGGG

LTVL TKLTVL SEQ ID NO: 81 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 82 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS

VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV (4A8 VL K53H) HRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGL (4A8 VL R54Q) NKQPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG

QAEDEADYYCSSYAGNNNFGVFGGGT LQAEDEADYYCSSYAGNNNFGVFGGG

KLTVL TKLTVL SEQ ID NO: 83 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 84 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS

VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV (4A8 VL Y91A) KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL N94A) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG

AEDEADYYCSSAAGNNNFGVFGGGTK LQAEDEADYYCSSYAGANNFGVFGGG

LTVL TKLTVL SEQ ID NO: 85 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 86 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS

VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV (4A8 VL N94S) KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL N94K) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG

AEDEADYYCSSYAGSNNFGVFGGGTK LQAEDEADYYCSSYAGKNNFGVFGGG

LTVL TKLTVL SEQ ID NO: 87 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 88 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS

VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV (4A8 VL N94L) KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL N94W) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG

AEDEADYYCSSYAGLNNFGVFGGGTK LQAEDEADYYCSSYAGWNNFGVFGG

LTVL GTKLTVL SEQ ID NO: 89 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 90 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS

VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência (4A8 VL N94Y) KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL N95aQ) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG

AEDEADYYCSSYAGYNNFGVFGGGTK LQAEDEADYYCSSYAGNNQFGVFGGG

LTVL TKLTVL SEQ ID NO: 91 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 92 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS

VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV (4A8 VL N95aD) KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL N95aH) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG

AEDEADYYCSSYAGNNDFGVFGGGTK LQAEDEADYYCSSYAGNNHFGVFGGG

LTVL TKLTVL SEQ ID NO: 93 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 94 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS

VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV (4A8 VL N95aK) KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL N95aL) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG

AEDEADYYCSSYAGNNKFGVFGGGTK LQAEDEADYYCSSYAGNNLFGVFGGG

LTVL TKLTVL SEQ ID NO: 95 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 96 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS

VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV (4A8 VL N95aY) KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL V97A) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG

AEDEADYYCSSYAGNNYFGVFGGGTK LQAEDEADYYCSSYAGNNNFGAFGGG

LTVL TKLTVL SEQ ID NO: 97 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD

VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN (4A8 VL V97K) KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ

AEDEADYYCSSYAGNNNFGKFGGGTK

LTVL Variantes combinatórias BKO-4A8 SEQ ID NO: 98 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 99 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG

TFSSSTQSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTQSWVRQPPGKGLEWVSAIS (4A8 VH RGRSTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH Variante GRGRSTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL Variante 1 LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG 2 YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ (M34Q_N56S)) ILVTVSS GILVTVSS

Identificador SequênciaIdentificador de Sequência de Sequência Sequência (M34Q_A40P_N5 6S)) SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 101 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 100 TFSSSTQSWVRQPPGKGLEWVSAISG FTFSSSTQSWVRQPPGKGLEWVSAIS RGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY (4A8 VH Variante GRGRSTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL (4A8 VH LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG 4 YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQKGYWGQ Variante 3 ILVTVSS (M34Q_A40P_N5 GILVTVSS (M34Q_A40P_N 6S_M96K)) 56S_R75K)) SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 103 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 102 TFSSSTQSWVRQPPGKGLEWVSAISG FTFSSSTQSWVRQPPGKGLEWVSAIS RGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY (4A8 VH Variante GRGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTL (4A8 VH LQMNSLRAEDTAVYYCAIQKGYWGQGI 6 YLQMNSLRAEDTAVYYCAKQKGYWG Variante 5 LVTVSS (M34Q_A40P_N5 QGILVTVSS (M34Q_A40P_N 6S_R75K_I94K_ 56S_R75K_M96 M96K)) K)) SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 105 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 104 TFSSSTQSWVRQPPGKGLEWVSAISG FTFSSSTQSWVRQAPGKGLEWVSAIS RGRSTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH Variante GRGRSTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL (4A8 VH LQMNSLRAEDTAVYYCAKQKGYWGQG 8 YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQKGYWGQ Variante 7 ILVTVSS (M34Q_N56S_M GILVTVSS (M34Q_A40P_N 96K)) 56S_I94K_M96 K)) SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 107 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 106 TFSSSTQSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS RGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY (4A8 VH Variante GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL 10 (I94K_M96K))

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência (4A8 VH LQMNSLRAEDTAVYYCAIQKGYWGQGI YLQMNSLRAEDTAVYYCAKQKGYWG Variante 9 LVTVSS QGILVTVSS (M34Q_N56S_ R75K_M96K)) SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 109 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS 108 TFSSSTQSWVRQPPGKGLEWVSAISG DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV RGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY (4A8 VL variant b SKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG (4A8 VH LQMNSLRAEDTAVYYCAIQAGYWGQGI N52S_N94S) LQAEDEADYYCSSYAGSNNFGVFGGG Variante 101 LVTVSS TKLTVL (M34Q_A40P_N 56S_R75K_M96 A)) SEQ ID NO: QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 111 GAAGTTCAGCTGCTTGAATCTGGCGG 110 VGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVS AGGACTGGTTCAGCCTGGCGGATCT KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VH CTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCG (4A8 VL variant AEDEADYYCSSYAGSNNFGVFGGGTK M34Q_A40P_N5 GCTTCACCTTTAGCAGCAGCACACAG c LTVL 6S_R75K_M96A) AGCTGGGTCCGACAGCCTCCTGGCA D41G_N52S_N AAGGACTGGAATGGGTGTCCGCCAT 94S) CTCTGGCAGAGGCAGAAGCACCTAC

TACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATT CACCATCAGCCGGGACAACAGCAAG AACACCCTGTACCTGCAGATGAACAG CCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTG TACTATTGTGCCATCCAGGCCGGCTA TTGGGGCCAGGGAATACTCGTGACA

GTGTCCTCA SEQ ID NO: CAGTCTGCTCTGACACAGCCTCCTAG 112 CGCCTCTGGCTCTCCTGGCCAGAGC

GTGACCATCAGCTGTATCGGCACCAG

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência (4A8 VL CAGCGACGTGGGCGGCTACAACTAC D41G_N52S_N GTGTCCTGGTATCAGCAGCACCCCGg 94S) TAAGGCCCCCAAGCTGATGATCTACG

AAGTGTCCAAGCGGCCCAGCGGCGT GCCCGATAGATTCAGCGGCAGCAAG AGCGGCAACACCGCCAGCCTCACAG TGTCTGGACTGCAGGCCGAGGACGA

GGCCGACTACTACTGTAGCAGCTACG CCGGCAgCAACAACTTCGGCGTGTTC

GGCGGAGGCACCAAGCTGACAGTCC

TA BKO-4A8-mIgG1 SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 114 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS 113 TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (BKO-4A8-mIgG1 NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG (BKO-4A8- LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG VL) LQAEDEADYYCSSYAGNNNFGVFGGG mIgG1 VH) ILVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNS TKLTVLGQPKSSPSVTLFPPSSEELET

MVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSS NKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTP GVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSPR VTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTL PSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDC TARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSL GCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTIT SRADCS LTPKVTCVVVAISKDDPEVQFSWFVDD VEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPI MHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKT ISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKV SLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAEN YKNTQPIMNTNGSYFVYSKLNVQKSNW EAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHS PG

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência Variante de cadeia pesada BKO-4A8 SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 116 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC 115 TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (IgG4*) AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY (BKO-4A8 LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP IgG4*) ILVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSES PCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLYITR

TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS EPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDG GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS VEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTV LGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKY LHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT GPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKN TLYITREPEVTCVVVDVSQEDPEVQFN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE WYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRV NNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKS VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLP RWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEE SLSLG MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLT VDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSLG SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 118 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC 117 TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (IgG4) AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY (BKO-4A8 IgG4) LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP

ILVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSES PCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMIS TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS RTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVD GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS GVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLT LGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKY VLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEK GPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKN TLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE WYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRV NNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKS

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência

VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLP RWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEE SLSLG MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLT VDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSLG SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 120 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC 119 TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (IgG2*) AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTY (BKO-4A8 LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG TCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECP IgG2*) ILVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSES PCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISR

TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS TPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDG GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSN VEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTV FGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKC VHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEK CVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDT TISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNW QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE YVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVS NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKS VLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS RWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS SIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEM LSLSPG TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 122 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGC 121 TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (IgG1*) AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI (BKO-4A8 LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHT IgG1*) ILVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG CPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLM

TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS ISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência

GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSV LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKS LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI CDKTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPK EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELT PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP QKSLSLSPG SRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL

HNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 124 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGC 123 TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (IgG1) AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI (BKO-4A8 IgG1) LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHT

ILVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS ISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSV LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKS LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI CDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELT PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP QKSLSLSPG SRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPG

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência Sequências CXCR SEQ ID NO: MEDFNMESDSFEDFWKGEDLSNYSYS SEQ ID NO: 126 MGEFKVDKFNIEDFFSGDLDIFNYSSG 125 STLPPFLLDAAPCEPESLEINKYFVVIIY MPSILPDAVPCHSENLEINSYAVVVIYV ALVFLLSLLGNSLVMLVILYSRVGRSVT (Mouse CXCR2) LVTLLSLVGNSLVMLVILYNRSTCSVTD (CXCR2 DVYLLNLALADLLFALTLPIWAASKVNG VYLLNLAIADLFFALTLPVWAASKVNG humano) WIFGTFLCKVVSLLKEVNFYSGILLLACI WTFGSTLCKIFSYVKEVTFYSSVLLLAC

SVDRYLAIVHATRTLTQKRYLVKFICLSI ISMDRYLAIVHATSTLIQKRHLVKFVCIA WGLSLLLALPVLLFRRTVYSSNVSPAC MWLLSVILALPILILRNPVKVNLSTLVCY YEDMGNNTANWRMLLRILPQSFGFIVP EDVGNNTSRLRVVLRILPQTFGFLVPLL LLIMLFCYGFTLRTLFKAHMGQKHRAM IMLFCYGFTLRTLFKAHMGQKHRAMRV RVIFAVVLIFLLCWLPYNLVLLADTLMRT IFAVVLVFLLCWLPYNLVLFTDTLMRTK QVIQETCERRNHIDRALDATEILGILHSC LIKETCERRDDIDKALNATEILGFLHSCL LNPLIYAFIGQKFRHGLLKILAIHGLISKD NPIIYAFIGQKFRHGLLKIMATYGLVSKE

SLPKDSRPSFVGSSSGHTSTTL FLAKEGRPSFVSSSSANTSTTL SEQ ID NO: MQSFNFEDFWENEDFSNYSYSSDLPP SEQ ID NO: 128 MVLEVSDHQVLNDAEVAALLENFSSSY 127 SLPDVAPCRPESLEINKYFVVIIYALVFL DYGENESDSCCTSPPCPQDFSLNFDR LSLLGNSLVMLVILHSRVGRSITDVYLLN (CXCR3 AFLPALYSLLFLLGLLGNGAVAAVLLSR (cinomólogos LAMADLLFALTLPIWAAAKVNGWIFGTF hu RTALSSTDTFLLHLAVADTLLVLTLPLW CXCR2) LCKVVSLLKEVNFYSGILLLACISVDRYL ma AVDAAVQWVFGSGLCKVAGALFNINFY AIVHATRTLTQKRYLVKFVCLSIWSLSLL no) AGALLLACISFDRYLNIVHATQLYRRGP

LALPVLLFRRTVYLTYISPVCYEDMGNN PARVTLTCLAVWGLCLLFALPDFIFLSA TAKWRMVLRILPQTFGFILPLLIMLFCYG HHDERLNATHCQYNFPQVGRTALRVL FTLRTLFKAHMGQKHRAMRVIFAVVLIF QLVAGFLLPLLVMAYCYAHILAVLLVSR LLCWLPYHLVLLADTLMRTRLINETCQR GQRRLRAMRLVVVVVVAFALCWTPYH RNNIDQALDATEILGILHSCLNPLIYAFIG LVVLVDILMDLGALARNCGRESRVDVA QKFRHGLLKILATHGLISKDSLPKDSRP KSVTSGLGYMHCCLNPLLYAFVGVKFR SFVGSSSGHTSTTL ERMWMLLLRLGCPNQRGLQRQPSSS RRDSSWSETSEASYSGL

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência SEQ ID NO: MEGISIYTSDNYTEEMGSGDYDSMKEP SEQ ID NO: 130 MNYPLTLEMDLENLEDLFWELDRLDNY 129 CFREENANFNKIFLPTIYSIIFLTGIVGNG NDTSLVENHLCPATEGPLMASFKAVFV LVILVMGYQKKLRSMTDKYRLHLSVADL (CXCR5 PVAYSLIFLLGVIGNVLVLVILERHRQTR (CXCR4 LFVITLPFWAVDAVANWYFGNFLCKAV hu SSTETFLFHLAVADLLLVFILPFAVAEGS humano) HVIYTVNLYSSVLILAFISLDRYLAIVHAT ma VGWVLGTFLCKTVIALHKVNFYCSSLLL NSQRPRKLLAEKVVYVGVWIPALLLTIP no) ACIAVDRYLAIVHAVHAYRHRRLLSIHIT

DFIFANVSEADDRYICDRFYPNDLWVV CGTIWLVGFLLALPEILFAKVSQGHHNN VFQFQHIMVGLILPGIVILSCYCIIISKLSH SLPRCTFSQENQAETHAWFTSRFLYH SKGHQKRKALKTTVILILAFFACWLPYYI VAGFLLPMLVMGWCYVGVVHRLRQA GISIDSFILLEIIKQGCEFENTVHKWISITE QRRPQRQKAVRVAILVTSIFFLCWSPY ALAFFHCCLNPILYAFLGAKFKTSAQHA HIVIFLDTLARLKAVDNTCKLNGSLPVAI LTSVSRGSSLKILSKGKRGGHSSVSTE TMCEFLGLAHCCLNPMLYTFAGVKFRS SESSSFHSS DLSRLLTKLGCTGPASLCQLFPSWRRS

SLSESENATSLTTF SEQ ID NO: MAEHDYHEDYGFSSFNDSSQEEHQDF SEQ ID NO: 132 MDLHLFDYSEPGNFSDISWPCNSSDCI 131 LQFSKVFLPCMYLVVFVCGLVGNSLVL VVDTVMCPNMPNKSVLLYTLSFIYIFIFV VISIFYHKLQSLTDVFLVNLPLADLVFVC (CXCR7 IGMIANSVVVWVNIQAKTTGYDTHCYIL (CXCR6 TLPFWAYAGIHEWVFGQVMCKSLLGIY hu NLAIADLWVVLTIPVWVVSLVQHNQWP humano) TINFYTSMLILTCITVDRFIVVVKATKAYN ma MGELTCKVTHLIFSINLFGSIFFLTCMSV QQAKRMTWGKVTSLLIWVISLLVSLPQII no) DRYLSITYFTNTPSSRKKMVRRVVCILV

YGNVFNLDKLICGYHDEAISTVVLATQM WLLAFCVSLPDTYYLKTVTSASNNETY TLGFFLPLLTMIVCYSVIIKTLLHAGGFQ CRSFYPEHSIKEWLIGMELVSVVLGFA KHRSLKIIFLVMAVFLLTQMPFNLMKFIR VPFSIIAVFYFLLARAISASSDQEKHSSR STHWEYYAMTSFHYTIMVTEAIAYLRAC KIIFSYVVVFLVCWLPYHVAVLLDIFSIL LNPVLYAFVSLKFRKNFWKLVKDIGCLP HYIPFTCRLEHALFTALHVTQCLSLVHC YLGVSHQWKSSEDNSKTFSASHNVEA CVNPVLYSFINRNYRYELMKAFIFKYSA TSMFQL KTGLTKLIDASRVSETEYSALEQSTK

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência SEQ ID NO: MSNITDPQMWDFDDLNFTGMPPADED 133 YSPCMLETETLNKYVVIIAYALVFLLSLL

GNSLVMLVILYSRVGRSVTDVYLLNLAL (CXCR1 ADLLFALTLPIWAASKVNGWIFGTFLCK humano) VVSLLKEVNFYSGILLLACISVDRYLAIV

HATRTLTQKRHLVKFVCLGCWGLSMNL SLPFFLFRQAYHPNNSSPVCYEVLGND TAKWRMVLRILPHTFGFIVPLFVMLFCY GFTLRTLFKAHMGQKHRAMRVIFAVVLI FLLCWLPYNLVLLADTLMRTQVIQESCE RRNNIGRALDATEILGFLHSCLNPIIYAFI GQNFRHGFLKILAMHGLVSKEFLARHR

VTSYTSSSVNVSSNL Regiões constantes de cadeia leve SEQ ID NO: GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLV SEQ ID NO: 135 134 CLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVE RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVC TTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKS (Região LLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ (Região HRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS constante da ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYE constante da cadeia leve KHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE cadeia leve Kappa humano) C Lambda humana) Variantes adicionais de BKO-4A8 aa única SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 137 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 136 TFSSDTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTMQWVRQAPGKGLEWVSAIS RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH S35Q) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL (4A8 VH S32D) LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ

ILVTVSS GILVTVSS

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 139 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 138 TFSSSTMDWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTMKWVRQAPGKGLEWVSAIS RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH S35K) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL (4A8 VH S35D) LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ

ILVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 141 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 140 TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSSISG FTFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH R55Q) GRGQNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL (4A8 VH A50S) LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ

ILVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 143 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 142 TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS RGDNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH R55H) GRGHNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL (4A8 VH R55D) LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ

ILVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 145 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 144 TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH M96D) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL (4A8 VH M96S) LQMNSLRAEDTAVYYCAIQSGYWGQGI YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQDGYWGQ

LVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 147 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 146 TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH M96L) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL (4A8 VH M96H) LQMNSLRAEDTAVYYCAIQHGYWGQGI YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQLGYWGQ

LVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 149 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 148 TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH M96Y) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL (4A8 VH M96W)

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência

LQMNSLRAEDTAVYYCAIQWGYWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQYGYWGQ

ILVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 151 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 150 TFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAISG FTFSSSTMSWVRQAPGKGLEWVSAIS RGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTLY (4A8 VH Y102D) GRGRNTYYADSVKGRFTISRDNSRNTL (4A8 VH LQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGQWGQG YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGDWGQ Y102Q) ILVTVSS GILVTVSS SEQ ID NO: QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 153 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS 152 VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEDN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEY KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL V51Y) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG (4A8 VL V51D) AEDEADYYCSSYAGNNNFGVFGGGTK LQAEDEADYYCSSYAGNNNFGVFGGG

LTVL TKLTVL SEQ ID NO: QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 155 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS 154 VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV KDPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL Y91S) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG (4A8 VL R54D) AEDEADYYCSSYAGNNNFGVFGGGTK LQAEDEADYYCSSSAGNNNFGVFGGG

LTVL TKLTVL SEQ ID NO: QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 157 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS 156 VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL N94H) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG (4A8 VL Y91H) AEDEADYYCSSHAGNNNFGVFGGGTK LQAEDEADYYCSSYAGHNNFGVFGGG

LTVL TKLTVL SEQ ID NO: QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 159 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS 158 VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL N95aW) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG (4A8 VL N95aS) AEDEADYYCSSYAGNNSFGVFGGGTK LQAEDEADYYCSSYAGNNWFGVFGG

LTVL GTKLTVL

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência SEQ ID NO: QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSSD SEQ ID NO: 161 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS 160 VGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVN DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYEV KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQ (4A8 VL V97D) NKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSG (4A8 VL V97S) AEDEADYYCSSYAGNNNFGSFGGGTK LQAEDEADYYCSSYAGNNNFGDFGGG

LTVL TKLTVL Variantes combinatórias de BKO-4A8 adicionais SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 163 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 162 TFSSSTQSWVRQPPGKGLEWVSAISG FTFSSSTQSWVRQPPGKGLEWVSAIS RGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY 4A8 VH Variante GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTL 4A8 VH LQMNSLRAEDTAVYYCAIQEGYWGQGI 103 YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQMGYWGQ Variante 102 LVTVSS M34Q_A40P_ GILVTVSS M34Q_A40P_ R53S_R55G_N5 N56S_R75K_M 6S_R75K 96E SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 165 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG 164 TFSSSTQSWVRQPPGKGLEWVSAISG FTFSSSTQSWVRQPPGKGLEWVSAIS SGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY 4A8 VH Variante GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTL 4A8 VH LQMNSLRAEDTAVYYCAIQKGYWGQGI 105 YLQMNSLRAEDTAVYYCAIQAGYWGQ Variante 104 LVTVSS M34Q_A40P_ GILVTVSS M34Q_A40P_ R53S_R55G_N5 R53S_R55G_N 6S_R75K_M96A 56S_R75K_M96

K SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF 166 TFSSSTQSWVRQPPGKGLEWVSAISG

SGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY (4A8 VH LQMNSLRAEDTAVYYCAIQEGYWGQGI Variante 106 LVTVSS

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência (M34Q_A40P_R 53S_R55G_N56 S_R75K_M96E) ) Sequências de consenso SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 168 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS 167 TFSSX1X2X3SWVRQAPGKGLEWVSAX4 DVGGYNYVSWYQQHPDKAPKLMIYX13 SX5X6X7RX8TYYADSVKGRFTISRDNSR (VL de consenso VX14X15X16PSGVPDRFSGSKSGNTASL (VH de NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAX9QX10X1 4A8) TVSGLQAEDEADYYCSSX17AGX18NX19 consenso 4A8) 1X12WGQGILVTVSS FGX20FGGGTKLTVL em que: em que: X1 é S, Q, H, L, W ou Y; X2 é T ou A; e X13 é E ou D; X14 é N, D ou S; X15 é K, X3 é M, Q, D, H ou W A, D ou H; e X 16 é R ou Q X4 é I ou H; X5 é G ou D; X6 é R, S ou Q; X17 é Y ou A; X18 é N, A, S, K, L, W ou Y; X7 é G ou D; e X8 é N ou S X19 é N, Q, D, H, K, L ou Y; e X20 é V, A X9 é I ou K, ou K X10 é M, A, Q ou K; X11 é G ou D; X12 é Y, S ou K SEQ ID NO: SX1X2X3S em que: X1 é S, Q, H, L, W ou SEQ ID NO: 170 AX4SX5X6X7RX8TYYADSVKG em que: 169 Y; X2 é T ou A; e X3 é M, Q, D, H ou W (VH de consenso X4 é I ou H; X5 é G ou D; X6 é R, S ou Q; (VH de CDR2) X7 é G ou D; e X8 é N ou S consenso CDR1) SEQ ID NO: QX10X11X12 em que X10 é M, A, Q ou K; SEQ ID NO: 172 IGTSSDVGGYNYVS 171 X11 é G ou D; e X12 é Y, S ou K (VH de consenso (VH de CDR1) consenso CDR3)

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência SEQ ID NO: X13VX14X15X16PS em que: X13 é E ou D; SEQ ID NO: 174 SSX17AGX18NX19FGX20 em que: X17 é Y 173 X14 é N, D ou S; X15 é K, A, D ou H; e X (VH de consenso ou A; X18 é N, A, S, K, L, W ou Y; X19 é (VH de 16 é R ou Q CDR3) N, Q, D, H, K, L ou Y; e X20 é V, A ou K consenso CDR2) Sequências CDR SEQ ID NO: SSTMS SEQ ID NO: 176 SQTMS 175 (4A8 S32Q (4A8 VHCDR1) VHCDR1) SEQ ID NO: SHTMS SEQ ID NO: 178 SLTMS 177 (4A8 S32L (4A8 S32H VHCDR1) VHCDR1) SEQ ID NO: SWTMS SEQ ID NO: 180 SYTMS 179 (4A8 S32Y (4A8 S32W VHCDR1) VHCDR1) SEQ ID NO: SSAMS SEQ ID NO: 182 SSTQS 181 (4A8 M34Q (4A8 T33A VHCDR1) VHCDR1) SEQ ID NO: SSTDS SEQ ID NO: 184 SSTHS 183 (4A8 M34H (4A8 M34D VHCDR1) VHCDR1) SEQ ID NO: SSTWS SEQ ID NO: 186 AISGRGRNTYYADSVKG 185 (4A8 VHCDR2) (4A8 M34W VHCDR1)

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência SEQ ID NO: AHSGRGRNTYYADSVKG SEQ ID NO: 188 AISDRGRNTYYADSVKG 187 4A8 G52aD 4A8 I51H VHCDR2 VHCDR2 SEQ ID NO: AISGSGRNTYYADSVKG SEQ ID NO: 190 AISGQGRNTYYADSVKG 189 4A8 R53Q 4A8 R53S VHCDR2 VHCDR2 SEQ ID NO: AISGRDRNTYYADSVKG SEQ ID NO: 192 AISGRGRSTYYADSVKG 191 4A8 N56S 4A8 G54D VHCDR2 VHCDR2 SEQ ID NO: AISGSGGSTYYADSVKG SEQ ID NO: 194 QMGY 193 4A8 VHCDR3 4A8 103,104, 105 VHCDR2 SEQ ID NO: QAGY SEQ ID NO: 196 QQGY 195 4A8 M96Q 4A8 M96A VHCDR3 VHCDR3 SEQ ID NO: QKGY SEQ ID NO: 198 QMDY 197 4A8 G101D 4A8 M96K VHCDR3 VHCDR3 SEQ ID NO: QMGS SEQ ID NO: 200 QMGK 199 4A8 Y102K 4A8 Y102S VHCDR3 VHCDR3

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência SEQ ID NO: IGTSSDVGGYNYVS SEQ ID NO: 202 EVNKRPS 201 4A8 VLCDR2 4A8 VLCDR1 SEQ ID NO: DVNKRPS SEQ ID NO: 204 EVDKRPS 203 4A8 N52D 4A8 E50D VLCDR2 VLCDR2 SEQ ID NO: EVSKRPS SEQ ID NO: 206 EVNARPS 205 4A8 K53A 4A8 N52S VLCDR2 VLCDR2 SEQ ID NO: EVNDRPS SEQ ID NO: 208 EVNHRPS 207 4A8 K53H 4A8 K53D VLCDR2 VLCDR2 SEQ ID NO: EVNKQPS SEQ ID NO: 210 SSYAGNNNFGV 209 4A8 VLCDR3 4A8 R54Q VLCDR2 SEQ ID NO: SSAAGNNNFGV SEQ ID NO: 212 SSYAGANNFGV 211 4A8 N94A 4A8 Y91A VLCDR3 VLCDR3 SEQ ID NO: SSYAGSNNFGV 213 4A8 N94S VLCDR3 SEQ ID NO: SSYAGKNNFGV SEQ ID NO: 215 SSYAGLNNFGV 214

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência 4A8 N94K 4A8 N94L VLCDR3 VLCDR3 SEQ ID NO: SSYAGWNNFGV SEQ ID NO: 217 SSYAGYNNFGV 216 4A8 N94Y 4A8 N94W VLCDR3 VLCDR3 SEQ ID NO: SSYAGNNQFGV SEQ ID NO: 219 SSYAGNNDFGV 218 4A8 N95aD 4A8 N95aQ VLCDR3 VLCDR3 SEQ ID NO: SSYAGNNHFGV SEQ ID NO: 221 SSYAGNNKFGV 220 4A8 N95aK 4A8 N95aH VLCDR3 VLCDR3 SEQ ID NO: SSYAGNNLFGV SEQ ID NO: 223 SSYAGNNYFGV 222 A48 N95aY 4A8 N95aL VLCDR3 VLCDR3 SEQ ID NO: SSYAGNNNFGA SEQ ID NO: 225 SSYAGNNNFGK 224 4A8 V97K 4A8 V97A VLCDR3 VLCDR3 Sequências de consenso SEQ ID NO: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF SEQ ID NO: 227 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCIGTSS 226 TFSSSTX21SWVRQX22PGKGLEWVSAI DVGGYNYVSWYQQHPX29KAPKLMIYE SGX23GX24X25TYYADSVKGRFTISRDNS (VL de consenso VX30KRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTV (4A8 Consenso X26NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAX27QX 4A8) SGLQAEDEADYYCSSYAGX31NNFGVF VH) 28GYWGQGILVTVSS GGGTKLTVL

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência Em que: em que: X21 é M ou Q; X29 é D ou G; X22 é A ou P; X30 é N ou S; X23 é R ou S; X24 é R ou G; e X25 é N ou X31 é N ou S S; X26 é R ou K; X27 é I ou K; X28 é M, K ou A

SEQ ID NO: SSTX21S em que: X21 é M ou Q SEQ ID NO: 229 AISGX23GX24X25TYYADSVKG em que: 228 (VH de consenso X23 é R ou S; X24 é R ou G X25 é N ou S; (VH de CDR2) consenso CDR1) SEQ ID NO: QX28GY em que: X28 é M, K ou A SEQ ID NO: 201 IGTSSDVGGYNYVS 230 (VH de consenso (VH de CDR1) consenso CDR3) SEQ ID NO: EVX30KRPS em que: X30 é N ou S SEQ ID NO: 232 SSYAGX31NNFGV em que: X31 é N ou S 231 (VH de consenso (VH de CDR3) consenso CDR2) Sequências polinucleotídicas BKO-4A8 VH GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCG 4A8 VH Variante GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCG GAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAG 1 GAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAG SEQ ID NO: CCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCG CCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGC 233 GCTTCACCTTCAGCAGCAGCACAATG SEQ ID NO: 234 GGCTTCACCTTCAGCAGCAGCACACA

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência

AGCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCA GAGCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGC AGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCAT AAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCA CAGCGGCAGAGGCCGGAACACCTAC TCAGCGGCAGAGGCCGGAGTACCTA TACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGT CTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGG TCACCATCAGCCGGGACAACAGCAGA TTCACCATCAGCCGGGACAACAGCA AACACCCTGTACCTGCAGATGAACAG GAAACACCCTGTACCTGCAGATGAAC CCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTG AGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCC TACTACTGTGCCATCCAGATGGGCTA GTGTACTACTGTGCCATCCAGATGGG CTGGGGCCAGGGCATTCTCGTGACA CTACTGGGGCCAGGGCATTCTCGTG

GTGTCCTCA ACAGTGTCCTCA 4A8 VH GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCG 4A8 VH Variante GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCG Variante 2 GAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAG 3 GAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAG

CCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCG CCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGC SEQ ID NO: GCTTCACCTTCAGCAGCAGCACACAG SEQ ID NO: 236 GGCTTCACCTTCAGCAGCAGCACACA 235 AGCTGGGTCCGACAGCCTCCTGGCA GAGCTGGGTCCGACAGCCTCCTGGC

AGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCAT AAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCA CAGCGGCAGAGGCCGGAGTACCTAC TCAGCGGCAGAGGCCGGAGTACCTA TACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGT CTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGG TCACCATCAGCCGGGACAACAGCAGA TTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAA AACACCCTGTACCTGCAGATGAACAG AAACACCCTGTACCTGCAGATGAACA CCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTG GCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGT TACTACTGTGCCATCCAGATGGGCTA GTACTACTGTGCCATCCAGATGGGCT CTGGGGCCAGGGCATTCTCGTGACA ACTGGGGCCAGGGCATTCTCGTGAC

GTGTCCTCA AGTGTCCTCA 4A8 VH GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCG 4A8 VH Variante GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCG Variante 4 GAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAG 5 GAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAG

CCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCG CCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGC SEQ ID NO: GCTTCACCTTCAGCAGCAGCACACAG SEQ ID NO: 238 GGCTTCACCTTCAGCAGCAGCACACA 237 AGCTGGGTCCGACAGCCTCCTGGCA GAGCTGGGTCCGACAGCCTCCTGGC

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência

AGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCAT AAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCA CAGCGGCAGAGGCCGGAGTACCTAC TCAGCGGCAGAGGCCGGAGTACCTA TACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGT CTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGG TCACCATCAGCCGGGACAACAGCAGA TTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAA AACACCCTGTACCTGCAGATGAACAG AAACACCCTGTACCTGCAGATGAACA CCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTG GCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGT TACTACTGTGCCATCCAGAAGGGCTA GTACTACTGTGCCATCCAGAAGGGCT CTGGGGCCAGGGCATTCTCGTGACA ACTGGGGCCAGGGCATTCTCGTGAC

GTGTCCTCA AGTGTCCTCA 4A8 VH GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCG 4A8 VH Variante GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCG Variante 6 GAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAG 7 GAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAG

CCTGAGACTG CCTGAGACTG SEQ ID NO: TCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTT SEQ ID NO: 240 TCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTT 239 CAGCAGCAGCACACAGAGCTGGGTC CAGCAGCAGCACACAGAGCTGGGTC

CGACAGCCTCCTGGCAAGGGACTGG CGACAGCCTCCTGGCAAGGGACTGG AATGGGTGTCCGCCATCAGCGGCAG AATGGGTGTCCGCCATCAGCGGCAG AGGCCGGAGTACCTACTACGCCGAC AGGCCGGAGTACCTACTACGCCGAC AGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCA AGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCA GCCGGGACAACAGCAAAAACACCCT GCCGGGACAACAGCAGAAACACCCT GTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGG GTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGG GCCGAGGACACCGCCGTGTACTACT GCCGAGGACACCGCCGTGTACTACT GTGCCAAGCAGAAGGGCTACTGGGG GTGCCAAGCAGAAGGGCTACTGGGG CCAGGGCATTCTCGTGACAGTGTCCT CCAGGGCATTCTCGTGACAGTGTCCT

CA CA 4A8 VH GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCG 4A8 VH Variante GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCG Variante 8 GAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAG 9 GAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAG

CCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCG CCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGC GCTTCACCTTCAGCAGCAGCACACAG SEQ ID NO: 242 GGCTTCACCTTCAGCAGCAGCACACA

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência SEQ ID NO: AGCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCA GAGCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGC 241 AGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCAT AAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCA

CAGCGGCAGAGGCCGGAGTACCTAC TCAGCGGCAGAGGCCGGAGTACCTA TACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGT CTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGG TCACCATCAGCCGGGACAACAGCAGA TTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAA AACACCCTGTACCTGCAGATGAACAG AAACACCCTGTACCTGCAGATGAACA CCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTG GCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGT TACTACTGTGCCATCCAGAAGGGCTA GTACTACTGTGCCATCCAGAAGGGCT CTGGGGCCAGGGCATTCTCGTGACA ACTGGGGCCAGGGCATTCTCGTGAC

GTGTCCTCA AGTGTCCTCA 4A8 VH GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCG 4A8 VH Variante GAAGTTCAGCTGCTTGAATCTGGCGG Variante 10 GAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAG 101 AGGACTGGTTCAGCCTGGCGGATCT

CCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCG CTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCG SEQ ID NO: GCTTCACCTTCAGCAGCAGCACAATG SEQ ID NO: 244 GCTTCACCTTTAGCAGCAGCACACAG 243 AGCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCA AGCTGGGTCCGACAGCCTCCTGGCA

AGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCAT AAGGACTGGAATGGGTGTCCGCCAT CAGCGGCAGAGGCCGGAACACCTAC CTCTGGCAGAGGCAGAAGCACCTAC TACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGT TACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATT TCACCATCAGCCGGGACAACAGCAGA CACCATCAGCCGGGACAACAGCAAG AACACCCTGTACCTGCAGATGAACAG AACACCCTGTACCTGCAGATGAACAG CCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTG CCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTG TACTACTGTGCCAAGCAGAAGGGCTA TACTATTGTGCCATCCAGGCCGGCTA CTGGGGCCAGGGCATTCTCGTGACA TTGGGGCCAGGGAATACTCGTGACA

GTGTCCTCA GTGTCCTCA 4A8 VH GAAGTTCAGCTGCTTGAATCTGGCGG 4A8 VH Variante GAAGTTCAGCTGCTTGAATCTGGCGG Variante 103 AGGACTGGTTCAGCCTGGCGGATCTC 104 AGGACTGGTTCAGCCTGGCGGATCT

TGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGG CTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCG SEQ ID NO: CTTCACCTTTAGCAGCAGCACACAGA SEQ ID NO: 246 GCTTCACCTTTAGCAGCAGCACACAG 245 GCTGGGTCCGACAGCCTCCTGGCAA AGCTGGGTCCGACAGCCTCCTGGCA

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência

AGGACTGGAATGGGTGTCCGCCATCT AAGGACTGGAATGGGTGTCCGCCAT CTGGCAGCGGCGGCAGCACATATTA CTCTGGCAGCGGCGGCAGCACATAT CGCCGATTCTGTGAAGGGCAGATTCA TACGCCGATTCTGTGAAGGGCAGATT CCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAA CACCATCAGCCGGGACAACAGCAAG CACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCC AACACCCTGTACCTGCAGATGAACAG TGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTA CCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTG CTATTGCGCCATCCAGATGGGCTATT TACTATTGCGCCATCCAGAAAGGCTA GGGGCCAGGGAATCCTCGTGACAGT TTGGGGCCAGGGCATCCTCGTGACA

GTCCTCA GTGTCCTCA 4A8 VH GAAGTTCAGCTGCTTGAATCTGGCGG IgG1 humano GCTAGCACCAAGGGACCCAGCGTGT Variante 105 AGGACTGGTTCAGCCTGGCGGATCTC TCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAG TGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGG SEQ ID NO: 248 CACATCTGGCGGAACAGCCGCCCTG SEQ ID NO: CTTCACCTTTAGCAGCAGCACACAGA GGCTGCCTGGTGAAAGACTACTTCCC 247 GCTGGGTCCGACAGCCTCCTGGCAA CGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAAC

AGGACTGGAATGGGTGTCCGCCATCT AGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGC CTGGCAGCGGCGGCAGCACATATTA ACACCTTTCCAGCCGTGCTGCAGAG CGCCGATTCTGTGAAGGGCAGATTCA CAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGC CCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAA GTGGTGACAGTGCCCTCTAGCAGCC CACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCC TGGGCACCCAGACCTACATCTGCAAC TGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTA GTGAACCACAAGCCCAGCAACACCA CTATTGTGCCATCCAGGCCGGCTATT AGGTGGACAAAAAGGTGGAACCCAA GGGGCCAGGGAATACTCGTGACAGT GAGCTGCGACAAGACCCACACCTGT GTCCTCA CCCCCCTGCCCTGCCCCTGAACTGC TGGGCGGACCCTCCGTGTTCCTGTT CCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTG ATGATCAGCCGGACCCCCGAAGTGA CCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCA CGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAATT GGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCA

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência

CAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAG GAACAGTACAACAGCACCTACCGGG TGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCA CCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAG TACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGC CCTGCCTGCTCCCATCGAGAAAACCA TCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCG CGAGCCTCAGGTGTACACACTGCCC CCCAGCCGGGACGAGCTGACCAAGA ACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGT GAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCG CCGTGGAATGGGAGAGCAACGGCCA GCCCGAGAACAACTACAAGACCACC CCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCT CATTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACC GTGGACAAGAGCCGGTGGCAGCAGG GCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGAT GCACGAGGCCCTGCACAACCACTAC ACCCAGAAGTCCCTGAGCCTGAGCC

CCGGC IgG1* humano GCTAGCACCAAGGGACCCAGCGTGT IgG4 humano GCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGT

TCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAG TCCCCCTGGCCCCTTGTAGCAGAAG SEQ ID NO: CACATCTGGCGGAACAGCCGCCCTG SEQ ID NO: 250 CACCAGCGAGAGCACAGCCGCCCTG 249 GGCTGCCTGGTGAAAGACTACTTCCC GGCTGCCTGGTGAAAGACTACTTCCC

CGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAAC CGAGCCCGTCACCGTGTCCTGGAAC AGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGC AGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGC ACACCTTTCCAGCCGTGCTGCAGAGC ACACCTTTCCAGCCGTGCTGCAGAG AGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCG CAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGC TGGTGACAGTGCCCTCTAGCAGCCTG GTGGTGACAGTGCCCTCCAGCAGCC

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência

GGCACCCAGACCTACATCTGCAACGT TGGGCACCAAGACCTACACCTGTAAC GAACCACAAGCCCAGCAACACCAAG GTGGACCACAAGCCCAGCAACACCA GTGGACAAAAAGGTGGAACCCAAGA AGGTGGACAAGCGGGTGGAATCTAA GCTGCGACAAGACCCACACCTGTCCC GTACGGCCCACCCTGCCCCCCCTGC CCCTGCCCTGCCCCTGAACTGGCTG CCTGCCCCTGAATTTCTGGGCGGAC GCGCTCCCTCCGTGTTCCTGTTCCCC CCTCCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAG CCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGAT CCCAAGGACACCCTGATGATCAGCC CAGCCGGACCCCCGAAGTGACCTGC GGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGT GTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGG GGTGGACGTGTCCCAGGAAGATCCC ACCCTGAAGTGAAGTTCAATTGGTAC GAGGTCCAGTTCAATTGGTACGTGGA GTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACG CGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAG CCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACA ACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTTCA GTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGT ACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGT CCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGA GCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGG CTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGT CTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCA GCAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCT AAGTCTCCAACAAGGGCCTGCCCAG GCTCCCATCGAGAAAACCATCAGCAA CTCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGG GGCCAAGGGCCAGCCCCGCGAGCCT CCAAGGGCCAGCCCCGCGAGCCTCA CAGGTGTACACACTGCCCCCCAGCC GGTGTACACACTGCCCCCCAGCCAG GGGACGAGCTGACCAAGAACCAGGT GAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGT GTCCCTGACCTGTCTGGTGAAAGGCT CCCTGACCTGTCTGGTGAAAGGCTTC TCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAA TACCCCAGCGATATCGCCGTGGAAT TGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGA GGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAA ACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTG CAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGC CTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCCT TGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCT GTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGA GTACTCCCGGCTGACCGTGGACAAG GCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTT AGCCGGTGGCAGGAAGGCAACGTCT CAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCC TCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGC

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência

CTGCACAACCACTACACCCAGAAGTC CCTGCACAACCACTACACCCAGAAGT

CCTGAGCCTGAGCCCCGGC CCCTGAGCCTGAGCCTGGGC IgG4* humano GCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGT IgG2* humano GCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGT

TCCCCCTGGCCCCTTGTAGCAGAAGC TCCCTCTGGCCCCTTGTAGCAGAAGC SEQ ID NO: ACCAGCGAGAGCACAGCCGCCCTGG SEQ ID NO: 252 ACCAGCGAGTCTACAGCCGCCCTGG 251 GCTGCCTGGTGAAAGACTACTTCCCC GCTGCCTCGTGAAGGACTACTTTCCC

GAGCCCGTCACCGTGTCCTGGAACA GAGCCCGTCACCGTGTCCTGGAACT GCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCA CTGGCGCTCTGACAAGCGGCGTGCA CACCTTTCCAGCCGTGCTGCAGAGCA CACCTTTCCAGCCGTGCTGCAGAGC GCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGT AGCGGCCTGTACTCTCTGAGCAGCG GGTGACAGTGCCCTCCAGCAGCCTG TCGTGACCGTGCCCAGCAGCAATTTC GGCACCAAGACCTACACCTGTAACGT GGCACCCAGACCTACACCTGTAACGT GGACCACAAGCCCAGCAACACCAAG GGACCACAAGCCCAGCAACACCAAG GTGGACAAGCGGGTGGAATCTAAGTA GTGGACAAGACCGTGGAACGGAAGT CGGCCCACCCTGCCCCCCCTGCCCT GCTGCGTGGAATGCCCCCCTTGTCC GCCCCTGAATTTCTGGGCGGACCCTC TGCCCCTCCAGTGGCTGGCCCTTCC CGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCA GTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAA AGGACACCCTGTATATCACTCGGGAG GGACACCCTGATGATCAGCCGGACC CCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGG CCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGG ACGTGTCCCAGGAAGATCCCGAGGT ATGTGTCCCACGAGGACCCCGAGGT CCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCG GCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGC TGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAG GTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCA CCCAGAGAGGAACAGTTCAACAGCAC AGCCCAGAGAGGAACAGTTCAACAG CTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACC CACCTTCCGGGTGGTGTCCGTGCTG GTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACG ACCGTGGTGCATCAGGACTGGCTGA GCAAAGAGTACAAGTGCAAAGTCTCC ACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGT AACAAGGGCCTGCCCAGCTCCATCGA GTCCAACAAGGGCCTGCCCAGCTCC GAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGC ATCGAGAAAACCATCAGCAAGACCAA CAGCCCCGCGAGCCTCAGGTGTACA AGGCCAGCCCCGCGAGCCCCAGGTG

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência

CACTGCCCCCCAGCCAGGAAGAGAT TACACACTGCCTCCAAGCCGGGAAG GACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCT AGATGACCAAGAATCAGGTGTCCCTG GTCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGC ACCTGTCTCGTGAAAGGCTTCTACCC GATATCGCCGTGGAATGGGAGAGCA CTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAG ACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAA AGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACT GACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGC ACAAGACCACCCCCCCCATGCTGGA GACGGCAGCTTCTTCCTGTACTCCCG CAGCGACGGCTCATTCTTCCTGTACA GCTGACCGTGGACAAGAGCCGGTGG GCAAGCTGACAGTGGACAAGTCCCG CAGGAAGGCAACGTCTTCAGCTGCAG GTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGC CGTGATGCACGAGGCCCTGCACAAC TGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGC CACTACACCCAGAAGTCCCTGAGCCT ACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTG

GAGCCTGGGC AGCCTGAGCCCTGGC BKO-4A8 VL CAGTCTGCTCTGACACAGCCTCCTAG 4A8 VL variante CAGTCTGCTCTGACACAGCCTCCTAG CGCCTCTGGCTCTCCTGGCCAGAGC b CGCCTCTGGCTCTCCTGGCCAGAGC SEQ ID NO: GTGACCATCAGCTGTATCGGCACCAG GTGACCATCAGCTGTATCGGCACCA 253 CAGCGACGTGGGCGGCTACAACTAC SEQ ID NO: 254 GCAGCGACGTGGGCGGCTACAACTA

GTGTCCTGGTATCAGCAGCACCCCGA CGTGTCCTGGTATCAGCAGCACCCC CAAGGCCCCCAAGCTGATGATCTACG GACAAGGCCCCCAAGCTGATGATCTA AAGTGAACAAGCGGCCCAGCGGCGT CGAAGTGTCCAAGCGGCCCAGCGGC GCCCGATAGATTCAGCGGCAGCAAG GTGCCCGATAGATTCAGCGGCAGCA AGCGGCAACACCGCCAGCCTCACAG AGAGCGGCAACACCGCCAGCCTCAC TGTCTGGACTGCAGGCCGAGGACGA AGTGTCTGGACTGCAGGCCGAGGAC GGCCGACTACTACTGTAGCAGCTACG GAGGCCGACTACTACTGTAGCAGCTA CCGGCAACAACAACTTCGGCGTGTTC CGCCGGCAGCAACAACTTCGGCGTG GGCGGAGGCACCAAGCTGACAGTCC TTCGGCGGAGGCACCAAGCTGACAG

TA TCCTA 4A8 VL variante CAGTCTGCTCTGACACAGCCTCCTAG cadeia leve GGTCAGCCCAAGGCCGCTCCCAGCG c CGCCTCTGGCTCTCCTGGCCAGAGC constante lambda TGACCCTGTTCCCCCCAAGCAGCGA

GTGACCATCAGCTGTATCGGCACCAG GGAACTGCAGGCCAACAAGGCCACC

Identificador Sequência Identificador de Sequência de Sequência Sequência SEQ ID NO: CAGCGACGTGGGCGGCTACAACTAC SEQ ID NO: 256 CTGGTGTGCCTGATCAGCGACTTCTA 255 GTGTCCTGGTATCAGCAGCACCCCGg CCCTGGGGCCGTGACCGTGGCCTGG

TAAGGCCCCCAAGCTGATGATCTACG AAGGCCGATAGCAGCCCTGTGAAGG AAGTGTCCAAGCGGCCCAGCGGCGT CCGGCGTGGAAACCACCACCCCCTC GCCCGATAGATTCAGCGGCAGCAAG CAAGCAGAGCAACAACAAATACGCC AGCGGCAACACCGCCAGCCTCACAG GCCAGCAGCTACCTGTCCCTGACCC TGTCTGGACTGCAGGCCGAGGACGA CCGAGCAGTGGAAGTCCCACCGGTC

GGCCGACTACTACTGTAGCAGCTACG CTACAGCTGCCAGGTGACACACGAG CCGGCAgCAACAACTTCGGCGTGTTC GGCAGCACCGTGGAAAAGACCGTGG

GGCGGAGGCACCAAGCTGACAGTCC CCCCCACCGAGTGCAGC TA

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Molécula de anticorpo humano que se liga imunoespecificamente ao CXCR2 humano, caracterizado pelo fato de que a molécula de anticorpo compreende: a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NO: 167 e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 da SEQ ID NO: 168; ou a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NO: 226 e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 da SEQ ID NO: 227 e em que a molécula de anticorpo inibe a ativação induzida por CXCL1 de CXCR2 ou ativação induzida por CXCL5 de CXCR2.

2. Molécula de anticorpo humano, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que: a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 169, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 170, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 171, a CDR1 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 172, a CDR2 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 173, e a CDR3 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 174; ou a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 228, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 229, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 230, a CDR1 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 201, a CDR2 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 231, e a CDR3 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 232

3. Molécula de anticorpo humano, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que:

a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 167 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 168; ou a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 226 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 227.

4. Molécula de anticorpo humano, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que: a) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; b) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; c) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 100 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; d) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 101 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; e) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 102 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; f) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 103 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; g) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 104 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110;

h) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 105 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; i) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 106 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; j) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 107 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; k) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 108 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; l) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 162 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; m) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 163 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; n) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 164 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; o) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 165 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110; ou p) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 166 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109 ou 110.

5. Molécula de anticorpo humano, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que:

a) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 108 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; b) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 162 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; c) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 163 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; d) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 164 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; e) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 165 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110; ou f) a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 166 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110.

6. Molécula de anticorpo humano, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a CDR1 de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 192, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 195, a CDR1 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 201, a CDR2 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 205, e a CDR3 de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 213.

7. Molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 108 e a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

110.

8. Molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que o anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1 humana.

9. Molécula de anticorpo humano, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que a região constante da cadeia pesada de IgG1 humana compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 122 ou 124.

10. Molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que o anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG2 humana.

11. Molécula de anticorpo humano, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que a região constante da cadeia pesada de IgG2 humana compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 120.

12. Molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que o anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG4 humana.

13. Molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo é um fragmento Fab, um fragmento F(ab)2 ou um anticorpo de cadeia única.

14. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende a molécula de anticorpo humano definida de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13.

15. Molécula de ácido nucleico caracterizada pelo fato de que codifica a molécula de anticorpo humano, definida de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13.

16. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende a molécula de ácido nucleico, definida de acordo com a reivindicação 15.

17. Célula transformada caracterizada por ser para expressar a molécula de anticorpo humano definida de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13.

18. Método de tratamento ou prevenção de neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende: administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz da molécula de anticorpo humano definida de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13 ou a composição farmacêutica definida de acordo com a reivindicação 14 para prevenir ou tratar a neutrofilia das vias aéreas ou inflamação aguda do pulmão.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda ou ambas são doença pulmonar obstrutiva crônica, asma neutrofílica grave ou ambas.

20. Molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada por ser para uso como medicamento.

21. Molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada por ser para uso na prevenção ou tratamento de neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda.

22. Uso da molécula de anticorpo humano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13 ou a composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada por ser na preparação de um medicamento para a prevenção ou tratamento de neutrofilia das vias aéreas ou inflamação pulmonar aguda.

23. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 21 ou 22, caracterizado pelo fato de que a neutrofilia das vias aéreas, inflamação pulmonar aguda ou ambas são doença pulmonar obstrutiva crônica, asma neutrofílica grave ou ambas.

24. Método para bloquear a quimiotaxia de neutrófilos, caracterizado pelo fato de que compreende a exposição de neutrófilos ao anticorpo humano definido de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13.

25. Método, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que a quimiotaxia é a migração de neutrófilos para o pulmão.

26. Método para bloquear a sinalização de CXCR2 em resposta a CXCR1 e/ou CXCR5, em uma célula que expressa a sinalização de CXCR2, caracterizado pelo fato de que compreende a exposição de células ao anticorpo humano definido de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13.