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BR112020001698A2 - compostos para prevenção e tratamento de distúrbios médicos e usos dos mesmos - Google Patents

compostos para prevenção e tratamento de distúrbios médicos e usos dos mesmos Download PDF

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BR112020001698A2
BR112020001698A2 BR112020001698-5A BR112020001698A BR112020001698A2 BR 112020001698 A2 BR112020001698 A2 BR 112020001698A2 BR 112020001698 A BR112020001698 A BR 112020001698A BR 112020001698 A2 BR112020001698 A2 BR 112020001698A2
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BR
Brazil
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group
fact
compound
ags
group substituted
Prior art date
Application number
BR112020001698-5A
Other languages
English (en)
Inventor
Raphael Nir
Eliezer Zomer
Peter G. Traber
Joseph M. Johnson
Ryan George
Sharon Shechter
Original Assignee
Galectin Sciences, Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Galectin Sciences, Llc filed Critical Galectin Sciences, Llc
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Abstract

A presente invenção refere-se a compostos, composições farmacêuticas, métodos para a fabricação de compostos e métodos para tratamento de vários distúrbios mediados pelo menos em parte por uma ou mais galectinas.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSTOS PARA PREVENÇÃO E TRATAMENTO DE DISTÚRBIOS MÉDICOS E USOS DOS MESMOS".
INVENTORES Raphael Nir, Eliezer Zomer, Peter G. Traber, Joseph M. Johnson, Ryan George e Sharon Shechter.
PEDIDO RELACIONADO
[001] Este pedido reivindica o benefício e a prioridade do Pedido Provisório U.S. No. de Série 62/540.860, depositado em 3 de agosto de 2017, toda a divulgação é incorporada aqui por referência em sua totalidade.
CAMPO DE INVENÇÃO
[002] Aspectos da invenção referem-se a compostos, composições farmacêuticas, métodos para a fabricação de compostos e métodos para o tratamento de vários distúrbios mediados pelo menos em parte por uma ou mais galectinas. Em particular, a invenção refere- se a compostos que inibem as atividades biológicas de Gal-3.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[003] Galectinas são uma família de lectinas tipo S que se ligam a oligossacarídeos beta-galactose contendo glicoproteínas. Até o momento, quinze galectinas de mamíferos foram identificadas. As galectinas têm sido associadas a múltiplos processos biológicos, como adesão celular, regulação do crescimento, apoptose, desenvolvimento de tumores e outras vias em eventos normais e patológicos. A galectina- 3 (Gal-3), em particular, demonstrou estar envolvida em inflamação, formação de fibrose, câncer metastático, incluindo infiltração, angiogênese, adesão, proliferação e imunossupressão, bem como resistência sistêmica à insulina e obesidade.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[004] Aspectos da invenção referem-se a compostos ou composições compreendendo um composto em um veículo farmacêutico aceitável para administração parentérica ou entérica, para uso em formulações terapêuticas. Em algumas modalidades, a composição pode ser administrada parenteralmente por uma via intravenosa, subcutânea ou oral.
[005] Aspectos da invenção referem-se a compostos e método de fabricação de compostos tendo propriedades farmacológicas seletivas para ligar e atenuar especificamente as atividades patológicas e metabólicas de Gal-3. Em alguns aspectos da invenção, os compostos têm efeitos colaterais reduzidos devido à interação não específica. Em alguns aspectos, os compostos da invenção têm efeitos colaterais reduzidos devido à atenuação de outras atividades metabólicas das galectinas.
[006] Aspectos da invenção referem-se a compostos tendo uma atividade biológica inibidora de Gal-3. Em alguns aspectos, os compostos compreendem um substituinte arila ligado a um núcleo pirroloquinazolina-cetona projetado especificamente para interagir alostericamente e modular e/ou atenuar com a interação Gal-3 com ligantes de glicoproteínas, inibindo diretamente as atividades biológicas e patológicas de Gal-3. Em alguns aspectos da invenção, os compostos podem atenuar com propriedades farmacodinâmicas.
[007] Alguns aspectos da invenção referem-se a compostos ou composição farmacêutica compreendendo uma dosagem terapeuticamente eficaz de compostos interativos alostéricos.
[008] Alguns aspectos da invenção referem-se a métodos para a fabricação e formulação de compostos como substâncias terapêuticas e métodos para tratamento de vários distúrbios médicos mediados pelo menos em parte por Gal-3 ou outras galectinas.
[009] Em alguns aspectos, os compostos são direcionados para uma nova classe de compostos compósitos sem carboidratos que atenuam o Sítio de Ligação a Carboidratos (CRD) de Galectina-3 (Gal- 3) humana através de uma mudança alostérica que modifica a funcionalidade do sítio de ligação a carboidratos.
[010] Alguns aspectos da invenção referem-se a um composto da Fórmula I ou a um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável ou a uma composição farmacêutica que compreende um composto da Fórmula I ou a um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo. Fórmula I: em que a ligação (Y) é (-CH=) ou (-CH2-) ou -CH2-X- em que X é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio; em que Z é um carbono ou um heteroátomo, em que o heteroátomo é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio; em que R1 é hidrogênio, oxigênio, amina, carboxila, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, arila, halogênio, trifluorometila, dinitrometila ou uma combinação dos anteriores; em que R2 e R3 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxila, amina, carboxila, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4 e halogênio.
[011] Em algumas modalidades, a ligação Y é -CH2-X, em que o - CH2 está ligado a pirrolo[1,2-a]quinazolin-5-ona.
[012] Em algumas modalidades, R2, R3 ou R2 e R3 são um grupo arila com uma ou mais substituições, em que as uma ou mais substituições são hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4,
halogênio, benzeno ou combinações dos mesmos.
[013] Em algumas modalidades, em que R2, R3 ou R2 e R3 são fluorometila.
[014] Em algumas modalidades, a ligação Y é (-CH=).
[015] Em algumas modalidades, o composto é ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.
[016] Alguns aspectos da invenção referem-se a um composto de Fórmula II ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável ou uma composição farmacêutica que compreende um composto de Fórmula II ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável. Fórmula II: em que A-M é uma ligação de 2 átomos tendo a estrutura de uma amida -N(-Ra)-C(=O)-, sulfonamida -N(-H)-S(=O2)-, um metil éter -C(-H2)-O- metil éster -C(=O)-O-, carbossulfon -C(-H2)-S(=O) (=O)-, fosfato -O-P(=O) (-OH)-, difosfato -O-P(=O) (-O)-O-P(=O) (-O)-,
Hidrazida –N(-H)-N(-H)-, selanometileno, metoxila, etila ou glicol e/ou um aminoácido, em que a ligação (Y) é (-CH=) ou (-CH2-) ou -CH2-X- em que X é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio; em que Z é um carbono, ou um heteroátomo, em que o heteroátomo é nitrogênio, enxofre de oxigênio ou selênio; em que R1 é hidrogênio, oxigênio, amina, carboxila, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, arila, halogênio, trifluorometila, dinitrometila ou uma combinação dos anteriores; em que R2 e R3 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxila, amina, alquil C1- C6, alcóxi C1-C4 e halogênio.
[017] Em algumas modalidades, a ligação Y é -CH2-X, em que o - CH2 está ligado ao pirrolo [1,2-a]quinazolin-5-ona.
[018] Em algumas modalidades, R2, R3 ou R2 e R3 são um grupo arila com uma ou mais substituições, em que as uma ou mais substituições são hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, halogênio, benzeno ou combinações dos mesmos.
[019] Em algumas modalidades, em que R2, R3 ou R2 e R3 são fluorometila.
[020] Em algumas modalidades, a ligação Y é (-CH=).
[021] Em algumas modalidades, o composto é ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.
[022] Alguns aspectos da invenção referem-se a um composto de Fórmula III ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável ou uma composição farmacêutica que compreende um composto de Fórmula III ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.
Fórmula III: em que Z é um carbono ou um heteroátomo em que o heteroátomo é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio; em que R1 é hidrogênio, oxigênio, amina, carboxila, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, arila, halogênio, trifluorometila, dinitrometila ou uma combinação dos anteriores; em que R2 e R3 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxila, amina, alquil C1- C6, alcóxi C1-C4, halogênio, grupo arila com substituições tais como hidrogênio, hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, halogênio ou combinações dos mesmos; e em que a ligação (Y) é (-CH=) ou (-CH2-)-) ou -CH2-X-, em que X é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio.
[023] Em algumas modalidades, a ligação Y é (-CH=).
[024] Em algumas modalidades, a ligação Y é -CH2-X, em que o - CH2 está ligado ao pirrolo [1,2-a]quinazolin-5-ona.
[025] Alguns aspectos da invenção se referem a um composto da Fórmula IV ou a um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável ou a uma composição farmacêutica que compreende um composto da
Fórmula IV ou a um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo. Fórmula IV: em que Z é um carbono, ou um heteroátomo, em que o heteroátomo é nitrogênio, enxofre de oxigênio ou selênio; em que R1, R2, R3 e R4 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em CO, SO2, SO, PO2, PO, CH, Hidrogênio, hidrocarbonetos lineares e cíclicos hidrofóbicos, incluindo substituições heterocíclicas de peso molecular de cerca de 10-200 D; em que a ligação (Y) é metilideno (-CH=) ou metileno (-CH2- )-) ou -CH2-X-, em que X é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio; em que a ligação A-M sendo pelo menos 2 átomos de ligação tendo a estrutura de amida -N(-Ra)-C(=O)-, sulfonamida -N(-H)-S(=O2)- , um metil éter -C(-H2)-O- metil éster -C(=O)-O-, carbossulfon -C(-H2)- S(=O) (=O)-, fosfato -O-P(=O) (-OH)-, difosfato -O-P(=O) (-O)-O-P(=O) (-O)-, hidrazida-N(-H)-N(-H)-, selanometileno, metoxila, etila, glicol; e/ou um aminoácido.
[026] Em algumas modalidades, a ligação Y é -CH2-X, em que o - CH2 está ligado ao pirrolo [1,2-a]quinazolin-5-ona.
[027] Em algumas modalidades, a ligação Y é (-CH=).
[028] Em algumas modalidades, o composto é mostrado abaixo ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo
[029] Em algumas modalidades, em que os hidrocarbonetos lineares e cíclicos hidrofóbicos compreendem um de: a) um grupo alquila de pelo menos 4 carbonos, um grupo alquenila de pelo menos 4 carbonos, um grupo alquila de pelo menos 4 carbonos substituídos por um grupo carbóxi, um grupo alquenila de pelo menos 4 carbonos substituídos por um grupo carbóxi, um grupo alquila de pelo menos 4 carbonos substituídos por um grupo amino, um grupo alquenila de pelo menos 4 carbonos substituídos por um grupo amino, um grupo alquila de pelo menos 4 carbonos substituídos por ambos um grupo amino e um grupo carbóxi, um grupo alquenila de pelo menos 4 carbonos substituídos por ambos um grupo amino e um grupo carbóxi, e um grupo alquila substituído por um ou mais halogênios, b) um grupo fenila, ou um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo carbóxi, um grupo fenila substituído por pelo menos um halogênio, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo alcóxi, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo nitro, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo sulfo, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo amino, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo alquilamino, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo dialquilamino, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo hidróxi, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo carbonila e um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo carbonila substituído. c) um grupo naftila, ou um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo carbóxi, um grupo naftila substituído por pelo menos um halogênio, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo alcóxi, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo nitro, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo sulfo, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo amino, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo alquilamino, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo dialquilamino, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo hidróxi, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo carbonila e um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo carbonila substituído. d) um grupo heteroarila, ou um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo carbóxi, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um halogênio, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo alcóxi, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo nitro, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo sulfo, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo amino, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo alquilamino, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo dialquilamino, um grupo heteroarila substituído por pelo menos pelo menos um grupo hidróxi, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo carbonila e / um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo carbonila substituído, ou uma combinação dos mesmos.
[030] Em algumas modalidades, o composto é um composto da Tabela 1 ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo
Tabela 1 Exemplo 1A: Exemplo 1B: Exemplo 1C: Y= metilideno Y= metilideno Y= metilideno AGS-0028 AGS-0028 – AGS-0028 – Isômero Isômeros E e Z Isômero E Z
(3E)-3-(3,4-di- 3-[(4-etóxi-3- hidroxibenzilideno)- (3Z)-3-(3,4-di- metoxifenil)metilideno]- 2,3-di- hidroxibenzilideno)- 1H,2H,3H,5H-pirrolo[1,2- hidropirrolo[1,2- 2,3-di-hidropirrolo[1,2- a]quinazolin-5-ona a]quinazolin-5(1H)- a]quinazolin-5(1H)-ona ona
Exemplo 1D: Y=Metileno AGS-0904
(3E)-3-[(4-hidróxi-3- metoxifenil)metileno]- 1H,2H,3H,5H-pirrolo[1,2- a]quinazolin-5-ona
Exemplo 2A: Exemplo 2B: Exemplo 2C: Y = metilideno Y = metilideno Y = metileno,
A-M = ponte A-M = ponte metileno-éter A-M = ponte metileno- metileno-éter éter AGS-0144 AGS-0144 AGS-0906 Isômeros E & Z Isômero Z
3-({4-[(4- (3Z)-3-({4-[(4- (3Z)-3-({4-[(4- metilfenil)metóxi]fenil} metilfenil) metóxi] metilfenil)metóxi] metilideno)- fenil}metileno)- fenil}metilideno)- 1H,2H,3H,5H- 1H,2H,3H,5H- 1H,2H,3H,5H-pirrolo[1,2- pirrolo[1,2- pirrolo[1,2- a]quinazolin-5-ona a]quinazolin-5-ona a]quinazolin-5-ona
Exemplo 2D: Exemplo 2E: Exemplo 2F: A-M = Sulfonamida - A-M = Metilsulfon A-M = Metilselênio AGS-0907 AGS-0929 AGS-0936
(3Z)-3-({4-[(-N-4- (3Z)-3-({4-[(-N-4- difluorolfenil)sulfonmeti l] (3Z)-3-({4-[(4-metilfenil) metilfenil)sulfonamida]f selanometileno] enil}metilideno)- fenil} metilideno)- fenil}metilideno)- 1H,2H,3H,5H- 1H,2H,3H,5H- 1H,2H,3H,5H-pirrolo[1,2- pirrolo[1,2- pirrolo[1,2- a]quinazolin-5-ona a]quinazolin-5-ona a]quinazolin-5-ona
QZ Linear Exemplo 3A: Y= Exemplo 3B: Z = metilideno Sulfato AGS-1011 AGS-1021 (3E)-3-[(2H-1,3- (3E)-3-[(4-bromotiofen- benzodioxol-5- 2-il)metilideno]-6- il)metilideno]- (trifluorometil)- 1H,2H,3H,9H- 1H,2H,3H,9H- pirrolo[2,1- pirrolo[2,1-b]quinazolin- b]quinazolin-9-ona 9-ona : QZ-Arila Linear Exemplo 4A: Y= metilideno A-M = Ponte metoxila AGS-1101
[031] Em algumas modalidades, o composto é um composto da
Tabela 6 ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo Tabela 6 Códigos GS Códigos de Estruturas fabricação AGS-0928 GTJC-144-009
AGS-0925 GTJC-144-006
AGS-0907 GTJC-144-008
AGS-0921 GTJC-144-008-1
AGS-0926 GTJC-028-12-2
AGS-0923 GTJC-028-021
AGS-0924 GTJC-028-022
AGS-0934 GTJC-028-023
[032] Em algumas modalidades, o composto tem uma afinidade de ligação de cerca de 5 nM a 20 µM a Galectin-3.
[033] Em algumas modalidades, o composto está em uma forma cristalina ou em uma forma livre. A forma livre pode ser um anidrato ou um hidrato.
[034] Em algumas modalidades, o composto se liga à Galectina 3 com especificidade mais alta que à Galectina 1, Galectina 8, Galectina 9 ou outras galectinas.
[035] Em algumas modalidades, o composto modula a ligação de Gal-3 ao receptor de insulina e ao receptor de fator de crescimento semelhante à insulina 1.
[036] Aspectos da invenção referem-se a uma composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto aqui descrito e um adjuvante, excipiente, veículo de formulação farmaceuticamente aceitável ou combinações dos mesmos.
[037] Em algumas modalidades, a composição compreende uma substância terapeuticamente eficaz do composto aqui descrito e uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma droga anti-inflamatória, uma droga antifibrose, uma droga farmacêutica, droga nutracêutica, suplemento ou combinações dos mesmos.
[038] Em algumas modalidades, a composição compreende o composto em um veículo farmacêutico aceitável para uso na administração entérica ou parentérica.
[039] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica compreendendo o composto em um veículo farmacêutico aceitável pode ser formulada para uso na administração oral, intravenosa ou subcutânea.
[040] Aspectos da invenção referem-se a um método de tratamento de uma doença em um indivíduo em necessidade do mesmo, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um composto aqui descrito.
[041] Em algumas modalidades, a doença é um distúrbio relacionado à doença patológica devido ao aumento da galectina-3.
[042] Em algumas modalidades, a doença é esteato-hepatite alcoólica ou viral, esteato-hepatite não alcoólica, fibrose, cirrose, distúrbio inflamatório, distúrbio metabólico, resistência à insulina, distúrbio autoimune, condição neoplásica, distúrbio metabólico ou câncer.
[043] Em algumas modalidades, o distúrbio inflamatório é doença inflamatória intestinal, doença de Crohn, esclerose múltipla, lúpus eritematoso sistêmico, artrite, artrite reumatoide, asma ou colite ulcerativa.
[044] Em algumas modalidades, a fibrose é fibrose hepática, fibrose renal, fibrose pulmonar ou fibrose cardíaca.
[045] Em algumas modalidades, o distúrbio autoimune é artrite reumatoide, doença de pele ou esclerose múltipla.
[046] Em algumas modalidades, a doença é insuficiência cardíaca, arritmias ou cardiomiopatia urêmica.
[047] Em algumas modalidades, a doença é doenças crônicas de rim e pulmonares idiopáticas.
[048] Em algumas modalidades, a doença é um distúrbio cutâneo autoimune, proliferativo e fibrótico da pele, opcionalmente psoríase ou dermatite atópica.
[049] Em algumas modalidades, a condição neoplásica é uma doença neoplásica benigna ou maligna.
[050] Aspectos da invenção referem-se ao método para o tratamento de resistência sistêmica à insulina associada ao diabetes tipo 1 e obesidade.
[051] Aspectos da invenção referem-se ao método para o tratamento de resistência sistêmica à insulina associada ao diabetes mellitus tipo 2 (T2DM).
[052] Aspectos da invenção referem-se ao método para o tratamento de resistência sistêmica à insulina associada à obesidade, diabetes gestacional ou pré-diabetes.
[053] Em algumas modalidades, o tratamento com o composto ou composição aqui descrito restaura a sensibilidade das células à atividade da insulina.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[054] A presente invenção será ainda explicada com referência aos desenhos anexos, em que estruturas semelhantes são referidas por números semelhantes ao longo das várias vistas. Os desenhos mostrados não estão necessariamente em escala, com ênfase sendo geralmente colocada na ilustração dos princípios da presente invenção.
[055] A Figura 1 mostra uma estrutura 3D de alta definição de Gal- 3 que ilustra a face S com o foco de ligação do Domínio de Reconhecimento de Carboidratos (CRD) com lactose (azul) e a Face F, onde são possíveis sítios para o sítio de interação alostérica, o alvo de ligação para os compostos aqui descritos de acordo com modalidades da invenção. 15
[056] A Figura 2 mostra deslocamentos de N RMN, análise comparativa de composto alostérico (esquerda, AGS-0028) e composto à base de galactose (direita, TD-139) de acordo com modalidades da invenção.
[057] A Figura 3A ilustra uma imagem em 3D de adesivos hidrofóbicos (amarelo) dentro de um foco do sítio de ligação (cinza) na face F de Gal-3 identificada como alvo potencial de compostos alostéricos (verde) que poderiam afetar a interação de Gal-3 com seus ligantes de acordo com modalidades da invenção.
[058] A Figura 3B ilustra uma imagem 3D de um composto AGS- 0144 (verde) interagindo com o alvo em potencial para esses compostos alostéricos na Face F de Gal-3 com uma pontuação Glide de -5,96, de acordo com modalidades da invenção.
[059] A Figura 3C ilustra uma imagem 3D de um composto AGS- 0164 (verde) interagindo com o alvo em potencial para esses compostos alostéricos na face F de Gal-3 com uma pontuação de Glide de -7,09, de acordo com modalidades da invenção.
[060] A Figura 4 representa um método usando polarização fluorescente (FP) para mostrar a interação do ligante fluorescente (FL) com o CRD de Gal-3 de acordo com modalidades da invenção. Um inibidor potencial que se liga ao CRD irá competir com o FL e reduzir o sinal de polarização.
[061] As Figuras 5A e 5B demonstram uma inibição do FP pelo derivado da galactose [TD-149] em comparação com um inibidor alostérico AGS-0229, de acordo com modalidades da invenção. Sinal fraco de FP (polarização fluorescente) pelo inibidor alostérico da galectina-3 (Fig. 5A, AGS-0229) em comparação com o sinal forte gerado por um derivado de galactosídeo [Fig. 5B, TD-139] que se liga diretamente ao sítio de CRD.
[062] A figura 6 é uma representação esquemática de um método analítico de transferência de energia de ressonância por fluorescência (FRET) usando um ligante marcado fluorescente (DOADOR) para medir a interação com o alvo Galectin-3 marcado com composto de emissão fluorescente (ACEITADOR). A interação por duas moléculas marcadas com fluorescência cria uma transferência de energia de ressonância por fluorescência (FRET) entre um ligante fluorescente "DOADOR" e o alvo Gal-3 marcado com o composto de emissão fluorescente "ACEITADOR" de acordo com modalidades da invenção.
[063] A Figura 7A ilustra um método ELISA em sanduíche usando 2 anticorpos específicos para Gal-3 cuja interação com Gal-3 é sensível ao status de ocupação de CRD de acordo com modalidades da invenção. Assim, um composto que interage com o CRD inibirá o sinal ELISA.
[064] A Figura 7B ilustra um método ELISA em sanduíche usando um ligante funcional de Gal-3 com um anticorpo específico para Gal-3 para medir a inibição da interação ligante - alvo de acordo com modalidades da invenção.
[065] A Figura 8A mostra a comparação da inibição de várias interações de integrinas com Gal-3 pelo composto AGS-0028, de acordo com modalidades da invenção.
[066] As Figuras 8B e 8C mostram a inibição da interação de Integrina αMβ2 com Gal-3 por AGS-0229, um composto alostérico (Fig. 8B) e TD-139 (Fig. 8C), um composto derivado de galactose, de acordo com modalidades da invenção.
[067] As Figuras 8D e 8E representam a especificidade de AGS- 0229, um inibidor alostérico para Gal-3, em comparação com o composto derivado de galactose de acordo com modalidades da invenção. O ensaio ELISA (FIG. 8D, à esquerda) da interação Gal-3 (diamante azul) com Integrina αMβ2 demonstra claramente a especificidade de AGS-0028 para Gal-3, enquanto o derivado da galactose TD-139 inibe a interação de galectinas diversificadas, além de Gal-3 (galectinas 1 (triângulo), 8 (círculo) e 9 (diamante vermelho)) com integrina αMβ2 (FIG. 8E). 15
[068] A Figura 9A mostra deslocamentos N-RMN da molécula inteira de Gal-3 (Gal-3 FL) com a adição do composto derivado de galactose TD-139 de acordo com modalidades da invenção. 15
[069] A Figura 9B mostra as alterações de N-RMN dos aminoácidos Gal-3 após a interação com as glicoproteínas funcionais, como a integrina, mostrando alterações principalmente dos aminoácidos associados a CRD, semelhantes às mudanças observadas quando a Gal-3 interage com TD-139 de acordo com modalidades da invenção. A interação da galectina-3 com as integrinas de glicoproteínas funcionais afeta os aminoácidos associados ao CRD, causando mudanças correspondentes nos deslocamentos 15N-RMN.
[070] A Figura 9C mostra uma comparação das alterações médias de intensidade que refletem a avidez de ligação de Gal-3 (afinidade e estequiometria) para integrina αMβ2 (círculos vermelhos) e αVβ6 (quadrados pretos) de acordo com modalidades da invenção. 15
[071] A Figura 9D mostra alterações de intensidade de N RMN que refletem a avidez de ligação de CRD Gal-3 (afinidade e estequiometria) à integrina αVβ6 de acordo com as modalidades da invenção.
[072] A Figura 9E representa o efeito de AGS-0028 na intensidade 15 N RMN Gal-3 FL após interação com a integrina αVβ6 de acordo com modalidades da invenção. 15
[073] A Figura 9F representa os deslocamentos de N RMN Gal- 3 CRD (AA 114-250) após a adição de AGS-0028 a Gal-3 ligada à integrina αVβ6. AGS-0028 atenua a ligação de Gal-3 CRD a αVβ6.
[074] A Figura 10 representa o efeito de inibidores de Gal-3 na secreção de h-MCP-1 por macrófagos estressados inflamatórios (células monócitas THP-1 estressadas por endotoxina - modelo inflamatório) de acordo com modalidades da invenção.
[075] A Figura 11A mostra um efeito de inibição sinérgica do composto AGS-0028 com o derivado de galactosídeo TD-139. Assim, o
AGS-0028 atenua a estrutura 3D de CRD de uma maneira que inibe a ligação de Gal-3 com Gal-3 BP, mas não afeta a ligação de TD-139 a CRD. AGS-0028 atenua negativamente (inibindo a ligação de galectina- 3 com Gal-3 BP) e é sinérgico com a inibição de TD-139 dessa interação de Galectina-3 e Galectina-3 BP.
[076] A Figura 11B mostra que o composto AGS-0905 atenua a estrutura 3D de CRD que aumenta positivamente a afinidade de CRD e melhora o coeficiente de ligação de Gal-3 com Gal-3 BP. Assim, o efeito de AGS-0905 no CRD foi antagônico ao TD-139 e diminuiu efetivamente sua inibição na interação entre Gal-3 e seu ligante Gal-3 PB, de acordo com modalidades da invenção.
[077] A Figura 12A mostra que AGS-0905 aprimorou a ligação de Gal-3 à Integrina αVβ6 e diminuiu efetivamente o efeito inibitório de TD- 139 no modo de resposta à dose, de acordo com modalidades da invenção. O AGS-0905 diminuiu a ligação de TD-139 à Galectin-3 no modo de resposta à dose, como indicado pela reversão da sua inibição da ligação de Galectin-3 à Integrina αVβ6. A Figura 12A mostra que os compostos aqui descritos também podem ter efeito no CRD aumentando sua afinidade com os receptores das glicoproteínas.
[078] A Figura 12B representa a inibição da ligação de Gal-3 à integrina αVβ6 em níveis baixos de µM para vários compostos com as Fórmulas I e II de acordo com modalidades da invenção.
[079] A figura 12C mostra a inibição de ligação de Gal-3 à integrina αMβ2 em níveis baixos de µM para vários compostos com as Fórmulas III e IV de acordo com modalidades da invenção.
[080] A Figura 12D representa a inibição da ligação de Gal-3 à proteína de ligação de Gal-3 a níveis baixos de µM para vários compostos com as fórmulas III e IV de acordo com modalidades da invenção. A Figura 12D mostra que os compostos aqui descritos também podem aumentar a afinidade de CRD para os receptores de glicoproteínas, como mostrado neste experimento com AGS-0143.
[081] A Figura 12E mostra a inibição da ligação de Gal-3 ao receptor de TGF-beta tipo 1 (Gene: TGFBR1) em níveis baixos de µM para compostos desta invenção com a Fórmula III de acordo com modalidades da invenção. A Figura 12E mostra que os compostos aqui descritos também podem aumentar a afinidade de CRD para os receptores de glicoproteínas, como mostrado neste experimento com AGS-0150.
[082] A Figura 12F representa a inibição da ligação de Gal-3 ao receptor de insulina (gene: INSR) em níveis baixos de µM para compostos com as fórmulas III e IV de acordo com modalidades da invenção. A Figura 12F mostra que os compostos aqui descritos também podem aumentar a afinidade de CRD para os receptores da glicoproteína, como mostrado neste experimento com AGS-0150.
[083] A Figura 12G mostra que os compostos de acordo com as modalidades da invenção modulam a ligação de Gal-3 ao receptor do fator de crescimento semelhante à insulina 1 (IGFR1, gene IGF1R) em níveis baixos de µM semelhantes aos derivados de galactosídeo. A Figura 12E mostra que os compostos aqui descritos também podem aumentar a afinidade de CRD para os receptores de glicoproteína, como mostrado neste experimento com AGS-0903.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[084] As modalidades detalhadas da presente invenção são divulgadas neste documento; no entanto, deve ser entendido que as modalidades divulgadas são meramente ilustrativas da invenção que podem ser realizadas de várias formas. Além disso, cada um dos exemplos dados em conexão com as várias modalidades da invenção pretende ser ilustrativo e não restritivo. Além disso, as figuras não estão necessariamente em escala, alguns recursos podem ser exagerados para mostrar detalhes de componentes particulares. Além disso,
quaisquer medições, especificações e similares mostrados nas figuras devem ser ilustrativos e não restritivos. Portanto, detalhes estruturais e funcionais específicos aqui divulgados não devem ser interpretados como limitativos, mas apenas como uma base representativa para ensinar um versado na técnica a empregar de maneira diversa a presente invenção.
[085] A citação de documentos aqui contida não se destina a admitir que algum dos documentos citados aqui seja pertinente ao estado da técnica, ou admitir que os documentos citados sejam considerados materiais para a patenteabilidade das reivindicações do presente pedido.
[086] Em toda a especificação e reivindicações, os termos a seguir assumem o significado explicitamente associado aqui, a menos que o contexto indique claramente o contrário. As frases "em uma modalidade" e "em algumas modalidades", conforme usadas neste documento, não se referem necessariamente às mesmas modalidades, embora possam. Além disso, as frases "em outra modalidade" e "em algumas outras modalidades", conforme aqui utilizadas, não se referem necessariamente a uma modalidade diferente, embora possam. Assim, como descrito abaixo, várias modalidades da invenção podem ser prontamente combinadas, sem se afastar do escopo ou espírito da invenção.
[087] Além disso, como usado aqui, o significado de "a", "o", "uma" e "um" inclui referências plurais.
[088] A menos que especificado de outra forma, todas as porcentagens aqui expressas são peso/peso. Galectinas
[089] As galectinas (também conhecidas como galaptinas ou S- lectinas) são uma família de lectinas que se ligam ao beta-galactosídeo. A galectina como um nome geral foi proposta em 1994 para uma família de lectinas de animais (Barondes, S. H., et al.: Galectins: a family of animal beta-galactoside-binding lectins. Cell 76, 597-598, 1994). A família é definida por ter pelo menos um domínio de reconhecimento de carboidratos (CRD) característico com uma afinidade por beta- galactosídeos e compartilhar certos elementos de sequência. Caracterização estrutural adicional segmenta as galectinas em três subgrupos, incluindo: (1) galectinas com um único CRD, (2) galectinas com dois CRDs unidos por um peptídeo ligante e (3) um grupo com um membro (galectina-3) que possui um CRD unido a um tipo diferente de domínio N-terminal. O domínio de reconhecimento de carboidratos da galectina é um beta-sanduíche de cerca de 135 aminoácidos. As duas folhas são levemente dobradas, com 6 filamentos formando o lado côncavo, também chamado de face S, e 5 filamentos formando o lado convexo, a face F). O lado côncavo forma um sulco no qual o carboidrato está ligado (Leffler H, Carlsson S, Hedlund M, Qian Y, Poirier F (2004). "Introduction to galectins". Glycoconj. J. 19 (7-9): 433-40).
[090] Foi demonstrado que uma grande variedade de fenômenos biológicos está relacionada a galectinas, incluindo desenvolvimento, diferenciação, morfogênese, metástase de tumor, apoptose, emenda de RNA e muitos outros.
[091] Pelo menos quinze proteínas de galectinas de mamíferos foram identificadas as quais possuem um ou dois domínios de carboidratos em tandem. A galectina 3 (Gal-3), também conhecida como MAC2, é uma galectina codificada por um único gene, LGALS3.
[092] As proteínas da galectina aumentam acentuadamente em vários estados de doenças animais e humanas, incluindo, entre outras, doenças associadas à inflamação, fibrose, autoimunidade e neoplasia. As galectinas foram diretamente implicadas na patogênese da doença, como descrito abaixo. Por exemplo, estados de doenças que podem ser dependentes de galectinas incluem, entre outros, inflamação aguda e crônica, distúrbios alérgicos, asma, dermatite, doença autoimune, artrite inflamatória e degenerativa, doença neurológica mediada por imunidade, fibrose de múltiplos órgãos (incluindo, entre outros, fígado, pulmão, rim, pâncreas e coração), doença inflamatória intestinal, aterosclerose, insuficiência cardíaca, doença inflamatória ocular, uma grande variedade de cânceres.
[093] Além dos estados de doença, as galectinas são importantes moléculas reguladoras na modulação da resposta das células imunes à vacinação, patógenos exógenos e células cancerígenas.
[094] Por conseguinte, é necessário fornecer compostos e método de fabricação de compostos com propriedades farmacológicas seletivas para ligar e atenuar especificamente as atividades patológicas e metabólicas de Gal-3. Em algumas modalidades, esses compostos podem ter efeitos colaterais reduzidos devido à interação inespecífica e atenuar outras atividades metabólicas das galectinas. Compostos
[095] Aspectos da invenção referem-se a compostos de Fórmula I ou seus sais ou solvatos: Fórmula I:
[096] Aspectos da invenção referem-se a compostos tendo a estrutura da fórmula I, em que uma estrutura principal de pirroloquinazolina-cetona é primeiro ligada a um composto arila selecionado através de uma ponte de átomo único (Y). Em algumas modalidades, o grupo arila tem substituintes (R2 e R3) que permitem uma ligação alostérica Gal-3 que altera as características de ligação de
CRD. Em algumas modalidades, a ligação (Y) a um metilideno (-CH=) pode ser dos isômeros E ou Z (Vide os Exemplos 1A, B e C da Tabela 1).
[097] Em algumas modalidades, a ligação (Y) também é selecionada também a partir de um único átomo de metileno (-CH2-) ou –Se-, -S-, -N- ou -O-(Vide o exemplo 1D da Tabela 1)
[098] Em algumas modalidades, Z indica heteroátomos que são incorporados nas moléculas como nitrogênio, oxigênio ou enxofre.
[099] Em algumas modalidades, a substituição do composto R1 da Fórmula I é selecionada a partir de hidrogênio, oxigênio, amina, carboxila, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, arila, halogênios, trifluorometila, dinitrometila ou combinações dos anteriores. Em algumas modalidades, R2 e R3 são selecionados individual e independentemente do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4 e halogênios.
[100] Em algumas modalidades, R2 e/ou R3 são independentemente um grupo arila com substituições tais como hidrogênio, hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, halogênios, benzeno ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, R1 e/ou R2 são fluorometila, como ilustrado na Fórmula II (Vide os exemplos 2A, 2B e 2C da Tabela 1).
[101] Alguns aspectos da invenção referem-se a um composto da Fórmula I ou a um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável ou a uma composição farmacêutica que compreende um composto da Fórmula I ou a um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo. Fórmula I:
em que a ligação (Y) é (-CH=) ou (-CH2-) ou -CH2-X- em que X é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio; em que Z é um carbono ou um heteroátomo, em que o heteroátomo é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio; em que R1 é hidrogênio, oxigênio, amina, carboxila, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, arila, halogênio, trifluorometila, dinitrometila ou uma combinação dos anteriores; em que R2 e R3 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxila, amina, carboxila, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4 e halogênio.
[102] Em algumas modalidades, a ligação Y é -CH2-X, em que o - CH2 está ligado ao pirrolo [1,2-a]quinazolin-5-ona.
[103] Em algumas modalidades, R2, R3 ou R2 e R3 são um grupo arila com uma ou mais substituições, em que as uma ou mais substituições são hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, halogênio, benzeno ou combinações dos mesmos.
[104] Em algumas modalidades, R2, R3 ou R2 e R3 são fluorometila.
[105] Em algumas modalidades, R2, R3 ou R2 e R3 são hidroxila, alcóxi C1-C4 ou combinações dos mesmos.
[106] Em algumas modalidades, o composto é ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.
[107] Aspectos da invenção referem-se a compostos tendo a estrutura da Fórmula II ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.
Fórmula II
[108] Em algumas modalidades, a atividade alostérica pode ser aumentada pela propriedade da ligação A-M e as propriedades dos substituintes do grupo arila com IC50 na faixa de 5 ηM a 20 µM.
[109] Em algumas modalidades, A-M pode ser uma ligação de 2 átomos tendo a estrutura de uma amida -N(-Ra)-C(=O)-, sulfonamida - N(-H)-S(=O2)-, um metiléter -C(-H2)-O- metiléster -C(=O)-O-, carbossulfon -C(-H2)-S(=O) (=O)-, fosfato -O-P(=O) (-OH)-, difosfato - O-P(=O) (-O)-O-P(=O) (-O)-, Hidrazida-N(-H)-N(-H)-, selanometileno, metoxila, etila, glicol e/ou um aminoácido.
[110] Em algumas modalidades, a ligação Y é -CH2-X, em que o - CH2 está ligado ao pirrolo [1,2-a]quinazolin-5-ona.
[111] Em algumas modalidades, R2, R3 ou R2 e R3 são um grupo arila com uma ou mais substituições, em que as uma ou mais substituições são hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, halogênio, benzeno ou combinações dos mesmos.
[112] Em algumas modalidades, em que R2, R3 ou R2 e R3 são fluorometila.
[113] Em algumas modalidades, a entidade A-M na Fórmula II pode ser uma ligação de 2 átomos tendo a estrutura de amida, sulfonamida, selanometileno, metoxila, metil éster, etila, glicol e similares (vide exemplos 2D, 2E e 2F da tabela 1).
[114] Aspectos da invenção também são direcionados a compostos tendo a estrutura de fórmula II ou sais ou solvatos dos mesmos, em que os compostos têm uma estrutura central de pirroloquinazolina-cetona, tendo uma estrutura linear de pirroloquinazolina-cetona. A ligação (Y) pode ainda ser selecionada a partir de uma ponte de átomo único de metileno (-CH2-) ou metilideno (-CH=) ou um de –Se-, -S-, -N- ou -0-(Vide exemplos 3A e 3B da Tabela 1).
[115] Aspectos da invenção também são direcionados a compostos tendo a estrutura da fórmula III ou seus sais ou solvatos. Fórmula III:
[116] Em algumas modalidades, Z indica heteroátomos que são incorporados nas moléculas como nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Em algumas modalidades, R1 é selecionado a partir de hidrogênio, hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, halogênio e trifluorometila. Em algumas modalidades, R2 e R3 são selecionados individual e independentemente do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, halogênios e grupo arila com substituições como hidrogênio, hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1- C4, halogênios e suas combinações.
[117] Em algumas modalidades, a ligação (Y) é (-CH=) ou (-CH2- )-) ou -CH2-X-, em que X é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio. Em algumas modalidades, a ligação Y é -CH2-X, em que o -CH2 está ligado ao pirrolo [1,2-a]quinazolin-5-ona.
[118] Aspectos da invenção são direcionados a compostos que têm a estrutura ilustrada na Fórmula IV ou sais ou solvatos dos mesmos. Fórmula IV:
[119] Em algumas modalidades, a atividade alostérica pode ser melhorada pela propriedade da ligação A-M e pelas propriedades do segundo substituinte do grupo arila.
[120] Em algumas modalidades, a entidade A-M na Fórmula IV pode ser uma ligação de 2 átomos tendo a estrutura de ligações amida, sulfonamida, selanometileno, metoxila, metil éster, etila, glicol e bi- átomos.
[121] Aspectos da invenção também são direcionados a compostos tendo a estrutura da fórmula IV ou sais ou solvatos dos mesmos.
[122] Em algumas modalidades, Z é um carbono ou um heteroátomo, em que o heteroátomo é nitrogênio, enxofre de oxigênio ou selênio; a ligação (Y) é metilideno (-CH=) ou metileno (-CH2-)-) ou - CH2-X-, em que X é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio; a ligação A-M sendo pelo menos 2 átomos de ligação tendo a estrutura de amida -N(-Ra)-C(=O)-, sulfonamida -N(-H)-S(=O2)-, um metil éter -C(-H2)-O- metiléster -C(=O)-O-, carbossulfon -C(-H2)-S(=O) (=O)-, fosfato -O- P(=O) (-OH)-, difosfato -O-P(=O) (-O)-O-P(=O) (-O)-, hidrazida-N(-H)- N(-H)-, selanometileno, metoxila, etila, glicol; e/ou um aminoácido.
[123] Em algumas modalidades, R1, R2, R3 e R4 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em CO, SO2, SO, PO2, PO, CH, hidrogênio, hidrocarbonetos lineares e cíclicos hidrofóbicos, incluindo substituições heterocíclicas de peso molecular de cerca de 10 -200 D
[124] Em algumas modalidades, o composto tem a estrutura do composto mostrado no exemplo 4A da Tabela 1)
[125] Em algumas modalidades, os hidrocarbonetos lineares e cíclicos hidrofóbicos podem compreender um de: a) um grupo alquila de pelo menos 4 carbonos, um grupo alquenila de pelo menos 4 carbonos, um grupo alquila de pelo menos 4 carbonos substituídos por um grupo carbóxi, um grupo alquenila de pelo menos 4 carbonos substituídos por um grupo carbóxi, um grupo alquila de pelo menos 4 carbonos substituídos por um grupo amino, um grupo alquenila de pelo menos 4 carbonos substituídos por um grupo amino, um grupo alquila de pelo menos 4 carbonos substituídos por ambos um grupo amino e um grupo carbóxi, um grupo alquenila de pelo menos 4 carbonos substituídos por ambos um grupo amino e um grupo carbóxi, e um grupo alquila substituído por um ou mais halogênios, b) um grupo fenila, ou um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo carbóxi, um grupo fenila substituído por pelo menos um halogênio, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo alcóxi, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo nitro, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo sulfo, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo amino, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo alquilamino, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo dialquilamino, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo hidróxi, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo carbonila e um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo carbonila substituído.
c) um grupo naftila ou um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo carbóxi, um grupo naftila substituído por pelo menos um halogênio, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo alcóxi, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo nitro, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo sulfo, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo amino, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo alquilamino, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo dialquilamino, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo hidróxi, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo carbonila e um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo carbonila substituído. d) um grupo heteroarila ou um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo carbóxi, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um halogênio, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo alcóxi, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo nitro, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo sulfo, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo amino, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo alquilamino, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo dialquilamino, um grupo heteroarila substituído por pelo menos pelo menos um grupo hidróxi, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo carbonila e / um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo carbonila substituído, ou uma combinação dos mesmos.
[126] Sem estar vinculado a esses exemplos, outros derivados e/ou substituições seriam farmacêuticos ativos visando a galectinas. Exemplos adicionais de compostos são dados na Tabela 1. TABELA 1: EXEMPLO DE COMPOSTOS ALOSTÉRICOS DE DESLOCAMENTO DE GALECTINA (AGS):
Exemplo 1A: Exemplo 1B: Exemplo 1C: Y= metilideno Y= metilideno Y= metilideno AGS-0028 AGS-0028 – AGS-0028 – Isômero E Isômeros E e Z Isômero Z
(3Z)-3-(3,4-di- 3-[(4-etóxi-3- (3E)-3-(3,4-di- hidroxibenzilideno)- metoxifenil)metilideno]- hidroxibenzilideno)-2,3- 2,3-di- 1H,2H,3H,5H-pirrolo[1,2- di-hidropirrolo[1,2- hidropirrolo[1,2- a]quinazolin-5-ona a]quinazolin-5(1H)-ona a]quinazolin-5(1H)- ona
Exemplo 1D: Y=Metileno AGS-0904
(3E)-3-[(4-hidróxi-3-metoxifenil)metileno]-1H,2H,3H,5H-pirrolo[1,2- a]quinazolin-5-ona
Exemplo 2A: Exemplo 2B Exemplo 2C Y= metilideno Y= metilideno Y= metilideno A-M = ponte metileno- A-M = ponte metileno- A-M = ponte metileno- éter éter éter AGS-0144 AGS-0144 AGS-0906 Isômeros E & Z Isômero Z
(3Z)-3-({4-[(4-metilfenil) (3Z)-3-({4-[(4- (3Z)-3-({4-[(4-metilfenil) metóxi] fenil}metileno)- metilfenil) metóxi] metóxi] fenil}metileno)- 1H,2H,3H,5H- fenil}metileno)- 1H,2H,3H,5H- pirrolo[1,2-a]quinazolin- 1H,2H,3H,5H- pirrolo[1,2-a]quinazolin- 5-ona pirrolo[1,2- 5-ona a]quinazolin-5-ona
Exemplo 2D: Exemplo 2E: Exemplo 2F:
A-M = Sulfonamida - A-M = Metilsulfon A-M = Metilselênio AGS-0907 AGS-0929 AGS-0936
(3Z)-3-({4-[(-N-4- (3Z)-3-({4-[(-N-4- (3Z)-3-({4-[(4- metilfenil)sulfonamida]fe difluorolfenil)sulfonmetil] metilfenil) nil}metilideno)- fenil} metilideno)- selanometileno] fenil} 1H,2H,3H,5H- 1H,2H,3H,5H- metilideno)- pirrolo[1,2-a]quinazolin- pirrolo[1,2-a]quinazolin- 1H,2H,3H,5H- 5-ona 5-ona pirrolo[1,2- a]quinazolin-5-ona
: QZ-Arila linear Exemplo 4A: Y= metilideno A-M = Ponte metoxila AGS-1101 QZ linear Exemplo 3A: Y= metilideno Exemplo 3B: Z = Sulfato AGS-1011 AGS-1021 (3E)-3-[(2H-1,3-benzodioxol-5- (3E)-3-[(4-bromotiofen-2- il)metilideno]-1H,2H,3H,9H- il)metilideno]-6-(trifluorometil)- pirrolo[2,1-b]quinazolin-9-ona 1H,2H,3H,9H-pirrolo[2,1-b]quinazolin- 9-ona
[127] Aspectos da invenção referem-se a compostos ou composições compreendendo um composto em um veículo farmacêutico aceitável para administração entérica ou parentérica, para uso em formulações terapêuticas. Em algumas modalidades, a composição pode ser administrada por formulações orais via entérica, ou parenteralmente via rota intravenosa ou subcutânea.
[128] Aspectos da invenção referem-se a compostos ou composições para o tratamento de vários distúrbios nos quais as proteínas da lectina desempenham um papel na patogênese, incluindo, mas não se limitando a, doenças inflamatórias crônicas, fibróticas, metabólicas e doenças malignas. Em algumas modalidades, o composto é capaz de imitar interações de glicoproteínas com proteínas de lectinas ou galectina que são conhecidas por modular as vias fisiopatológicas que levam a inflamação, fibrogênese, angiogênese, resistência sistêmica à insulina, progressão do câncer e metástase.
[129] Em algumas modalidades, o composto compreende estruturas de pirroloquinazolina-cetona ligadas por um único átomo de carbono, uma metila, a um composto arila.
[130] Em algumas modalidades, substituições aromáticas específicas podem ser adicionadas ao núcleo arila para adicionalmente aumentar a afinidade das estruturas pirroloquinazolina-cetona ligadas a arila. Tais substituições aromáticas podem melhorar a interação do composto com resíduos de aminoácidos (por exemplo, arginina, triptofano, histidina, ácido glutâmico, etc...) expostos na galectina nas proximidades dos domínios de reconhecimento de carboidratos (CRD) das lectinas e, portanto, solicitar mudanças na associação e especificidade de ligação do CRD.
[131] Em algumas modalidades, o composto arila compreende um único anel de benzeno ou núcleo arila duplo ligado através de etila, éster, metil-alcóxi, amida, sulfonamida, metil-sulfona ou metil-selênio, que por sua vez está ligado ao composto pirroloquinazolina-cetona.
[132] Em algumas modalidades, o composto é um composto di- pirroloquinazolina-cetona-L-arila simétrico, em que as duas pirroloquinazolina-cetona-L-arilas são ligadas através do composto arila por uma ou mais ligações que são sistematicamente clivadas para gerar composto anti-Gal-3 farmacêutico ativo.
[133] Em algumas modalidades, o composto é uma di- pirroloquinazolina-cetona-L-arila simétrica, em que as duas pirroloquinazolina-cetonas são ligadas através de uma ou mais ligações cliváveis sistemicamente, como ligações de enxofre, disselênio, éster ou amida. Os dois compostos resultantes gerados sistemicamente por clivagem enzimática (principalmente no fígado) após a administração, são anti-Gal-3 farmacêuticos ativos.
[134] Ainda em outras modalidades, o composto pode ser assimétrico, onde as substituições de arila não são simétricas. Por exemplo, o composto pode ter diferentes substituições aromáticas ou alifáticas no núcleo arila.
[135] Em algumas modalidades, o composto é um pirroloquinazolina-cetona-metil-difenol derivado de fluoreto.
[136] Aspecto da presente invenção refere-se a um composto de fórmulas (I, II, III, IV) ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[137] Em algumas modalidades, o composto está em uma forma livre. Em algumas modalidades, a forma livre é um anidrato. Em algumas modalidades, a forma livre é um solvato, como um hidrato.
[138] Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I, II, III e IV) está em uma forma cristalina.
[139] Sem estar vinculado à teoria, acredita-se que os compostos que contêm as moléculas contendo pirroloquinazolina-cetona tornam o composto metabolicamente estável, mantendo as características químicas, físicas e alostéricas para interação específica com Gal-3 e afetando o reconhecimento de glicoproteínas alvo. Em algumas modalidades, os híbridos pirroloquinazolina-cetona arila são metabolicamente mais estáveis que os inibidores da base de galactose.
[140] Além disso, de acordo com aspectos da invenção, os compostos descritos neste documento e seus derivados não interagem com o sítio CRD em Gal-3. Inesperadamente, os compostos aqui descritos são capazes de interromper a interação de glicoproteínas, como várias integrinas, Gal-3 BP, elastina, receptor de insulina, TGFb1- r = Receptor, HSP60, CD13, PSA e outros, da ligação ao sítio CRD.
[141] Além disso, os compostos aqui descritos têm como alvo específico a face F de Gal-3, que confere a esses compostos uma grande especificidade em relação a outras galectinas que compartilham sítios comuns de CRD. Isso pode ser visto na FIG. 1. A FIG. 1 mostra a exibição em 3D da interação da lactose (azul) com a face S do sítio CRD C-terminal de galectina-3.
[142] Além disso, os compostos aqui descritos visando à face F de 15 Gal-3 mostraram mudanças nítidas em estudos de N RMN. As FIG. 15 2A e FIG. 2B são uma análise comparativa por deslocamentos de N RMN de um composto alostérico (à esquerda, AGS-0028) e composto derivado de galactose (à direita, TD-139). As FIGS. 2A e 2B mostram que a interação do sítio alostérico causa mudanças marginais (Fig. 2A, AGS-0028, máximo 0,02 ppm) na face S de CRD do terminal C (aminoácidos 114-245), em comparação com as mudanças fortes registradas com composto derivado da galactose (Fig. 2B, TD-139, Max 0,4 ppm.
[143] Em algum aspecto, os compostos podem ser projetados com atributos químicos para obedecer à regra Lipinski de 5 para drogas orais [Lipinski, 2004, "Lead- and drug-like compounds: the rule-of-five revolution". Drug Discovery Today: Technologies 1 (4): 337–341].
[144] Em alguns aspectos, os substituintes nos compostos híbridos foram selecionados através da análise de predição ADME da estrutura computacional In-silico para características de farmacodinâmica.
[145] Além disso, a estereoisomerização pode ser levada em consideração durante a síntese, pois os compostos com nomenclatura 2D idêntica podem ser diferentes na orientação 3D, com pontuações muito diferentes no modelo computacional e nos testes biológicos.
[146] Em algumas modalidades, a análise computacional in-silico pode ser feita para estabilidade e metabolitos esperados, por exemplo, o anel aromático sem certas substituições pode ser metabolizado ou oxidado mais rapidamente nos microssomas hepáticos.
[147] Além disso, a estrutura da semelhança da farmacocinética pode ser considerada, incluindo o seguinte: Peso molecular [<450] Log p ou cLog P [<5.0], Doadores de ligação de H [<5], Aceitadors de ligação de H [<10], Área de Superfície Polar [<140 A0], Ligações rotacionais [<10], Eficiência de Ligante (LE) [>0.4], Eficiência Lipofílica (LipE) [>6] como estabelecido por regras de química medicinal [Lipinski CA. 2004, Drug Discovery Today: Technologies. 1 (4): 337–341].
[148] Além disso, a ligação ao sítio alostérico pode ser estudada por análise 3D in-silico (vide Figuras 2A e 2B) que indicam efeito potencial na estrutura 3D do CRD e atenuam a especificidade do foco de ligação que pode reduzir ou aprimorar a Afinidade de CRD para seus ligantes de galactose.
[149] Ligação do composto AGS-0028 (verde) da Fórmula I a um adesivo hidrofóbico (amarelo) dentro de um foco do sítio de ligação (cinza) na Face F é ilustrada na FIG. 3A. Com referência à FIG. 3A, é feita ilustração para adesivos hidrofóbicos (amarelo) dentro de um foco de sítio de ligação (cinza) na face F de Gal-3 como alvo potencial de compostos alostéricos (verde) que podem afetar a interação da galectina-3 com seus ligantes.
[150] O composto AGS-0144 (verde) da Fórmula II é mostrado interagindo com o alvo potencial para esses compostos alostéricos na Face F da Galectina-3 com uma pontuação de Glide de -5,96 (FIG. 3B).
[151] A FIG. 3C divulgou a ligação do composto AGS-0164 (verde) com o alvo potencial para esses compostos alostéricos na face F de Gal-3 com uma pontuação de Glide de -7,09.
[152] Alguns aspectos da presente invenção referem-se a um composto de Fórmula I, Fórmula II, Fórmula III ou Fórmula IV para uso como agente terapêutico em um mamífero, como um humano.
[153] Alguns aspectos da presente invenção referem-se a uma composição farmacêutica compreendendo o composto de Fórmula I, Fórmula II, Fórmula III ou Fórmula IV e, opcionalmente, um aditivo farmaceuticamente aceitável, como veículo ou excipiente.
[154] Em algumas modalidades, o composto se liga com alta seletividade à Gal-3 através de um sítio alostérico e afetando o CRD.
[155] Em algumas modalidades, os compostos têm seletividade e afinidade muito altas para Gal-3 na faixa de 5 ηM a 20 µM. Tabela 2: Exemplos de compostos de Fórmula II.
Tabela 3.
Tabela 4: Compostos de Fórmula I que podem também ser adicionalmente derivados para Fórmula II.
Tabela 5: Compostos de Fórmula III que podem também ser adicionalmente derivados para Fórmula IV.
Isto inclui compostos que podem ser encontrados em biblioteca comercial, mas não foram reivindicados para atividade farmacêutica
Métodos de tratamento
[156] Em algumas modalidades, os compostos ou as composições farmacêuticas podem ser utilizados no tratamento de câncer, inflamação, fibrose / cirrose, doenças autoimunes / doenças metabólicas (diabetes / insulina).
[157] Em algumas modalidades, os compostos ou as composições farmacêuticas podem ser utilizados no tratamento de câncer, inflamação, fibrose / cirrose, doenças autoimunes / doenças metabólicas (diabetes / insulina).
[158] Em algumas modalidades, os compostos ou as composições farmacêuticas podem ser utilizados na esteato-hepatite alcoólica ou viral e na esteato-hepatite não alcoólica.
[159] Em algumas modalidades, os compostos ou as composições farmacêuticas podem ser usadas no tratamento de distúrbios inflamatórios e autoimunes crônicos.
[160] Em algumas modalidades, os compostos ou as composições farmacêuticas podem ser utilizados no tratamento de fibrose, incluindo, entre outros, fibrose hepática, fibrose renal, fibrose pulmonar ou fibrose cardíaca.
[161] Alguns aspectos da invenção referem-se a uma composição farmacêutica ou a um composto capaz de aumentar a atividade antifibrose autônoma em órgãos e a cicatrização de órgãos lesados, mas não limitado a fígado, rim, pulmão e coração.
[162] Alguns aspectos da invenção estão relacionados a um método de tratamento de câncer metastático e distúrbios de angiogênese, nos quais Gal-3 está pelo menos em parte envolvido na patogênese, melhorando a metástase em órgãos, incluindo, mas não se limitando a fígado, rim, pulmão e cérebro.
[163] Alguns aspectos da invenção se referem a uma composição farmacêutica ou a um composto que possui uma atividade terapêutica para tratar a imunossupressão e a resistência à insulina sistêmica. Em outro aspecto, a invenção se refere a um método para reduzir a atividade patológica e de doença associada com resistência à insulina sistêmica. [Pingping Li et al. 2016. "Hematopoietic-Derived Galectin-3 Causes Cellular and Systemic Insulin Resistance", Cell. 2016 Nov 3;167(4):973-984].
[164] Alguns aspectos da invenção se referem a uma composição farmacêutica ou a um composto utilizado no tratamento ou a um método de tratar distúrbios inflamatórios e autoimunes nos quais as galectinas estão pelo menos em parte envolvidas na patogênese, incluindo, mas não se limitando a, artrite, artrite reumatoide, asma, doenças de pele, intestino inflamatório e doenças de Crohn.
[165] Alguns aspectos da invenção referem-se a uma composição farmacêutica ou um composto para tratar condições malignas neoplásicas (por exemplo, doenças neoplásicas benignas ou malignas) nas quais a Gal-3 está, pelo menos em parte, envolvida na patogênese, inibindo processos promovidos pelo aumento da expressão de Gal-3. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica ou um composto pode ser usado para tratar ou prevenir a invasão de células tumorais, metástases e neovascularização. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica ou um composto pode ser usado para tratar cânceres primário e secundário.
[166] Em algumas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto ou da composição pode ser compatível e eficaz em combinação com uma quantidade terapeuticamente eficaz de várias drogas anti-inflamatórias, vitaminas, outras drogas ou suplementos farmacêuticos e nutracêuticos, ou combinações dos mesmos sem limitação.
[167] Alguns aspectos da presente invenção referem-se a um composto de Fórmula I, Fórmula II, Fórmula III ou Fórmula IV para uso em um método para tratar um distúrbio relacionado aos ligantes específicos de glicoproteínas que são ativados pela ligação de Gal-3. Alguns aspectos da presente invenção referem-se a um composto de Fórmula I, Fórmula II, Fórmula III ou Fórmula IV para uso em um método para tratar um distúrbio relacionado à ligação de Gal-3 a um ligante específico.
[168] Alguns aspectos da presente invenção referem-se a um método para tratar um distúrbio relacionado à ligação de uma galectina, como Gal-3, a um ligante em um humano ou outro mamífero, em que o método compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto de Fórmula I, Fórmula II, Fórmula III ou Fórmula IV a um humano ou um mamífero em necessidade do mesmo.
[169] Aspectos da invenção referem-se a composições farmacêuticas compreendendo um ou mais dos compostos aqui descritos. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas compreendem um ou mais dos seguintes: adjuvante, diluente, excipiente e veículo farmaceuticamente aceitável.
[170] O termo "veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a um veículo ou adjuvante que pode ser administrado a um objeto (por exemplo, um paciente), juntamente com um composto aqui descrito, e que não destrói a atividade farmacológica do mesmo e é não tóxico quando administrado em doses suficientes para administrar uma quantidade terapêutica ou uma quantidade eficaz do composto.
[171] "Veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a todo e qualquer solvente, meios de dispersão. O uso de tais meios e compostos para substâncias farmaceuticamente ativas é bem conhecido na técnica. De preferência, o veículo é adequado para administração oral, intravenosa, intramuscular, subcutânea, parentérica, espinhal ou peridural (por exemplo, por injeção ou infusão). Dependendo da via de administração, o composto ativo pode ser revestido em um material para proteger o composto da ação de ácidos e outras condições naturais que podem inativar o composto.
[172] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto aqui descrito como ingrediente ativo juntamente com um adjuvante, diluente, excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Uma composição farmacêutica pode compreender de 1 a 99% em peso de um adjuvante, diluente, excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável e de 1 a 99% em peso de um composto aqui descrito.
[173] Os adjuvantes, diluentes, excipientes e/ou veículos que podem ser utilizados na composição da invenção são farmaceuticamente aceitáveis, isto é, são compatíveis com os compostos e os outros ingredientes da composição farmacêutica e não são prejudiciais para o seu receptor. Os adjuvantes, diluentes, excipientes e veículos que podem ser utilizados na composição farmacêutica da invenção são bem conhecidos de uma pessoa dentro da técnica.
[174] Uma dose oral eficaz do composto da presente invenção para um animal ou humano experimental pode ser formulada com uma variedade de excipientes e aditivos que aumentam a absorção do composto através do estômago e intestino delgado.
[175] A composição farmacêutica da presente invenção pode compreender dois ou mais compostos da presente invenção. A composição também pode ser usada em conjunto com outros medicamentos da técnica para o tratamento de distúrbios relacionados.
[176] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreendendo um ou mais compostos aqui descritos pode ser adaptada para administração oral, intravenosa, tópica, intraperitoneal, nasal, bucal, sublingual ou subcutânea, ou para administração via trato respiratório na forma de, por exemplo, um aerossol ou um pó fino suspenso no ar ou, para administração através do olho, intraocularmente, intravítreo ou corneano.
[177] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreendendo um ou mais compostos aqui descritos pode estar na forma de, por exemplo, comprimidos, cápsulas, pós, soluções para injeção, soluções para pulverização, pomadas, adesivos transdérmicos ou supositórios.
[178] Alguns aspectos da presente invenção referem-se à composição farmacêutica compreendendo o composto aqui descrito ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo e opcionalmente um aditivo farmaceuticamente aceitável, tal como veículo ou excipiente.
[179] Uma dose oral eficaz pode ser de 10 vezes e até 100 vezes a quantidade da dose efetiva parental.
[180] Uma dose oral eficaz pode ser administrada diariamente, em uma ou doses divididas ou duas vezes, três vezes por semana ou mensalmente.
[181] Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos podem ser coadministrados com um ou mais outros agentes terapêuticos. Em certas modalidades, os agentes adicionais podem ser administrados separadamente, como parte de um regime de doses múltiplas, a partir dos compostos aqui descritos (por exemplo, sequencialmente, por exemplo, em diferentes esquemas de sobreposição com a administração do composto aqui descrito). Em outras modalidades, esses agentes podem fazer parte de uma forma de dosagem única, misturada com os compostos aqui descritos em uma única composição. Em ainda outra modalidade, esses agentes podem ser administrados como uma dose separada que é administrada aproximadamente ao mesmo tempo que os compostos aqui descritos. Quando as composições incluírem uma combinação do composto aqui descrito e um ou mais agentes terapêuticos ou profiláticos adicionais, o composto e o agente adicional podem estar presentes em níveis de dosagem entre cerca de 1 a 100% e mais preferivelmente entre cerca de 5 a 95% da dose normalmente administrada em um regime de monoterapia.
Métodos de Preparação
[182] Aspectos da invenção referem-se ao método de produção de compostos aqui descritos. Tabela 6: Exemplos de Síntese de Compostos de Acordo com Aspectos da Invenção: Códigos GS Códigos de Estruturas fabricação AGS-0928 GTJC-144-009 AGS-0925 GTJC-144-006 AGS-0907 GTJC-144-008
AGS-0921 GTJC-144-008-1
AGS-0926 GTJC-028-12-2
AGS-0923 GTJC-028-021
AGS-0924 GTJC-028-022
AGS-0934 GTJC-028-023 Procedimento Experimental para AGS-0928 (GTJC-144-009)
[183] Esquema I
[184] Etapa 1: O-(4-formilfenil) dimetilcarbamotioato: DABCO (3,60 g, 32,78 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-hidroxibenzaldeído 1 (2,0 g, 16,39 mmol) em DMF (20 mL) à temperatura ambiente e a mistura de reação foi agitada por 10 min. Cloreto de dimetilcarbamotioico (4,03 g, 32. mmol) foi então adicionado em porções e a mistura de reação foi agitada por 16 h. Água gelada (100 mL) foi adicionada à mistura de reação e armazenada no refrigerador por 5 h. O sólido precipitado foi filtrado através de funil sinterizado e purificado por Combiflash usando 10% de acetato de etila em hexano para fornecer O-(4-formilfenil) dimetilcarbamotioato 3 como um sólido branco
(1,80 g, 50%). HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C10H11NO2S é 209,05, encontrado: 210,00 [M+H]+ 1 H RMN (400 MHz; CDCl3): δ = 10,0 (s, 1H), 7,93 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,24 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 3,46 (s, 3H), 3,37 (s, 3H).
[185] Etapa 2: S-(4-formilfenil) dimetilcarbamotioato: O-(4-formilfenil) dimetilcarbamotioato (3, 1,0 g, 4,7 mmol) foi aquecido a 180ºC em um tubo vedado por 6 h. O produto em bruto foi purificado por Combiflash utilizando 15% de acetato de etila em hexano para fornecer S-(4- formilfenil) dimetilcarbamotioato 4 como um sólido branco (650 mg, 92%). HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C10H11NO2S é 209,05, encontrado: 210,00 [M+H]+ 1 H RMN (400 MHz; CDCl3): δ = 9,83 (s, 1H), 7,86 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,67 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 3,10 (s, 3H), 3,04 (s, 3H).
[186] Etapa 3: 4-Mercaptobenzaldeído: A uma solução de S-(4-formilfenil) dimetilcarbamotioato 4 (650 mg, 3,11 mmol) em MeOH (15 mL), KOH a 5N (6,5 mL) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 80 ºC por 2 h. A mistura foi concentrada para remover o metanol, neutralizada com 1:1 HCl:H2O (pH-7) e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina saturada e secas (Na2SO4) e concentradas sob pressão reduzida a 45 ºC para fornecer 4-mercaptobenzaldeído como líquido incolor (400 mg, 93%). O material bruto foi utilizado para as próximas etapas sem purificação. HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C7H6OS é 138,01, encontrado: 137,00 [M+H]+ 1 H RMN (400 MHz; CDCl3): δ = 9,92 (s, 1H), 7,73 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,03 (s, 1H), 7,37 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 3,67 (s, 1H).
[187] Etapa 4: 4-((4-metilbenzil)tio)benzaldeído: Para uma solução agitada de 4- mercaptobenzaldeído (5, 400 mg, 2,89 mmol) em ACN (15 mL), Cs2CO3 (2,8 g, 8,60 mmol) e 4-(bromometil) benzaldeído (6, 404 mg, 1,36 mmol) foi adicionado à temperatura ambiente (ta). A mistura de reação foi agitada por 10 min à mesma temperatura. Adicionou-se 1-(bromometil)- 4-metilbenzeno na mistura de reação e agitou-se a 80 ºC por 3 h. A mistura de reação foi arrefecida com água (50 mL) e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas (Na2SO4), filtradas e concentradas sob pressão reduzida a 45 ºC. O resíduo foi purificado por combiflash usando 10% de acetato de etila em hexano para fornecer 4-((4- metilbenzil)tio)benzaldeído (600 mg, 85%) como um sólido branco. HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C15H14OS foi 242.08, encontrado:
241.04 [M-H]- 1 H RMN (400 MHz; CDCl3): δ = 9,91 (s, 1H), 7,77 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,37 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,13 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 4,23 (s, 2H), 3,37 (s, 3H).
[188] Etapa 5: (E)-3-(4-((4-metilbenzil)tio)benzilideno)-2,3-di- hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-5(1H)-ona: 2,3-di-hidropirrolo[1,2- a]quinazolin-5(1H)-ona (7, 250 mg, 1,34 mmol) e 4-((4- metilbenzil)tio)benzaldeído (6, 325 mg, 1,34 mmol) foram tomados em AcOH (8 mL) e a mistura de reação foi agitada a 117 ºC por 16 h. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida a 45 ºC e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa para fornecer (E)-3-(4-((4- metilbenzil)tio)benzilideno)-2,3-di-hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-5(1H)- ona como mistura isomérica de (GTJC-144-009-1) (27 mg, 5%) como um sólido amarelo claro. HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C26H22N2OS foi 410.15, encontrado:
411.20 [M + H] 1 H RMN (400 MHz; CDCl3): δ = 8,18 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,69 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 7,46 - 7,41 (m, 3H), 7,31 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,26 - 7,22 (m, 3H), 7,12 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 4,32 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 4,16 (s, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,33 (s, 3H).
[189] Etapa 6: 4-((4-metilbenzil) sulfonil) benzaldeído: m-CPBA (172 mg, 0,82 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-((4-metilbenzil)tio) benzaldeído (8, 100 mg, 0,41 mmol) em DCM (5 mL) a 0 ºC e a mistura de reação foi agitada a 0 ºC de temperatura por 3 h. A mistura de reação foi arrefecida com água gelada (20 mL) e extraída com EtOAc (3 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas (Na2SO4), filtradas e concentradas sob pressão reduzida a 45 ºC e o resíduo foi purificado por Combiflash usando 10% de acetato de etila em hexano para fornecer 4-((4-metilbenzil) sulfonil) benzaldeído (90 mg, 79%) como um sólido branco. HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C15H14O3S era 274,07, encontrado: 273,01 [M-H] + 1 H RMN (400 MHz; CDCl3): δ = 10,06 (s, 1H), 7,93 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 7,79 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,06 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 4,45 (s, 2H), 2,32 (s, 3H).
[190] Etapa 7: (E)-3-(4-((4-metilbenzil)sulfonil)benzilideno)-2,3-di-hidropirrolo[1,2- a]quinazolin-5(1H)-ona: A uma solução agitada de 2,3-di- hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-5(1H)-ona (8, 60 mg, 032 mmol) em IPA (4 mL), NaOMe a 30% (0,3 ml) e 4-((4-metilbenzil) sulfonil) benzaldeído (9, 92 mg, 0,32 mmol) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada a 80 ºC por 4 horas. Após 4 h, a mistura de reação foi concentrada diretamente para obter o produto bruto. O bruto lavado com dietil éter e pentano e purificado por HPLC preparativa para dar (E)-
3-(4-((4-metilbenzil) sulfonil) benzilideno)-2,3-di-hidropirrolo[1,2- a]quinazolin-5(1H)-ona (GTJC-144-009) como um sólido amarelo pálido (10 mg, 7%). Procedimento Experimental para AGS-0925 (GTJC-144-006-1) Esquema II
[191] Etapa 1: (E)-4-metil-N-(4-((5-oxo-1,2-di-hidropirrolo[1,2- a]quinazolin-3(5H)-ilideno)metil)fenil)-N-tosilbenzamida: A uma solução de (E)-4-metil-N-(4-((5-oxo-1,2-di-hidropirrolo[1,2-a]quinazolin- 3(5H)-ilideno)metil)fenil)benzeno sulfonamida (GTJC-144-008) (100 mg, 0,225 mmol) em DCM (3 mL), trietilamina (0,3 mL, 0,677 mmol) foi adicionada a 0ºC seguida por cloreto de 4-metilbenzoíla (52 mg, 0,338 mmol) ao mesmo a temperatura e a reação foram agitadas à temperatura ambiente por 3 h. Água foi adicionada à mistura de reação e extraída com DCM (3 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas (Na2SO4), filtradas, concentradas e o resíduo foi purificado por preparação. HPLC para fornecer (E)-4- metil-N-(4-((5-oxo-1,2-di-hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-3(5H)- ilideno)metil)fenil)-N-tosilbenzamida (GTJC-144-006) como um sólido marrom. HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C33H27N3O4S 561,17, encontrado: 562,22 [M+H]+ 1 H RMN (400 MHz; DMSO-d6): δ = 8,31 - 8,70 (m, 17 H), 4,43 (t, J = 4,5 Hz, 2H), 3,36 (s, 2H), 2,43 (s, 3H), 2,21 (s, 3H). Procedimento Experimental para AGS-0907 (GTJC-144-008)
Esquema III
[192] Etapa 1: N-(4-formilfenil)-4-metilbenzenossulfonamida: A uma solução de 4- aminobenzaldeído (200 mg, 1,65 mmol) em DCM (10 mL) trietilamina (0,68 mL, 4,45 mmol) e cloreto de 4-metilbenzenossulfonila (471 mg, 2,47 mmol) foram adicionados gota a gota a 0ºC e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 12h. Água foi adicionada à mistura de reação e extraída com DCM (3 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas (Na2SO4), filtradas concentradas e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash eluindo com 5% de metanol em DCM para fornecer N-(4- formilfenil)-4-metilbenzenossulfonamida (3) como um sólido amarelo. HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C14H13NO3S 275,32, encontrado: 274,18 [M-H] + LCMS (Método B): m/z 274,18 (M-H)+ (ES-), a 2,00 min (68,93%). 1 H RMN (400 MHz; DMSO-d6): δ = 10,90 (s, 1H), 9,80 (s, 1H), 7,80 - 7,77 (m, 2H), 7,75 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 7,33 (d, J = 4,6 Hz, 2H), 7,26 (d, J = 4,3 Hz, 2H), 2,49 (s, 3H).
[193] Etapa 2: (E)-4-metil-N-(4-((5-oxo-1,2-di-hidropirrolo[1,2- a]quinazolin-3(5H)-ilideno)metil)fenil)benzeno sulfonamida (GTJC- 144 -008):
[194] A uma solução de 2,3-di-hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-5(1H)- ona (4), (70 mg, 0,376 mmol) e N-(4-formilfenil)-4- metilbenzenossulfonamida (103 mg, 0,376 mmol) em MeOH (5 mL) NaOMe a 30% (182,7 mg 1,128 mmol) foi adicionado a 0ºC. A mistura de reação foi então agitada a 90 ºC por 2 h. A mistura de reação foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi lavado com dietil éter (3 x 15 mL). O solvente foi removido sob pressão reduzida a 45ºC e o resíduo foi purificado por HPLC Prep para fornecer (E)-4-metil-N-(4-((5-oxo-1,2-di- hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-3(5H)-ilideno)metil)fenil)benzeno sulfonamida (GTJC-144-008) como um sólido branco (11 mg, 99,26%). HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C25H21N3O3S 443,13, encontrado: 444,44 [M+H]+ LCMS (Método A): m/z 444,44 (M+H)+ (ES+) a 5,18 min (68,33%) e 5,54 min (30,93%) 1 H RMN (400 MHz; DMSO-d6): δ = 10,65 (s, 1H), 8,08 (d, J = 7,36 Hz, 1H), 7,83 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,57 (d, J = 2,4 Hz, 4H), 7,51 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,36 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,32 - 3,29 (m, 2H), 2,33 (s, 3H). Procedimento Experimental para AGS-0921 (GTJC-144-008-1) Esquema IV
[195] Etapa 1: Síntese de (E)-N,4-dimetil-N-(4-((5-oxo-1,2-di- hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-3(5H)-ilideno)metil)fenil)
benzenossulfonamida:
[196] A uma solução de (E)-4-metil-N-(4-((5-oxo-1,2-di- hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-3(5H)-ilideno)metil)fenil)benzeno sulfonamida (GTJC-144-008) (150 mg, 0,3386 mmol) em THF (10 mL), NaH (34 mg, 0,6772 mmol) foi adicionado a 0ºC. Após agitação durante 30 min, foi adicionado gota a gota iodeto de metila (120 mg, 0,8465 mmol) à mesma temperatura e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi arrefecida com NH4Cl diluída com água e extraída com acetato de etila (3 x 15 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina e secas (Na2SO4), filtradas concentradas e o resíduo foi purificado por HPLC Prep para fornecer (E)-N,4-dimetil-N-(4-((5-oxo-1,2-di- hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-3(5H)-ilideno)metil)fenil) benzenossulfonamida (GTJC- 144-008-1) como um sólido castanho. HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C26H23N3O3S 457,55, encontrado: 458,29 [M-H] + 1 H RMN (400 MHz; DMSO-d6): δ = 8,11 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,7 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 7,67 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 7,45 (d, J = 3,6 Hz, 4H), 7,35 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 4,30 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 3,32 - 3,25 (m, 2H), 3,20 (s, 3H), 2,34 (s, 3H). Procedimento de Síntese Experimental para G-926 Esquema V
[197] Nesse esquema sintético, o grupo Me-o- no intermediário 5 representa uma variedade de estrutura arila potencial [Rx-O-] que pode fortalecer o coeficiente de ligação do composto, aumentar sua afinidade com a Gal-3, afetando o ligante ligação e/ou perfil farmacocinético do composto, incluindo a sua biodisponibilidade oral.
[198] Etapa 1: Síntese de 1-(terc-butil) 3-etil 4-oxopiperidina-1,3-dicarboxilato (2): A uma solução de 4-oxopiperidina-3-carboxilato de etila (2,0 g, 9,63 mmol) em DCM (20,0 mL) trietilamina (3,0 eq) e Boc-anidrido (1,0 eq) foram adicionados a 0ºC e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 18 h. Água foi adicionada à mistura de reação e extraída com DCM (3 x 25 mL)). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas (Na2SO4). O solvente foi removido sob pressão reduzida a 45ºC e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash, eluindo com 5% de MeOH em DCM para fornecer 1-(terc- butil) 3-etil 4-oxopiperidina-1,3-dicarboxilato (2) como xarope incolor. 1 H RMN (400 MHz; CDCl3): δ = 4,23 (t, J = 6,2 Hz, 3H), 4,05 (s, 2H), 3,56 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,58 (s, 2H), 1,46 (s, 9H), 1,40 (t, J = 5,6 Hz, 3H).
[199] Etapa 2: 5-oxo-1,4,5,7,8,9-hexa-hidropirido[3,4-e]pirrolo[1,2-a]pirimidina-3 (2H)-carboxilato de terc-butila (4):
[200] A uma solução de cloridrato de 3,4-di-hidro-2H-pirrol-5- amina (3, 1998 mg, 7,375 mmol) em EtOH (5 mL) adicionou NaOMe a 30% em metanol (6 mL) e 1-(terc-butil) 4-oxopiperidina-1,3-dicarboxilato de 3-etila (4, 885 mg, 7,375 mmol) foram adicionados à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura de 80 ºC por 8 h. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida a 45ºC, para dar o bruto. A mistura de reação bruta foi purificada por cromatografia em coluna flash para fornecer 5-oxo- 1,4,5,7,8,9-hexa-hidropirido[3,4-e]pirrolo[1,2-a]pirimidina-3 (2H)- carboxilato de terc-butila (4) como goma incolor. HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C15H21N3O3 291,16, encontrado: 292,15 [M+H]+ LCMS (Método A): m/z 292,15 (M+H)+ (ES+), a 4 min (99,16%). 1 H RMN (400 MHz; CDCl3): δ = 4,30 (s, 2H), 4,03 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 3,71 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 3,07 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 2,60 (s, 2H), 2,33-2,27 (m, 2H), 1,46 (s, 9H).
[201] Etapa 3: 7-(4-hidróxi-3-metoxibenzilideno)-5-oxo-1,4,5,7,8,9-hexa- hidropirido[3,4-e]pirrolo[1,2-a]pirimidina-3(2H)-carboxilato de terc- butila (GTJC-028-12-1):
[202] A uma solução de 5-oxo-1,4,5,7,8,9-hexa-hidropirido[3,4- e]pirrolo [1,2 -a] pirimidina-3 (2H)-carboxilato de terc-butila (4, 130 mg, 0,446 mmol) em IPA (10 mL), NaOMe a 30% em metanol (0,3 ml) e 1- (terc-butil) 3-etil 4-oxopiperidina-1,3-dicarboxilato (4,885 mg, 7,375 mmol) foram adicionados à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada a 90ºC por 24 h. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida a 45ºC, para dar o bruto. A mistura de reação bruta foi purificada por cromatografia em coluna Flash eluindo com 5% de MeOH em DCM para fornecer 7-(4-hidróxi-3- metoxibenzilideno)-5-oxo-1,4,5,7,8,9-hexahidropirido[3,4-e]pirrolo[1,2- a]pirimidina-3(2H)-carboxilato de terc-butila como um sólido amarelo (GTJC-028-12-1). HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C23H27N3O5 425,20, encontrado: 426,23 [M+H]+ LCMS (Método A): m/z 426,23 (M+H)+ (ES+), a 10 min (98,94%). 1 H RMN (400 MHz; CDCl3): δ = 9,55 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,09 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,18-4,14 (t, 2H), 4,09 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,61 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,24 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,70 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 1,42 (s, 9H).
[203] Etapa 4: 7-(4-hidróxi-3-metoxibenzilideno)-1,2,3,4,8,9-hexa-hidropirido[3,4- e]pirrolo [1,2-a] pirimidin-5 (7H)-ona (GTJC -028-12-2):
[204] A uma solução de 7-(4-hidróxi-3-metoxibenzilideno)-5-oxo- 1,4,5,7,8,9-hexa-hidropirido[3,4-e]pirrolo[1,2-a]pirimidina-3(2H)- carboxilato de terc-butila (60 mg, 0,141 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado HCl a 3N em dioxano (0,2 mL) a 0ºC. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 2 h. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida a 45ºC e o resíduo foi titurado com dietil éter para fornecer 7-(4-hidróxi-3-metoxibenzilideno)- 1,2,3,4,8,9-hexa-hidropirido[3,4-e]pirrolo[1,2-a]pirimidin-5(7H)-ona como um sólido amarelo claro (GTJC-028-12-2). HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C18H19N3O3 325,14, encontrado: 326,05 [M+H]+ LCMS (Método A): m/z 326,05 (M+H)+ (ES+), a 10 min (99,65%). 1 H RMN (400 MHz; DMSO-d6): δ = 9,55 (s, 2H), 7,60 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,13 (d, J = 1,92 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 4,26 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,30 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,30 (t, J = 6,4 Hz, 2H)), 2,96 (t, J = 6,2 Hz, 2H).
[205] Procedimento Experimental para AGS-0923 (GTJC-028- 021) Esquema VI
[206] Etapa 1: 7-fluoro-2,3-di-hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-5(1H)-ona (3):
[207] Uma mistura de 2,5-difluorobenzamida (500 mg, 3,18 mmol) e 5-metóxi-3,4-di-hidro-2H-pirrol (945 mg, 9,54 mmol) foi aquecida a 120ºC por 8 h. A mistura de reação foi arrefecida à temperatura ambiente e dissolvida em 5% de MeOH em DCM e concentrada in vácuo. O produto bruto foi purificado por Combiflash usando 5% de MeOH em DCM para fornecer 7-fluoro-2,3-di-hidropirrolo[1,2- a]quinazolin-5(1H)-ona (3) como um sólido vermelho claro. HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C11H9FN2O 204,07, encontrado: 205,01 [M+H]+ LCMS (Método A): m/z 205,01 (M+H)+ (ES+), a 4,00 min (95,32%). 1 H RMN (400 MHz; DMSO-d6): δ = 7,73 - 7,70 (m, 2H), 7,61 - 7,58 (m,
1H), 4,26 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,05-3,01 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,27-2,23 (m, 2H).
[208] Etapa 2: (E)-7-fluoro-3-(4-hidróxi-3,5-dimetoxibenzilideno)-2,3-di- hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-5(1H)-ona (GTJC-028-021):
[209] A uma solução de 7-fluoro-2,3-di-hidropirrolo[1,2- a]quinazolin-5(1H)-ona (3, 220 mg, 0,927 mmol) em metanol (5 mL), NaOMe a 30% em metanol (2 mL) e 4-hidróxi-3,5-dimetoxibenzaldeído (4, 337 mg, 1,85 mmol) foram adicionados à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura de 70ºC por 8 h. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida a 45ºC. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna Prep para dar (E)-7-fluoro-3-(4-hidróxi-3,5-dimetoxibenzilideno)-2,3-di- hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-5(1H)-ona (GTJC-028-002) como um sólido acastanhado claro (24 mg, 11%). HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C20H17FN2O4 368,12, encontrado: 369,07 [M+H]+ LCMS (Método A): m/z 369,07 (M+H)+ (ES+), a 10 min (97,33%). 1 H RMN (400 MHz; DMSO-d6): δ = 9,00 (s, 1H), 7,75 - 7,70 (m, 2H), 7,72 - 7,67 (m, 2H), 6,97 (s, 2H), 4,40 - 4,36 (m, 2H), 3,87 (s, 6H), 3,39 - 3,38 (m, 2H). Procedimento Experimental para AGS-924 Esquema VII
[210] Etapa 1:
[211] 7-cloro-2,3-di-hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-5(1H)-ona (3): Uma mistura de 5-cloro-2-fluorobenzamida (3, 500 mg, 2,89 mmol) e 5-
metóxi-3,4-di-hidro-2H-pirrolo (858 mg, 8,67 mmol) foi aquecida a 120 durante 8 h. A mistura de reação foi arrefecida até à temperatura ambiente, dissolvida em 5% de MeOH em DCM e concentrada in vácuo. O resíduo foi purificado por Combiflash eluindo com 5% de MeOH em DCM para fornecer 7-cloro-2,3-di-hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-5(1H)- ona (3) como um sólido vermelho claro. HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C11H9ClN2O, 220.04 encontrado: 221.04 [M+H]+ LCMS (Método H): m/z 221 (M+H)+ (ES+), a 4,12 min (92,58%). 1 H RMN (400 MHz; DMSO-d6): δ = 7,97 (s, 1H), 7,07 - 7,85 (m, 1H), 7,57 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,26 (t, J = 6,3 Hz), 2H), 3,05-(t, J = 6,6 Hz, 2H), 2,25 (t, J = 6,0 Hz, 2H).
[212] Etapa 2: (E)-7-cloro-3-(4-hidróxi-3,5-dimetoxibenzilideno)-2,3-di- hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-5(1H)-ona (AGS-0934, GTJC-028 - 022):
[213] A uma solução de 7-cloro-2,3-di-hidropirrolo[1,2- a]quinazolin-5(1H)-ona (3, 380 mg, 1,77 mmol) em isopropanol (10 mL), NaOMe a 30% em metanol (3,5 mL) e 4-hidróxi-3,5- dimetoxibenzaldeído (4, 345 mg, 1,89 mmol) foram adicionados à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura de 70ºC por 8 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida a 45ºC e o resíduo foi purificado por HPLC Prep para fornecer (E)-7- cloro-3-(4-hidróxi-3,5-dimetoxibenzilideno)-2,3-di- hidropirrolo[1,2a]quinazolin-5(1H)-ona (GTJC-028-022) como um sólido amarelo (4 mg, 10%). HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C20H17ClN2O4, 384,09, encontrado: 385,10 [M+H]+ LCMS (Método A): m/z 385,10 (M+H)+ (ES+), a 10 min (85,00%). 1 H RMN (400 MHz; DMSO-d6): δ = 8,01 (s, 1H), 7,88 (t, J = 6,6 Hz, 1H),
7,69 (s, 1H), 7,62-7,59 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 6,89 (s, 2H), 4,40 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,81 (s, 6H), 3,40 (t, J = 6,1 Hz. 2H). Procedimento Experimental para AGS-0934 (GTJC-028-023) Esquema VIII
[214] Etapa 1: 7-bromo-2,3-di-hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-5(1H)-ona (3): Uma mistura de 5-bromo-2-fluorobenzamida (1, 600 g, 2,76 mmol) e 5- metóxi-3,4-di-hidro-2H-pirrol (2, 995 mg, 179,6 mmol) foi aquecida a 120ºC durante 8 h. A mistura de reação foi arrefecida à temperatura ambiente, dissolvida em 5% de MeOH em DCM e concentrada in vácuo. O resíduo foi purificado por Combiflash eluindo com 5% de MeOH em DCM para fornecer 7-bromo-2,3-di-hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-5(1H)- ona (3) como um sólido marrom claro. HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C11H9BrN2O 264, encontrado: 265 [M+H]+ e 267 [M + H + 2] + LCMS (Método B): m/z 265 (M+H)+ (ES+), a 4,12 min (99,54%). 1 H RMN (400 MHz; DMSO-d6): δ = 8,11 (s, 1H), 7,99-7,97 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,25 - 4,22 (m, 2H), 3,05 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,26 (t, J = 6,0 Hz, 2H).
[215] Etapa 2: Síntese de (E)-7-bromo-3-(4-hidróxi-3,5-dimetoxibenzilideno) -2,3- di-hidropirrolo[1,2-a]quinazolin-5(1H)-ona (AGS-0924, GTJC-028- 023):
[216] A uma solução de 7-bromo-2,3-di-hidropirrolo[1,2- a]quinazolin-5(1H)-ona (3, 400 mg, 1,51 mmol) em isopropanol (8 mL), 30% de NaOMe em metanol (2,0 mL) e 4-hidróxi-3,5-
dimetoxibenzaldeído (4, 330 mg, 1,818 mmol) foram adicionados à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada a 70ºC por 8 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida a 45ºC e o resíduo foi purificado por HPLC Prep para fornecer (E)-7-bromo-3-(4- hidróxi-3,5-dimetoxibenzilideno)-2,3-di-hidropirrolo[1,2-a]quinazolin- 5(1H)-ona (GTJC-028-002) como um sólido amarelo claro (4 mg, 10%). HRMS (ESI) [M+H]+ calc. para C20H17BrN2O4 428,04, encontrado: 429 [M+H]+ e 431 [M+H+2]+ LCMS (Método A): m/z 429,05 (M+H)+ (ES+), a 10 min (92,32%). 1 H RMN (400 MHz; DMSO-d6): δ = 8,92 (s, 1H), 8,13 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,99 - 7,97 (m, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,56 - 7,54 (m, 1H), 6,97 (s, 2H), 4,38 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,84 (s, 6H), 3,397 (t, J = 6,6 Hz, 2H).
EXEMPLOS
[217] Os compostos identificados foram sintetizados e purificados por cromatografia convencional de alto desempenho e, em seguida, validados quanto à estrutura, pureza e composição de isômeros por RMN e LC-MS. Os compostos foram então pesquisados quanto à ligação de Gal-3 por múltiplos ensaios in vitro e in vivo.
[218] São dados exemplos de compostos proprietários aqui descritos que têm efeito fisiológico significativo nas galectinas e mais específicos na funcionalidade Gal-3 in vitro e in vivo:
[219] São dados exemplos de compostos aqui descritos (Tabelas 2, 3 e 4) que podem ter efeito fisiológico significativo nas galectinas ou podem servir como intermediários para serem integrados ainda mais em estruturas fundidas (como demonstrado na Tabela 3) para produzir especificidade de ligação aprimorada para Gal-3 ou outra galectina e atenuam sua funcionalidade e manifestação patológica. Exemplo 1: Inibição de composto de CRD da galectina (Domínio de Reconhecimento de Carboidratos) que se liga a sondas fluorescentes
[220] As moléculas fluorescentes em solução, excitadas com uma luz polarizada, emitem luz para um plano fixo se as moléculas permanecerem imobilizadas durante a excitação do fluoróforo. No entanto, a molécula emitirá luz para um plano múltiplo se a molécula girar e tombar livremente durante a excitação do fluoróforo. Portanto, quando a molécula fluorescente se liga a uma molécula grande, como a proteína, a luz emitida permanece polarizada, no entanto, no estado livre, a luz é obviamente despolarizada (FIG. 4).
[221] As sondas de carboidratos marcados com fluorescência foram desenvolvidas as quais se ligam à Gal-3 e outras proteínas da galectina e essas sondas foram usadas para estabelecer ensaios que medem a afinidade de ligação de compostos às proteínas da galectina usando interferência com o sinal de Polarização de Fluorescência. Os compostos aqui descritos se ligam avidamente à Gal-3, bem como a outras proteínas da galectina como Galectin-1, Galectin-8, galectin-9 e outras. Usando este ensaio e deslocando a sonda com alta afinidade, com IC50 (concentração a 50% de inibição) entre 5 ηM e 20 µM. Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos têm um IC50 entre 5 nM e 10 nM, de 5 nM e 100 nM, de 5 nM a 1 µM, de 5 nM a 10 µM, de 10 nM a 100 nM, de 10 nM a 100 nM, de 10 nM a 1 µM, de 10 nM a 10 µM, de 10 nM a 20 µM, de 100 nM a 1 µM, de 100 nM a 10 µM, de 100 nM a 20 µM, de 1 µM a 10 µM, de 1 µM a 20 µM, de 1 µM a 20 µM, de 10 µM a 20 µM, etc.
[222] A interferência de compostos alostéricos com uma pequena ligação da sonda de fluoresceína tem sido geralmente mais fraca do que a observação com a interação da galectina com os ligantes naturais de glicoproteínas maiores das galectinas. Este método foi mais eficaz na medição de pequenas moléculas de derivados da galactose.
[223] Por exemplo, um derivado de digalactosídeo que causa inibição significativa da polarização quando testado contra um pequeno derivado de lactose ligado a FITC (vide FIG. 5B) ou a interação mais complexa de ligante de glicoproteína como Integrina αMβ2 (Vide FIG. 8C). No entanto, o composto alostérico (como nos Exemplos 1A, 2 e 3) pode afetar apenas levemente a interação do pequeno derivado de FITC-lactose (vide FIG. 5A), mas afetará significativamente a interação mais complexa com o ligante de glicoproteínas, como a Integrina αMβ2 e αVβ6 (Vide FIGS 8A e 8B). Exemplo 2: Inibição de composto de transferência de energia de ressonância entre o cromóforo da galectina (doador) e um ligante fluorescente (aceitador).
[224] A transferência de energia de ressonância por fluorescência (FRET) é um método adequado para avaliar a ligação de molécula pequena relativa a um sítio de ligação de uma molécula aceitadora maior. A FRET é um fenômeno físico que está sendo usado regularmente na descoberta de drogas. A sensibilidade do sinal FRET depende da transferência de energia dependente da distância devido a uma interação da molécula doadora com uma molécula aceitadora. Após a interação, o cromóforo da molécula doadora que absorve inicialmente a energia transfere-a posteriormente para o cromóforo do aceitador. A transferência de energia leva a uma redução na intensidade de fluorescência do doador e no tempo de vida do estado excitado e a um aumento na intensidade de emissão do aceitador. Um par de moléculas que interagem de tal maneira que a FRET ocorre é frequentemente chamado de par doador/aceitador.
[225] O ensaio FRET foi adaptado para avaliar a interação das galectinas marcadas com cromóforo com a sonda doadora de galactose fluorescente que, quando se liga ao CRD, apresenta emissão positiva (vide a FIG. 6). O método foi considerado eficaz para verificar se os compostos aqui descritos se ligam avidamente à Gal-3, bem como a outras proteínas da galectina e reduzem a intensidade de emissão.
Usando este ensaio, a IC50 (concentração de inibição de 50%) foi estabelecido na faixa de 5 ηM a 20 µM.
[226] Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos têm uma IC50 entre 5 nM e 10 nM, de 5 nM e 100 nM, de 5 nM a 1 µM, de 5 nM a 10 µM, de 10 nM a 100 nM, de 10 nM a 1 µM, de 10 nM a 10 µM, de 10 nM a 20 µM, de 100 nM a 1 µM, de 100 nM a 10 µM, de 100 nM a 10 µM, de 100 nM a 20 µM, de 1 µM a 10 µM, de 1 µM a 20 µM, de 10 µM a 20 µM, etc. Exemplo 3: Inibição de composto de ligação de galectina a ligantes fisiológicos
[227] As proteínas da galectina, incluindo, mas não se limitando a Gal-3 e galectina-1, têm vários ligantes de ligação biologicamente relevantes em espécies de mamíferos, incluindo mas não se limitando a roedores, primatas e seres humanos. As galectinas são proteínas de ligação a carboidratos que se ligam às glicoproteínas com açúcares contendo β-galactosídeo.
[228] O resultado da ligação das proteínas da galectina a esses ligantes resulta em uma infinidade de efeitos biológicos nas células e nos tecidos e organismos inteiros, incluindo a regulação da sobrevivência e sinalização celular, influenciando o crescimento celular e a quimiotaxia, interferindo na secreção de citocinas, mediando interações célula-célula ou célula-matriz ou influenciando na progressão e metástase do tumor. Além disso, as alterações na expressão normal das proteínas da galectina são responsáveis por efeitos patológicos em várias doenças, incluindo, entre outras, doenças inflamatórias, fibróticas e neoplásicas.
[229] Os compostos aqui descritos são projetados para atenuar o domínio de reconhecimento de carboidratos das proteínas da galectina, com maior especificidade para Gal-3, e interromper suas interações com ligantes biologicamente relevantes. Destinam-se a inibir a função das proteínas da galectina que podem estar envolvidas em processos patológicos em níveis normais de expressão ou em situações em que são aumentadas em níveis fisiológicos.
[230] Alguns dos ligantes das proteínas da galectina que são importantes na função celular normal e na patologia da doença incluem, entre outros, integrinas, proteína de ligação de Gal-3, TIM-3 (mucina 3 de imunoglobulina de células T), CD8, Receptor de células T, receptores do fator-β de crescimento transformador (TGF-β Rs), lamininas, fibronectinas, BCR (receptor de células B, CTLA-4 (proteína-4 associada a linfócitos T citotóxicos), EGFR (receptor do fator de crescimento epidérmico), FGFR (receptor do fator de crescimento de fibroblastos), GLUT-2 (transportador de glicose-2), IGFR (receptor do fator de crescimento tipo insulina), receptor de insulina, várias interleucinas, GLP (lipofosfoglicano), MHC (complexo de histocompatibilidade principal), PDGFR (receptor do fator de crescimento derivado de plaquetas), TCR (receptor de células T), CD98, antígeno Mac3 (proteína 2 da membrana associada a lisossoma (LAMP2), também conhecido como CD107b (Cluster de Diferenciação 107b) e outros.
[231] Experimentos foram realizadas para avaliar a interação física das proteínas de galectina com esses vários ligantes biológicos mediadores das funções celulares, bem como com anticorpos específicos para as galectinas. A concepção destes experimentos foi usada para avaliar a interação entre vários ligantes Gal-3 e determinar se os compostos aqui descritos são capazes de inibir essas interações, como mostrado nos diagramas nas FIGS. 7A e 7B.
[232] Ilustrações de ensaios funcionais com anticorpo específico para o emparelhamento de ligação de Gal-3 com um ligante da glicoproteína, por exemplo, Proteína de Ligação de Gal-3 (Gal-3 BP), Integrinas, etc. (FIGS. 7A e 7B).
[233] Ao usar este ensaio, os compostos aqui descritos inibem a interação das proteínas Gal-3 com seus ligantes, incluindo mas não se limitando a várias moléculas de integrina (αVβ3, αVβ6, αMβ2, α2β3 e outras) com IC50 na faixa de 50 ηM a 20 µM (FIGS. 8A, 8B e 8D). Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos têm uma IC50 entre 5 nM e 10 nM, de 5 nM e 100 nM, de 5 nM a 1 µM, de 5 nM a 1 µM, de 5 nM a 10 µM, de 10 nM a 100 nM, de 10 nM a 1 µM, de 10 nM a 10 µM, de 10 nM a 20 µM, de 100 nM a 1 µM, de 100 nM a 10 µM, de 100 nM a 10 µM, de 100 nM a 20 µM, de 1 µM a 10 µM, de 1 µM a 20 µM, de 10 µM a 20 µM, etc. Ensaios Funcionais com Integrinas: Integrina αMβ2 e αVβ6:
[234] A placa ELISA ativada é revestida com integrina αMβ2. A ligação de Gal-3 é monitorizada com anticorpo anti-Gal-3 conjugado com FITC. O sinal positivo de FITC não representa inibição, enquanto o sinal reduzido indica inibição. A FIG. 8A mostra um exemplo de um composto AGS-0028 que inibe a ligação de Gal-3 a várias integrinas (αVβ6, αMβ2, α2β3) a cerca de 1 µM. As FIGS. 8D e 8E ilustram a inibição específica de Gal-3 por um composto aqui descrito (AGS-0229) vs outras galectinas (FIG. 8D) versus a interação não específica do derivado digalactosídeo TD-139 (FIGS. 8C e 8E).
[235] Integrinas com a subunidade αv como integrina αVβ6 foram identificadas como desempenhando papel importante na via molecular que regula a fibrose em vários órgãos [Henderson et al. Nature Medicine, vol. 19 (12) de dezembro de 2013].
[236] A integrina αVβ6 foi considerada importante na fibrose e sua importância foi validada quando a exclusão genética da subunidade αV protegeu camundongos da fibrose hepática induzida por tetracloreto de carbono. Dados semelhantes foram obtidos com a integrina αVβ3 que, com Gal-3, foram relatados como estando envolvidos na angiogênese (https://www.rndsystems.com/resources/articles/role-Gal-3-
angiogenesis).
[237] Os compostos descritos são altamente específicos para Gal- 3 com faixa de IC50 de 5 ηM a 20 µM. Isto é mostrado por um ensaio de inibição de ELISA (FIG. 8D), em que AGS-0028 demonstrou dificultar significativamente apenas a interação Gal-3 com a Integrina αMβ2. Embora a mesma interação da integrina αMβ2 com várias galectinas (1, 8 e 9) seja inibida com um inibidor específico de CRD, o derivado da galactose TD-139 (FIG. 8E).
[238] Os compostos alostéricos aqui descritos podem atenuar o coeficiente de ligação a CRD para reduzir sua especificidade para ligantes de galactose ou até aumentar sua especificidade para ligante de galactose específico. Estes efeitos foram demonstrados para os compostos AGS-0028 e AGS-0905.
[239] Composto AGS-0028, como representado na FIG. 11A atenua (inibe) a ligação de Gal-3 com Gal-3 BP e, como tal, é sinérgico com a ligação de TD-139 e sua inibição dessa interação.
[240] O composto AGS-0905 como representado na FIG. 11B atenua positivamente (melhorando) o coeficiente de ligação de Gal-3 com Gal-3 BP e, portanto, diminui a inibição de TD-139 dessa interação.
[241] O composto AGS-0905 como representado na FIG. 12A diminuiu a ligação de TD-139 a Gal-3 no modo de resposta à dose, como indicado pela reversão de sua inibição da ligação de Gal-3 à Integrina αVβ6.
[242] Demonstração adicional da inibição da ligação de Gal-3 à integrina αVβ6 é apresentada na FIG. 12B para vários compostos com as fórmulas I e II.
[243] A inibição da ligação de Gal-3 à integrina αMβ2 é demonstrada na FIG. 12C para vários compostos com as fórmulas I, II e III.
[244] A inibição da ligação de Gal-3 à proteína de ligação de Gal-
3 é demonstrada na FIG. 12D para vários compostos com as fórmulas I, II e III.
[245] A inibição da ligação de Gal-3 ao receptor TGFb1 é demonstrada na FIG. 12E para vários compostos com as fórmulas I, II e III.
[246] A inibição da ligação de Gal-3 ao receptor de insulina (IR) é demonstrada na FIG. 12F para vários compostos com as Fórmulas I, II e III. Exemplo 4: Ligação de composto a CRD e outros epítopos, conforme analisado por deslocamentos de resíduos de aminoácidos por 15N RMN: 15
[247] A espectroscopia heteronuclear de N RMN foi usada para avaliar a interação dos compostos aqui descritos com moléculas de galectina, incluindo mas não limitado a Gal-3, para avaliar os resíduos de interação na molécula de Gal-3. 15
[248] Gal-3 uniformemente marcada com N foi expressa em células competentes BL21 (DE3) (Novagen), cultivadas em meios mínimos, purificadas sobre uma coluna de afinidade com lactose e fracionadas em uma coluna de filtração em gel, conforme descrito anteriormente para a produção de Galectina-1 [Nesmelova IV, et al. 2008, "1H, 13C, and 15N backbone and side-chain chemical shift assignments for the 29 kDa human galectin-1 protein dimer". RMN Biomol. Atribuído em Dezembro de 2008; 2 (2):203-205]. 15
[249] Gal-3 uniformemente marcada com N foi dissolvida a uma concentração de 2 mg/ml em 20 mM de tampão de fosfato de potássio a pH 7,0, constituído usando uma mistura de 95% de H2O/5% de D2O. 1 Os experimentos de RMN de H-15N HSQC foram usados para investigar a ligação de uma série de compostos aqui descritos. 1 15 Atribuições de ressonância de H e N para Gal-3 humana recombinante foram previamente relatadas [Ippel H, et al. 2015, "(1)H,
(13)C, and (15)N backbone and side-chain chemical shift assignments for the 36 proline-containing, full length 29 kDa human chimera-type Gal- 3". RMN Biomol. Atribuído em 2015; 9(1):59-63].
[250] Experimentos de RMN foram realizados a 30ºC em espectrômetros Bruker 600 MHz, 700 MHz ou 850 MHz equipados com sondas de ressonância tripla H/C/N e unidades de gradiente de campo de pulso de eixo triplo x/y/z. Uma versão de sensibilidade melhorada ao gradiente de HSQC 1H-15N bidimensional foi aplicada com pontos de dados complexos 256 (t1) x 2048 (t2) nas dimensões de nitrogênio e próton, respectivamente. Os dados brutos foram convertidos e processados usando NMRPipe e foram analisados usando NMRview.
[251] Ao usar um experimento de NMQ HSQC que investiga o deslocamento de cada aminoácido individual na estrutura 3D de Gal-3 completa, o efeito dos compostos aqui descritos indicou claramente uma interação alostérica. Embora o derivado da galactose como TD-139 crie claramente distúrbios de aminoácido localizado no sítio CRD (FIG. 2B, FIG. 9A), os compostos descritos (AGS-0028, AGS-0144) não interagem diretamente com esses aminoácidos (FIGS. 2A, 3A, 3B, 3C, 9E, 9F). A investigação com glicoproteínas funcionais como integrinas no HSQC RMN indicou claramente o aumento da intensidade de resíduos de aminoácidos em Gal-3 associada ao CRD semelhante à lactose. No entanto, outros aminoácidos também mudaram de intensidade (FIGS. 9C, 9D). A adição dos compostos aqui descritos modificou a intensidade / sinal que é traduzido para alterar a afinidade de ligação (FIG. 9F).
[252] A partir dos resultados de RMN (FIGS. 9B, 9C, 9D, 9E, 9F), é óbvio que as integrinas se ligam na S-Face-CRD de Gal-3. No entanto, o composto aqui descrito obviamente se liga em um sítio não CRD, quer local próximo ao CRD na face S, ou na Face F ou no termo N (FIGS. 3A, 3B, 3C, 9B). No entanto, como resultado de suas alterações conformacionais de ligação na estrutura 3D de Gal-3, afetam o foco de CRD e, como resultado, eles modificaram a interação da proteína Gal-3 (FIGS. 9C e 9D).
[253] O estudo de RMN da interação do AGS-0028 com o complexo Gal-3-integrina (aVb6) demonstra claramente que os compostos atenuam múltiplos aminoácidos da Gal-3, incluindo aminoácidos no sítio CRD de Gal-3 (FIGS. 9E e 9F).
[254] Os compostos aqui descritos podem, em algumas modalidades, também aumentar a afinidade de uma interação complexa de Gal-3 com glicoproteínas funcionais e tornar a interação mais específica, como ilustrado pelo composto AGS-0905 (FIG. 11B).
[255] Esses experimentos de HSQC RMN mostraram claramente diferenças entre os compostos aqui descritos e os derivados de galactose descritos na técnica anterior para se ligarem exclusivamente a resíduos de aminoácidos no domínio de ligação a carboidratos de Gal-
3. Exemplo 5: Atividade celular de atividade de citocinas relacionada à inibição da ligação de Galectina
[256] O Exemplo 1 descreve a capacidade dos compostos aqui descritos para inibir a ligação de ligantes fisiológicos a moléculas de galectina. Nos experimentos deste exemplo, as implicações funcionais dessas interações de ligação foram avaliadas.
[257] Uma das interações com Gal-3 que foi inibida pelos compostos aqui descritos foi o receptor TGF-β. Portanto, experimentos foram realizados para avaliar o efeito dos compostos na atividade do receptor TGR-β em linhagens celulares. Várias linhagens celulares responsivas a TGF-β, incluindo, mas não se limitando a, células LX-2 e THP-1, foram tratadas com TGF-β e a resposta das células foi medida observando a ativação de sistemas de segundo mensageiro, incluindo mas não se limitando à fosforilação de várias proteínas SMAD intracelulares. Depois de estabelecer que TGF-β ativou os segundos sistemas mensageiros nas várias linhagens celulares, as células foram tratadas com os compostos aqui descritos. Os resultados mostraram que estes compostos inibiram as vias de sinalização de TGF-β, confirmando que a inibição da interação de ligação descrita no Exemplo 1 tem um papel fisiológico em modelos celulares.
[258] Ensaios celulares também foram realizados para avaliar o significado fisiológico da inibição da interação de Gal-3 com várias moléculas de integrina. Os estudos de interação célula-célula foram realizados utilizando monócitos que se ligam a células endoteliais vasculares, bem como outras linhagens celulares. Verificou-se que o tratamento de células com compostos aqui descritos inibe essas interações dependentes de integrina, confirmando que a inibição da interação de ligação descrita no Exemplo 1 tem um papel fisiológico em modelos celulares.
[259] Ensaios de motilidade celular foram realizados para avaliar o significado fisiológico da inibição da interação de Gal-3 com várias integrinas e outras moléculas de superfície celular definidas no Exemplo
1. Os estudos celulares foram realizados usando várias linhagens celulares em um aparelho de poço separado por membrana semipermeável. Verificou-se que o tratamento de células com compostos aqui descritos inibiu a motilidade celular, confirmando que a inibição da interação de ligação descrita no Exemplo 1 tem um papel fisiológico em modelos celulares. Exemplo 6: Modelo Inflamatório In vitro (um ensaio baseado em monócitos)
[260] Um modelo de polarização de macrófagos foi estabelecido, a partir da cultura de monócitos THP-1, que foi diferenciada em macrófagos inflamatórios usando PMA (Phorbol 12-miristato 13- acetato) por 2-4 dias. Uma vez diferenciados (macrófagos M0), eles foram induzidos com LPS ou LPS e IFN-gama para ativação de macrófagos (M1) ao estágio inflamatório por 1-3 dias. A matriz de citocinas e quimiocinas foi analisada para confirmar a polarização dos macrófagos derivados de THP-1 para o estágio inflamatório. O impacto dos compostos antigalectina 3 na polarização de macrófagos foi avaliado primeiro pelo monitoramento da viabilidade celular usando um método colorimétrico (usando um reagente de tetrazólio) para determinar o número de células viáveis em ensaios de proliferação ou citotoxicidade ((Promega, The CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay which contains a novel tetrazolium compound [3- (4,5-dimethyl-2-il)-5-(3-carboxymetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H- tetrazolium, inner salt; MTS] e um reagente de acoplamento de elétron (etossulfato de fenazina; PES)) e estágio inflamatório avaliado por uma medida quantitativa da Proteína-1 Quimioatrativa de Monócito de quimiocina (MCP-1/CCL2), uma proteína chave que regula a migração e a infiltração de monócitos / macrófagos no processo celular de inflamação. Testes de acompanhamento para a expressão e secreção de outras citocinas e quimiocinas foram realizados para os principais compostos ativos. Os resultados foram expressos em redução percentual de MCP-1 (FIG. 10).
[261] A capacidade do composto para reduzir a expressão de MCP1 em células THP1 ativadas reduzirá a atividade inflamatória de macrófagos [vide <https://www.bio-rad-antibodies.com/macrophage- polarization-minireview.html]. Espec. massa de lisados de HUVEC isolados com uma coluna de afinidade Gal-3 identificou αVβ3 como um parceiro de ligação. αVβ3 foi relatado que estar envolvido na angiogênese mediada por fator de crescimento. Tratamento de HUVECs com Gal-3 promoveu ativação de cluster de αVβ3 e quinase de adesão focal (FAK). Anticorpos contra αVβ3 inibiram a migração de HUVEC induzida por Gal-3 e a formação de túbulos capilares.
[Markowska, A.I. et al. (2010) J. Exp. Med. 207: 1981].
[262] Exemplo de Etapas do Método: 1) Células THP-1 foram cultivadas em meio contendo gentamicina 2) Células THP-1 foram transferidas para poços em uma placa de 96 poços, 2.000 células / poço por 2 dias de incubação em meio de ensaio contendo 10 ng/ml de PMA 3) Diluição serial dos compostos de teste foi realizada em LPS (10 ng/ml) contendo meio 4) A cada poço foram adicionados 100 ml de compostos/ solução de LPS a um volume final de ensaio de cada poço de 200 ml, contendo também Gentamicina e 5 ng/ml de PMA 5) Células foram incubadas até 8 dias. 6) Em dias alternados, amostras de 60 µl foram removidas para bioensaio 7) Na terminação, 15 ml de Solução One Aquosa Promega Substrate CellTiter 96 foram adicionados a cada poço para monitorar a citotoxicidade (a 490 nm) 8) Para avaliação de biomarcadores celulares, as células foram lavadas 1XPBS e extraídas com 200 µl de tampão de Lise por 1 hora. O extrato foi girado 10 minutos e a amostra de 120 µl foi removida do topo. Todas as amostras foram mantidas a -70 ºC até o teste.
[263] As células THP-1 foram estimuladas pela endotoxina microbiana, que transforma as células em macrófagos inflamatórios (M1), que secretam citocinas inflamatórias como a Proteína-1 Quimioatrativa de Monócito (MCP-1). Os agentes anti-inflamatórios reduzem a expressão de MCP-1, como foi demonstrado para AGS-0229 (FIG. 10). Exemplo 7: Modelo de fibrogênese de cultura de células
[264] Os experimentos são realizados com culturas de células estreladas fibrogênicas, incluindo, mas não se limitando a células LX-2, para avaliar o efeito celular dos compostos aqui descritos. As células LX-2 são ativadas em cultura usando meios privados de soro e meios enriquecidos com diferentes porcentagens de meios condicionados às células THP-1. A ativação das células LX-2 é monitorada por vários marcadores bem definidos, incluindo, entre outros, TIMP-1. A ativação demonstrável das células LX-2 é evidente 24 horas após o tratamento e o tratamento das células com os compostos aqui descritos inibe a ativação, confirmando um papel fisiológico nos modelos celulares. Exemplo 8: Modelo NASH/obesidade animal in vivo de fibrose hepática Modelo de fibrose em camundongos com esteato-hepatite não alcoólica (NASH)
[265] O modelo NASH usa camundongos recém-nascidos machos [camundongos C57BL/6J]. A doença é induzida por uma única injeção subcutânea de solução de estreptozotocina (Sigma, St. Louis, MO) 2 dias após o nascimento, o que induziu diabetes. Após quatro semanas de idade, uma dieta rica em gorduras (HFD, 57% de kcal de gordura) é introduzida por 12 e até 16 semanas. O veículo e as substâncias de teste nas várias doses são administrados por via oral ou SQ ou por via intravenosa semanalmente e calculados como mg/kg de peso corporal. O cuidado com os animais segue protocolos de acordo com as Diretrizes de Uso de Animais aceitas. Os animais são submetidos a jejum por 3 horas antes do sacrifício, que é realizado por exsanguinação através de punção cardíaca direta sob anestesia com éter.
[266] A randomização de camundongos nos grupos de tratamento é feita antes do tratamento, com base nos níveis plasmáticos de ALT e peso corporal. No mínimo 3 grupos de tratamento estão em estudo.
[267] Grupo 1: Doze camundongos normais serão alimentados com dieta ad libitum normal, sem qualquer tratamento,
[268] Grupo 2: Doze camundongos NASH serão administrados por via intravenosa (cloreto de sódio a 0,9%) uma vez por semana, de 6 a 12 semanas de idade
[269] Grupo 3: Doze camundongos NASH receberão artigo de teste por via intravenosa em veículo (cloreto de sódio a 0,9%) uma vez por semana, de 6 a 12 semanas de idade
[270] Camundongos serão sacrificados nas 4 semanas seguintes ao tratamento
[271] Os compostos principais reduzirão a fibrose hepática como medido pelo colágeno de 10 a 80% em relação ao controle do veículo ou a níveis quase normais de colágeno, conforme estabelecido no grupo
1. Testes Bioquímicos Gerais:
[272] A glicose rápida diabética é medida em amostras de sangue total usando, por exemplo, G Checker (Sanko Junyaku Co. Ltd., Japão).
[273] Funções hepáticas são avaliadas no plasma quanto aos níveis de AST, ALT, bilirrubina total, creatinina e TG são medidos por FUJI DRY CHEM 7000 exemplar (Fuji Film, Japão).
[274] Bioquímica do fígado: Para quantificar o conteúdo de hidroxiprolina no fígado, uma avaliação quantitativa do conteúdo de colágeno, amostras de fígado congeladas (40–70 mg) são processadas por um método padrão de hidrólise de ácido alcalino e o conteúdo de hidroxiprolina é normalizado para as proteínas totais do fígado.
[275] Os extratos lipídicos do fígado totais são obtidos dos lobos caudados pelo método de Folch e os níveis de TG no fígado são medidos usando o teste E de triglicerídeo (Wako, Japão).
[276] Seções do fígado de análises histopatológicas e imuno- histoquímica são cortadas em blocos de parafina de tecido hepático prefixado na solução de Bouin e coradas com Hematoxilina de Lillie- Mayer (Muto Pure Chemicals, Japão) e solução de eosina (Wako,
Japão).
[277] Para visualizar a deposição de colágeno, as seções fixas do fígado de Bouin são coradas com solução vermelha picro-Sirius (Waldeck GmbH & Co. KG, Alemanha). O escore de atividade de NAFLD (NAS) também é calculado de acordo com os critérios estabelecidos.
[278] A imuno-histoquímica para SMA, F4/80, Gal-3, CD36 e iNOS pode ser estimada a partir de cada área positiva como indicação da extensão da inflamação e fibrose. Exemplo 9: Toxicidade química animal in vivo levando ao modelo de fibrose / cirrose Modelo de fibrose hepática tratado com tioacetamida de rato (TAA):
[279] Esses experimentos usam ratos machos Sprague – Dawley entre 160 e 280 g obtidos em instalações de pesquisa com animais (Jackson Laboratory) e mantidos de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (Institute of Laboratory Animal Resources, 1996, Nat. Acad. Press) e Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais (IACUC). No final dos experimentos, os animais são sacrificados sob anestesia com fenobarbital.
[280] Após um período de aclimatação de duas semanas, é iniciado um período de indução de oito semanas, no qual todos os ratos são submetidos a injeções intraperitoneais (IP) de Tioacetamida (TAA, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, EUA) de soluções estéreis dissolvidas em solução salina a 0,9%, administradas por injeção IP duas vezes ou três vezes por semana com uma dose inicial de 450 mg/kg/semana, seguida por sete semanas de regime de 400 mg/kg/semana de peso corporal. Para avaliar a progressão da fibrose, dois ratos são sacrificados nas semanas 4 e 8 e o fígado é examinado histologicamente. Para desenvolver cirrose, os animais recebem TAA IP de 11 a 12 semanas, para fibrose 8 semanas são suficientes. O tratamento foi realizado por 4 semanas, começando na semana 8, e o grupo controle de veículo foi administrado com NaCl a 0,9% por via intraperitoneal (IP) duas vezes por semana durante quatro semanas. Os artigos de teste experimental recebem IP duas ou uma vez por semana, começando na semana 8 ou 11, para fibrose ou cirrose, respectivamente. No final do período de tratamento, os ratos são colocados sob anestesia usando isofluorano entre 1% e 5% por inalação e uma laparotomia é realizada. No momento do sacrifício, a pressão da aorta é medida usando um angiocateter de 16 G introduzido na veia aorta para medir a altura de uma coluna de água. O fígado é removido, pesado e as peças dos maiores lóbulos são usadas para análises posteriores. O baço também é removido e pesado antes de ser descartado.
[281] A histologia representativa das seções de fígado coradas com vermelho de Sirius do experimento descrito é feita para comparação entre animais e controle. Uma redução de 20% no colágeno médio (vermelho manchado) é estatisticamente aceitável para o efeito antifibrose. Filamentos de fibrose em ponte indicam estágio avançado de fibrose (são filamentos de fibras de colágeno). Testes Bioquímicos:
[282] Como no modelo NASH, vários testes de diagnóstico são feitos para avaliar a extensão do dano hepático devido à fibrose:
[283] Funções hepáticas são avaliadas no plasma quanto aos níveis de AST, ALT, bilirrubina total, creatinina e TG são medidos pelo exemplo FUJI DRY CHEM 7000 (Fuji Film, Japão).
[284] Bioquímica Fígado: para quantificar o conteúdo de hidroxiprolina no fígado, uma avaliação quantitativa do conteúdo de colágeno, amostras de fígado congelado (40–70 mg) foram processadas por um método padrão de hidrólise de ácido alcalino e o conteúdo de hidroxiprolina foi normalizado para proteínas totais do fígado.
[285] O extrato lipídico total do fígado é obtido dos lóbulos caudados pelo método de Folch e os níveis de TG no fígado são medidos usando o teste E de triglicerídeo (Wako, Japão).
[286] Seções de fígado de análises histopatológicas e imuno- histoquímicas são cortadas de blocos de parafina de tecido hepático prefixado na solução de Bouin e coradas com Hematoxilina de Lillie- Mayer (Muto Pure Chemicals, Japão) e solução de eosina (Wako, Japão).
[287] Para visualizar a deposição de colágeno, as seções do fígado fixadas com Bouin são coradas com solução vermelha picro- Sirius (Waldeck GmbH & Co. KG, Alemanha). O escore de atividade do NAFLD (NAS) também é calculado de acordo com os critérios estabelecidos.
[288] A imuno-histoquímica para SMA, F4/80, Gal-3, CD36 e iNOS pode ser estimada a partir de cada área positiva como indicação da extensão da inflamação e fibrose. Modelos de ducto biliar de fibrose hepática
[289] Esses experimentos são realizados para avaliar a eficácia dos compostos aqui descritos na fibrose do fígado após a ligação do ducto biliar ou tratamento com drogas que causam fibrose biliar. Os animais tratados com vários compostos aqui descritos mostram que a fibrose hepática é reduzida em comparação com os controles do veículo. Exemplo 10: Modelos animais in vivo de fibrose pulmonar
[290] Esses experimentos são realizados para avaliar a eficácia dos compostos aqui descritos na prevenção da fibrose pulmonar induzida por bleomicina. Um grupo controle não tratado com infusão de solução salina intratraqueal consistiu em 10 camundongos. A bleomicina é administrada por infusão intratraqueal lenta nos pulmões de outros grupos no Dia 0. Nos Dias -1, 2, 6, 9, 13, 16 e 20, os camundongos são dosados (iv, ip, subcutâneo ou oral) uma vez ao dia com veículo ou várias doses de compostos aqui descritos (iv, ip, subcutâneo ou oral) CT-01 (Grupo 3). Os animais são pesados e avaliados diariamente para dificuldade respiratória. No dia 21, todos os animais são sacrificados e o peso úmido dos pulmões é medido. Após o sacrifício, o sangue é coletado por sangramento retro-orbital para a preparação do soro. O lóbulo direito do pulmão é congelado rapidamente para análise subsequente de hidroxiprolina, enquanto o esquerdo é insuflado e fixado em formalina a 10% para análise histológica. O pulmão fixado em formalina é processado para avaliação histológica de rotina. Exemplo 11: Modelos animais in vivo de fibrose renal
[291] Esses experimentos são realizados para avaliar a eficácia dos compostos descritos aqui na fibrose renal, usando modelos de ligação ureteral unilateral e nefropatia diabética. Os animais tratados com vários compostos aqui descritos mostram que a fibrose renal é reduzida em comparação com os controles do veículo. Exemplo 12: Modelos animais in vivo de fibrose cardiovascular
[292] Esses experimentos são realizados para avaliar a eficácia dos compostos descritos aqui na fibrose do coração e dos vasos usando modelos de insuficiência cardíaca, fibrilação atrial, hipertensão pulmonar e aterosclerose. Os animais tratados com vários compostos aqui descritos mostram que a fibrose cardiovascular é reduzida em comparação com os controles do veículo. Exemplo 13: Angiogênese induzida por VEGF-A
[293] Sinalização de fatores de crescimento endotelial vascular (VEGFs), embora o receptor-2 de VEGF (VEGFR-2) seja a principal via angiogênica. As proteínas da galectina são importantes para a via de sinalização. Os compostos aqui descritos são capazes de inibir a neovascularização da córnea de camundongo em resposta à lesão. Exemplo 14: Gal-3 causa resistência sistêmica à insulina in vivo e prejudica a ação da insulina em adipócitos e hepatócitos
[294] Na obesidade, macrófagos e outras células imunes se acumulam nos tecidos alvo da insulina, promovendo um estado inflamatório crônico e resistência à insulina.
[295] Foi relatado que a Gal-3 é elevada em indivíduos obesos e em camundongos [Li et al., Cell (2016), 167 (4), p973–984]. A administração de Gal-3 a camundongos causa intolerância à glicose, bloqueando a ativação do receptor de insulina (IR) da captação de glicose quando a insulina se liga ao seu receptor, enquanto a inibição de Gal-3 melhorou a sensibilidade à insulina em camundongos obesos. Os compostos aqui descritos se ligam à Gal-3 alostericamente e inibem sua ligação ao receptor de insulina (IR) e, portanto, causam a reversão da inibição a jusante da sinalização IR e captação de glicose causada por ele Gal-3. A FIG. 12F demonstra inibição da ligação de Gal-3 a IR na faixa de 50 ηM a 20 µM.
[296] Este modelo in vivo ligou Gal-3, causando inflamação e diminuição da sensibilidade à insulina. Assim, compostos que inibem a ligação de Gal-3 ao IR podem ser utilizados terapeuticamente para tratar a resistência à insulina. Exemplo 15: Avaliação da absorção, distribuição, metabolismo e eliminação de compostos
[297] Os compostos aqui descritos são avaliados quanto às propriedades físico-químicas, incluindo, entre outras, a solubilidade (método termodinâmico e cinético), várias alterações de pH, solubilidade em meio biorrelevante (FaSSIF, FaSSGF, FeSSIF), Log D (Octanol / água e ciclo-hexano / água), estabilidade química no plasma e partição sanguínea.
[298] Os compostos aqui descritos são avaliados quanto às propriedades de permeabilidade in vitro, incluindo, mas não limitados a, PAMPA (ensaio de permeabilidade da membrana artificial paralelo), Caco-2 e MDCK (tipo selvagem).
[299] Os compostos aqui descritos são avaliados quanto às propriedades farmacocinéticas dos animais, incluindo, mas não se limitando à farmacocinética, por várias vias, a saber, oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutânea em camundongos (Albino Suíço, C57, Balb/C), ratos (Wistar, Sprague Dawley), coelhos (brancos da Nova Zelândia), cães (Beagle), macacos Cinomolgo, etc., distribuição de tecidos, razão cérebro-plasma, excreção biliar e balanço de massa.
[300] Os compostos aqui descritos são avaliados quanto à ligação às proteínas, incluindo, entre outras, a ligação às proteínas plasmáticas (ultrafiltração e Diálise de Equilíbrio) e a ligação às proteínas microssômicas.
[301] Os compostos aqui descritos são avaliados quanto ao metabolismo in vitro, incluindo, entre outros, inibição do citocromo P450, inibição dependente do tempo do citocromo P450, estabilidade metabólica, metabolismo do microssoma hepático, metabolismo da fração S-9, efeito no hepatócito criopreservado, estabilidade plasmática e Interceptação AGSH.
[302] Os compostos aqui descritos são avaliados quanto à identificação de metabólitos, incluindo, entre outros, identificação in vitro (microssomas, S-9 e hepatócitos) e amostras in vivo. Exemplo 16: Potencial Terapêutico de Direcionamento de Sinalização de IGF
[303] A sinalização do sistema IGF tem importância crítica no crescimento e desenvolvimento, no entanto, também é crítica em outras funções fisiológicas importantes, incluindo integração de sistemas de energia, regulação de glicose / insulina, desenvolvimento e lactação mamária, saúde óssea, manutenção neuronal. O direcionamento da via de sinalização de IGF foi relatado como uma estratégia promissora no desenvolvimento de novas terapêuticas anticâncer. A expressão de IGF-1R, o principal receptor de transdução de sinal da via, parece ser necessária para a transformação maligna, pois quando foi superexpresso, aumentou o tempo e a frequência do desenvolvimento do tumor em modelos animais. Além disso, camundongos deficientes em IGF-1 reduziram bastante a capacidade de suportar o crescimento e a metástase de tumores. Através de sua atividade antiproliferativa, os inibidores do sistema IGF-1R podem fornecer uma série de benefícios clinicamente importantes. Por exemplo, a terapia de manutenção, destinada a suprimir o crescimento de doença subclínica residual, bloqueio de IGF-1R tem potencial para numerosos efeitos clinicamente úteis, incluindo o aumento da proporção, extensão e duração das respostas clínicas das terapias citotóxicas quando usadas em combinação com quimioterapia.
[304] Utilizando o ensaio de composição ELISA aqui descrito, no qual os compostos foram incubados com Gal-3 e a ligação de Gal-3 ao receptor de IGF foi testada. A FIG. 12G mostra que a Galectin-3 se liga fortemente a IGF-R1 e os compostos aqui descritos podem modular a ligação de Gal-3 a IGF-R1. Como mostrado na Figura 12G, os compostos podem inibir (IC50 positivo) ou aumentar (IC50 negativo) a ligação da Galectina-3 a IGF-R1 e, assim, afetar a via de sinalização do IGF.
[305] A FIG. 12G mostra a comparação dos compostos aqui descritos com compostos derivados de galactose. Ao contrário dos compostos derivados da galactose (por exemplo, TD-139 e AGS-0666) que se ligam diretamente ao domínio de reconhecimento de carboidratos Gal-3 e causam inibição, os compostos alostéricos aqui descritos podem afetar a estrutura de CRD de duas maneiras: (1) reduzir sua afinidade com glicoproteínas (por exemplo AGS-O229 e
AGS-O823 na FIG. 12G) ou (2) fortalecer a afinidade com glicoproteínas (AGS-O903 na FIG. 12G).

Claims (44)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula I ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo: Fórmula I: em que a ligação Y é (-CH=) ou (-CH2-) ou -CH2-X-, sendo que X é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio; Z é um carbono ou um heteroátomo, em que o heteroátomo é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio; R1 é hidrogênio, oxigênio, amina, carboxila, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, arila, halogênio, trifluorometila, dinitrometila ou uma combinação dos anteriores; e R2 e R3 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxila, amina, carboxila, alquil C1- C6, alcóxi C1-C4 e halogênio.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R2, R3 ou R2 e R3 são grupo arila com uma ou mais substituições, em que as uma ou mais substituições são hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, halogênio, benzeno ou combinações dos mesmos.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R2, R3 ou R2 e R3 são fluorometila.
4. Composto, caracterizado pelo fato de que possui a seguinte fórmula ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo:
5. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula II ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo: Fórmula II: em que A-M é uma ligação de 2 átomos tendo a estrutura de uma amida -N(-Ra)-C(=O)-, sulfonamida -N(-H)-S(=O2)-, um metil éter -C(- H2)-O- metil éster -C(=O)-O-, carbossulfon -C(-H2)-S(=O) (=O)-, fosfato -O-P(=O) (-OH)-, difosfato -O-P(=O) (-O)-O-P(=O) (-O)-, Hidrazida –N(- H)-N(-H)-, selanometileno, metoxila, etila ou glicol e/ou um aminoácido, em que a ligação (Y) é (-CH=) ou (-CH2-) ou -CH2-X-, em que X é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio; em que Z é um carbono, ou um heteroátomo em que o heteroátomo é nitrogênio, enxofre de oxigênio ou selênio; em que R1 é hidrogênio, oxigênio, amina, carboxila, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, arila, halogênio, trifluorometila, dinitrometila ou uma combinação do precedente; em que R2 e R3 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4 e halogênio.
6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que R2, R3 ou R2 e R3 são um grupo arila com uma ou mais substituições, em que as uma ou mais substituições são hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, halogênio, benzeno ou combinações dos mesmos.
7. Composto, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que R2, R3 ou R2 e R3 são fluorometila.
8. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte fórmula ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo:
9. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte fórmula ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.
10. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula III ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo: Fórmula III:
em que Z é um carbono, ou um heteroátomo em que o heteroátomo é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio; em que R1 é hidrogênio, oxigênio, amina, carboxila, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, arila, halogênio, trifluorometila, dinitrometila ou uma combinação dos anteriores; em que R2 e R3 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxila, amina, alquil C1- C6, alcóxi C1-C4, halogênio, grupo arila com substituições como hidrogênio, hidroxila, amina, alquil C1-C6, alcóxi C1-C4, halogênio ou combinações dos mesmos; e em que a ligação (Y) é (-CH=) ou (-CH2-)-) ou -CH2-X-, em que X é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio.
11. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula IV ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo: Fórmula IV: em que em que Z é um carbono, ou um heteroátomo, em que o heteroátomo é nitrogênio, enxofre de oxigênio ou selênio; em que R1, R2, R3 e R4 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em CO, SO2, SO,
PO2, PO, CH, Hidrogênio, hidrocarbonetos lineares e cíclicos hidrofóbicos incluindo substituições heterocíclicas de peso molecular de cerca de 10-200 D; em que a ligação (Y) é metilideno (-CH=) ou metileno (-CH2- )-) ou -CH2-X-, em que X é nitrogênio, oxigênio, enxofre ou selênio; em que a ligação A-M sendo pelo menos 2 átomos de ligação tendo a estrutura de amida -N(-Ra)-C(=O)-, sulfonamida -N(-H)-S(=O2)- , um metil éter -C(-H2)-O- metiléster -C(=O)-O-, carbossulfon -C(-H2)- S(=O) (=O)-, fosfato -O-P(=O) (-OH)-, difosfato -O-P(=O) (-O)-O-P(=O) (-O)-, hidrazida-N(-H)-N(-H)-, selanometileno, metoxila, etila, glicol; e/ou um aminoácido.
12. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte fórmula ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo .
13. Composto, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que os hidrocarbonetos lineares e cíclicos hidrofóbicos compreendem um de: (a) um grupo alquila de pelo menos 4 carbonos, um grupo alquenila de pelo menos 4 carbonos, um grupo alquila de pelo menos 4 carbonos substituídos por um grupo carbóxi, um grupo alquenila de pelo menos 4 carbonos substituídos por um grupo carbóxi, um grupo alquila de pelo menos 4 carbonos substituídos por um grupo amino, um grupo alquenila de pelo menos 4 carbonos substituídos por um grupo amino,
um grupo alquila de pelo menos 4 carbonos substituídos por ambos um grupo amino e um grupo carbóxi, um grupo alquenila de pelo menos 4 carbonos substituídos por ambos um grupo amino e um grupo carbóxi e um grupo alquila substituído por um ou mais halogênios; (b) um grupo fenila, ou um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo carbóxi, um grupo fenila substituído por pelo menos um halogênio, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo alcóxi, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo nitro, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo sulfo, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo amino, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo alquilamino, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo dialquilamino, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo hidróxi, um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo carbonila e um grupo fenila substituído por pelo menos um grupo carbonila substituído; (c) um grupo naftila, ou um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo carbóxi, um grupo naftila substituído por pelo menos um halogênio, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo alcóxi, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo nitro, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo sulfo, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo amino, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo alquilamino, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo dialquilamino, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo hidróxi, um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo carbonila e um grupo naftila substituído por pelo menos um grupo carbonila substituído; (d) um grupo heteroarila, ou um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo carbóxi, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um halogênio, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo alcóxi, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo nitro, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo sulfo, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo amino, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo alquilamino, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo dialquilamino, um grupo heteroarila substituído por pelo menos pelo menos um grupo hidróxi, um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo carbonila e / um grupo heteroarila substituído por pelo menos um grupo carbonila substituído, ou uma combinação dos mesmos.
14. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir dos compostos que têm a fórmula da Tabela 1 Exemplo 1A: Exemplo 1B: Exemplo 1C: Y= metilideno Y= metilideno Y= metilideno AGS-0028 AGS-0028 – Isômero E AGS-0028 – Isômero Z Isômeros E e Z 3-[(4-etóxi-3- (3E)-3-(3,4-di- (3Z)-3-(3,4-di- metoxifenil)metilideno]- hidroxibenzilideno)-2,3- hidroxibenzilideno)-2,3- 1H,2H,3H,5H- di-hidropirrolo[1,2- di-hidropirrolo[1,2- pirrolo[1,2- a]quinazolin-5(1H)-ona a]quinazolin-5(1H)-ona a]quinazolin-5-ona Exemplo 1D: Y=Metileno AGS-0904
(3E)-3-[(4-hidróxi-3- metoxifenil)metileno]- 1H,2H,3H,5H-pirrolo[1,2- a]quinazolin-5-ona
Exemplo 2A: Exemplo 2B: Exemplo 2C: Y = metilideno Y = metilideno Y = metileno, A-M = ponte A-M = ponte metileno- A-M = ponte metileno-éter metileno-éter éter AGS-0144 AGS-0144 AGS-0906 Isômeros E & Z Isômero Z
3-({4-[(4- (3Z)-3-({4-[(4- metilfenil)metóxi]feni metilfenil)metóxi] (3Z)-3-({4-[(4-metilfenil) l}metilideno)- fenil}metilideno)- metóxi]fenil}metileno)- 1H,2H,3H,5H- 1H,2H,3H,5H- 1H,2H,3H,5H-pirrolo[1,2- pirrolo[1,2- pirrolo[1,2-a]quinazolin- a]quinazolin-5-ona a]quinazolin-5-ona 5-ona
Exemplo 2D: Exemplo 2E: Exemplo 2F: A-M = Sulfonamida - A-M = Metilsulfon A-M = Metilselênio
AGS-0907 AGS-0929 AGS-0936
(3Z)-3-({4-[(4- (3Z)-3-({4-[(-N-4- (3Z)-3-({4-[(-N-4- metilfenil) metilfenil)sulfonamida]f difluorolfenil)sulfonmetil] selanometileno]fenil}m enil}metilideno)- fenil}metilideno)- etilideno)- 1H,2H,3H,5H- 1H,2H,3H,5H- 1H,2H,3H,5H- pirrolo[1,2- pirrolo[1,2-a]quinazolin- pirrolo[1,2- a]quinazolin-5-ona 5-ona a]quinazolin-5-ona
QZ linear Exemplo 3A: Y= Exemplo 3B: Z = Sulfato metilideno AGS-1011 AGS-1021
(3E)-3-[(4-bromotiofen-2- (3E)-3-[(2H-1,3- il)metilideno]-6- benzodioxol-5-il)metilideno]- (trifluorometil)- 1H,2H,3H,9H-pirrolo[2,1- 1H,2H,3H,9H-pirrolo[2,1- b]quinazolin-9-ona b]quinazolin-9-ona
: QZ-Arila linear Exemplo 4A: Y= metilideno A-M = Ponte metoxila AGS-1101
15. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta uma das Fórmulas da Tabela 6: Códigos GS Códigos de Estruturas fabricação AGS-0928 GTJC-144-009
AGS-0925 GTJC-144-006
AGS-0907 GTJC-144-008
AGS-0921 GTJC-144-008-1
AGS-0926 GTJC-028-12-2
AGS-0923 GTJC-028-021
AGS-0924 GTJC-028-022
AGS-0934 GTJC-028-023
16. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a ligação Y é (-CH=).
17. Composto, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a ligação Y é (-CH=).
18. Composto, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a ligação Y é (-CH=).
19. Composto, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a ligação Y é (-CH=).
20. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que apresenta uma afinidade de ligação de cerca de 5 nM a 20 µM para Galectin-3.
21. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que está na forma cristalina.
22. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que está em uma forma livre.
23. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que a forma livre é um anidrato.
24. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que a forma livre é um hidrato.
25. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que se liga à Galectina 3 com especificidade mais alta que a Galectina 1, Galectina 8, Galectina 9 ou outras galectinas.
26. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 19, e um adjuvante, excipiente, veículo de formulação farmaceuticamente aceitável ou combinações dos mesmos.
27. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 19, e uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma droga anti-inflamatória, uma droga antifibrose, uma droga farmacêutica, droga nutracêutica, suplemento ou combinações dos mesmos.
28. Composição farmacêutica para uso em administração entérica ou parentérica, caracterizada pelo fato de que compreende o composto como definido em uma das reivindicações 1 a 19 em um veículo farmacêutico aceitável.
29. Composição farmacêutica para uso na administração oral, intravenosa ou subcutânea, caracterizada pelo fato de que compreende o composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 19, em um veículo farmacêutico aceitável.
30. Uso de pelo menos um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que é para preparação de uma composição farmacêutica para tratamento de uma doença em um sujeito em necessidade do mesmo.
31. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que a doença é um distúrbio relacionado à doença patológica devido ao aumento da galectina-3.
32. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que a doença é esteato-hepatite alcoólica ou viral, esteato- hepatite não alcoólica, fibrose, cirrose, distúrbio inflamatório, distúrbio metabólico, resistência à insulina, distúrbio autoimune, condição neoplásica, distúrbio metabólico ou câncer.
33. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que a doença é insuficiência cardíaca, arritmias ou cardiomiopatia urêmica.
34. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que a doença é um rim crônico e doenças pulmonares idiopáticas.
35. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que a doença é um distúrbio cutâneo autoimune, proliferativo e fibrótico da pele, opcionalmente psoríase ou dermatite atópica.
36. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o composto modula a ligação de Gal-3 ao receptor de insulina e ao receptor de fator de crescimento semelhante à insulina 1.
37. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de resistência sistêmica à insulina associada ao diabetes tipo 1 e obesidade.
38. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de resistência sistêmica à insulina associada ao diabetes mellitus tipo 2 (T2DM).
39. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de resistência sistêmica à insulina associada à obesidade, diabetes gestacional ou pré-diabetes.
40. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o tratamento com o composto restaura a sensibilidade das células à atividade da insulina.
41. Uso, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o distúrbio inflamatório é doença inflamatória intestinal, doença de Crohn, esclerose múltipla, lúpus eritematoso sistêmico, artrite, artrite reumatoide, asma ou colite ulcerativa.
42. Uso, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a fibrose é fibrose hepática, fibrose renal, fibrose pulmonar ou fibrose cardíaca.
43. Uso, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o distúrbio autoimune é artrite reumatoide, doença de pele ou esclerose múltipla.
44. Uso, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a condição neoplásica é uma doença neoplásica benigna ou maligna.
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