BR112019027943B1

BR112019027943B1 - MULTIPLE WELL CULTURE PLATES AND SYSTEMS THEREOF; AND METHOD FOR GENERATING IMAGES OF A CELL CULTURE

Info

Publication number: BR112019027943B1
Application number: BR112019027943-1A
Authority: BR
Inventors: Glauco R. Souza
Original assignee: Greiner Bio-One North America, Inc
Priority date: 2017-07-13
Filing date: 2018-07-13
Publication date: 2023-08-01

Abstract

São fornecidas placas de cultura especializadas para geração de imagens de células de maneira rápida e com alto rendimento. De forma ideal, os poços da placa de cultura possuem poços triangulares, quadrados ou em forma de V ou paredes de separação de células que possuem uma pluralidade de vértices, e variações mais complicadas dos mesmos também são possíveis. As placas são inclinadas ou giradas para reunir as células no vértice ou vértices dos poços, opcionalmente recebem vibração para acelerar a reunião e, em seguida, a vibração e a inclinação ou rotação são removidas por um período de tempo no qual as células são visualizadas através da base plana transparente da placa.Specialized culture plates are provided for rapid, high-throughput cell imaging. Ideally, culture plate wells have triangular, square, or V-shaped wells or cell separation walls that have a plurality of vertices, and more complicated variations thereof are also possible. The plates are tilted or rotated to gather the cells at the apex or vertices of the wells, optionally vibrated to accelerate the assemblage, and then the vibration and tilt or rotation are removed for a period of time in which the cells are viewed through. the transparent flat base of the plate.

Description

RELATED PREVIOUS ORDERS

[001] O presente pedido reivindica prioridade ao Pedido de Patente No. US 62/532.031, depositado em 13 de julho de 2017, e incorporado por referência em sua totalidade para todos os propósitos.[001] The present application claims priority to Patent Application No. US 62/532,031, filed on July 13, 2017, and incorporated by reference in its entirety for all purposes.

FIELD OF INVENTION

[002] A presente invenção refere-se a diversos dispositivos e métodos de crescimento, manipulação e geração de imagens de células, os quais são importantes em pesquisas e aplicações biológicas. Mais particularmente, a invenção refere-se a recipientes simples, duráveis e econômicos para cultura e geração de imagens e células, e métodos de produção ou utilização dos mesmos.[002] The present invention relates to various devices and methods for growing, manipulating and imaging cells, which are important in biological research and applications. More particularly, the invention relates to simple, durable and economical containers for culturing and imaging and cells, and methods of producing or using the same.

BACKGROUND OF THE INVENTION

[003] A cultura de células, que é o crescimento de células em um ambiente artificial in vitro, é uma técnica crucial no desenvolvimento, e em pesquisas, da ciência da vida. Um ambiente ideal de cultura de células é aquele que promove um crescimento rápido e robusto de células saudáveis, em que a morfologia e a função da célula são dominadas por interações célula-célula com outras células, sinalização celular específica e/ou variáveis de controle experimentais, ao invés de serem influenciadas pelas propriedades do ambiente de cultura artificial.[003] Cell culture, which is the growth of cells in an artificial in vitro environment, is a crucial technique in the development and research of life science. An ideal cell culture environment is one that promotes rapid and robust growth of healthy cells, in which cell morphology and function are dominated by cell-cell interactions with other cells, specific cell signaling, and/or experimental control variables. , rather than being influenced by the properties of the artificial culture environment.

[004] Frequentemente, é desejável desenvolver células que se assemelham estritamente às células cultivadas em organismos vivos, incluindo sua expressão genética, características funcionais de células diferenciadas, morfologia, distribuição, organização e formação de uma matriz extracelular. O custo e a escalabilidade de produção também são considerações críticas para o potencial de aplicação de tais tecnologias.[004] It is often desirable to develop cells that closely resemble cells cultured in living organisms, including their genetic expression, functional characteristics of differentiated cells, morphology, distribution, organization and formation of an extracellular matrix. Cost and production scalability are also critical considerations for the potential application of such technologies.

[005] Como tal, as técnicas de cultura 3D oferecem o potencial de estudar células em um ambiente mais natural, a estrutura tridimensional de um grupo de células que oferece o potencial para simular, de forma cautelosa, o ambiente in vivo. Os presentes autores desenvolveram diversos materiais para permitir o cultivo 3D de células em campos magnéticos, bem como um hardware para a manipulação daquelas células. O presente pedido continua o desenvolvimento de hardware, neste caso, hardware para geração de imagens para alta produtividade de geração de imagens de culturas 3D.[005] As such, 3D culture techniques offer the potential to study cells in a more natural environment, the three-dimensional structure of a group of cells offering the potential to carefully simulate the in vivo environment. The present authors have developed several materials to allow the 3D cultivation of cells in magnetic fields, as well as hardware for manipulating those cells. The present application continues the development of hardware, in this case, imaging hardware for high throughput 3D crop imaging.

SUMMARY OF THE INVENTION

[006] A presente invenção refere-se a dispositivos para culturas de células, geração de imagens de células e culturas de células 3D em alta velocidade. Em geral, a invenção compreende placas de microtitulação com uma pluralidade de poços, em que os poços possuem um formato triangular ou outro formato que possui pelo menos um vértice em seção transversal em vista plana superior, mas com uma base plana, opticamente transparente.[006] The present invention relates to devices for cell cultures, cell imaging and high-speed 3D cell cultures. In general, the invention comprises microtiter plates having a plurality of wells, wherein the wells have a triangular shape or other shape that has at least one apex in cross section in top plan view, but with a flat, optically transparent base.

[007] O documento US5225164 descreve poços quadrados que possuem uma base plana, mas o interior desses poços compreende um defletor, projetado para permitir amistura de fluidos. Além disso, essas placas não são transparentes. Assim, essas placas não podem ser usadas para geração de imagens.[007] Document US5225164 describes square wells that have a flat base, but the interior of these wells comprises a deflector, designed to allow fluid mixing. Furthermore, these plates are not transparent. Therefore, these plates cannot be used for imaging.

[008] As culturas podem ser cultivadas nas placas da presente invenção, da mesma forma que em qualquer outra placa de microtitulação. As culturas também podem ser cultivadas em cultura 3D com o uso de campos magnéticos e materiais de magnetização de células, tais como NanoShuttle®. Alternativamente, as células podem ser cultivadas em 3D através de suspensão ou em materiais tipo gel/scaffold com outros métodos, ou adicionadas às placas após o cultivo.[008] Cultures can be grown in the plates of the present invention, in the same way as in any other microtiter plate. Cultures can also be grown in 3D culture with the use of magnetic fields and cell magnetization materials such as NanoShuttle®. Alternatively, cells can be cultured in 3D via suspension or gel/scaffold materials with other methods, or added to plates after cultivation.

[009] As placas são inclinadas manualmente ou com um suporte ou máquina dedicada, de modo que as células caiam no vértice do poço. Quando a placa é novamente nivelada de forma lenta e cuidadosa, a cultura 3D permanecerá naquele vértice, assentando-se no fundo da placa devido à ação da gravidade ou com um campo magnético, e a cultura de células 3D pode então ser visualizada através do fundo da placa. Dessa forma, as células estarão em um local conhecido no canto inferior da placa e a placa será posicionada de forma plana em relação à máquina de geração de imagens, permitindo uma produção mais rápida e uma geração de imagens melhorada da placa através de uma máquina de geração de imagens. De forma importante, todas as células estarão na mesma profundidade de campo, permitindo que uma única imagem capture múltiplos poços, e até mesmo múltiplas placas.[009] The plates are tilted manually or with a dedicated support or machine, so that the cells fall at the apex of the well. When the plate is again slowly and carefully leveled, the 3D culture will remain at that apex, settling to the bottom of the plate due to the action of gravity or a magnetic field, and the 3D cell culture can then be viewed through the bottom. of the board. This way, the cells will be in a known location at the bottom corner of the plate and the plate will be positioned flat relative to the imaging machine, allowing for faster production and improved imaging of the plate via a imaging machine. image generation. Importantly, all cells will be at the same depth of field, allowing a single image to capture multiple wells, and even multiple plates.

[0010] Uma placa transparente com fundo plano transparente é particularmente preferencial para a melhor geração de imagens e, preferivelmente, placas de microtitulação com tamanho padrão. A placa pode ser feita em uma ou mais partes, dependendo se a ciclagem de temperatura é esperada e a qualidade de geração de imagens que é necessária. Se desejado, o fundo da placa pode ser de vidro óptico transparente para a melhor geração de imagens, mas para muitos propósitos, o poço delgado típico de polipropileno, poliolefina, vidro preenchido com polipropileno, acrilonitrila (ABS), poliamida (PA), policarbonato (PC), poliestireno (PS), polimetil- metacrilato (PMMA), polipropileno (PP) ou estireno- acrilonitrila (SAN), e similares serão suficientes. Exemplos de polímeros transparentes adequados são: poliestireno, poliacrilonitrila, policarbonato, poliéster, polimetilpenteno e materiais acrílicos, mas existem muitas variações de polímeros transparentes.[0010] A transparent plate with a transparent flat bottom is particularly preferred for better imaging and, preferably, standard size microtiter plates. The plate can be made in one or more parts depending on whether temperature cycling is expected and the imaging quality that is required. If desired, the plate bottom can be clear optical glass for better imaging, but for many purposes, the typical slender well of polypropylene, polyolefin, polypropylene-filled glass, acrylonitrile (ABS), polyamide (PA), polycarbonate (PC), polystyrene (PS), polymethyl methacrylate (PMMA), polypropylene (PP) or styrene acrylonitrile (SAN), and the like will suffice. Examples of suitable transparent polymers are: polystyrene, polyacrylonitrile, polycarbonate, polyester, polymethylpentene and acrylic materials, but there are many variations of transparent polymers.

[0011] As placas de cultura de células podem ser fabricadas através de qualquer método conhecido na arte, veja, por exemplo, os documentos US502582, US5457527, US6503456, US6340589, US20050170498, US8512652, US8636965, US9168532 e similares.[0011] Cell culture plates can be manufactured by any method known in the art, see, for example, documents US502582, US5457527, US6503456, US6340589, US20050170498, US8512652, US8636965, US9168532 and the like.

[0012] A compatibilidade das placas com equipamento automatizado é talvez uma das restrições mais rigorosas no que tange a forma e a estrutura das placas que devem ser usadas em métodos de alta produtividade. Muitos laboratórios automatizam várias etapas ou fases de procedimentos, tais como deposição e remoção de pequenas quantidades de mistura reacional a partir de poços de amostra utilizando sistemas de distribuição/aspiração automatizados. Além disso, equipamentos de manuseio de placas são frequentemente utilizados para ajudar e facilitar a automação de tais procedimentos. Consequentemente, é desejável usar uma placa de múltiplos poços que é conducente ao uso com equipamento robótico e que possa resistir à preensão e manipulação robótica. As dimensões padrão foram recomendadas pelo SLAS (Microplate Standards Advisory Committee) em slas.org/resources/information/industry-standards/ e são assim uma concretização preferencial.[0012] The compatibility of plates with automated equipment is perhaps one of the most stringent restrictions regarding the shape and structure of plates that must be used in high productivity methods. Many laboratories automate several procedural steps or phases, such as deposition and removal of small amounts of reaction mixture from sample wells using automated dispensing/aspiration systems. Additionally, plate handling equipment is often used to help and facilitate the automation of such procedures. Consequently, it is desirable to use a multiwell plate that is conducive to use with robotic equipment and that can withstand robotic grasping and manipulation. The standard dimensions have been recommended by SLAS (Microplate Standards Advisory Committee) at slas.org/resources/information/industry-standards/ and are therefore a preferred embodiment.

[0013] Qualquer sistema de geração de imagens pode ser usado para visualizar as placas, preferivelmente a geração de imagens de uma ou mais placas de cada vez. Os documentos US7599055, US7265829, US20110286102, US6130745 e similares são exemplificativos, mas a presente invenção apresenta placas com imagens geradas utilizando um telefone celular e um único suporte de câmera per US20150091233. Entretanto, para uma produção maximizada, é previsto que um sistema dedicado será provido para a rápida geração de imagens de diversas placas simultaneamente.[0013] Any imaging system can be used to visualize the plates, preferably imaging one or more plates at a time. Documents US7599055, US7265829, US20110286102, US6130745 and similar are exemplary, but the present invention presents plates with images generated using a cell phone and a single camera support per US20150091233. However, for maximized production, it is anticipated that a dedicated system will be provided for rapid imaging of multiple plates simultaneously.

[0014] Tal como usado aqui, "recipiente" ou "placa" refere-se a qualquer embalagem para cultura de células, tais como uma placa de Petri, frasco, chips microfluídicos, dispositivos microfluídicos, placas de cultura de múltiplos poços, tubos de teste e similares. Embora as placas de microtitulação padrão sejam atualmente preferenciais, espera-se que a técnica venha a migrar para um dispositivo microfluídico no futuro já que tais dispositivos se tornam mais robustos e padronizados, e o equipamento de manuseio para o mesmo se torna onipresente.[0014] As used herein, "container" or "plate" refers to any packaging for cell culture, such as a Petri dish, flask, microfluidic chips, microfluidic devices, multi-well culture plates, tubes test and the like. Although standard microtiter plates are currently preferred, it is expected that the technique will migrate to a microfluidic device in the future as such devices become more robust and standardized, and handling equipment for the same becomes ubiquitous.

[0015] Tal como aqui usado, um "vértice" é um ponto angular de um polígono, poliedro, ou outro formato. Por exemplo, um triângulo possui três vértices, um poço em forma de V possui três vértices, e um quadrado possui quatro vértices. Embora pelo menos um vértice seja aqui requerido, o restante do formato não precisa ser poligonal, conforme indicado pela forma de lágrima na Figura 10.[0015] As used herein, a "vertex" is an angular point of a polygon, polyhedron, or other shape. For example, a triangle has three vertices, a V-shaped well has three vertices, and a square has four vertices. Although at least one vertex is required here, the remainder of the shape does not need to be polygonal, as indicated by the teardrop shape in Figure 10.

[0016] Conforme aqui utilizado, um poço "em forma de V" descreve a seção transversal de um poço dotado de duas pernas que se encontram em um ponto ou vértice, tal como a letra "V". Um poço em forma de V pode ser muito benéfico em certas aplicações onde as células podem ser coletadas em uma perna do V e a outra perna pode ser usada para mudar o meio, minimizando assim qualquer rompimento das células. Dois tipos de células diferentes podem ser cultivados em extremidades diferentes das pernas, e então posteriormente colocados juntos no vértice das duas pernas, permitindo assim, ensaios envolvendo dois tipos de células.[0016] As used herein, a "V-shaped" well describes the cross section of a well provided with two legs that meet at a point or apex, such as the letter "V". A V-shaped well can be very beneficial in certain applications where cells can be collected in one leg of the V and the other leg can be used to change the medium, thus minimizing any disruption of the cells. Two different cell types can be cultured at different ends of the legs, and then placed together at the apex of the two legs, thus allowing assays involving two cell types.

[0017] Um "vértice arredondado" significa o ponto em que as duas linhas retas de um polígono ou polígono parcial se encontram em uma curva suave. O vértice arredondado permite que uma aglomeração maior de células se acumule no vértice.[0017] A "rounded vertex" means the point where the two straight lines of a polygon or partial polygon meet in a smooth curve. The rounded apex allows a larger cluster of cells to accumulate at the apex.

[0018] O trecho "sobre o dito poço" significa que a tampa magnética e os ímãs não podem mergulhar no meio de cultura quando o ímã está em uso, mas se assenta sobre, abaixo ou ao lado do meio de cultura. O dispositivo podetambém se assentar sob a placa inteira, em cuja orientação, o meio não é colocado em contato.[0018] The phrase "over said well" means that the magnetic cover and magnets cannot dip into the culture medium when the magnet is in use, but sit on, below or next to the culture medium. The device may also sit under the entire plate, in which orientation the medium is not brought into contact.

[0019] O termo "microplaca" ou "placa de microtitulação" ou "vaso de microtitulação" destina-se a referenciar microplacas padrão da indústria atual. Note que ANSI-SLAS divulga padrões de tamanhos para placas de microtitulação de modo a assegurar interoperabilidade entre robótica e multi-pipetagem, e estes podem ser encontrados em slas.org/resources/information/industry-standards/.[0019] The term "microplate" or "microtiter plate" or "microtiter vessel" is intended to reference current industry standard microplates. Note that ANSI-SLAS publishes size standards for microtiter plates to ensure interoperability between robotics and multi-pipetting, and these can be found at slas.org/resources/information/industry-standards/.

[0020] O termo "ímã" refere-se a qualquer material que cria um campo magnético, e pode ser um imã permanente ou um eletroímã.[0020] The term "magnet" refers to any material that creates a magnetic field, and can be a permanent magnet or an electromagnet.

[0021] Conforme aqui utilizado, um "acionador magnético" é uma cobertura ou tampa superior ou inferior que pode se ajustar sobre ou sob uma placa de cultura, e que possui ímãs permanentemente ou reversíveis fixados ao mesmo, de modo que o acionador magnético possa ser usado com a placa para levitar e/ou padronizar/marcar células que estão sendo cultivadas na placa.[0021] As used herein, a "magnetic actuator" is a top or bottom cover or lid that can fit over or under a culture plate, and that has permanently or reversibly magnets attached thereto, so that the magnetic actuator can be used with the plate to levitate and/or standardize/mark cells being cultured on the plate.

[0022] A referência à superfície "sob" de uma tampa é com relação ao rebordo, a superfície inferior que possui um rebordo ou borda no mesmo lado.[0022] Reference to the "under" surface of a lid is with respect to the rim, the lower surface that has a lip or edge on the same side.

[0023] Conforme aqui utilizado, um "sistema de placas de cultura" refere-se, em geral, a um sistema que inclui uma placa de cultura, tal como qualquer uma das descritas aqui, uma tampa que possui um rebordo em torno de sua circunferência externa e sendo modelada para se encaixar sobre ou sob a dita placa de cultura e um meio para inclinar ou girar a dita placa de cultura. Particularmente, o termo refere-se a um sistema incluindo uma placa de microtitulação, uma tampa compatível, uma tampa ou acionador magnético, e uma cunha para inclinar a placa. Os meios para inclinação também podem ser uma placa basculante ou qualquer dispositivo especialmente projetado para inclinar placas. O meio para rotação de células pode ser qualquer plataforma rotativa.[0023] As used herein, a "culture plate system" refers, generally, to a system that includes a culture plate, such as any of those described herein, a lid that has a rim around its surface. outer circumference and being shaped to fit over or under said culture plate and a means for tilting or rotating said culture plate. Particularly, the term refers to a system including a microtiter plate, a compatible lid, a magnetic cap or actuator, and a wedge for tilting the plate. The means for tilting may also be a tilting plate or any device specially designed for tilting plates. The means for cell rotation can be any rotating platform.

[0024] Tal como aqui utilizado, uma "parede de separação" é uma parede que é mais baixa do que as paredes exteriores de um poço, de modo que o meio pode fluir sobre o topo da parede de separação. As paredes têm uma pluralidade de vértices, permitindo que as células sejam coletadas em cada vértice. Preferivelmente, tais paredes de separação são em forma de zigue-zague (faces em V alternadas), uma vez que isto é o mais simples, mas qualquer fileira com uma pluralidade de vértices poderia ser usada (por exemplo, caixas de face aberta com faces alternadas ou pentágonos de face aberta).[0024] As used herein, a "separation wall" is a wall that is lower than the outer walls of a well, so that the medium can flow over the top of the separation wall. Walls have a plurality of vertices, allowing cells to be collected at each vertex. Preferably, such separation walls are zigzag shaped (alternating V-faces), since this is the simplest, but any row with a plurality of vertices could be used (e.g., open-faced boxes with alternating or open-faced pentagons).

[0025] A invenção inclui qualquer uma ou mais das seguintes concretizações, e qualquer combinação das mesmas: Placa de cultura de múltiplos poços, que compreende: - uma placa retangular que possui um primeiro e um segundo lado longo e um primeiro e um segundo lado curto; - a dita placa possui uma pluralidade de poços; e - cada um da dita pluralidade de poços possui uma seção transversal não circular que possui pelo menos um vértice quando visualizado a partir de uma vista superior; e - cada um dos ditos poços possui uma base plana transparente sem qualquer obstrução, de modo que a totalidade do conteúdo do poço possa ser visualizada por baixo da base. Placa de cultura de múltiplos poços, que compreende: - uma placa retangular que possui um primeiro e um segundo lado longo e um primeiro e um segundo lado curto; - a dita placa possui uma pluralidade de poços; e - cada um da dita pluralidade de poços possui uma seção transversal em forma de V quando visualizado a partir de uma vista superior, a dita seção transversal em forma de V possui um vértice; e - cada um dos ditos poços possui uma base plana, em particular uma base plana transparente. Placa de cultura de múltiplos poços, que compreende: - uma placa retangular que possui um primeiro e um segundo lado longo e um primeiro e um segundo lado curto; - a dita placa possui uma pluralidade de poços; e - cada um da dita pluralidade de poços possui uma seção transversal triangular quando visualizado a partir de uma vista superior, a dita seção transversal triangular possui um vértice; e - cada um dos ditos poços possui uma base plana, em particular uma base plana transparente. Qualquer placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada, em que o formato de seção transversal é um triângulo, triângulo isósceles, quadrado, retangular, em forma de V, paralelogramo ou formato de lágrima e que adicionalmente possui zero, um ou mais cantos arredondados (também conhecidos como vértices). Qualquer placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada, em que o dito vértice é orientado para o dito primeiro lado longo. Qualquer placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada, que adicionalmente compreende uma cunha retangular que se encaixa sob o dito recipiente retangular de cultura de células, deste modo levantando o dito segundo lado longo em 15° a 45°. Qualquer placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada, em que o dito vértice é orientado para o dito primeiro lado curto. Qualquer placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada, que adicionalmente compreende uma cunha retangular que se encaixa sob o dito recipiente retangular de cultura de células, deste modo levantando o dito segundo lado curto em 15° a 45°. Qualquer placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada, em que o dito vértice possui um canto arredondado. Qualquer placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada, que adicionalmente compreende uma tampa retangular que possui um rebordo em torno de sua circunferência externa e sendo modelada para se encaixar sobre ou sob a dita placa de cultura de múltiplos poços. Qualquer placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada, que adicionalmente compreende uma tampa retangular que possui um rebordo em torno de sua circunferência externa e sendo modelada para se encaixar sobre ou sob a dita placa de cultura de múltiplos poços, a dita tampa possui uma pluralidade de ímãs fixados a mesma, prendendo assim o dito imã sobre cada dito poço quando a dita tampa está no lugar sobre ou sob a dita placa de cultura de múltiplos poços. Qualquer placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada, que adicionalmente compreende uma tampa retangular que possui um rebordo em torno de sua circunferência externa e sendo modelada para encaixar sobre ou sob a dita placa de cultura de múltiplos poços, a dita tampa possui uma pluralidade de ímãs fixados a mesma, assim segurando o dito imã sobre cada poço quando a dita tampa está no lugar sobre ou sob a dita placa de cultura de múltiplos poços, cada imã adjacente estando em polaridade oposta. Qualquer placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada, em que cada dito imã se assenta sobre cada vértice. Qualquer placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada, em que cada dito imã se assenta sobre um centro de cada poço. Qualquer placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada, que possui 6, 12, 24, 96, 384, 1.536, 3.072, 6.144 poços. Método de geração de imagens de uma cultura de células, que compreende: - incubar um ou mais tipos de células em um meio em um ou mais poços da placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada; - inclinar a dita placa de cultura de múltiplos poços de modo que as células se reúnam no dito vértice; - opcionalmente, vibrar a dita placa; - remover a dita inclinação quando todas as células se reuniram no dito vértice; e - gerar imagens das ditas células através da dita base plana, em particular uma base plana transparente. Método de geração de imagens de uma cultura de células, que compreende: - incubar um ou mais tipos de células em um meio em um ou mais poços da placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada; - encaixar a dita cunha sob a dita placa de cultura de múltiplos poços; - opcionalmente, vibrar a dita placa; - remover a dita cunha quando todas as células se reuniram no dito vértice; e - gerar imagens das ditas células através da dita base plana, em particular uma base plana transparente. Qualquer método aqui mencionado, em que a dita etapa de vibração é realizada. Método de geração de imagens de uma cultura de células, que compreende: (a) incubar um ou mais tipos de células em um meio em um ou mais poços de uma placa de cultura de múltiplos poços, em que cada poço possui uma base plana transparente; (b) inclinar a placa de cultura de múltiplos poços; (c) vibrar a dita placa de cultura de múltiplos poços; (e) remover a dita inclinação e a dita vibração; e (f) gerar imagens das ditas células através da dita base plana transparente. Qualquer método aqui mencionado em que o dito um ou mais poços possui uma seção transversal triangular ou quadrada ou em forma de V que possui pelo menos um vértice, e em que a dita inclinação permite que as células sejam reunidas no dito vértice. Qualquer método aqui mencionado, em que o dito vértice possui um canto arredondado. Placa de cultura de múltiplos poços, que compreende: (i) uma placa retangular que possui um lado longo e um lado curto; (ii) a dita placa possui uma pluralidade de poços; e (iii) cada um da dita pluralidade de poços possui uma seção transversal em forma de V em uma base dos ditos poços, a dita seção transversal em forma de V possui um vértice e uma primeira perna e uma segunda perna; (iv) em que as ditas primeiras pernas de cada poço em uma única fileira são conectadas perto de uma superfície superior da dita placa, formando assim um canal que conecta todos os poços na dita fileira; e (v) cada base sendo uma base plana transparente. Em uma variação adicional, o canal que conecta as fileiras de poços em forma de V pode se conectar a uma extremidade do canal que conecta cada fileira. Veja a Figura 17. Método de geração de imagens de uma cultura de células, que compreende: (a) incubar um ou mais tipos de células em um meio em um ou mais poços da placa de cultura de múltiplos poços em forma de v; (b) inclinar a placa de cultura de múltiplos poços; (c) vibrar a dita placa de cultura de múltiplos poços; (d) reunir todas as células do dito vértice de cada poço na dita placa de cultura de múltiplos poços inclinada; (e) remover a dita inclinação e a dita vibração; e (f) gerar imagens de células através da dita base plana transparente. Método, em que a dita inclinação até uma extremidade oposta do dito vértice permite que as células de uma fileira de poços sejam reunidas em conjunto, o que pode ser benéfico em certos ensaios. Placa de cultura, que compreende: (i) um ou mais poços grandes com uma parede de altura H e uma base plana transparente; (ii) o(s) dito(s) poço(s) grande(s), cada um possuindo uma pluralidade de paredes de separação que possui uma pluralidade de vértices, em que as ditas paredes de separação possuem uma altura < H, preferivelmente as paredes de separação são em zigue-zague, mas outras paredes que possuem uma pluralidade de vértices são possíveis. Qualquer placa de cultura aqui descrita, em que a dita placa de cultura possui um único poço retangular, e a dita pluralidade de paredes de separação em zigue-zague é disposta de forma paralela entre si e atravessa um lado do dito poço retangular até o outro lado do dito poço retangular. Qualquer placa de cultura aqui descrita, em que a dita placa de cultura possui um único poço circular, e a dita pluralidade de paredes de separação em zigue-zague é disposta de forma paralela entre si e atravesse um lado do dito poço circular para outro lado do dito poço retangular. Qualquer placa de cultura aqui descrita, em que a dita placa de cultura possui um único poço circular, e a dita pluralidade de paredes de separação em zigue-zague é disposta em círculos concêntricos entre si centrados em um centro do dito poço circular. Qualquer placa de cultura aqui descrita, em que a dita placa de cultura possui um único poço circular, e a dita pluralidade de paredes de separação em zigue-zague é disposta radialmente a partir de um centro do dito poço circular. Método de geração de imagens de uma cultura de células, que compreende: (a) incubar um ou mais tipos de células em um meio em uma placa de cultura que possui paredes de separação com uma pluralidade de vértices, conforme descrito aqui; (b) inclinar ou rotacionar a dita placa de cultura; (c) vibrar a dita placa de cultura; (d) reunir as células na dita pluralidade de vértices; (e) remover a dita inclinação ou rotação e a dita vibração por um período de tempo; e, (f) gerar imagens das ditas células através dadita base plana transparente. Sistema de placas de cultura de múltiplos poços, que compreende: (a) uma placa de cultura de múltiplos poços conforme aqui descrita; (b) uma tampa que possui um rebordo em torno de uma circunferência externa e sendo modelada para se encaixar sobre ou sob a dita placa de cultura de múltiplos poços. (c) um meio para inclinar a dita placa de cultura. Sistema de placas de cultura que compreende: a) uma placa de cultura que possui paredes de separação com uma pluralidade de vértices, conforme descrito aqui; b) uma tampa que possui um rebordo em torno de uma circunferência externa e sendo modelada para encaixar sobre ou sob a dita placa de cultura; c) um meio para inclinar a dita placa, ou um meio para girar a dita placa.[0025] The invention includes any one or more of the following embodiments, and any combination thereof: Multi-well culture plate, comprising: - a rectangular plate having a first and a second long side and a first and a second long side short; - said plate has a plurality of wells; and - each of said plurality of wells has a non-circular cross-section that has at least one apex when viewed from a top view; and - each of said wells has a flat transparent base without any obstruction, so that the entire contents of the well can be viewed underneath the base. Multi-well culture plate, comprising: - a rectangular plate having a first and a second long side and a first and a second short side; - said plate has a plurality of wells; and - each of said plurality of wells has a V-shaped cross-section when viewed from a top view, said V-shaped cross-section has an apex; and - each of said wells has a flat base, in particular a transparent flat base. Multi-well culture plate, comprising: - a rectangular plate having a first and a second long side and a first and a second short side; - said plate has a plurality of wells; and - each of said plurality of wells has a triangular cross-section when viewed from a top view, said triangular cross-section has a vertex; and - each of said wells has a flat base, in particular a transparent flat base. Any multi-well culture plate mentioned herein, wherein the cross-sectional shape is a triangle, isosceles triangle, square, rectangular, V-shaped, parallelogram, or teardrop shape and which additionally has zero, one or more rounded corners ( also known as vertices). Any multi-well culture plate mentioned herein, wherein said apex is oriented towards said first long side. Any multi-well culture plate mentioned herein, which further comprises a rectangular wedge that fits under said rectangular cell culture vessel, thereby raising said second long side by 15° to 45°. Any multi-well culture plate mentioned herein, wherein said apex is oriented towards said first short side. Any multi-well culture plate mentioned herein, which further comprises a rectangular wedge that fits under said rectangular cell culture vessel, thereby raising said second short side by 15° to 45°. Any multi-well culture plate mentioned herein, wherein said apex has a rounded corner. Any multi-well culture plate mentioned herein, which further comprises a rectangular lid having a lip around its outer circumference and being shaped to fit over or under said multi-well culture plate. Any multi-well culture plate mentioned herein, which further comprises a rectangular lid having a lip around its outer circumference and being shaped to fit over or under said multi-well culture plate, said lid having a plurality of of magnets fixed thereto, thereby securing said magnet over each said well when said lid is in place on or under said multi-well culture plate. Any multi-well culture plate mentioned herein, which further comprises a rectangular lid having a lip around its outer circumference and being shaped to fit over or under said multi-well culture plate, said lid having a plurality of magnets fixed thereto, thereby holding said magnet over each well when said lid is in place on or under said multi-well culture plate, each adjacent magnet being in opposite polarity. Any multi-well culture plate mentioned herein, wherein each said magnet sits on each apex. Any multi-well culture plate mentioned herein, wherein each said magnet sits on a center of each well. Any multi-well culture plate mentioned herein, which has 6, 12, 24, 96, 384, 1,536, 3,072, 6,144 wells. A method of imaging a cell culture, comprising: - incubating one or more types of cells in a medium in one or more wells of the multi-well culture plate mentioned herein; - tilting said multi-well culture plate so that the cells gather at said apex; - optionally, vibrate said plate; - remove said slope when all cells have gathered at said vertex; and - generating images of said cells through said flat base, in particular a transparent flat base. A method of imaging a cell culture, comprising: - incubating one or more types of cells in a medium in one or more wells of the multi-well culture plate mentioned herein; - fitting said wedge under said multi-well culture plate; - optionally, vibrate said plate; - removing said wedge when all cells have gathered at said vertex; and - generating images of said cells through said flat base, in particular a transparent flat base. Any method mentioned herein in which said vibration step is carried out. A method of imaging a cell culture, comprising: (a) incubating one or more cell types in a medium in one or more wells of a multi-well culture plate, each well having a flat transparent base ; (b) tilting the multiwell culture plate; (c) vibrating said multi-well culture plate; (e) remove said tilt and said vibration; and (f) generating images of said cells through said flat transparent base. Any method mentioned herein wherein said one or more wells has a triangular or square or V-shaped cross-section that has at least one apex, and wherein said slope allows cells to be gathered at said apex. Any method mentioned herein, in which said vertex has a rounded corner. Multi-well culture plate, comprising: (i) a rectangular plate having a long side and a short side; (ii) said plate has a plurality of wells; and (iii) each of said plurality of wells has a V-shaped cross-section at a base of said wells, said V-shaped cross-section has an apex and a first leg and a second leg; (iv) wherein said first legs of each well in a single row are connected near an upper surface of said plate, thereby forming a channel that connects all wells in said row; and (v) each base being a transparent flat base. In a further variation, the channel connecting the rows of V-shaped wells may connect to one end of the channel connecting each row. See Figure 17. Method of imaging a cell culture, comprising: (a) incubating one or more cell types in a medium in one or more wells of the v-shaped multi-well culture plate; (b) tilting the multiwell culture plate; (c) vibrating said multi-well culture plate; (d) collecting all cells from said apex of each well in said tilted multi-well culture plate; (e) remove said tilt and said vibration; and (f) imaging cells through said flat transparent base. Method, wherein said inclination to an opposite end of said apex allows cells from a row of wells to be brought together, which may be beneficial in certain assays. Culture plate, comprising: (i) one or more large wells with a wall of height H and a flat transparent base; (ii) said large well(s), each having a plurality of separation walls having a plurality of vertices, wherein said separation walls have a height < H, preferably the separating walls are zigzag, but other walls that have a plurality of vertices are possible. Any culture plate described herein, wherein said culture plate has a single rectangular well, and said plurality of zigzag separation walls are arranged parallel to each other and traverse one side of said rectangular well to the other side of said rectangular well. Any culture plate described herein, wherein said culture plate has a single circular well, and said plurality of zigzag separation walls are arranged parallel to each other and traverse one side of said circular well to another side of said rectangular well. Any culture plate described herein, wherein said culture plate has a single circular well, and said plurality of zigzag separation walls are arranged in circles concentric with each other centered on a center of said circular well. Any culture plate described herein, wherein said culture plate has a single circular well, and said plurality of zigzag separation walls are arranged radially from a center of said circular well. A method of imaging a cell culture, comprising: (a) incubating one or more types of cells in a medium in a culture dish having separation walls with a plurality of vertices, as described herein; (b) tilting or rotating said culture plate; (c) vibrating said culture plate; (d) bringing together the cells at said plurality of vertices; (e) removing said tilt or rotation and said vibration for a period of time; and, (f) generating images of said cells through said flat transparent base. Multi-well culture plate system, comprising: (a) a multi-well culture plate as described herein; (b) a lid having a lip around an outer circumference and being shaped to fit over or under said multi-well culture plate. (c) a means for tilting said culture plate. A culture plate system comprising: a) a culture plate having separation walls with a plurality of vertices as described herein; b) a lid having a lip around an outer circumference and being shaped to fit over or under said culture plate; c) a means for tilting said plate, or a means for rotating said plate.

SPECIFIC ACHIEVEMENTS

[0026] Em uma concretização específica, a presente invenção adicionalmente refere-se a:[0026] In a specific embodiment, the present invention additionally relates to:

[0027] Um sistema de placas de cultura de múltiplos poços, que compreende: - uma placa retangular que possui um primeiro e um segundo lado longo e um primeiro e um segundo lado curto, em que a dita placa possui uma pluralidade de poços; e cada um da dita pluralidade de poços possui uma seção transversal não circular que possui pelo menos um vértice quando visualizado a partir de uma vista superior, e cada um dos ditos poços possui uma base plana transparente sem qualquer obstrução, de modo que a totalidade do conteúdo do poço possa ser visualizada por baixo da base; - uma tampa retangular que possui um rebordo em torno de sua circunferência externa e sendo modelada para se encaixar sobre ou sob a dita placa; - um meio para inclinar a dita placa.[0027] A multi-well culture plate system, comprising: - a rectangular plate having a first and a second long side and a first and a second short side, said plate having a plurality of wells; and each of said plurality of wells has a non-circular cross section having at least one apex when viewed from a top view, and each of said wells has a flat transparent base without any obstruction, so that the entirety of said wells pit contents can be viewed from beneath the base; - a rectangular lid having a rim around its outer circumference and being shaped to fit over or under said plate; - a means for tilting said plate.

[0028] Um sistema de placas de cultura de múltiplos poços, que compreende: - uma placa retangular que possui um primeiro e um segundo lado longo e um primeiro e um segundo lado curto, em que a dita placa possui uma pluralidade de poços; e cada um da dita pluralidade de poços possui uma seção transversal em forma de V quando visualizado a partir de uma vista superior, a dita seção transversal em forma de V possui um vértice e cada um dos ditos poços possui uma base plana, em particular uma base plana transparente; - uma tampa retangular que possui um rebordo em torno de sua circunferência externa e sendo modelada para se encaixar sobre ou sob a dita placa; - um meio para inclinar a dita placa.[0028] A multi-well culture plate system, comprising: - a rectangular plate having a first and a second long side and a first and a second short side, said plate having a plurality of wells; and each of said plurality of wells has a V-shaped cross-section when viewed from a top view, said V-shaped cross-section has an apex and each of said wells has a flat base, in particular a transparent flat base; - a rectangular lid having a rim around its outer circumference and being shaped to fit over or under said plate; - a means for tilting said plate.

[0029] Um sistema de placas de cultura de múltiplos poços, que compreende: - uma placa retangular que possui um primeiro e um segundo lado longo e um primeiro e um segundo lado curto, em que a dita placa possui uma pluralidade de poços; e cada um da dita pluralidade de poços possui uma seção transversal triangular quando visualizado de uma vista superior, a dita seção transversal triangular possui um vértice e cada um dos ditos poços possui uma base plana transparente; - uma tampa retangular com um rebordo em torno de sua circunferência externa e sendo modelada para se encaixar sobre ou sob a dita placa; - um meio para inclinar a dita placa.[0029] A multi-well culture plate system, comprising: - a rectangular plate having a first and a second long side and a first and a second short side, said plate having a plurality of wells; and each of said plurality of wells has a triangular cross-section when viewed from a top view, said triangular cross-section has an apex, and each of said wells has a flat transparent base; - a rectangular lid having a rim around its outer circumference and being shaped to fit over or under said plate; - a means for tilting said plate.

[0030] Qualquer sistema de placas de cultura de múltiplos poços aqui mencionado, em que o dito formato de seção transversal é um triângulo, triângulo isósceles, quadrado, retangular, em forma de V, paralelogramo ou formato de lágrima e que adicionalmente possui zero, um ou mais cantos arredondados (também conhecidos como vértices).[0030] Any multi-well culture plate system mentioned herein, wherein said cross-sectional shape is a triangle, isosceles triangle, square, rectangular, V-shaped, parallelogram or teardrop shape and which additionally has zero, one or more rounded corners (also known as vertices).

[0031] Qualquer sistema de placas de cultura de múltiplos poços aqui mencionado, em que o dito vértice é orientado para o dito primeiro lado longo.[0031] Any multi-well culture plate system mentioned herein, wherein said apex is oriented towards said first long side.

[0032] Qualquer sistema de placas de cultura de múltiplos poços aqui mencionado, em que o dito vértice é orientado para o dito primeiro lado curto.[0032] Any multi-well culture plate system mentioned herein, wherein said apex is oriented towards said first short side.

[0033] Qualquer sistema de placas de cultura de múltiplos poços aqui mencionado, em que o dito meio para inclinar a placa de cultura de múltiplos poços retangular é uma cunha retangular que se encaixa sob a dita placa de cultura de múltiplos poços retangular, deste modo levantando um lado curto ou um lado longo da placa de cultura de múltiplos poços retangular em 15° a 45°.[0033] Any multi-well culture plate system mentioned herein, wherein said means for tilting the rectangular multi-well culture plate is a rectangular wedge that fits under said rectangular multi-well culture plate, thereby lifting one short side or one long side of the rectangular multi-well culture plate by 15° to 45°.

[0034] Qualquer sistema de placas de cultura de múltiplos poços aqui mencionado, em que o dito vértice possui um canto arredondado.[0034] Any multi-well culture plate system mentioned herein, wherein said apex has a rounded corner.

[0035] Quaisquer sistemas de placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionados, que adicionalmente compreendem uma tampa retangular que possui um rebordo em torno de sua circunferência externa e sendo modelado parase encaixar sobre ou sob a dita placa de cultura de múltiplos poços retangular, a dita tampa possui uma pluralidade de ímãs fixados a mesma, assim segurando o dito imã sobre cada poço quando a dita tampa está no lugar sobre ou sob a dita placa de cultura de múltiplos poços, cada imã adjacente estando em polaridade oposta.[0035] Any multi-well culture plate systems mentioned herein, which further comprise a rectangular lid having a lip around its outer circumference and being shaped to fit over or under said rectangular multi-well culture plate, the said lid has a plurality of magnets fixed thereto, thereby holding said magnet over each well when said lid is in place on or under said multi-well culture plate, each adjacent magnet being in opposite polarity.

[0036] Qualquer sistema de placas de cultura de múltiplos poços aqui mencionado, em que cada dito ímã se assenta sobre cada vértice.[0036] Any multi-well culture plate system mentioned herein, wherein each said magnet sits on each apex.

[0037] Qualquer sistema de placas de cultura de múltiplos poços aqui mencionado, em que cada dito ímã se assenta sobre um centro de cada poço.[0037] Any multi-well culture plate system mentioned herein, wherein each said magnet sits on a center of each well.

[0038] Qualquer sistema de placas de cultura de múltiplos poços aqui mencionado, que possui 6, 12, 24, 96, 384, 1.536, 3.072, 6.144 poços.[0038] Any multi-well culture plate system mentioned herein, which has 6, 12, 24, 96, 384, 1,536, 3,072, 6,144 wells.

[0039] Um método de geração de imagens de uma cultura de células, que compreende: (a) incubar um ou mais tipos de células em um meio em um ou mais poços da placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada; (b) inclinar a dita placa de cultura de múltiplos poços de modo que as células se reúnam no dito vértice; (c) opcionalmente, vibrar a dita placa; (d) remover a dita inclinação quando todas as células se reuniram no dito vértice; e (e) gerar imagens das ditas células através da dita base plana, em particular uma dita base plana transparente.[0039] A method of imaging a cell culture, comprising: (a) incubating one or more cell types in a medium in one or more wells of the multi-well culture plate mentioned herein; (b) tilting said multi-well culture plate so that cells gather at said apex; (c) optionally, vibrating said plate; (d) removing said slope when all cells have gathered at said vertex; and (e) imaging said cells through said flat base, in particular a said transparent flat base.

[0040] Um método de geração de imagens de uma cultura de células, que compreende: (a) incubar um ou mais tipos de células em um meio em um ou mais poços da placa de cultura de múltiplos poços aqui mencionada; (b) encaixar uma cunha sob a dita placa; (c) opcionalmente, vibrar a dita placa; (d) remover a dita inclinação quando todas as células se reuniram no dito vértice; e (e) gerar imagens das ditas células através da dita base plana, em particular uma dita base plana transparente.[0040] A method of imaging a cell culture, comprising: (a) incubating one or more cell types in a medium in one or more wells of the multi-well culture plate mentioned herein; (b) fitting a wedge under said plate; (c) optionally, vibrating said plate; (d) removing said slope when all cells have gathered at said vertex; and (e) imaging said cells through said flat base, in particular a said transparent flat base.

[0041] Qualquer método aqui mencionado, em que a dita etapa de vibração é realizada.[0041] Any method mentioned herein, in which said vibration step is carried out.

[0042] Um método de geração de imagens de uma cultura de células, que compreende: (a) incubar um ou mais tipos de células em um meio em um ou mais poços de uma placa do sistema de placas de múltiplos poços aqui mencionada, em que cada poço possui uma base plana transparente; (b) inclinar a placa do sistema de placas de múltiplos poços; (c) vibrar a dita placa do sistema de placas de múltiplos poços; (d) reunir todas as células em um local mais baixo de dito um ou mais poços da dita placa inclinada do sistema de placas de múltiplos poços; (e) remover a dita inclinação e a dita vibração; e (f) gerar imagens das ditas células através da dita base plana transparente.[0042] A method of imaging a cell culture, comprising: (a) incubating one or more types of cells in a medium in one or more wells of a plate of the multi-well plate system mentioned herein, in that each well has a flat transparent base; (b) tilting the plate of the multiwell plate system; (c) vibrating said plate of the multi-well plate system; (d) gathering all cells in a lower location of said one or more wells of said inclined plate of the multi-well plate system; (e) remove said tilt and said vibration; and (f) generating images of said cells through said flat transparent base.

[0043] Qualquer método aqui mencionado, em que o dito um ou mais poços possui uma seção transversal triangular ou quadrada ou em forma de V que possui pelo menos um vértice, e em que a dita inclinação permite que as células sejam reunidas no dito vértice.[0043] Any method mentioned herein, wherein said one or more wells have a triangular or square or V-shaped cross-section that has at least one apex, and wherein said slope allows cells to be gathered at said apex .

[0044] Qualquer método aqui mencionado, em que o dito vértice possui um canto arredondado.[0044] Any method mentioned herein, in which said vertex has a rounded corner.

[0045] Um sistema de placas de cultura de múltiplos poços, que compreende: - uma placa retangular que possui um lado longo e um lado curto, a dita placa possui uma pluralidade de poços; e cada uma da dita pluralidade de poços possui uma seção transversal em forma de V em uma base dos ditos poços, em que a dita seção transversal em forma de V possui um vértice e uma primeira e uma segunda perna; em que as ditas primeiras pernas de cada poço em uma única fileira são conectadas perto de uma superfície superior da dita placa, dessa forma formando um canal que liga todos os poços na dita fileira; e cada base sendo uma base plana transparente; - uma tampa retangular com um rebordo em torno de sua circunferência externa e sendo modelada para se encaixar sobre ou sob a dita placa; - um meio para inclinar a dita placa.[0045] A multi-well culture plate system, comprising: - a rectangular plate having a long side and a short side, said plate having a plurality of wells; and each of said plurality of wells has a V-shaped cross-section at a base of said wells, wherein said V-shaped cross-section has an apex and a first and a second leg; wherein said first legs of each well in a single row are connected near an upper surface of said plate, thereby forming a channel connecting all wells in said row; and each base being a transparent flat base; - a rectangular lid having a rim around its outer circumference and being shaped to fit over or under said plate; - a means for tilting said plate.

[0046] Em uma variação adicional, o canal que conecta as fileiras de poços em forma de V pode conectar-se a um canal de extremidade que conecta cada fileira.[0046] In a further variation, the channel connecting the rows of V-shaped wells can connect to an end channel connecting each row.

[0047] Um método de geração de imagens de uma cultura de células, que compreende: (a) incubar um ou mais tipos de células em um meio em um ou mais poços da placa em forma de v do sistema de placas de cultura de múltiplos poços aqui mencionado; (b) inclinar a placa do sistema de placas de cultura de múltiplos poços; (c) vibrar a dita placa do sistema de placas de cultura de múltiplos poços; (d) reunir todas as células no vértice de cada poço na dita placa inclinada do sistema de placas de cultura de múltiplos poços; (e) cessar a dita inclinação e a dita vibração; e (f) gerar imagens das ditas células através da dita base plana transparente.[0047] A method of imaging a cell culture, comprising: (a) incubating one or more cell types in a medium in one or more wells of the v-shaped plate of the multiple culture plate system wells mentioned here; (b) tilting the plate of the multi-well culture plate system; (c) vibrating said plate of the multi-well culture plate system; (d) gathering all cells at the apex of each well in said inclined plate of the multi-well culture plate system; (e) cease said tilt and said vibration; and (f) generating images of said cells through said flat transparent base.

[0048] Este método, em que a dita inclinação até uma extremidade oposta do dito vértice permite que as células de uma fileira de poços sejam reunidas de forma conjuntas, que pode ser benéfico em certos ensaios.[0048] This method, in which said inclination to an opposite end of said vertex allows cells from a row of wells to be brought together together, which can be beneficial in certain assays.

BRIEF DESCRIPTION OF FIGURES

[0049] Figura 1A: Vista em perspectiva de placa de seis poços com tampa magnética, tampa regular e cunha. Cada poço possui uma seção transversal triangular em vista superior.[0049] Figure 1A: Perspective view of six-well plate with magnetic lid, regular lid and wedge. Each well has a triangular cross-section in top view.

[0050] Figura 1B: Placa de seis poços montada com cunha no lugar sob a mesma, assim inclinando a placa.[0050] Figure 1B: Six-well plate assembled with wedge in place under it, thus tilting the plate.

[0051] Figura 1C: Vista superior da placa de seis poços com células coletadas em vértice em forma de triângulo para observação conveniente.[0051] Figure 1C: Top view of the six-well plate with cells collected in a triangle-shaped apex for convenient observation.

[0052] Figura 2: Vista em perspectiva de um protótipo de suporte de placa única com mecanismo de elevação, mecanismo de vibração e estrutura para suporte da placa em posição levantada. Mecanismo de vibração (V) e mecanismo de elevação (L) indicados pelas letras de rótulo.[0052] Figure 2: Perspective view of a single plate support prototype with lifting mechanism, vibration mechanism and structure for supporting the plate in a raised position. Vibration mechanism (V) and lifting mechanism (L) indicated by label letters.

[0053] Figura 3: Vistas laterais e superiores de poços e células que se deslocam para baixo para repousar no vértice. A velocidade de sedimentação é auxiliada com uma vibração suave (de 0,1 Hz a 400 Hz, preferivelmente de 1 Hz a 120 Hz, de 0,05 N a 4 N, preferivelmente de 0,1 N a 0,5 N).[0053] Figure 3: Side and top views of wells and cells moving downward to rest on the apex. The settling speed is aided with gentle vibration (from 0.1 Hz to 400 Hz, preferably from 1 Hz to 120 Hz, from 0.05 N to 4 N, preferably from 0.1 N to 0.5 N).

[0054] Figura 4: Outra concretização de um protótipo de suporte em que as placas são inclinadas em ambos os eixos. Mecanismo de vibração (V) e mecanismo de elevação (L) indicados pelas letras de rótulo.[0054] Figure 4: Another embodiment of a support prototype in which the plates are inclined in both axes. Vibration mechanism (V) and lifting mechanism (L) indicated by label letters.

[0055] Figura 5: Exemplo real de células coletadas no fundo de cada poço de uma placa utilizando vibração e inclinação dupla.[0055] Figure 5: Real example of cells collected at the bottom of each well of a plate using vibration and double tilt.

[0056] Figura 6: Suporte em conjunto com tampa magnética com ímãs colocados sob o vértice e placa de microtitulação. Mecanismo de vibração (V) e mecanismo de elevação (L) indicados pelas letras de rótulo.[0056] Figure 6: Support together with magnetic cover with magnets placed under the apex and microtiter plate. Vibration mechanism (V) and lifting mechanism (L) indicated by label letters.

[0057] Figura 7: Suporte em conjunto com tampa magnética sob os ímãs colocados no vértice, e placa de microtitulação que possui poços quadrados com cantos arredondados (somente cantos exibidos).[0057] Figure 7: Support together with magnetic cover under the magnets placed at the apex, and microtiter plate that has square wells with rounded corners (only corners shown).

[0058] Figura 8: Exemplo de suporte inclinado e ímã (retângulo pequeno) usado na manipulação de células e de meios.[0058] Figure 8: Example of inclined support and magnet (small rectangle) used in manipulating cells and media.

[0059] Figura 9A: Vista lateral de posições preferenciais para imãs para utilização em aplicações de inclinação. Para aplicações de não inclinação, os ímãs são posicionados para ficarem diretamente sobre ou sob o poço,mas em aplicações de inclinação, os ímãs devem estar localizados, adjacentes ou no lado de um vértice do poço.[0059] Figure 9A: Side view of preferred positions for magnets for use in tilting applications. For non-tilt applications, the magnets are positioned to be directly over or under the well, but in tilt applications, the magnets must be located adjacent to or on the side of a well apex.

[0060] Figura 9B: Seção transversal da placa que possui poços triangulares e tampa magnética com espaço extra -W- em um lado, permitindo que os ímãs sejam centrados, ou em um lado dos poços, dependendo de qual o rebordo da tampa é empurrado contra o rebordo da placa.[0060] Figure 9B: Cross section of the plate that has triangular wells and a magnetic lid with extra space -W- on one side, allowing the magnets to be centered, or on one side of the wells, depending on which edge of the lid is pushed against the edge of the plate.

[0061] Figura 10: Vários formatos de poço (vista de topo).[0061] Figure 10: Various well formats (top view).

[0062] Figura 11: Vários formatos de poço (vista lateral).[0062] Figure 11: Various well formats (side view).

[0063] Figura 12: Várias aplicações para poços em forma de V.[0063] Figure 12: Various applications for V-shaped wells.

[0064] Figura 13: Aplicação de co-cultura para poços em forma de V.[0064] Figure 13: Application of co-culture for V-shaped wells.

[0065] Figura 14: Aplicações de poços em forma de V com ímãs.[0065] Figure 14: Applications of V-shaped wells with magnets.

[0066] Figura 15: Co-cultura em poços em forma de V com ímãs.[0066] Figure 15: Co-culture in V-shaped wells with magnets.

[0067] Figura 16: Poço de múltiplos canais e aplicação, em que setas exibem o movimento da massa celular causado pela elevação do lado apropriado.[0067] Figure 16: Multi-channel well and application, in which arrows show the movement of the cell mass caused by elevation of the appropriate side.

[0068] Figura 17: Outra concretização de um poço de múltiplos canais, em que todos os canais são combinados em um canal de extremidade.[0068] Figure 17: Another embodiment of a multi-channel well, in which all channels are combined into an end channel.

[0069] Figura 18: Dispositivo de empilhamento de múltiplas placas, em que a estrutura continua para cima e as saliências são providas de forma que as placas se assentem. Esta configuração exibe apenas uma únicasaliência, mas múltiplas saliências poderiam ser providas.[0069] Figure 18: Multiple plate stacking device, in which the structure continues upwards and protrusions are provided so that the plates sit. This configuration displays only a single protrusion, but multiple protrusions could be provided.

[0070] Figuras 19A e 19B: Um suporte de inclinação de multiplaca de nível único (A), e levantado (B), com câmera ou outra modalidade de geração de imagens por baixo e capaz de fotografar todas as placas ou poços individuais, conforme desejado.[0070] Figures 19A and 19B: A single-level (A), and raised (B) multiplate tilt stand, with camera or other imaging modality underneath and capable of photographing all individual plates or wells, as per wanted.

[0071] Figuras de 20A a 20C: Vistas em perspectiva de uma placa projetada com múltiplos vértices dentro de um único poço grande, permitindo que muitas culturas 3D sejam formadas, uma em cada vértice. A Figura 20A exibe a placa vazia, e a Figura 20B exibe as placas com cada vértice de uma parede de separação em zigue-zague tendo reunido algumas células devido ao movimento oscilante o qual movimenta o meio para trás e para frente sobre as paredes de separação mais curtas. As paredes de separação de células possuem cerca da metade da altura das paredes exteriores, podendo estar em qualquer lugar a partir de 0,5% a 50% das paredes exteriores, a maior altura necessária para reter qualquer meio de agitação. Na Figura 20C, a oscilação cessou, e as células se mantiveram em grumos.[0071] Figures 20A to 20C: Perspective views of a plate designed with multiple vertices within a single large well, allowing many 3D cultures to be formed, one at each vertex. Figure 20A shows the empty plate, and Figure 20B shows the plates with each vertex of a zigzag separation wall having brought together some cells due to the oscillating motion which moves the medium back and forth over the separation walls. shorter. The cell separation walls are about half the height of the outer walls and can be anywhere from 0.5% to 50% of the outer walls, the greatest height necessary to retain any agitation medium. In Figure 20C, the oscillation ceased, and the cells remained in clumps.

[0072] Figura 21: Exibe outra variação da ideia da Figura 20, em que o poço maior é circular, e a placa é girada. Naturalmente, as células serão direcionadas ao rebordo da placa devido à ação de forças centrípetas durante a rotação, mas as paredes curvas redirecionarão as células de volta para o centro da placa, onde elas serão novamente coletadas nos vértices.[0072] Figure 21: Shows another variation of the idea in Figure 20, in which the larger well is circular, and the plate is rotated. Naturally, the cells will be directed towards the edge of the plate due to the action of centripetal forces during rotation, but the curved walls will redirect the cells back to the center of the plate, where they will again be collected at the vertices.

[0073] Figura 22: Exibe outra concretização com Petição 870220118221, de 15/12/2022, pág. 37/78 paredes de separação concêntricas em zigue-zague, para melhor aproveitar as forças centrípetas criadas pela rotação da placa. Aqui, as células se acumulam nos Vs que se abrem para o centro da placa/eixo de rotação.[0073] Figure 22: Displays another embodiment with Petition 870220118221, dated 12/15/2022, page. 37/78 concentric zigzag separation walls, to better take advantage of the centripetal forces created by the rotation of the plate. Here, cells accumulate in Vs that open toward the center of the plate/axis of rotation.

[0074] Figura 23: Exibe outra concretização com paredes de separação radiais em zigue-zague.[0074] Figure 23: Shows another embodiment with zigzag radial separation walls.

[0075] Figuras de 24A a 24E: Vista superior (A), vista lateral (B, C), vista transversal (D) e vista ampliada (E) de uma placa de 384 poços, em que cada poço da placa de 384 poços possui uma seção transversal triangular.[0075] Figures 24A to 24E: Top view (A), side view (B, C), transverse view (D) and enlarged view (E) of a 384-well plate, in which each well of the 384-well plate has a triangular cross section.

[0076] Figuras de 25A a 25C: Simples impressão tridimensional de uma placa de 384 poços em um suporte de placa para aplicação de inclinação, em vistas em perspectiva elevada (A), perspectiva inferior (B) e superior (C), cada poço da placa de 384 poços possui uma seção transversal triangular.[0076] Figures 25A to 25C: Simple three-dimensional printing of a 384-well plate on a plate support for tilt application, in elevated perspective views (A), bottom perspective (B) and top perspective (C), each well of the 384-well plate has a triangular cross section.

DETAILED DESCRIPTION

[0077] Na Figura 1A, é apresentada uma concretização de um sistema de placas de cultura de múltiplos poços, incluindo uma placa de microtitulação, uma tampa compatível, um acionador ou tampa magnética, e cunha para inclinar a placa. A tampa magnética 10 pode ser usada sobre ou sob a placa quando usada em cultura magnética, conforme descrito nas patentes anteriores dos inventores. A segunda tampa 18 é uma tampa típica, e é provida para uso sobre as células quando a tampa magnética 10 é usada sob as células. A tampa magnética 10 possui um rebordo ou aro 12 circunscrevendo a tampa e dimensionada para se encaixar sobre ou sob a placa. Neste caso, a superfície interna da tampa possui pilares 14, cada um disposto para estar centralizado sobre um poço correspondente, quando colocados sobre ou sob a placa. Os anéis magnéticos 16 são encaixados sobre os pilares 14 e, preferivelmente, cada ímã é orientado para estar em polaridade oposta aos seus vizinhos mais próximos. Entretanto, os pilares são apenas uma forma de fixar os ímãs, e qualquer outro método poderia ser usado incluindo depressões nas quais os ímãs se encaixam, ou os ímãs poderiam ser colados na tampa.[0077] In Figure 1A, an embodiment of a multi-well culture plate system is shown, including a microtiter plate, a compatible lid, a magnetic driver or lid, and wedge for tilting the plate. The magnetic lid 10 can be used over or under the plate when used in magnetic culture, as described in the inventors' previous patents. The second cap 18 is a typical cap, and is provided for use over the cells when the magnetic cap 10 is used under the cells. The magnetic cover 10 has a lip or rim 12 circumscribing the cover and sized to fit over or under the plate. In this case, the inner surface of the lid has pillars 14, each arranged to be centered over a corresponding well when placed on or under the plate. The magnetic rings 16 are fitted over the pillars 14 and, preferably, each magnet is oriented to be in opposite polarity to its nearest neighbors. However, the pillars are just one way of attaching the magnets, and any other method could be used including depressions into which the magnets fit, or the magnets could be glued to the lid.

[0078] Também é exibida uma segunda tampa 18, também dotada de um rebordo ou borda circunscrevendo a tampa e dimensionada para se ajustar sobre a placa.[0078] A second lid 18 is also shown, also provided with a lip or edge circumscribing the lid and sized to fit over the plate.

[0079] A Base 20 possui seis poços triangulares 22 com vértice 24 oposto ao lado plano 26. Neste caso, o lado plano 26 é orientado contra um dos lados longos da placa retangular, o vértice 24 é apontando para o rebordo longo oposto, mas outras orientações são possíveis, a cunha é adaptada de forma adequada. A cunha 28 é dimensionada para possuir dimensões similares à placa, mas é mais espessa em um lado, fornecendo cerca de 15° a 45°, preferivelmente cerca de 30° a 35° no que tange a elevação quando deslizada sob a base, direcionado as células para sedimentação em um vértice do poço triangular. Isto resulta em uma mudança na orientação da gravidade, o que resulta em deposição de células ao longo do vértice 24 do poço triangular, de tal modo que quando novamente colocadas horizontalmente, as células serão assentadas sobre a base naquele vértice.[0079] Base 20 has six triangular wells 22 with apex 24 opposite the flat side 26. In this case, the flat side 26 is oriented against one of the long sides of the rectangular plate, the apex 24 is pointing towards the opposite long edge, but other orientations are possible, the wedge is adapted accordingly. The wedge 28 is sized to have similar dimensions to the plate, but is thicker on one side, providing about 15° to 45°, preferably about 30° to 35° of elevation when slid under the base, directed at the cells for sedimentation in an apex of the triangular well. This results in a change in the orientation of gravity, which results in deposition of cells along apex 24 of the triangular well, such that when placed horizontally again, the cells will be seated on the base at that apex.

[0080] A Figura 1B é uma vista em perspectiva com a cunha 28 sob a base 20, erguendo-a sobre o lado plano, com as células 30 assentando-se no vértice 24. A Figura 1C é uma vista superior da base 20, claramente exibindo células 30 assentando-se no vértice 24. Quando a placa é cuidadosamente assentada sobre um gerador de imagens, por exemplo, uma câmera, as células podem ser fotografadas através do fundo da placa, e todas serão coletadas no mesmo vértice e aproximadamente na mesma profundidade. Isto torna a geração de imagens mais rápida e fornece uma maior qualidade, todas as células estando aproximadamente na mesma profundidade e na mesma localização aproximada.[0080] Figure 1B is a perspective view with the wedge 28 under the base 20, lifting it onto the flat side, with the cells 30 sitting on the apex 24. Figure 1C is a top view of the base 20, clearly displaying cells 30 sitting at apex 24. When the plate is carefully seated over an imager, e.g., a camera, the cells can be photographed through the bottom of the plate, and they will all be collected at the same apex and approximately at same depth. This makes imaging faster and provides higher quality, with all cells being at approximately the same depth and in the same approximate location.

[0081] A Figura 1 exibe uma placa de 6 poços, mas os mesmos princípios podem ser usados para formatos com 12, 24, 48, 96, 384, 1.536, 3.072, 6.144 poços, e assim por diante.[0081] Figure 1 shows a 6-well plate, but the same principles can be used for formats with 12, 24, 48, 96, 384, 1,536, 3,072, 6,144 wells, and so on.

[0082] A Figura 2 exibe um protótipo de suporte de placa para aplicação de inclinação, em que uma estrutura mantém a placa, e um simples mecanismo eleva a placa, e outro mecanismo vibra a placa. A Figura 18 é similar, mas a estrutura possui prateleiras adicionais (neste caso 1) para conter placas adicionais. As prateleiras são separadas suficientemente para permitir a inclinação total. A Figura 4 exibe um protótipo simples de placa que é inclinada em dois eixos. As Figuras 6 e 8 exibem suportes e placas de microtitulação com formatos de vértice diferentes e as Figuras 10 e 11 exibem mais exemplos de formatos de poços. A Figura 17 exibe uma configuração de múltiplos canais que permite que todos os canais sejam combinados.[0082] Figure 2 shows a prototype plate support for tilting application, in which a structure holds the plate, and a simple mechanism elevates the plate, and another mechanism vibrates the plate. Figure 18 is similar, but the structure has additional shelves (in this case 1) to hold additional boards. The shelves are spaced far enough apart to allow full tilt. Figure 4 shows a simple prototype plate that is tilted in two axes. Figures 6 and 8 show holders and microtiter plates with different apex shapes and Figures 10 and 11 show more examples of well shapes. Figure 17 displays a multi-channel configuration that allows all channels to be combined.

[0083] A Figura 3 exibe vistas superior e lateral de um poço à medida que a célula se desloca para baixo a Petição 870220118221, de 15/12/2022, pág. 40/78 partir da lateral, para dentro do vértice. As Figuras 5 e 7 exibem um exemplo real de células coletadas.[0083] Figure 3 displays top and side views of a well as the cell moves downwards. Petition 870220118221, dated 15/12/2022, p. 40/78 from the side, towards the apex. Figures 5 and 7 show a real example of collected cells.

[0084] A Figura 13 exibe a seção transversal de um poço em forma de V. Um poço em forma de V pode ser muito benéfico em certas aplicações, tais como na troca de meios e co-cultura de diferentes tipos de células. As Figuras 12 e de 14 a 15 exibem várias aplicações de tais poços. As células de diferentes tipos podem ser colocadas em cada uma das pernas do V, permitindo assim a cultura nos mesmos meios de solução, mas não em contato direto. Além disso, devido à inclinação da placa, de modo que o ponto mais baixo do poço é o "fundo" do "V", onde as pernas do V se juntam, os diferentes tipos de células podem ser unidos para serem co-cultivados em contato direto. Isto poderia ser desejável com uma variedade de tipos de células e aplicações, incluindo, mas não limitado a, cultura de células-tronco, células imunes, células tumorais circulantes, células de amostras de biópsia líquida e sólida, células bacterianas.[0084] Figure 13 displays the cross section of a V-shaped well. A V-shaped well can be very beneficial in certain applications, such as exchanging media and co-culturing different types of cells. Figures 12 and 14 to 15 show various applications of such wells. Cells of different types can be placed on each of the legs of the V, thus allowing culture in the same solution media, but not in direct contact. Furthermore, because the plate is tilted so that the lowest point of the well is the "bottom" of the "V", where the legs of the V come together, the different cell types can be brought together to be co-cultured in direct contact. This could be desirable with a variety of cell types and applications, including, but not limited to, stem cell culture, immune cells, circulating tumor cells, cells from liquid and solid biopsy samples, bacterial cells.

[0085] Em uso, os acionadores magnéticos são usados com placas de cultura de células para levitar células. Em primeiro lugar, as células são magnetizadas, por exemplo, utilizando-se NanoShuttle™ (Nano3D Biosciences, TX). NanoShuttle™ é um conjunto de nanopartículas (-50 nm) consistindo em ouro, óxido de ferro e poli-L-lisina. A poli-L-lisina se ligará não especificamente às membranas celulares através de interações eletrostáticas. A poli-L- lisina de NanoShuttle™ (NanoShuttle™-PL) será retida pelas células durante aproximadamente 8 dias, após este período Petição 870220118221, de 15/12/2022, pág. 41/78 estas elas são liberadas no espaço extracelular. Em um ambiente 3D, a NanoShuttle™-PL será liberada na matriz extracelular, e a cultura 3D manterá sua natureza magnética. Estas células magnetizadas requerem forças magnéticas (30 pN) suficientemente fortes para agregar, mas não danificar, as células. Além disso, descobriu-se que NanoShuttle™ não afeta a proliferação, viabilidade, metabolismo, respostas inflamatórias ou de estresse oxidativo, fenótipo e outras funções de macrocélulas.[0085] In use, magnetic actuators are used with cell culture plates to levitate cells. First, the cells are magnetized, for example, using NanoShuttle™ (Nano3D Biosciences, TX). NanoShuttle™ is a set of nanoparticles (-50 nm) consisting of gold, iron oxide and poly-L-lysine. Poly-L-lysine will non-specifically bind to cell membranes through electrostatic interactions. The poly-L-lysine from NanoShuttle™ (NanoShuttle™-PL) will be retained by cells for approximately 8 days, after this period Petition 870220118221, dated 15/12/2022, p. 41/78 these are released into the extracellular space. In a 3D environment, the NanoShuttle™-PL will be released into the extracellular matrix, and the 3D culture will maintain its magnetic nature. These magnetized cells require magnetic forces (30 pN) strong enough to aggregate, but not damage, the cells. Furthermore, NanoShuttle™ was found not to affect the proliferation, viability, metabolism, inflammatory or oxidative stress responses, phenotype and other functions of macrocells.

[0086] As células são magnetizadas adicionando-se NanoShuttle™-PL diretamente a um frasco de células que está de 70% a 80% confluente, seguido de incubação durante a noite. Tipicamente, NanoShuttle™-PL é adicionada a uma concentração de 1 μL/10.000 células. No dia seguinte, as células tratadas são clivadas enzimaticamente com tripsina e ressuspensas em meios adequados. As células também podem ser magnetizadas em suspensão. Em resumo, as células em suspensão são magnetizadas pela sua mistura com NanoShuttle™-PL durante aproximadamente 30 minutos em um agitador orbital suavemente rotativo. As células são coletadas, por exemplo, através de centrifugação, ressuspensas em meios adequados e prontas para uso.[0086] Cells are magnetized by adding NanoShuttle™-PL directly to a flask of cells that is 70% to 80% confluent, followed by overnight incubation. Typically, NanoShuttle™-PL is added at a concentration of 1 μL/10,000 cells. The next day, treated cells are enzymatically cleaved with trypsin and resuspended in suitable media. Cells can also be magnetized in suspension. Briefly, suspended cells are magnetized by mixing them with NanoShuttle™-PL for approximately 30 minutes in a gently rotating orbital shaker. Cells are collected, for example, through centrifugation, resuspended in suitable media and ready for use.

[0087] As células necessitam receber nanopartículas magnéticas suficientes de modo a serem levitadas no campo magnético, mas não com o intuito de romper o metabolismo normal das células. Níveis de cerca de 30-150 pg/célula, ou cerca de 50 pg de óxido de ferro magnético, são típicos.[0087] Cells need to receive enough magnetic nanoparticles to be levitated in the magnetic field, but not with the aim of disrupting the cells' normal metabolism. Levels of about 30-150 pg/cell, or about 50 pg of magnetic iron oxide, are typical.

[0088] Uma vez magnetizadas, as células podem ser levitadas para montagem, através da adição de células magnetizadas a uma placa, preferivelmente uma placa de fixação ultrabaixa de fundo plano para eficiência máxima de levitação, mas que possui as seções transversais triangulares descritas aqui. Um acionamento magnético, tal como descrito aqui, é então colocado sob a placa de cultura de células. A reunião de células começa tipicamente em minutos, e está completo em horas, embora diferentes tipos de células requererem tempos diferentes, e isto é tipicamente otimizado antes de um experimento ser iniciado. Se desejado, o acionamento magnético pode ser deixado no lugar mesmo depois que as células foram reunidas em uma cultura 3D estável. Entretanto, o acionamento é tipicamente removido e as células são adicionalmente estudadas. Tipicamente, as células retêm sua estrutura 3D uma vez estabilizadas durante cerca de 4 a 8 horas no campo magnético.[0088] Once magnetized, the cells can be levitated for assembly by adding magnetized cells to a plate, preferably a flat-bottomed ultra-low clamping plate for maximum levitation efficiency, but having the triangular cross-sections described here. A magnetic drive, as described here, is then placed under the cell culture plate. Cell assembly typically begins in minutes, and is complete in hours, although different cell types require different times, and this is typically optimized before an experiment is started. If desired, the magnetic drive can be left in place even after the cells have been gathered into a stable 3D culture. However, the drive is typically removed and the cells are further studied. Typically, cells retain their 3D structure once stabilized for about 4 to 8 hours in the magnetic field.

[0089] Um ou mais fármacos ou outros agentes podem ser adicionados às culturas 3D, e então as culturas 3D podem ser convertidas em imagens pela remoção dos ímãs e inclinação das placas de modo a coletar as culturas 3D no vértice. A cunha é então cuidadosamente removida, e a placa é fotografada através da base. A fotografia ou outra imagem será mais rápida e mais confiável, uma vez que as células estão em um local e profundidade conhecidas e uma única foto da câmera pode visualizar cada poço na placa ao mesmo tempo.[0089] One or more drugs or other agents can be added to the 3D cultures, and then the 3D cultures can be converted into images by removing the magnets and tilting the plates so as to collect the 3D cultures at the apex. The wedge is then carefully removed, and the plate is imaged through the base. Photography or other imaging will be faster and more reliable, since the cells are in a known location and depth and a single camera photo can visualize each well in the plate at the same time.

[0090] Se desejado, o acionamento magnético também pode ser usado para coletar células e/ou trocar meio, em que é fornecido um acionamento variante com os ímãsposicionados sobre/sob o vértice, em vez do centro do poço (veja a Figura 9A). Podem ser produzidas diferentes tampas magnéticas para estas duas finalidades, ou uma única tampa pode ser produzida com uma pequena quantidade de espaço adicional (1/2-1X de largura de poço) em um rebordo e, então, os ímãs são posicionados centralmente ou em um lado dos poços pelo deslocamento da posição da tampa para um lado ou outro. Isto também pode ser integrado como parte de um microscópio de varredura onde poços individuais são visualizados.[0090] If desired, magnetic drive can also be used to collect cells and/or exchange media, wherein a variant drive is provided with the magnets positioned over/under the apex rather than the center of the well (see Figure 9A). . Different magnetic covers can be produced for these two purposes, or a single cover can be produced with a small amount of additional space (1/2-1X well width) on one edge and then the magnets are positioned centrally or at one side of the wells by shifting the position of the cover to one side or the other. This can also be integrated as part of a scanning microscope where individual wells are visualized.

[0091] Isto é exibido na Figura 9B, que exibe uma seção transversal através de uma placa 90 com poços triangulares 91. Acima disso, paira uma seção transversal de uma tampa 93 com ímãs 95. A tampa 91 possui um espaço extra W em um lado, o qual possui 0,5-1X em largura, em relação ao poço 91. Assim, empurrar a tampa para a direita centraliza os ímãs 95 sobre os poços 91, ao passo que o empurrá-la para a esquerda move os ímãs 95 em torno de 0,51X de largura do poço fora do centro. A tampa também pode ser rotulada (não exibido) para indicar qual lado deve repousar contra o rebordo da placa. A placa não se move muito para a esquerda porque o aro da tampa encontra o lado da placa, e o movimento é parado.[0091] This is shown in Figure 9B, which displays a cross section through a plate 90 with triangular wells 91. Above this hovers a cross section of a lid 93 with magnets 95. The lid 91 has an extra space W in a side, which is 0.5-1X in width relative to well 91. Thus, pushing the cover to the right centers the magnets 95 over the wells 91, while pushing it to the left moves the magnets 95 around 0.51X well width off center. The cover may also be labeled (not shown) to indicate which side should rest against the edge of the plate. The plate does not move too far to the left because the rim of the lid meets the side of the plate, and the movement is stopped.

[0092] Uma cunha simples usada para inclinar as células foi exibida, fato que possui a vantagem de ser muito econômico. Entretanto, mecanismos mais sofisticados também podem ser usados. Por exemplo, as placas podem ser ajustadas em um suporte que mantém múltiplas placas (Figura 19), e todo o suporte pode ser inclinado, dessa forma, inclinando cada placa ao mesmo tempo. Isto pode ser feito com um pé ou pés de parafuso, pernas telescópicas ou pernas que se estendem ou, uma alavanca ou suporte de elevação pode ser acionado por um motor. Uma tampa modificada também poderia ser usada/combinada para facilitar o empilhamento das placas enquanto elas são inclinadas e empilhadas verticalmente.[0092] A simple wedge used to tilt the cells was shown, which has the advantage of being very economical. However, more sophisticated mechanisms can also be used. For example, the plates can be fitted into a bracket that holds multiple plates (Figure 19), and the entire bracket can be tilted, thereby tilting each plate at the same time. This can be done with a screw foot or feet, telescopic legs or extending legs, or, a lever or lifting bracket can be driven by a motor. A modified lid could also be used/combined to facilitate stacking of the plates as they are tilted and stacked vertically.

[0093] Um suporte acionado por motor seria preferencial para aplicações de alta produtividade, permitindo um levantamento / retorno rápido para o nível com um mínimo de movimento de meios ou movimentos de células. O suporte também pode ser dimensionado de modo a permitir que uma câmera ou outro meio de geração de imagens se ajuste sob as placas para a geração de imagens, minimizando assim qualquer movimento da placa. De forma ideal, o suporte possuirá prateleiras para deslizar nas placas, tal como descrito no documento US20150091233, e o gerador de imagens se encaixará por baixo e pode fotografar uma pluralidade de placas de cada vez.[0093] A motor-driven stand would be preferred for high productivity applications, allowing rapid lifting/return to level with minimal media movement or cell movements. The bracket can also be sized to allow a camera or other imaging means to fit under the plates for imaging, thereby minimizing any plate movement. Ideally, the holder will have shelves to slide in the plates, as described in US20150091233, and the imager will fit underneath and can image a plurality of plates at a time.

[0094] Um inclinador automatizado de múltiplas placas é provido na Figura 19A. Um suporte para o inclinador motorizado de múltiplas placas possui uma base 200 sobre um invólucro 213 que aloja motores 205 e 209 e provê um painel controlador 211. A base é meramente uma estrutura que possui paredes 201 para impedir que as placas deslizem para fora e saliências ou prateleiras 203 para suportar placas. Dentro dos invólucros 213, os motores 205 fornecem um levantamento mecanizado através do mecanismo de elevação 207. O motor vibratório 209 pode ser montado no centro do invólucro, no lado inferior da base 200, para conduzir a vibração na base, e, assim, nas placas posicionadas sobre a mesma. Entretanto, ela pode ser montada em outras localizações, contanto que não interfira com o gerador de imagens ou a câmera 300, por exemplo, um rebordo externo. A Figura 19B exibe o dispositivo após o levantamento através dos motores 205.[0094] An automated multi-plate tilter is provided in Figure 19A. A support for the multi-plate motorized tilter has a base 200 on a housing 213 that houses motors 205 and 209 and provides a controller panel 211. The base is merely a structure that has walls 201 to prevent the plates from sliding out and protrusions. or shelves 203 to support plates. Within the housings 213, the motors 205 provide mechanized lifting via the lifting mechanism 207. The vibratory motor 209 may be mounted in the center of the housing, on the underside of the base 200, to drive vibration into the base, and thus the plates positioned on it. However, it may be mounted in other locations as long as it does not interfere with the imager or camera 300, e.g., an external ledge. Figure 19B shows the device after lifting by motors 205.

[0095] São exibidos um par de motores e um par de invólucros para os mesmos, uma vez que isto permitirá que um suporte muito grande seja produzido e forneça levantamento em ambos os cantos de um suporte. Entretanto, suportes menores podem precisar apenas de um único conjunto de motor. Nos casos em que são providos elevadores duplos, eles serão tipicamente controlados pelo mesmo circuito, economizando assim em custo de fabricação. No entanto, isto não é essencial, e o circuito duplo permitiria a inclinação dos eixos duplos acima descritos.[0095] A pair of motors and a pair of casings for the same are shown, as this will allow a very large support to be produced and provide lifting at both corners of a support. However, smaller mounts may only need a single motor assembly. Where twin elevators are provided, they will typically be controlled by the same circuit, thus saving on manufacturing cost. However, this is not essential, and the double circuit would allow tilting of the dual axes described above.

[0096] A Figura 20A exibe outra variação de uma placa que pode criar um grande número de grumos ou esferoides de células para usos em pesquisa. Existe um único poço grande - neste caso retangular e, preferivelmente, do mesmo tamanho e dimensão que uma placa de microtitulação padrão. Dentro das paredes exteriores 2001 existem paredes de separação de células em zigue-zague 2003 mais curtas, que podem ser dispostas em qualquer padrão, mas aqui são mostradas em linhas paralelas e atravessando de um lado para o outro. Uma vez que as paredes de separação 2003 são mais curtas do que a parede externa 2001, quando as células contendo meio 2050 são Petição 870220118221, de 15/12/2022, pág. 46/78 adicionadas a uma profundidade maior do que as paredes de separação 2003, e a placa é oscilada para trás e para frente sobre o oscilador 2030, as forças farão com que as células 2020 comecem a se acumular nos vértices. Veja a Figura 20B. Uma vez reunidas, a oscilação pode ser descontinuada, e com o tempo de cultura, cada uma das células 2020 nos vértices irá crescer, criando esferoides ou grumos 3D (Figura 20C).[0096] Figure 20A shows another variation of a plate that can create a large number of clumps or spheroids of cells for research uses. There is a single large well - in this case rectangular and preferably the same size and dimension as a standard microtiter plate. Within the 2001 outer walls there are shorter 2003 zigzag cell separation walls, which can be arranged in any pattern, but here they are shown in parallel lines and crossing from one side to the other. Since the separation walls 2003 are shorter than the outer wall 2001, when the cells containing medium 2050 are Petition 870220118221, dated 12/15/2022, p. 46/78 added to a greater depth than the 2003 separation walls, and the plate is oscillated back and forth on the 2030 oscillator, the forces will cause the 2020 cells to begin to accumulate at the vertices. See Figure 20B. Once gathered, the oscillation can be discontinued, and over time in culture, each of the 2020 cells at the vertices will grow, creating 3D spheroids or clumps (Figure 20C).

[0097] A Figura 21 apresenta outra variação desta ideia na qual o poço é circular, mais uma vez tendo a parede externa mais alta 2101 e a pluralidade de paredes circulares em zigue-zague 2103. Também estão incluídas as paredes curvas 2105 que se estendem a partir da parede externa 2101 e que se projetam de uma maneira curta para o interior do diâmetro do poço. Estas paredes curvas 2105 direcionarão o meio e a célula 2150 de volta o centro da placa, impedindo assim que todas as células se acumulem no rebordo mais externo. Como antes, quando a rotação é interrompida, as células se manterão em grumos formados (não exibidos).[0097] Figure 21 presents another variation of this idea in which the shaft is circular, once again having the taller outer wall 2101 and the plurality of zigzag circular walls 2103. Also included are curved walls 2105 that extend from the outer wall 2101 and projecting a short way into the borehole diameter. These curved walls 2105 will direct the middle and cell 2150 back to the center of the plate, thus preventing all cells from accumulating at the outermost edge. As before, when rotation is stopped, the cells will remain in clumps (not shown).

[0098] A Figura 22 exibe outra variação adicional, em que as paredes de separação em zigue-zague 2203 são dispostas em anéis concêntricos em torno do centro da placa. Isto permite o uso benéfico máximo das forças centrípetas. As paredes curvas 2205 e a parede exterior 2201 têm a mesma função que na Figura 21.[0098] Figure 22 displays another additional variation, in which the zigzag separation walls 2203 are arranged in concentric rings around the center of the plate. This allows for maximum beneficial use of centripetal forces. The curved walls 2205 and the outer wall 2201 have the same function as in Figure 21.

[0099] A Figura 23 exibe outra variação adicional, em que as paredes de separação em zigue-zague 2303 são dispostas radialmente a partir do centro da placa. Asparedes curvas 2305 e a parede exterior 2301 têm a mesma função que na Figura 21.[0099] Figure 23 displays another additional variation, in which the zigzag separation walls 2303 are arranged radially from the center of the plate. The curved walls 2305 and the outer wall 2301 have the same function as in Figure 21.

[00100] As Figuras de 24A a 24E exibem vistas superior e lateral de uma placa de 384 poços de acordo com a presente invenção bem como uma seção transversal, em que cada poço da placa de 384 poços possui uma seção transversal triangular em vista superior. Além disso, é exibida uma vista ampliada da placa que ilustra que um vértice de cada poço individual possui um canto arredondado orientado para um lado curto da placa.[00100] Figures 24A to 24E show top and side views of a 384-well plate in accordance with the present invention as well as a cross-section, wherein each well of the 384-well plate has a triangular cross-section in top view. Additionally, an enlarged view of the plate is shown that illustrates that one apex of each individual well has a rounded corner oriented toward a short side of the plate.

[00101] As Figuras de 25A a 25C provêm uma simples impressão tridimensional da placa exibida na Figura 24 em um suporte de placa para aplicação de inclinação, conforme exibido nas Figuras 2, 4, 6 e 18.[00101] Figures 25A to 25C provide a simple three-dimensional print of the plate shown in Figure 24 on a plate support for tilting application, as shown in Figures 2, 4, 6 and 18.

[00102] A presente invenção adicionalmente refere-se aos seguintes aspectos:[00102] The present invention additionally refers to the following aspects:

[00103] 1. Placa de cultura de múltiplos poços que compreende: uma placa retangular que possui um primeiro e segundo lado longo e um primeiro e segundo lado curto; em que a dita placa possui uma pluralidade de poços; e cada um da dita pluralidade de poços possui uma seção transversal não circular que possui pelo menos um vértice quando visualizado de uma vista superior; e cada um dos poços possui uma base plana transparente sem qualquer obstrução, de modo que a totalidade do conteúdo do poço possa ser visualizada por baixo da base.[00103] 1. Multi-well culture plate comprising: a rectangular plate having a first and second long side and a first and second short side; wherein said plate has a plurality of wells; and each of said plurality of wells has a non-circular cross-section that has at least one apex when viewed from a top view; and each of the wells has a flat transparent base without any obstructions, so that the entire contents of the well can be viewed underneath the base.

[00104] 2. Placa de cultura de múltiplos poços do aspecto 1, em que o dito vértice é orientado para o dito primeiro lado longo.[00104] 2. Multi-well culture plate of aspect 1, wherein said apex is oriented towards said first long side.

[00105] 3. Placa de cultura de múltiplos poços do aspecto 2, que adicionalmente compreende uma cunha retangular que se encaixa sob o dito recipiente retangular de cultura de células, deste modo levantando o dito segundo lado longo em 15° a 45°.[00105] 3. The multi-well culture plate of aspect 2, further comprising a rectangular wedge that fits under said rectangular cell culture vessel, thereby raising said second long side by 15° to 45°.

[00106] 4. Placa de cultura de múltiplos poços do aspecto 1, em que o dito vértice é orientado para o dito primeiro lado curto.[00106] 4. Multi-well culture plate of aspect 1, wherein said apex is oriented towards said first short side.

[00107] 5. Placa de cultura de múltiplos poços do aspecto 4, que adicionalmente compreende uma cunha retangular que se encaixa sob o dito recipiente retangular de cultura de células, deste modo levantando o dito segundo lado curto em 15° a 45°.[00107] 5. The multi-well culture plate of aspect 4, further comprising a rectangular wedge that fits under said rectangular cell culture vessel, thereby raising said second short side by 15° to 45°.

[00108] 6. Placa de cultura de múltiplos poços do aspecto de 1 a 5, em que dito vértice possui um canto arredondado.[00108] 6. Multi-well culture plate of aspect 1 to 5, wherein said apex has a rounded corner.

[00109] 7. Placa de cultura de múltiplos poços do aspecto 1, que adicionalmente compreende uma tampa retangular que possui um rebordo em torno de sua circunferência externa e sendo modelada para se encaixar sobre ou sob a dita placa de cultura de múltiplos poços.[00109] 7. The multi-well culture plate of aspect 1, further comprising a rectangular lid having a lip around its outer circumference and being shaped to fit over or under said multi-well culture plate.

[00110] 8. Placa de cultura de múltiplos poços do aspecto 1, que adicionalmente compreende uma tampa retangular que possui um rebordo em torno de sua circunferência externa e sendo modelada para se encaixar sobre ou sob a dita placa de cultura de múltiplos poços, a dita tampa possui uma pluralidade de ímãs fixados a mesma, deste modo, assegurando o dito imã sobre cada poço quando a dita tampa está no lugar sobre ou sob a dita placa de cultura de múltiplos poços.[00110] 8. The multi-well culture plate of aspect 1, further comprising a rectangular lid having a rim around its outer circumference and being shaped to fit over or under said multi-well culture plate, the said lid has a plurality of magnets fixed thereto, thereby securing said magnet over each well when said lid is in place on or under said multi-well culture plate.

[00111] 9. Placa de cultura de múltiplos poços do aspecto 1, que adicionalmente compreende uma tampa retangular que possui um rebordo em torno de sua circunferência externa e sendo modelada para se encaixar sobre ou sob a dita placa de cultura de múltiplos poços, a dita tampa possui uma pluralidade de imãs afixados à mesma, deste modo, assegurando o dito imã sobre cada dito poço quando a dita tampa está no lugar sobre ou sob a dita placa de cultura de múltiplos poços, cada ímã adjacente estando em polaridade oposta.[00111] 9. The multi-well culture plate of aspect 1, further comprising a rectangular lid having a rim around its outer circumference and being shaped to fit over or under said multi-well culture plate, the said lid has a plurality of magnets affixed thereto, thereby securing said magnet over each said well when said lid is in place on or under said multi-well culture plate, each adjacent magnet being in opposite polarity.

[00112] 10. Placa de cultura de múltiplos poços do aspecto 8 ou 9, em que cada dito ímã se assenta sobre cada vértice.[00112] 10. Multi-well culture plate of aspect 8 or 9, wherein each said magnet sits on each apex.

[00113] 11. Placa de cultura de múltiplos poços do aspecto 8 ou 9, em que cada ímã se assenta sobre um centro de cada poço.[00113] 11. Multi-well culture plate of aspect 8 or 9, wherein each magnet sits on a center of each well.

[00114] 12. Placa de cultura de múltiplos poços dos aspectos de 1 a 11, que possui 6 poços.[00114] 12. Multi-well culture plate from aspects 1 to 11, which has 6 wells.

[00115] 13. Placa de cultura de múltiplos poços dos aspectos de 1 a 11, que possui 24 poços.[00115] 13. Multi-well culture plate from aspects 1 to 11, which has 24 wells.

[00116] 14. Placa de cultura de múltiplos poços dos aspectos de 1 a 11, que possui 96 poços.[00116] 14. Multi-well culture plate from aspects 1 to 11, which has 96 wells.

[00117] 15. Placa de cultura de múltiplos poços dos aspectos de 1 a 11, que possui 384 poços.[00117] 15. Multi-well culture plate from aspects 1 to 11, which has 384 wells.

[00118] 16. Placa de cultura de múltiplos poços dos aspectos de 1 a 11, que possui 1.536 poços.[00118] 16. Multi-well culture plate from aspects 1 to 11, which has 1,536 wells.

[00119] 17. Placa de cultura de múltiplos poços dos aspectos de 1 a 11, que possui 3.072 poços.[00119] 17. Multi-well culture plate from aspects 1 to 11, which has 3,072 wells.

[00120] 18. Placa de cultura de múltiplos poços dos aspectos de 1 a 11, que possui 6.144 poços.[00120] 18. Multi-well culture plate from aspects 1 to 11, which has 6,144 wells.

[00121] 19. Método de geração de imagens de uma cultura de células que compreende: incubar um ou mais tipos de células em um meio em um ou mais poços da placa de cultura de múltiplos poços do aspecto 1; inclinar a dita placa de cultura de múltiplos poços de modo que as células se reúnam no dito vértice; opcionalmente, vibrar da dita placa; remover a dita inclinação quando todas as células foram reunidas no dito vértice; e gerar imagens das ditas células através da dita base plana.[00121] 19. A method of imaging a cell culture comprising: incubating one or more cell types in a medium in one or more wells of the multi-well culture plate of aspect 1; tilting said multi-well culture plate so that cells gather at said apex; optionally, vibrating said plate; removing said slope when all cells have been gathered at said vertex; and generating images of said cells through said flat base.

[00122] 20. Método de geração de imagens de uma cultura de células, que compreende: incubar um ou mais tipos de células em um meio em um ou mais poços da placa de cultura de múltiplos poços do aspecto 3; encaixar a dita cunha sob a dita placa de cultura de múltiplos poços, opcionalmente, vibrar a dita placa; remover a dita cunha quando todas as células foram reunidas no dito vértice; e gerar imagens das ditas células através da dita base plana.[00122] 20. A method of imaging a cell culture, comprising: incubating one or more cell types in a medium in one or more wells of the multi-well culture plate of aspect 3; fitting said wedge under said multi-well culture plate, optionally vibrating said plate; removing said wedge when all cells have been gathered at said vertex; and generating images of said cells through said flat base.

[00123] 21. Método, de acordo com o aspecto 19 ou 20, em que a dita etapa de vibração é realizada.[00123] 21. Method, according to aspect 19 or 20, in which said vibration step is carried out.

[00124] 22. Placa de cultura de múltiplos poços, que compreende: uma placa retangular que possui um lado longo e um lado curto; em que a dita placa possui uma pluralidade de poços; e cada um da dita pluralidade de poços possui uma seção transversal em forma de V quando visualizado em uma vista superior, a dita seção transversal em forma de V possui um vértice; e cada um dos ditos poços possui uma base plana.[00124] 22. Multi-well culture plate, comprising: a rectangular plate having a long side and a short side; wherein said plate has a plurality of wells; and each of said plurality of wells has a V-shaped cross-section when viewed in a top view, said V-shaped cross-section has a vertex; and each of said wells has a flat base.

[00125] 23. Placa de cultura de múltiplos poços, que compreende: uma placa retangular que possui um lado longo e um lado curto; a dita placa possui uma pluralidade de poços; e cada um da dita pluralidade de poços possui uma seção transversal triangular quando visualizado em uma vista superior, em que a dita seção transversal triangular possui um vértice; e cada um dos ditos poços possui uma base plana transparente.[00125] 23. Multi-well culture plate, comprising: a rectangular plate having a long side and a short side; said plate has a plurality of wells; and each of said plurality of wells has a triangular cross-section when viewed in a top view, said triangular cross-section having an apex; and each of said wells has a flat transparent base.

[00126] 24. Método de geração de imagens de uma cultura de células, que compreende: incubar um ou mais tipos de células em um meio em um ou mais poços de uma placa de cultura de múltiplos poços, em que cada poço possui uma base plana transparente; inclinar a dita placa de cultura de múltiplos poços; vibrar a dita placa de cultura de múltiplos poços; reunir todas as células em uma localização mais baixa de um ou mais poços da dita placa de cultura de múltiplos poços inclinada; cessar a dita inclinação e a dita vibração; e gerar imagens das ditas células através da dita base plana transparente.[00126] 24. Method of imaging a cell culture, comprising: incubating one or more types of cells in a medium in one or more wells of a multi-well culture plate, wherein each well has a base flat transparent; tilting said multi-well culture plate; vibrating said multi-well culture plate; gathering all the cells in a lower location of one or more wells of said inclined multi-well culture plate; cease said inclination and said vibration; and generating images of said cells through said flat transparent base.

[00127] 25. Método do aspecto 24, em que o dito um ou mais poços possui uma seção transversal triangular ou quadrada ou em forma de V que possui pelo menos um vértice, e em que a dita inclinação permite que as células sejam reunidas no dito vértice.[00127] 25. Method of aspect 24, wherein said one or more wells have a triangular or square or V-shaped cross-section that has at least one apex, and wherein said inclination allows cells to be brought together in the said vertex.

[00128] 26. Método do aspecto 25, em que o dito vértice possui um canto arredondado.[00128] 26. Method of aspect 25, in which said vertex has a rounded corner.

[00129] 27. Placa de cultura de múltiplos poços, que compreende: uma placa retangular que possui um lado longo e um lado curto; em que a dita placa possui uma pluralidadede poços; e cada um da dita pluralidade de poços possui uma seção transversal em forma de V em uma base dos ditos poços, a seção transversal em forma de V possui um vértice e uma primeira perna e uma segunda perna; em que as ditas primeiras pernas de cada poço em uma única fileira são conectadas perto de uma superfície superior da dita placa, formando assim um canal que conecta todos os poços na dita fileira; e cada base sendo uma base plana transparente.[00129] 27. Multi-well culture plate, comprising: a rectangular plate having a long side and a short side; wherein said plate has a plurality of wells; and each of said plurality of wells has a V-shaped cross-section at a base of said wells, the V-shaped cross-section has an apex and a first leg and a second leg; wherein said first legs of each well in a single row are connected near an upper surface of said plate, thereby forming a channel that connects all wells in said row; and each base being a flat transparent base.

[00130] 28. Placa de cultura de múltiplos poços do aspecto 27, em que cada canal se conecta a um mesmo canal terminal permitindo a reunião de todas as células em todas as fileiras da dita placa de cultura de múltiplos poços.[00130] 28. Multi-well culture plate of aspect 27, in which each channel connects to the same terminal channel allowing the gathering of all cells in all rows of said multi-well culture plate.

[00131] 29. Método de geração de imagens de uma cultura de células, que compreende: incubar um ou mais tipos de células em um meio em um ou mais poços da placa de cultura de múltiplos poços do aspecto 28; inclinar a dita placa de cultura de múltiplos poços; vibrar a dita placa de cultura de múltiplos poços; reunir todas as células no vértice de cada poço na dita placa de cultura de múltiplos poços inclinada; cessar a dita inclinação e a dita vibração; e gerar imagens das ditas células através da dita base plana transparente.[00131] 29. A method of imaging a cell culture, comprising: incubating one or more types of cells in a medium in one or more wells of the multi-well culture plate of aspect 28; tilting said multi-well culture plate; vibrating said multi-well culture plate; gathering all cells at the apex of each well in said inclined multi-well culture plate; cease said inclination and said vibration; and generating images of said cells through said flat transparent base.

[00132] 30. Método do aspecto 29, em que a dita inclinação até uma extremidade oposta do dito vértice permite que as células de uma fileira de poços sejam coletadas de forma conjunta.[00132] 30. Method of aspect 29, wherein said inclination to an opposite end of said vertex allows cells from a row of wells to be collected together.

[00133] As descrições acima são apenas ilustrativas e não pretendem limitar indevidamente a invenção conforme definida pelas reivindicações anexas.[00133] The above descriptions are illustrative only and are not intended to unduly limit the invention as defined by the appended claims.

[00134] Os seguintes documentos são aqui incorporados por referência em sua totalidade para todos os propósitos:[00134] The following documents are incorporated herein by reference in their entirety for all purposes:

[00135] ANSI SLAS 1-2004 (R2012): Footprint Dimensions.[00135] ANSI SLAS 1-2004 (R2012): Footprint Dimensions.

[00136] ANSI SLAS 2-2004 (R2012): Height Dimensions.[00136] ANSI SLAS 2-2004 (R2012): Height Dimensions.

[00137] ANSI SLAS 3-2004 (R2012): Bottom Outside Flange Dimensions.[00137] ANSI SLAS 3-2004 (R2012): Bottom Outside Flange Dimensions.

[00138] ANSI SLAS 4-2004 (R2012): Well Positions.[00138] ANSI SLAS 4-2004 (R2012): Well Positions.

[00139] ANSI SLAS 4-2012: Well Bottom Elevation.[00139] ANSI SLAS 4-2012: Well Bottom Elevation.

[00140] WO2013019212, US20140220672 e 61/372.164, depositados em 10 de agosto de 2010.[00140] WO2013019212, US20140220672 and 61/372,164, filed on August 10, 2010.

[00141] US20120171744, US8883471, US20150104844 e 61/245.846, que foram depositados em 25 de setembro de 2009. Materials for magnetizing cells and magnetic manipulation.[00141] US20120171744, US8883471, US20150104844 and 61/245,846, which were filed on September 25, 2009. Materials for magnetizing cells and magnetic manipulation.

[00142] US20150091233, Phone camera and sample stand.[00142] US20150091233, Phone camera and sample stand.

[00143] US20110286975, US8815231, US201403784 e 61/099.966, depositados em 25 de setembro de 2008. Systems and methods for magnetic guidance and patterning of materials.[00143] US20110286975, US8815231, US201403784 and 61/099,966, filed on September 25, 2008. Systems and methods for magnetic guidance and patterning of materials.

[00144] US5225164 Microplate laboratory tray with rectilinear wells.[00144] US5225164 Microplate laboratory tray with rectilinear wells.

[00145] US5002582 Preparation of polymeric surfaces via covalently attaching polymers.[00145] US5002582 Preparation of polymeric surfaces via covalently attaching polymers.

[00146] US5457527 Microplate forming wells with transparent bottom walls for assays using light measurements.[00146] US5457527 Microplate forming wells with transparent bottom walls for assays using light measurements.

[00147] US6503456 Microplate with transparent base.[00147] US6503456 Microplate with transparent base.

[00148] US6340589 Thin-well microplate and methods of making same.[00148] US6340589 Thin-well microplate and methods of making same.

[00149] US20050170498 Multiwell plate and method for making multiwell plate using a low cytotoxicity photocurable adhesive.[00149] US20050170498 Multiwell plate and method for making multiwell plate using a low cytotoxicity photocurable adhesive.

[00150] US8512652 Multiwell microplate with transparent bottom having a thickness less than 200 micrometers.[00150] US8512652 Multiwell microplate with transparent bottom having a thickness less than 200 micrometers.

[00151] US7599055 Swept wavelength imaging optical interrogation system and method for using same.[00151] US7599055 Swept wavelength imaging optical interrogation system and method for using the same.

[00152] US7265829 Reflective optic system for imaging microplate readers.[00152] US7265829 Reflective optic system for imaging microplate readers.

[00153] US20110286102 Optical Adaptor.[00153] US20110286102 Optical Adapter.

[00154] US6130745 Optical autofocus for use with microtiter plates.[00154] US6130745 Optical autofocus for use with microtiter plates.

[00155] US8636965 Microtitration plate.[00155] US8636965 Microtitration plate.

[00156] US9168532 Microwell plate.[00156] US9168532 Microwell plate.

[00157] Castro-Chavez, F., et al. - Effect of lyso- phosphatidylcholine and Schnurri-3 on osteogenic transdifferentiation of vascular smooth muscle cells to calcifying vascular cells in 3D culture. Biochim. Biophys. Acta 1830, 3828-34 (2013).[00157] Castro-Chavez, F., et al. - Effect of lyso- phosphatidylcholine and Schnurri-3 on osteogenic transdifferentiation of vascular smooth muscle cells to calcifying vascular cells in 3D culture. Biochim. Biophys. Minutes 1830, 3828-34 (2013).

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[00164] Tseng H., et al. - A high-throughput in vitro ring assay for vasoactivity using magnetic 3D. Sci Rep, 6:30640, 2016.[00164] Tseng H., et al. - A high-throughput in vitro ring assay for vasoactivity using magnetic 3D. Sci Rep, 6:30640, 2016.

[00165] Tseng H., et al. - A spheroid toxicity assay using magnetic 3D bioprinting and real-time mobile device-based imaging. Sci Rep, 5:13987, 2015.[00165] Tseng H., et al. - A spheroid toxicity assay using magnetic 3D bioprinting and real-time mobile device-based imaging. Sci Rep, 5:13987, 2015.

[00166] Tseng, H., et al. - Assembly of a three-dimensional multitype bronchiole coculture model using magnetic levitation. Tissue Eng. Part C. Methods 19, 665-75 (2013).[00166] Tseng, H., et al. - Assembly of a three-dimensional multitype bronchiole coculture model using magnetic levitation. Tissue Eng. Part C. Methods 19, 665-75 (2013).

[00167] Tseng, H., et al. - A three-dimensional co-culture model of the aortic valve using magnetic levitation. Acta Biomater. 10, 173-82 (2014).[00167] Tseng, H., et al. - A three-dimensional co-culture model of the aortic valve using magnetic levitation. Acta Biomater. 10, 173-82 (2014).

Claims

1. Multi-well culture plate system characterized by the fact that it comprises: a) a multi-well culture plate (20) comprising: (i) a rectangular plate having a first and a second long side and a first and a second short side; (ii) said plate has a plurality of wells (22); (iii) each of said plurality of wells (22) has a non-circular cross-section that has at least one apex (24) when viewed from a top view; and (iv) each of said wells (22) has a flat transparent base without any obstruction, so that the entire contents of the well can be viewed below the base, b) a rectangular lid (10) having a rim (12) around its outer circumference and being shaped to fit over or under said culture plate (20); c) a rectangular element (28) for tilting said plate (20).

2. Multi-well culture plate system characterized by the fact that it comprises: a) a multi-well culture plate (20) comprising: Petition 870220118221, of 15/12/2022, p. 57/78 (i) a rectangular plate having a first and a second long side and a first and a second short side; (ii) said plate has a plurality of wells (22); (iii) each of said plurality of wells (22) has a V-shaped cross-section when viewed from a top view, said V-shaped cross-section has a vertex (24); and (iv) each of said wells (22) has a flat transparent base, b) a rectangular lid (10) having a lip (12) around its outer circumference and being shaped to fit over or under said culture plate (20); c) a rectangular element (28) for tilting said plate (20).

3. Multi-well culture plate system characterized by the fact that it comprises: a) a multi-well culture plate (20) comprising: (i) a rectangular plate having a first and a second long side and a first and a second short side; (ii) said plate has a plurality of wells (22); (iii) each of said plurality of wells (22) has a triangular cross section when Petition 870220118221, of 15/12/2022, p. 58/78 viewed from a top view, said triangular cross-section has a vertex (24); and (iv) each of said wells (22) has a flat transparent base, b) a rectangular lid (10) having a lip (12) around its outer circumference and being shaped to fit over or under said culture plate (20); c) a rectangular element (28) for tilting said plate (20).

4. Multi-well culture plate system according to any one of claims 1 to 3, characterized in that said apex (24) is oriented towards said first long side or said first short side.

5. Multi-well culture plate system according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the rectangular wedge (28) raises said second long side or said second short side by 15° to 45°. °.

6. Multi-well culture plate system according to any one of claims 1 to 3, characterized in that said apex (24) has a rounded corner.

7. Multi-well culture plate system according to any one of claims 1 to 3, characterized in that said rectangular lid (10) has a plurality of magnets (16) fixed thereto, thereby holding said magnet (16) over or under each well (22) when said lid (10) is in place over or under said multi-well culture plate (20).

8. Multi-well culture plate system according to any one of claims 1 to 3, characterized in that said rectangular lid (10) has a plurality of magnets (16) fixed thereto, thereby holding said magnet (16) over or under each well (22) when said lid (10) is in place over or under said multi-well culture plate (20), each adjacent magnet (16) being in opposite polarity.

9. Multi-well culture plate system according to claim 8, characterized by the fact that each said magnet (16) sits on each apex (24).

10. Multi-well culture plate system according to claim 8, characterized by the fact that each said magnet (16) sits on a center of each well (22).

11. Multi-well culture plate system according to any one of claims 1 to 3, characterized in that it has 6, 24, 96, 384, 1,536, 3,072 or 6,144 wells (22).

12. Method of imaging a cell culture characterized by the fact that it comprises: (a) incubating one or more types of cells in a medium in one or more wells (22) of the multi-well culture plate (20) a multi-well culture plate system as defined in claims 1 to 3; (b) tilting said multi-well culture plate (20) so that cells gather at said apex (24); (c) optionally vibrating said plate (20); (d) removing said slope when all cells meet at said vertex (24); and (e) imaging said cells through said flat transparent base.

13. Method of imaging a cell culture characterized by the fact that it comprises: (a) incubating one or more types of cells in a medium in one or more wells of the multi-well culture plate (20) of a system of a multi-well culture plate as defined in claims 1 to 3; (b) fitting a rectangular wedge (28) under said multi-well culture plate (20); (c) optionally vibrating said plate (20); (d) removing said wedge (28) when all cells have gathered at said vertex (24); and (e) generating images of said cells through said flat transparent base.

14. Method of imaging a cell culture, characterized by the fact that it comprises: (a) incubating one or more types of cells in a medium in one or more wells (22) of a culture plate (20), wherein each well has a flat transparent base; (b) tilting said culture plate (20); (c) vibrating said culture plate (20); (d) gathering all cells in a lower location of said one or more wells (22) of said inclined culture plate (20); (e) cease said tilt and said vibration; and (f) imaging said cells through said flat transparent base, wherein said one or more wells (22) have a triangular or square or V-shaped cross-section having at least one apex (24), and wherein said inclination allows cells to be brought together at said vertex (24).

15. Method, according to claim 14, characterized by the fact that said vertex (24) has a rounded corner.

16. Method according to claim 14, characterized by the fact that said culture plate has one or more wells (20), each well having one or more zigzag cell separation walls (2003, 2103, 2203, 2303) that are shorter than a well wall (2001, 2101, 2201, 2301), each zigzag cell separation wall (2003, 2103, 2203, 2303) has a plurality of vertices, and wherein said tilt allows cells to be brought together at said plurality of vertices.

17. Method according to claim 16, characterized by the fact that said plurality of vertices has rounded corners.

18. Multi-well culture plate (20) characterized by the fact that it comprises: (i) a rectangular plate having a long side and a short side; (ii) said plate has a plurality of wells (22); (iii) each of said plurality of wells (22) has a V-shaped cross-section at a base of said wells (22), said V-shaped cross-section has an apex (24) and a first leg and a second leg; (iv) wherein said first legs of each well (22) in a single row are connected near an upper surface of said plate, thereby forming a channel that connects all wells (22) in said row; and (v) each base being a transparent flat base.

19. Multi-well culture plate (20), according to claim 18, characterized by the fact that each channel connects to the same terminal channel allowing the gathering of all cells in all rows of said culture plate. multiple wells (20).

20. Method of imaging a cell culture characterized by the fact that it comprises: (a) incubating one or more types of cells in a medium in one or more wells of the multi-well culture plate (20) as defined in claim 19; (b) tilting the multi-well culture plate (20); (c) vibrating said multi-well culture plate (20); (d) collecting all cells from said apex (24) of each well (22) in said inclined multi-well culture plate (20); (e) cease said tilt and said vibration; and, (f) generating images of said cells through said flat transparent base.

21. Method according to claim 20, characterized in that said inclination to an opposite end of said apex (24) allows the cells of a row of wells to be brought together.

22. Multi-well culture plate system characterized by the fact that it comprises: (a) a multi-well culture plate (20) as defined in claim 18; (b) a rectangular lid (10) having a lip (12) around its outer circumference and being shaped to fit over or under said plate (20); (c) an element (28) for tilting said plate (20).

23. Method according to claim 14, characterized by the fact that the multi-well culture plate (20) is the multi-well culture plate (20) of a multi-well culture plate system as defined in any of claims 1, 2 or 3.