BR112014009282B1

BR112014009282B1 - Composto, composição farmacêutica contendo-o e uso do mesmo

Info

Publication number: BR112014009282B1
Application number: BR112014009282-6A
Authority: BR
Inventors: John P. Toscano; Daryl A. Guthrie
Original assignee: The Johns Hopkins University
Priority date: 2011-10-17
Filing date: 2012-10-16
Publication date: 2021-12-14
Also published as: EP2776402A1; US20140275134A1; BR112014009282A2; KR102061537B1; CA2852914A1; MX363306B; CN108409662A; CN104053647B; AU2013201929A1; CN108409662B; US9181213B2; JP2015501308A; AU2013201929B2; MX2014004596A; KR20140107197A; IL232101A0; HK1200168A1; CA2852914C; EP2776402B1; BR112014009282A8

Abstract

ácido de meldrum, ácido barbitúrico e derivados de pirazol substituídos com hidroxilamina como doadores de hno. o objeto revelado proporciona certos compostos n-substituídos derivados de hidroxilamina, composições farmacêuticas e kits compreendendo estes compostos, e métodos de utilização de tais compostos ou composições farmacêuticas. em particular, o objeto revelado proporciona métodos de utilização de tais compostos ou de composições farmacêuticas para tratar, prevenir, ou retardar o aparecimento e/ou o desenvolvimento de uma doença ou condição. em algumas formas de realização, a doença ou condição é selecionada de doenças cardiovasculares, isquemia, lesão de reperfusão, doença cancerosa, a hipertensão pulmonar e condições que respondem a terapia de nitroxilo.

Description

[001] Esse pedido reivindica prioridade do Pedido Provisório de Patente US No. 61/548,036, depositado em 17 de outubro de 2011, intitulado “Derivados de Hidroxilamina N-substituída com Grupos de Partida Baseados em Carbono como Doadores Nitroxil (HNO) Fisiologicamente Útil”, a totalidade do conteúdo do qual é aqui incorporada por referência.

[002] Essa invenção foi realizada, em parte, com o apoio do governo, Grant No. CHE-0911305 concedido por National Science Foundation (NSF). O governo pode ter certos direitos nessa invenção.

[003] Nitroxil (HNO) demonstrou possuir uma atividade biológica distinta daquela do seu primo redox, o óxido nítrico (NO), e óxidos relacionados de nitrogênio.1-11 Muito do recente interesse no HNO foi catalisado pela pesquisa sugerindo que pode ser uma nova terapêutica para o tratamento de insuficiência cardíaca.1-5 Em pH neutro na ausência de coletor químico, HNO dimeriza eficientemente (k= 8x106 M-1s-1) para ácido hiponitroso (HON=NOH) que subsequentemente desidrata no óxido nitroso (N2O).12 Dada esta reatividade inerente, HNO não pode ser usado diretamente; moléculas dadoras são necessárias para a geração de HNO in situ. No entanto, além de sal de Angeli, derivados do ácido de Piloty e compostos nitrosos de acilóxi, poucos doadores HNO fisiologicamente úteis existem.

[004] N-hidroxicianamida é um derivado de hidroxilamina com um grupo de partida baseado em carbono e um intermediário proposto na bioativação oxidativa de cianamida pela catalase, a qual pode desproporcionar para HNO e cianeto. N-Hidroxicianamida nunca foi isolada para fundamentar a sua reatividade. Existem evidências de que a oxidação adicional de N-hidroxicianamida produz intermediários que também podem gerar HNO. Nagasawa e colaboradores sintetizaram um derivado de N,O-bis-acilado de N-hidroxicianamida, mas este derivado libera HNO juntamente com cianeto por meio de um intermediário nitroso de acil apenas em condições enzimática ou básicas. Dada a toxicidade do cianeto, grupos de partida alternativos à base de carbono são desejados.

[005] Aqui descritos estão derivados de hidroxilamina N-substituídos com grupos de partida adequados à base de carbono para a produção de HNO em pH neutro sem ativação enzimática. Além disso, esses derivados evitam a liberação de cianeto tóxico.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[006] FIG. 1 mostra a análise de 1HRMN da decomposição de (a) 4a a 4b e (b) 6a a 6b em D2O a 10%, soro tamponado com fosfato (PBS), pH 7,4 em temperatura ambiente. Em cada caso, o espectro de fundo foi coletado no início da experiência, e a parte superior do espectro após a decomposição completa. Na inserção de (a), as cinéticas de decomposição são mostradas. Os triângulos representam os (6H) de N-CH3 e o oxima C-CH3(3H) de 4a, e os círculos representam (6H) de N-CH3 e oxima C-CH3(3H) de carboânion 4b. As curvas sólidas são calculadas no melhor ajuste para uma única função exponencial (k= 2,4 X 10-3s-1 para cada ajuste). Em (b), os asteriscos (*) indicam sinais devido ao menor isômero anti-6b.

[007] A FIG. 2 mostra (A) um gráfico representando a concentração de (a) 4b, 4b-H+ e (b), 6b, 6b-H+ como uma função do pH. Em (a) , os quadrados representam 4b-H+ (Àmáx = 298 nm) , e os círculos representam carboânion 4b (Xmáx = 261 nm) . Em (b) , os quadrados representam 6b-H+ (Àmáx = 270 nm) , em que os últimos três pontos de dados foram omitidos, devido à sobreposição espectral, e os círculos representam carboânion 6b (Àmáx = 253 nm) .

[008] A FIG. 3 mostra o espectro de UV-Vis da decomposição de (a) 4a (tempo entre traços = 30 s) e (b) 6a (tempo entre traços = 240 s), em 37°C em PBS, pH 7,4; e (c) um gráfico representando a taxa de decomposição (como determinada por análise de UV-Vis) como função do pH em 25°C de 4a (monitorado em 261 nm) e 6a (monitorado em 253 nm).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO Definições

[009] “Hr” ou “h” refere-se às horas.

[010] “Min” ou “m” refere-se aos minutos.

[011] “Seg” ou “s” refere-se aos segundos.

[012] “D” refere-se aos dias.

[013] “Substituto” refere-se a um grupo ou composto tendo um ou mais átomos de hidrogênio substituídos com um ou mais substituintes os quais podem ser iguais ou diferentes. Em algumas modalidades, o um ou mais substituintes são aqueles os quais não afetam substancialmente a estabilidade ou a atividade do composto.

[014] “Alquil” refere-se a um grupo hidrocarboneto monovalente contendo apenas ligações simples carbono- carbono. Um grupo alquil pode ser linear, ramificado, cíclico, ou qualquer combinação dos mesmos. Salvo indicação em contrário, qualquer uso do termo “alquil” abrange todas as variações e seus isômeros geométricos, como se cada grupo alquil, ou faixa de grupos alquil conforme medido por um número especificado de átomos de carbono, foi explicitamente e individualmente listada. Por exemplo, alquil C1-C8 engloba um grupo alquil C1-C6, alquil C1-C4, alquil C1-C2, metil, etil, propil, n-propil, iso-propil, n- butil, sec-butil, isobutil e terc-butil, n-pentil, secpentil, iso-pentil, neopentil, n-hexil, sec-hexil, n- heptil, n-octil, ciclohexil, (ciclohexil)metil, e (ciclopropil)metil. Em algumas modalidades, o alquil é alquil C1-C20. Em algumas modalidades, o alquil é alquil C1C4. Em algumas modalidades, o alquil é alquil C1-C4.

[015] “Alquenil” refere-se a um grupo alquil tendo uma ou mais ligações duplas carbono-carbono em substituição de uma ou mais ligações simples carbono-carbono. Exemplos de grupos alcenil incluem sem limitação etenil, propenil, butenil, 1-metil-2-buten-1-il, 1,3-butadienil, pentenil, hexenil, octenil, ciclopropenil, ciclobutenil, ciclopentenil, 1-ciclohexenil, 3-ciclohexenil e 1,3- ciclohexadienil.

[016] “Alquinil” refere-se a um grupo alquil tendo uma ou mais ligações triplas de carbono-carbono em substituição de uma ou mais ligações simples carbono- carbono. Exemplos de grupos alquinil incluem, sem limitação, etinil, 2-propinil, 1-propinil, pentinil, 2- hexinil, heptinil.

[017] “Heterocicloalquil” refere-se a um grupo alquil monocíclico, bicíclico ou policíclico tendo um ou mais heteroátomos anulares selecionados independentemente de oxigênio, nitrogênio e enxofre, em que os heteroátomos de nitrogênio e enxofre podem opcionalmente ser oxidados e o heteroátomo de nitrogênio pode opcionalmente ser quaternizado. Um grupo heterocicloalquil pode estar ligado à estrutura principal através de um carbono ou heteroátomo. Exemplos de grupos heterocicloalquil incluem, sem limitação, aziridinil, oxiranil, tiiranil, azetidinil, oxetanil, tietanil, pirrolidinil, tetrahidrofuranil, oxalanil, tiolanil, imidazolidinil, pirazolidinil, oxazolidinil, isoxazolidinil, tiazolidinil, isotiazolidinil, dioxolanil, ditiolanil, piperidinil, oxanil, tianil, piperazinil, morfolino, tiomorfolino, dioxanil, ditianil, trioxanil, 1-piperidinil, 2- piperidinil, 3-piperidinil, 4-morfolino, 3-morfolino, tetrahidrofuran-2-il, tetrahidrofuran-3-il, tetrahidrotien- 2-il, tetrahidrotien-3-il, 1-piperazinil, 2-piperazinil. Em algumas modalidades, o heterocicloalquil contém um a três heteroátomos. Em algumas modalidades, o heterocicloalquil contém um a dois heteroátomos. Em algumas modalidades, o heterocicloalquil é fundido com um grupo aril ou heteroaril. Em algumas modalidades, o heterocicloalquil representa heterocicloalquil C5-C10. Em algumas modalidades, o heterocicloalquil é heterocicloalquil C5-C6.

[018] “Heterocicloalquenil” refere-se a um grupo alquenil monocíclico, bicíclico ou policíclico tendo um ou mais heteroátomos anulares selecionados independentemente a partir do oxigênio, nitrogênio e enxofre, em que os heteroátomos de nitrogênio e enxofre podem opcionalmente ser oxidados e o heteroátomo de nitrogênio pode opcionalmente ser quaternizado. Um grupo heterocicloalquenil pode estar ligado à estrutura principal através de um carbono ou heteroátomo. Exemplos dos grupos heterocicloalquenil incluem, sem limitação, piranil, tiopiranil e tetrahidropiridil. Em algumas modalidades, o heterocicloalquenil contém um a três heteroátomos. Em algumas modalidades, o heterocicloalquil contém um a dois heteroátomos. Em algumas modalidades, o heterocicloalquenil está fundido com um grupo aril ou heteroaril. Em algumas modalidades, o heterocicloalquenil é heterocicloalquenil C5-C10. Em algumas modalidades, o heterocicloalquenil é heterocicloalquenil C5-C6.

[019] “Aril” refere-se a um grupo hidrocarboneto aromático monovalente, o qual pode ser monocíclico, bicíclico ou policíclico. Exemplos de grupos aril incluem, sem limitação fenil, naftil, indanil, indenil e tetralinil. Em algumas modalidades, o aril é um aril C5-C6. Em algumas modalidades, o grupo aril é um aril C9-C10 bicíclico. Em algumas modalidades, o aril é um aril C13-C14 tricíclico. Em algumas modalidades, o aril é fenil. Em algumas modalidades, o aril é naftil.

[020] “Heteroaril” refere-se a um grupo aril tendo um ou mais heteroátomos anulares selecionados independentemente de oxigênio, nitrogênio e enxofre. Um grupo heteroaril pode estar ligado à estrutura principal através de um carbono ou heteroátomo. Exemplos de grupos heteroaril incluem, sem limitação imidazolil, piridinil, pirrolil, indolil, tiofenil, benzopirano, tiazolil, furanil, benzimidazolil, benzoxazolil, benzotiazolil, quinolinil, isoquinolinil, quinoxalinil, pirimidinil, pirazinil, tetrazolil e pirazolil. Em algumas modalidades, o heteroaril é heteroaril C5-C6. Em algumas modalidades, o heteroaril é um heteroaril C9-C10 bicíclico. Em algumas modalidades, o heteroaril é um heteroaril C13-C14 tricíclico. Em algumas modalidades, o heteroaril é piridinil.

[021] “Alcóxi” refere-se a um grupo alquil que está ligado à estrutura principal através de um átomo de oxigênio (-O-alquil). Exemplos de grupos alcóxi incluem, sem limitação, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, ciclopropilóxi e ciclohexilóxi.

[022] “Farmaceuticamente aceitável” refere-se àquelas propriedades e/ou substâncias que são aceitáveis para o paciente de um ponto de vista farmacológico e/ou toxicológico, e/ou para a fabricação de químico farmacêutico de um ponto vista físico e/ou de químico em relação à composição, formulação, estabilidade, aceitação do paciente, a biodisponibilidade e compatibilidade com outros ingredientes.

[023] “Sal farmaceuticamente aceitável” refere-se aos sais farmaceuticamente aceitáveis de um composto aqui descrito, tal como um composto de fórmula (I), (Ia) ou (II) ou outros doadores de nitroxil, os quais os sais podem ser derivados de uma variedade de contra íons orgânicos e inorgânicos bem conhecidos na técnica e inclui, a título de exemplo, sódio, potássio, cálcio, magnésio, amônio, tetraalquilamônio, e similares; quando a molécula contém uma funcionalidade básica, sais de ácidos orgânicos ou inorgânicos, tais como cloridrato, bromidrato, tartrato, mesilato, acetato, maleato, oxalato e similares. Sais ilustrativos incluem, mas não se limitam, sais de sulfato, citrato, acetato, cloreto, brometo, iodeto, nitrato, bissulfato, fosfato, fosfato ácido, lactato, salicilato, citrato ácido, tartarato, oleato, tanato, pantotenato, bitartarato, ascorbato, succinato, maleato, besilato, fumarato, gluconato, glucaronato, sacarato, formato, benzoato, glutamato, metanossulfonato, etanossulfonato, benzenossulfonato, e p-toluenossulfonato. Deste modo, um sal pode ser preparado a partir de um composto de qualquer uma das fórmulas aqui descritas tendo um grupo funcional acídico, tal como um grupo funcional de ácido carboxílico, e uma base inorgânica ou orgânica farmaceuticamente aceitável. As bases adequadas incluem, mas não estão limitados aos, hidróxidos de metais alcalinos, tais como sódio, potássio e lítio; hidróxidos de metais alcalinos terrosos, tais como cálcio e magnésio; hidróxidos de outros metais, tais como alumínio e zinco; amônia, e aminas orgânicas, tais como mono-, di-, ou trialquilaminas não substituídas ou substituídas por hidróxi; diciclohexilamina; tributil amina; piridina; N-metil,N- etilamina; dietilamina; trietilamina; mono-, bis-, ou tris- (2-hidróxi-alquil amina inferior), tais como mono-, bis-, ou tris-(2-hidroxietil)amina, 2-hidróxi-terc-butilamina, ou tris-(hidroximetil)metilamina, N,N-di-alquil inferior-N- (hidróxi alquil inferior)-aminas, tais como o N,N-dimetil- N-(2-hidroxietil)amina, ou tri-(2-hidroxietil)amina; N- metil-D-glucamina; e aminoácidos tais como arginina, lisina, e similares. Um sal pode também ser preparado a partir de um composto de qualquer uma das fórmulas aqui descritas tendo um grupo básico funcional, tal como um grupo funcional amino, e um ácido inorgânico ou orgânico farmaceuticamente aceitável. Os ácidos adequados incluem o sulfato de hidrogênio, ácido cítrico, ácido acético, ácido clorídrico (HCl), brometo de hidrogênio (HBr), iodeto de hidrogênio (HI), ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido lático, ácido salicílico, ácido tartárico, ácido ascórbico, ácido succínico, ácido maléico, ácido besílico, ácido fumárico, ácido glucônico, ácido glucarônico, ácido fórmico, ácido benzóico, ácido glutâmico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido benzenossulfônico, e ácido p-toluenossulfônico.

[024] “Excipiente farmaceuticamente aceitável” refere-se a qualquer substância, um agente terapêutico diferente desta, usada como um veículo, diluente, adjuvante, ligante, e/ou veículo para entrega de um agente terapêutico a um paciente, ou adicionada a uma composição farmacêutica para melhorar suas propriedades de manuseamento ou de armazenamento ou para permitir ou facilitar a formação de um composto ou composição em uma forma de dosagem de unidade para administração. Os excipientes farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica farmacêutica e estão descritos, por exemplo, em Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa (por exemplo, 20a Ed., 2000), e Handbook of Pharmaceutical Excipients, American Pharmaceutical Association, Washington, DC, (por exemplo, 1°, 2° e 3° Eds., 1986, 1994, 2000, respectivamente). Como será do conhecimento dos peritos na técnica, excipientes farmaceuticamente aceitáveis podem proporcionar uma variedade de funções e podem ser descritos como agentes de umidificação, agentes tamponantes, agentes de suspensão, agentes lubrificantes, emulsificantes, desintegrantes, absorventes, conservantes, tensoativos, corantes, aromatizantes e adoçantes. Exemplos de excipientes farmaceuticamente aceitáveis incluem, sem limitação: (1) açúcares, tais como lactose, glucose e sacarose; (2) amidos, tais como amido de milho e amido de batata; (3) celulose e seus derivados, tais como sais carboximetil celulose de sódio, etil celulose, acetato de celulose, hidroxipropilmetilcelulose, e hidroxipropilcelulose; (4) tragacanto em pó; (5) malte; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tais como manteiga de cacau e ceras para supositório; (9) óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de cártamo, óleo de sésamo, óleo de oliva, óleo de milho e óleo de soja; (10) glicóis, tais como propileno glicol; (11) polióis, tais como glicerina, sorbitol, manitol e polietileno glicol; (12) ésteres, tais como oleato de etil e laurato de etil; (13) ágar; (14) agentes de tamponamento, tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; (15) ácido algínico; (16) água isenta de pirógeno; (17) solução salina isotônica; (18) solução de Ringer; (19) álcool etílico; (20) soluções de pH tamponado; (21) poliésteres, policarbonatos e/ou polianidridos; e (22) outras substâncias compatíveis não tóxicas empregadas em formulações farmacêuticas.

[025] “Forma de dosagem unitária” refere-se a uma unidade fisicamente discreta adequada como dosagem unitária para pacientes humanos ou outros animais. Cada forma de dosagem unitária pode conter uma quantidade predeterminada de uma substância ativa (por exemplo, um composto de fórmula (I), (Ia) ou (II)), calculada para produzir o efeito desejado.

[026] A menos que expressamente indicado de outra forma, “indivíduo” ou “paciente” refere-se a um animal, tal como um mamífero, incluindo, mas não se limitando, a um ser humano. Assim, os métodos aqui descritos podem ser úteis na terapia humana e aplicações veterinárias. Em algumas modalidades, o indivíduo ou o paciente é um mamífero. Em algumas modalidades, o indivíduo ou o paciente é um ser humano.

[027] “Quantidade eficaz” refere-se a tal quantidade de um composto ou de um sal farmaceuticamente aceitável deste, o qual em combinação com os seus parâmetros de eficácia e toxicidade, bem como com base no conhecimento do especialista praticante deve ser eficaz para uma dada forma terapêutica. Tal como é entendido na técnica, uma quantidade eficaz pode ser em uma ou mais doses.

[028] “Tratamento” ou “tratar” é uma abordagem para a obtenção de um resultado benéfico ou desejado, incluindo os resultados clínicos. Para os fins dessa invenção, resultados benéficos ou desejados incluem, mas não estão limitados à inibição e/ou supressão do aparecimento e/ou do desenvolvimento de uma doença ou condição ou redução da gravidade de tal doença ou condição, tal como a redução do número e/ou severidade dos sintomas associados com a doença ou condição, o aumento da qualidade de vida daqueles que sofrem da doença ou condição, a diminuição da dose de outros medicamentos necessários para tratar a doença ou condição, aumentando o efeito de outra medicação que um indivíduo está tomando para a doença ou a condição, e prolongando a sobrevivência de indivíduos tendo a doença ou condição.

[029] “Prevenir” refere-se a reduzir a probabilidade de desenvolvimento de um distúrbio ou condição em um indivíduo que não tem, mas está em risco de desenvolver uma doença ou condição. Um indivíduo “em risco” pode ou não pode ter uma doença detectável ou condição, e pode ou não ter apresentado uma doença detectável ou condição prévia para os métodos de tratamento aqui descritos. “Em risco” significa que um indivíduo tem ou mais dos chamados fatores de risco, os quais são parâmetros mensuráveis que se correlacionam com o desenvolvimento de uma doença ou condição e são conhecidos na técnica. Um indivíduo tendo um ou mais destes fatores de risco tem uma maior probabilidade de desenvolver a doença ou condição do que um indivíduo sem esse(s) fator(es) de risco.

[030] "Nitroxil" refere-se à espécie de HNO.

[031] “O doador de nitroxil” ou “doador de HNO” refere-se a um composto que doa nitroxil sob condições fisiológicas. Como aqui usado, os doadores de nitroxil podem, alternativamente, ser referidos como “um composto” ou “o composto”. Em algumas modalidades, o doador de nitroxil é capaz de doar uma quantidade eficaz de nitroxil in vivo e tem um perfil de segurança indicando que o composto pode ser tolerado por um indivíduo na quantidade necessária para atingir um efeito terapêutico. Um perito na técnica seria capaz de determinar a segurança da administração de compostos e dosagens particulares para viver sujeitos. Um perito na técnica pode também determinar se um composto é um doador de nitroxil, avaliando se libera HNO sob condições fisiológicas. Os compostos são facilmente testados para doação de nitroxil com experimentos de rotina. Embora seja impraticável para medir diretamente se nitroxil é doado, vários testes são aceitos para determinar se um composto doa nitroxil. Por exemplo, o composto de interesse pode ser colocado em solução, por exemplo, em solução salina de tampão de fosfato (PBS) ou solução de tampão de fosfato em um pH de cerca de 7,4 , em um recipiente fechado. Após um tempo suficiente para a dissociação ter decorrido, tal como desde alguns minutos a várias horas, o gás do espaço interno é retirado e analisado para determinar a sua composição, tal como por cromatografia de gás e/ou espectroscopia de massa. Se o gás de N2O é formado (o que ocorre por dimerização de HNO), o teste é positivo para a doação de nitroxil e o composto é um doador de nitroxil. O nível de capacidade de doar nitroxil pode ser expresso como uma percentagem de um máximo teórico do composto. Um composto que doa um “nível significativo de nitroxil” pretende significar um composto que doa 40% ou mais ou 50% ou mais da sua quantidade máxima teórica de nitroxil. Em algumas modalidades, os compostos aqui doam 60% ou mais da quantidade máxima teórica de nitroxil. Em algumas modalidades, os compostos aqui doam 70% ou mais da quantidade máxima teórica de nitroxil. Em algumas modalidades, os compostos aqui doam 80% ou mais da quantidade máxima teórica do nitroxil. Em algumas modalidades, os compostos aqui doam 90% ou mais da quantidade máxima teórica de nitroxil. Em algumas modalidades, os compostos aqui doam entre cerca de 70% e cerca de 90% do valor teórico máximo de nitroxil. Em algumas modalidades, os compostos aqui doam entre cerca de 85% e cerca de 95% do valor teórico máximo de nitroxil. Em algumas modalidades, os compostos aqui doam entre cerca de 90% e cerca de 95% do valor teórico máximo de nitroxil. Os compostos que doam menos de 40% ou menos do que 50% do seu valor teórico de nitroxil ainda são doadores de nitroxil e podem ser usados nos métodos descritos. Um composto que doa menos do que 50% da quantidade teórica de nitroxil pode ser usado nos métodos descritos, e pode requerer níveis de dosagem mais elevados em comparação com os compostos que doam um nível significativo de nitroxil. Doação de nitroxil pode também ser detectada através da exposição do composto de teste para metamioglobina (Mb3+). Nitroxil reage com Mb3+ para formar um complexo de Mb2+-NO, o qual pode ser detectado por alterações no espectro de ultravioleta/visível ou por Ressonância paramagnética de Elétron (EPR). O complexo Mb2+-NO tem um sinal EPR em torno de um valor g de cerca de 2. Óxido nítrico, por outro lado, reage com Mb para formar um complexo Mb3+-NO que é ausente de EPR. Consequentemente, se o composto candidato reage com MB+3 para formar um complexo detectável por métodos comuns, tais como raios ultravioleta/visível ou EPR, então o teste é positivo para a doação de nitroxil. Teste para a doação de nitroxil pode ser realizado em um pH fisiologicamente relevante.

[032] “Inotrópico positivo” refere-se a um agente que provoca um aumento na função contrátil do miocárdio. Tal agente inclui um agonista beta-adrenérgico, um inibidor da atividade de fosfodiesterase, e sensibilizadores de cálcio. Agonistas do receptor beta-adrenérgico incluem, entre outros, dopamina, dobutamina, terbutalina, e isoproterenol. Análogos e derivados desses compostos também são pretendidos. Por exemplo, a Patente Americana US No. 4,663,351 descreve um pró-fármaco de dobutamina que pode ser administrado por via oral. Um perito na técnica seria capaz de determinar se um composto é capaz de provocar efeitos inotrópicos positivos e também compostos beta- agonistas adicionais. Em modalidades particulares, o agonista do beta-receptor é seletivo para o beta-1 receptor. Em outras modalidades, o beta-agonista é seletivo para o beta-2 receptor, ou não é seletivo para qualquer receptor específico.

[033] As doenças ou condições que são “responsivas à terapia de nitroxil” inclui qualquer doença ou condição em que a administração de um composto que doa uma quantidade eficaz de nitroxil sob condições fisiológicas trata e/ou previne a doença ou a condição, como esses termos são aqui definidos. Uma doença ou uma condição cujos sintomas são suprimidos ou diminuídos com a administração do doador de nitroxil é uma doença ou condição responsiva à terapia de nitroxil. Exemplos não limitantes das doenças ou condições que são responsivas à terapia de nitroxil incluem obstruções coronárias, doença arterial coronariana (DAC), angina, ataque cardíaco, infarto do miocárdio, hipertensão sanguínea, cardiomiopatia isquêmica e infarto, insuficiência cardíaca diastólica, congestão pulmonar, edema pulmonar, fibrose cardíaca, doença valvular do coração, doença do pericárdio, estados de congestão circulatória, edema periférico, ascite, doença de Chagas, hipertrofia ventricular, doença valvular do coração, insuficiência cardíaca, incluindo, mas não limitados à insuficiência cardíaca congestiva, tais como insuficiência cardíaca congestiva aguda e insuficiência cardíaca descompensada aguda. Outras doenças ou condições cardiovasculares são também pretendidas, como são as doenças ou condições que implicam a lesão de isquemia/reperfusão. O câncer é outro exemplo de doença ou condição que é responsiva para terapia de nitroxil.

[034] “Hipertensão pulmonar” ou “PH” refere-se a uma condição em que a pressão da artéria pulmonar é elevada. A definição hemodinâmica atual de PH é uma pressão arterial pulmonar média (MPAP) em repouso maior do que ou igual a 25 mm Hg.1 Exemplos de PH incluem, mas não estão limitadas às condições listadas na classificação atualizada de PH (Tabela 1).2

[035] 1 Badesch D. et al. Diagnosis and assessment of pulmonar arterial hypertension. J Am Coll Cardiol 2009; 54 (Suppl.): S55-S66.

[036] 2 Simonneau G. et al. Updated clinical classification of pulmonar hypertesion. J Am Coll Cardiol 2009; 54 (1 Suppl): S43-54. Tabela 1. Classificação da hipertensão pulmonar (PH)

[037] O objeto revelado proporciona certos compostos derivados de hidroxilamina N-substituídas, métodos de utilização de tais compostos, e composições farmacêuticas e kits compreendendo esses compostos. Compostos Derivados de Hidroxilamina N-Substituída

[038] Em algumas modalidades, a matéria revelada proporciona um composto de fórmula (I) ou (II)

[039] ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste, em que:

[040] X e Z são independentemente selecionados a partir de -O-, -NR3-, -S-, -CR3-, e -CR3R4-;

[041] Y é selecionado a partir de -C(=O)-, -C(=S)- , -C(=NR5)-, e -CR5R6-;

[042] R é selecionado a partir de alquil C1-C8, alquenil C2-C8, alquinil C2-C8, alcóxi C1-C8, aril C5-C10, - 7 7 78 78 C(=O)R , -C(=S)R , -C(=NR )R , e -C(=NOR)R , em que o alquil, alquenil, alquinil, alcóxi e aril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes;

[043] R1 é selecionado a partir de -H, alquil C1 C8, alquenil C2-C8, alquinil C2-C8, aril C5-C10, heterocicloalquil C5-C10, heterocicloalquenil C5-C10, e heteroaril C5-C10, em que o alquil, alquenil, alquinil, aril, heterocicloalquil, heterocicloalquenil e heteroaril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes; e

[044] R2, R3, R4, R5, R6, R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de -H, alquil C1-C8, alquenil C2C8, alquinil C2-C8, aril C5-C10, heterocicloalquil C5-C10, heterocicloalquenil C5-C10, heteroaril C5-C10, em que o alquil, alquenil, alquinil, aril, heterocicloalquil, heterocicloalquenil e heteroaril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes.

[045] Exemplos de substituintes incluem, sem limitação, halo (flúor, cloro, bromo ou iodo), hidroxila (OH), amino(-NH2), ciano(-C=N), nitro(-NO2), mercapto (-SH), oxo(=O), tioxo(=S), imino(-N-alquil), alquil, alquenil, alquinil, alcóxi, alquenilóxi, alquinilóxi, aril, heteroaril, heterocicloalquil, heterocicloalquenil, formil(-C(=O)H), carbamoil(-C(=O)NH2), carboxil(-C(O)OH), ureído(-NH-C(=O)-NH2), tioureído(-NH-C(=S)-NH2), tiocianato(-SC=N), sulfonamido(-SO2NH2), -COR', -C(O)OR', - C(O)NHR', -C(O)NR'R", -NHR', -NR'R", -SR', -SOR', -SO2R', e -OR', em que R' e R" são independentemente selecionados a partir de alquil, alquenil, alquinil, aril, heteroaril, heterocicloalquil e heterocicloalquenil, e em que o alquil, alquenil, alquinil, aril, heteroaril, heterocicloalquil e heterocicloalquenil são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes. Os compostos de Fórmula (I)

[046] Em algumas modalidades, a matéria revelada proporciona um composto de fórmula (I) HO NH R

[047] ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um hidrato deste, em que:

[048] X e Z são independentemente selecionados a partir de -O-, -NR3-, -S-, -CR3-, e -CR3R4-;

[049] Y é selecionado a partir de -C(=O)-, -C(=S)- , -C(=NR5)-, e -CR5R6-;

[050] R é alquil C1-C8, alquenil C2-C8, alquinil C2-C8, alcóxi C1-C8, aril C5-C10, -C(=O)R7, -C(=S)R7, - C(=NR7)R8, e -C(=NOR7)R8, em que o alquil, alquenil, alquinil, alcóxi e aril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes; e

[051] R3, R4, R5, R6, R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de -H, alquil C1-C8, alquenil C2C8, alquinil C2-C8, aril C5-C10, heterocicloalquil C5-C10, heterocicloalquenil C5-C10, heteroaril C5-C10, em que o alquil, alquenil, alquinil, aril, heterocicloalquil, heterocicloalquenil e heteroaril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes.

[052] Em algumas modalidades, pelo menos um de X e Z é -O-. Em algumas modalidades, pelo menos um de X e Z é - NR3-. Em algumas modalidades, pelo menos um de X e Z é - CR3-. Em algumas modalidades, pelo menos um de X e Z é - CR3R4-.

[053] Em algumas modalidades, X e Z são a mesma porção. Em algumas modalidades, X e Z são cada um -O-. Em algumas modalidades, X e Z são independentemente -NR3-. Em algumas modalidades, X e Z são cada um -NR3-; e R3 é -H. Em algumas modalidades, X e Z são, independentemente,-NR3-; e R3 é alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, X e Z são independentemente -NR3-; e R3 é alquil C1-C8. Em algumas modalidades, X e Z são independentemente -NR3-; e R3 é alquil C1-C8. Em algumas modalidades, X e Z são independentemente -NR3-; e R3 é metil. Em algumas modalidades, X e Z são independentemente -CR3-. Em algumas modalidades, X e Z são cada um -CR3-; e R3 é -H. Em algumas modalidades, X e Z são independentemente - CR3-; e R3 é alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, X e Z são independentemente -CR3-; e R3 é alquil C1-C8. Em algumas modalidades, X e Z são independentemente -CR3-; e R3 é aril C5-C10, em que o aril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, X e Z são independentemente -CR3-; e R3 é fenil ou naftil, em que o fenil ou naftil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, X e Z são independentemente -CR3R4-. Em algumas modalidades, X e Z são independentemente -CR3R4-; e R3 e R4 são selecionados independentemente a partir de -H, alquil C1-C8 e aril C5-C10, em que o alquil e aril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes.

[054] Em algumas modalidades, Y é -C(=O)-. Em algumas modalidades, Y é -C(=S)-. Em algumas modalidades, Y é -C(=NR5)-. Em algumas modalidades, Y é -C(=NR5)-; e R5 é selecionado a partir de -H e alquil C1-C8. Em algumas modalidades, Y é -CR5R6-. Em algumas modalidades, Y é - CR5R6-; e R5 e R6 são selecionados independentemente a partir de -H e alquil C1-C8. Em algumas modalidades, Y é - CR5R6-; e pelo menos um de R5 e R6 é alquil C1-C8. Em algumas modalidades, Y é -CR5R6-; e R5 e R6 são, independentemente, alquil C1-C8. Em algumas modalidades, Y é -CR5R6-; e pelo menos um de R5 e R6 é alquil C1-C4. Em algumas modalidades, Y é - CR5R6-; e R5 e R6 são, independentemente, alquil C1-C4. Em algumas modalidades, Y é -CR3R4-; e pelo menos um de R3 e R4 é um metil. Em algumas modalidades, Y é -CR3R4-; e R3 e R4 são cada um metil.

[055] Em algumas modalidades, R é alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é alquil C1C8. Em algumas modalidades, R é um alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R é metil ou etil. Em algumas modalidades, R é metil. Em algumas modalidades, R é etil. Em algumas modalidades, R é trifluorometil. Em algumas modalidades, R é alcóxi C1-C8, em que o alcóxi é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é aril C5-C10, em que o aril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é fenil ou naftil, em que fenil e naftil são não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é -C(=O)R7. Em algumas modalidades, R é -C(=O)R7; e R7 é -H. Em algumas modalidades, R é -C(=O)R7; e R7 é alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R é C-R(=S)7. Em algumas modalidades, R é - C(=S)R7; e R7 é -H. Em algumas modalidades, R é -C(=S)R7; e R7 é alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R é -C(=NR7)R8. Em algumas modalidades, R é -C(=NR7)R8; e R7 e R8 são independentemente selecionados a partir de -H e alquil C1C8. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; e R7 e R8 são independentemente selecionados a partir de -H e alquil C1C8. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; e R7 e R8 são selecionados independentemente de alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8 e R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8 e R7 e R8 são cada um metil.

[056] Em algumas modalidades, R é alquil C1-C8; e X e Z são cada um -O-. Em algumas modalidades, R é alquil C1-C8; e Y é -CR5R6-. Em algumas modalidades, R é alquil C1C8; X e Z são cada um -O-; e Y é -CR5R6-. Em algumas modalidades, R é um alquil C1-C4; X e Z são cada um -O-; Y é -CR5R6-; e R5 e R6 são, independentemente, alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R é metil; X e Z são cada um -O-; Y é -CR5R6-. Em algumas modalidades, R é um alquil C1-C4; X e Z são cada um -O-; Y é -CR5R6-; e R5 e R6 são cada um metil.

[057] Em algumas modalidades, R é alquil C1-C8; e X e Z são independentemente -NR3-. Em algumas modalidades, R é alquil C1-C8; e Y é -C(=O)-. Em algumas modalidades, R é alquil C1-C8; X e Z são independentemente -NR3-; e Y é - C(=O)-. Em algumas modalidades, R é alquil C1-C8; X e Z são independentemente -NR3-; R3 é alquil C1-C8; e Y é -C(=O)-. Em algumas modalidades, R é alquil C1-C4; X e Z são independentemente -NR3-; R3 é alquil C1-C4; e Y é -C(=O)-. Em algumas modalidades, R é etil; X e Z são independentemente -NR3-; R3 é alquil C1-C4; e Y é -C(=O)-. Em algumas modalidades, R é um alquil C1-C4; X e Z são cada um -NCH3; e Y é -C(=O)-.

[058] Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; e X e Z são cada um -O-. Em algumas modalidades, R é - C(=NOR7)R8; e Y é -CR5R6-. Em algumas modalidades, R é - C(=NOR7)R8; X e Z são cada um -O-; e Y é -CR5R6-. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; R7 e R8 são independentemente alquil C1-C4; X e Z são cada um -O-; Y é -CR5R6-; e R5 e R6 são independentemente alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; R7 e R8 são cada um metil; X e Z são cada um -O-; Y é -CR5R6-; e R5 e R6 são independentemente alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; R7 e R8 são independentemente alquil C1-C4; X e Z são cada um -O-; Y é -CR5R6-; e R5 e R6 são cada um metil.

[059] Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; e X e Z são independentemente -NR3-. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; e Y é -C(=O)-. Em algumas modalidades, R é - C(=NOR7)R8; X e Z são independentemente -NR3-; R3 é alquil C1-C8; e Y é -C(=O)-. Em algumas modalidades, R é - C(=NOR7)R8; R7 e R8 são independentemente alquil C1-C4; X e Z são independentemente -NR3-; R3 é alquil C1-C4; e Y é - C(=O)-. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; R7 e R8 são cada um metil; X e Z são independentemente -NR3-; R3 é um alquil C1-C4; e Y é -C(=O)-. Em algumas modalidades, R é - C(=NOR7)R8; R7 e R8 são independentemente alquil C1-C4; X e Z são cada um -N(CH3)-; e Y é -C(=O)-.

[060] Os compostos representativos de fórmula I incluem sem limitação os compostos listados na Tabela 2. Tabela 2. Compostos representativos de fórmula (I)

[061] Em algumas modalidades, o composto é

[062] Em algumas modalidades, o composto é

Compostos de Fórmula (II)

[063] Em algumas modalidades, a matéria revelada proporciona um composto de fórmula (II)

[064] ou um sal farmaceuticamente aceitável deste ou um hidrato deste, em que:

[065] R é alquil C1-C8, alquenil C2-C8, alquinil C2-C8, alcóxi C1-C8, aril C5-C10, -C(=O)R7, -C(=S)R7, - C(=NR7)R8, e -C(=NOR7)R8, em que o alquil, alquenil, alquinil, alcóxi e aril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes;

[066] R1 é selecionado a partir de -H, alquil C1 C8, alquenil C2-C8, alquinil C2-C8, aril C5-C10, heterocicloalquil C5-C10, heterocicloalquenil C5-C10, e heteroaril C5-C10, em que o alquil, alquenil, alquinil, aril, heterocicloalquil, heterocicloalquenil e heteroaril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes; e

[067] R2, R7 e R8 são independentemente selecionados a partir de -H, alquil C1-C8, alquenil C2-C8, alquinil C2-C8, aril C5-C10, heterocicloalquil C5-C10, heterocicloalquenil C5-C10, heteroaril C5-C10, em que o alquil, alquenil, alquinil, aril, heterocicloalquil, heterocicloalquenil e heteroaril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes.

[068] Em algumas modalidades, R é alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é alquil C1C4. Em algumas modalidades, R é um alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R é metil. Em algumas modalidades, R é trifluorometil. Em algumas modalidades, R é alcóxi C1-C8, em que o alcóxi é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é aril C5-C10, em que o aril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é fenil ou naftil, em que fenil e naftil são não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de flúor, cloro, bromo e iodo. Em algumas modalidades, R é fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R é fenil. Em algumas modalidades, R é fenil substituído com cloro. Em algumas modalidades, R é o-clorofenil. Em algumas modalidades, R é m-clorofenil. Em algumas modalidades, R é p-clorofenil. Em algumas modalidades, R é -C(=O)R7. Em algumas modalidades, R é - C(=O)R7; e R7 é -H. Em algumas modalidades , R é -C(=O)R7; e R7 é alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R é -C(=S)R7. Em algumas modalidades, R é -C(=S)R7; e R7 é -H. Em algumas modalidades, R é -C(=S)R7; e R7 é alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R é -C(=NR7)R8. Em algumas modalidades, R é - C(=NR7)R8; e R7 e R8 são independentemente selecionados a partir de -H e alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R é - C(=NOR7)R8. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; e R7 e R8 são independentemente selecionados a partir de -H e alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; e pelo menos um de R7 e R8 é alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; e R7 e R8 são independentemente selecionados a partir de alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; e R7 e R8 são independentemente selecionados de alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; e pelo menos um de R7 e R8 é metil. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR7)R8; e R7 e R8 são cada um metil. Em algumas modalidades, R é alquenil C2C8, em que o alquenil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é alquinil C2-C8, em que o alquinil não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é alcóxi C1-C8, em que o alcóxi é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é aril C5-C10, em que o aril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é fenil ou naftil, em que fenil e naftil são não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é -C(=O)R7. Em algumas modalidades, R é -C(=S)R7. Em algumas modalidades, R é -C(=NR7)R8. Em algumas modalidades, R é -C(=O)R7, - C(=S)R7 ou -C(=NR7)R8, em que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de -H e alquil C1-C8.

[069] Em algumas modalidades, R1 é -H. Em algumas modalidades, R1 é alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R1 é alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de flúor, cloro, bromo e iodo. Em algumas modalidades, R1 é alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R1 é alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R1 é metil. Em algumas modalidades, R1 é alquenil C2-C8, em que o alquenil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R1 é alquinil C2-C8, em que o alquinil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R1 é aril C5-C10, em que o aril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R1 é aril C5-C10, em que o aril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de flúor, cloro, bromo e iodo. Em algumas modalidades, R1 é fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de flúor, cloro, bromo e iodo. Em algumas modalidades, R1 é fenil. Em algumas modalidades, R1 é fenil substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de flúor, cloro, bromo e iodo. Em algumas modalidades, R1 é fenil substituído com cloro. Em algumas modalidades, R1 é heterocicloalquil C5-C10, em que o heterocicloalquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R1 é heterocicloalquenil C5-C10, em que o heterocicloalquenil não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R1 é heteroaril C5-C10, em que o heteroaril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R1 é piridinil, em que o piridinil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R1 é piridinil.

[070] Em algumas modalidades, R2 é -H. Em algumas modalidades, R2 é alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R2 é alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R2 é um alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R2 é metil. Em algumas modalidades, R2 é alquenil, em que o alquenil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R2 é alquinil C2-C8, em que o alquinil não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R2 é aril C5C10, em que o aril não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R2 é heterocicloalquil C5-C10, em que o heterocicloalquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R2 é heterocicloalquenil C5-C10, em que o heterocicloalquenil não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R2 é heteroaril C5-C10, em que o heteroaril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes.

[071] Em algumas modalidades, R é um grupo alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes; e R1 é -H. Em algumas modalidades, R é alquil C1-C8; e R1 é -H. Em algumas modalidades, R é um alquil C1-C4; e R1 é -H. Em algumas modalidades, R é metil; e R1 é -H.

[072] Em algumas modalidades, R e R1 são independentemente alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R e R1 são independentemente alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R e R1 são independentemente alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R é um alquil C1-C4; e R1 é metil. Em algumas modalidades, R é metil; e R1 é alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R e R1 são cada um metil.

[073] Em algumas modalidades, R é alquil C1-C8; e R1 é aril C5-C10, em que o alquil e o aril são independentemente não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é alquil C1- C8; e R1 é aril C5-C10, em que o aril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de flúor, cloro, bromo e iodo. Em algumas modalidades, R é alquil C1-C8; e R1 é um fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de flúor, cloro, bromo e iodo. Em algumas modalidades, R é alquil C1-C8; e R1 representa um grupo fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com cloro. Em algumas modalidades, R é metil; e R1 é um fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com cloro. Em algumas modalidades, R é um alquil C1-C4; e R1 é fenil. Em algumas modalidades, R é metil; e R1 é fenil. Em algumas modalidades, R é um alquil C1-C4; e R1 é o-clorofenil, m- clorofenil ou p-clorofenil. Em algumas modalidades, R é metil; e R1 é o-clorofenil, m-clorofenil ou p-clorofenil. Em algumas modalidades, R é metil e R1 é o-clorofenil. Em algumas modalidades, R é metil e R1 é o-clorofenil. Em algumas modalidades, R é metil e R1 é o m-clorofenil. Em algumas modalidades, R é metil e R1 é p-clorofenil.

[074] Em algumas modalidades, R e R2 são independentemente alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes; e R1 é -H ou alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R e R2 são, independentemente alquil C1-C8; e R1 é -H ou alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R e R2 são, independentemente alquil C1-C4; e R1 é -H. Em algumas modalidades, R é metil; R1 é -H; e R2 é alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R é um alquil C1-C4; R1 é -H; e R2 é metil. Em algumas modalidades, R, R1 e R2 são independentemente alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R, R1 e R2 são independentemente alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R, R1 e R2 são independentemente alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R, R1 e R2 são independentemente alquil C1-C4; e pelo menos um de R, R1 e R2 é metil. Em algumas modalidades, R e R1 são independentemente alquil C1-C4; e R2 é metil. Em algumas modalidades, R é alquil C1-C4; e R1 e R2 são cada um metil. Em algumas modalidades, R, R1 e R2 são cada um metil.

[075] Em algumas modalidades, R e R2 são independentemente alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes; e R1 é aquil C5-C10, em que o aril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R e R2 são independentemente alquil C1-C8; e R1 é aril C5-C10, em que o aril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R e R2 são independentemente alquil C1-C8; e R1 é um grupo fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R e R2 são independentemente alquil C1-C8; e R1 é fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de flúor, cloro, bromo e iodo. Em algumas modalidades, R e R2 são independentemente alquil C1-C8; e R1 é fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R e R2 são independentemente alquilo C1-C4; e R1 é um grupo fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com cloro. Em algumas modalidades, R e R2 são cada um metil; e R1 é fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com cloro. Em algumas modalidades, R é aquilo C1-C4; e R1 é fenil. Em algumas modalidades, R e R2 são cada um metil; e R1 é fenil. Em algumas modalidades, R e R2 são independentemente alquil C1-C4; e R1 é o-clorofenil, m- clorofenil ou p-clorofenil. Em algumas modalidades, R e R2 são cada um metil; e R1 é o-clorofenil, m-clorofenil ou p- clorofenil. Em algumas modalidades, R e R2 são cada um metil e R1 é o-clorofenil. Em algumas modalidades, R e R2 são cada um metil e R1 é o-clorofenil. Em algumas modalidades, R e R2 são cada um metil e R1 é m-clorofenil. Em algumas modalidades, R e R2 são cada um metil e R1 é p- clorofenil.

[076] Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; e R1 e R2 são, independentemente, alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; e R1 e R2 são independentemente alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; R1, R2, R5 e R6 são independentemente alquil C1-C8. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; e R1, R2, R5 e R6 são independentemente alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; R5 e R6 são independentemente alquil C1-C4; e R1 e R2 são cada um metil. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; R5 e R6 são cada um metil; e R1 e R2 são independentemente alquil C1-C4. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; e R1, R2, R5 e R6 são cada um metil.

[077] Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; R1 éaril C5-C10, em que o aril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes; e R2 é alquil C1-C8, em que o alquil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; R5 e R6 são independentemente alquil C1-C8; R1 é aril C5-C10; e R2 é alquil C1-C8, em que o alquil e aril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; R2, R5 e R6 são independentemente alquil C1-C8; e R1 é aril C5-C10, em que o aril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; R2, R5 e R6 são independentemente alquil C1-C4; e R1 é aril C5- C10, em que o aril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é - C(=NOR5)R6; R2, R5 e R6 são, independentemente, alquil C1-C4; e R1 representa um grupo fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; R2, R5 e R6 são independentemente alquil C1-C4; e R1 é fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de flúor, cloro, bromo e iodo. Em algumas modalidades, R é - C(=NOR5)R6; R2, R5 e R6 são cada um metil; e R1 é fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de flúor, cloro, bromo e iodo. Em algumas modalidades, R é - C(=NOR5)R6; R2, R5 e R6 são cada um metil; e R1 representa um grupo fenil, em que o fenil é não substituído ou substituído com flúor, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; R2, R5 e R6 são cada um metil; e R1 é fenil ou clorofenil. Em algumas modalidades, R é - C(=NOR5)R6; R2, R5 e R6 são independentemente alquil C1-C4; e R1 é fenil. Em algumas modalidades, R é -C(=NOR5)R6; R2, R5 e R6 são, independentemente, alquil C1-C4; e R1 é oclorofenil, m-clorofenil ou p-clorofenil.

[078] Os compostos representativos de fórmula II incluem, sem limitação, os compostos listados na Tabela 3. Tabela 3. Compostos representativos de fórmula II

[079] Em algumas modalidades, o composto é

[080] Em algumas modalidades, o composto é um composto que doa nitroxil sob condições fisiológicas, como em um pH de 7,4 e/ou em uma temperatura de 37°C. Em algumas modalidades, o composto é um composto que doa 40% ou mais da sua quantidade máxima teórica de nitroxil sob condições fisiológicas. Em algumas modalidades, o composto é um composto que doa 50% ou mais da quantidade máxima teórica de nitroxil sob condições fisiológicas. Em algumas modalidades, o composto é um composto que doa 60% ou mais da quantidade máxima teórica de nitroxil sob condições fisiológicas. Em algumas modalidades, o composto é um composto que doa 70% ou mais da quantidade máxima teórica de nitroxil sob condições fisiológicas. Em algumas modalidades, o composto é um composto que doa 80% ou mais da quantidade máxima teórica de nitroxil sob condições fisiológicas. Em algumas modalidades, o composto é um composto que doa 90% ou mais da quantidade máxima teórica de nitroxil sob condições fisiológicas.

[081] Para todos os compostos aqui divulgados, onde aplicável devido à presença de um estereocentro, o composto se destina a abranger todos os estereoisômeros possíveis dos compostos representados ou descritos. As composições compreendendo um composto com pelo menos um estereocentro são também abrangidos pela matéria divulgada, e incluem misturas racêmicas ou misturas contendo um excesso de enantiomérico de um enântiomero ou diastereômeros individuais ou misturas diastereoméricas. Todas essas formas isoméricas desses compostos estão expressamente incluídas aqui o mesmo como se cada uma e todas as formas isoméricas foram listadas especificamente e individualmente. Os compostos aqui também podem conter ligações (por exemplo, ligações carbono-carbono), em que a rotação da ligação está restrita sobre essa ligação particular, por exemplo, restrição resultante da presença de um anel ou uma ligação dupla. Consequentemente, todo cis/trans e isômeros E/Z são também incluídos expressamente no objeto revelado. Os compostos desta invenção também podem ser representados em várias formas tautoméricas, e em tais casos, o objeto revelado inclui expressamente todas as formas tautoméricas dos compostos descritos neste documento, mesmo que apenas uma única forma tautomérica possa ser representada.

[082] Em algumas modalidades, a matéria revelada proporciona um composto substancialmente puro. “Substancialmente puro” significa uma preparação do composto que contém não mais do que 25% de impurezas (por exemplo, % em peso), o qual a impureza talvez outro composto completamente ou de uma forma diferente do composto (por exemplo, um sal ou um isômero diferente). Pureza em porcentagem pode ser avaliada por métodos conhecidos na técnica. Em algumas modalidades, uma preparação de composto substancialmente puro é fornecida em que a preparação não contém mais do que 15% de impureza. Em algumas modalidades, uma preparação de composto substancialmente puro é fornecida, onde a preparação não contém nenhuma impureza mais do que 10%. Em algumas modalidades, uma preparação de composto substancialmente puro é fornecida, em que a preparação não contém mais do que 5% de impureza. Em algumas modalidades, uma preparação de composto substancialmente puro é fornecida, em que a preparação não contém mais do que 3% de impurezas. Em algumas modalidades, uma preparação de composto substancialmente puro é fornecido onde a preparação não contém mais do que 1% de impureza.

[083] Em algumas modalidades, a matéria revelada proporciona um composto na forma purificada e/ou isolada, por exemplo, após cromatografia em coluna, cromatografia líquida de alta pressão, recristalização ou outras técnicas de purificação. Onde os estereoisômeros particulares dos compostos da matéria revelada são denotados, tais estereoisômeros podem ser substancialmente livres de outros estereoisômeros. Composições Farmacêuticas

[084] Em algumas modalidades, o objeto revelado proporciona uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto aqui descrito ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em conjunto com um excipiente farmaceuticamente aceitável.

[085] Exemplos de excipientes farmaceuticamente aceitáveis incluem os descritos acima, tais como veículos, agentes tensoativos, agentes espessantes ou emulsificantes, ligantes sólidos, auxiliares de dispersão ou de suspensão, solubilizantes, corantes, agentes aromatizantes, revestimentos, agentes de desintegração, lubrificantes, edulcorantes, conservantes, agentes isotônicos, e suas combinações. A seleção e o uso de excipientes farmaceuticamente aceitáveis são ensinados em “Remington: The Science and Practice of Pharmacy”, 21° ed. (Lippincott Williams & Wilkins, 2005), a divulgação da qual é aqui incorporada por referência.

[086] As composições farmacêuticas podem ser formuladas para administração no estado sólido ou líquido, incluindo àquelas adaptadas para o seguinte: (1) administração oral, por exemplo, remédios líquidos (por exemplo, soluções aquosas ou não aquosas ou suspensões), comprimidos (por exemplo, aqueles alvos para administração bucal, sublingual e absorção sistémica), cápsulas, pílulas grandes, pós, grânulos, pastas para aplicação na língua, cápsulas de gelatina dura, cápsulas de gelatina mole, pulverizadores bucais, pastilhas, pílulas, péletes, xaropes, suspensões, elixires, líquidos, emulsões e microemulsões; (2) administração parentérica, por exemplo, por via subcutânea, intramuscular, intravenosa ou epidural como, por exemplo, uma solução ou suspensão estéril; (3) aplicação tópica, por exemplo, como um creme, pomada, emplastro, pessário ou pulverização, aplicada à pele; (4) por via intravaginal ou intrarretal, por exemplo, como um pessário, creme ou espuma; (5) por via sublingual; (6) ocularmente; (7) por via transdérmica; ou (8) por via nasal. As composições farmacêuticas podem ser para liberação imediata, sustentada ou controlada.

[087] Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas são formuladas para administração oral. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas são formuladas para administração intravenosa.

[088] Os compostos e composições farmacêuticas aqui descritos podem ser preparados como qualquer forma de dosagem unitária apropriada, tais como cápsulas, sachês, comprimidos; pó, grânulos, solução, suspensão em um líquido aquoso ou em um líquido não aquoso, emulsão líquida óleo em água, emulsão líquida de água em óleo, lipossomas e bolus.

[089] Os comprimidos podem ser feitos por compressão ou moldagem, opcionalmente, com um ou mais ingredientes acessórios. Os comprimidos prensados podem ser preparados por compressar em uma máquina adequada do princípio ativo em uma forma de fluxo livre tal como um pó ou grânulos, opcionalmente misturados com um aglutinante, lubrificante, diluente inerte, conservante, agente ativo de superfície ou agente de dispersão. Os comprimidos moldados podem ser feitos por moldagem em uma máquina adequada de uma mistura do composto em pó umedecido com um diluente líquido inerte. Os comprimidos podem ser opcionalmente revestidos ou marcados e podem ser formulados de modo a proporcionar a liberação lenta ou controlada do princípio ativo neles contido. Métodos para a formulação de tais composições de liberação lenta ou controlada dos princípios farmacologicamente ativos como as aqui e outros compostos conhecidos na técnica, são conhecidos na técnica e descritos em várias Patentes Americanas concedidas, algumas das quais incluem, mas não estão limitadas a, Patente US Nos. 4,369,174 e 4,842,866, e as referências aqui citadas. Os revestimentos podem ser usados para a entrega de compostos ao intestino (vide, por exemplo, Patente US Nos. 6,638,534, 5,217,720 e 6,569,457, e as referências citadas nesta). Um perito na técnica reconhecerá que em adição aos comprimidos, outras formas de dosagem podem ser formuladas para proporcionar uma liberação lenta ou controlada do princípio ativo. Tais formas de dosagem incluem, mas não estão limitadas a, cápsulas, granulados e cápsulas de gel.

[090] As composições farmacêuticas adequadas para administração tópica incluem, sem limitação, pílulas compreendendo os ingredientes em uma base aromatizada, tais como sacarose, acácia e tragacanto; e pastilhas compreendendo o princípio ativo em uma base aromatizada ou em uma base inerte, como gelatina e glicerina.

[091] As composições farmacêuticas adequadas para administração parentérica incluem, sem limitação, soluções injetáveis estéreis aquosas e não aquosas contendo, por exemplo, antioxidantes, tampões, estatísticas e solutos bacterio que tornam a formulação isotônica com o sangue do receptor pretendido; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas contendo, por exemplo, agentes de suspensão e agentes espessantes. As formulações podem ser apresentadas em recipientes de dose unitária ou multidoses, por exemplo, ampolas seladas e frascos, e podem ser armazenadas em condição criodessecada (liofilizada) requerendo apenas a adição de um veículo líquido estéril, como água, imediatamente antes do uso. Em algumas modalidades, a composição aquosa é ácida, tendo um pH de cerca de 5,5 a cerca de 7.

[092] As soluções para injeção extemporâneas e suspensões podem ser preparadas a partir de pós, grânulos e comprimidos estéreis. Métodos de uso dos Compostos e Composições Farmacêuticas

[093] Em algumas modalidades, a matéria revelada proporciona um método para modular (por exemplo, como aumentar ou reduzir) in vivo, os níveis de nitroxil, compreendendo a administração a um indivíduo que dele necessite um composto ou composição farmacêutica deste tal como aqui descrito. Em algumas modalidades, o indivíduo tem, é suspeito de ter, ou está em risco de ter ou desenvolver uma doença ou condição que é responsiva à terapia de nitroxil.

[094] Em algumas modalidades, a matéria revelada proporciona um método para tratar, prevenir ou retardar o aparecimento e/ou o desenvolvimento de uma doença ou condição compreendendo administrar um indivíduo (incluindo um indivíduo identificado como necessitando de tal tratamento, prevenção ou atraso) uma quantidade eficaz de um composto ou uma composição farmacêutica como aqui descrita. Identificar um indivíduo em necessidade do mesmo pode estar no julgamento de um médico, corpo clínico, funcionários da emergência ou de outro profissional de saúde e pode ser subjetiva (por exemplo, opinião) ou objetivo, por exemplo, (mensurável por um teste ou método de diagnóstico).

[095] Doenças ou condições particulares contempladas pelos métodos aqui descritos incluem, sem limitação, doenças cardiovasculares, isquemia, lesão de reperfusão, doenças cancerosas, hipertensão pulmonar e condições que respondem à terapia de nitroxil. Doenças Cardiovasculares

[096] Em algumas modalidades, a matéria revelada proporciona um método de tratamento de uma doença cardiovascular, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um composto ou composição farmacêutica como aqui descrita a um indivíduo em necessidade do mesmo.

[097] Exemplos de doenças cardiovasculares incluem, sem limitação, as doenças cardiovasculares que são sensíveis à terapia nitroxil, obstruções coronárias, doença arterial coronariana (DAC), angina, ataque cardíaco, infarto do miocárdio, pressão sanguínea elevada, cardiopatia isquêmica e infarto, congestão pulmonar, edema pulmonar, fibrose cardíaca, doença valvular cardíaca, doenças do pericárdio, estados circulatórios congestivos, edema periférico, ascite, doença de Chagas, hipertrofia ventricular, doença da válvula cardíaca, insuficiência cardíaca, insuficiência cardíaca diastólica, insuficiência cardíaca congestiva, insuficiência cardíaca congestiva aguda, insuficiência cardíaca descompensada aguda, e hipertrofia cardíaca.

[098] Em algumas modalidades, o indivíduo está com insuficiência cardíaca. Em algumas modalidades, o indivíduo está com insuficiência cardíaca e/ou passando por tratamento com um agente inotrópico positivo. Em algumas modalidades, o indivíduo está experimentando insuficiência cardíaca e/ou passando por tratamento com um antagonista do receptor de beta-andrenérgico (também aqui referido como beta-antagonista ou beta-bloqueador). Uma beta-antagonista inclui qualquer composto que efetivamente atua como um antagonista em receptores beta-adrenérgicos do indivíduo, e fornece resultados terapêuticos ou farmacêuticos desejados, tais como a diminuição do tónus vascular e/ou da frequência cardíaca. Um indivíduo que está passando por tratamento com um beta-antagonista é qualquer indivíduo a quem o beta- antagonista tenha sido administrado, e a que o beta- antagonista continua a atuar como um antagonista nos receptores beta-adrenérgicos do indivíduo. Exemplos de beta-antagonistas incluem, sem limitação, propranolol, metoprolol, bisoprolol, bucindolol, e carvedilol.

[099] Em algumas modalidades, o indivíduo está experimentando insuficiência cardíaca e/ou o tratamento com um agonista do receptor beta-adrenérgico (também aqui referido como beta-agonista). Exemplos de beta-agonistas incluem, sem limitação, dopamina, dobutamina, isoproterenol, e análogos e derivados desses compostos.

[100] A determinação de se um indivíduo está passando por tratamento com um inotrópico positivo, beta- antagonista ou beta-agonista pode ser feito pelo exame do histórico médico do indivíduo, ou triagem do indivíduo para a presença de tais agentes de testes químicos, tais como a cromatografia líquida de alta velocidade, como descrito em Thevis et al., Biomed. Chromatogr. 2001, 15, 393-402.

[101] Em algumas modalidades, o método compreende ainda a administração de uma quantidade eficaz de pelo menos outro agente inotrópico positivo ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método compreende ainda a administração de uma quantidade eficaz de um beta- antagonista para o indivíduo. Em algumas modalidades, o método compreende ainda a administração de uma quantidade eficaz de um beta-agonista para o indivíduo.

[102] Em algumas modalidades, a doença cardiovascular é a insuficiência cardíaca. A insuficiência cardíaca pode ser de qualquer tipo ou forma, incluindo qualquer das insuficiências cardíacas aqui descritas. Exemplos não limitantes de insuficiência cardíaca incluem insuficiência cardíaca de estágio precoce, insuficiência cardíaca de Classe I, II, III ou IV, insuficiência cardíaca aguda, insuficiência cardíaca congestiva (ICC) e insuficiência cardíaca congestiva aguda. Em algumas modalidades, a insuficiência cardíaca é a insuficiência cardíaca descompensada.

[103] Em algumas modalidades, a doença cardiovascular é CHF, e o método compreende ainda a administração de uma quantidade eficaz de pelo menos outro agente inotrópico positivo para o indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo está experimentado insuficiência cardíaca. Em algumas modalidades, o pelo menos outro agente inotrópico positivo é um agonista beta-adrenérgico. Em algumas modalidades, o agonista beta-adrenérgico é dobutamina. Isquemia ou lesão de reperfusão

[104] Em algumas modalidades, a matéria revelada proporciona um método para tratar, prevenir ou retardar o aparecimento e/ou o desenvolvimento de isquemia ou reperfusão compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um composto ou composição farmacêutica como aqui descrita a um sujeito com essa necessidade.

[105] Em algumas modalidades, o método é para a prevenção da isquemia ou da lesão de reperfusão. Em algumas modalidades, o composto ou a composição farmacêutica é administrada antes do início da isquemia. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é administrada antes dos procedimentos, em que pode ocorrer isquemia do miocárdio, por exemplo, uma angioplastia ou cirurgia, como uma cirurgia de revascularização do miocárdio. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica ou o composto é administrado após a isquemia, mas antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica ou o composto é administrado após isquemia e reperfusão.

[106] Em algumas modalidades, o sujeito é um indivíduo. Em algumas modalidades, o sujeito é um indivíduo em risco de um evento isquêmico. Em algumas modalidades, o indivíduo está em risco de um futuro evento isquêmico, mas não tem presente evidência de isquemia. A determinação de se um indivíduo está em risco para um evento isquêmico pode ser realizada por qualquer método conhecido na técnica, tal como a verificação do indivíduo ou do histórico médico do indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo teve um evento isquêmico anterior. Assim, o indivíduo pode estar em risco de um primeiro ou subsequente evento isquêmico. Exemplos de indivíduos em risco de um evento isquêmico incluem indivíduos com hipercolesterolemia conhecida, alterações ECG associadas à isquemia (por exemplo, ondas T invertidas ou no pico ou elevações ou depressão em um segmento ST em um contexto clínico apropriado), EKG anormal não associado com isquemia ativa, CKMB elevado, evidência clínica de isquemia (por exemplo, uma dor forte subesternal no peito ou dor no braço, falta de ar e/ou sudorese), história prévia de infarto do miocárdio, colesterol elevado, sedentarismo, evidência angiográfica de obstrução parcial da artéria coronária, evidência ecocardiográfica de dano do miocárdio, ou qualquer outra evidência de um risco para um futuro evento isquêmico. Exemplos de eventos isquêmicos incluem, sem limitação, enfarte do miocárdio (MI) e isquemia neurovascular, como um acidente vascular cerebral (AVC).

[107] Em algumas modalidades, o sujeito é um órgão que está a ser transplantado. Em algumas modalidades, o composto ou a composição farmacêutica é administrada antes da reperfusão do órgão em um receptor de transplante. Em algumas modalidades, o composto ou a composição farmacêutica é administrada antes da remoção do órgão do doador, por exemplo, através das cânulas de perfusão usadas no processo de remoção de órgãos. Se o doador de órgãos é um doador vivo, por exemplo, um doador de rim, o composto ou a composição farmacêutica pode ser administrada ao doador de órgãos. Em algumas modalidades, o composto ou a composição farmacêutica é administrada através do armazenamento do órgão em uma solução compreendendo o composto ou a composição farmacêutica. Por exemplo, o composto ou a composição farmacêutica pode estar incluído na solução de conservação de órgãos, tais como a solução da Universidade de Wisconsin “UW”, a qual é uma solução compreendendo amido de hidroxietil substancialmente livre de etileno glicol, clorohidrina de etileno e acetona (vide, Patente Americana US No. 4,798,824). Em algumas modalidades, a quantidade do composto ou da composição farmacêutica é tal que a isquemia ou a lesão de reperfusão aos tecidos do órgão é reduzida após a reperfusão no receptor do órgão transplantado. Em algumas modalidades, o método reduz a necrose do tecido (a medida do enfarte) em tecidos em risco.

[108] Isquemia ou reperfusão pode danificar outros tecidos que não os tecidos do miocárdio; e a matéria revelada abrange métodos de tratamento ou prevenção de tais danos. Em algumas modalidades, a isquemia ou reperfusão não é no miocárdio. Em algumas modalidades, o método reduz os danos da isquemia ou reperfusão no tecido do cérebro, fígado, intestino, rim, intestino delgado, ou qualquer parte do corpo diferente do miocárdio. Em algumas modalidades, o indivíduo está em risco de tais lesões. Seleção de uma pessoa em risco de isquemia não no miocárdio poderia incluir a determinação dos indicadores usados para avaliar o risco de isquemia miocárdica. No entanto, outros fatores podem indicar um risco de isquemia/reperfusão em outros tecidos. Por exemplo, pacientes de cirurgia muitas vezes experimentam a cirurgia relacionada à isquemia. Assim, os indivíduos programados para a cirurgia poderiam ser considerados de risco para um evento isquêmico. Os seguintes fatores de risco para derrame (ou um subconjunto desses fatores de risco) poderiam demonstrar um risco de um indivíduo para isquemia do tecido cerebral: hipertensão, tabagismo, estenose da artéria carótida, sedentarismo, diabetes mellitus, hiperlipidemia, ataque isquêmico transitório, fibrilação atrial, doença arterial coronariana, insuficiência cardíaca congestiva, infarto do miocárdio passado, disfunção do ventrículo esquerdo com trombo mural e estenose mitral. Ingall, Postgrad. Med. 2000, 107(6), 34-50. Além disso, as complicações da diarreia infecciosa não tratada no idoso podem incluir miocárdio, renal, cerebrovascular e isquemia intestinal. Slotwiner-Nie et al., Gastroenterol. Clin. N. Am. 2001, 30(3), 625-635. Alternativamente, os indivíduos poderiam ser selecionados com base em fatores de risco para isquemia intestinal, doença renal ou hepática. Por exemplo, o tratamento será iniciado em indivíduos idosos com risco de episódios de hipotensão (tais como perda de sangue cirúrgico). Assim, os indivíduos apresentando uma indicação desse tipo poderiam ser considerados em risco de um evento isquêmico. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma ou mais das condições listadas aqui, tais como diabetes mellitus ou hipertensão. Outras condições que podem resultar em isquemia, como malformação arteriovenosa cerebral, poderia demonstrar risco de um indivíduo para um evento isquêmico.

[109] Em algumas modalidades, o método compreende ainda a administração de um agente terapêutico adicional. O agente terapêutico pode ser, por exemplo, um composto doador de nitroxil, tal como sal de Angeli ou outro composto aqui descrito, um beta bloqueador, um bloqueador do canal de cálcio, um agente antiplaquetas, ou qualquer outro agente terapêutico para a redução da lesão isquêmica ou para a proteção do miocárdio no indivíduo. Doenças Cancerígenas

[110] Em algumas modalidades, a matéria revelada proporciona um método para tratar, prevenir ou retardar o aparecimento e/ou o desenvolvimento de uma doença cancerosa, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um composto ou composição farmacêutica como aqui descrita a um indivíduo em necessidade do mesmo.

[111] Em algumas modalidades, o indivíduo tem ou é suspeito de ter uma doença cancerosa, por exemplo, câncer.

[112] Os cânceres que podem ser tratados pelos métodos aqui descritos incluem, sem limitação, os cânceres da cabeça, pescoço, que incluem tumores da cabeça, pescoço, cavidade nasal, seios paranasais, nasofaringe, cavidade oral, orofaringe, laringe, hipofaringe, glândulas salivares e paragangliomas; cânceres do fígado e da árvore biliar, tal como carcinoma hepatocelular; cânceres intestinais, como o câncer colorretal; câncer de ovário; pequenas células e câncer do pulmão de células não pequenas; sarcomas de câncer de mama, tais como fibrossarcoma, histiocitoma fibrosa maligna, rabdomiossarcoma embrionário, leiomisossarcoma, neurofibrossarcoma, osteossarcoma, sarcoma sinovial, lipossarcoma, e sarcoma alveolar de partes moles; as neoplasias do sistema nervoso central, tais como o câncer do cérebro; linfomas, como o linfoma de Hodgkin, linfoma linfoplasmacitóide, linfoma folicular, linfoma do tecido linfoide associado à mucosa, linfoma de células do manto, linfoma de grandes células de linhagem B, linfoma de Burkitt e linfoma anaplásico de grandes células de células T.

[113] Em algumas modalidades, o método compreende ainda a administração de uma quantidade eficaz de um agente terapêutico adicional para o indivíduo. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um agente anticancerígeno ou um agente citotóxico. Exemplos de tais agentes incluem, sem limitação, agentes alquilantes, inibidores de angiogênese, antimetabolitos, cutelos de DNA, reticuladores de DNA, intercaladores de DNA, menor ligantes do sulco de DNA, enediinos, inibidores de proteína de choque térmico 90, inibidores de histona deacetilase, estabilizadores de microtúbulos, análogos de nucleosídeo (purina ou pirimidina), inibidores de exportação nuclear, inibidores da proteassoma, inibidores (I ou II) de topoisomerase, inibidores de tirosina quinase. Agentes específicos anticâncer ou citotóxicos incluem, por exemplo, beta-lapachona, ansamitocina P3, auristatina, bicalutamida, bleomicina, bleomicina, bortezomibe, bussulfano, caliqueamicina, calistatina A, camptotecina, capecitabina, cisplatina, criptoficinas, daunorubicina, docetaxel, doxorrubicina, duocarmicina, dinemicina A, etoposídeo, floxuridina, floxuridina, fludarabina, fluorouracil, gefitinibe, gemcitabina, hidroxiureia, imatinibe, interferons, interleucinas, irinotecano, metotrexato, mitomicina C, oxaliplatina, paclitaxel, espongistatinas, ácido hidroxâmico suberoilanilida (SAHA), tiotepa, topotecano, tricostatina A, vinblastina, vincristina e vindesina. Hipertensão Pulmonar

[114] Em algumas modalidades, a matéria revelada proporciona um método para tratar, prevenir ou retardar o aparecimento e/ou o desenvolvimento de hipertensão pulmonar compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um composto ou composição farmacêutica como aqui descrita a um indivíduo em necessidade do mesmo. Em algumas modalidades, a hipertensão pulmonar é selecionada a partir de doenças e condições acima listadas na Tabela 1. Em algumas modalidades, a hipertensão pulmonar é a hipertensão arterial pulmonar (HAP). Em algumas modalidades, a hipertensão pulmonar é a hipertensão pulmonar devido à doença do esquerdo do coração. Em algumas modalidades, a doença do esquerdo do coração é insuficiência esquerda cardíaca. Em algumas modalidades, a insuficiência esquerda cardíaca é deixada insuficiência cardíaca sistólica. Em algumas modalidades, a insuficiência esquerda cardíaca é a insuficiência cardíaca diastólica. Em algumas modalidades, a insuficiência esquerda cardíaca é crônica ou aguda descompensada. Em algumas modalidades, a hipertensão pulmonar é a hipertensão pulmonar tromboembólica crônica.

[115] Em algumas modalidades, a matéria revelada proporciona um método de redução da pressão arterial pulmonar média (MPAP), compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um composto ou de uma composição farmacêutica aqui descrita a um indivíduo que dela necessite. Em algumas modalidades, a MPAP é reduzida até cerca de 50%. Em algumas modalidades, a MPAP é reduzida até cerca de 25%. Em algumas modalidades, a MPAP é reduzida em até 20%. Em algumas modalidades, a MPAP é reduzida em até 15%. Em algumas modalidades, a MPAP é reduzida em até 10%. Em algumas modalidades, a MPAP é reduzida até 5%. Em algumas modalidades, a MPAP é reduzida para cerca de 12 a 16 mmHg. Em algumas modalidades, a MPAP é reduzida para cerca de 15 mm Hg. Modos de Administração, Regimes e Níveis de Dose

[116] Qualquer regime de administração bem conhecido dos peritos na técnica para a regulação do tempo e da sequência de entrega de fármaco pode ser usada e repetida conforme necessário para efetuar o tratamento nos métodos aqui descritos. Por exemplo, o composto ou a composição farmacêutica pode ser administrado 1, 2, 3 ou 4 vezes ao dia, por uma dose única, doses múltiplas discretas ou infusão contínua.

[117] O composto ou a composição farmacêutica pode ser administrado antes de, substancialmente ao mesmo tempo com, ou após a administração de um agente terapêutico adicional. O regime de administração pode incluir o pré- tratamento e/ou coadministração com o agente terapêutico adicional. Em tal caso, o composto ou a composição farmacêutica e o agente terapêutico adicional pode ser administrado simultaneamente, separadamente ou sequencialmente.

[118] Exemplos de regimes de administração incluem, sem limitação: a administração de cada composto, composição sequencial; e a coadministração de cada composto, composição farmacêutica e um agente terapêutico em uma maneira substancialmente simultânea (por exemplo, como em uma única forma de dosagem unitária) ou em múltiplas, formas de dosagem unitárias separadas para cada composto, composição farmacêutica e um agente terapêutico.

[119] A administração da composição farmacêutica ou do composto pode ser via qualquer um dos modos conhecidos aceitados dos peritos na técnica, por exemplo, por via oral, parentérica, por pulverização de inalação, topicamente, por via retal, por via nasal, bucal, vaginal, intraocular, intrapulmonar, ou através de um implante reservatório. O termo “parenteral” inclui, sem limitação, por via subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intraesternal, intracranial por injeção intraóssea e por meio de técnicas de infusão. A administração pode envolver a exposição sistêmica ou pode ser local, tal como quando um composto ou composição farmacêutica é administrado no local de interesse. Várias ferramentas podem ser usadas para a administração no local de interesse, tais como cateteres, trocarteres, projéteis, géis plurônicos, tronco, polímeros de liberação prolongada de fármacos ou outros dispositivos que proporcionam o acesso interno. Onde o composto ou a composição farmacêutica é administrado para um órgão a ser doado, tal órgão pode ser banhado em um meio contendo o composto ou a composição farmacêutica. Alternativamente, o composto ou a composição farmacêutica pode ser marcado no órgão, ou pode ser aplicado de qualquer maneira adequada.

[120] Será apreciado por aqueles peritos na técnica que a “quantidade eficaz” ou “nível de dose” dependerá de vários fatores tais como o modo de administração particular, regime de administração, o composto, e a composição selecionada, e a doença em particular e o paciente sendo tratado. Por exemplo, o nível de dose apropriado pode variar de acordo com a atividade, a taxa de excreção e a possível toxicidade do composto ou composição específica empregada; a idade, o peso corporal, a saúde geral, o sexo e a dieta do paciente sendo tratado; a frequência de administração; o outro agente(s) terapêutico(s) sendo coadministrado(s); e o tipo e gravidade da doença.

[121] Os compostos e as composições farmacêuticas aqui descritas podem ser administrados em dose adequada. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica ou o composto é administrado a uma dose de cerca de 0,0001 a 4,0 gramas por dia (ou várias doses por dia em doses divididas) para adultos. Assim, em algumas modalidades, a composição farmacêutica ou composto é administrado em uma faixa de nível de dose na qual a extremidade inferior da faixa é qualquer quantidade entre 0,1 mg/dia e 400 mg/dia e a extremidade superior da faixa é qualquer quantidade entre 1 mg/dia e 4000 mg/dia (por exemplo, 5 mg/dia e 100 mg/dia, 150 mg/dia e 500 mg/dia). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica ou o composto é administrado em uma faixa de nível dose na qual a extremidade inferior da faixa é qualquer quantidade entre 0,1 mg/kg/dia e 90 mg/kg/dia e a extremidade superior da faixa é qualquer quantidade entre 1 mg/kg/dia e 100 mg/kg/dia (por exemplo, 0,5 mg/kg/dia e 2 mg/kg/dia, 5 mg/kg/dia e 20 mg/kg/dia).

[122] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica ou o composto é administrado em uma dose base em peso. Em algumas modalidades, o nível de dosagem é de cerca de 0,001 a cerca de 10000 mg/kg/d. Em algumas modalidades, o nível de dosagem é de cerca de 0,01 a cerca de 1000 mg/kg/d. Em algumas modalidades, o nível de dosagem é de cerca de 0,01 a cerca de 100 mg/kg/d. Em algumas modalidades, o nível de dosagem é de cerca de 0,01 a cerca de 10 mg/kg/d. Em algumas modalidades, o nível de dosagem é de cerca de 0,1 a cerca de 1 mg/kg/d. Em algumas modalidades, o nível de dosagem é inferior a cerca de 1 g/kg/d.

[123] O nível de dosagem pode ser ajustado para a administração intravenosa. Em tal caso, a composição farmacêutica ou o composto pode ser administrado em uma quantidade de entre cerca de 0,01 μg/kg/min a cerca de 100 μg/kg/min, cerca de 0,05 μg/kg/min a cerca de 95 μg/kg/min, cerca de 0,1 μg/kg/min a cerca de 90 μg/kg/min, cerca de 1,0 μg/kg/min a cerca de 80 μg/kg/min, cerca de 10 μg/kg/min a cerca de 70 μg/kg/min, cerca de 20 μg/kg/min a cerca de 60μg/kg/min, cerca de 30 μg/kg/min a cerca de 50 μg/kg/min, cerca de 0,01 μg/kg/min a cerca de 1,0 μg/kg/min, cerca de 0,01 μg/kg/min a cerca de 10 μg/kg/min, cerca de 0,1 μg/kg/min a cerca de 1,0 μg/kg/min, cerca de 0,1 μg/kg/min para cerca de 10 μg/Kg/min, cerca de 1,0 μg/kg/min para cerca de 5 μg/kg/min, cerca de 70μg/kg/min a cerca de 100 μg/kg/min, cerca de 80 μg/kg/min a cerca de 90 μg/kg/min.

[124] O intervalo de dosagem pode ser ajustado de acordo com as necessidades do indivíduo. Para intervalos mais longos de administração, liberação prolongada ou formulações de depósito pode ser usada. Kits compreendendo os compostos ou composições farmacêuticas

[125] Em algumas modalidades, a matéria revelada proporciona um kit compreendendo um composto ou uma composição farmacêutica aqui descrita.

[126] Em algumas modalidades, o kit compreende ainda instruções para a utilização do composto ou composição farmacêutica. As instruções podem estar em qualquer forma adequada, tal como escrita ou eletrônica. Em algumas modalidades, as instruções podem ser instruções escritas. Em algumas modalidades, as instruções estão contidas em um meio de armazenamento eletrônico (por exemplo, disquete magnético ou disco ótico). Em algumas modalidades, as instruções incluem informação sobre a composição farmacêutica ou o composto e a forma de administração do composto ou da composição farmacêutica a um indivíduo. Em algumas modalidades, as instruções referem-se a um método de utilização aqui (por exemplo, tratar, prevenir e/ou retardar o aparecimento e/ou o desenvolvimento de uma doença ou condição selecionada de entre doenças cardiovasculares, isquemia, lesão de reperfusão, doença cancerosa, hipertensão pulmonar e condições que respondem a terapia de nitroxil).

[127] Em algumas modalidades, o kit compreende ainda uma embalagem adequada. Sempre que o kit compreende mais do que um composto ou uma composição farmacêutica, os embalados individualmente em embalagens separadas, ou combinados em um recipiente onde a reatividade cruzada e vida de prateleira o permitam.

[128] Exceto nos exemplos de operação, ou onde indicado em contrário, todos os números que expressam quantidades de ingredientes, condições de reação, e assim por diante utilizados no relatório e reivindicações devem ser entendidos como sendo modificados pelo termo “cerca de”. Por conseguinte, a menos que indicado em contrário, esses números são aproximações que podem variar dependendo das propriedades desejadas procuradas serem obtidas pela matéria revelada. No mínimo, e não como uma tentativa de limitar a aplicação da doutrina de equivalentes ao escopo das reivindicações, cada parâmetro numérico deverá ser interpretado tendo em vista o número de algarismos significativos e técnicas de arredondamento comuns.

[129] Enquanto as faixas numéricas e parâmetros que estabelecem a abrangência do escopo da matéria divulgada são aproximações, os valores numéricos definidos nos exemplos de operação são relatados de forma tão precisa quanto possível. Qualquer valor numérico, no entanto, contém inerentemente certos erros necessariamente resultantes do desvio padrão encontrados em suas respectivas medições de teste. EXEMPLOS

[130] Os exemplos seguintes são apresentados para fins ilustrativos e não devem servir para limitar o escopo do objeto revelado. EXEMPLO 1: Síntese de Compostos

[131] Os compostos aqui descritos podem ser feitos de acordo com os métodos gerais descritos nos Esquemas 1 a 3 ou por processos conhecidos na técnica. Os materiais de partida para as reações podem estar disponíveis comercialmente ou podem ser preparados por procedimentos conhecidos ou modificações óbvias dos mesmos. Por exemplo, o ácido de 5-bromo-5-metil-Meldrum1 foi obtido através da bromação de ácido de 5-metil-Meldrum (bicarbonato de sódio, bromo, água). Ácido de 5-acetil-Meldrum2 foi obtido por meio de acilação do ácido de Meldrum (ácido acético, N,N'- diciclohexilcarbodiimida, 4-dimetilaminopiridina, diclorometano). Ácido 5-acetil-N,N-dimetilbarbitúrico2,3 foi obtido através de acilação de ácido N,N-dimetilbarbitúrico (cloreto de acetil, piridina, diclorometano). Ácido 5-etil- barbitúrico4 foi obtido através da redução do ácido 5- acetil-Meldrum (cianoborohidrato de sódio, ácido acético). 4-Acetil-N-fenil-5-metil-pirazolona5 foi obtida através da acilação de N-fenil-5-metil-pirazolona (cloreto de acetil, hidróxido de cálcio, dioxano). N,O-bis(t-butoxicarbonil)- hidroxilamina6 foi obtida através de proteção N,O diBoc de cloridrato de hidroxilamina (dicarbonato de di-t-butil, trietilamina, éter de petróleo, t-butil metil éter, água). Todos os materiais de partida eram de grau reagente e foram usados sem purificação adicional.

[132] Os espectros de RMN foram obtidos em um espectrômetro Bruker Avance 400 MHz FT-RMN. Todos os desvios químicos são referidos em partes por milhão (ppm) em relação ao CHCl3 residual (7,26 ppm para 1H, 77,23 ppm para 13C), DMSO residual (2,50 ppm para 1H, 39,52 para 13C), ou H2O residual (4,8 ppm de 1H). Os espectros de massa de alta resolução foram obtidos em um espectrômetro de massa do setor magnético VG Analytical VG70SE operando em modo rápido de bombardeamento atômico (FAB). Os espectros de absorção Ultravioleta-Visível (UV-Vis) foram obtidos usando um espectrômetro de arranjo de díodos Hewlett-Packard 8453. Soluções (PBS) salinas tamponadas com fosfato (0,1 M) foram preparadas com 140 mM de NaCl e 3 mM de KCl, com 100μM de ácido dietilenotriaminopentacético (DTPA), ajustado para pH 7,4. Soluções tamponadas (0,1 M) para experimentos UV-Vis foram preparadas a partir de HCl/NaCl (pH 1,7), AcOH/AcONa (pH 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5), ou NaPO3H2/Na2PO3H (pH 6,0, 6,5, 7,0, 8,0, 9,0, 9,5, 9,8, 10,0, 10,5, 10,6). Esquema 1. Síntese de doadores de ácido de Meldrum 1a e 2a Esquema Geral:

Exemplos específicos:

Esquema Geral:

Exemplos Específicos:

Esquema 3. Síntese de doadores pirazolona 6a - 12a Esquema Geral: Método A

Exemplo Específico:

Esquema Geral: Método B

Procedimento Geral para Compostos 1a - 6a

[133] Brometos de 1b-4b, 6b. Composto 1b estava disponível comercialmente e 2b-5b foram sintetizados através de métodos conhecidos da literatura.1-3 Raillar, S.P.; Chen, W.; Sullivan, E.; Bajjalieh, W.; Bhandari, A.; Baer, T.A.J. Comb. Chem. 2002, 4, 470-474; Yranzo, G.I.; Reartes, N.R.; Perez, J.D.; Iwataki, I.; Adachi, H.J. Anal. Appl. Pyrolysis 1998, 46, 101-112, e Nutaitis, C.F.; Schultz, R.A.; Obaza, J.; Smith, F.X.J. Org. Chem. 1980, 45, 4606-4608.

[134] Ácido 5-(N-(N,O-bis(t-butoxicarbonil))- hidroxilamina)-5-metil-Meldrum (1b-diBoc). A uma solução de N,O-bis(t-butoxicarbonil)-hidroxilamina (1,81 g, 7,75 mmoles) em dimetilformamida (25 mL) em temperatura ambiente foi adicionado hidrato de sódio, 60% (0,340 g, 8,52 mmoles), e a reação foi agitada durante uma hora. A esta solução foi adicionada 1b-Br (1,84 g, 7,75 mmoles), e a reação prosseguiu em temperatura ambiente durante 17 horas adicionais. A reação foi diluída com éter (50 mL) e lavada com cloreto de amônio (x2), água, e salmoura. O solvente foi removido por meio de evaporação por rotação, o qual forneceu o composto título como um óleo que solidificou e aerado em vácuo. A recristalização de diclorometano e hexanos forneceu o composto título como um sólido branco (1,79g, 59%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 1,90 (s, 3H), 1,83 (s, 3H), 1,80 (s, 3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 167,04, 163,92, 154,77, 151,91, 107,49, 85,51, 84,88, 64,80, 28,78, 28,00, 27,59, 21,84.

[135] Monohidrato de cloridrato de ácido 5-(N- hidroxilamina)-5-metil-Meldrum (1a). A uma solução de 1b- diBoc (0,190 g, 0,488 mmol) em diclorometano (10 mL) e metanol (0,99 mL) em 0°C foi adicionado cloreto de acetil (1,7 mL, 24 mmoles) ao longo de dois minutos. A reação foi deixada aquecer até a temperatura ambiente no banho de gelo, e continuou a agitar durante a noite. O precipitado branco foi filtrado e caracterizado como o composto título (0,094 g, 86%). A recristalização a partir de metanol e diclorometano forneceu cristais de qualidade de raio-X. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO)δ: 10,32 (s, 1H), 8,40 (br.s, 3H), 1,73 (s, 3H), 1,71 (s, 3H), 1,44 (s, 3H). 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO)δ: 168,99, 105,57, 66,14, 28,88, 28,33, 20,96.

[136] Ácido de 5-(acetil-O-metoxioxima)-Meldrum (2b-H+). A uma solução de ácido 5-acetil-Meldrum (1,644 g, 8,831 mmoles) em metanol (50 mL) em temperatura ambiente foi adicionado cloridrato em O-metoxihidroxilamina (0,738 g, 8,84 mmoles) e bicarbonato de sódio (0,743 g, 8,84 mmoles), e a reação continuou em temperatura ambiente durante 24 horas. A reação foi concentrada em vácuo, dissolveu novamente em diclorometano, filtrou e concentrou em vácuo para fornecer o composto título como um sólido amarelo claro (1,714 g, 90%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 13,11 (s, 1H), 3,88 (s, 3H), 2,71 (s, 3H), 1,69 (6H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 169,77, 166,95, 162,58, 103,12, 80,79, 64,68, 26,46, 14,86. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 216,08696 (MH+); calc. para C9H13NO5: 216,08720.

[137] Ácido de 5-(acetil-O-metoxioxima)-5-bromo- Meldrum (2b-Br). A uma solução de 4b-H+ (0,681 g, 2,87 mmoles) e trietilamina (0,40 mL, 2,87 mmoles) em diclorometano (20 mL) em 0°C foi adicionada uma solução de bromo (0,15 mL, 2,87 mmoles) em diclorometano (2 mL). A reação foi agitada durante cinco minutos e depois extraída com água e salmoura, seca sobre sulfato de magnésio, e concentrada em vácuo para fornecer o composto título como um sólido de cor de laranja (0,810 g, 96%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 3,94 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,85 (s, 3H), 1,78 (s , 3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 161,53, 151,23, 107,27, 63,19, 55,82, 28,74, 28,38, 12,71. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 295,99537 (MH+); calc. para C9H12BrNO5: 295,99566.

[138] Ácido de 5-(acetil-O-metoxioxima)-5-(N-(N,O- bis(t-butoxicarbonil))-hidroxilamina)-Meldrum (2b-diBoc). A uma solução de N,O-bis(t-butoxicarbonil)-hidroxilamina (0,642 g, 2,75 mmoles) em dimetilformamida (20 mL) em temperatura ambiente foi adicionado hidrato de sódio, 60% (0,121g, 3,03 mmoles), e a reação agitada durante uma hora. A essa solução foi adicionada 2b-Br (0,810 g, 2,75 mmoles), e a reação prosseguiu à temperatura ambiente durante um período adicional de 24 horas. A reação foi diluída com éter (50 mL) e lavada com cloreto de amônio (x2), água, e salmoura, em seguida, concentrada em vácuo para fornecer 2b-diBoc bruto ~30-40% puro por 1H RMN, o qual foi usado sem purificação adicional. 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 3,94 (s, 3H), 1,99 (br.s, 3H), 1,82 (br.s, 3H), 1,73 (s, 3H), 1,51 (s, 9H), 1,48 (s, 9H).

[139] Ácido 5-(N-hidroxiamina)-5-(acetil-O- metoxioxima)-Meldrum (2a). A uma solução de 2b-diBoc a partir da reação anterior em metanol (20 mL) em 0°C foi adicionado ao cloreto de acetil (4 mL) ao longo de três minutos. A reação foi deixada aquecer até a temperatura ambiente no banho de gelo, e continuou a agitar durante a noite. A reação foi concentrada em vácuo, dissolvida novamente em diclorometano, filtrada, e o filtrado foi concentrado em vácuo. A recristalização de diclorometano e hexanos forneceram o composto título como agulhas cor de laranja pálida (0,68 g, 10% ao longo de duas etapas). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO)δ: 8,38 (d , 1H, J = 2,3 Hz), 6,94 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 3,81 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,74 (s, 3H), 1,71 (s, 3H). HR-MS (FAB): encontrado m/z = 247,09360 (MH+); calc. para C9H14N2O6: 247,09301.

[140] Ácido de 5-bromo-5-etil-N,N- dimetilbarbitúrico (3b-Br). A uma solução de 3b-H+ (1,06 g, 5,74 mmoles) e trietilamina (0,81 mL, 5,74 mmoles) em diclorometano (50 mL) a 0°C foi adicionada uma solução de bromo (0,30 mL, 5,74 mmoles) em diclorometano (2 mL). A reação foi agitada durante cinco minutos e depois extraída com água e salmoura, seca sobre sulfato de magnésio, e concentrada em vácuo para fornecer o composto título como um sólido branco (1,42 g, 94%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 3,38 (s, 6H), 2,61 (q, 2H), 0,85 (t, 3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 166,07, 150,09, 49,93, 30,30, 29,66, 10,70. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 265,00118 (MH+); calc. para C8H11BrN2O3: 265,00108.

[141] Ácido 5-(N-(N,O-bis(t-butoxicarbonil))- hidroxilamina)-5-etil-N,N-dimetilbarbitúrico (3b-diBoc). A uma solução de N,O-bis(t-butoxicarbonil)-hidroxilamina (1,26 g, 5,41 mmoles) em dimetilformamida (50 mL) em temperatura ambiente foi adicionado hidrato de sódio, 60% (0,238 g, 5,95 mmoles), e a reação foi agitada durante uma hora. A esta solução foi adicionado 3b-Br (1,42 g, 5,41 mmoles), e a reação prosseguiu em temperatura ambiente durante 20 horas adicionais. A reação foi diluída com éter (50 mL) e lavada com cloreto de amônio (x2), água, e salmoura. O solvente foi removido por meio de evaporação rotativa, a qual forneceu o composto título como um óleo que solidificou e ficou areado em vácuo. A recristalização a partir de diclorometano e hexanos forneceu o composto título como um sólido branco (1,67 g, 74%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 3,35 (s, 3H), 3,33 (s, 3H), 2,17 (m, 2H), 1,54 (s, 9H), 1,41 (br.s, 9H), 0,89 (t, 3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 169,60, 166,47, 151,81, 150,74, 85,20, 84,40, 70,70, 29,41, 29,03, 28,82, 27,99, 27,94, 27,61, 27,57, 7,88. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 416,20253 (MH+) ; calc. para C18H29N3O8: 416,20329.

[142] Cloridrato de ácido de 5-(N-hidroxilamina)- 5-etil-N,N-dimetilbarbitúrico (3a). A uma solução de 3b- diBoc (0,415 g, 1 mmol) em diclorometano (20 mL) e metanol (2,0 mL) em 0°C foi adicionado cloreto de acetil (3,5 mL, 50 mmoles) ao longo de três minutos. A reação foi deixada aquecer até a temperatura ambiente no banho de gelo, e continuou a agitar durante a noite. O precipitado branco foi filtrado e caracterizado como o composto título (0,109 g, 43%). A recristalização a partir de metanol e diclorometano forneceu cristais de qualidade de raio-X. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO)δ: 10,27 (s, 1H), 7,24 (t, 1H, J=50,8 Hz), 3,21 (s, 6H), 1,78 (q, 2H, J=7,4 Hz), 0,72 (t, 3H, J=7,7 Hz). Rearranjo para 5 excluído a coleção de 13C RMN. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 216,09879 (MH+); calc. Para C8H13N3O4: 216,09843.

[143] Ácido 5-(acetil-O-metoxoxima)-N,N- dimetilbarbitúrico (4b-H+). A uma suspensão de ácido de 5- acetil-N,N-dimetilbarbitúrico (15,43 g, 77,8 mmoles) em metanol (125 mL) foi adicionado cloridrato de O- metoxihidroxilamina (6,50 g, 77,8 mmoles) e bicarbonato de sódio (6,54 g, 77,8 mmoles). A reação foi aquecida ao refluxo durante uma hora e, então, deixada resfriar em gelo. O precipitado foi filtrado, dissolvido novamente em diclorometano, filtrado, e a solução foi concentrada em vácuo para fornecer o composto título como um sólido branco (15,36 g, 87 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 14,54 (s, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,32 (s, 3H), 3,30 (s, 3H), 2,76 (s , 3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 169,63, 166,11, 162,55, 151,42, 86,97, 64,55, 27,87, 14,75. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 228,09857 (MH+); calc. para C9H13N3O4: 228,09843.

[144] Ácido de 5-(acetil-O-metoxioxima)-5-bromo- N,N-dimetilbarbitúrico(4b-Br). A uma solução de 4b-H+ (7,27 g, 32 mmoles) e trietilamina (4,5 mL, 32 mmoles) em diclorometano (50 mL) em 0°, foi adicionada em uma solução de bromo (1,65 mL, 32 mmoles) em diclorometano (10 mL). A reação foi agitada durante cinco minutos e, então, extraída com água e salmoura, seca sobre sulfato de magnésio, e concentrada em vácuo para fornecer o composto título como um sólido branco (9,51 g, 97%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 3,87 (s, 3H), 3,35 (s, 6H), 2,06 (s, 3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 163,77, 151,70, 150,02, 62,87, 60,13, 30,00, 12,69. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 308,00717 (MH+); calc. para C9H12BrN3O4: 308,00690.

[145] Ácido de 5-(acetil-O-metoxioxima)-5-(N-(N,O- bis(t-butoxicarbonil))-hidroxilamina-N,N-dimetilbarbitúrico (4b-diBoc). A uma solução de N,O-bis(t-butoxicarbonil)- hidroxilamina (5,83 g, 25 mmoles) em dimetilformamida (100 mL) em temperatura ambiente foi adicionado hidrato de sódio, 60% (1,1 g, 27,5 mmoles), e a reação foi agitada durante uma hora. A essa solução foi adicionado 4b-Br (7,65g, 25 mmoles), e a reação prosseguiu em temperatura ambiente durante um período adicional de 20 horas. A reação foi diluída com éter (150 mL) e lavada com cloreto de amônio (x2), água, e salmoura. O solvente foi removido por meio de evaporação rotativa, a qual forneceu o composto título como um óleo que solidificou e aerou em vácuo. Esse material foi usado sem purificação adicional 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 3,84 (s, 3H), 3,32 (s, 6H), 1,94 (br.m, 3H), 1,52 (s, 9H), 1,46 (br.m, 9H). HR-MS (FAB): encontrado m/z = 459,20898 (MH+); calc. para C19H30N3O9: 459,20910.

[146] Ácido de 5-(N-hidroxilamina)-5-(acetil-O- metoxioxima)-N,N-dimetilbarbitúrico (4a). Metanol (100 mL) em 0°C foi carregado com cloreto de acetil (25 mL) ao longo de 10 minutos e, então, agitado durante cinco minutos adicionais. A esta solução ácida foi adicionada uma solução de 4b-diBoc em metanol (70 mL), e a reação turva foi deixada aquecer até a temperatura ambiente no banho de gelo durante a noite. A reação foi concentrada em vácuo, dissolvida novamente em diclorometano, filtrada, e o filtrado foi concentrado em vácuo para fornecer o composto título como um sólido pegajoso. A recristalização a partir do diclorometano e hexanos forneceu a agulhas brancas (3,98 g, 62% ao longo de duas etapas). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 6,38 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 5,32 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 3,82 (s, 3H), 3,36 (s, 6H), 1,89 (s, 3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 167,10, 152,47, 150,86, 74,93, 62,80, 29,38, 10,93. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 259,10454 (MH+); calc. para C9H14N4O5: 259,10424.

[147] 4-(acetil-O-metoxioxima)-N-fenil-5-metil- pirazolona (6b-H+). A uma suspensão de 4-acetil-N-fenil-5- metil-pirazolona (3,69 g, 17,1 mmoles) em metanol (50 mL) foi adicionada cloridrato de O-metoxihidroxilamina (1,43 g, 17,1 mmoles) e bicarbonato de sódio (1,44 g, 17,1 mmoles). A reação foi aquecida ao refluxo durante uma hora, em seguida, deixada resfriar até a temperatura ambiente. A reação foi concentrada em vácuo, dissolvida novamente em diclorometano, filtrada, e o filtrado foi concentrado em vácuo para fornecer o composto título como um óleo castanho avermelhado que solidificou em repouso (4,15 g, 99%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 7,85 (m, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,26 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 2,29 (s, 3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 170,58, 156,30, 155,54, 154,44, 146,17, 138,22, 128,93, 125,89, 120,67, 120,62, 118,75, 96,46, 147.1, 43,06, 16,94, 15,75, 12,95. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 246,12350 (MH+); calc. para C13H15N3O2: 246,12425.

[148] 4-(acetil-O-metoxioxima)-4-bromo-N-fenil-5- metil-pirazolona (6b-Br). A uma mistura bifásica de 6b-H+ (1,078 g, 4,4 mmoles) e bicarbonato de sódio (0,369 g, 4,4 mmoles) em diclorometano (20 mL) e água (20 mL) em temperatura ambiente foi adicionado bromo (0,23 mL, 4,4 mmoles) uma vez. A reação foi vigorosamente agitada por cinco minutos, transferida para um funil de separação e agitada até resultar uma camada aquosa límpida e incolor. A camada orgânica foi separada, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada, e concentrada em vácuo para fornecer o composto título como um óleo castanho (1,38 g, 97%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 7,88 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,22 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 2,44 (s, 3H), 2,22 (s, 3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 167,06, 157,83, 151,27, 137,69, 129,11, 125,78, 119,08, 62,73, 56,61, 15,71, 11,70. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 326,03272 (MH+); calc. para C13H14BrN3O2: 326,03219.

[149] 4-(acetil-O-metoxioxima)-4-(N-(N,O-bis(t- butoxicarbonil))-hidroxilamina-N-fenil-5-metil-pirazolona (6b-diboc). A uma solução de N,O-bis(t-butoxicarbonil)- hidroxilamina (0,992 g, 4,25 mmoles) em dimetilformamida (20 mL) em temperatura ambiente foi adicionado hidrato de sódio, 60% (0,187 g, 4,68 mmoles), e a reação foi agitada durante uma hora. A essa solução foi adicionado 6b-Br (1,38 g, 4,25 mmoles), e a reação prosseguiu em temperatura ambiente durante 30 minutos. A reação foi diluída com éter (50 mL) e lavada com cloreto de amônio (x2), água, e salmoura. O solvente foi removido por meio de evaporação rotativa, a qual forneceu o composto título como um óleo que solidificou e aerou em vácuo. Esse material foi usado sem purificação adicional 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 7,89 (m, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,16 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 2,24 (br.s., 3H), 2,05 (br. m., 3H), 1,52 (s, 9H), 1,40 (br. m., 9H).

[150] 4-(N-hidroxilamina)-4-(acetil-O- metoxioxima)-N-fenil-5-metil-pirazolona (6a). A uma solução de 6b-diBoc a partir da reação anterior em metanol (50 mL) em 0°C, foi adicionado cloreto de acetil (3 mL) ao longo de três minutos. A reação foi deixada aquecer até a temperatura ambiente no banho de gelo, e continuou a agitar durante a noite. A reação foi concentrada em vácuo, dissolvida novamente em diclorometano, filtrada, e o filtrado foi concentrado em vácuo para fornecer o composto título como um sólido pegajoso. A recristalização a partir de diclorometano e hexanos forneceu o composto título como agulhas brancas (0,412 g, 35% ao longo de duas etapas). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 7,92 (m, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,20 (m, 1H), 6,25 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 4,68 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 3,92 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 1,79 (s, 3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 170,23, 159,62, 148,66, 137,85, 129,07, 125,59, 119,03, 78,10, 62,59, 14,43, 11,05. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 277,12953 (MH+); calc. para C13H16N4O3: 277,13007. Procedimento geral para 7a - 12a

[151] A uma solução de pirazolonas 7b-12b (1 mmol) e cloreto de amônio (10 mmoles) em metanol (10 mL) e água (10 mL) em temperatura ambiente, foi adicionado sal de Angeli (2 mmoles) uma vez, e a reação agitada durante uma hora. A solução resultante foi extraída com diclorometano (x2), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas sobre sulfato de magnésio, e concentrada em vácuo para fornecer 7a-12a em 81% (7a) e conversões quantitativas (8a-12a). A recristalização de diclorometano e hexanos forneceram doadores de HNO pirazolona 7a - 12a na forma de sólidos brancos.

[152] 4-(N-hidroxilamina)-4-(acetil-O- metoxioxima)-N-metil-5-metil-pirazolona (7a). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 3,89 (s, 3H), 3,32 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,73 (s, 3H). 13C RMN (100MHz, CDCl3)δ: 171,68, 158,97, 76,62, 62,53, 31,77, 14,39, 10,96. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 215,11454 (MH+); calc. para C8H14N4O3: 215,11442 (MH+).

[153] 4-(N-hidroxilamina)-4-metil-N-fenil-5-metil- pirazolona (8a). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 7,93 (dd, 2H), 7,40 (dd, 2H), 7,18 (t, 1H), 5,70 (bs, 1H), 4,77 (s, 1H), 2,21 (s, 3H), 1,28 (s, 3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 174,06, 162,07, 138,12, 129,05, 125,31, 118,86, 71,23, 16,97, 13,33. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 220,10932 (MH+); calc. para C11H13N3O2 : 220,10860 (MH+).

[154] 4-(N-hidroxilamina)-4-metil-N-metil-5-metil- pirazolona (9a). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 5,59 (bs, 1H), 4,93 (s, 1H), 3,31 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,18 (s, 3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 175,58, 162,00, 69,88, 31,50, 16,60, 13,11. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 158,09320 (MH+); calc. para C6H11N3O2: 158,09295 (MH+).

[155] 4-(N-hidroxilamina)-4-metil-N-(4- clorofenil)-5-metil-pirazolona (10a). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 7,90 (d, 2H), 7,35 (d, 2H), 2,20 (s, 3H), 1,28 (s, 3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 173,96, 162,18, 136,77, 130,36, 129,09, 119,92, 71,19, 16,92, 13,31. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 254,06968 (MH+, 35Cl), 256,06703 (MH+, 37Cl); calc. para C11H12ClN3O2: 254,06963 (MH+, 35Cl), 256,06668 (MH+, 37C).

[156] 4-(N-hidroxilamina)-4-metil-N-(2- clorofenil)-5-metil-pirazolona (11a). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 7,50 (m, 1H), 7,43 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 2,19 (3H), 1,34 (3H). 13C RMN (100 MHz, CDCl3)δ: 174,71, 162,25, 134,58, 132,09, 130,64, 130,07, 129,14, 127,74, 70,09, 16,97, 13,35. HR-MS (FAB): encontrado m/z = 254,06967 (MH+, 35Cl), 256,06718 (MH+, 37Cl); calc. para C11H12ClN3O2: 254,06963 (MH+, 35Cl), 256,06668 (MH+, 37Cl).

[157] 4-(N-hidroxilamina)-4-metil-5-metil- pirazolona (12a). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ: 2,09 (s, 3H), 1,21 (s, 3H). EXEMPLO 2: Produção de HNO

[158] Os compostos aqui descritos são acreditados doar HNO baseado na estratégia geral mostrada no Esquema 4, em que X é um grupo de partida. Ácido de Piloty e seus derivados, com grupos de partida de sulfinato, são exemplos clássicos dessa estratégia. Os compostos aqui descritos empregam grupos de partida com base em carbono, de modo que pH neutro. Esquema 4 liberação HNO. Esquema Geral:

Exemplos específicos: Exemplos específicos: (a) a liberação de HNO a partir dos derivados do ácido de Medrum 1a e 2a em pH 7,4, 37ºC

(b) liberação de HNO de ácidos barbitúricos 3a e 4a em pH 7,4, 37ºC

(c) a liberação de HNO a partir de pirazolonas 6a-12a em pH 7,4, 37ºC

[159] O óxido nitroso é produzido através da dimerização e desidratação de HNO, e é o marcador mais comum para a produção de HNO (Fukuto, J.M. et al. Chem. Res. Toxicol. 2005, 18, 790-801). HNO, no entanto, pode também ser parcialmente neutralizado pelo oxigênio para produzir um produto que não produz N2O (vide Mincione, F. et al., J. Enzyme Inhibition 1998, 13, 267-284; e Scozzafava, A. et al., J. Med. Chem. 2000, 43, 3677-3687). Usando sal de Angeli (AS) como padrão de referência, as quantidades relativas de N2O liberados a partir dos compostos foram analisadas através de análise do espaço livre da cromatografia em fase gasosa (GC).

[160] A cromatografia gasosa foi realizada em um instrumento Varian CP-3800 equipado com um injetor manual 1041, um detector de captura de elétrons, e uma coluna de peneira molecular capilar 25m 5Â. O nitrogênio de grau 5,0 foi usado como um veículo (8 mL/min) e a composição (22 mL/min) de gás. O forno do injetor e o forno do detector foram mantidos em 200°C e 300°C, respectivamente. Todas as análises de óxido nitroso foram realizadas com o forno da coluna mantido constante em 150°C. Todas as injeções de gás foram feitas usando uma seringa de estanque de gases 100μL com um bloqueio de amostra. As amostras foram preparadas em frascos de espaço livre de âmbar de 15 mL com volumes pré- medidos para a uniformidade da amostra (volume de frasco real varia de 15,19-15,20 mL). Os frascos foram carregados com 5 mL de tampão PBS contendo DTPA, purgado com argônio e selado com um septo de borracha. Os frascos foram equilibrados durante pelo menos 10 minutos em 37 °C em um aquecedor de bloco seco. Uma solução de estoque 10 mM de sal de Angeli (AS) foi preparada em 10 mM de hidróxido de sódio, e os doadores de HNO 1a-4a, 6a (10 mM) foram preparados em acetonitrila ou metanol e usados imediatamente após a preparação. A partir dessas soluções de armazenamento, 50μL foi introduzido em frascos de espaço livre equilibrados termicamente individuais usando uma seringa estanque de gás, obtendo-se concentrações finais de substrato de 0,1 mM. Os substratos foram, em seguida, incubados por tempo suficiente para assegurar a completa decomposição e equilíbrio de N2O com o espaço livre. A O espaço livre (60μL) foi, então, amostrado e injetado cinco vezes sucessivas usando uma seringa estanque de gás com uma trava de amostra. Isto foi repetido para n > 3 frascos por doador. O rendimento de óxido nitroso foi médio e relatado em relação ao padrão, o sal de Angeli. Para coleta química de HNO, a glutationa (100μL de 10 mM em PBS) foi adicionada antes da adição do doador de HNO para fornecer uma concentração final de glutationa de 0,2 mM, e a amostra do espaço livre para N2O foi realizada de forma análoga, como já foi referido acima. Os resultados são fornecidos na Tabela 4. Tabela 4. Resultados da análise do Espaço livre N2O

aCompostos doadores (0,1 mM) foram incubados em 37°C em PBS, pH 7,4. Rendimentos de HNO são relatados relativamente ao doador padrão de HNO, sal de Angeli, conforme determinado por análise de espaço livre N2O (SEM ±5%; n = 3). A produção de N2O foi completamente neutralizada com glutationa adicionada (0,2 mM). bOs rendimentos de carbânions 1b-4b, 6b determinada por espectroscopia de 1H RMN. cDeterminados a partir de experimentos cinéticos UV- Vis. dRelativos ao subproduto principal, acetona. eRelativo ao rearranjo do subproduto 5. fNão determinado.

[161] Os dados apresentados em compostos 1a-4a e 6a sugerem que a capacidade destas hidroxilaminas N- substituídas para gerar HNO é baseada principalmente na natureza do grupo de partida. Para produzir HNO de forma eficiente, a força motriz para a formação de um carboânion estabilizado deve superar outras vias de reação de produção não-HNO.

[162] Com relação ao derivado de ácido de Meldrum 1a, apenas traços de quantidades foram observados de N2O. Embora o ácido de Meldrum (pKa = 4,8) seja completamente ionizado em pH 7,4 e seu derivado de 2,2-dimetil tem uma meia-vida de hidrólise de cerca de 12 horas sob condições fisiológicas, o produto principal por espectroscopia de 1H RMN é acetona, indicativo de uma via da reação de abertura de anel dominante para 1a.

[163] Comparado ao 1a, um rendimento de HNO aperfeiçoado foi observado para o derivado de ácido de Meldrum 2a. No entanto, a acetona é ainda o produto principal, indicando que o não HNO produzindo a via da reação de abertura do anel continua competitivo com a via pretendida.

[164] Similar ao 1a, os barbitúricos 3a produziram pouco HNO. Na sequência de uma decomposição de grande escala, o principal subproduto orgânico foi isolado e identificado por cristalografia de raios-X, revelando que barbitúricos 3a sofrem principalmente um rearranjo intramolecular para o composto 5 em soluções tampão de pH 7,4 (Esquema 5). Esquema 5. Via da reação principal para barbitúricos 3a

[165] Dado o impacto positivo que um grupo O- metiloxima deficiente de elétrons teve na produção de HNO a partir de derivados de ácido de Meldrum 1a e 2a, uma substituição do análogo no sistema de anel do ácido barbitúrico foi analisada. Trocando o grupo etil em 3a com um O-metiloxima em barbitúricos 4a favorece fortemente a geração de HNO, como refletido pelo alto rendimento de N2O observado após decomposição (Tabela 4). HNO foi confirmado como a fonte de N2O para este e outros precursores examinados por neutralização de glutationa, uma coleta eficaz conhecida para HNO.

[166] A decomposição de 4a foi monitorada por espectroscopia de 1H RMN em PBS (pH 7,4, temperatura ambiente), e o único subproduto orgânico detectável era carboânion 4b (FIG. 1a). Com uma pKa estimada de aproximadamente 4,2 (FIG. 2), o subproduto é completamente ionizado em pH neutro. Influenciado pelo grupo O- metiloxima, essa pKa é ligeiramente menor do que a do ácido de N,N-dimetil-barbitúrico (pKa = 4,7). A cinética da decomposição a partir de 4a a 4b foi monitorada por espectroscopia UV-Vis dada a absorbância distintiva de ânion 4b (Àmáx = 261 nm) (FIG. 3a) . A análise da velocidade de decomposição como uma função de pH revela um forte aumento no pH 8 (FIG. 3b). O barbitúrico 4a tem uma meia- vida de aproximadamente 1 min em pH 7,4 e 37°C (Fig. 3a), mas é relativamente estável em pH 4,0 e temperatura ambiente, com uma meia-vida de cerca de 1 dia sob essas condições.

[167] Para demonstrar a generalidade desta abordagem para a geração de HNO, outra N-hidroxilamina substituída com um grupo de partida baseado de carbono apropriado foi examinada. Como barbitúricos 3a e 4a, pirazolona 6a (sintetizada analogamente para compostos 1a- 4a) também tira vantagem da formação de um derivado aromático (6b) (Esquema 4c), e produz eficientemente HNO com uma meia-vida de aproximadamente 10 min em pH 7,4, 37°C (Tabela 4). Outra vantagem potencial prática apreciada por precursor 6a é que o subproduto 6b, formado junto com HNO, é um derivado de edaravona, um antioxidante potente já em uso clínico para o tratamento de derrame cerebral e doença cardiovascular.

[168] A decomposição de 6a foi analisada de similarmente a de 4a por espectroscopia 1H RMN em PBS (pH 7,4, temperatura ambiente) (Figura 1b). Os únicos subprodutos orgânicos observados por essa análise é isômeros de sin (maior) e de anti (menor) de 6b (Esquema 4c), e a abundância relativa destes isômeros é inalterada em pH elevado e baixo. O doador de 6a, bem como 2a e 4a, são observados para ser todos sin por análise de RMN e cristalografia de raios-X. O pKa de 6b/6b-H+ é calculada para ser aproximadamente 6 (Fig. 2b), deslocada abaixo do edaravona (pKa = 7) por substituição de O-metiloxima, indicando que quase todos este subproduto seja ionizado em pH 7,4. Como foi o caso do precursor 4a, a taxa de decomposição de pirazolona 6a é altamente pH, aqui com um aumento acentuado perto de pH 10 (Fig. 3c); 6a é muito mais estável em pH 4,0, com uma meia-vida de cerca de 25 horas em temperatura ambiente. As semi-vidas dos compostos 6a, 7a, 8a, 9a, 10a, 11a e 12, e a pKa de subprodutos dos compostos são apresentados na Tabela 5. Tabela 5. Meias-vidas e pKa dos subprodutos

aA: pH 7,4, 37°C, 0,1M PBS, 100μL DTPA, ar (UV/Vis); B: pH 7,4, 37°C, D2O a 10%, 0,25M PBS, não quelante, ar (1H NMR); C: pH 7,4, 37°C, D2O a 10%, 0,25M PBS, 100μL DTPA, BME (20 equiv.), argônio (1H NMR); D: pH 7,4, 37°C, D2O a 10%, 0,25M PBS, 100μL DTPA, GSH (2 equiv.), argônio (1H NMR); E: pH 7,4, 37°C, D2O a 10%, 0,25M PBS, 100μL DTPA, 12b (1 equiv.), ar (1H RMN); F: pH 7,4, 37°C, D2O a 10%, 0,25M PBS, não quelante, nitrogênio (1H NMR); G: pH 7,4, 37°C, D2O a 10%, 0,25M PBS, 100μL DTPA, ar (1H NMR) . Exemplo 3: Efeitos cardiovasculares de agudas

[169] Os efeitos cardiovasculares agudos de compostos 4a e 6a, quando administrados por via intravenosa em ratos Sprague-Dawley em uma taxa de infusão de 100μg/kg/min, foram examinados por meio de análise curva (giros) de pressão-volume (PV). Famílias/relação PV foram gerados através da variação da pré-carga e os índices de hemodinâmica foram comparados aos valores de parâmetros. Cada artigo teste foi administrado para cinco ratos.

[170] Os ratos foram intraperitonealmente (IP) anestesiados para efeito com pentobarbital (~50 mg/kg), rapados e posicionados em recúbito dorsal, incubado via endotraqueal e ventilado (~90 respirações/min,~2,5 mL do volume corrente com O2 a 95%/5% CO2) com um ventilador de pequeno animal ajustável (Harvard Apparatus). A anestesia foi mantida com uma infusão contínua de pentobarbital (para efeito, ~3 a 5 mg/kg/h, IV) até à conclusão da experiência através de um cateter interno colocado na veia femural. Posteriormente, os eletrodos da agulha transtorácica formando uma única guia ECG foram colocados. Para a avaliação do VE mecano-energético, a artéria carótida direita foi isolada, dissecada livre do tecido circundante, e canulada com um cateter de alta condutância de fidelidade 2F/micromanômetro (Millar Instruments). Esse cateter foi avançado regressivo através da válvula aórtica e na câmara de VE a fim de determinar simultaneamente pressão e o volume (através de condutividade) do ventrículo esquerdo. Um cateter de balão de tamanho adequado (preenchido com água destilada) foi colocado e avançado na veia cava inferior, através de uma veia femoral; breve inflação deste oclusor/balão é usada para diminuir a pré-carga do miocárdio agudo. Entretanto, a fim de registrar pressões arteriais, um cateter de micromanômetro de alta fidelidade 2F (Millar Instruments) foi inserido na artéria femoral e avançado para a aorta abdominal. Finalmente, um cateter interno foi colocado na veia jugular para administração do artigo de teste.

[171] Uma vez que o estado hemodinâmico estacionário foi alcançado seguindo instrumentação, pré- carga do ventrículo esquerdo foi reduzida de forma aguda por meio de breves oclusões da veia cava (através da inflação transiente da oclusão do vaso) a fim de gerar uma família de curvas/giros de pressão-volume; até três oclusões foram realizadas, permitindo a recuperação hemodinâmica entre os testes. Seguindo a coleta dos dados das bases de referência hemodinâmicos, a infusão do artigo teste foi iniciada em uma taxa de infusão de 100g/kg/min; em 10μL/min. As análises de pressão e volume foram realizadas novamente em aproximadamente 30 min e 45 min após o início da dose.

[172] O dado resultante de pressão e volume do ventrículo esquerdo foi analisado desconectado (IOX/ECG automático; EMKA Technologies) a fim de gerar relações representando o estado energético e contrátil do miocárdio. As pressões arteriais sistólicas (SAP), diastólicas (DAP) e médias (MAP) foram coletadas. Índices mecânicos e/ou geométricos ventricular esquerdo foram obtidos a partir da pressão (ESP, EDP, dP/dt máx/min, o tempo constante de relaxamento - tau [baseada no decaimento mono-exponencial com assíntota diferente de zero]) e sinal do volume (ESV, EDV, SV). Além disso, as seguintes medidas foram obtidas a partir de dados de pressão-volume (giros PV) do ventrículo esquerdo gerados durante breves períodos de redução da pré- carga: • Área de volume e pressão (PVA) e de trabalho sistólico (SW). • Relações de volume e pressão da sistólica final (ESPVR) e diastólica final (EDPVR). • Relação de volume sistólica e pressão sistólica final (Elastância Arterial, Ea).

[173] Os dados são apresentados como médias com erros padrões (média ± SEM) na Tabela 6. Tabela 6. Efeitos cardiovasculares agudos em ratos Sprague- Dawley

EXEMPLO 4: Modelo in vitro para Determinar a Capacidade de Compostos ou Composições Farmacêuticas para Tratar, Prevenir e/ou Retardar o Aparecimento e/ou o Desenvolvimento de uma Doença ou Condição. Doenças Cardiovasculares ou Condições

[174] Em modelos in vitro de doença cardiovascular também pode ser usado para determinar a capacidade de qualquer um dos compostos e composições farmacêuticas aqui descritas para tratar, prevenir e/ou retardar o aparecimento e/ou o desenvolvimento de uma doença cardiovascular ou condição em um indivíduo. Um modelo exemplar in vitro de doença cardíaca é descrito abaixo.

[175] Modelos in vitro podem ser utilizados para avaliar as propriedades de vasorelaxantes dos compostos e composições farmacêuticas. Tensão isométrica em segmento de anel aórtico torácico do rato isolado pode ser medida como descrito anteriormente por Crawford, J.H. et al., Blood 2006, 107, 566-575. Após sacrifício, os segmentos do anel da aorta são removidos e limpos do tecido adiposo e de adesão. Os vasos são, então, cortados em segmentos de anéis individuais (2-3 mm de largura) e suspensos a partir de um transdutor de força - deslocamento em um banho de tecido. Os segmentos de anel são banhados em 37°C em uma solução tamponada de bicarbonato de Krebs-Henseleit (K-H) da seguinte composição (mM): NaCl 118; KCl 4,6; NaHCO3 27,2; KH2PO4 1,2; MgSO4 1,2; CaCl2 1,75; Na2EDTA 0,03; e glicose 11,1 e perfundidos continuamente com O2 a 21%/CO2 a 5%/N2 a 74%. Uma carga passiva de 2g é aplicada a todos os segmentos de anel e mantida neste nível ao longo dos experimentos. No início de cada experiência, os segmentos de anel tratados com indometacina são despolarizados com KCl (70 mM) para determinar a capacidade máxima de contração do vaso. Os anéis são, então, lavados extensivamente e deixados equilibrar. Para os experimentos posteriores, os vasos são contraídos submaximalmente (50% da resposta de KCl) com fenilefrina (PE, 3 x 10-8 - 10-7 M) , e L-NMMA, 0,1 mM, também é adicionado para inibir a eNOS e produção endógena de NO. Após o desenvolvimento de tensão atingir um patamar, os compostos ou composições farmacêuticas são adicionados cumulativamente ao banho de vaso e os efeitos da tensão monitorados.

[176] Em modelos in vitro podem ser utilizados para determinar os efeitos dos compostos e composições farmacêuticas em mudanças na força desenvolvida e no cálcio intracelular nos músculos do coração. Força desenvolvida e cálcio intracelular podem ser medidos em trabéculas de rato do normal ou do doente (isto é, ratos com insuficiência cardíaca congestiva ou hipertrofia) como descrito anteriormente (Gao W.D. et al., Circ. Res. 1995, 76: 10361048). Os ratos (Sprague-Dawley, 250-300 g) são usados nestes experimentos. Os ratos são anestesiados com pentobarbital (100 mg/kg) via injeção intra-abdominal, o coração exposto por esternotomia mediana, rapidamente removido e colocado em uma placa de dissecação. A aorta é canulada e o retrógrado perfundido no coração (~15 mM/min) com uma solução de Krebs-Henseleit (H-K) de dissecação equilibrada com O2 a 95% e CO2 a 5%. A solução de K-H de dissecação é composta por (mM): NaCl 120, NaHCO3 20, KCl 5, MgCl2 1,2, glicose 10, CaCl2 0,5, e monoximina de 2,3- butanodiona (BDM) 20, pH 7,35-7,45 em temperatura ambiente (21-22°C). Trabéculas do ventrículo direito do coração são dissecadas e montadas entre um transdutor de força e um braço de motor e superfundidas com solução de K-H normal (KCl, 5 mM) em uma taxa de ~10 mL/min e estimuladas em 0,5Hz. Dimensões dos músculos são medidas com uma retícula de calibração no ocular do microscópio de dissecção (x40, resolução ~10μm).

[177] A força é medida usando transdutor de força, e é expressa em millinewtons por milímetro quadrado de área da seção transversal. O comprimento do sarcômero é medido por difração de laser. O comprimento restante do sarcômero é ajustado em 2,20-2,30 μm ao longo dos experimentos.

[178] O cálcio intracelular é medido usando a forma de ácido livre de fura-2, como descrito em estudos anteriores (Gao et al., 1994; Backx et al., 1995; Gao et al., 1998). O sal de fura-2 de potássio é micro injetado iontoforeticamente em uma célula e permitido a espalhar por todo o músculo (via junções fissuradas). A ponta do elétrodo (~0,2μm em diâmetro) é cheia com sal fura-2 (1 mM) e o restante do elétrodo é cheio com 150 mM de KCl. Depois de um empalamento sucedido em uma célula superficial no músculo não estimulado, uma corrente hiperpolarizante de 510 nA é passada continuamente para ~15 min. A epifluorescência fura-2 é medida através da excitação em 380 e 340 nm. A luz fluorescente é coletada em 510 nm por um tubo fotomultiplicador. A produção do fotomultiplicador é coletada e digitalizada. Rianodina (1,0μm) é usada para permitir a ativação de estado estacionário. Depois de 15 minutos de exposição à rianodina, os diferentes níveis de tetanizações são induzidos brevemente (~4-8 segundos) estimulando os músculos em 10 Hz no cálcio extracelular variado (0,5-20 mM). Todas as experiências são realizadas em temperatura ambiente (20-22°C). Doenças ou condições implicando a isquemia/reperfusão

[179] Os modelos in vitro podem também ser usados para determinar a capacidade de qualquer um dos compostos e composições farmacêuticas aqui descritas para tratar, desenvolvimento de uma doença ou condição implicando a lesão de isquemia/reperfusão em um indivíduo. Câncer

[180] Atividades anti-tumor dos compostos aqui descritos podem ser avaliadas usando ensaios de proliferação in vitro de células de tumor usando métodos bem conhecidos, tais como os descritos em Norris A. J. et al. Intl. J. Cancer 2008, 122:1905-1910.

[181] As células de uma linha celular apropriada, por exemplo, a linha de células de câncer da mama humana MCF-7, foram semeadas em placas de microtitulação de cultura de tecidos de 96 cavidades em ~4000 células por cavidade para uma incubação durante a noite. Diluições em série de 10 vezes dos compostos de teste são adicionadas, e as células são incubadas durante 72 h. A capacidade da célula é determinada usando o Ensaio de Capacidade Celular Luminescente CellTiter-GloTM (Promega; Madison, WI). IC50 é medida como a concentração do fármaco necessário para inibir o crescimento celular em 50%. Exemplo 5: Modelos Em Vivo e/ou Ex vivo para Determinar a Capacidade de Compostos e Composições Farmacêuticas para Tratar, Prevenir e/ou Retardar o aparecimento e/ou o Desenvolvimento de uma Doença ou Condição Doenças Cardiovasculares ou Condição

[182] Modelos em vivo de doença cardiovascular também podem ser usados para determinar a capacidade de qualquer um dos compostos e composições farmacêuticas aqui descritas para tratar, prevenir e/ou retardar o aparecimento e/ou o desenvolvimento de uma doença cardiovascular ou condição em um indivíduo. Um modelo animal exemplificativo de doença cardíaca é descrito abaixo.

[183] Os efeitos cardiovasculares em vivos obtidos com um composto ou composição farmacêutica podem ser avaliados em um cão (normal) de controle. O estudo é realizado em cães (machos) mestiços adultos (25 kg) cronicamente instrumentados para análise hemodinâmica consciente e coleta de sangue, como descrito anteriormente (Katori, T. et al., Circ. Res. 2005, 96, 234-243). Transdutores de micromanômetro no ventrículo esquerdo fornecem pressão, enquanto os cateteres descendentes da aorta e da atrial direita fornecem pressões de fluidos e canais de amostragem. Sonomicrometros endocárdios (anterior-posterior, septo-lateral) medem dimensões de eixo curto, um oclusor pneumático ao redor da veia cava inferior facilitou as manipulações de pré-carga para análise da relação de pressão. Elétrodos de estimulação epicárdicos são colocados no átrio direito, e outro par é colocado no ventrículo direito livre da parede ligada a um marca-passo permanente para induzir à falha cardíaca a estimulação rápida. Após 10 dias de recuperação, os animais são avaliados em ritmo sinusal de base de referência e com estimulação auricular (120-160 bpm). Medidas incluem gravações conscientes hemodinâmicas para mecânicas cardíacas.

[184] Os compostos aqui descritos são administrados a um cão de controle saudável com a dose de 1-5 μg/kg/min; e o dado cardiovascular resultante é obtido. Demonstração de que um composto aqui descrito melhora a hemodinâmica cardíaca em corações com insuficiência cardíaca congestiva: Depois de completar protocolos sob condições de base de referência, a insuficiência cardíaca congestiva é induzida por ritmo de taquicardia (210 bpm x 3 semanas, 240 bpm x 1 semana), como anteriormente descrito (Katori, T., et al., Circ. Res. 2005, 96: 234-243). Resumidamente, a pressão diastólica final e dP/dtmáx são medidos semanalmente para monitorar a progressão da falha. Quando os animais demonstram um aumento na EDP mais de 2x, e dP/dtmáx de > 50% da base de referência são considerados prontos para estudos de insuficiência cardíaca congestiva.

[185] Os valores para os compostos de teste e as composições farmacêuticas são obtidos após infusão i.v. contínua de 15 min (2,5 ou 1,25 μg/kg/min) no controle e preparações de insuficiência cardíaca, respectivamente, tanto na ausência quanto na presença de restauração do volume. Para comparação, as mesmas medições hemodinâmicas são obtidas com AS em preparações de insuficiência cardíaca. Doenças ou Condições Implicando Isquemia/Reperfusão

[186] Modelos ex-vivo de isquemia/reperfusão também podem ser usados para determinar a capacidade de qualquer um dos compostos aqui descritos para tratar, prevenir e/ou retardar o aparecimento e/ou o desenvolvimento de uma doença ou condição implicando a lesão de isquemia/reperfusão em um indivíduo. Um modelo exemplar ex vivo de lesões de isquemia/reperfusão está descrito abaixo.

[187] Ratos Wistar machos são alojados em gaiolas idênticas e permitidos o acesso à água da torneira e dieta padrão de roedor ad libitum. Cada animal é anestesiado com 1 g/kg de i.p. de uretano de 10 min depois de heparina (2500 U, i.m.) de tratamento. O peito é aberto e o coração é rapidamente removido, colocado em solução tampão gelada e pesada. Corações de ratos isolados são ligados a um aparelho de perfusão e retrogradamente perfundido com solução tampão oxigenado em 37°C. Os corações são instrumentados como anteriormente descrito em Rastaldo et al., Am. J. Physiol. 2001, 280, H2823-H2832, e Paolocci et al., Am. J. Physiol. 2000, 279, H1982-H1988. O fluxo é mantido constante (aproximadamente 9 mL/min/g do peso molhado) para atingir uma pressão de perfusão coronária típica de 85-90 mmHg. A proporção constante de 10% da taxa de fluxo é aplicada por meio de uma das duas bombas de perfusão (Terumo, Tóquio, Japão) usando uma seringa de 50 mL ligada à cânula aórtica. Aplicações de fármaco são asseguradas pela ligação da seringa contendo tampão sozinho à seringa da outra bomba contendo o fármaco (composto ou composição farmacêutica aqui descrita) dissolvido em um veículo em uma concentração de 10x para a concentração final desejada no coração. Um pequeno orifício na parede do ventrículo esquerdo permite a drenagem do fluxo de tebésio, e um balão de cloreto de polivinil é colocado no ventrículo esquerdo e conectado a um eletromanômetro para registro da pressão ventricular esquerda (LVP). Os corações são eletricamente ritmados em 280-300 bpm e mantidos em uma câmara com temperatura controlada (37°C). Pressão de perfusão coronária (CPP) e fluxo coronariano são monitorados com um segundo eletromanômetro e uma sonda de fluxo de eletromagnética, respectivamente, ambos colocados ao longo da linha de perfusão. Pressão ventricular esquerda, o fluxo coronariano e pressão de perfusão coronária são gravados usando um gravador TEAC R-71, digitalizados em 1000 Hz e analisados desconectados com software DataQ-Instruments/CODAS, o qual permite a quantificação da taxa máxima de aumento de LVP durante sístole (dP/dtmáx).

[188] Corações são perfundidos com solução de Krebs-Henseleit gaseificada com O2 a 95% e CO2 a 5% com a seguinte composição: 17,7 mM de bicarbonato de sódio, 127 mM de NaCl, 5,1 mM de KCl, 1,5 mM de CaCl2, 1,26 mM de MgCl2, 11 mM de D-glicose, suplementado com 5μg/mL de lidocaína.

[189] O composto de teste ou as composições farmacêuticas são diluídos em tampão imediatamente antes de usar. Os corações são deixados a estabilizar durante 30 min, e os parâmetros de base de referência são registrados. Tipicamente, o fluxo coronário é ajustado dentro do primeiro 10 min e mantido constante a partir deste. Depois de 30 min de estabilização, os corações são atribuídos aleatoriamente a um dos grupos de tratamento, e submetidos a 30 minutos global, isquemia de fluxo zero, seguida por 30 min de reperfusão (I/R). A estimulação do coração é parada no início do período de isquemia e reiniciada depois do terceiro minuto da reperfusão.

[190] Corações em um grupo de controle são perfundidos com um tampão para 29 min adicionais após a estabilização. Corações tratados são expostos a um composto de teste ou uma composição farmacêutica (por exemplo, concentração final 1μM de cerca de 20 minutos seguido por um período de 10 minutos de lavagem com tampão).

[191] Em todos os corações, a estimulação é suspensa no aparecimento da isquemia e reiniciada em 3 minutos seguindo reperfusão. Como as preparações isoladas do coração podem deteriorar ao longo do tempo (tipicamente depois de 2-2,5 horas de perfusão), a duração do refluxo é limitada a 30 minutos a fim de minimizar os efeitos produzidos por perfusão de cristalóide no desempenho do coração, e consistentemente com outros relatórios.

[192] A avaliação da função ventricular: Para se obter a LVP máxima desenvolvida, o volume do balão intra-ventricular é ajustado para um LVP diastólica final de 10 mmHg durante o período de estabilização, como relatado na Paolocci, supra, e Hare et al., J. Clin. Invest. 1998, 101, 1424-1431. Mudanças na LVP desenvolvida, dP/dtmáx e o valor diastólico final induzido pelo protocolo de I/R são monitorados continuamente. A diferença entre o LVP diastólico final (EDLVP) antes do final do período de isquemia e durante as condições de pré-isquémicas ser usada como um índice da extensão do desenvolvimento da contratura. Recuperação máxima de LVP desenvolvida e dP/dtmáx durante a reperfusão é comparada com os respectivos valores pré-isquêmicos.

[193] Avaliação da lesão miocárdica: Liberação de enzimas é uma medida de lesão miocárdica grave que ainda tem que evoluir para lesão celular irreversível. As amostras de efluente coronário (2 mL) são retiradas com um cateter inserido no ventrículo direito através da artéria pulmonar.

[194] As amostras são colhidas imediatamente antes da isquemia e em 3, 6, 10, 20 e 30 min de reperfusão. A liberação de LDH é medida como anteriormente descrita por Bergmeyer et al., Verlag Chemie 1974. Dados estão expressos como os valores acumulados para todo o período de refluxo.

[195] Para corroborar os dados relativos a lesões do miocárdio determinadas pela liberação de LDH, as áreas de infarto também são avaliadas de forma cega. No fim do curso (30 min de reperfusão), cada coração é rapidamente removido do aparelho de perfusão, e o VE dissecado em fatias de 2-3 mm de circunferência. Após 15 min de incubação em 37°C em solução a 0,1% de azul de tetrazólio de nitro em tampão de fosfato como descrito em Ma et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 1999, 96, 14617-14622, tecido necrótico não marcado é separado do tecido marcado capaz. As áreas de tecido viável e necrótico são cuidadosamente separadas por um observador independente que não tem conhecimento da origem dos corações. O peso dos tecidos necróticos e não necróticos é, então, determinado e a massa necrótica expressa como uma percentagem da massa ventricular esquerda total.

[196] Os dados podem ser submetidos a métodos estatísticos, como ANOVA seguida pela correção de Bonferroni para testes post hoc t. Câncer

[197] Atividades anticancerígenas de compostos aqui descritas podem ser avaliadas usando modelos de xenotransplante de camundongo em vivo usando os métodos descritos em Norris A. J. et al., Intl. J. Cancer 2008, 122, 1905-1910 e Stoyanovsky, D.A. et al., J. Med. Chem. 2004, 47, 210-217.

[198] Os camundongos são inoculados com células de tumor apropriadas por injeção subcutânea no flanco inferior. A terapia pode ser iniciada após 1-3 semanas quando os tumores atingiram um volume médio de ~50-60 mm3. Diâmetros dos tumores são medidos com compassos de calibre digitais, e o volume do tumor é calculado. A eficácia anti- tumoral dos compostos de teste é avaliada por comparação da dimensão do tumor no grupo de teste para este no grupo de controle. EXEMPLO 6: Estudos em vivo em Animais (Tratamento Agudo, Infusão Intravenosa)

[199] Esse exemplo demonstra a eficácia dos compostos e composições farmacêuticas aqui descritas para a pressão da artéria pulmonar inferior em ratos com PH induzida pela monocrotalina.

[200] Ratos (250-250 g) são anestesiados via uma injeção intra-muscular (i.m.) de cetamina/xilazina (80/10 mg/kg). Uma metade da dose (40 mg/kg de cetamina/5 mg/kg de xilazina) é dada como anestesia suplementar, se necessária. Os animais são colocados em um bloco de aquecimento ajustado para manter a temperatura corporal em aproximadamente 37°C. A temperatura corporal é monitorada durante todo o experimento. Uma vez que se perde a consciência, um transdutor da pressão é inserido em uma artéria femural para medir a pressão sanguínea arterial. Um cateter cheio de líquido é inserido através da veia jugular direita para a artéria pulmonar para medir a pressão da artéria pulmonar através de um transdutor de pressão. Uma cânula é colocada na veia jugular esquerda para administração da dose.

[201] Monocrotalina é administrada através de uma única injeção subcutânea (60 mg/kg) cerca de 3 semanas antes do procedimento terminal. A pressão da artéria pulmonar de linha de referência de >30 mmHg é requerida para iniciar a pesquisa dos compostos aqui descritos. Um doador de nitroxil ou um composto ou uma composição farmacêutica como aqui descrito, é administrado por via intravenosa na forma de escalonamento de dose em intervalos 20 minutos de doses de 10 a 300 μg/kg/min. Índices hemodinâmicos, incluindo MAP (pressão arterial média), SAP (pressão arterial sistólica), DAP (pressão arterial diastólica), HP (frequência cardíaca), MPAP (pressão arterial pulmonar média), SPAP (pressão arterial sistólica), DPAP (pressão arterial pulmonar diastólica), são medidos. Os resultados dos compostos de teste são ilustrados na FIG. 1, FIG. 2 e FIG. 3.

[202] Para o procedimento do terminal, depois da instrumentação cirúrgica e um período de aproximadamente 10 minutos antes da dose de equilíbrio, as soluções de composto teste ou de composição farmacêutica são infundidas através do cateter através da veia jugular. No final da experiência, os ratos são sacrificados sob anestesia de eutanásia através de uma overdose de pentobarbital. EXEMPLO 7: Estudos em vivo em animais (Tratamento Agudo, Infusão Intravenosa ou administração por inalação)

[203] Esse exemplo demonstra a eficácia dos compostos e composições farmacêuticas aqui descritas para a pressão da artéria pulmonar inferior em cães com hipertensão pulmonar induzida por hipoxia.

[204] Cães saudáveis (10-15 kg) são anestesiados com pentobarbital (20-40 mg/kg, por via intravenosa) e é mantida a anestesia por infusão contínua de pentobarbital em uma taxa de 5-10 mg/kg/h. Os cães são entubados através de uma traqueotomia, e respiração artificial (durante o monitoramento de oxigênio inspirado e CO2 expirado). A veia e a artéria femoral esquerda são canuladas para administração de uma dose e gravação arterial da pressão arterial. A veia jugular direita é canulada com um cateter de pressão de artéria pulmonar (Swan Ganz), para medir a pressão arterial pulmonar (PAP) e a pressão capilar pulmonar (PCP). Esse cateter é também usado para a medição do resultado cardíaco por meio de técnicas de termodiluição seguindo injeção rápida de 5 mL de solução salina fria. Os eletrocardiogramas são monitorados durante todo o experimento.

[205] Durante as medições de referência e de controle, oxigênio inspirado é mantido a 40%. A hipoxia é induzida pela adição de nitrogênio para o gás respiratório em uma taxa suficiente para reduzir o oxigênio respirado para 10% (FiO2 = 10%). Cada condição hipóxica é mantida por 15-30 minutos e, em seguida, condição de controle normóxico (FiO2 = 40%) é retornada. Cada dose do composto teste ou da composição farmacêutica é administrada por via intravenosa durante a condição hipóxica 30 minutos; nenhum fármaco é infundido durante a normóxia subsequente até a próxima dose ser dada. Os compostos testes ou as composições farmacêuticas são administrados por via intravenosas na faixa de 1 a 100μg/kg/min e vários índices hemodinâmicos são registrados. Alternativamente, nestes compostos de teste ou composições farmacêuticas experimentadas são administrados usando um nebulizador de inalação em níveis de dosagem de 0,1-1 g/kg em 5-10 período de tempo durante cada período de hipoxia. EXEMPLO 8: Estudos em vivo em animais (Tratamento Crônico, Infusão Intravenosa Contínua)

[206] Esse exemplo demonstra a eficácia dos compostos e composições farmacêuticas aqui descritas para retardar a progressão da doença em ratos com PH induzida pela monocrotalina.

[207] Os ratos (200-250g) são implantados cirurgicamente com um transdutor de pressão equipado com transmissor de telemetria. O conjunto de transmissor é protegido internamente; o cateter cheio de fluido é colocado na veia jugular com a ponta do transdutor de pressão posicionado no ventrículo direito para a coleta de dados de pressão do ventrículo direito (RVP). Além disso, todos os animais, com exceção do grupo sham, são implantados com cânulas na veia femoral para efeitos de dosagem.

[208] Monocrotalina (MCT) é administrada para animais de controle do veículo por injeção subcutânea. Uma semana após a injeção de MCT, os animais de controle de veículo são administrados em uma solução salina ou uma dose baixa ou elevada de um composto teste ou da composição farmacêutica por infusão intravenosa contínua durante duas semanas. O artigo de teste e o controle de veículo são administrados por bomba externa. Observações clínicas semanais são realizadas em animais.

[209] Para avaliações cardiovasculares, os dados RVP são coletados com animais deixados em circulação livre na gaiola. Os animais são monitorados durante pelo menos 24 horas antes da administração de MCT. RVP também é monitorado em 24 horas seguindo o final da infusão de duas semanas, e ocorre durante pelo menos 24 horas. Todos os animais são autopsiados no final do estudo. Pesos dos pulmões e da artéria pulmonar, coração e cada câmara individual são avaliados. Os pesos do coração, VE, VD, e a relação de peso do corpo são relatados. As pequenas artérias pulmonares de cada animal são avaliadas quanto à espessura da camada média, neoíntima e hipertrofia do músculo liso. EXEMPLO 9: Estudos in vivo em animais (Tratamento Crônico, Administração Oral)

[210] Esse exemplo demonstra a eficácia dos compostos e composições farmacêuticas aqui descritas para retardar a progressão da doença em ratos com PH induzida pela monocrotalina.

[211] A metodologia geral para esse experimento é similar aquela do Exemplo 7 acima. Uma diferença é que a rota de administração é oral, com um regime de dosagem de uma a quatro vezes por dia em níveis de dosagem de 0,1-1 g/kg. EXEMPLO 10: Estudos em vivo em Animais (Tratamento Crônico, Infusão Intravenosa Contínua)

[212] Esse exemplo demonstra a eficácia dos compostos e das composições farmacêuticas aqui descritas para inverter a progressão da doença em ratos com HP induzida por monocrotalina.

[213] Neste estudo, os ratos machos (200-250 g) são implantados cirurgicamente com um transmissor de telemetria equipado com transdutor de pressão. O conjunto transmissor é protegido internamente; o cateter cheio de fluido é colocado na veia jugular com a ponta do transdutor de pressão posicionado no ventrículo direito para a coleta de dados de pressão do ventrículo direito (RVP). Além disso, todos os animais, com exceção do grupo sham, são implantados com cânulas na veia femoral para efeitos de dosagem.

[214] O veículo e o artigo de controle, monocrotalina (MCT), são administrados pela injeção subcutânea. Três semanas após a injeção de MCT, os animais são administrados em uma solução salina ou dose baixa ou elevada de um composto teste ou de uma composição farmacêutica por perfusão intravenosa contínua durante três semanas. O composto teste ou a composição farmacêutica e o artigo de controle de veículo são administrados por bomba externa. Observações clínicas semanais são realizadas em animais.

[215] Para avaliações cardiovasculares, o dado RVP é coletado com animais deixados em circulação livre na gaiola. Os animais são monitorados durante pelo menos 24 horas antes da administração de MCT. RVP também é monitorada durante, pelo menos, 24 horas seguindo o final da infusão de duas semanas. Todos os animais são autopsiados no final do estudo. Pesos dos pulmões e da artéria pulmonar, coração e cada câmara individual são avaliados. Os pesos do coração, VE, VD, e a razão em peso do corpo são relatados. As pequenas artérias pulmonares de cada animal são avaliadas quanto à espessura da camada média, neoíntima e hipertrofia do músculo liso. EXEMPLO 11: Estudos em vivo em animais (Tratamento Crônico, Administração Oral)

[216] Esse exemplo demonstra a eficácia dos compostos e composições farmacêuticas aqui descritas para inverter a progressão da doença em ratos com HP induzida por monocrotalina.

[217] A metodologia geral é similar a esta do Exemplo 9, com a exceção de que a rota de administração é oral, com um regime de dosagem de um a quatro vezes por dia em níveis de dosagem de 0,1-1 g/kg. EXEMPLO 12: Estudos em vivo em Animais (Tratamento crônico, Administração por Inalação)

[218] Esse exemplo demonstra a eficácia dos compostos e das composições farmacêuticas aqui descritas para retardar a progressão da doença em ratos com PH induzida pela monocrotalina.

[219] A metodologia geral é similar a este Exemplo 7 acima, com a exceção de que a rota de administração é por via de inalação, com um regime de dosagem de um a quatro vezes por dia em níveis de dosagem de 0,1-1 g/kg. EXEMPLO 13: Estudos em vivo em animais (Tratamento Crônico, Administração por Inalação)

[220] Esse exemplo demonstra a eficácia dos compostos e das composições farmacêuticas aqui descritas para inverter a progressão da doença em ratos com HP induzida por monocrotalina.

[221] A metodologia geral é similar a esta do Exemplo 7, com a exceção de que a rota de administração é por via de inalação, com um regime de dosagem de um a quatro vezes por dia em níveis de dosagem de 0,1-1 g/kg. EXEMPLO 14: Estudos em vivo em Animais (Tratamento Agudo, Infusão Intravenosa e Administração por Inalação)

[222] Esse exemplo demonstra a eficácia dos compostos e das composições farmacêuticas aqui descritas para a pressão da artéria pulmonar inferior em cães com PH pulmonar induzida por tromboxano.

[223] PH experimental é induzido por infusão contínua de um análogo de agonista de receptor de tromboxano A2 (por exemplo, U46619, Tocris Bioscience). A taxa de infusão de agonista análogo do receptor do tromboxano A2 (0,1-1 mg/kg/min) é ajustada para manter uma pressão arterial sistólica pulmonar (PAP) em 40 mmHg em cães anestesiados e ventilados mecanicamente. A veia e a artéria femoral esquerda são canuladas para administração de uma dose e gravação arterial da pressão arterial. A veia jugular direita é canulada com um cateter de artéria pulmonar (cateter Swan Ganz), para medir a pressão arterial pulmonar (PAP) e a pressão capilar pulmonar (PCP). Esse cateter é também usado para a medição do resultado cardíaca por meio de técnicas de termodiluição seguidas por injeção rápida de 5 mL de solução salina fria. Os eletrocardiogramas são monitorados durante todo o experimento.

[224] Uma vez que um estado estacionário estável na hemodinâmica é conseguido, várias doses dos compostos teste ou as composições farmacêuticas são administradas por via intravenosa em taxas de doses na faixa de 1 a 100 μg/kg/min e vários índices hemodinâmicos são registrados. Alternativamente, nessa experiência, os compostos testes ou as composições farmacêuticas são administrados usando um nebulizador de inalação em níveis de dosagem de 0,1-1 g/kg no período de tempo de 5-10. EXEMPLO 15: Estudos em vivo Humanos (Tratamento Agudo, Infusão Intravenosa e Administração por Inalação)

[225] Esse exemplo demonstra a eficácia de doadores HNO para baixar a pressão arterial pulmonar em pacientes humanos, com várias causas de hipertensão pulmonar.

[226] Os pacientes (ou gênero) com várias causas de hipertensão pulmonar são selecionados para este estudo. Características hemodinâmicas de base de referência dos pacientes são avaliadas por vários índices hemodinâmicos coletados utilizando cauterização cardíaca direita (por exemplo, pressão do átrio direito, pressão média da artéria pulmonar, índice cardíaco) e perfis de gases no sangue. O ritmo cardíaco é monitorado com eletrocardiograma contínuo, e a pressão arterial é monitorada através de um medidor de pressão. Os pacientes são testados quanto à reversibilidade da hipertensão pulmonar usando óxido nítrico (NO) por inalação. Índices hemodinâmicos são, então, reavaliados. Uma vez que todos os índices voltaram à base de referência em cessação da entrega do NO, e uma base de referência é estabelecida, várias doses de doadores de HNO são administradas por via intravenosa em taxas de doses nas faixas de 1 a 100μg/kg/min (ou dose contínua ou em uma forma de escalonamento de dose) e vários índices hemodinâmicos são gravados. Alternativamente, nesse experimento, doadores de HNO são administrados usando um nebulizador de inalação em níveis de dosagem de 0,1-1 g/kg em um período de tempo de 5-10 minutos. Índices hemodinâmicos são avaliados em vários momentos durante o período de infusão. Alguns pacientes recebem placebo em vez de doador de HNO de forma randomizada duplo-cego. A partir dos dados coletados durante vários períodos de tentativa, as resistências vasculares pulmonares e sistêmicas são calculadas. EXEMPLO 16: Ensaios Clínicos em Humanos para Determinar a Capacidade de Compostos ou de Composições Farmacêuticas para Tratar, Prevenir e/ou Retardar o Aparecimento e/ou o Desenvolvimento de uma Doença ou Condição

[227] Qualquer um dos compostos e das composições farmacêuticas aqui descritas pode também ser testado em seres humanos para determinar a capacidade dos compostos ou composições farmacêuticas para tratar, prevenir e/ou retardar o aparecimento e/ou o desenvolvimento de uma doença ou condição. Métodos padrão podem ser usados para estes ensaios clínicos. Em um método exemplar, os indivíduos com uma doença ou condição aqui descrita, tais como insuficiência cardíaca congestiva, estão inscritos em estudo de farmacodinâmica fase I, farmacocinética e tolerabilidade de uma terapia usando os compostos aqui descritos em protocolos padrão. Em seguida, um ensaio controlado randomizada duplo-cego, fase II, é realizado para determinar a eficácia dos compostos usando protocolos padrão.

[228] Será evidente para os peritos na técnica que as modalidades específicas da invenção podem ser direcionadas a um, alguns ou todos os itens das modalidades acima e abaixo indicadas, em qualquer combinação.

[229] Embora a invenção tenha sido descrita em algum detalhe por meio de ilustração e exemplo para fins de clareza de compreensão, é evidente para os especialistas na técnica que várias mudanças podem ser feitas e equivalentes podem ser substituídos sem sair do verdadeiro âmbito e escopo da invenção. Portanto, a descrição e os exemplos não devem ser interpretados como limitando o escopo da invenção.

[230] Todas as referências, publicações, patentes e pedidos de patente aqui revelados são deste modo incorporados por referência na sua totalidade.

Claims

1. Composto da fórmula (I) ou (II)

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste, caracterizado pelo fato de que: X e Z são independentemente selecionados a partir de -O-, -NR3-, -S-, e -CR3R4-; Y é selecionado a partir de -C(=O)- e -CR5R6-; RA é selecionado a partir de alcóxi C1-C8, aril C5-C10, e -C(=NOR7)R8, em que o alcóxi e aril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes; RB é selecionado a partir de alquil C1-C8, alquenil C2C8, alquinil C2-C8, alcóxi C1-C8, aril C5-C10, -C(=O)R7, - C(=NR7)R8, e -C(=NOR7)R8, em que o alquil, alquenil, alquinil, alcóxi e aril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes; R1 é selecionado a partir de -H, alquil C1-C8, alquenil C2-C8, alquinil C2-C8, aril C5-C10, e heteroaril C5-C10, em que o alquil, alquenil, alquinil, aril e heteroaril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes; e R2, R3, R4, R5, R6, R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de -H, alquil C1-C8, alquenil C2C8, alquinil C2-C8, aril C5-C10, e heteroaril C5-C10, em que o alquil, alquenil, alquinil, aril, e heteroaril são não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes.

2. Composto, sal ou hidrato, de acordo com reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é da fórmula (I).

3. Composto, sal ou hidrato, de acordo com reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que: (a) X e Z são cada um -O-; (b) X e Z são cada um -NR3-; ou (c) X e Z são cada um -NR3, e R3 é alquil C1-C4.

4. Composto, sal ou hidrato, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 e 3, caracterizado pelo fato de que: (a) Y é -CR5R6; ou (b) Y é -C(=O)-.

5. Composto, sal ou hidrato, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é da fórmula (II).

6. Composto, sal ou hidrato, de acordo com a reivindicação 1 ou 5, caracterizado pelo fato de que: (a) RB é alquil C1-C4; (b) RB é fenil e o fenil é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes selecionados independentemente a partir de -F, -Cl, -Br, e -I; ou (c) RB é -C(=NOR7)R8, e R7 e R8 são independentemente alquil C1-C4.

7. Composto, sal ou hidrato, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 5 e 6, caracterizado pelo fato de que: (a) R1 é -H; (b) R1 é alquil C1-C4; (c) R1 é fenil; ou (d) R1 é fenil substituído com -F, -Cl, -Br ou -I.

8. Composto, sal ou hidrato, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 5 a 7, caracterizado pelo fato de que: (a) R2 é alquil C1-C4; ou (b) R2 é aril C5-C10 e o aril é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes, e os referidos substituintes são um ou mais substituintes selecionados a partir de -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -NH2, -CN, -NO2, -SH, =O, =S, =N-alquil, alquil, alquenil, alquinil, alcóxi, alquenilóxi, alquinilóxi, aril, heteroaril, heterocicloalquil, heterocicloalquenil, -C(=O)H, -C(=O)NH2, -C(O)OH, -NH-C(=O)-NH2, -NH-C(=S)-NH2, -S-CN, -SO2NH2, -COR’, -C(O)OR’, -C(O)NHR’, -C(O)NR’R", -NHR’, -NR’R”, -SR’, -SOR’, -SO2R’, e -OR’, em que R’ e R” são selecionados independentemente a partir de alquil, alquenil, alquinil, aril, heteroaril, heterocicloalquil, e heterocicloalquenil, em que o alquil, alquenil, alquinil, aril, heteroaril, heterocicloalquil, e heterocicloalquenil são não substituídos.

9. Composto, sal ou hidrato, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que RB e R1 são independentemente alquil C1-C4.

10. Composto, sal ou hidrato, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 5 a 9, caracterizado pelo fato de que RB, R1 e R2 são independentemente aquil C1-C4, e pelo menos um de RB, R1 e R2 é metil.

11. Composto, sal ou hidrato, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado a partir de:

12. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende: um composto, sal ou hidrato conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11; e um excipiente farmaceuticamente aceitável.

13. Uso de um composto, sal ou hidrato, conforme definido nas reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de uma composição farmacêutica para tratar uma doença ou condição selecionada a partir das doenças cardiovasculares, isquemia, lesão de reperfusão, doença cancerosa, hipertensão pulmonar e condições responsivas à terapia de nitroxil.

14. Uso do composto, sal ou hidrato, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a doença cardiovascular é (a) insuficiência cardíaca, ou (b) insuficiência cardíaca descompensada aguda.

15. Uso de um composto, sal ou hidrato, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de uma composição farmacêutica para modular os níveis de nitroxil in vivo.