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Nouveaux dérivés de Coumermycine A1 et de Coumermycine A et leur procédé de préparation.
La présente invention concerne de nouveaux utile.% des substances antibiotiques du type Coumermycine A1 et Coumermycine A2 (décrites dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 3. 201.386) et leur procédé de production,, Plus particulièrement, la présente invention concerne des di-, tri- et tétra-éthers tétrahydropyranyliques de Coumermycine A1 et A2 et leur procédé de préparation dans lequel on fait -t'agir la Coumermycine avec le dihydropyranne en présence d'un catalyseur acide.,
La Coumermycine A1 (dans laquelle R est un ra- dical méthyle) et la Coumermycine A2 (dans laquelle R
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a.'Eâ r=vi.l Ur ,t'i,
&
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n.t pour effet d'inhiber la développenciit des 1otéries Toutes deux sont non toxioues et ont un effet thérapeutique sur les souris infectées par des bac-
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té!'ies gl'am-posi tiVi38 0ependan'i, un inconviient iapor- tant des est leur faible pouvoir d'absorp- tion, et par suite de faibles taux sanguins.
Des tenta-
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tives pour oorrigor oes défauts. par la moc1ifioa'bion chimiquo des moldoulps apparent6es se sont traduites par la découverte de nouveaux éthers tétrahydropyr1yliques de ces conposés qui sont -utiles comie .n1jerH1.diaircs chiriiîques dans la synthèse finale de nouvelles subs-taiices anti'biotiques utiles, La, présente invention fournit un urooddd pour préparer des composés de formule :
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et R représente un atome d'hydrogôno ou un radical mdthy" le prooédd qui connifito à faire xsix un t'oripOD6 do
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formule !
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dans laquelle R représente un fttono cllyyrlxt;at3 a Uri groupe méthyle,, avec Lino quantitd on exos do dihydropy.ranne et une quantité no,talytiquo d'un acide.'
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Le procède est habituellement mis on couvre on
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mélangeant ensemble de la Comicrmycino A1 ou do la Coumennyoine Ap sensiblenent pure avco une quantité on oxcbs de dihydropyrannc en présence d'un catalyseur acide et d'un aolvant inerte pour obtenir des ri6lttnCos do Mono-, di-, tre- et tétra-6ther tetrahydropyranyliquo de Coiwiermyoïne A1 ou Ap rspcctivenent< Plus spécialcnent, on mélangc uie 001mio±lyeine avec du dihydropyranne dans diverses proportions moldoulaines,
Mais do prdf6renco à un rapport d'uno Mole do 00wnernyoine pour plus de 20 moles de dihydropyrannc, L'addition d'un acido approprie au ndiango de Cow.iermyoîne et de dillydropyrmmo corria aatc.lyctour, est indispensable. L'acide Utilia4 est habituollonent choisi
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dans l'un des groupes suivants
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1. io.a;cm.nn mmrcs:.,;,,.s,,. 1!tl:mmte :n.!1 ul'uriquo l'acide phlBphDriyp1eq .",1.: 'X lJOOi1. l'acido t3'i.3i'i2fi.j'1'0 '2 Lee tfieidas MlS!Q3Li)cmi?m@s myarà lla dflboeK> suivante 1
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dan,s laquelle A, B et C ISmit He!!\1:tt:1!.<pe$ <IOOl\ #li\jf(fi:bB catit représentent un atome dll't:J#" zin ibJnrnre <a.'ha3hsms un syoupc nlkyJ.c ;t.uf.1!';t \I.\1". /tü../li'IJj! 1IJl111f;'r'lIrlY,t:r" !Ii!U.t.\" 4aglàf#
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ou oyano.
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3, Des ?-c,ides i5o Lewrls CIM!mlmE ffiImt!1m.4\.1t "5' Zn.01g ou Fo013' 4. Des r.aaoa x lIOOroU$ 3j0ïtsp :ff'a#m!# ((mH- " 1 CO!:.lli1ê les acides phéooliqUIOS, m],;[#n:!!.1f km roro:ij#s Jl J- 7.ystyrèno suJ.:foniq1l.1eS, les acHes pù1p%A+ los soldes polystyrène ron9.u.:aa l<t3a 'aa3Ma:rst qucs carboxyliques, les noideis ]1XtD:n;w:m oeéOàq%xes dont le radical suJ..:fcniqulCl eoet :1':l\.'i:'.@) #IJD.ïr le E).t1.., 1"n±+B méthaorylique oarbo;x;yliqucit iIDW!.:#a- !L'6:ra1til.rem1li l'acide polystyrène ,oo.'l:ff'IO!n1'tl1JtG Ji1l:a11:tr#1 IIWmiw#'d; bzz, Rohm and Baas) 5.
Des id¯a¯¯j!a3?BjLmB. utlïll.w& /D'.G1mnw F,O-002H, F20H002H ou
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où A, B et 0 sont '-do,n1ïiqu1JoS - ti'ft'-a.'B #Ij mntt t#m
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groupes nitro, fluoro, oyano ou un atone a'hydrogène.
6. Des aoides alkyl aulfoniques ayant pour for- mule:
R- (CH2)xSO3H dans laquelle R est un groupe arylo, arylo substitue, alkyle inférieur ou alkyle inférieur substitué et dans laquollo X est un nombre entier de 0 à 6 inolusivement.
La quantité de l'aoido utilisé comme catalyseur est habituellement déterminée par les conditions réaction- nelles, le volume du catalyseur et la quantité avec la- , quelle on obtient le rendement optimum en produit.
Etant donné que le dihydropyranno est un liqui- de et qu'il agit comno solvant, on peut conduire la réac- tion avec ou sans co-solvant. Un co-solvant inerte est habituellement utilisé pour augmenter la solubilité des réactifs et pour réduire la viscosité du mélange. Des co- solvants inertes appropriés comprennent le tétra-hydro- furanne, 'le dioxanne, l'éther de diéthyle, les éthers de dipropyle, les éthers de dibutylo, le benzène, le xylène et le toluène.
La réaction est exothormique. On peut régler soigneusement sa température ou on peut la laisser attein- dre son propre niveau sans quo le résultat final diffère beaucoup. Le procédé est normalement mis en oeuvre à une température oonpriso entre 0 et 10000, et de préférence entre 10 et 60 C pendant un tenps qui dépend do.la ten- pératuro utilisée et du. degré do substitution voulu. La durée do la réaction peut varier entre 15 Minutes et 200 . heures environ.
Corme sus-mentionné, le procédé aboutit habi-
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tuellemont à la formation de <1L"@Uwm . 'ttbMM.-. dropyrauyliqucs nono-, éiz, 'tb)L- qti bstU!1.tb. tas 0ommermyéiÉeB. Cependant. le :rro.p:rlb gaz pmxi\l.1!.:ttw \mm le mélange r4actIonnel d6pmd es &XG". dina oetnmdi-t1ons réactionnelles et *1moe !!l7f'lrm#tt du pxw-. oed6 d '1solOl.1ont et de mx..C'ac' demallw 2ZO%ltew Lorsqu'on condul-t 2a a''MBËm & t&sa 'fBn;p&)!!a# turcs élevéos cODpriSCB entm tB;)# 01 m\m1tt quatre heures, ou à àc plue :Eedb2go 'taëffa#Bss uDerAne de plus longues périodes de 't'ac dams <9'.B<s #:omM.13 strictement anhydres;
en proe4diawat #JJID.-m:lhli) 1h 'mm gà1tWfication on l'absence de 8lmàDùt Dad3M3S an $ThrtJtl11Dntb mon produit oonsistant on de ie. 2',z'*4.4-n -#fia%'ùhydropyranylcounemycino d'orne 1J:I,l!rW é3e #. Ç9)E) <m.n trouve habituellement les autres tita,o,r.unmycines éventuelles dams l'<o:M5mB s'aiwam-t dm 2eQr oemm tra.on relative 2 la 2x x a n xxc-'.ü..âtm;p.y.'1 oow aerrcmyoiner. a r.tatmc.gr.Ilra,myoine ::>la 2'-fl-acaoytcü: >la ooumersycino.
Lorsqu'on oonduit la r<Ss.c1bJL!m à li!l i tnppuatures inférieures ou pendant de plus courbaz jptëtdMt'BS fSa3 -temps ou dans des conditions qmJL me mat Pas aned #!JD1l:wdres, la proportion de la 2',2%4w4Mi!Mi.-hydropyranylo01.WlC!'33ycino dams le 1nI.:gtID c8i 2a proportion dos autres éthers Uitr!Í!l:!r\ID'.m.."1,1I iID #W(B}-
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mente,
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Le fragment tétrn.b1Jl.u ftivàl à :R."l1!.\tII(!1) au - l'autne ou aux deux positions 4H - 1J\1'!11 1 uü1.#3 - ontlormyoine est très laM.le en pr.l) m-# de s!!B2bMm'ta! 1PJ!>:n:d1:IIu:m...
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.Lorsqu'on cristallise ou rocristalliso la ' , 2 , ., ..0, 0, C, C.. tétratétrahydropyranylooQrmycin:9u la 2ruz',4-0,0,0- Â '1 trït6trahydropyranylcourierriyene dano un système solvant alcoolique chaud, los fonctions éther 4-0-tétrahydropy-
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ranylo sont scindées en fonctions 4-hydroxyle pour donner
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de la 2',2'-0,0-ditétrahydropyranylcoumoroyoino pure. Los fonctions éther 2'-0-tétrahydi'opyranyle sont G4nôraloment
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stables lorsqu'on conduit la cristallisation en l'absence
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do 1\1/.\ 1i:1.b'o noidoo,
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On peut séparer les vélangos dos éthers t6trahydropyranyliques en procédant à une purification par distribution à contre-courant.
En pratique, la matière
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convient sous forme d'un ri6lange de di-, tri- ot t'tra-tetrahydropyranyloouaernyoines, ou on peut la cristalliser dans un système solvant alouoliquo ohvucï pour oblonir do la 2',2' -0,0-ditétrahydropyranylcounornyoino pure convenant pour être utilisée ooume interrdd3.aire on vue do sa transformation finale on un agent biologiqucnent actif.
Los 2,2t-0,0-ditétrahydxopyrany7.aounoarycine, 2' , 2' , .-0, 0, 0-tritdtx,hydropyxanylcoumeraycino, et 2',2', - 4,4--o,o,o,o-tétratétrahydropyranylcouniorriyoine, sous forme de substances pures ou sous 'oxz7e de leurs ralanges, sont intéressantes comme 3ntor..6diaireo pour la préparatien do la Couaeraycine A ou A2 d'une très grande pureté.
Le mélange de l'un ou l'autre des conposda oi-dossus ou de leurs mélanges dans un systeno alcoolique en présence d'une quantité catalytique d'un acide (choisi pami ceux décrits plus haut) assure la alivace do toutos les liai- . sons tétrahydropyranyle de la t101écu.l0. L' iaolcl1ent ul-t6rieur du produit donne de la Counomyoim h' ou A2 puri-
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fiée, selon la Matière do départ utilisée.
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La 2 , 2 -0, Odit6trahydropyxanyJ.oouraoxcyoinv, la 2 , 2 , .-0, 0, O..tritdtxahydropyrany.otraoxnyoine ou la 2 ',?',4,4-0,Ô,0,o-tétra%étrahydropyranylcounernyoine, sous fonno do substances pures ou de leurs nélanges, sont egaloiaent intoressantos colite intermédiaires pour la pré- paration do nouveaux composta biologiquenont actifs.
Le traitement de l'une des substances ci-dessus ou d'un mé- lango do doux des substances ou dos trois par un agent
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, c cvoyaw;lon DO ,n('o :l.t\ IngJ.1C\110 "0 Oo,rto,;yo,zA fJo:1..b t\ l'uno des liaisons alpha-amide ou aux deux entre les fragments coumarine et acide pyrroiedioarboxylique pour former des composés répondant aux formules
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où R est un atome d'hydrogène ou un groupe móthylo ot R4 ,est un groupe alkyle inférieur ou aryle,
Ainsi, un clivage par un agont d'aoylation des
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di-t tri- ou t6tra-thàrs 't6tr4ihydropyranyl:
tqxios do OoumeJyoine ,1 ou de leurs mélnngos, peut dtre .effectua en les faisant réagir avoQ'du ohloruio'do bonzoylot du bromure do bonzoylo ou de l'anhydride boiizolque dans de la pyridine, Le chauffage du m6lo.nge à des teT.:\)?âratul'Gs inférieures au point d'ébullition pondant plusieurs heures ou Bon,Maintien h la température anbinnte pendant plusieurs jours assure la production d'uno matière ayant pour foru@
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Dans les conditions rénotionnelles utilisées,
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tous fragments tétrahydropyranylo fixés dans lu position 4-0- sont scindes en groupes hydroxyle,
Un traitement supplémentairo du produit on le Mélangeant dans un solvant alcoolique en présence d'une quantitô oatalytique d'un acide (choisi parml ceux dócrite plus haut) assure
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le clivage de la liaison éther 2-a.-tétr:
hydxopyranyJ.ique pour donner la N-.bcnzoyl-3-arino-h-hydroxy f3.-bthyy-7-3- 0-5-radthyl-2-pyrrolyloa,xbonyz.)nov3osy.oxyoourzax3no 1
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qui a une action antibiotique chas les r1amr.1ifèr13s à l'en... contre du tanhyloo2cous a3àrous 'On essaye la Coumornyoinû hi 'classique dans des bottes de Petri préparées en utilisant 10 ml dtAgrr..A,rar de base de Balt3.noro Biologioal Lbortori0S (BBL) ot une couche supérieure de 4 1 d'Agar-Agar d t onsenonoo1.1!mt BEL inoculé avec âtLLLibyloco2ous aureus A.T.C.C, 6536 P. On incube les bottes pendant 18 heures à 30 C. On détornine
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une courbe d'activité standard pour la CounerMyoino Ai en utilisant dos concentrations comprises entro 0,07 et 1,5
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ioror^arar.o/n3..
Dans la présente invention, l'emploi du not CouMercnyoino sans préciser Comaomycino A ou ,A2 doit étro considéré comme indiquant la COUI.1er/;1yoine A, ou A2 ou leurs mélanges, lesdits composés étant chimiquement équivalents dans ce procédé.
Dans les formes do réalisation préférées do la présente invention, R est conme défini plus haut (et est plus spécialement un groupe !:\éthyle) ot R2 et R3 repré- sentent des atones d'hydrogène.
EXEMPLE 1
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2 ',2' -o ,o-Ditétrahydropyranylcowne1rlyoino A On set en suspension 5,5 5 g de CO\U'lol1JYoino A.. ' finement broyée (l'acide libre purifié par reoristallisa-
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tion sous fortne de col sodique) dans 50 1:11 do dihydropyranne (DIIP) et on ajoute uno très faible quantité (2-' ng) d'acide para-toluène sulfoniquo.
On asito 110.r;nÓtiquQT1ont le mélange dans un ballon bouché dans des conditions anhy-
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. dres à 25C pendant trois heures et dar.3.o Il solution du oolide est achevée au bout do deux heures.
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On évapore la solution à siooité sous vide à
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une température miniritui (intérieure à 40 0) et on dissout le résidu dans do l'acétone bouillant (30 ml). On ajoute lentomont de l'étho,nol chaud en agitant et en chauffant jusqu'à ce qu'on en ait ajouté 100 ml.
On cristallise le produit après l'avoir refroidi pondant 16 heures pour ob- tonir 5,3 g (84 %) de fins cristaux cubiques. On sépare
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810 mag supp16montaires (13 %) sous forme d'une seconde récolte à partir de la liqueur-mère en la laissant reposor à -5 C pondant 24 heures, . on recristallisc deux fois un échantillon de
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1,7 ce dans un mélange d'acotono ot d'ethanol pour obtenir un échantillon pur (1,5 g) ayant un point de fusion avec décomposition qui est supérieur à 200 0,
Analyse :
Calculé pour O65H75O22N5:
0, 61,06 ; H, 5,91 ; 1 Ne 5,47 Trouvé ! : 0, 61,00 : H, 5,83:
N, 5,56,
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ont nG.2 1 Trouvé 623 ; J Oa10ul6 6'4, x>rtPZr 2, 21921-090-Dit6trahydropyranylcoumernyoine A, On agite 5,5 g da 001kmernyoine A, avec 50 Lil de tétrahydrofuranno (THF) à la température ambiante jusqu'à compléte dissolution. On ajoute 25 ml do DIT, puis le @ catalyseur, la résine "Amberlyst 15" (H+) (oontenant moine de 0,5 % de H2O). A mesure qu'on poursuit l'agitation, on
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ajoute 25 ni supplénontaire3de DHP.
Uno oortaino quantité do Oo\ayo1no se sépare sous fomo d'un 601i On Maintient la réaction oxothomiquo à 30-3500 en utilisant un bain d'eau @lacéo ot au bout do uno à deux
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heures le gel est graduellement remis en solution, Lors- qu'on n obtenu uno solution, la réaction exothermique s'apaise. On poursuit l'agitation pendant doux à trois heures supplémentaires (durée totale de la réaction do 4 heures environ) pendant lesquelles la couleur de la solu- tion se fonce pour devenir brun orange.
On enlève la résine "Amborlyst" par filtration, et on concentre la solution sous vide pour obtenir un sirop. La dilution du sirop avec 500 ml de méthanol assura , la formation d'un solide cristallin qu'on lave avec un pou do méthanol, puis sèche, pour obtenir 6,06 g (93 %) de produit.
On dissout le produit brut dans un mélango de
20 ml de méthanol et de 20 ml de chlorure do méthylène,
On chauffe la solution à ébullition ot on ajoute du métha- nol jusqu'à ce qu'on atteigne le point de trouble (30 ml environ sont nécessaires). A assure que le mélengo se re- froidit, on ajoute du chlorure de méthylène en une quan- tité qui est juste suffisante pour maintonir une solu- tion limpide à la températire ambiante (22.5 C). En le laissant reposer, le produit cristallise lentement sous forme de minces aiguilles, Le rendement est de 3,96 g (62 %), On obtiont une autre récolte do 1,26 g (20 %) à partir do la liqueur-mére par dilution avec du méthanol.
On peut laisser la tompérature réactionnelle augmenter sans refroidissement et sans qu'il en résulte un effet nuisible ; on fait, dans des réactions à plus grande échelle la chaleur de la réaction peut être avan- .
tagouse. Au cours d'opérations effectuées à grande échel- le, on a agite le mélange réactionnel pondant 24 heures
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au cours dosquolloa le mélange réactionnel est revenu à
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la tonip4ratur0 ambiante (habituel10men% au coure des six premières heures), Dans la plupart des cas, après la pre-
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niéno précipitation, avec du 6hanQl, on a utilisé la mas tibro en vuo d'un traitement ultóriour, Si cette nattera
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a une activité supérieure à 2 mioro-Srannes/ng, oonno déton,nin6 par l'essai do la OoumarrJyoina A1 ou si l'on oons" tata la prdoonce do quantités importantes de 00ucieimyoine (Rf- Op 5) et/ou dv ses d6rîv6a monotétrahydropyranyléa (Rf = 0,5 0,50),
on la recycle dans 10 procéder Les valeurs do Rf sont obtenues en utilisant des plaques chro-
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natographiques b, couche ninoo préparées à partir d'un gel de silioe dans un système solvant comprenant de l'acétate do t1éthylo, du 2..propanol et du NH40H concentre , un rap- port de 9\21 la (part;Les on volume).
EXEMPLE 3
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t1,g,1JJnl3E:1,9,,0 s'li-. t;:""....Qt téttI,,ltr,C\ld.r.oJ?,rU1..YÂÇI..oW'1e:t!ax- ,oi,n,../1. et leur séparation On agite do la OO\U'loX'r.1yoine AI avec THF a la tonpàrnttiro anbianto jusqu'à ou quo la dissolution soit achevée. On ajoute du DHD, puis de la résine "Aoborlyst 15" (11+) (oonten±\nt moins de 0,5 % do H20): En poursuivant l'asitation, on ajoute une quantité supplenontaire de DHP, Il so forme un gel qui se dissout do nouveau au bout de uno à doux heures.
On poursuit l'agitation à la tompórature ambiante pendant seize houros au cours desquolles la coulour de la solution se fonce pour devenir brun orange.
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4xen7.bvca la résine "Araborlyst" par filtration et on concentre la solution sous vide jusqu'à ce qu'elle ait la consistance d'un sirop, La dilution du sirop avec
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une quantité minimum do méthanol donne un solide brut
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(85-95 % du rendeMent théorique)< 'On obeho le solide sous vide, La chromatographie on couche mince indique que le solide présente au moins trois zonos (Rf = 0,6 " 0,7).
On effectue une séparation par distribution à opntre-courant selon Craig avec un échantillon de 15 g du mélange, En utilisant 0,5volume do la phase supérieure
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pour 1 volxvie do la phase inf6rioure ot 1001 transferts à partir d'un système do 5:1!5:1 de 14 ' CH01, : t 0113OH H20, on récupère 97,5 % du solide... Los récupérations à partir des concentrations principales, oonao détermine par absorption de lumièzo ultra-violette à z.5 nillinicrons, sont los suivantes 2 s, 2 s , , 4-0, 0, 0, 0-tétrattrahydropyrccnylcouuazyo.ne A.
On récupère l'éther t 6 trahydropyranyli que titrasubstitué de Couneruyoino A1 à partir dos tubos 21 à 40 sous forms d'un solide cristallin pur, 3,68 g, point do fusion supérieur à 200 0 avec décomposition*
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ÂJ.1fJ,Xa..C? : Calcule pour C?5H91N502 0, 62,27 3 H, Q,34 ; 3 n 4,64 ; Trouvé 1 C, 62,03 : H, 6,il ;
N, 4,94.'
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2 s , 2 s , h.0, 0, 0-tritétrahyctropyranylcouerr.,yo.nc Ai On récupère l'éther tétrahydropyranylique trisubstitué de COUtl0Inyoino A1 partir des tubes 41 à 'tu .', sous forme d'un solide cristallin pur, 3,8 g, point do
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fusion supérieur à 200 C avec déco!:1posi tiol1
Analyse :
Calculé pour C70H83N5O23 :
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C, 61,71 ; il, 6, in ; 1 1.1, 5,14 Trouvé 1 C, 61, 65 ; it, 6,19 ;
n, 5t34.
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2', 2 0, 0-ditdtrahydropyrv.ny7.oounexsnyaino , On r6oupèro l'éther t6txahydxopyxanyl.iqub di- ,. substitué de Coumermyàeine A1 à partir dos tubes 71 à 100 BOUS forme d'un solide cristallin pur, 1,8 g, point de
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fusion.supérieur à 200 C avec deoompositiont Les oarao- t6ristiquos physiques du produit sont identiques à colles do la natiéne 'pr6o6doriment oaraotériséoi 2 ' "O-nonotëtrahydropyyanylooumamycine AI 0 rl,o\\pb),l" :1,' Ó 102' '\H5t\hy\:l.l011Y'tny:l.:t.q"f,) Rona" substitue do Counemyoine A1 à partir dos tubes 101 à 130 sous tome d'un solide cristallin pur; 1,6 g, point de fusion supérieur à 200 0, avec décomposition:
Analyse : Calcule pour O60H65N5O2:
0, 60,35 H, 5,66 ;
N, 5,86
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Trouvé t C, 60,42 f H, 5,bi ; N, 5t83, On rdoupbre la Oounernyoine A1à l'état inohangé à partir des tubes 300 499, 1,5 5 B, point do fusion avec àéoonpoeilion 1 240 - 245 0, les ouraot6riatiques physi" quon do 00 produit s'a,n'4 identiques a colles do la matière pr6oddocment caraetdris6e. , ' EXEMPLE 4
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2 , 2' 0, 0-d.tatxa,hßdxopyrany.oourerrvyo.no A On agite la Counorcyaino A1 avec du 'HP' à la tonp6raturo unbiante jusqu'à ooiaplète dissolution. On ajoute du DHP et quelquos gouttes de H2SO4 concentre et on poursuit l'agitation pondant 4 heuros environ. On ajou-
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te 5 g do Na2003 finoaont divisé pour détruire Ilacidc4 .
Uno décantation suivie par 7,' dlirination du solvant sous vido donne un sirop qui, après dilution avec du méthanol,
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cristallise sous forrle d'un solide. La rooristallisation
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du solide dans du méthanol, un n11ango do l;'J0thanol ot d'hydrocarbure halogend ou un nclanse de 1:16tlw.nol et d'acétone donne un produit pur ayant un point do fusion avec décomposition supérieur à 200 0, qui ost identique
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à la natière prcdoMrent caractérisée.
EX1JIliPIJE ,5 2 , 2 .-4, 0 ditétrahydxopyrany.e ourierrayoino On net en suspension 1 i i 0, 06 (1,0 noie) ,1e Couaoraycine A1 dans un Délange de 11,2 litres de THF anhydre et de il,2 litres de DHP anhydre. On ajoute 22,2 g d'acide para-toluène sulfonique monohydraté et on agite
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la solution pendant 20 heures à la teDpÓraturo anbianto, On ooncontre la solution jusqu'à 1/3 du volume sous vide à noins de 40 C, on la filtre et on verso le filtrat dans
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134 litres de nethanol anhydre . OOC. Le produit oristallioe après une agitation de 30 minutes à 0" 5aC et on . le recuoille par filtration.
Le gâteau de filtre ost tou- jours recouvert par un solvant anhydre pendant qu'on le lave avec 10 litres de méthanol froid ot anhydre, puis avec 5 litres d'éthor do pétrole.
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La recrista.lisation dans le n6thanol chaud donne l'ether de 2' , 2' -.0, 0dittxuh,ydropyx,nyl.e voulu, ayant un point do fusion avec ddconposition sUlï0riGur b.
200 0. Les caractéristiques du produit sont idontiquos à celles do la natiero precddennent oaractorisco, 3XIIRPLB 6 ................,.r..
':-Q.., Q-d:l. t±:r;:.f.th.1ldronYrmwlcoJ.1!lo,rr:xpj,D.9...A1...J?Ar..,;t..:.J':te- -
EMI17.7
. j,f1.i:t:o de, J..r>. 2 f . 2' . 4 .-O..1.o. O. O-tétrr""'.tJ;'!.\b.Y\X'.o:!?Y:J:r.\.1Jx..J.- ' il, cotulernyaine 1 ..!I ÎÉÎi±ÉÉiÎi,,É,1 On dissout la 2f,2',4,4-0,O,O,o-tétrat6trfl.hYdrri! pyrMylooul1ornyoinc pure, obtenue dans l' oxcr.lplo ;. 1 pyr=yloowioxy.,yoine pure, obtenue dans l'oxonpio ;" ,la
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du mthanol chaude on concentre la solution sous Vide et
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on lnisl30 cristalliser le solide au cours .du refroidisse" Ment pour obtenir cio la 2;
2'-OcOditdtralydxapyanyl-. oom'.iertyoino A, puro, ayant un point de fusion supérieur' à 200 0 avec décomposition,''et qui est identique à la ma-
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i;ibxa pr6oédeMoent onraotérisâel X]]IPI 1 2' , 2'-0, 0-ditetxs,hydropyrany.oourorryo.fi4 A par l'inter- .p,é",d,Ln.:l r. e do 7. ¯ . ? . 4-0. 0. 0-tritétrhxM n;,nout,,ar.. mycino ,au.
On dissout .a 2' , Z' , .-0, 0, 0 tr.t6txnhydxopyxa YlooumorrnYoino A, pure, obtenue dans l'exemple 3, dans du méthanol ohaud, on concentre la solution sous vide et on laisse cristalliser le solide au cours du refroi-
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dissecent pour obtenir la 2',2'-0,0-<lit4"raiiyànopyranylcoui-iaxiiyoino A1 pure, ayant un point do fusion aveo dé- conposition supérieur à 200 0 ot qui est identique à la matière précédemment caractérisée.
, EXEMPLEB
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2' , 2' -0, 0-di.ttrchydropyxanylaowxorraya.no A On suit le processus général de l'exeple 1, excapté que l'on remplace In Oouuorayoino A utilis6e dans oot oxeyolo 1 par la Counoruyoino A2 pour obtenir la 2',2'" O,O.d.t6trahydropyxs,nyl,oouoriyo.no A2 ' point do fusion eupcrieur à 200 0 avec c160 0!'11> 0 si tion.
EXEMPLE 9 2' , 2 , -0, 0, 0 tritétxchydropyranyl.counoxaya.no et
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2' r 2' , , . 0, 0, 0, 0.-,ttrrù6trahydropyranylaour.:owlyoin On suit le proooosus gnérn,i.e 1' oxorplo 3, ex- 00l>tÓ qu'on r 1,ipInoo la OO\U1ornyoino à utilisée dans cet
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¯,exemple par la Coumoruyoino ,A2 pour obtenir .La 2',2',4- 0,0,0-tr.ttxo,hydxopßxamyl.couraoxryaina A2 (point de fusion supérieur à 20000 avec dôoompoxition) et la 2 , 2 , , dC, 0, 0,0-t6tratétrahydropyranyloovr.iernycine A2 (point de fusion supérieur à 200 0 avec ddooraposition), ;
processus 1 donnd à titre il.lx.ti Purification do la Counornyoino A. 1- on Passant par ses éthers 'té'brrthvdrofvranviiaue s On sommet un mèlange de 2,2--0,0.-ditétrahydropyranylcoumernycine A,, de 2',2',4-o,0,o-tnitétrahydropyranyloouroernyoine A1 et de 2' , 2 , , .-0, 0, 0, 0 tdtrtdl;rnhydropyr.anylooumernyoino À 1 à un clivage pour obtenir la Cour4rr.yo.ne 111 purifiée on dissolvant 10 éJ.r.ayo dos éthers dans de l'alcool réthy7.iquo avec uno quantït6 captalytique d'acide pera-toluèno suifoniquop puis en agitant pondant plusieurs heures. lin Counemycino 11 purifide oh.. tonne par le Pl'OOEH'J/3Ua cet do qualité supdriouro ot se compare favorablement avec la Counemyoino AI préparée par d'autres prooÓd6s do purification.
.s.o.g....Q}l 4 U,.9.!.w..cLQ....tiyt,r.sJ.J...:J.:.l.GjJ}.'! ..r t d,¯,, o"lY.",.vdxo...w ':l laÎ.µ=0=(¯szm¯µ±?iy±-2-n¯yrtalxono=,i@à,g¯ jz% %±# On dissout 16 g d'un nélongo de di-, tri- ot t6tratétxa,hydropyxany.aourea:yo.no A1dins 35 r.a1 do pyi<1dino :t'ra1cheont distillée. On ajoute 6,6 ni due chlorure de bonzoylo direoteont ot avoô préor.utiol1 à la solution agitée à 2500 pondant 10 minutes et on agite In solution à la température ambiante pendant 124 1wuroo au total.
.. On concentre la solution do couleur orangée i)1JQnso soun 4 vide jusqu'à 50 nl environ ot on la verso (hna 2000 ni z '
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d'eau glao6o 6narsiquernent agîtdeb On règle le pli 4 5,0 avoo'500 .ra. d'acide chlorhydrique 6N, puis on agite n 0-
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oO pondant une heure,.On filtre sous vide les golidos
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amorphes de couleur rosé ainsi obtenus, on les lave avec
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de l'eau et los obohe sous vide pour obtenir 19,6 g de solides la détermination du dosage avec des bottes contenant do 1.'Aga,r Agar inooulé avec f3tn.pqyl..Q..9.9.9-cUS aureus équivaut a 0, 51 W .aro-.rra,eue/rg (on oonparaioon do la Counernyoino classique Â1)
'
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Le traitement du solide en utilisant la réac-
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tion par olivago do 1'6thor tetrahydropyranyliquo décrite fifiS lé PVQQOPMO 1 donnd 4 titre illustratit donne 19 g d'un résidu cristallin rouge ; In d6terminatïoii du dosage dans des bottes inoculées avec 8twnhvlooo,ous, ureus équi-. vaut à 8,5 5 ciioro-grv,meg/ng. Une cristallisation fraotionn6o dans un ndiange d'acétate d'éthyle et d'éther de p 6'\;ro10 donno 5,6 6 t1 un produit orietallin jaune clair point de fusion ! 1 devient riarron et se rlJU.ïo11i t à 19000 ne d6compose fortenant à 2õ-2µ5 0 j la deterninaticn du dosage avec dos boitos inocul6es avoo f!:b.rwP.9.qS?OP.l\ f1.ure\!s.
ÓquivC1.ut à 54. bioro-grar,ll',1GS/t1S.
M±1g±± o(tloul6 pour O,1H,2010N2 0, 62,E3 1 lit 5,h5 Nui 4p73 Trouvé 1 0, É3#49 i Hr 5r?$ Nui zon3
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lies études initiales effectuées avec des animaux do laboratoire indiquent qu'une administration par voie
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orale ou intrn-nusoul±\1ro se traduit par des taux sanguins ddtvxr.iin6o OO!:\!'1±1 ôtant d'une officacitc thérapeutique.
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Naturollenent, l'invention n'est pas lioiteo aux fonien do réalisation décrites et est ausoop.l7.o de recevoir diverses variantes rentrant dans le cadre et l'esprit de 1'invention,
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New derivatives of Coumermycin A1 and Coumermycin A and their preparation process.
The present invention relates to useful novel antibiotic substances of the type Coumermycin A1 and Coumermycin A2 (described in US Pat. No. 3,201,386) and their production process. More particularly, the present invention relates to tetrahydropyranyl di-, tri- and tetraethers of Coumermycin A1 and A2 and their preparation process in which Coumermycin is made to act with dihydropyran in the presence of an acid catalyst.,
Coumermycin A1 (in which R is a methyl radical) and Coumermycin A2 (in which R
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a.'Eâ r = vi.l Ur, t'i,
&
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n.t the effect of inhibiting the development of the oteria Both are non-toxic and have a therapeutic effect on mice infected with bacteria.
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ty! 'ies gl'am-posi tiVi38 0ependan'i, a drawback of them is their low absorption capacity, and consequently low blood levels.
Temptations
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tives for correcting these defects. The chemical mocifion of related moldoulps has resulted in the discovery of new tetrahydropyr1yl ethers of these compounds which are useful as chiral drugs in the final synthesis of new useful antibiotic substances. provides a urooddd to prepare compounds of the formula:
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and R represents a hydrogen atom or a mdthy radical "the prooédd which connifito to make xsix a t'oripOD6 do
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formula !
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in which R represents a cllyyrlxt, at3 to a methyl group, with Lino an amount of dihydropyran and a no, talytiquo amount of an acid.
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The procedure is usually put on cover on
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mixing together Comicrmycino A1 or Cumennyoin Ap sensiblenent pure with a quantity of dihydropyrannc in the presence of an acid catalyst and an inert solvent to obtain ri6lttnCos of Mono-, di-, tre- and tetra-6ther Tetrahydropyranyliquo de Coiwiermyoïne A1 or Ap rspcctivenent <More specifically, 001mio ± lyein is mixed with dihydropyran in various Moldoulan proportions,
But do prefer a ratio of uno Mole do 00wnernyoine for more than 20 moles of dihydropyrannc. The addition of an appropriate acid to the ndiango of Cow.iermyoîne and of dillydropyrmmo corria aatc.lyctour, is essential. Utilia4 acid is usually chosen
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in one of the following groups
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1. io.a; cm.nn mmrcs:.,; ,,. S ,,. 1! Tl: mmte: n.! 1 ul'uriquo acid phlBphDriyp1eq. ", 1 .: 'X lJOOi1. Acid t3'i.3i'i2fi.j'1'0' 2 Lee tfieidas MlS! Q3Li ) cmi? m @ s myarà lla dflboeK> next 1
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dan, where A, B and C ISmit He !! \ 1: tt: 1!. <pe $ <IOOl \ #li \ jf (fi: bB catit represent an atom dll't: J # "zin ibJnrnre <a. 'ha3hsms un syoupc nlkyJ.c; t.uf.1!'; t \ I. \ 1 ". /tü../li'IJj! 1IJl111f; 'r'lIrlY, t: r"! Ii! Ut \ " 4aglàf #
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or oyano.
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3, Des? -C, ides i5o Lewrls CIM! MlmE ffiImt! 1m.4 \ .1t "5 'Zn.01g or Fo013' 4. Des r.aaoa x lIOOroU $ 3j0ïtsp: ff'a # m! # (( mH- "1 CO!:. lli1ê pheoolic acids, m],; [# n: !!. 1f km roro: ij # s Jl J- 7.ystyrèno suJ.:foniq1l.1eS, acHes pù1p% A + los polystyrene balances ron9.u.:aa l <t3a 'aa3Ma: rst qucs carboxyliques, the noideis] 1XtD: n; w: m oeéOàq% xes whose radical suJ ..: fcniqulCl eoet: 1': l \. 'i: '. @) # IJD.ïr the E) .t1 .., 1 "n ± + B methaoryl oarbo; x; yliqucit iIDW!.: # A-! L'6: ra1til.rem1li polystyrene acid, oo. 'l: ff'IO! n1'tl1JtG Ji1l: a11: tr # 1 IIWmiw #' d; bzz, Rohm and Baas) 5.
Id¯ā¯j! A3? BjLmB. utlïll.w & /D'.G1mnw F, O-002H, F20H002H or
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where A, B and 0 are '-do, n1ïiqu1JoS - ti'ft'-a.'B #Ij mntt t # m
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nitro, fluoro, oyano or hydrogen atom groups.
6. Alkyl sulfonic aids having the formula:
R- (CH2) xSO3H wherein R is aryl, aryl substituted, lower alkyl or substituted lower alkyl and in which X is an integer from 0 to 6 inolusively.
The amount of the aoido used as the catalyst is usually determined by the reaction conditions, the volume of the catalyst and the amount with which the optimum yield of product is obtained.
Since dihydropyranno is a liquid and acts as a solvent, the reaction can be carried out with or without a cosolvent. An inert co-solvent is usually used to increase the solubility of the reagents and to reduce the viscosity of the mixture. Suitable inert co-solvents include tetrahydrofuran, dioxan, diethyl ether, dipropyl ethers, dibutyl ethers, benzene, xylene and toluene.
The reaction is exothormous. You can adjust its temperature carefully or you can let it reach its own level without the end result being very different. The process is normally carried out at a temperature of between 0 and 10,000, and preferably between 10 and 60 ° C. for a time which depends on the temperature used and the temperature. degree of substitution desired. The reaction time can vary between 15 minutes and 200. hours approximately.
As mentioned above, the process usually results in
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tuellemont to the formation of <1L "@Uwm. 'ttbMM.-. dropyrauyliqucs nono-, éiz,' tb) L- qti bstU! 1.tb. tas 0ommermyéiÉeB. However. le: rro.p: rlb gaz pmxi \ l .1!.: Ttw \ mm the reactIonal mixture d6pmd es & XG ". reaction dina oetnmdi-t1ons and * 1moe !! l7f'lrm # tt of pxw-. oed6 d '1solOl.1ont and mx..C'ac' demallw 2ZO% ltew When we condul-t 2a a''MBËm & t & sa 'fBn; p &) !! a # Turkish high cODpriSCB entm tB;) # 01 m \ m1tt four hours, or longer: Eedb2go 'taëffa # Bss uDerAne longer periods of' t'ac dams <9'.B <s #: omM.13 strictly anhydrous;
en proe4diawat # JJID.-m: lhli) 1h 'mm gà1tWfication on the absence of 8lmàDùt Dad3M3S an $ ThrtJtl11Dntb my oonsistant product on ie. 2 ', z' * 4.4-n - # fia% 'ùhydropyranylcounemycino d'orne 1J: I, l! RW é3e #. Ç9) E) <mn usually finds the other possible tita, o, r.unmycins dams l '<o: M5mB s'aiwam-t dm 2eQr oemm tra.on relative 2 la 2x xan xxc -'. Ü..âtm; py'1 oow aerrcmyoiner. a r.tatmc.gr.Ilra, myoine ::> the 2'-fl-acaoytcü:> the ooumersycino.
When we lead the r <Ss.c1bJL! M to li! Li lower tnppuatures or during more courbaz jptëtdMt'BS fSa3 -time or under conditions qmJL me mat Not aned #! JD1l: wdres, the proportion of the 2 ' , 2% 4w4Mi! Mi.-hydropyranylo01.WlC! '33ycino dams le 1nI.:gtID c8i 2a proportion of other Uitr ethers! Í! L:! R \ ID'.m .. "1,1I iID #W (B } -
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lie,
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The tetrn.b1Jl.u fragment corresponds to: R. "L1!. \ TII (! 1) at the alumnus or at both positions 4H - 1J \ 1 '! 11 1 uü1. # 3 - ontlormyoine is very laM. le in pr.l) m- # of s !! B2bMm'ta! 1PJ!>: n: d1: IIu: m ...
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.When one crystallizes or rocristalliso la ', 2,., ..0, 0, C, C .. tetratetrahydropyranylooQrmycin: 9u la 2ruz', 4-0,0,0- Â '1 trït6trahydropyranylcourierriyene in a hot alcoholic solvent system , los ether functions 4-0-tetrahydropy-
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ranylo are split into 4-hydroxyl functions to give
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pure 2 ', 2'-0,0-ditetrahydropyranylcoumoroyoino. The 2'-0-tetrahydi'opyranyl ether functions are G4nôraloment
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stable when the crystallization is carried out in the absence
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do 1 \ 1 /. \ 1i: 1.b'o noidoo,
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The velangos can be separated from tetrahydropyranyl ethers by purification by countercurrent distribution.
In practice, the material
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is suitable as a mixture of di-, tri- ot t'tra-tetrahydropyranyloouaernyoines, or it can be crystallized in a solvent system alouoliquo ohvucï to oblonize the pure 2 ', 2' -0,0-ditetrahydropyranylcounornyoino suitable for use. used or prohibited because its final transformation into a biologically active agent.
Los 2,2t-0,0-ditetrahydxopyrany7.aounoarycine, 2 ', 2',.-0, 0, 0-tritdtx, hydropyxanylcoumeraycino, and 2 ', 2', - 4,4 - o, o, o, o-Tetratetrahydropyranylcouniorriyoine, in the form of pure substances or in the oxy of their mixtures, are interesting as 3ntor..6diaireo for the preparation of Couaeraycin A or A2 of very high purity.
The mixture of one or the other of the conposda or their mixtures in an alcoholic systeno in the presence of a catalytic quantity of an acid (chosen from those described above) ensures the survival of all the bindings. . tetrahydropyranyl sounds of t101ecu.l0. The subsequent liquid of the product gives purified Counomyoim h 'or A2.
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depending on the starting material used.
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The 2, 2 -0, Odit6trahydropyxanyJ.oouraoxcyoinv, the 2, 2,.-0, 0, O..tritdtxahydropyrany.otraoxnyoine or the 2 ',?', 4,4-0, Ô, 0, o-tetra% Etrahydropyranylcounernyoine, in the form of pure substances or their mixtures, are also important intermediates for the preparation of new biologically active compost.
Treatment of one of the above substances or of a mild mixture of the substances or three by an agent
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, c cvoyaw; lon DO, n ('o: lt \ IngJ.1C \ 110 "0 Oo, rto,; yo, zA fJo: 1..bt \ uno of the alpha-amide bonds or to both between the fragments coumarin and pyrroiedioarboxylic acid to form compounds of the formulas
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where R is a hydrogen atom or a methyl group ot R4, is a lower alkyl or aryl group,
Thus, a cleavage by an agont of aoylation of
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di-t tri- or t6tra-thàrs' t6tr4ihydropyranyl:
Tqxios do OoumeJyoine, 1 or their mixtures, can be effected by reacting them with ohloruio'do bonzoylot, bonzoylo bromide or boiizolque anhydride in pyridine, heating the mixture to teT. : \)? âratul'Gs below the boiling point laying several hours or Good, Maintaining the temperature anbinnte for several days ensures the production of uno material having foru @
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Under the renational conditions used,
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all tetrahydropyranylo moieties fixed in the 4-0- position are split into hydroxyl groups,
An additional treatment of the product or Mixing it in an alcoholic solvent in the presence of an oatalytic quantity of an acid (chosen from those described above) ensures
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the cleavage of the 2-a.-tetr ether bond:
hydxopyranyJ.ique to give N-.bcnzoyl-3-arino-h-hydroxy f3.-bthyy-7-3- 0-5-radthyl-2-pyrrolyloa, xbonyz.) nov3osy.oxyoourzax3no 1
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which has an antibiotic action chasing r1amr.1ifèr13s in ... against tanhyloo2cous a3àrous 'We try the classic Coumornyoinû hi' in Petri boots prepared using 10 ml dtAgrr..A, rar base of Balt3. noro Biologioal Lbortori0S (BBL) ot a top layer of 4 L of Agar-Agar dt onsenonoo1.1! mt BEL inoculated with âtLLLibyloco2ous aureus ATCC, 6536 P. The boots are incubated for 18 hours at 30 C. We detorninate
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a standard activity curve for CounerMyoino Ai using dosages between 0.07 and 1.5
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ioror ^ arar.o / n3 ..
In the present invention, the use of the not CouMercnyoino without specifying Comaomycino A or, A2 should be considered as indicating COUI.1er /; 1yoine A, or A2 or their mixtures, said compounds being chemically equivalent in this process.
In preferred embodiments of the present invention, R is as defined above (and is more especially an ethyl group), and R 2 and R 3 represent hydrogen atoms.
EXAMPLE 1
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2 ', 2' -o, o-Ditetrahydropyranylcowne1rlyoino A 5.5 g of finely ground CO \ U'lol1JYoino A are suspended in suspension (the free acid purified by reoristallisa-
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solution under sodium neck) in 50 1:11 of dihydropyran (DIIP) and a very small amount (2- 'ng) of para-toluene sulfoniquo acid is added.
On asito 110.r; nÓtiquQT1ont the mixture in a stoppered flask under anhy-
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. dres at 25C for three hours and dar.3.o The oolide solution is completed after two hours.
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The solution is evaporated off in vacuo at
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miniritui temperature (internal to 40 °) and the residue is dissolved in boiling acetone (30 ml). Lentomont is added hot etho, nol with stirring and heating until 100 ml has been added.
The product is crystallized after cooling for 16 hours to give 5.3 g (84%) of fine cubic crystals. We separate
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810 extra mags (13%) in the form of a second harvest from the mother liquor, leaving it to rest at -5 C for 24 hours,. a sample of
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1.7 cc in a mixture of acotono ot ethanol to obtain a pure sample (1.5 g) having a melting point with decomposition which is greater than 200 0,
Analysis:
Calculated for O65H75O22N5:
0, 61.06; H, 5.91; 1 Ne 5.47 Found! : 0.61.00: H, 5.83:
N, 5.56,
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have nG.2 1 Found 623; J Oa10ul6 6'4, x> rtPZr 2, 21921-090-Dit6trahydropyranylcoumernyoine A, 5.5 g of 001 kmernyoine A are stirred with 50 lil of tetrahydrofuran (THF) at room temperature until complete dissolution. 25 ml of DIT are added, followed by the catalyst, "Amberlyst 15" (H +) resin (containing 0.5% H2O). As the agitation continues, we
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adds 25 n additional DHP.
Uno oortaino quantity of Oo \ ayo1no separates under fomo of a 601i We Maintain the oxothomiquo reaction at 30-3500 using a water bath @ lacéo ot at the end of one to two
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hours the gel is gradually returned to solution. When a solution is obtained, the exothermic reaction subsides. Stirring is continued for gentle an additional three hours (total reaction time about 4 hours) during which time the color of the solution darkens to orange brown.
The "Amborlyst" resin is removed by filtration, and the solution is concentrated in vacuo to obtain a syrup. Dilution of the syrup with 500 ml of methanol ensured the formation of a crystalline solid which was washed with a louse of methanol, then dried, to obtain 6.06 g (93%) of product.
The crude product is dissolved in a mixture of
20 ml of methanol and 20 ml of methylene chloride,
The solution is heated to a boil and methanol is added until the cloud point is reached (about 30 ml is needed). To ensure that the melengo cools, methylene chloride is added in an amount which is just sufficient to maintain a clear solution at room temperature (22.5 ° C). On standing, the product slowly crystallizes in the form of thin needles, The yield is 3.96 g (62%), Another crop of 1.26 g (20%) is obtained from the mother liquor by dilution with methanol.
The reaction temperature can be allowed to rise without cooling and without causing any deleterious effect; one does, in reactions on a larger scale the heat of reaction can be advanced.
tagouse. In large-scale operations the reaction mixture was stirred for 24 hours.
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during dosquolloa the reaction mixture returned to
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the ambient tonip4ratur0 (usual 10men% during the first six hours), In most cases, after the first
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niéno precipitation, with 6hanQl, we used the mas tibro in view of an ulterior treatment, If this mattera
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has an activity greater than 2 mioro-Srannes / ng, oonno deton, nin6 by the test of OoumarrJyoina A1 or if we "tata the prdoonce of large quantities of 00ucieimyoine (Rf- Op 5) and / or dv ses d6rîv6a monotetrahydropyranyléa (Rf = 0.5 0.50),
it is recycled into the procedure. Rf values are obtained using chromium plates.
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natographic b, ninoo layer prepared from silio gel in a solvent system comprising ethyl acetate, 2..propanol and concentrated NH4OH, a ratio of 9%. volume).
EXAMPLE 3
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t1, g, 1JJnl3E: 1.9,, 0 s'li-. t;: "" .... Qt tetI ,, ltr, C \ ld.r.oJ?, rU1..YÂÇI..oW'1e: t! ax-, oi, n, .. / 1. and their separation. OO \ U'loX'r.1yoine AI is stirred with THF at the tonpàrnttiro anbianto until the dissolution is complete. DHD is added, then "Aoborlyst 15" (11+) resin (oonten ± \ nt less than 0.5% of H20): By continuing the agitation, an additional quantity of DHP is added, it forms a gel which dissolves again after one to two hours.
Stirring is continued at ambient temperature for sixteen hours during which the color of the solution darkens to become orange-brown.
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4xen7.bvca the "Araborlyst" resin by filtration and the solution is concentrated in vacuo until it has the consistency of a syrup, Dilution of the syrup with
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a minimum amount of methanol gives a crude solid
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(85-95% of theoretical yield) <'The solid is obeyed under vacuum. Thin layer chromatography indicates that the solid has at least three zonos (Rf = 0.6 "0.7).
A Craig-based opn-current distribution separation was carried out with a 15 g sample of the mixture, using 0.5 volume of the upper phase.
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for 1 volume of the lower phase ot 1001 transfers from a 5: 1! 5: 1 system of 14 'CH01,: t 0113OH H20, 97.5% of the solid is recovered ... The recoveries from the main concentrations, oonao determined by absorption of ultraviolet light at z.5 nillinicrons, are the following 2 s, 2 s,, 4-0, 0, 0, 0-tetrattrahydropyrccnylcouuazyo.ne A.
The ether t 6 trahydropyranyli which titrasubstituted from Couneruyoino A1 is recovered from tubos 21 to 40 in the form of a pure crystalline solid, 3.68 g, melting point greater than 200 0 with decomposition *
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ÂJ.1fJ, Xa..C? : Calculated for C? 5H91N502 0.62.27 3H, Q, 34; 3 n 4.64; Found 1 C, 62.03: H, 6.1;
N, 4.94.
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2 s, 2 s, h.0, 0, 0-tritétrahyctropyranylcouerr., Yo.nc Ai The trisubstituted tetrahydropyranyl ether of COUtl0Inyoino A1 is recovered from tubes 41 at 'tu.', In the form of a pure crystalline solid, 3.8 g, point do
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fusion over 200 C with deco !: 1posi tiol1
Analysis:
Calculated for C70H83N5O23:
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C, 61.71; he, 6, in; 11.1, 5.14 Found 1 C, 61, 65; it, 6.19;
n, 5t34.
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2 ', 20, 0-ditdtrahydropyrv.ny7.oounexsnyaino, The ether t6txahydxopyxanyl.iqub di-,. substituted by Coumermyàeine A1 from tubes 71 to 100 BOUS form of a pure crystalline solid, 1.8 g, point of
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fusion.superior to 200 C with deoompositiont The physical characteristics of the product are identical to the adhesives of the natiéne 'pr6o6doriment oaraotériséoi 2' "O-nonotëtrahydropyyanylooumamycin Al 0 rl, o \\ pb), l": 1, 'Ó 102' '\ H5t \ hy \: l.l011Y'tny: l.: Tq "f,) Rona" substitutes for Counemyoine A1 from tubes 101 to 130 in volume of a pure crystalline solid; 1.6 g, melting point greater than 200 0, with decomposition:
Analysis: Calculate for O60H65N5O2:
0.60.35H, 5.66;
N, 5.86
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Found t C, 60.42 f H, 5, bi; N, 5t83, Oounernyoine A1 is re-dubbed in the unchanged state from tubes 300 499, 1.5 5 B, point of melting with eoonpoeilion 1 240 - 245 0, the physiological uraotriatics which are produced are produced. '4 identical to the glues of the previously characterized material.,' EXAMPLE 4
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2, 2 '0, 0-d.tatxa, hßdxopyrany.oourerrvyo.no A Counorcyaino A1 is stirred with' HP 'at unbiant tonp6raturo until complete dissolution. DHP and a few drops of concentrated H2SO4 are added and stirring is continued for about 4 hours. We added
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te 5 g of Na2003 fino have divided to destroy Ilacidc4.
Uno decantation followed by 7, dlirination of the solvent under video gives a syrup which, after dilution with methanol,
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crystallizes under the form of a solid. Rooristallization
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solid in methanol, a mixture of halogenated hydrocarbon alcohol or a 1: 16 mlnol and acetone nclanse gives a pure product having a melting point with decomposition greater than 200 0, which is identical
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to the prcdoMrent nature characterized.
EX1JIliPIJE, 5 2, 2.-4, 0 ditétrahydxopyrany.e ourierrayoino On net in suspension 1 ii 0, 06 (1.0 drown), 1e Couaoraycin A1 in a mixture of 11.2 liters of anhydrous THF and il, 2 liters of anhydrous DBH. 22.2 g of para-toluene sulfonic acid monohydrate are added and the mixture is stirred
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the solution for 20 hours in teDpÓraturo anbianto, the solution is ooncontre to 1/3 of the volume under vacuum at noins of 40 C, it is filtered and the filtrate is poured into
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134 liters of anhydrous nethanol. OOC. The product is crystallized after stirring for 30 minutes at 0-5 ° C. and is removed by filtration.
The filter cake is always covered with an anhydrous solvent while washed with 10 liters of cold anhydrous methanol, then with 5 liters of petroleum ether.
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Recrystallization from hot n6thanol gives the desired 2 ', 2' -.0.0dittxuh, dropyx, nyl ether having a melting point with decomposition of sUlï0riGur b.
200 0. The characteristics of the product are identical to those of the previous version of the aractorisco, 3XIIRPLB 6 ................,. R ..
': -Q .., Q-d: l. t ±: r;:. f.th.1ldronYrmwlcoJ.1! lo, rr: xpj, D.9 ... A1 ... J? Ar ..,; t ..:. J ': te- -
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. j, f1.i: t: o de, J..r>. 2 F . 2 '. 4.-O..1.o. O. O-tetrr "" '. TJ;'!. \ BY \ X'.o:!? Y: J: r. \. 1Jx..J.- 'il, cotulernyaine 1 ..! I ÎÉÎi ± ÉÉiÎi ,, É, 1 We dissolve the 2f, 2 ', 4,4-0, O, O, o-tetrat6trfl.hYdrri! pure pyrMylooul1ornyoinc, obtained in oxcr.lplo;. 1 pyr = yloowioxy., Pure yoine, obtained in oxonpio; ", the
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hot methanol is concentrated in vacuo and
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the solid is crystallized during cooling to obtain cio la 2;
2'-OcOditdtralydxapyanyl-. oom'.iertyoino A, puro, having a melting point greater than 'than 200 0 with decomposition,' 'and which is identical to the ma-
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i; ibxa pr6oédeMoent onraotérisâel X]] IPI 1 2 ', 2'-0, 0-ditetxs, hydropyrany.oourorryo.fi4 A by the inter- .p, é ", d, Ln.: l r. e do 7 . ¯.?. 4-0. 0. 0-tritétrhxM n;, nout ,, ar .. mycino, au.
A 2 ', Z',.-0, 0, 0 tr.txnhydxopyxa YlooumorrnYoino A, pure, obtained in Example 3, is dissolved in hot methanol, the solution is concentrated in vacuo and the solid is left to crystallize in during cooling
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dissecent to obtain pure 2 ', 2'-0,0- <lit4 "raiiyànopyranylcoui-iaxiiyoino A1, having a melting point with a de- conposition greater than 200 0 ot which is identical to the material previously characterized.
, EXAMPLEB
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2 ', 2' -0, 0-di.ttrchydropyxanylaowxorraya.no A We follow the general process of example 1, excapted that we replace In Oouuorayoino A used in oot oxeyolo 1 by Counoruyoino A2 to obtain 2 ' , 2 '"O, Odtrahydropyxs, nyl, ouoriyo.no A2' melting point at 200 0 with c160 0! '11> 0 if tion.
EXAMPLE 9 2 ', 2, -0, 0, 0 tritétxchydropyranyl.counoxaya.no and
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2 'r 2',,. 0, 0, 0, 0 .-, ttrrù6trahydropyranylaour.: Owlyoin We follow the proooosus gnérn, i.e. 1 'oxorplo 3, ex- 00l> tÓ that r 1, ipInoo the OO \ U1ornyoino used in this
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¯, for example by Coumoruyoino, A2 to obtain .La 2 ', 2', 4- 0,0,0-tr.ttxo, hydxopßxamyl.couraoxryaina A2 (melting point greater than 20,000 with doompoxition) and 2, 2, , dC, 0, 0,0-t6tratetrahydropyranyloovr.iernycine A2 (melting point greater than 200 0 with ddooraposition),;
process 1 given as il.lx.ti Purification of Counornyoino A. 1- on Passing through its ethers 'té'brrthvdrofvranviiaue s We top a mixture of 2,2--0,0.-ditetrahydropyranylcoumernycin A ,, of 2' , 2 ', 4-o, 0, o-tnitétrahydropyranyloouroernyoine A1 and 2', 2,,.-0, 0, 0, 0 tdtrtdl; rnhydropyr.anylooumernyoino A 1 at a cleavage to obtain the Cour4rr.yo.ne 111 purified by dissolving 10 eJ.r.ayo dos ethers in rethy7.iquo alcohol with uno captalytic quantity of pera-toluèno sulfoniquop then stirring for several hours. Lin Counemycino 11 purified oh .. ton by Pl'OOEH'J / 3U has this superior quality and compares favorably with Counemyoino AI prepared by other purification procedures.
.s.o.g .... Q} l 4 U, .9.!. w..cLQ .... tiyt, r.sJ.J ...: J.:.l.GjJ}. '! ..rtd, ¯ ,, o "lY." ,. vdxo ... w ': l laÎ.µ = 0 = (¯szm¯µ ±? iy ± -2-n¯yrtalxono =, i @ to, g ¯ jz%% ± # We dissolve 16 g of a nelongo of di-, tri- ot t6tratétxa, hydropyxany.aourea: yo.no A1dins 35 r.a1 do pyi <1dino: t'ra1cheont distilled. We add 6.6 Neither bonzoylo chloride was added to the solution stirred at 2,500 for 10 minutes and the solution was stirred at room temperature for a total of 124%.
.. One concentrates the solution of orange color i) 1JQnso soun 4 empty up to approximately 50 nl ot one the back (hna 2000 ni z '
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glao6o 6narsiquernent agîtdeb Fold 4 5.0 avoo'500 .ra is adjusted. 6N hydrochloric acid, then stirred n 0-
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oO laying one hour, the golidos are vacuum filtered
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amorphous of pink color thus obtained, they are washed with
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water and los obohe under vacuum to obtain 19.6 g of solids determination of the dosage with bundles containing do 1.'Aga, r Agar inooulé with f3tn.pqyl..Q..9.9.9-cUS aureus is equivalent a 0, 51 W .aro-.rra, eue / rg (on oonparaioon do the classical Counernyoino Â1)
'
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The treatment of the solid using the reaction
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tion by olivago of the ethor tetrahydropyranyliquo described in the PVQQOPMO 1 given 4 as an illustration gives 19 g of a red crystalline residue; Determination of the dosage in bundles inoculated with 8twnhvlooo, or, ureus equi-. is 8.5 5 ciioro-grv, meg / ng. A fresh crystallization in a mixture of ethyl acetate and p 6 '\; ro10 ether gives 5.6 6 t1 a light yellow orietalline product melting point! 1 becomes riarron and settles at 19000 does not break down fortenant at 2õ-2µ5 0 on the determination of the dosage with dos boitos inoculated with avoo f!: B.rwP.9.qS? OP.l \ f1.ure \! S .
ÓquivC1.ut at 54. bioro-grar, ll ', 1GS / t1S.
M ± 1g ± ± o (tloul6 for O, 1H, 2010N2 0, 62, E3 1 bed 5, h5 Nui 4p73 Found 1 0, E3 # 49 i Hr 5r? $ Nui zon3
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The initial studies carried out with laboratory animals indicate that administration by the
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oral or intrn-nusoul ± \ 1ro results in blood levels ddtvxr.iin6o OO!: \! '1 ± 1 withdrawing from a therapeutic drug.
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Naturally, the invention is not related to the embodiments described and is also to receive various variants falling within the scope and spirit of the invention,