AT395587B - Herstellung und verwendung neuer azolderivate, und sie enthaltende pharmazeutische praeparate - Google Patents

Description

AT395 587 B

Azolderivate

Die Erfindung betrifft neue Azolderivate, ihre Herstellung, pharmazeutische Präparate, welche sie enthalten, sowie ihre Verwendung.

Insbesondere betrifft die Erfindung die Azolderivate der Formel I

I -C-Cl^-NH-CO-Rj

worin Rj und R2 gleich oder verschieden sind und jeweils für einen unsubstituierten oder ein- oder mehrfach substituierten Aryl- oder Heteroarylrest,

Rg füreinen unsubstituierten oder ein- oder mehrfach substituierten Alkyl-, Cycloalkyl-, Aryl-, Heteroaryl- oder mit einem Benzolring kondensierten Cycloalkyl-, Aryl- oder Heteroarylrest oder für eine Alkoxygruppe, und X für CH oder N, stehen, wobei falls Rg für Methyl undR ^ undR2 beide für einen Phenylrest stehen, mindestens einer dieserPhenylreste substituiert sein muß, sowie ihre Säureadditionssalze.

In der obigen Formel stehen R j, R2 und Rg als Arylreste besonders für Phenyl, als Heteroarylreste besitzen sie vorzugsweise 5 oder 6 Ringatome und als Heteroatome ein- oder mehrfach Schwefel oder Stickstoff. Die nichtkondensierten Heteroarylreste stehen z. B. für den Thienyl- oder Pyridinrest, der kondensierte Heteroarylrest steht z. B. für den Indolyl-2- oder Indolyl-3-Rest

Als Substituenten für Rj und R2 kommen besonders Halogenatome, z. B. F oder CI in Frage. Bevorzugt ist eine Monosubstitution, besonders in p -Stellung.

Substituenten für den Rest Rg als Aryl- oder Heteroarylrest sind z. B. Halogen, die Nitrogruppe, die Cyangruppe, eine gegebenenfalls durch Halogen oder Phenyl ein- oder mehrfach substituierte niedere Alkyl-, niedere Alke-nyl-, niedere Alkinyl-, niedere Alkylthio-, niedere Alkylsulfinyl-, niedere Alkylsulfonyl- oder niedere Alkoxygruppe oder eine gegebenenfalls substituiertePhenyl- oder Phenoxygruppe. Bevorzugtals Substituenten sind Halogenatome, z. B. F oder CI und CN.

Rg als gegebenenfalls mit Benzol kondensierten Cycloalkylrest hat vorzugsweise 5 bis 7 C-Atomen und ist bevorzugt unsubstituiert.

Rg als Alkylrest hat vorzugsweise 1 bis 4 C-Atome und kann z. B. durch CN, Alkoxy, Benzyloxy oder eine Alkoxy-(mono, di oder tri)-äthylenoxygruppe substituiert sein.

Rg als Alkoxygruppe hat vorzugsweise 1 bis 4 C-Atome. Falls dieRg-Reste substituiert sind, ist eine Monosubstitu-tion bevorzugt.

Die als Substituenten aufscheinenden oder in Substituenten enthaltenen niederen Alkylgruppen besitzen vorzugsweise 1 bis 4 Kohlenstoffatome, die niederen Alkenyl- und Alkynylgruppen bis 4 Kohlenstoffatome.

In der obigen Formel I sind die nachfolgenden Bedeutungen der Symbole allein oder in Kombination bevorzugt: R1 und R2 sind p-F- oder besonders P-Cl-Phenyl

X ist CH R3 hat die oben erwähnten bevorzugten Bedeutungen und ist besonders p-F-, p-Cl- oder p-CN-Phenyl.

Erfindungsgemäß gelangt man zu den Verbindungen der Formel I, indem man Verbindungen der Formel

__N X 11 X.N-* Π

Rl“?'CH2NH2 worin X, R j und R2 obige Bedeutung besitzen, mit einer Carbonsäure RgCOOH oder einem reaktiven Derivat davon nach an sich bekannten Methoden acyliert

Das erfindungsgemäße Verfahren kann beispielsweise durch Umsetzung einer Verbindung der Formel Π mit einem entsprechenden Säurehalogenid in einem unter den Reaktionsbedingungen inerten Lösungsmittel, z. B. in -2-

AT395 587 B einer organischen oder anorganischen Base, die gleichzeitig als Säurefänger fungiert, wie Pyridin, gegebenenfalls unter Zusatz eines Acylierungsbeschleunigers, wie 4-Dimethylaminopyridin durchgeführt werden. Zur Acylierung kann eine Verbindung der Formel Π auch mit einem Aktivester der Säure R3COOH umgesetzt werden. Beispielsweise kann die Reaktion mit einem Pyridyl-2-thiolester in einem unter den Reaktionsbedingungen inerten Lösungsmittel, z. B. in einem Diniederalkylcarbonsäureamid wie Dimethylformamid bei Raumtemperatur durchgeführt werden. Weiter kann man die Verbindungen der Formel Π mitR^COOH in Gegenwart von N-Hydroxybenzotriazol und Dicyclohexylcarbodiimid umsetzen. Das Endprodukt kann aus dem Reaktionsgemisch nach an sich bekannten Methoden isoliert und gegebenenfalls gereinigt werden.

Die Ausgangsprodukte der Formel Π sind teilweise neu und können beispielsweise nach folgendem Reäktions-schema erhalten werden. » R -CO-CHj + NHjOH.HCl-V I^-C-CHj + 2 R., Mg Hai

NOK

*· II

_N

An/ K2 H

1 II nN/‘

H

Die übrigen Ausgangsprodukte, sowie die Acylierungsmittel sind bekannt oder analog zu bekannten Methoden, bzw. analog wie in den Beispielen beschrieben herstellbar.

In den nachfolgenden Beispielen erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden und sind unkorrigiert

Beispiel 1: 2,2-Bis-(4-chlorphenyl)-2-(lH-imidazol-1 -yl)-1 -(4-chlorbenzoyl-amino)ethan

Zu 670mg2,2-Bis-(4-chlorphenyl)-2-(lH-imidazol-l-yl)-l-aminoethan in4 ml trockenemPyridin werden unter Eiskühlung 0,34 ml 4-Chlorbenzoylchlorid getropft. Das Gemisch wird 4 StundenbeiRaumtemperatur gerührt. Man gießt auf kalte, gesättigte Natriumhydrogencarbonatlösung und extrahiert mit Essigsäureethylester. Die vereinigten organischen Phasen werden mitgesättigterNatriumhydrogencarbonatlösungundNatriumchloridlösunggewaschen, über Magnesiumsuftat getrocknet und eingedampft. Der Rückstand kristallisiert beim Digerieren mit Essigsäureethylester und Diethylether. Farblose Kristalle, Fp 241-244°.

Das als Ausgangsprodukt verwendete 2,2-Bis-(4-chlorphenyl)-2-(lH-imidazoll-yl)-l-aminoethan kann wie folgt hergestellt werden: a~) 2.2-Bis-('4-chlon)henv0aziridin

Eine Grignardlösung aus 8,45 g Magnesium und 36 ml Brombenzol in 200 ml absolutem Ether wird mit 300 ml getrocknetem Toluol versetzt und der Ether abdestilliert, bis eine Innentemperatur von 107° erreicht ist. Zur siedenden Lösung werden nun 28,8 g p-Chloracetophenonoxim in 100 ml getrocknetem Toluol zugetropft, das Gemisch 1 l/2StundenzumRückflußerhitzt und dann unterEiskiihlungmit300ml20 %iger Ammoniumchloridlösung versetzt. NachPhasentrennung wird die wäßrige Phase mitEther extrahiert Die vereinigten organischenPhasen werden mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, üb»' Magnesiumsulfat getrocknet und eingedampft Der ölige Rückstand wird über Kieselgel (0,040 bis 0,063 mm) mit Petrolether 60-80° und Diethylether/Petrolether (3/2) chromatographiert Das so erhaltene Öl wird durch das NMR-Spektrum charakterisiert ^I-NMRiCDClg): 2.36 (2H, s, breit -CH2); 7.20-7.55 (8H, m, Aromat). h!2.2-Bis-(4-chlorDhenvH-2-nH-imidazol-l-vH-l-aminoethan 3,96 g 2,2-Bis-(4-chlorphenyl)aziridin werden mit 5,1 g Imidazol 20 Stunden auf 95° erhitzt (Schmelze). Man nimmt mit Essigsäureethylester/Wasser auf und extrahiert die H2Ö-Phase einige Male mit Essigsäureethylester nach. Dieorganischen Phasen werden mit 0,25 % Weinsäurelösung und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingedampft. Der Rückstand, der neben dem gewünschten Produkt auch das Stellungsisomere l,l-Bis-(4-chlorphenyl)-2-(lH-imidazol-l-yl)-l-aminoethan, enthält wird über Kieselgel (0,040-0,063 mm) mit Dichlormethan/Methanol/Petrolether (20/1/5) aufgetrennt. Man erhält ein zähes gelbbraunes Öl. taNMRiCDCty: 1,40 (2H, breit -NH2); 3.90 (2H, s, -C%); 6.9-7.5 (6H, m, Aromat, Imidazol); 7,68 (1H, Imidazol)

Analog wie in Beispiel 1 beschrieben, können auch folgende Verbindungen der Formel I aus den entsprechenden Ausgangsprodukten erhalten werden: -3-

AT395 587 B

Bsp. X Rl R2 R3 2 CH C6H5 c6h5 - z’“' -CI W // C1 • «MM* 3 N - ^ \ -ci \w/ C1 - -Ci \\ // 1 11 4 CH tl tt -ch3 5 CH It 1t -C(CH3)3 6 CH tl tt - ' \ _C1 \\_// \W/· 7 CH 8 CH tt tt 9 CH 11 tt oc2h5 10 CH tf 11 CH(CH3)-0-CH2-@) 11 CH 1t tt -οε> H 12 CH tt tt 13 CH tt tl CH2(0-CH2-CH2)0CH3 14 CH 1t II ch2-cn 15 CH -©-F -@-F ~<2)~F 16 CH 11 tt -®-a 17 CH 1t tt ch3 -4- 5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50

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Die Verbindungen der Formel I sowie die pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalze dieser Verbindungen weisen im Tierversuch interessante pharmakodynamische Eigenschaften auf. Sie können daher als Arzneimittel verwendet werden. Insbesondere besitzen die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel I und ihre Salze eine aromatase-inhibierende Wirkung. Diese Aromataseinhibition kann z. B. in den nachfolgenden Tests nachgewiesen werden: 1. Aromataseinhibition in vitro:

Als Enzymquelle dienen Mikrosomen aus humaner Placenta. Zur Präparation dieser Mikrosomen werden ganze humane Placenten unmittelbar nach der Entbindung gekühlt ins Labor gebracht, durch intensives Spülen mit 0,25 M Sucrose von überschüssigem Blut befreit, sodann in Stücke geschnitten und sofort unter Kühlung homogenisiert (1 g Organ +1,5 g KCl/Tris-Puffer, pH 7,4; Ultraturrax 3 x 10 s/ö °C). Nach der Sedimentation von teilweise zerstörten Zellen, Zellkernen und Mitochondrien bei 200,7000 und 11000 g jeweils 10 Minuten erfolgt die Gewinnung der mikrosomalen Fraktion durch Zentrifugation des postmitochondrialen Überstandes bei 105.000 g/60 min. Das einmal gewaschene Pellet wird dann in isotonem KCl/Tri-Puffer zu einer CytP-450 Konzentration von 0,5 μΜ suspendiert.

Die Bestimmung der Aromataseaktivität erfolgt nach einer modifizierten bekannten Methode (Thompson E.A., Siiteri P.K. 1974, J. Biol. Chem. 249.5364-5372) unter Verwendung von lß, 2ß %-Androstendion als Substrat in GegenwarteinesNADPH regenerierenden Systems. Die Prüfverbindungen werden inKonzentrationen von 0,01 und 1 μΜ zugegeben. Nach 30 Minuten Inkubation bei 37 °C wird die Reaktion durch Mischen mit einem großen Überschuß an Chloroform beendet und wäßrige und organische Phasen getrennt. Die Radioaktivität der wäßrigen Phase ist auf%20 zurückzuführen, das bei der Aromatisierung von lß, 2ß %-Androstendion zu Östron entsteht, und wird als Maß für die enzymatische Aktivität verwendet Verbindungen, die die Aromatase unter diesen Testbedingungen signifikant inhibieren, werden zur Bestimmung von ICgQ-Werten sodann in einem erweiterten Konzentrationsbereich geprüft. Für die Verbindung des Beispiels 1 wurde in diesem Test eine IC^q von 4,2 nM ermittelt (für die Vergleichssubstanz Aminoglutethimid ist die IC^q 700 nM). 2. Ovulationshemmung

Rattenweibchen mit regelmäßigem Zyklus erhalten die zu prüfende Substanz um 16.00 Uhr am Tage vor der Ovulation und um 11.00 Uhr am Tage der Ovulation. Die Ovulation wird bestimmt durch das Auszählen der Eier im Vaginalabstrich.

Die orale ID^q für die Verbindung des Beispiels 1 ist0,15 mg/kg.Fürdie Vergleichssubstanzen Aminoglutethimid und 4-Hydroxyandrostendion liegen in diesem Test die oralen ID^q bei Werten über 10 mg/kg. 3. Einfluß auf Ovarialaromatase und E-yProduktion in vivo:

Erwachsene weibliche Ratten werden 12 Tage hindurch mit 25 IU/Tag s. c. PMSG (pregnant mare Serum gona-dotrophin) vorbehandelt, am 13. Tag wird die Testsubstanz in einer Konzentration von 0,032 bis 10 mg/kg oral verabreicht Die Ratten werden 8,24 und 48 Stunden später getötet und Blut und Eierstöcke entnommen. Aus jeweils einem Eierstock jedes Tieres werden Mikrosomen präpariert und deren Aromataseaktivität, wie oben beschrieben, ermittelt Östradiol wird aus dem zweiten Eierstock extrahiert und durch RIA quantifiziert; ebenso Östradiol aus dem Blut.

In diesem Test lag die ID^q der Verbindung des Beispiels 1 für die Aromataseinhibition im Eierstock unterhalb 0,032 mg/kg nach 24 Stunden (für Aminogluethimid >5,6 mg). 4. Subchronische Effekte in vivo:

Jugendlichen, 23 Tage alten, weiblichen Ratten wird die Testsubstanz 7 Tage hindurch je einmal täglich verabreicht. Am 4. bis zum 7. Tag wird zusätzlich Testosteronpropionat s.c. injiziert Am 8. Tag werden die Tiere getötet, das Blut gesammelt und die Uteri entnommen, gereinigt und gewogen. Gaben von Testosteron verursachen eine deutliche Zunahme der Uterusgewichte, bedingt durch die Umwandlung von Testosteron durch Aromatase in Östradiol. Daher ist die Hemmung der Uterushypertrophie durch eine Testsubstanz ein genaues Maß für die Inhibition der Östrogenerzeugung durch Aromatase während der siebentägigen Behandlung.

In diesem Test betrug die IDjq für die Verbindung des Beispiels 1 0,4 mg/kg/Tag p.o. 5. Chronische Effekte Östrogenabhängige Brusttumoren werden bei Ratten durch eine einzelne orale Verabreichung von 7,12-Di-methylbenz[a]anthrazen (DMB A) hervorgerufen. Wenn die Tumoren durchschnittlich eine Größe von ca. 1500 mm^ erreicht haben, wird die Behandlung mit der zu prüfenden Substanz eingesetzt und weitergeführt bis zu 6 Wochen. -5- 55

Claims (10)

1. AT 395 587 B Die Verbindung des Beispiels 1 hemmt das Wachstum des Tumors deutlich bei 1 mg und 10 mg/kg p. o. pro Tag. Die Vergleichssubstanz Aminoglutethimid ist auch bei 100 mg/kg pro Tag unwirksam. Die Aromatase spielt eine herausragendeRolle in der Biosynthese von Östrogenen bei Säugetieren. Die Blockierung dieses Enzyms durch spezifische Inhibitoren kann eine drastische Senkung der üblichen Steroidspiegel bewirken. Eine derartige nichtinvasive chemische Erniedrigung des Steroidspiegels erscheint gegenüber der chirurgischen Entfernung hormonproduzierender Organe (Prostata, Ovar, Nebennieren) eine wünschenswerte Alternative undErgänzung in der Behandlung steroidabhängiger Tumoren z. B. da-Prostata, des polycystischen ovariellen Syndroms, da Carcinoma der Mamma, Ovarien, des Endometriums sowie des Morbus Cushing. Die Verbindungender Formellkönnen demnach als geeignete,spezifische Inhibitoren derSteroidsynthese in der Behandlung mehrerer der angeführten Tumoren verwendet werden. Für die oben genannten Anwendungen variiert die zu verwendende Dosis selbstverständlich je nach verwendeter Substanz, Art der Administration und der gewünschten Behandlung. Im allgemeinen werden aber befriedigende Resultate erreicht bei Verabreichung der Verbindungen derFormell in einer Dosis von etwa 0,15 bis 1,5 mg/kg Körpagewicht. Für größere Säugetiere liegt eine geeignete Tagesdosis entsprechend im Baeich von ca. 10 bis ca. 100 mg. Diese Tagesdosis kann in kleineren Einheitsdosen 2-4 mal täglich oder in Retaidform erfolgen. Eine geeignete Einheits-dosis enthält daher für die entsprechenden Anwendungen von ca. 2,5 bis ca. 50 mg der Verbindungen der Formel I neben pharmazeutisch akzeptablen Verdünnungsmitteln oder Trägersubstanzen. Die Verbindungen da Formel I können, als freie Base oder als pharmazeutisch akzeptable Säureadditionssalze, enteral (z. B. oral, beispielsweise als Tabletten oder Kapseln) oder parenteral (z. B. als Injektionslösungen oder Suspensionen) verabreicht werden. DieErfindung betrifftauch pharmazeutischePräparate,dieeineVeibindungdaFormelIodaein pharmazeutisch akzeptables Säureadditionsalz davon enthalten. Diese Präparate, beispielsweise eine Lösung oder eine Tablette, können nach bekannten Methoden, unter Verwendung der üblichen Hilfs- und Trägerstoffe, hergestellt werden. Die Erfindung betrifft weiter die Verbindungen der Formel I oder ihre pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalze zur Verwendung als Arzneimittel, besonders zur Verwendung als Aromatase-Hemmer. PATENTANSPRÜCHE 1. Neue Azolderivate der Formel I

   I Rj-C-CHg-NH-CO-Rj

   worin Rj und R2 gleich oder verschieden sind und jeweils für einen unsubstituierten oder ein- oder mehrfach substituierten Aryl- oder Heteroarylrest, R3 für einen unsubstituierten oder ein- oder mehrfach substituierten Alkyl-, Cycloalkyl-, Aryl-, Heteroaryl- oder mit einem Benzolring kondensierten Cycloalkyl-, Aryl- oder Heteroarylrest oder für eine Alkoxygruppe, und XfürCHoderN, stehen, wobei falls R3 für Methyl undRj undR2beidefüreinenPhenylreststehen,mindestens einer dieser Phenylreste substituiert sein muß, sowie ihre Säureadditionssalze.
2. 2. Azolderivate der Formel I gemäß Anspruch 1, worin Rj und R2 gleich oder verschieden sind und jeweils für einen gegebenenfalls mono-substituierten Phenylrest, R3 für eine gegebenenfallsdurchCN,Alkoxy(Cj_4),Benzyloxy oder Alkoxy(Ci^)-(mono-,di-odertri-)äthylenoxy substituierte Alkylgruppe mit 1 bis 4 C-Atomen, AT 395 587 B für eine Alkoxygruppe mit 1 bis 4 C-Atomen, für eine gegebenenfalls substituierte Phenylgruppe, für eine gegeben-falls mit einem Benzolring kondensierte Cycloalkylgruppe mit 5 bis 7 C-Atomen oder für einen gegebenenfalls mit einem Benzolring kondensierten Heteroring mit 5 oder 6 Ringatomen und als Heteroatome ein- oder mehrfach Schwefel oder Stickstoff stehen, sowie ihre Säureadditionssalze. 5
3. 3. Azolderivate gemäß Ansprüchen 1 oder 2, worin Rj und R2 für p-Cl- oder p-F-Phenyl stehen, sowie ihre Säureadditionssalze.
4. 4. Azolderivate gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, worin R3 für p-F-, p-Cl- oder p-CN-Phenyl steht, sowie ihre 10 Säureadditionssalze.
5. 5. DieVeibindung2,2-Bis(4-chloiphenyl)-2-(lH-imidazol-l-yl)l-(4-chlorbenzoyl)äthan,sowieihreSäureadditions-salze.
6. 6. Verfahren zur Herstellung der Azolderivate der Formel I gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Verbindungen der Formel 20 __Ni' 11 Ri-c-ch2 R, NH, II 25 worin X.Rj undR2dieim Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen, mit einer Carbonsäure R3COOH, worin die im Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat oder mit einem reaktiven Derivat davon nach an sich bekannten Methoden acyliert.
7. 7. Verbindungen, wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, zur Verwendung als Arzneimittel. 30
8. 8. Verbindungen, wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, zur Verwendung als Aromatasehemmer.
9. 9. Verwendung von Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5 bei der Herstellung aromatasehemmender Arzneimittel. 35
10. 10. Pharmazeutische Präparate enthaltend eine Verbindung der Formel I, wie im Anspruch 1 definiert, oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon, zusammen mit einem pharmazeutisch akzeptablen Hilfs- oderTrägerstoff dafür. 40 45 50 -7- 55