NO158004B - Fremgangsmaate for fremstilling av et preparat med cytolytisk aktivitet. - Google Patents
Fremgangsmaate for fremstilling av et preparat med cytolytisk aktivitet. Download PDFInfo
- Publication number
- NO158004B NO158004B NO821167A NO821167A NO158004B NO 158004 B NO158004 B NO 158004B NO 821167 A NO821167 A NO 821167A NO 821167 A NO821167 A NO 821167A NO 158004 B NO158004 B NO 158004B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- tumor
- iccops
- cells
- enzyme
- animals
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 title claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 18
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 18
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 14
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 10
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 claims description 7
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 claims description 7
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 7
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 claims description 7
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 claims description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 7
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 108010023244 Lactoperoxidase Proteins 0.000 claims description 4
- 102000045576 Lactoperoxidases Human genes 0.000 claims description 4
- 229940057428 lactoperoxidase Drugs 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 claims 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 60
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 38
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 26
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 22
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 17
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 11
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 10
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 9
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 9
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- POGSZHUEECCEAP-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-amino-3-(3-amino-4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(N)=C1 POGSZHUEECCEAP-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 7
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 6
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 5
- 208000010454 Experimental Liver Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 4
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- XJPHGGXFBWOHFL-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-hydrazinyl-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound NN[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XJPHGGXFBWOHFL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 3
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 3
- FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N Thiotepa Chemical compound C1CN1P(N1CC1)(=S)N1CC1 FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 3
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 229960001196 thiotepa Drugs 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 108010007843 NADH oxidase Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- HHLJUSLZGFYWKW-UHFFFAOYSA-N triethanolamine hydrochloride Chemical compound Cl.OCCN(CCO)CCO HHLJUSLZGFYWKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002476 tumorcidal effect Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006678 Abdominal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010001233 Adenoma benign Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000011057 Breast sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241001315286 Damon Species 0.000 description 1
- 208000007659 Fibroadenoma Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010015133 Galactose oxidase Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- PPQNQXQZIWHJRB-UHFFFAOYSA-N Methylcholanthrene Chemical compound C1=CC=C2C3=CC4=CC=C(C)C(CC5)=C4C5=C3C=CC2=C1 PPQNQXQZIWHJRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 108010002998 NADPH Oxidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004722 NADPH Oxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229940123742 Peroxidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 102100033220 Xanthine oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010093894 Xanthine oxidase Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000001707 blastogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000003149 breast fibroadenoma Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- MHUWZNTUIIFHAS-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidic acid Chemical class CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MHUWZNTUIIFHAS-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000003328 fibroblastic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- -1 halide ion Chemical class 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 230000031942 natural killer cell mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002956 necrotizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 210000002747 omentum Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000004783 oxidative metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 208000018655 severe necrosis Diseases 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000021595 spermatogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000013223 sprague-dawley female rat Methods 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 208000010576 undifferentiated carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/44—Oxidoreductases (1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/38—Albumins
- A61K38/385—Serum albumin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/44—Oxidoreductases (1)
- A61K38/443—Oxidoreductases (1) acting on CH-OH groups as donors, e.g. glucose oxidase, lactate dehydrogenase (1.1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/141—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers
- A61K9/146—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers with organic macromolecular compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/18—Multi-enzyme systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
- C12Y101/03—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with a oxygen as acceptor (1.1.3)
- C12Y101/03004—Glucose oxidase (1.1.3.4)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y111/00—Oxidoreductases acting on a peroxide as acceptor (1.11)
- C12Y111/01—Peroxidases (1.11.1)
- C12Y111/01007—Peroxidase (1.11.1.7), i.e. horseradish-peroxidase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av et preparat med cytolytisk aktivitet overfor prokaryotiske og eukaryotiske celler.
Et fyldig bevismateriale har vist at kombinasjonen
av Visse peroxydaser med hydrogenperoxyd og et halogenidion gir et system med sterke cytotoxiske egenskaper. Myeloperoxydase-hydrogenperoxyd-kloridsystemet danner et kraftig cytotoxisk system som er effektivt overfor bakterier, sopp, virus, mycoplasma og forskjellige pattedyrceller. På lignende måte har lactoperoxydase-hydrogenperoxyd-thiocyanatsystemet og pepperrotperoxydase-hydrogenperoxyd-kloridsystemet vist seg å ha kraftig cytotoxisk aktivitet.
Et like cytotoxisk system erholdes når man i stedet for hydrogenperoxyd anvender et hydrogenperoxyd-utviklende system. Således gir glucoseoxydase-pepperrotperoxydase-kloridkombinasjonen et kraftig cytotoxisk system ved tilsetning av glucose. Galactoseoxydase og xanthinoxydase har også vist seg å være effektivt i dette henseende. Ennvidere er det vist at den endogene NADH-oxydase-aktivitet av pepperrotperoxydase også er istand til å aktivere den cytotoxiske aktivitet av enzymet i nærvær av kloridioner.
En stor mengde av bevismateriale indikerer at cytotoxiske systemer slik som de ovenfor beskrevne kan være opera-tive i polymorfonucleare leukocyter, eosinofiler, macrofager og andre celletyper med cytotoxiske egenskaper. Slike celler synes generelt å anvende en NADH-eller NADPH-oxydase som det peroxyd-utviklende enzym.
Macrofager er en nødvendig komponent ved forsterk-ningen av naturlig celledreperaktivitet av Bacillus Calmette-Guerin (BCG) i mus. BCG øker også peroxyd-og superoxyd-produk-sjonen i macrofager. Det eksisterer således en mulighet for at peroxydasesystemet hos macrofagene spiller en rolle ved for-sterkningen av den naturlige celledreperaktivitet. På lignende måte inneholder perifere lymfocyter, som i overveiende grad er T-celler, en cytotoxisk peroxydase. K jemilumin.escens resulterende fra peroxyd-utviklende oxydativ metabolisme observeres når T-lymfocyter stimuleres av Concanavalin A. Ennvidere be-virker immunisering av mus med enten løselige eller partikkel-formede antigener en økning i peroxydaseaktivitet i milten som går forut for utviklingen av spesifikt antistoff. Disse obser-vasjoner antyder at oxydase-og/eller peroxydaseaktivitet på
en eller annen måte er involvert i utvikling av spesifikke immunresponser.
Hittil har ingen av de cytotoxiske systemer som ovenfor beskrevet vært anvendt i noen in vivo-forsøk. Imidlertid har enkelte relevante forsøk vært foretatt for en viss tid siden av Schultz et al. Schultz, Snyder, Wer, Berger og Bonner; Chemical Nature and Biological Activity of Myeloperoxydase: Molecular Basis of Electron Transport, Academic Press, New York, N.Y., s. 301-321 (1972); og Schultz, Baker og Tucker; Myeloperoxidase, Enzyme-Therapy of Rat Mammary Tumors; Cancer Enzymology, Academic Press, New York, N.Y. s. 319-334 (1976).
Ved anvendelse av mus bærende 20-methylcholanthren-induserte tumorer injiserte disse forfattere myeloperoxydase i kombinasjon med thio-TEPA, et antitumorlegemiddel.. De observerte en signifikant reduksjon i tumorvekst i den behandlede mus, men ingen fullstendig tilbakedannelse. Verken myeloperoxydase eller thio-TEPA alene var effektive til å redusere tumorvekst. Inhiberingen av tumorvekst varte så lenge som behandlingen med myeloperoxydase og thio-TEPA ble fortsatt.
Disse resultater indikerte at aktiviteten av myeloperoxydase kunne spille en rolle ved regulering av tumorvekst, enten direkte eller indirekte. Sikre konklusjoner er vanskelig å trekke på grunnlag av slike eksperimenter da den biologiske halveringstid til myeloperoxydase bare er ca. 24 timer. Det er verdt å legge merke til at den toxiske aktivitet syntes å være spesifikt rettet mot tumorvevet.
Ifølge oppfinnelsen er det tilveiebragt en fremgangsmåte for fremstilling av et preparat som utviser cytolytisk aktivitet overfor prokaryotiske og eukaroyotiske celler, og som er kjennetegnet ved at et første oxydaseenzym og et andre peroxydaseenzym som er istand til kjemisk å tverrbindes med det første enzym og med et protein, for eksempel bovint eller humant serumalbumin, hvorved begge enzymer forblir aktive, oppløses i en bufferoppløsning, hvoretter et polymeriserende middel tilsettes og løsningen polymeriseres,
og eventuelt nedfryses og lyofiliseres en uoppløselig gel isolert etter avkjøling av den polymeriserte oppløsning, og eventuelt oppmales gelen.
Ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen fremstilles det altså et preparat omfattende et første oxydase-enzym, ét andre peroxydase-enzym og et protein, hvilke første og andre enzymer og hvilket protein er kjemisk tverrbundet, og hvilket preparat utviser cytolytisk aktivitet overfor prokaryotiske og eukaryotiske celler.
Det fremstilte preparat er ment for anvendelse ved cytolyse av prokaryotiske og eukaryotiske celler i levende organismer. Preparatet fremstilles altså som en,blanding av et bæremedium og en sammensetning utvisende cytolytisk aktivitet overfor prokaryotiske og eukaryotiske celler, hvilken sammensetning er dannet ved oppløsning av et første oxydase-enzym, et andre peroxydase-enzym og et protein i en bufferløsning, og polymerisering av sammensetningen ved tilsetning av et polymeriseringsmiddel dertil. Ved anvend-elsen innføres preparatet i en levende organisme.
Det er således et mål ved oppfinnelsen å fremstille et preparat for anvendelse ved en fremgangsmåte for kontroll av tumorvekst og infektiøse sykdommer i pattedyr.
Det er funnet at flere peroxydaser, når slike anvendes i kombinasjon med et hydrogenperoxyd-og/eller superoxyd-utviklende system, utvikler en kraftig cytotoxisk aktivitet når de administreres til tumor-bærende dyr. Det er ytterligere blitt funnet at denne cytotoxiske aktivitet synes utelukkende å være rettet mot neoplastisk vev.
For å oppnå den tumoricidale aktivitet er det nød-vendig at de to enzymer holdes nært til hverandre og at enzymene er stabilisert slik at dette signifikant øker deres halveringstid in vivo. Begge disse krav kan oppfylles ved immobilisering av enzymene, enten separat eller i kombinasjon, på en uløselig bærer. Denne immobilisering kan foretas ved enten kjemisk festing av enzymmolekylene på den uløselige bærer eller ved innelukking av enzymmolekylene innen den. molekylære matriks av bæreren.
I denne beskrivelse menes med immobilisering for-bindelsene mellom aktive proteinmolekyler og et uløselig macro-molekyl på en hvilken som helst måte som forhindrer protein-molekylene fra å bevege seg bort fra den uløselige bærer. En uløselig forbindelse er definert som en forbindelse som ikke danner en virkelig løsning i et vandig medium ved fysiologiske pH-verdier; i det vandige media er vandige buffermedia såvel som hvilke som helst kroppsvæsker.. Forbindelser som danner colloidale løsninger i de ovenfor angitte vandige media be-traktes som å være uløselige forbindelser.
En eller flere injeksjoner av det ovenfor beskrevne immobiliserte enzymkonjugat i tumor-bærende dyr resulterer i en delvis eller fullstendig tilbakedannelse av tumorvevet. Det er fordelaktig at materialet injiseres i tumoren eller nær tumoren, imidlertid underkastes primære tumorer såvel som metas-taserte tumorer den cytotoxiske virkning av de immobiliserte enzymer.
Det er ytterligere funnet at de immobiliserte enzym-systemer virker som kraftige aktivatorer av den spesifikke immunrespons i tumor-bærende dyr. Denne aktivering av den spesifikke immunrespons kan derfor fullstendig eller delvis være ansvarlig for tilbakedannelsen av tumorene. På lignende måte resulterer injeksjonen av kraftige inhibitorer av den cytotoxiske aktivitet av det immobiliserte enzymsystem i en ned-settelse av den spesifikke immunrespons og gjør dyrene mer mot-takelige til å utvikle tumorvekst.
Det foregående indikerer at det immobiliserte enzymsystem forsterker og/eller aktiverer den naturlige mekanisme som kropper anvender for å eliminere overførte eller fremmede celler tilstedeværende i kroppen, mens inhibitorer av det cytotoxiske system er istand til å inhibere denne naturlige for-
svarsmekanisme til kroppen mot. veksten av abnormale celler.
Av hensiktsmessige grunner vil det uløselige tverrbundne cytotoxiske oxydase-peroxydasesystem
heretter bli angitt som "ICCOPS". I tillegg skal det også be-merkes at tre til fire ukers gamle Sprague-Dawley rotter hver ble injisert intraperitonealt med 0,5 til 1,0 ml Novikoff hepatonwsuspensjon. Tumorene fikk utvikles i fem dager eller inntil ascites ble fastslått. Ved dette tidspunkt ble enkelte dyr avlivet for å fastslå nærvær av tumor. De gjenværende tumor-bærende dyr ble deretter oppdelt i test-og kontrollgrup-per og behandlingen ble startet.
Fremstilling av ICCOPS
Det tverrbundne enzym ble fremstilt ved oppløsning av 10 mg pepperrotperoxydase og 300 mg kvegserumalbumin eller humant serumalbumin i en løsning inneholdende 2 ml glucoseoxydase (2400 enheter) og 2,5 ml av 0,1 M fosfatbuffer, pH 6,9. Polymeriseringen ble initiert ved tilsetning av 75 vil 25 %-ig glutaraldehyd til enzymløsningen. Blandingen ble inkubert i minst 24 timer ved 4°c eller inntil en gel ble dannet. Gelen ble senket i 100 ganger dets volum av destillert vann. Vannet ble dekantert fra og gelen ble ytterligere vasket med 100 ytterligere volumer destillert vann over et sintret glass-filter. Gelen ble deretter fryst og lyofilisert. Den lyo-filiserte gel ble malt i en morter med en støter til en stør-relse som passerte gjennom en 18 gauge hypodermisk nål når denne var svellet i fosfatbufret saltvann (PBS), pH 7,4.
Det pulverformede ICCOPS ble lagret ved -20°C inntil bruk.
Peroxydaseaktivitet av immobilisert enzym
Oxydase og peroxydaseaktivitet ble kvalitativt bes-temt ved tilsetning av 1 mg av det immobiliserte enzymsystem til 0,1 % glucose i PBS, pH 7,4, inneholdende 1,5 mg ABTS pr. ml. Hvis den grønne løsningen gikk over i blått i løpet av en time ble oxydasen og peroxydasen betraktet som aktive.
Prosedyrer for behandling av tumor- bærende rotter
Hovedprosedyren for behandling med ICCOPS krevet
tre fortløpende behandlingsdager med 5 mg av preparatet suspendert i 1 ml PBS, pH 7,4, inneholdende 0,1 % glucose. Suspensjonen ble injisert i det abdominale hulrom i rotter som
bar 5-dagers gamle tumorer. Variasjoner i behandlingssystemene ble anvendt som angitt i de resultater som er beskrevet senere.
Prøve på cellulær immunologisk respons i rotter
En enkelt-cellesuspensjon ble fremstilt fra milt ved passering gjennom en rustfri stålsikt. Cellene ble vasket en gang i Hanks balanserte saltløsning (HBSS), og ble deretter suspendert i en Tris-ammoniumkloridløsning. Tris-ammonium-kloridløsningen ble fremstilt fra 10 ml 0,17 M Tris og 90 ml 0,16 M ammoniumklorid og løsningen ble justert til pH 7,2. Suspensjonen ble inkubert i et vannbad ved 37°C for å lyse erythrocytene. Cellene ble sentrifugert ved 1000 omdreininger pr. minutt i en "CRC 5000" DAMON/IEC Division sentrifuge i 10 minutter og supernatanten ble fjernet. Cellene ble vasket i HBSS og igjen sentrifugert. Pelleten ble suspendert i modi-fisert Eagles medium supplert med 10 % (V/V) normalt kanin-serum, Hepes buffer 10 mM, ikke-essensielle aminosyrer (Gibco) og penicillin-streptomycin. En 100 yl's aliquot av ;celler ble tatt ut og blandet med 100 yl 0,4 % trypanblått. Etter tre minutter ble cellene og farveblandingen fortynnet med 19,8 ml fysiologisk saltløsning resulterende i en 1:200 fortynning av celler. Cellene ble tellet i et hemocytometer og deres konsentrasjon justert til 2x10^ levende celler/ml. Levedyktig-heten var større enn 90 %.
De forskjellige antigener og mitogener ble lagret sterilt ved 4°C oppløst i PBS, pH 7,2, ved konsentrasjoner på 1 mg/ml, 100 yg/ml og 10 yg/ml. Dyrkninger ble utført i stan-dart 96-brønners mikrotiterplater konstruert fra plast av vev-dyrkningskvalitet. Til brønnene som krevde antigen til et yg/ml ble 10 yl antigen med konsentrasjon 10 yg/ml tilsatt. For å oppnå sluttkonsentrasjoner på 10 yg/ml eller 100 yg/ml ble eksempelvis 10 yl av konsentrasjonen 100 yg/ml eller 1 mg/ml tilsatt. Andre konsentrasjoner av forskjellige mitogener ble fremstilt på lignende måte. Det spesifikke antigen som ble anvendt var "Keyhole Limpet Hemocyanin" (KLH) med hvilket rottene ble inokulert subcutant 14 dager før innføring av tumorceller. Hver rotte mottok 200 yg KLH i 0,1 ml PBS,
pH 7,6. Concanavalin A (ConA) var det mitogen som ble anvendt i prøvene. Den negative kontroll besto av tilsetning av 10
pl PBS ved pH 7,2 til hver kontrollbrønn. Etter tilsetning av antigen eller mitogen mottok hver brønn 100 vi av celle-suspensjonen. Platene ble inkubert ved 37°C i en fuktig atmo-sfære inneholdende 5 % C02 i 2 4 timer. Deretter ble brønnene pulset med 100 yl MEM inneholdende tritiert-thymidin ved 5 yCi/ml, spesifikk aktivitet 2Ci/mmol. Etter 48 timers dyrk-ning ble cellene høstet på glassfiberfiltere etter anvendelse av en "titertech" cellehøster. Etter tørkning ble filtrene tellet i en scintillasjonsvæske bestående av toluen, PPO og
POPOP.
Erholdte testresultater ved anvendelse av den foretrukne ut-førelsesform dg prosess
Tilbakegang av Novikoff hepatomer i rotter
Unge Sprague-Dawley hunnrotter ble intraperitonealt inokulert hver med 0,5 ml av en Novikof f hepatom--cellesuspensjon. Fem dager senere var tumorer blitt utviklet og i de fleste tilfeller var ascitesvæsken tilstede i det peritoneale hulrom.
Ved dette punkt ble hver rotte injisert intraperitonealt med 5 mg ICCOPS suspendert i 0,1 %-ig glucoseløsning. Den følgende dag ble rottene igjen gitt 5 mg ICCOPS, og dette ble gjentatt på den tredje dag. Kontrollforsøk ble foretatt ved injisering av ICCOPS fra hvilken enten glucoseoxydasen eller peroxydasen var utelatt eller ved injisering av bare glucoseløsningen. Fem dager etter den siste behandling ble fire av de syv dyr som var behandlet med det komplette ICCOPS-system avlivet sammen med alle kontrolldyrene som fremdeles var i live. Alle kontrolldyr hadde utviklet massive abdominale tumorer som utgjorde så meget som 25 g tumorvev. Dyrene som ble behandlet med det komplette ICCOPS-system utviste på den annen side nærvær av noe gult fibrøst bindevev, men ingen tegn på aktiv tumorvekst. De tre dyr som ikke ble avlivet forble levende i 8 måneder uten tegn til sykdomseffekter. (Se tabell I).
Totalt 24 Novikoff hepatom,r bærende rotter ble behandlet med det komplette ICCOPS-system. En fullstendig tilbakedannelse av tumorvev fant sted i hvert av dyrene, og i alle tilfeller fremkom det ikke noen sykdomseffekter etter behandlingen.
Effekt av ICCOPS , på hepatom - tumorer
En ung hunnrotte ble inokulert intraperitonealt med 0,5 ml Ni.ovikoff hepatom.-cellesuspens jon og tumoren fikk utvikles i 5 dager. Ved dette punkt ble bukhulen åpnet under anestesi. Typisk tumorutvikling ble observert ledsaget av ascites. Bukhulen ble deretter lukket og 5 mg ICCOPS blé injisert intraperitonealt. Rotten ble deretter gitt to ytterligere doser av 5 mg ICCOPS på de to etterfølgende dager etter den første administrering, og bukhulen ble åpnet igjen på den tiende dag etter den siste behandling. Ved dette punkt var tumoren omdannet til en hard, knuteformet gul fibrøs masse. Rotten formerte seg to måneder senere og gav et normalt kull med unger. Dette forsøk illustrerte at den peroxydaseaktiverte tumorregresjon fant sted ved hjelp av tumorcellelyse. Meste-parten av ICCOPS-partiklene ble funnet i det omentale vev. Tilsynelatende er det liten eller ingen direkte kontakt mellom ICCOPS-partiklene og tumorcellene, hvilket antyder at den cytotoxiske aktivitet av ICCOPS-partiklene overføres til tumorcellene via én eller flere løselige mellomprodukter.
Histopatologisk analyse
Et hematoxylin-og eosinpreparat av aktiv voksende Novikoff hepatom ble undersøkt. Tumorcellene syntes å være av epitelisk opprinnelse og lite bindevevstroma eller innkaps-ling var tilstede. Cellene var dårlig differensierte. Tumoren besto av et sammenhengende hele av celler som danner tilfel-dige små cystisklignende strukturer. Vevet viste en tilfeldig begrenset differensiering mot pseudorosetter av cellene rundt vaskulaturen, og i enkelte områder en differensiering mot et papillært mønster. Mitotiske figurer var felles. Vaskulari-tet var begrenset og det var utallige områder av necrose tilstedeværende i vevet. Tumoren ble derfor betegnet som et u-differensiert carcinom med enkelte karakteristika for papillært cystisk adenocarcinom.
Den samme preparering av de gule rester, av tumoren tatt 10 dager etter den sluttelige behandling med ICCOPS ble
undersøkt. Vevet besto av øyer av necrotiske celler innkapslet av en aktiv fibroblastisk respons. Det var en markert sammen-brytning av det neoplastiske vev og necrose synes å være total. Vevet utviste således vevnecrose med sekundær fibroplasi.
De mesentriale lymfeknuter i samme dyr viste sammen-brudd ved en infiltrering av neoplastiske celler i knutene.
De neoplastiske celler hadde startet dannelsen av adskilte øyer av vev, som er en indikasjon på aktiv neoplastisk metastase. Således hadde dette dyr allerede gjennomgått metastase når den primære tumor var blitt ødelagt. Hvis denne observasjon er representativ for andre dyr, kan man bare konkludere med at enhver metastasert tumor deretter ble ødelagt, da alle gjenværende rotter ble fullt ut restituert.
Effekt av peroxydase- inhibitorer
For å. oppnå ytterligere bevis på at den observerte tumor-tilbakedannelse virkelig var aktivert av ICCOPS-systemet, ble et forsøk utført i hvilket enkelte dyr ble injisert med en kraftig peroxydase-inhibitor. DOPA-analogen 3-aminotyrosin er en kraftig inhibitor av pepperrotperoxydase med på 5 yM.
I dette forsøk ble ICCOPS administrert til 8 hepatom-bærende rotter. 4 av dyrene ble også imjisert med 100 yg 3-aminotyrosin.
Resultatene indikerte at 3-aminotyrosinet inhiberte virkningen av ICCOPS og alle fire rotter som mottok 3-aminotyrosin døde til slutt av tumoren, mens den fjerde rotte som bare mottok ICCOPS viste en fullstendig remisjon. Dette be-krefter at tilbakegangen av hepatomer virkelig aktiveres av
ICCOPS.
Effekt av ICCOPS på normalt vev
To av hannrottene med tilbakedrevet Novikoff hepatom ble avlivet på den tiende dag etter behandlingen med ICCOPS for å vurdere virkningene av behandlingen på hurtig-formerende normale celler. For dette formål ble testiklene av dyrene undersøkt ved elektronmikroskopi og det ble funnet atser-tolicellene og spermatogenesen synes å være fullstendig nor-mal .
100 mg ICCOPS ble også injisert i tre normalt friske dyr i tre etterfølgende dager. På den fjerde dag ble en av dyrene avlivet. Mikroskopisk undersøkelse viste at ICCOPS-partiklene igjen var innleiret i det omentale vev. De andre to rotter ble holdt i live i ytterligere seks måneder. Under dette tidsrom ble ingenting observert som kunne skille disse fra andre normalt friske dyr.
Effekt av ICCOPS på andre tumorer
For å bestemme hvorvidt eller ikke den cytotoxiske virkning av ICCOPS in vivo er spesifikk for rotteadenocarci-nomer, ble effekten av ICCOPS testet på forskjellige typer av tumorer.
Et malignt musemelanom (B16-F1) ble dyrket i mus,
og etter at en betydelig mengde av tumorceller var tilstede i dyrene ble behandlingen med ICCOPS startet. Resultatene viste at tumor-necrose fant sted som et resultat av ICCOPS-behandlingen. Behandling i fire til fem fortløpende dager var imidlertid nødvendig for å oppnå fullstendig remisjon.
Flere spontane rottebrysttumorer ble også behandlet. I disse tilfeller ble 5 mg ICCOPS injisert i nærheten av tumoren i tre til fire fortløpende dager. En biopsi tatt ti dager etter den siste dag med behandling viste at fullstendig remisjon av tumoren hadde funnet sted. Patologisk under-søkelse fastslo at både et spontant brystcarcinom og et bryst-sarcom med hell kunne behandles med ICCOPS.
Ennvidere ble en hund med fremskredet Hodgkin's syk-dom (et malignt lymfom) behandlet. ICCOPS ble injisert direkte i en av de syke lymfeknuter i tre dager. Ved dette punkt døde hunden. Imidlertid ble alvorlig necrose av lymfom observert i de behandlede lymfeknuter som indikerer at dette lymfom. også er følsomt overfor virkningen av ICCOPS.
På lignende måte ble en fullstendig remisjon av en godartet tumor (et fibroadenom) i en rotte også oppnådd.
Disse data indikerer at minst flere typer av tumorer påvirkes av den cytotoxiske aktivitet av ICCOPS, og at dyr som bærer slike tumorer med hell kan behandles på denne måte. Slike data indikerer imidlertid at ikke alle tumorer reagerer like godt på ICCOPS-behandling; et forskjellig behandlingsopp-legg er nødvendig for hver type av tumor for å oppnå fullstendig remisjon.
Antitumor- aktivitet av andre peroxydaser
Anvendelse av lactoperoxydase i stedet for pepperrotperoxydase i ICCOPS-preparatet gir et produkt som også er effektivt når det gjelder å fremme tumortilbakegang in vivo. Dets in vivo-aktivitet overfor rottehepatomer er noe mindre enn av <p>epperrotperoxydasesystemets; administreringen måtte fortsettes i fire fortløpende dager for å oppnå de samme resultater som tre dager for ICCOPS-administrering.
Disse resultater viser at den tumoricidale aktivitet ikke er spesifikk for pepperrotperoxydase men kan altså frem-mes av visse andre pattedyrperoxydaser.
Forsterkning av tumorvekst av aminotyrosin
For å vurdere hvorvidt eller ikke endogene peroxydaser spiller en rolle i den naturlige resistens overfor en neoplastisk vekst, ble enkelte rotter injisert med en kraftig inhibitor av den cytotoxiske aktivitet av peroxydaser og dyrene ble deretter utfordret med en suspensjon av hepatom-celler.
Fire voksne hannrotter ble injisert intraperetonealt med 1 mg 3-aminotyrosin i 1 ml vann. Fire kontrollrotter ble injisert med 1 ml vann. Den neste dag ble alle rotter injisert med 1 ml av en fortynnet Novikoff hepatom-cellesuspensjon; i det antallet av celler normalt var utilstrekkelig for å fremkalle tumorvekst. På samme dag ble ytterligere 1 mg aminotyrosin administrert til rottene som mottok inhibitoren den foregående dag, og dette ble gjentatt i ytterligere tre dager. De fire kontrollrotter mottok på lignende måte vann-
injeksjoner.
På den niende dag etter innpodningen med tumor, ble alle rotter avlivet og undersøkt med hensyn til nærvær av tumor. Ingen tumor var til stede i noen av kontrolldyrene.
På den annen side hadde hver av dyrene som var behandlet med aminotyrosin utviklet tumorvekst. En rotte hadde en stor sentral omental tumor, mens de andre tre rotter inneholdt et antall små tumorer spredd gjennom det mesentrale omentum og over overflaten av tynntarmen.
Denne dramatiske forskjell indikerer at 3-aminotyrosin inhiberer den naturlige mekanisme ved hvilken dyrene be-skytter seg selv mot neoplasi. Som sådan er denne virkning lik virkningen av forskjellige immunundertrykkende forbindelser.
Effekter av ICCOPS på immunsystemet
Tabell II illustrerer forandringen i respons på Concanavalin A stimulering av miltceller erholdt fra tumor-bærende rotter og fra rotter med tilbakedannede tumorer sammenlignet med normalt friske dyr.
Dataene viser at miltceller fra tumor-bærende dyr
er meget aktive når det gjelder inkorporering av thymidin og er ufølsomme overfor ytterligere stimulering av Concanavalin A. Selv ved lave konsentrasjoner virker faktisk mitogenet som en inhibitor. Miltceller erholdt fra dyr med tilbakedannede tumorer kan på den annen side stimuleres av mitogenet, selv om de er mere aktive enn cellene fra friske rotter.
Når miltceller fra dyr med aktivt tilbakedannende tumorer ble testet ble et mønster observert lik det av dyr med fullstendig tilbakedannede tumorer. Disse resultater antyder at forandringene i immunresponsen oppstår raskt etter administreringen av ICCOPS. Lignende resultater ble erholdt med miltceller fra rotter som på forhånd var immunisert med KLH. (Tabell III). Celler fra dyr med aktivt tilbakedannende tumorer oppførte seg igjen mer som celler fra normale dyr i deres respons på stimulering med KLH enn celler fra tumor-bærende dyr.
Disse data indikerer at forandringer i immun-systemet oppstår samtidig med tumortilbakedannelse som et resultat av virkningen av peroxydasesystemet. Hvorvidt disse forandringer oppstår som et resultat av den tilbakedannende tumor eller er direkte forårsaket av nærværet av peroxydasesystemet kan ikke fastslås for tiden.
Konklusjon
Dataene presentert i foreliggende beskrivelse viser at ICCOPS, et immobilisert system med glucoseoxydase og pepperrotperoxydase som dets funksjonelle komponenter, hurtig og selektivt ødelegger et meget ondartet og langt fremkommet adenocarcinom i rotter. I tillegg underkastes andre ond-artede tumorer, innbefattet melanom, sarcom, og lymfom selektiv ødeleggelse av ICCOPS. Tidligere in vitro-undersø-kelser av andre under anvendelse av løselig glucoseoxydase og pepperrotperoxydase viste ingen spesifisitet overfor tumorceller sammenlignet med normale celler. En lignende mangel på spesifisitet ble observert med myeloperoxydase-og lacto-peroxydasesystemene. I en in vivo-undersøkelse ble på den annen side en meget høy, grad av selektivitet erholdt som illustrert ved følgende to fakta.
For det første ble ingen åpenbar skade funnet i normalt vev, innbefattende hurtig formerende testikkelceller; og for det andre viste histopatologiske vevsnitt at fibroblaster lokali-sert i umiddelbar nærhet til necroserende tumorceller er hovedsakelig normale.
Det ble også vist at peroxydaser forskjellig fra pepperrotperoxydase kan anvendes i ICCOPS. Tumortilbakedannelse ble erholdt under anvendelse av lactoperoxydase og cytotoxisk aktivitet in vitro ble demonstrert under anvendelse av myeloperoxydase og slangeskinnperoxydase.
Funksjonen av glucoseoxydasen i ICCOPS-systemet er bare å tilveiebringe hydrogenperoxydet og/eller superoxydet som trenges for å omdanne peroxydasen til den cytotoxiske form. Glucoseoxydase ble valgt av praktiske grunner da dets substrat (glucose og oxygen) er lett tilgjengelig for dets bruk in vivo. Imidlertid kan dets funksjon oppfylles av et hvilket som helst system som produserer enten hydrogenperoxyd eller superoxyd.
Det ble også funnet at peroxydasesystemet aktiverer en sekundær antitumormekanisme. Dette sekundære system synes å være den celle-formidlede del av immunsystemet. Den spontane blastogene aktivitet av miltceller fra rotter med aktivt voksende tumor indikerer et maksimalt stimulert immunsystem som ikke lykkes i å produsere en effektiv respons. Innføring av ICCOPS modifiserer imidlertid hurtig immunsystemet ved å redusere den ineffektive respons og restituere den mitogene og spesifikke immunrespons. Disse resultater indikerer at ICCOPS virker som et immunostimulerende middel i dyr hvis normale respons er utilstrekkelig. Den økede føl-somhet av dyrene overfor en utfordring med tumorceller som et resultat av 3-aminotyrosinadministrering, som således virker som et immunoundertrykkende middel, understøtter også denne konklusjon.
Således kan ICCOPS såvel som peroxydaseinhibitorer være anvendbare som terapeutiske midler ved sykdommer som på-virker immunsystemet, ved regulering av immunsystemet etter organtransplantasjoner og andre vevimplantasjoner, såvel som innen hver terapi som krever enten en undertrykkelse eller
aktivering av den endogene immunrespons.
Det er selvsagt mange variasjoner over de spesifikke trinn, teknikker, doser, materialer og lignende som kan foretas i det her beskrevne arbeidet.
Claims (4)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av et preparat med cytolytisk aktivitet overfor prokaryotiske og eukaryotiske celler,
karakterisert ved at et første oxydaseenzym og et andre peroxydaseenzym som er i stand til kjemisk å tverrbindes med det første enzym og med et protein, for eksempel bovint eller humant serumalbumin, hvorved begge enzymer forblir aktive, oppløses i en bufferoppløsning, hvoretter et polymeriserende middel tilsettes og løsningen polymeriseres, og eventuelt nedfryses og lyofiliseres en uoppløselig gel isolert etter avkjøling av den polymeriserte oppløsning, og eventuelt oppmales gelen.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at en glucoseoxydase anvendes som det første enzym.
3. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av de foregående krav,
karakterisert ved at pepperrotperoxydase anvendes som det andre enzym.
4. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av <i>kravene 1 til 3,
karakterisert ved at lactoperoxydase anvendes som det andre enzym.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US06/251,694 US4486408A (en) | 1981-04-07 | 1981-04-07 | Insoluble crosslinked cytotoxic oxidase-peroxidase system |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO821167L NO821167L (no) | 1982-10-08 |
NO158004B true NO158004B (no) | 1988-03-21 |
NO158004C NO158004C (no) | 1988-06-29 |
Family
ID=22953019
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO821167A NO158004C (no) | 1981-04-07 | 1982-04-06 | Fremgangsmaate for fremstilling av et preparat med cytolytisk aktivitet. |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4486408A (no) |
EP (1) | EP0062434B1 (no) |
JP (1) | JPS57177694A (no) |
AR (1) | AR229260A1 (no) |
AT (1) | ATE15813T1 (no) |
AU (1) | AU556620B2 (no) |
CA (1) | CA1187791A (no) |
DE (1) | DE3266476D1 (no) |
DK (1) | DK155082A (no) |
IL (1) | IL65382A (no) |
IN (1) | IN156471B (no) |
NO (1) | NO158004C (no) |
ZA (1) | ZA821924B (no) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4576817A (en) * | 1984-06-07 | 1986-03-18 | Laclede Professional Products, Inc. | Enzymatic bandages and pads |
EP0236610A1 (en) * | 1986-03-13 | 1987-09-16 | Laclede Professional Products, Inc. | Enzymatic bandages and pads |
SE8500341L (sv) * | 1985-01-24 | 1986-07-25 | Pharmacia Ab | Desinfektionssats samt sett for desinfektion |
US4974929A (en) * | 1987-09-22 | 1990-12-04 | Baxter International, Inc. | Fiber optical probe connector for physiologic measurement devices |
AU4402589A (en) * | 1988-09-28 | 1990-04-18 | Ideon Corporation | Combination enzyme immunotherapeutics |
FR2646777B1 (fr) * | 1989-05-12 | 1993-09-03 | Bio Serae Lab | Procede de preparation d'un produit particulaire antimicrobien, produit antimicrobien obtenu et applications |
US5486360A (en) * | 1993-04-22 | 1996-01-23 | St. Joseph Health Centre | Method of treating tumour cells using catalase |
JPH08509064A (ja) * | 1993-09-22 | 1996-09-24 | デイド、インターナショナル、インコーポレイテッド | 化学的に架橋したタンパクの固相支持体上の固定化 |
US7192766B2 (en) * | 2001-10-23 | 2007-03-20 | Medtronic Minimed, Inc. | Sensor containing molded solidified protein |
CN103781905A (zh) * | 2011-07-06 | 2014-05-07 | 加利福尼亚大学董事会 | 多酶纳米复合物 |
WO2023200842A1 (en) * | 2022-04-13 | 2023-10-19 | Exoxemis, Inc. | Compositions and methods for treating solid cancer |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4004979A (en) * | 1968-03-29 | 1977-01-25 | Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) | Preparation of active proteins cross-linked to inactive proteins |
US4178362A (en) * | 1969-06-03 | 1979-12-11 | Telec S.A. | Enzymatic dentifrices |
US3638558A (en) * | 1970-03-26 | 1972-02-01 | Burger King Corp | Cooking apparatus for comestibles immersed in heated oil |
JPS528795B2 (no) * | 1971-12-30 | 1977-03-11 | ||
DE2214442C3 (de) * | 1972-03-24 | 1981-09-10 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur Überführung von Glucose in Gluconsäure |
DE2307904A1 (de) * | 1973-02-17 | 1974-08-29 | Hoechst Ag | Verwendung von katalasefreien oder katalsearmen glucoseoxidase-praeparaten als zytostatikum fuer maligne zellen |
DK146942C (da) * | 1978-04-19 | 1984-07-30 | Novo Industri As | Fremgangsmaade til fremstilling af et immobiliseret enzymprodukt |
DE2911192A1 (de) * | 1979-03-22 | 1980-10-02 | Boehringer Sohn Ingelheim | Neuartiges immobilisiertes glucoseoxidase-katalasepraeparat und seine verwendung zur enzymatischen glucoseoxidation |
-
1981
- 1981-04-07 US US06/251,694 patent/US4486408A/en not_active Expired - Fee Related
-
1982
- 1982-03-19 EP EP82301451A patent/EP0062434B1/en not_active Expired
- 1982-03-19 DE DE8282301451T patent/DE3266476D1/de not_active Expired
- 1982-03-19 AT AT82301451T patent/ATE15813T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-03-19 AU AU81739/82A patent/AU556620B2/en not_active Ceased
- 1982-03-22 ZA ZA821924A patent/ZA821924B/xx unknown
- 1982-03-30 IL IL65382A patent/IL65382A/xx unknown
- 1982-03-31 IN IN360/CAL/82A patent/IN156471B/en unknown
- 1982-04-05 AR AR289004A patent/AR229260A1/es active
- 1982-04-05 DK DK155082A patent/DK155082A/da not_active IP Right Cessation
- 1982-04-06 NO NO821167A patent/NO158004C/no unknown
- 1982-04-07 CA CA000400618A patent/CA1187791A/en not_active Expired
- 1982-04-07 JP JP57057947A patent/JPS57177694A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU8173982A (en) | 1982-10-14 |
IL65382A (en) | 1986-04-29 |
DK155082A (da) | 1982-10-08 |
DE3266476D1 (en) | 1985-10-31 |
ZA821924B (en) | 1983-04-27 |
AR229260A1 (es) | 1983-07-15 |
US4486408A (en) | 1984-12-04 |
JPS57177694A (en) | 1982-11-01 |
NO158004C (no) | 1988-06-29 |
EP0062434B1 (en) | 1985-09-25 |
EP0062434A1 (en) | 1982-10-13 |
ATE15813T1 (de) | 1985-10-15 |
NO821167L (no) | 1982-10-08 |
AU556620B2 (en) | 1986-11-13 |
CA1187791A (en) | 1985-05-28 |
IN156471B (no) | 1985-08-10 |
IL65382A0 (en) | 1982-05-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Parr et al. | Similarities of the anti-tumour actions of endotoxin, lipid A and double-stranded RNA | |
US10258673B2 (en) | Pharmaceutical composition comprising a botulinum neurotoxin and uses thereof | |
Brown et al. | Pathogenesis of ulcers of the alkali-burned cornea | |
Smith et al. | Regression of established intradermal tumors and lymph node metastases in guinea pigs after systemic transfer of immune lymphoid cells | |
NO158004B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av et preparat med cytolytisk aktivitet. | |
US4870002A (en) | Method of prevention of oxidative injury to cells | |
Heppner et al. | Suppression by Serum-Blocking Cytosine Arabinoside of Factors of Cell-Mediated Immunity to Syngeneic Transplants of Mouse Mammary Tumors | |
JP6538042B2 (ja) | 溶出マトリックスおよびその使用 | |
Wu et al. | Mesenchymal stem cells: an overview of their potential in cell‐based therapy for diabetic nephropathy | |
Sugihara et al. | Deoxyribonuclease treatment prevents blood-borne liver metastasis of cutaneously transplanted tumour cells in mice | |
Yan et al. | The influence of microenvironment on survival of intraportal transplanted islets | |
Mahoney et al. | The inflammatory response to a foreign body within transplantable tumors | |
Ginsburg | Action of streptococcal haemolysins and proteolytic enzymes on Ehrlich ascites tumour cells | |
WO2021042777A1 (zh) | 一种治疗肿瘤的多组分凝胶缓释药物组合物 | |
AU2019205822A1 (en) | Compositions and methods for treating nerve injury | |
Schwartz et al. | Actinomycin D: effects on Ridgway osteogenic sarcoma in mice | |
JP2005104987A (ja) | 拡散性生物学的産物を生産する細胞を含有する移植可能なアガロース−コラーゲンビーズとその利用法 | |
IE52794B1 (en) | Insoluble crosslinked cytotoxic oxidase-peroxidase system | |
CN113260370A (zh) | 细胞重编程的方法 | |
US4766150A (en) | Method for immunosuppression | |
US8003345B2 (en) | Antioxidant pharmaceutical compound, method for producing polypeptide and method of cure | |
CA2709895A1 (en) | Treatment of fibroses and liver disorders | |
US4871770A (en) | Method of inhibiting the activity of peroxidases and stimulating tumor growth | |
Ulbrich et al. | Poly [N-(2-Hydroypropyl) Methacrylamide] Conjugates of Bovine Seminal Ribonuclease. Synthesis, Physicochemical, and Preliminary Biological Evaluation | |
Lewis et al. | Atrophy of sarcoma in rats followed by tumor immunity: A surgical method for development of tumor immunity in rats |