MXPA04011059A

MXPA04011059A - Unidad de estimulacion electrica y sistema de bano maria.

Info

Publication number: MXPA04011059A
Application number: MXPA04011059A
Authority: MX
Inventors: P Kalinowski Douglas
Original assignee: Daemen College
Priority date: 2002-05-09
Filing date: 2003-05-09
Publication date: 2005-07-14
Also published as: US7740650B2; US20060106427A1; US20100331910A1; CA2485271A1; WO2003095018A3; WO2003095018A2; US7837719B2; AU2003234385A1; US20050149124A1

Abstract

La presente invencion se refiere a un metodo para tratar onicomicosis en humanos exponiendo el area de un paciente que esta infectado con una infeccion micotica con una solucion acuosa, y proporcionar una corriente directa de bajo voltaje a traves del area infectada por un periodo de al menos cinco minutos.

Description

- ,? m Í Í Í r TR). Patente OAPI (BF, BJ, CF. CG, CI, CM. GA. GN, GQ, GW, Para códigos de dos letras y otras abreviaciones, referirse a las L, MR. NE. SN. TD. TG). "Notas de dirección sobre códigos y abreviaciones " que aparecen al inicio de cada publicación regular de la Gaceta del PCT. Publicada Sin el reporte de búsqueda internacional y para ser publicada hasta la recepción del reporte. 1 UNIDAD DE ESTIMULACION ELECTRICA Y SISTEMA DE BAÑO MARIA Campo de la Invención Para uso como un sistema de tratamiento fungicida/fungiestático para el hongo de las uñas de los dedos del pie, hongos dermatológicos, e infecciones fúngicas. Antecedentes de la Invención El solo hongo de las uñas de los dedos del pie, afecta 2-13% de la población general de los Estados Unidos; sobre el 30% de la población de más de 60 años de edad son afectadas. El tratamiento sistémico actual consiste del uso de agentes farmacéuticos o fármacos costosos, muchos de los cuales tienen complicaciones e interacciones asociadas. Estos tratamientos farmacéuticos son menos que ideales para muchos pacientes, debido al costo y peligro asociados con éstos. Se han intentado y empleado varios procedimientos para tratar esta enfermedad, y la mayoría involucra . agentes farmacéuticos aplicados tópicamente o sistémicamente . Por ejemplo, la Patente Estadounidense No. 6,319,957, describe el uso de composiciones a base de soluciones de glicol-alcohol, hidró-alcohpl o glico-hidro-alcohol de un éster de glicol .o glicérico de ácido retinoico, preferiblemente en asociación con el éster etílico de ácido retinoico y con hidroquinona, tratar trastornos de la piel de aspecto desagradable, tales como acné, arrugas, cicatrices, marcas de estiramiento, EF. : 160025 2 manchas oscuras, etc., y en tratamiento de enfermedades micóticas de la piel y psoriasis. La Patente Estadounidense No. 6,303,104, muestra una preparación de yeso que comprende un caucho sintético; un agente de refuerzo a base de sílice o estireno-butadieno aleatorio, copolímero; un agente de pega osidad; ácido salicílico o una sal farmacéuticamente aceptable o éster del mismo, para tratar infecciones micóticas. La Patente Estadounidense No. 6,290,950, describe una nueva clase de vacunas de Micosis que comprende blastosporas de levadura inactivadas, homogenizadas y dermatophyte microconidia inactivada, homogenizada o material antigénico de dichas esporas, métodos para su producción y su uso para la profilaxis y/o tratamiento de micosis en mamíferos, preferiblemente humanos . Las vacunas de conformidad con la presente invención, son especialmente útiles para la profilaxis y/o tratamiento de micosis de la piel, preferiblemente Dermatomicosis y/o Candidosis y/o Onicomicosis . La Patente Estadounidense No. 6,287,276, describe una ¦¦¦ serie dé cortadores de ,uñas profundo y método para tratar el hongo de las uñas que se usa para cortar una incisión a una profundidad predeterminada en una uña o un dedo del pie, del dedo infectado con hongo y después aplicar un medicamento anti-fúngico a la uña del dedo del pie o al dedo a través de 3 la incisión. La Patente Estadounidense No. 6,281,239, muestra un método para tratar onicomicosis administrando a un área infectada alrededor de una uña de un paciente, una composición ablandadora de tejido que contiene urea y una composición antifúngica en una composición o separada, concurrentemente o no concurrentemente . Sumario de la Invención La presente invención se refiere a un método para tratar onicomicosis en humanos, que comprende las etapas de: exponer un área de un paciente que está infectado con una infección micótica con una solución; y proporcionar una corriente directa de bajo voltaje a dicha área infectada. La invención también se refiere a un aparato para tratar onicomicosis que comprende: un medio de depósito para proporcionar una solución acuosa a un paciente; un medio para asegurar dicho medio de depósito a un área micóticamente infectada; y medios para proporcionar una corriente de bajo voltaje a dicho medio de depósito a través del área micóticamente infectada. Este método de tratamiento puede también ser usado para tratar otras infecciones virales de la piel que incluyen el virus del molusco contagioso; virus del papiloma; verrugas; epidermodisplasia verruciformis ; virus del herpes, y similares. 4 Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 muestra un pie del paciente dispuesto en un estado del baño de la técnica con una fuente de corriente de bajo voltaje disponible. La Figura 2 muestra un aparato o dispositivo que permite el tratamiento de la infección micótica con inmersión en un baño. Descripción Detallada de la Invención Varios estudios han reportado que la estimulación eléctrica aumenta la cicatrización de heridas, la estimulación Eléctrica se ha reportado por mejorar el flujo sanguíneo, disminuir el edema e inhibir el crecimiento bacteriano. Numerosos estudios han reportado que la corriente pulsada monofásica de alto voltaje (CPAV) , aumenta la cicatrización de heridas. Estudios adicionales han mostrado significante incremento en la presión parcial de oxígeno transcutánea (tCP02) en individuos diabéticos después del uso de estimulación eléctrica. La CPAV ha sido usada para tratar exitosamente úlceras diabéticas del pie. Varios estudios han demostrado que la corriente eléctrica existe en organismos vivientes. Las células siguen la trayectoria de este flujo de corriente, lo cual se refiere como el efecto galvanotáxico . Se teoriza que la estimulación eléctrica aumenta el sistema bioléctrico endógeno en el cuerpo. El incremento en la relación de cicatrización de 5 heridas con estimulación eléctrica es también teorizado por ser un resultado de la atracción de diferentes tipos celulares . Estudios han mostrado que la migración de macrófagos, fibroblastos, células mástil, neutrófilos y células epidérmicas, está influenciada por la estimulación eléctrica. La estimulación eléctrica también ha mostrado incrementar la proliferación de fibroblastos y síntesis de proteínas, así como también el crecimiento de neuritas. Estos factores juegan un papel significante en la cicatrización. Además, la resistencia de tensión del colágeno ha mostrado incrementarse después de la aplicación de tales campos eléctricos, incrementando así la resistencia de las cicatrices de la herida. Por estas razones, el uso de estimulación eléctrica para el tratamiento de heridas crónicas ha sido usado de manera incrementada durante varios años. A través de experimentos ín vitro en el laboratorio y la experiencia clínica, se ha descubierto y mostrado que tanto la estimulación eléctrica de corriente pulsada monofásica de alto voltaje (CPAV) como de corriente directa son fungicidas/fungiestáticas . Humanos tratados con estimulación eléctrica -de CPAV en un baño María, presentaron infección fúngica marcadamente disminuida, y crecimiento de uña normal sana. El crecimiento de hongos Trichophyton mentagrophytes y hongos Trichophyton rubrum, puede ser inhibido con estimulación eléctrica de corriente directa de bajo voltaje. 6 Se han demostrado las propiedades fúngicas/fungiestáticas de la estimulación eléctrica en el hongo de la uña del dedo del pie, hongos dermatológicos y otras infecciones fúngicas . Basados en estos experimentos y en los descubrimientos de las propiedades fungicidas/fungiestáticas de la estimulación eléctrica, es lógico que un dispositivo terapéutico pueda ser formado consistiendo de una pequeña unidad de estimulación eléctrica y un sistema de baño María para pies. Un dispositivo usado para tratar el hongo de las uñas de los dedos del pie, comprenderá un baño María diseñado para permitir ya sea a uno o ambos pies, ajustarse confortablemente y ser sumergido en solución. Un electrodo en cualquier lado del baño, permitirá pasar una corriente segura a través de la solución y sobre y alrededor de los dedos del pie y las uñas. La corriente será suministrada por una unidad de estimulación eléctrica, la cual será un dispositivo pequeño que se puede conectar fácilmente a, o construido en el baño. La unidad de estimulación eléctrica tendrá conductores, los cuales se unen a los electrodos . El sistema usado para tratar el hongo de las uñas de; los. dedos del pie tendrá conductores en cualquier lado del baño, lateral y medio o frontal y posterior (véase Figura 1) . El dispositivo terapéutico será adaptado para tratar otras partes del cuerpo las cuales pueden ser fácilmente sumergidas, por ejemplo, manos. 7 El dispositivo suministra una corriente pulsada de 0 a 300 Volts en picos y una forma de onda exponencial a 100-200 Hz, y pares de pulso con intervalos de 255 microsegundos o mayores (Figura 2) . Este dispositivo está conectado al baño María por medio de electrodos, permite así a la corriente eléctrica viajar en la solución y cubrir el área afectada. Esta unidad ser tan segura como una unidad estimuladora del nervio eléctrico transcutáneo (ENET) , actualmente usada para modulación del dolor, pero será potenciada para suministrar un tipo distinto de corriente. Basados en estos hallazgos de las propiedades fungicidas/fungiestáticas de tanto estimulación eléctrica de corriente directa como pulsada, muchas aplicaciones adicionales, son posibles. Además del hongo de las uñas de los dedos del pie, hongos dermatológicos, hongos en heridas e infecciones fúngicas, están hongos adicionales, los cuales podrían ser tratados con este sistema. También, se anticipa que son posibles aplicaciones veterinarias para animales y ganado con infecciones fúngicas . Ejemplos "' Para demostrar la eficacia de la Corriente Directa.de Bajo Voltaje (CDBV) o electroestimulación (E-estimulación) como un agente antifúngico para uso clínico en el tratamiento de onicomicosis, cultivos puros de Trichophyton rubrum y Trichophyton mentagrophytes que crecieron en un medio de agar 8 sólido, se sometieron a dosis clínicamente relevantes de CDBV. Para determinar los efectos antifúngicos debido a la actividad germicida y/o fungiestática de E-estimulación de CDBV, los diámetros de algunas de las zonas en el agar alrededor de los electrodos las cuales carecen de crecimiento fúngico después de la E-estimulación, fueron medidos y compararon con los cultivos de control . Se observaron zonas desprovistas de crecimiento fúngico para tanto Trichophyton rubrum como Trichophyton mentagrophytes . alrededor tanto del ánodo como del cátodo, cuando fueron aplicadas dosis clínicamente relevantes de CDBV desde 500 microamperes a 3 miliamperes . En este intervalo de dosis, la E-estimulación de CDBV, actuó de manera fungicida en una manera dependiente de la dosis. El término onicomicosis se refiere a cualquier infección fúngica de uno o más elementos del sistema de uñas, el cual consiste de la matriz de uñas, lecho de la uña y placa de la uña. Varios estudios sugieren que la onicomicosis afecta entre 2% y 18% (o posiblemente más) de la población mundial. En Norteamérica, la onicomicosis se cuenta por aproximadamente 50%; de todas las enfermedades de las uñas, es una infección varias veces más común en las uñas de los dedos del pie que en las uñas de los dedos de la mano, y es más comúnmente encontrada entre individuos mayores (algunos estudios sugieren que casi el 50% de la población mayor de 70 años de edad puede 9 ser afectada) . La incidencia de onicomicosis en los Estados Unidos y otros países del mundo desarrollado, se ha incrementado en años recientes . Esto se piensa es más probablemente el resultado de varios factores que contribuyen 5 que incluyen: el envejecimiento general de la población; la incidencia superior posible de diabetes mellitus; el uso mayor de fármacos y antibióticos inmunosupresivos ; la exposición incrementada de la población general a hongos etiológicos ; la epidemiC4-5 del VIH. 0 La onicomicosis puede ser causada por tres diferentes grupos de hongos: los dermatofitos, las levaduras y el moldSI- 7 no dermatofitico . Los dermatofitos son la etiología más común, contando entre el 85% y 90% de todos los casos. Solo dos especies de dermatofitos, Trichophyton ruJbrum (T. rubrum) 5 y Trichophyton mentagrophytes (T. mentagrophytes) , son responsables ellas mismas por casi el 80% de todos los casos de onicomicosis. Varias especies diferentes de levaduras pueden también causar onicomicosis . Estas especies son en conjunto, responsables entre 5% y 10% de todos los casos. En 0 aproximadamente 70% de estos casos, el agente etiológico es - · Candida albicans. Finalmente, varias especies diferentes de los moldes no dermatofitos pueden también causar onicomicosis. Como un grupo, estos son responsables por aproximadamente 3% a 5% de todos los casos. 5 Aunque la onicomicosis no es una infección fatal, y 10 usualmente no es una condición muy debilitante en muchos individuos afectados, puede todavía tener serias consecuencias emocionales y/o físicas. La condición puede estar asociada con dolor e incomodidad significante y en varios casos, puede algunas veces conducir a desfiguro y/o a varios grados de pérdida f ncional. Además del deterioro físico, las consecuencias sociales y psicológicas de la onicomicosis pueden ser también significantes. Así, la onicomicosis representa más que un mero problema cosmético para muchos individuos afectados, y el tratamiento profesional de proveedores para el cuidad de la salud es a menudo muy buscado . El tratamiento de onicomicosis, sin embargo, ha probado ser difícil. Los tres procedimientos tradicionales para el tratamiento son desbridamiento de la unidad de la uña, medicación tópica y quimioterapia sistémica. Lo más exitoso de estos procedimientos ha sido el uso de fármacos antifúngicos sistémicos. Durante los últimos 40 años, los agentes antifúngicos orales han sido el apoyo principal de la terapia de onicomicosis. 'Sin embargo, debido a varios factores • negativos que incluyen toxicidad del fármaco, posibles interacciones adversas de agentes antifúngicos con otros fármacos en el cuerpo, y el curso prolongado de tratamiento requerido con muchos de estos regímenes terapéuticos antifúngicos, la búsqueda para nuevos tratamientos 11 alternativos, los cuales sean ambos eficaces y los cuales representen efectos laterales mínimos, son todavía una meta de investigación importante. Durante los pasados diez años, nuevos protocolos de tratamiento los cuales emplean estimulación eléctrica (E-estimulación) , han comenzado a ser usados en el tratamiento de ciertos tipos de heridas. La eficacia clínica de tal tratamiento está ahora bien documentada. Una de las formas en las cuales la E-estimulación probablemente juega un papel en el mejoramiento de la cicatrización de heridas, es por su efecto antimicrobiano. Varios estudios ín vitro han demostrado concluyentemente que la aplicación de E-estimulación es antibacteriana a la mayoría de las bacterias patogénicas comúnmente encontradas en heridas . En el curso del propio uso clínico de la electroestimulación de corriente directa de bajo voltaje (E-estimulación de CDBV) , en el tratamiento de heridas durante los últimos 10 años, coincidentemente se ha notado que, además de su mejoramiento del proceso de cicatrización de heridas, la E-estimulación también parece disminuir significantemente muchos casos de onicomicosis de las uñas de los" dedos del pie (Michael Brogan, comunicación de personal) . Subsecuentemente, se ha comenzado a emplear regularmente esta modalidad en el tratamiento de onicomicosis y ha tenido éxito clínico muy bueno. Para comenzar a determinar los factores responsables 12 por la eficacia observada de esta modalidad en el tratamiento de onicomicosis, se condujeron experimentos in vitro para evaluar los efectos antifúngicos de la E-estimulación de CDBV en el control y/o erradicación de las dos etiologías primarias de onicomicosis, T. rubrum y T. mentagrophytes. En este documento, se describen los métodos usados y los resultados obtenidos en esta investigación, y se discute la significancia clínica de usar E-estimulación de CDBV en el tratamiento de onicomicosis en conjunto con o alternativo con otras terapias actuales. Materiales y Métodos Organismos : El medio empleado para cultivar todos los hongos fue Agar Dextrosa de Sabouraud (SDA) en placas de petri de 100 mi obtenidas de Sistemas de Microbiología de Becton Dickinson. (Becton Dickinson Microbiology Systems, PO Box 243, Cockeysville, NM 21030) . Cultivos puros del hongo dermatofito T. rúbrum y T. mentagrophytes, se obtuvieron de Presque Isle Culturest. Los cultivos base permanentes de T. rúbrum fueron establecidos por inoculación del organismo en un medio de ¦ ·' crecimiento sólido que consiste de SDA en placas de petri, e incubación subsecuente de estas placas de SDA a 25°C por 7 días. Después de este periodo de tiempo, cada placa de SDA se cubrió por numerosas colonias de T. rúbrum las cuales se han fusionado en una "estopilla" fúngica, apelusada, homogénea (o 13 masa continua de crecimiento) , junto con la superficie completa del agar. Cultivos base permanentes de T. entagrophytes fueron establecidos en la manera descrita anteriormente para T. rubrum. Los cultivos base de ambos hongos fueron mantenidos a 4°C por el periodo de tiempo completo de estos experimentos y fueron monitoreados semanalmente para determinar su viabilidad. Procedimiento Experimental e Instrumentación Todos los experimentos de E-estimulación de CDBV descritos en este reporte fueron realizados en una cabina de seguridad biológica Tipo A/B3 NUAIRE Clase II, usando técnicas asépticas estándares. Toda la E-estimulación de CDBV se realizó usando un Estimulador de LIDC Ric-Mar VI . Se hicieron lecturas de corriente independiente con un amperímetro de Precisión B de Dynascon Corporation. Para cada experimento de E-estimulación, una sección de 1.0 cm de agar que contiene ya sea T. rubrum o T. mentagrophytes que crece en la superficie, se removió asépticamente a partir de las placas de cultivo base de SDA respectivas, usando una aguja de disección estéril. La pieza de ? .0.· CM2 de SDA que contiene ya sea T. rubrum o T_. mentagrophytes, fue entonces transferida a 5 mi de salina estéril al 0.9%. El tubo de salina estéril se mezcló sometiendo a vórtices por 10 seg para arrastrar la hifa, conidios y esporas fúngicas de la superficie del agar. Usando 14 una micropipeta estéril, se transfirieron 250 mi de la solución salina fúngica a una nueva placa de petri de SDA estéril. Si las placas de SDA múltiples fueron inoculadas en un experimento dado, este procedimiento se realizó múltiples veces a partir de la misma solución salina fúngica. La solución salina fúngica fue uniformemente distribuida sobre la superficie completa de cada una de la(s) placa (s) de SDA inoculadas usando una varilla de dispersión de vidrio estéril . Las placas de SDA fueron entonces incubadas a 25°C por 24 horas. Al final de este periodo, una película apenas visible de crecimiento fúngico cubrió la superficie de medio de crecimiento completo de las placas de SDA. Se incluyeron placas de SDA de control no inoculadas en cada grupo experimental para asegurar la esterilidad del medio. Después de 24 horas de incubación, se aplicó corriente eléctrica a cada una de las placas de SDA experimentales que contienen ya sea T. rubru o T. menta.groph.ytes por un Estimulador LIDC Rich Mar VI . Los electrodos usados para abarcar esto consisten de 2 piezas de acero inoxidable (1 mm de diámetro y 2.5 cm de largo) , las cuales fueron permanentemente insertadas a través de la porción superior de la placa de petri estéril 1.9 cm aparte entre sí, y las cuales se aseguraron con cemento epoxi a la superficie externa. Los electrodos se desinfectaron y almacenaron en etanol al 95% previo a y entre experimentos. Solo antes de cada experimento, 15 la porción superior que contiene los electrodos se removió de la unidad de almacenamiento de etanol al 95%, el etanol se dejó evaporar, y los electrodos se insertaron en el agar de la porción inferior de la placa de SDA que contiene 24 horas de crecimiento de cualquier hongo, cerrando la porción superior sobre la porción inferior de una placa de petri . Después, cualquiera de los electrodos permaneció en el agar por 30 minutos a temperatura ambiente (22-24°C) , sin aplicación de CDBV (0 amperes) , o se aplicó CDBV usando aparato de E-estimulación descrito anteriormente. Una corriente de ya sea 500 microamperes , 1 miliampere, 2 miliamperes o 3 miliamperes de CDBV se aplicó por 30 minutos a temperatura ambiente (22-2 °C) . Todos los amperajes fueron confirmados por el uso de un amperímetro independiente conectado en serie . En cada experimento, para confirmar la viabilidad fúngica y sanidad del medio, fue también incluida una placa de SDA de control que contiene el hongo particular usado en el experimento, pero el cual no se sometió a ya sea E-estimulación o intrusión de electrodo. Esta placa se inoculó al mismo tiempo, en la misma manera y a partir del mismo tubo salino como las placas experimentales. Después de la E-estimulación de CDBV, cada placa de petri de SDA se incubó a 25°C por 24 horas para permitir el crecimiento adicional del hongo, el cual podría entonces ser fácilmente visualizado. Después de esta incubación de 24 16 horas, el diámetro de algunas de las zonas carentes del crecimiento fúngico (donde no ocurre crecimiento fúngico adicional después de la aplicación de E-estimulación) en la ubicación de tanto los electrodos positivos como negativos, se midió a casi 0.1 mm usando una regla de milímetros y un microscopio de disección. Las placas de SDA fueron entonces incubadas por unos 3 a 5 días adicionales, sin observaciones y mediciones adicionales hechas diariamente. Para determinar si el material del electrodo mismo fue tóxico a cualquiera de los dos hongos, o si cualquier etanol (usado en la desinfección) permanece en los electrodos durante la aplicación de E-estimulación (lo cual podría matar los hongos o inhibir su crecimiento) , se inocularon placas de SDA con ya sea T. rubrum o T. mentagrophytes e incubaron por 24 horas como se describe anteriormente. Después de esto, los electrodos se insertaron en la placa de SDA que contiene cualquiera de los hongos y se dejó reposar por 30 minutos (como se describe previamente) , pero no se aplicó corriente eléctrica (0 amperes) . Las placas de SDA fueron entonces incubadas por 7 días como se describe previamente, y después se verificaron para determinar la presencia de algunas de las zonas que carecen del crecimiento fúngico durante cada uno de estos siete días. Para determinar si fueron generados algunos de los metabolitos antifúngicos inhibitorios o tóxicos en el medio de 17 crecimiento de SDA como un resultado de la aplicación de corriente eléctrica, se aplicó CDBV de ya sea 3 u 8 miliamperes a placas de SDA (como se describe) , por 30 minutos previo a la inoculación de ya sea T. rubrum o T. mentagrophytes. Inmediatamente después de esto, 250 microlitros de solución salina fúngica de ya sea T. rubrum o T. mentagrophytes, fue uniformemente distribuida sobre la superficie como se describe previamente. Las placas de SDA entonces fueron incubadas a 25°C por 7 días, y la presencia de algunas de las zonas que carecen del crecimiento fungico cerca del sitio de los contactos de electrodos (o en otra parte) , se observó y/o midió cada día. Para determinar si la E-estimulación de CDBV está actuando principalmente en una manera fungiestática (crecimiento fúngico inhibido pero sin matar células fúngicas) , o una manera fungicida (células fúngicas muertas) , se hizo lo siguiente durante cada experimento con ya sea T. rubrum o T. mentagrophytes. Se aplicó E-estimulación de CDBV como se describe anteriormente, y después de 24 horas de incubación a 25°C, las muestras fueron cuidadosamente tomadas én las áreas que carecen del crecimiento fúngico alrededor de cada electrodo con una esponja estéril para determinar si estuvieron presentes en estas zonas células fúngicas viables. Esta esponja se usó entonces para inocular placas de SDA estériles, frescas. Estas placas se incubaron por 7 días a 18 25°C y se observaron diariamente para determinar la presencia de cualquier crecimiento fúngico que pudiera resultar de la transferencia de cualquier hifa o espora fúngica viable a partir de una placa experimental a la nueva placa de SDA. Una 5 placa de control inoculada con los hongos tomada de la misma placa experimental, pero de una región lejos de los electrodos y que contiene el crecimiento fúngico, también fue incluida con cada uno de estos experimentos . Resultados 0 En esta investigación, varias dosis clínicamente relevantes de E-estimulación de CDBV fueron aplicadas a 24 horas de cultivos puros de T. rubrum o T. mentagrophytes que crece en placas de SDA. Después de esto, el diámetro de algunas de las zonas alrededor de cada electrodo que carecen 5 de crecimiento fúngico fue observado y medido. Para cada hongo, cada experimento se replicó tres veces a los ajustes de corriente y tiempo especificados . El tamaño de las zonas alrededor de cada electrodo carece del crecimiento fúngico para T. rubrum o T. mentagrophytes debido a la aplicación de 0 E-estimulación de CDBV a los varios amperajes usados. Para ¦ * tqdos . · los amperajes, excepto los amperes 0, zonas aproximadamente circulares o circulares desprovistas de crecimiento fúngico fueron observadas alrededor de tanto el electrodo positivo (ánodo) como negativo (cátodo) . Además, se 5 observó un incremento en el diámetro de las zonas con los 19 amperajes incrementados para ambos hongos (Fig. 1) . Debido a que se insertaron electrodos de 1 mm en la superficie de agar semi-sólido durante cada experimento para generar una corriente, hubo una depresión producida en la superficie del agar en la ubicación de estos electrodos en todas las placas de SDA. Esto fue debido, más probablemente, a la compresión y/o licuefacción del agar. Consecuentemente, la ausencia de crecimiento observada directamente bajo cada electrodo en este estudio, como se notó previamente, no se consideró ser indicativo de la actividad fungicida o fungiestática. Para confirmar que los efectos antifúngicos en T. rubrum y T. mentagrophytes observados en este estudio fueron debido a la aplicación de E-estimulación de CDBV, y no a otras posibles causas, se hicieron los siguientes controles. Para eliminar la posibilidad de que los efectos antifúngicos observados fueron debido al material del electrodo mismo, en cada ronda de experimentos se inoculó una placa de SDA con cualquiera de los hongos e incubó por 24 horas . Después de esto, los electrodos se insertaron en la misma manera y por el mismo periodo de tiempo como sería en un experimento típico usando .CDBV, pero no se aplicó corriente (0 amperaje) . Las placas fueron entonces incubadas y observadas como se describe anteriormente. En estas placas de SDA, no fueron nunca observadas áreas desprovistas de crecimiento fúngico alrededor de cualquier electrodo con ya sea T. rubrum o T. 20 mentagrophytes. Este mismo experimento fue también usado para determinar si la carencia de crecimiento fúngico alrededor de los dos electrodos fue debido a cualquier etanol restante (usado para desinfectar los electrodos entre experimentos) en los electrodos. Si este fuera el caso, algún área desprovista del crecimiento fúngico debe haberse observado alrededor de la región en donde se insertaron los electrodos en las placas de agar, aún sin la aplicación de CDBV (0 amperes) . No se observó tal región. Otra posible razón para los efectos antifúngicos observados en esta investigación, fue que los cambios producidos en el medio de crecimiento fúngico (SDA) como un resultado de la aplicación de E-estimulación de CDBV, hace al medio no más sustentador del crecimiento fúngico. Para investigar esta posibilidad, se hizo la siguiente serie de experimentos. Previo a la inoculación de cualquiera de los hongos en el medio SDA, se aplicó CDBV de ya sea 3 miliamperes (el amperaje clínico más alto usado en este estudio) , u 8 miliamperes (más allá del intervalo clínico usado) , a 8 placas de SDA por 30 minutos cada una (4 placas a 3 miliamperes, y 4 ¦ placas a 8 miliamperes.) . Entonces se inoculó T. rubrum en 2 placas de 3 miliamperes y 2 de los 8 miliamperes e incubó por 7 días. Se inoculó de manera similar T. mentagrophytes. Si el medio fue de hecho cambiado por aplicación de E-estimulación de CDBV en tal forma para prevenir o inhibir el crecimiento 21 fúngico, esto debe ser observado como una carencia de crecimiento en el agar en la región alrededor de los electrodos (o posiblemente alguna otra región del agar) . No se observó tal región carente del crecimiento fúngico para ya sea T. rubrum o T. mentacfrophytes en las áreas que circundan cualquiera de los electrodos (o cualquier otra área) , cuando se inocularon los hongos en una placa de SDA después de 3 miliamperes de aplicación de CDBV. A 8 miliamperes, no se observó región carente de crecimiento fúngico para cualquiera de los hongos en el cátodo. Sin embargo, a este amperaje, se observó alguna decoloración, licuefacción y subsecuente depresión del agar en el área en la cual se colocó el ánodo . Ningún hongo fue capaz de crecer muy bien sobre esta región de ánodo descolorida, deprimida a 8 miliamperes. De otro modo, el crecimiento ocurrió a través del resto de la placa. Para determinar si el intervalo de la aplicación de E-estimulación de CDBV usado en estos experimentos fue actuando principalmente como un agente fungicida o agente fungiestático, las áreas alrededor de cada electrodo que carecen de crecimiento fúngico, fueron muestreadas con una esponja estéril 24 horas después de la aplicación de E-estimulación para determinar la presencia de células o esporas fúngicas viables . Se hicieron un total de 24 muéstreos para T. rubrum y 24 muéstreos para T. mentagrophytes. Se tomó un muestreo del área alrededor de cada electrodo en todas las 22 placas las cuales recibieron una dosis de 500 microamperes, 1 miliampere, 2 miliamperes y 3 miliamperes . El crecimiento se observó en las placas de SDA fresco inoculadas con una esponja después de muestrear una placa experimental . En los 22 muéstreos restantes, no se observó crecimiento. Finalmente, como se ha reportado previamente, también se ha observado la producción de burbujas de gas en el cátodo durante todos los experimentos, y ocasionalmente, también en el ánodo . Además , se observó una decoloración azul alrededor del cátodo, posiblemente debido a un cambio de pH. Discusión Esta investigación fue emprendida para determinar si la eficacia clínicamente observada de la E-estimulación de CDBV en el tratamiento de onicomicosis es debida (al menos en parte) , a un efecto antifúngico de la modalidad. Los efectos antibacterianos contra muchos de los patógenos de heridas bacterianas comunes, se han demostrados in vitro para tanto corriente directa de bajo voltaje como corriente pulsada de alto voltaje en varios estudios. Sin embargo, tal documentación in vi tro es negligente con respecto al efecto de ' la corriente eléctrica en los patógenos fúngicos comunes, la levadura Candida albicans es una de las cuantas excepciones. Dosis clínicamente relevantes de E-estimulación de CDBV son antifúngicas in vitro, a las dos causas primarias de onicomicosis, el hongo T. rubrum y T. .mentacjrophytes. Los 23 efectos antifúngicos de E-estimulación de CDBV ocurren en una manera dependiente de la dosis en los intervalos clínicamente relevantes que fueron elegidos para usar en los experimentos in vitro (500 microamperes a 3 miliamperes) . Pue deseado hacer una segunda determinación relacionada acerca de si la E-estimulación de CDBV en el intervalo de dosis utilizada actuaba principalmente como un agente fungiestático o un agente fungicida. Para determinar esto, cuidadosamente se muestrearon las áreas desprovistas de crecimiento fúngico alrededor de los electrodos en cada uno de nuestros experimentos 24 horas después de la E-estimulación, con una esponja estéril para análisis para determinar algunas de las células o esporas fúngicas viables, las cuales podrían dar origen a colonias fúngicas en nuevas placas de SDA. Se han usado metodologías similares para determinar si la E-estimulación es bactericida o bacteriostática. En 46 del total de 48 muéstreos, no se observó crecimiento fúngico en las placas de SDA recientemente inoculadas . Las dos placas que mostraron algún crecimiento fueron ambas de la región del cátodo de la placa de dosis de 3 miliamperes. Estas zonas tienen el diámetro más grande, y es posible que la esponja de muestreo pueda haber tocado inadvertidamente alguna de las células fúngicas viables en la periferia de la zona. Como tal, podría representar un artefacto de estos experimentos, preferentemente que carencia actual de la actividad fungicida. 24 Se cree fuertemente que tal es el caso. Consecuentemente, los datos sugieren fuertemente que la E-estimulación de CDBV está actuando de manera fungicida en el intervalo de amperaje usado en este estudio. La muerte celular puede ser causada por un número de factores que incluyen: daño o desnaturalización de las enzimas celulares clave; daño al ADN; daño o rompimiento de la membrana celular; daño o destrucción de los sistemas de transporte celulares clave. La electricidad se cree más probablemente, que mata células afectando la estructura molecular de la membrana celular, conduciendo a cambios fatales en la permeabilidad de la membrana celular. Tal daño a la membrana celular podría explicar los efectos antifúngicos de E-estimulación de CDBV que se observaron tanto in vitro como in vivo. Sin embargo, otros factores pueden también jugar un papel. La aplicación de corriente eléctrica al medio de agar puede resultar en cambios en el pH del medio, incrementos en temperatura y la generación de metabolitos tóxicos . Todos estos (y posiblemente todavía otros) , podrían actuar microbialmente a un grado u otro. Tales factores han sido ¦ ·' considerados en otros estudios observando los efectos antibacterianos de la electricidad. No se observaron individualmente estos factores en este estudio, debido a que fueron principalmente relacionados con la determinación si la aplicación misma de E-estimulación de CDBV fue antifúngica. Si 25 la aplicación de electricidad a un hongo que crece en una uña del dedo del pie o superficie de agar resulta en la muerte de todas o algunas de estas células fúngicas, entonces si tal actividad fungicida fue debido a cambios fatales en la membrana celular de las células fúngicas y también a cambios en el pH o incremento en la temperatura celular, es secundario a nuestro interés actual .' Tales aspectos esperanzadamente se dirigirán en investigaciones subsecuentes. Sin embargo, esta presente investigación, se refirió a demostrar que cualquiera de los efectos antifúngicos de E-estimulación de CDBV en las dos etiologías principales de onicomicosis fue debido a la aplicación de E-estimulación misma (debido a los efectos de corriente eléctrica) , y no debido a cualquiera de los artefactos producidos como un resultado de la metodología experimental. Debido a que no se observó alguna la inhibición fúngica alrededor de cualquier electrodo durante algún ensayo cuando los electrodos fueron insertados, pero cuando la corriente no se aplicó (0 amperes) , se está seguro que el material de electrodo mismo (acero inoxidable) , no es antifúngico. Otra preocupación que se tenía fue- que- algo de etanol, el cual se usó para desinfectar los electrodos antes y entre experimentos, pudiera permanecer en los electrodos después de la inserción en el medio de SDA. Puesto que el etanol es un desinfectante, puede matar o inhibir las células bacterianas y fúngicas. Así, puede ser que 26 se vean áreas alrededor de cada electrodo que carecen del crecimiento fúngico, las cuales fueron debido a la acción de desinfección de etanol, en lugar de los efectos antifúngicos de la E-estimulación de CDBV. Para minimizar la posibilidad de esto, después de quitar los electrodos de sus unidades de almacenamiento de etanol (almacenado en la cabina biológica) , se dejaron secar por un mínimo de 30 segundos antes de que fueran insertados en algunas de las placas experimentales de SDA. No se observó actividad anti-fúngica en el ajuste de 0 amperes como se describe anteriormente, se está seguro de que insuficiente (o no) etanol permanece en los electrodos después de la inserción en algunas de las placas de SDA. Es claro que todo el etanol se ha evaporado y no fue una causa de las zonas observadas que carecen de crecimiento fúngico. Otra razón posible para algunas de las áreas observadas que carecen del crecimiento fúngico alrededor de cualquier electrodo, fue que la aplicación de E-estimulación de CDBV en el intervalo de corriente utilizada cambió el medio de SDA en alguna forma que no podría soportar más el crecimiento de ya sea T. rubrurn o T. entagrophytes . Esto podría resultar de la •producción de productos tóxicos o inhibitorios en el medio como un resultado de la aplicación de CDBV, o de cambios en el pH del medio debido a la CDBV, o de la desnaturalización y degeneración de nutrientes necesarios en el medio sin los cuales el hongo podría no crecer. Para investigar esta 27 posibilidad, primero se aplicaron ya sea 3 miliamperes u 8 miliamperes de E-estimulación de CDBV a varias placas de SDA antes de que se inocularan con ya sea T. rubrum o T. mentagrophytes . Si el medio de SDA fue de hecho cambiado por la aplicación de CDBV, de manera que ahora prevenga o inhiba el crecimiento fúngico, esto debe ser observado como una carencia de crecimiento dentro/en el agar en la regió (s) alrededor de los electrodos (o posiblemente algunas de otras regiones del agar) . Como muestran los datos, no se observó tal región a 3 miliamperes alrededor de ya sea el cátodo o el ánodo, o en cualquier otro lugar en las placas. El crecimiento ocurrió a través de cada placa de SDA. A 8 miliamperes, más de dos veces el amperaje más alto usado en el estudio, el crecimiento ocurrió en el cátodo, pero no el ánodo, en donde se observó la licuefacción y depresión. Es probable que a este amperaje, la carencia de crecimiento fue debida a algunos cambios físicos producidos en el medio (es decir, licuefacción) , o a la generación de metabolitos tóxicos, o la desnaturalización de nutrientes vitales, o a una combinación de varios factores. Sin embargo, debido a que 3 miliamperes fue la dosis más alta de E-estimulación de CDBV que se usó en los estudios antifúngicos , se está seguro de que a este amperaje y a amperajes más bajos, el medio no se altera en una forma significante para afectar negativamente el crecimiento de cualquiera de los hongos. Para soportar además esta 28 valoración, se notó que en los experimentos que involucran 500 microamperes, 1 miliampere, 2 miliamperes y 3 miliamperes de E-estimulación de CDBV, las áreas del agar que carecen de crecimiento fúngico debido a la aplicación de CDBV, fueron todavía capaces de soportar el crecimiento de ambos hongos . Esto se evidencia por el hecho de que si estas placas de agar fueron incubadas a 25 °C por 7 a 10 días, podría verse eventualmente de manera calara, que el hongo viable fuera del diámetro de la zona fungicida comienza a re-colonizar tal zona hasta que una estopilla fúngica sólida se forma nuevamente sobre el área completa. En conjunto, estos resultados soportan fuertemente la valoración de que cualquiera de los cambios posibles producidos en el medio de SDA, no fueron responsables de las zonas observadas que carecen de crecimiento fúngico alrededor de los electrodos en el intervalo de dosis clínicamente relevantes de CDBV que fue empleada en este estudio . Aparatos En otras modalidades de la invención, equipos como dispositivos pueden ser usados para tratar la infección fúngicá- proporcionando ' un depósito de fluido portátil en el área a ser tratada, la cual también incorpora un primer medio de electrodo y un segundo medio de electrodo. En algunos ejemplos, este dispositivo podría tener la forma general de un vendaje o similar con una porción adhesiva junto a la 29 periferia del medio de depósito para proporcionar un sello con el área de contacto a ser tratada. Después, una fuente de energía de CD puede ser enganchada hacia arriba al primero y segundo electrodo para proporcionar el campo electrónico a través de los electrodos y la superficie a ser tratada. Este aparato similar a "vendaje", permite el método de tratamiento a ser considerado sin limitar la actividad del paciente. Una persona que es tratada con tal aparato, será capaz de ser activa durante el tratamiento y por lo tanto, sea más probable que participe en regímenes de tratamiento completo. Aquellos expertos en la técnica reconocerán que además de los parches, un depósito similar localizado en el medio de depósito de "vendaje", puede hacerse en parte de una pieza del aparato. Dependiendo de los sitios de la infección fúngica, el aparato podría ser en la forma de un calcetín, pantalones de entrenamiento o camisa. Soluciones Se ha encontrado también, que ciertos aditivos a la solución acuosa en el depósito pueden incrementar la eficacia del régimen tratamiento. Por ejemplo, se ha encontrado que una ' fuente de -oxigenación tal como peróxido de hidrógeno, acelera la reducción de onicomicosis . Preferiblemente, la concentración de peróxido de hidrógeno está en el intervalo de 0.01 hasta alrededor de 2 por ciento en peso. La solución en estas concentraciones puede ser preparada previamente, o puede 30 ser recientemente preparada solo antes del tratamiento. La solución puede también ser ajustada para corregir la concentración, de manera que sea isotónica, y además pueden ser agregados sistemas adicionalmente amortiguadores de manera que el pH de las soluciones permanezca cerca de las condiciones fisiológicas del tejido a ser tratado. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

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REIVINDICACIONES
Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Método para tratar un área infectada en un sujeto, caracterizado porque comprende las etapas de: exponer dicha área infectada a una solución acuosa; y proporcionar corriente directa a dicha solución acuosa para tratar el área infectada. 2. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el área está infectada con oncomicosis, molusco contagioso, virus del papiloma, verrugas, epidermodisplasia verruciformis , virus del herpes o infección fúngica. 3. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dicha área es en la piel de dicho sujeto .
4. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la solución acuosa incluye peróxido de hidrógeno.
5. Método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la solución acuosa comprende alrededor de 0.01 hasta alrededor de 2.0 por ciento en peso de peróxido de hidrógeno. 32
6. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dicha corriente eléctrica es menos de alrededor de 3 miliamperes.
7. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la corriente directa es menos de alrededor de 8 miliamperes.
8. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dicha corriente directa es suministrada por una fuente de voltaje de menos de alrededor de 150 volts.
9. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dicha corriente eléctrica es pulsada.
10. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la corriente directa tiene un ancho de pulsación de alrededor de 5-50 microsegundos.
11. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dicha área infectada es tratada con dicha corriente eléctrica por un periodo de tiempo de alrededor de 20-45 minutos.
12. Aparato para tratar un área infectada en un sujeto, caracterizado porque comprende: un depósito; una solución acuosa en dicho depósito y expuesta a dicha área infectada; un primer electrodo en el depósito; un segundo electrodo en el depósito; y un circuito para proporcionar corriente a dicha 33 solución acuosa para tratar dicha área infectada.
13. Aparato de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque dicha área infectada es sumergida en la solución acuosa. 5
14. Aparato de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque dicho primer electrodo y el segundo electrodo se forman de acero inoxidable .
15. Aparato portátil para el tratamiento de un área infectada en un sujeto, caracterizado porque comprende .-0 una membrana elaborada de un material que es impermeable a soluciones acuosas y que tiene un borde; un adhesivo dispuesto en el borde de dicha membrana; una solución acuosa en dicha membrana en contacto con un área infectada de un sujeto; 5 un primer electrodo fijo a dicha membrana; un segundo electrodo fijo a dicha membrana; un circuito para proporcionar corriente a dicha solución acuosa para tratar dicha área infectada.
16. Aparato de conformidad con la reivindicación 15, 0 caracterizado porque además comprende una apertura llena de - ' líquido que permite al aparato ser colocado contra el área infectada para formar una bolsa la cual es capaz de sujetar una cantidad de una solución acuosa.
17. Aparato de conformidad con la reivindicación 15, 5 caracterizado porque la membrana está adaptada para estar 34 unida a dicho sujeto.
18. Aparato de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el primer electrodo y el segundo electrodo se forman de acero inoxidable.