MXPA00009904A - Hidroxamidas del acido (4-sulfonilamino)-tetrahidropiran-4-carboxilico - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula en la que Q es como se ha definido, que esútil en el tratamiento de un trastorno seleccionado del grupo formado por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, efisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad en el trasplante de unórgano, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgica, cáncer, ulceración de tejidos, reestenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis emapollosa, osteoporosis, falta de firmeza en implantes de articulaciones artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurismaaórtica (incluyendo aneurisma aórtica abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardíaca congestiva, infarto de miocardio, accidente cerebro vascular, isquemia cerebral, traumatismo craneal, lesión de la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, potenciación nootrópica o cognitiva, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiples, angiogénesis ocular, lesión corneal, deeneración macular, curación anómala de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento de tumor, metástasis tumoral, quemaduras corneales, escleritis, SIDA, septicemia y choque séptico;además, los compuestos de la presente invención se pueden usar en terapia de combinación con fármacos antiinflamatorios no esteroides (AINE) y analgésicos convencionales, y en combinación con fármacos citotóxicos como adriamicina, daunomicina, cis-platino, etopósido, taxol, taxótero y otros alcaloides como vincristina, en el tratamiento del cáncer.

Description

HIDROXAMIDAS DEL ACIDO (4-SULFONiLAMiNO -TETRAH»DROPIRAN- 4-CARBOXILICO ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a derivados de la hidroxamida del ácido (4-sulfonilamino)-tetrahidropiran-4-carboxílico y a composiciones farmacéuticas y procedimientos de tratamiento. Los compuestos de la presente invención son inhibidores de las cinc metaloendopeptidasas de zinc, en especial las que pertenecen a las subfamilias de metaloproteinasa de la matriz (también denominada MMP o matrixina) y de reprolisina (también conocida como adamilsina) de las metcinquinas (Rawlings, et al., Methods in Enzvmology, 248, 183-228 (1995) y Stocker, et al.. Protein Science. 4, 823-840 (1995)). La subfamilia de enzimas MMP, actualmente cuenta con diecisiete miembros (MMP-1 , MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11 , MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19 y MMP-20). Las MMP en su mayoría bien conocidas por su función en la regulación de la renovación de las proteínas de la matriz extracelular y como tales desempeñan funciones importantes en los procesos fisiológicos normales como la reproducción, el desarrollo y la diferenciación. Además, las MMP se expresan en muchas situaciones patológicas en las que se produce una renovación anómala de tejido conectivo. Por ejemplo, MMP- 13, una enzima con una potente actividad para degradar el colágeno tipo II (el principal colágeno en el cartílago) ha demostrado que se sobreexpresan en el cartílago osteoartrítico (Mitchell, et al.. J. Clin. Invest.. 97, 761 (1996)). Otras MMP (MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-12) también son sobreexpresadas en el cartílago osteoartrítico y cabe esperar que la inhibición de algunas o todas estas MMP disminuya o bloquee la pérdida acelerada de cartílago típica de enfermedades de las articulaciones como la osteoartrítis o la artritis reumatoide. Las reprolisinas de mamífero se conocen como ADAM [Disintegrid And Metalloproteinase (una disintegrina y metaloproteinasa)] (Wolfberg, et al., J. Cell. Biol.. 131 , 275-278 (1995)) y contiene un domino de disíntegrina además de un dominio similar al de las metaloproteinasas. Hasta la fecha, se han identificado veintitrés ADAM distintas. La ADAM-17, también conocida como enzima convertidora del factor alfa de necrosis tumoral (TACE) es la ADAM mejor conocida. La ADAM-17 (TACE) es responsable de la separación del factor alfa de necrosis tumoral unido a las células (TNF-a, también conocido como caquectina). Se conoce que el TNF-a está implicado en muchas enfermedades infecciosas y autoinmunes (W. Friers, FEBS Letters. 285, 199 (1991)). Además, se ha demostrado que el TNF-a es el mediador principal de la repuesta inflamatoria observada en la septicemia y el choque séptico (Spooner, et al., Clinical Immunology and Immunopathology. 62 S11 (1992)). Existen dos formas de TNF-a, una proteína de membrana tipo II de masa molecular relativa 26.000 (26 KD) y una forma soluble de 17 KD generada por las proteínas unidas a las células mediante escisión proteolítica específica. La forma soluble de 17 KD del TNF-a es liberada por las células y se asocia a los efectos perjudiciales del TNF-a. Esta forma de TNF-a también puede actuar en sitios alejados del lugar de la síntesis. Así, los inhibidores de la TACE evitan la formación de TNF-a soluble y evitan los efectos perjudiciales del factor soluble. Los compuestos seleccionados de la invención son potentes inhibidores de agrecanasa, una enzima importante en la degradación del agrecano del cartílago. Se cree también que la agrecanasa, es una ADAM. La pérdida de agrecano de la matriz del cartílago es un factor importante en la progresión de enfermedades de las articulaciones como osteoartritis y artritis reumatoide y cabe esperar que la inhibición de agrecanasa ralentice o bloquee la pérdida de cartílago en estas enfermedades. Otras ADAM que han demostrado su expresión en situaciones patológicas incluyen ADAM TS-1 (Kuno et al.. J. Biol. Chem.. 272, 556-562 (1997)) y ADAM 10, 12 y 15 (Wu, et al., Biochem. Biophvs. Res. Comm.. 235, 437-442 (1997). Como reconocimiento de la expresión, se apreciará que la asociación de substratos fisiológicos y enfermedades de la ADAM aumenta el completo conocimiento de la función de inhibición de esta clase de enzimas. Las enfermedades en las que la inhibición de MMP y/o ADAM proporcionará un beneficio terapéutico incluyen: artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, síndrome de insuficiencia respiratoria aguda, enfermedad pulmonar obstructiva crónica por asma, enfermedad de Alzheimer, toxicidad en el transplante de un órgano, coquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgica, cáncer, ulceración de tejidos, reestenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis ampollosa, osteoporisis, falta de firmeza en implantes de articulaciones artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardíaca congestiva, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral, traumatismo craneal, lesión de la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntigton, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía, periférica, dolor, anglopatía amiloide cerebral, potenciación nootrópica o cognitiva, esclerosis lateral amotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión corneal, degeneración macular, curación anómala de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento de un tumor, metástasis tumoral, quemaduras corneales, esclerosis, SIDA, septicemia, cloque séptico y otras enfermedades caracterizadas por expresión de metaloproteinasas o ADAM. Esta invención se refiere además a un procedimiento para usar los compuestos de la invención en el tratamiento de las enfermedades anteriores en mamíferos, especialmente en seres humanos y a las composiciones farmacéuticas útiles para ello.

Se ha reconicido que diferentes combinaciones de MMP y ADAM se expresan en diferentes situaciones patológicas. Como tales, para enfermedades particulares pueden preferirse inhibidores con selectividades específicas para ADAM y/o MMP particulares. Por ejemplo, la artritis reumatoide es una enfermedad inflamatoria de las articulaciones caracterizada por niveles excesivos de TNF y la pérdida de los constituyentes de la matriz de la articulación. En este caso, la terapia preferida puede ser un compuesto que inhiba TACE y agrecanasa, así como MMP, tal como MMP-13. Por otro lado, en una enfermedad de las articulaciones menos inflamatoria, como la osteoartritis, pueden preferirse los compuestos que inhiban las MMP que degradan la matriz como MMP-13, pero no TACE. Los autores de la presente invención también han descubierto que es posible diseñar inhibidores con actividad de metaloproteinasa diferencial. De forma específica, por ejemplo, los inventores han sido capaces de diseñar moléculas que inhiben de forma selectiva la metaloproteinasa-13 de la matriz (MMP-13), preferiblemente sobre la MMP-1. Los inhibidores de las metaloproteinasas de la matriz y de reprolisina son bien conocidos en la bibliografía. De forma específica, la publicación de documento PCT WO 96/33172, publicada el 24 de octubre de 1996, se refiere a ácidos ariisulfonilamino hidroxámicos cíclicos que son útiles como inhibidores de MMP. La patente de los Estados Unidos 5,672.615, la publicación de documento PCT WO 97/20824, publicación de documento PCT WO/9808825, publicación de documento PCT WO 98/27069 y publicación de documento PCT WO 98/34918, publicados el 13 de agosto de 1998, titulados "Arilsulfonil Hidroxámicos cíclicos que son útiles como inhibidores de MMP. Las publicaciones de documentos PCT WO 96/27583 y WO 98/07697, publicadas el 7 de marzo de 1996 y el 26 de febrero de 1998, respectivamente, se refieren a ácidos arilsulfonil hidroxámicos. La publicación de documento PCT WO 98/03516, publicada el 29 de enero de 1998 se refiere a fosfinatos con actividad frente a MMP. La publicación de documento PCT WO 98/34915, publicada el 13 de agosto de 1998, titulada "N-Hidroxi-b-Sulfonil Propionamíde Derivatives", se refiere a propionilhidroxamidas como inhibidores útiles de MMP. La publicación de documento PCT 98/33768, publicada el 6 de agosto de 1998, titulada "Arylsulfonylamino Hydroxamic Acid Derivatives" se refiere a ácidos ariisulfonilamino hidroxámicos N-sustituidos. La publicación de documento PCT WO 98/30566, publicada el 16 de julio de 1998, titulada "Cyclic Sulfone Derivatives", se refiere a ácidos sulfona hidroxámicos cíclicos como inhibidores de MMP. La solicitud de patente provisional de los Estados Unidos 60/55208, presentada el 8 de agosto de 1997, se refiere a ácidos biaril hidroxámicos como inhibidores de MMP. La solicitud de patente provisional de los Estados Unidos número de serie 60/55207, presentada el 8 de agosto de 1997, titulada "Aryloxyarylsulfonylamino Hydroxamic Acid Derivatives", se refiere a ácidos ariloxiarilsulfonil hidroxámicos como inhibidores de MMP. La solicitud de patente provisional de los Estados Unidos 60/62766, presentada el 24 de octubre de 1997 titulada "The Use of MMP-13 Selective Inhibitors For The Treatment of Osteoarthritis and Other MMP Mediated Disorders", se refiere al uso de inhibidores selectivos de MMP-13 para tratar la inflamación y otros trastornos. La solicitud de patente provisional de los Estados Unidos número de serie 60/68261 , presentada el 19 de diciembre de 1997 se refiere al uso de inhibidores de MMP para tratar la angiogénesis y otros trastornos. Cada una de las publicaciones y solicitudes anteriormente citadas se incorpora en la presente como referencia en su totalidad.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que Q es alquilo d-d, arilo C6-C?0, heteroarilo C2-C9, (ariloxi C6-C?0) (alquilo d-d), (ariloxi C6-C?0) (arilo Ce-Cío), (ariloxi C6-C?0) (heteroarilo C2-C9), (aril -Cio) (alquilo d-d), (aril C6-C?0) (arilo C6-C?0), (aril C6-C?0) (heteroarilo C2-C9), (aril C6-C 0) (aril -C o) (alquilo C -C6), (aril -Cio) (aril d-Cio) (arilo C6-C?0), (aril C6-C?o) (aril C6-C?0) (heteroarilo C2-C9), (heteroaril C2-C9) (alquilo d-C6), (heteroaril C2-C9) (arilo C6-C?0), (heteroaril C2-C9) (heteroarilo C2-C9), (aril C6-C?0) (alcoxi C?-C6) (alquilo C?-C6), (aril C6-C?0) (alcoxi C -C6) (arilo C6-C?0), (aril C6-C?0) (alcoxi C?-C6) (heteroarilo C2-C9), (heteroariloxi C2-C9) (alquilo C?-C6), (heteroariloxi C2-C9) (arilo C6-C?o), (heteroariloxi C2-C8) (heteroarilo C2-C9), (heteroaril C2-C8) (alcoxi d-d) (alquilo C?-C6), (heteroaril C2-C9) (alcoxi C?-C6) (arilo C6-C?0) o (heteroaril C2-C9) (alcoxi Ci- ) (heteroarilo C2-C9); donde cada uno de dichos radicales arilo -Cio o heteroarilo C2-C9 de dichos arilo C6-C?0, heteroarilo C2-C9, (ariloxi C6-C?0) (alquilo d-d), (ariloxi C6-C?0) (arilo C6-C?0), (ariloxi C6-C?0) (heteroarilo C2-C9), (aril C6-C?0) (alquilo C?-C6), (aril C6-C?0) (arilo C6-C?0), (aril C6-C?0) (heteroarilo C2-C9), (aril C6-C?o) (aril d-Cio) (alquilo C C6), (aril C6-C?0) (aril C6-C?0), (arilo C6-C?0) (aril d-Cio) (aril C6-C?0) (heteroarilo C2-C9), (heteroaril C2-C9) (alquilo C?-C6), (heteroaril d-d) (arilo -Cio), (heteroaril C2-C9) (heteroarilo C2-C9), (aril -C10) (alcoxi d-d) (alquilo C?-C6), (aril C6-C?0) (alcoxi CrC6) (arilo C6-C?0), (aril C6-C?o) (alcoxi C?-C6) (heteroarilo C2-C9), (heteroariloxi C2-C9) (alquilo Cr C6), (heteroariloxi C2-C9) (arilo C6-C?o), (heteroariloxi C2-C9) (heteroarilo C2-C9), (heteroaril C2-C9) (alcoxi C?-C6) (alquilo d-C6), (heteroaril C2-C9) (alcoxi C?-C6) (arilo C6-C?0) o (heteroaril C -C9) (alcoxi CrC6) (heteroarilo C2-C9) está opcionalmente sustituido sobre cualquiera de los átomos de carbono del anillo capaces de formar un enlace adicional mediante uno o más sustituyentes por anillo, seleccionados de forma independiente de fluoro, cloro, bromo, alquilo d-d, alcoxi d-d, perfluoro (alquilo C1-C3), perfluoro (alcoxi C1-C3) y ariloxi o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

El término "alquilo" tal como se usa en la presente, a no ser que se indique otra cosa, incluye radicales hidrocarburo monovalentes saturados con restos lineales ramificados o cíclicos o combinaciones de los mismos. El término "alcoxi" tal como se usa en la presente, incluye grupos O-alquilo en los que "alquilo" se define como antes. El término "arilo", tal como se usa en la presente, a no ser que se indique de otro modo, incluye un radical orgánico derivado de un hidrocarburo aromático por la eliminación de un hidrógeno, como fenilo o naftilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados del grupo formado por fluoro, cloro, bromo, perfluoro (alquilo C?-C6) incluyendo trifluorometilo), alcoxi C?-C6, ariloxi C6-C?0, perfluoro (alcoxi d-d) (incluyendo trifluorometoxi y difluorometoxi) y alquilo d-d. El término "heteroarilo", tal como se usa en la presente, a no ser que se indique de otro modo, incluye un radical orgánico derivado de un compuesto heterocíclico aromático por retirada de un hidrógeno, como piridilo, furilo, pirrolilo, tienilo, isotiazolilo, imidazolilo, bencimidazolilo, tetrazolilo, pirazinilo, pirimidilo, quinolilo, isoquinolilo, benzofurilo, isobenzofurilo, benzotienilo, pirazolilo, indolilo, isoindolilo, purinilo, carbazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, oxazolilo, benzotiazolilo o benzoxazolilo, opcionalmente sustituidos con 1 a 2 sustituyentes seleccionados del grupo formado por fluoro, cloro, trifluorometilo, alcoxi d-d, ariloxi C6-C?0, trifluorometoxi, difluorometoxi y alquilo C?-C6. Los heteroarilos preferidos incluyen piridilo, furilo, tienilo, isotiazolilo, pirazinilo, pirimidilo, pirazolilo, isoxazolilo, tiazolilo u oxazolilo. Los más preferidos incluyen piridilo, furilo o tienilo. Los compuestos preferidos de fórmula I incluyen aquellos en los que Q es arilo C6-C?o, (aril C6-C?0) (arilo C6-C?0), (ariloxi C6-C?0) (arilo C6-C?0), (ariloxi -Cio) (heteroarilo C2-Cg), heteroarilo C2-C9, (heteroaril C2-C9) (heteroarilo C2-C9), (aril C6-C?0) (heteroarilo C2-C9), (heteroaril C2-C9) (arilo C6-C10), (heteroariloxi C2-C9) (arilo C6-C?0), (aril C6-C?o) (alcoxi C?-C6) (arilo C6-C10), o (heteroaril C2-C9) (alcoxi d-d) (arilo C6-C?0) opcionalmente sustituidos. Otros compuestos preferidos de fórmula I incluyen aquellos en los que Q es (ariloxi -Cio) (arilo C6-C?0) opcionalmente sustituido. Los compuestos específicos de fórmula I incluyen los siguientes: Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico; Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-clorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico; Hidroxiamida del ácido 4-[4- (fenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico; Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-piridiloxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico; Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluorofenil)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico; Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluorofenilmetoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico; Hidroxiamida del ácido 4-[4- (fenilmetoxi)bencenosulfonilamino3tetrahidropiran-4-carboxílico; y Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluorofeniletoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico. La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno seleccionado del grupo formado por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad en el transplante de un órgano, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgica, cáncer (como cáncer con tumores sólidos incluyendo cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de pulmón y cáncer de próstata y procesos malignos hematopoyéticos incluyendo leucemias y linfomas), ulceración de tejidos, reestenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis ampollosa, osteoporosis, falta de firmeza en implantes de articulaciones artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardíaca congestiva, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral, traumatismo craneal, lesión de la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, potenciación nootrópica o cognitiva, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión corneal, degeneración macular, curación anómala de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento de tumor, metástasis tumoral, quemaduras corneales, escleritis, SIDA, septicemia y choque séptico y otras enfermedades caracterizadas por actividad de metaloproteinasas y otras enfermedades caracterizadas por actividad de reprolisina de mamífero en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende una cantidad de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, eficaz en tales tratamientos y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La presente invención se refiere también a una composición farmacéutica para la inhibición de (a) metaloproteinasas de la matriz y otras metaloproteinasas implicadas en la degradación de la matriz, o (b) una reprolisina de mamífero (como agrecanasa o ADAM TS-1 , 1 ,0, 12, 15 y 17, lo más preferible ADAM-17) en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La presente invención se refiere también a un procedimiento para tratar un trastorno seleccionado del grupo formado por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad en el trasplante de un órgano, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgica, cáncer, ulceración de tejidos, reestenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis ampollosa, osteoporosis, falta de firmeza en implantes de articulaciones artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardíaca congestiva, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral, traumatismo craneal, lesión de la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, potenciación nootrópica o cognitiva, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiples, angiogénesis ocular, lesión corneal, degeneración macular, curación anómala de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento de tumor, metástasis tumoral, quemaduras corneales, escleritis, SIDA, septicemia, choque séptico y otras enfermedades caracterizadas por actividad de metaloproteinasas y otras enfermedades caracterizadas por actividad de reprolisina de mamífero en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo eficaz para tratar dicho trastorno. La presente invención se refiere además a un procedimiento para la inhibición de (a) metaloproteinasas de la matriz u otras metaloproteinasas implicadas en la degradación de la matriz, o (b) una reprofisina de mamífero (como agrecanasa o ADAM TS-1 , 10, 12, 15 y 17, preferiblemente ADAM-17) en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Esta invención también incluye composiciones farmacéuticas que contienen profármacos de los compuestos de fórmula I. Esta invención también incluye procedimientos para tratar o prevenir trastornos que se pueden tratar o prevenir mediante la inhibición de las metaloproteinasas de la matriz o la inhibición de reprolisina de mamífero que comprende administrar profármacos de compuestos de fórmula I. Los compuestos de fórmula I que tienen grupos amino, amido, hidroxi o carboxilo libres se pueden convertir en profármacos. Los profármacos incluyen compuestos en los que un resto aminoácido, o una cadena polipeptídica de dos o más restos aminoácidos (por ejemplo, dos, tres o cuatro), están unidos covalentemente a través de enlaces peptídicos a los grupos amino, hidroxi o ácido carboxílico libres de los compuestos de fórmula I. Los restos aminoácidos incluyen los 20 aminoácidos naturales designados corrientemente por símbolos de tres letras y también incluyen 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, 3-metilhistidina, norvalina, beta-alanina, ácido gamma-aminobutírico, citrulina, homocisteína, homoserina, ornitina y metionina sulfona. Los profármacos también incluyen compuestos en los que carbonatos, carbamatos, amidas y esteres de alquilo están unidos covalentemente a los sustituyentes anteriores de fórmula I a través del carbono carbonilo de la cadena lateral del profármaco. Un experto en la técnica apreciará que los compuestos de la invención son de utilidad en el tratamiento de una diversidad de enfermedades. Un experto en la técnica también preciará que cuando se usan los compuestos de la invención en el tratamiento de una enfermedad específica, los compuestos de la invención se pueden combinar con diversos agentes terapéuticos existentes usados para dicha enfermedad. Para el tratamiento de la artritis reumatoide, los compuestos de la invención se pueden combinar con agentes, como los inhibidores de TNF-a tales como anticuerpos monoclonales anti-TNF y moléculas de inmunoglobulina receptoras de TNF (como Enbrel®), metotrexato en bajas dosis, lefunimida, hidroxicloroquina, d-penicilamina, auranofina o sales de oro por vía oral o parenteral. Los compuestos de la invención se pueden usar también en combinación con agentes terapéuticos existentes para el tratamiento de osteoartritis. Los agentes adecuados para usar en combinación incluyen agentes antiinflamatorios no esteroideos convencionales (en lo sucesivo AINE) como piroxicam, diclofenaco, ácidos propiónicos como naproxeno, flubiprofeno, fenoprofeno, cetoprofeno e ibuprofeno, fenamatos como ácido mefenámico, ¡ndometacina, sulindaco, apazona, pirazolonas como fenilbutazona, salicilatos como aspirina, inhibidores de COX-2 como celecoxib y rofecoxib, analgésicos y terapias intraarticulares como corticosteroides y ácidos hialurónicos como hialgan y sinvisc. Los compuestos de la presente invención se pueden usar en combinación con agentes contra el cáncer como endostatina y angiostatina o fármacos citotóxicos como adriamicina, daunomicina, cis-platino, etopósido, taxol, taxótero y alcaloides, como vincristina y antimetabolitos como metotrexato. Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en combinación con agentes cardiovasculares como los bloqueantes de los canales del calcio, agentes para la disminución del nivel de lípidos como estatinas, fibratos, beta-bloqueantes, inhibidores de la ACE, antagonistas del receptor de angiotensina-2 e inhibidores de la agregación de las plaquetas. Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en combinación con agentes que actúan en el SNC como antidepresivos (como sertralina), fármacos contra el Parkinson (como deprenil, L-dopa, requip, miratex, inhibidores de la MAOB como selegina y rasagilina, inhibidores de comP como Tasmar, inhibidores de A-2, inhibidores de la recaptación de dopamina, antagonistas del NMDA, agonistas de la nicotina, agonistas de la dopamina e inhibidores de la óxido nítrico sintetasa neuronal) y fármacos contra el Alzheimer como Aricept, tacrina, inhibidores de la COX-2, propentofilina o metrifonato.

Los compuestos de la presente invención se pueden usar también en combinación con agentes contra osteoporosis como droloxifeno o fosomax y agentes inmunosupresores como FK-506 y rapamicina.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los siguientes esquemas de la reacción ilustran la preparación de los compuestos de la presente invención. A no ser que se indique de otro modo, Q en los esquemas de reacción y la siguiente descripción es como se ha definido antes.

ESQUEMA 1 ESQUEMA 1 (CONTINUACIÓN) El esquema 1 se refiere a la preparación de compuestos de fórmula I. Con referencia al esquema 1 , el compuesto de fórmula I se prepara a partir del ácido carboxílico de fórmula II por tratamiento con 1-(3-dimetilam¡noprop¡l)-3-etilcarbod¡¡mida y 1-hidroxibenzotriazol en un disolvente polar, como N,N-dimetiIformamida, seguido por la adición de hidroxilamina a la mezcla de reacción después de un período de tiempo desde aproximadamente 15 minutos hasta aproximadamente 1 hora, preferiblemente aproximadamente 30 minutos. La hidroxilamina se genera de preferencia in situ a partir de una forma salina, como clorhidrato de hidroxilamina en presencia de una base como trietilamina. Como alternativa, el compuesto de fórmula I se puede preparar a partir de un compuesto de fórmula II por reacción con un derivado protegido de hidroxilamina o su forma salina, donde el grupo hidroxilo está protegido como terc-butilo, bencilo, alilo o éter 2-trimetilsililetílico. La retirada del grupo protector de hidroxilo se lleva a cabo por hidrogenólisis para un grupo protector bencilo (el catalizador preferido es paladio al 5% sobre sulfato de bario) o tratamiento con un ácido fuerte como ácido trifluoroacético, para un grupo protector terc-butilo. El grupo protector alilo se puede retirar por tratamiento con hidruro de tributilestaño y ácido acético en presencia de cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) catalítico. El éter 2-trimetilsililetílico se puede retirar por reacción con un ácido fuerte como ácido trifluoroacético o por reacción con una fuente de fluoruro como eterato de trifluoruro de boro. La reacción de II con hidroxilamina, una sal de hidroxilamina, un derivado protegido de hidroxilamina o una sal de un derivado protegido de hidroxilamina se puede llevar a cabo también en presencia de hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio y una base como trieilamina en un disolvente inerte como cloruro de metileno. La mezcla de reacción se agita a una temperatura desde aproximadamente 0°C hasta aproximadamente 50°C, preferiblemente a temperatura ambiente, durante un período de tiempo desde aproximadamente 1 hora hasta aproximadamente 3 días, preferiblemente aproximadamente 1 día. Otro procedimiento para convertir un compuesto de fórmula II en un compuesto de fórmula I es hacer reaccionar el compuesto de fórmula II con clorhidrato de O-bencilhidroxilamina en presencia de hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-¡loxi)tris(dimetilamino)fosfonio y trietilamina usando cloruro de metileno como disolvente. La posterior retirada del grupo protector O-bencilo para proporcionar un compuesto de fórmula I se lleva entonces a cabo por hidrogenólisis bajo una presión de 3.04x105 Pa a temperatura ambiente usando paladio al 5% sobre sulfato de bario como catalizador. El disolvente preferido es metanol. El tiempo de reacción puede variar desde aproximadamente 1 hora hasta aproximadamente 2 días (se prefieren 8 horas). El procedimiento preferido para convertir un compuesto de fórmula II en un compuesto de fórmula I es hacer reaccionar el compuesto de fórmula II con cloruro de oxalilo en cloruro de metileno en presencia de una cantidad catalítica de DMF durante 16 horas. El cloruro de ácido resultante se hace reaccionar a 0°C con N,O-bis trimetilsilil hidroxilamina formada por reacción de clorhidrato de hidroxilamina con clorotrimetilsilano en piridina desde 0°C a temperatura ambiente. El producto de fórmula I se obtiene después de unas reacciones de pocas horas desde 0°C a temperatura ambiente, seguido por un tratamiento acuoso ácido que elimina todos los restos de trimetilsililo. En ciertos casos, se prefiere obtener el compuesto de fórmula I por reacción de hidroxilamina, una sal de hidroxilamina, un derivado protegido de hidroxilamina o una sal de un derivado protegido de hidroxilamina con un éster activado de fórmula III. La reacción se lleva a cabo en un disolvente inerte, como N,N-dimetilformamida a una temperatura que varía desde aproximadamente temperatura ambiente hasta aproximadamente 80°C, con preferencia aproximadamente 60°C, durante un período de tiempo desde aproximadamente 1 hora a aproximadamente 2 días. Si se usa un derivado protegido de hidroxilamina o una sal de un derivado protegido de hidroxilamina, la retirada del grupo protector se lleva a cabo como se ha descrito antes. El derivado de éster activado de fórmula III se obtiene por tratamiento del compuesto de fórmula II con hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio y una base como trietilamina en un disolvente inerte, como cloruro de metileno. La mezcla de reacción se agita a una temperatura desde aproximadamente 0°C hasta aproximadamente 50°C, con preferencia a temperatura ambiente, durante un período de tiempo desde aproximadamente 1 hora a aproximadamente 3 días, preferiblemente aproximadamente 1 día. El compuesto intermedio de fórmula II se prepara por saponificación de un compuesto de fórmula IV. La reacción se lleva a cabo en un disolvente como etanol acuoso, con un exceso de hidróxidos metálicos, como hidróxido sódico o hidróxido de litio, a una temperatura desde aproximadamente 20°C hasta aproximadamente 100°C (es decir, desde temperatura ambiente a la temperatura de reflujo del disolvente), con preferencia aproximadamente 80°C. La mezcla de reacción se agita normalmente a temperatura ambiente durante un período de tiempo desde aproximadamente 30 minutos hasta aproximadamente 1 semana, con preferencia aproximadamente 16 horas. El compuesto de fórmula IV se prepara haciendo reaccionar un compuesto de fórmula V con un derivado funcional reactivo de un ácido sulfónico (QSO2OH), como cloruro de sulfonilo (QS02CI), en presencia de una base. Las bases adecuadas incluyen hidróxido sódico, trietilamina o diisopropiletilamina, con preferencia trietilamina. Los disolventes adecuados incluyen dimetilformamida (DMF), cloruro de metileno, tetrahidrofurano, dioxano, agua o acetonitrilo, preferiblemente DMF. La mezcla de reacción se agita a una temperatura desde aproximadamente 0°C hasta aproximadamente 50°C, con preferencia desde aproximadamente 20°C hasta aproximadamente 25°C (es decir, temperatura ambiente), durante un período de tiempo desde aproximadamente 10 minutos hasta aproximadamente 2 días, con preferencia aproximadamente 1 día. El compuesto de fórmula V se prepara por hidrólisis de un compuesto de fórmula IV. Especialmente, el compuesto de fórmula VI se trata con ácido acuoso, con preferencia en presencia de un disolvente orgánico inmiscible como éter etílico, éter diisopropílico o cloruro de metileno. Los ácidos adecuados incluyen el ácido clorhídrico y sulfúrico. La mezcla de reacción se agita a una temperatura desde aproximadamente 0°C hasta aproximadamente 50°C, con preferencia desde aproximadamente 20° hasta aproximadamente 25°C (es decir, temperatura ambiente), durante un período de tiempo desde aproximadamente 10 minutos hasta aproximadamente 2 días, con preferencia aproximadamente 1 día. El compuesto de fórmula VI se prepara por reacción del derivado aminoácido de fórmula Vil con un compuesto de fórmula VIII en presencia de una base y un disolvente, donde X es Cl, Br. I, tosilato o mesilato. Las bases adecuadas incluyen etilenglicol, hidruro sódico, diisopropilamida de litio o hexametildisilazida de sodio. Los disolventes adecuados incluyen éter dimetílico, dimetilformamida. La mezcla de reacción se agita a una temperatura desde aproximadamente -20°C hasta aproximadamente 25°C, con preferencia desde aproximadamente 0°C hasta aproximadamente 20°C (es decir, temperatura ambiente), durante un tiempo desde aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 2 días, preferiblemente aproximadamente 1 día. Los compuestos de fórmulas Vil y VIII se pueden preparar por procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica. Los ejemplos de tales compuestos incluyen metilglicina benzofenona imina y etilglicina benzofenona ¡mina. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos ácidos de la invención son sales formadas con bases, es decir, sales catiónicas como sales de metales alcalinos y alcalinotérreos, como sodio, litio, potasio, calcio, magnesio, así como sales de amonio, como sales de amonio, trimetilamonio, dietilamonio y tri (hidroximetil)metilamonio. Igualmente, también son posibles sales por adición de ácidos como por ejemplo de ácidos minerales, ácidos carboxílicos orgánicos y sulfónicos orgánicos, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido metanosulfónico, ácido maleico, con tal que forme parte de la estructura un grupo básico con piridilo. La capacidad de los compuestos de fórmula I o sus sales farmacéuticamente aceptables (en lo sucesivo denominados compuestos de la presente invención) para inhibir las metaloproteinasas de la matriz o reprolisina de mamífero y, por consiguiente, demostrar su eficacia para tratar enfermedades caracterizadas por la inhibición de las metaloproteinasas de la matriz o la producción de factor de necrosis tumoral, se muestra mediante los siguientes ensayos in vitro.

Ensayo biológico Inhibición de colagenasa humana (MMP-1 ) Se activa colagenasa recombinante humana con tripsina. La cantidad de tripsina se optimiza para cada lote de colagenasa-1 , aunque una reacción típica usa la siguiente relación: 5 µg de tripsina por 100 µg de colagenasa. La tripsina y la colagenasa se incuban a temperatura ambiente durante 10 minutos y se añade después un exceso de cinco veces (50 mg/10 mg de tripsina) de inhibidor de tripsina de soja. Se preparan soluciones madre 10 mM de inhibidores en sulfóxido de dimetilo y se diluyen después usando el siguiente esquema: 10 mM 120 µM 12 µM 1.2 0.12 µM Después se añaden, por triplicado, veinticinco micrólitros de cada concentración a pocilios apropiados de una placa Microfluor de 96 pocilios. La concentración final de inhibidor será una dilución 1 :4 después de la adición de enzima y substrato. Se preparan controles positivos (con enzima y sin inhibidor) en los pocilios D7-D12 y controles negativos (sin enzima y sin inhibidor) en los pocilios D1-D6. Se diluye colagenasa hasta 400 ng/ml y se añaden después 25 ml a pocilios apropiados de la placa Microfluor. La concentración final de colagenasa en el ensayo es 60 ng/ml. Se prepara substrato (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys (Me)-His-Ala-Lys (NMA)-NH2) como solución madre 5 mM en sulfóxido de dimetilo y se diluye después hasta 20 µM en tampón del ensayo. El ensayo se inicia por la adición de 50 ml de substrato por pocilio de la placa Microfluor para dar una concentración final de 10 mM. Se tomaron lecturas de la fluorescencia (360 nm de excitación y 460 nm de emisión) en el tiempo 0 y después a intervalos de 20 minutos. El ensayo se realiza a temperatura ambiente con un tiempo típico de ensayo de 3 horas.

Se construye después una gráfica de la fluorescencia en función del tiempo, tanto para las muestra que contienen colagenasa como para las del ensayo en blanco (en las determinaciones por triplicado, se determina el valor medio). Para determinar los valores de la IC50 se elige un tiempo que proporciona una buena señal (al menos cinco veces el blanco) y que está en la parte lineal de la curva (normalmente alrededor de 120 minutos). Los valores correspondientes al tiempo cero se usan como blanco para cada compuesto a cada concentración y estos valores se restan de los datos correspondientes a 120 minutos. Los datos se representan gráficamente como concentración de inhibidor frente a porcentaje de control (fluorescencia del inhibidor dividida entre fluorescencia de colagenasa sola y multiplicada por 100). Se determinan las I o a partir de la concentración de inhibidor que da una señal que es 50% de la del control. Si las I o son inferiores a 0.03 mM, entonces se ensayan los inhibidores a concentraciones de 0.3 mM, 0.03 mM y 0.003 mM.

Inhibición de gelatinasa (MMP-2) Se activa gelatinasa humano recombinante de 72 kD (MMP-2, gelatinasa A) con acetato p-aminofenilmercúrico 1 mM durante 16-18 horas (a partir de una solución madre 100 mM recién preparada en NaOH 0.2N) a 4°C, son oscilaciones suaves. Se diluyen en serie soluciones madre en sulfóxido de dimetilo 10 mM de inhibidores en tampón de ensayo (TRIS 50 mM, pH 7.5, NaCI 200 mM, CaCI2 5 mM, ZnCI2 20 µM y BRIJ-35 al 0.02% (vol/vol)) usando el siguiente esquema: 10 mM 120 µM 12 µM 1.2 0.12 µM Las diluciones posteriores se realizan según es necesario siguiendo este mismo esquema. En cada ensayo, se realizan un mínimo de cuatro concentraciones inhibidoras para cada compuesto. Se añaden entonces 25 µl de cada concentración a pocilios por triplicado de una placa Microfluor con fondo en U de 96 pocilios negra. Cuando el volumen final del ensayo es 100 µl, las concentraciones finales de inhibidor son el resultado de otra dilución 1 :4 (es decir, 30µM 3 µM 0.3 µM 0.03 µM, y así sucesivamente). También se prepara por triplicado un ensayo en blanco (sin enzima, sin inhibidor) y un control de enzima positivo (con enzima, sin inhibidor). La enzima activada se diluye hasta 100 ng/ml en tampón de ensayo, se añaden 25 µl por pocilio a los pocilios apropiados de la placa de microvaloración. La concentración final de enzima en el ensayo es 25 ng/ml (0.34 nM). Se diluye en el tampón de ensayo hasta 20 µM una solución madre en sulfóxido de dimetilo 5 mM de substrato (Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2). El ensayo se inicia mediante la adición de 50 µl de substrato diluido, proporcionando una concentración final de ensayo de substrato 10 µM. En el tiempo cero, se toma una lectura de fluorescencia (320 de excitación; 390 de emisión) inmediatamente y se toman posteriores lecturas cada quince minutos a temperatura ambiente con un lector de placas PersSeptive Biosystems Cytofluor Multi-Well Píate Reader con la ganancia a 90 unidades. El valor promedio de la fluorescencia de la enzima y el ensayo en blanco se representan frente al tiempo. Para las determinaciones de la I o se elige uno de los primeros tiempos de la parte lineal de esta curva. El tiempo cero para cada compuesto en cada dilución se resta del tiempo anterior y los datos se expresan entonces como porcentaje de control de la enzima (fluorescencia del inhibidor dividida entre fluorescencia del control de enzima positivo x 100). Los datos se representan como concentración de inhibidor frente a porcentaje de control de la enzima. Las IC5o se definen como la concentración de inhibidor que origina una señal que es el 50% del control de enzima positivo.

Inhibición de la actividad de la estromelisina (MMP-3) Se activa estromelisina humana recombinante (MMP-3, estromelisina-1 ) durante 20-22 horas con acetato p-aminofenil mercúrico 2 nM (de una solución madre 100 mM recién preparada en NaOH 0.2N) a 37°C. Las soluciones madre en dimetilsulfóxido 10 mM de inhibidores se diluyen en serie en tampón de ensayo (TRIS 50 mM, pH 7,5, NaCI 150 mM, CaCI2 10 mM y BRIJ-35 al 0.05% (vol/vol)) usando el siguiente esquema: 10 mM ? 120 µM ? 12 µM ? 1.2 µM ? 0.12 µM Las diluciones posteriores se realizan según es necesario siguiendo este mismo esquema. En cada ensayo, se realizan un mínimo de cuatro concentraciones inhibidoras para cada compuesto. Se añaden entonces 25 µl de cada concentración a pocilios por triplicado de una placa Microfluor con fondo en U de 96 pocilios negra. Como el volumen final del ensayo es 100 µl, las concentraciones finales de inhibidor son el resultado de otra dilución 1 :4 (es decir, 30 µM - 3 µM ?- 0.3 µM -» 0.03 µM, y así sucesivamente). También se prepara por triplicado un ensayo en blanco (sin enzima, sin inhibidor) y un control de enzima positivo (con enzima, sin inhibidor). La enzima activada se diluye hasta 200 ng/ml en tampón de ensayo, se añaden 25 µl por pocilio a los pocilios apropiados de la placa de microvaloración. La concentración final de enzima en el ensayo es 50 ng/ml (0.875 nM). Se diluye en el tampón de ensayo hasta 6 µM una solución madre en sulfóxido de dimetilo 10 mM de substrato (Mca-Arg-Pro-Lys-Val-Glu-Nva-Trp-Arg-Lys (Dnp)-NH2). El ensayo se inicia mediante la adición de 50 µl de substrato diluido proporcionando una concentración final de ensayo de substrato 3 µM. En el tiempo cero, se toma una lectura de fluorescencia (320 de excitación; 390 de emisión) inmediatamente y se toman posteriores lecturas cada quince minutos a temperatura ambiente con un lector de placas PerSeptive Biosystems CytoFluor Multi-Well Píate Reader con la ganancia a 90 unidades.

El valor promedio de la fluorescencia de la enzima y el ensayo en blanco se representan frente al tiempo. Para las determinaciones de la IC 0 se elige uno de los primeros tiempos de la parte lineal de esta curva. El tiempo cero para cada compuesto en cada dilución se resta del tiempo anterior y los datos se expresan entonces como porcentaje de control de la enzima (fluorescencia del inhibidor divido por fluorescencia del control de enzima positivo x 100). Los datos se representan como concentración de inhibidor frente a porcentaje de control de la enzima. Las I o se definen como la concentración de inhibidor que origina una señal que es el 50% del control de enzima positivo.

Inhibición de MMP-13 Se activa MMP-13 recombinante humana con APMA (acetato p-aminofenilmercúrico) 2 mM durante 2.0 horas a 37°C y se diluye hasta 240 mg/ml en tampón del ensayo (Tris 50 mM, pH 7.5, cloruro sódico 200 mM, cloruro calcico 5mM, cloruro de zinc 20 µM y Brij-35 al 0.02%). En una placa Microfluor de 96 pocilios se añaden veinticinco micrólitros de enzima diluida por pocilio. La enzima se diluye después a una relación 1 :4 en el ensayo por adición de inhibidor y substrato para dar una concentración final en el ensayo de 60 mg/ml. Se preparan soluciones madre (10 mM) de inhibidores en sulfóxido de dimetilo y se diluyen después en tampón de ensayo según el esquema de dilución de inhibidores del ensayo de inhibición de colagenasa humana (MMP-1 ). En la placa Microfluor se añaden, por triplicado, veinticinco micrólitros de cada concentración. Las concentraciones finales en el ensayo son 30 mM, 3 mM, 0.3 mM y 0.03 mM. Se prepara substrato (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys (Me) -His-Ala-Lys (NMA) -NH2) como en el ensayo de inhibición de colagenasa humana (MMP-1 ) y se añaden 50 µl a cada pocilio para dar una concentración final en el ensayo de 10 µM. Se hacen lecturas de la fluorescencia (360 nm en excitación y 450 nm en emisión) en el tiempo 0 y a intervalos de 5 minutos durante 1 hora. Los controles positivos y negativos se preparan por triplicado como se ha descrito en el ensayo de MMP-1. Se determinan las I o como en el ensayo de inhibición de colagenasa humana (MMP-1 ). Si las IC50 son inferiores a 0.03 mM, entonces los inhibidores se ensayan a concentraciones finales de 0.3 mM, 0.03 mM, 0.003 mM y 0.0003 mM.

Inhibición de la producción de TNF La capacidad de los compuestos o de las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos de inhibir la producción de TNF y, en consecuencia, de demostrar su eficacia para tratar enfermedades que implican la producción de TNF se muestra por el siguiente ensayo in vitro: Se aislaron leucocitos mononucleares de sangre humana anticoagulada, usando una técnica de separación de Ficoll- hypaque de una etapa. (2) Los leucocitos mononucleares se lavaron tres veces en solución salina equilibrada de Hanks (HBSS) con cationes divalentes y se volvieron a suspender a una densidad de 2 x 106/ml en HBSS que contenía 1 % de BSA. Los recuentos diferenciales determinados usando el analizador Abbott Cell Dyn 3500 indicaron que, en estas preparaciones, los monocitos variaban de 17 a 24% de las células totales. Se colocaron partes alícuotas de 180 µl de la suspensión de células en placas de 96 pocilios de fondo plano (Costar). Adiciones de compuestos y de LPS (concentración final de 100 ng/ml) dieron un volumen final de 200 µl. Todas las condiciones se realizaron por triplicado. Después de incubar durante cuatro horas a 37°C en un incubador con CO2 humidificado, se separaron las placas y se centrifugaron (10 minutos a aproximadamente 250xg), se separaron lo líquidos sobrenadantes y se ensayó en ellos el TFA-a usando el estuche R&D ELISA.

Inhibición de la producción de TNF-a soluble La capacidad de los compuestos o de las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para inhibir la liberación celular de TNF-a y, en consecuencia, demostrar su eficacia para tratar enfermedades que conllevan la regulación anómala de TNF-a soluble se muestra por el siguiente ensayo in vitro: Procedimiento de evaluación de la actividad de la enzima conversora de TNF-a recombinante Expresión de TACE recombinante: Se puede amplificar un fragmento de DNA que codifica la secuencia señalizadora, preprodominio, prodominio y dominio catalítico de TACE (aminoácidos 1-473) por reacción en cadena con polimerasa usando una genoteca de cDNA de pulmón humano como molde. El fragmento amplificado se clona a continuación en el vector pFastBac. La secuencia de DNA del inserto se confirma para ambas cadenas. Se transfecta en células de insecto SF9 un bácmido preparado usando pFastBac en DHIOBac de E. coli. Las partículas víricas se amplifican entonces hasta los estadios P1 , P2, P3. El virus P3 se infecta en células de insecto Sf9 y High Five y se desarrollan durante 48 horas a 27°C. El medio se recoge y se usa para ensayos y purificación adicionales.

Preparación del substrato inactivado fluorescente: Se prepara un substrato para TNF-a peptídico modelo (LY-LeucinalAlaninaGlutam¡naAlaninaValinaArgininaSerinaSerinaLysina(CTMR)-Arginina (LY=Amarillo Lucifer; CTMR=CarboxitetrametilRodamina)) y se determina la concentración por absorbancia a 560 nm (E56o, 60.000 M-1 CM-1 ) conforme al procedimiento de Geoghegan, KF, "Improved Method for converting an unmodified peptide to an energy-transfer substrate for a proteinase". Bioconjuqate Chem. 7, 385-391 (1995). Este péptido incluye el lugar de escisión en pro-TNF en el que se escinde in vivo por TACE.

Expresión de TACE recombinante Se amplifica un fragmento de ADN que codifica la secuencia señalizadora, el preprodominio, prodominio y el dominio catalítico de TACE (aminoácidos 1-473) por reacción en cadena con polimerasa usando genoteca de ADNc de pulmón humano como molde. El fragmento amplificado se clona a continuación en el vector pFastBac. La secuencia de ADN del insecto se confirma para ambas cadenas. Se transfecta en células de insecto SF9 un bácmido preparado usando pFastBac de E. coli. Las partículas víricas se amplifican entonces hasta los estadios P1 , P2, P3. El virus P3 se infecta en células de insecto Sf9 y High Five y se desarrollan durante 48 horas a 27°C. El medio se recoge y se usa para ensayos y purificación adicionales.

Reacción enzimática La reacción, llevada a cabo en una placa de 96 pocilios (Dynatech) comprende 70 µl de solución tampón (Hepes 25 mM-HCI, pH 7.5, más ZnCI2 20 mM), 10 µl de substrato ¡nactivado fluorescente 100 µM, 10 µl de solución en DMSO (5%) de compuesto de ensayo y una cantidad de la enzima r-TACE que producirá una escisión del 50% en 60 minutos - en un volumen total de 100 µl. La especificidad de la escisión enzimática en el enlace amida entre la alanina y valina se verifica por HPLC y espectrometría de masas. Se controlan las velocidades iniciales de escisión midiendo la velocidad de aumento de la fluorescencia a 530 nm (excitación a 409 nm) durante 30 minutos. El experimento se controla como sigue: 1 ) la fluorescencia de fondo del substrato; 2) la fluorescencia del substrato totalmente escindido; 3) la extinción o aumento de la fluorescencia a partir de las soluciones que contienen compuestos de ensayo. Los datos se analizan como sigue. Se promedian las velocidades de reacciones de "control" sin compuesto de ensayo para determinar el valor 100%. La velocidad de reacción en presencia de compuesto de ensayo se comparó con la misma en ausencia de compuesto y se tabuló como "porcentaje de control sin compuesto de ensayo". Los resultados se representan como "% de control" frente al logaritmo de la concentración de compuesto y se determina un punto hemimáximo o valor I o. Todos los compuestos de la invención tienen I o menores que 1 µM, con preferencia menores que 50 nM. Los compuestos más preferidos de la invención son al menos 100 veces menos potentes frente a r-MMP-1 que en el ensayo de TACE anterior.

Ensayo de monocitos humanos Se aislaron leucocitos mononucleares de sangre humana anticoagulada, usando una técnica de separación de Ficoll-hypaque de una etapa. (2) Los leucocitos monocelulares se lavaron tres veces en solución salina equilibrada de Hanks (HBSS) con cationes divalentes y se volvieron a suspender a una densidad de 2 x 106/ml en HBSS que contenía 1 % de BSA. Los recuentos diferenciales determinados usando el analizador Abbott Cell Dyn 3500 indicaron que, en estas preparaciones, los monocitos variaban de 17 a 24% de las células totales. Se colocaron partes alícuotas de 180µl de la suspensión de células en placas de 96 pocilios de fondo plano (Costar). Adiciones de compuestos y de LPS (concentración final de 100 ng/ml) dieron un volumen final de 200 µl. Todas las condiciones se realizaron por triplicado. Después de incubar cuatro horas a 37°C en un incubador con CO2 humificado, se separaron las placas y se centrifugaron (10 minutos a aproximadamente 250xg), se separaron los líquidos sobrenadantes y se ensayó en ellos el TFA-a usando el estuche R&D ELISA.

Ensayo de agrecanasa Se aislaron por digestión secuencial en tripsina y colagenasa condrocitos primarios porcinos del cartílago de la articulación, seguido por la digestión durante toda la noche en colagenasa y se cultivaron a una densidad de 2 x 105 células por pocilio en placas de 48 pocilios con 5µCi/ml de 35S (1000 Ci/mmoles) en las placas revestidas de colágeno tipo I. Se dejó incorporar el marcador en las células en su matriz de proteoglucano (aproximadamente 1 semana) a 37°C, a una atmósfera de CO2 al 5%.

La noche antes de iniciarse el ensayo, se lavaron las monocapas de condrocitos dos veces en DMEM/PSF al 1%/G y luego se dejó incubar en DMEM/FBS al 1 % recién preparado durante toda la noche. A la mañana siguiente, los condrocitos se lavaron una vez en DMEM/PSF al 1 %/G. El líquido de lavado final se dejó reposar en las placas en el incubador mientras se realizaban las diluciones. Los medios y diluciones se pueden realizar tal y como se describe en el siguiente cuadro.

Las placas se marcan y sólo se usan los 24 pocilios interiores de la placa. En una de las placas, se designan varias columnas como IL-1 (sin fármaco) y control (sin IL-1 , sin fármaco). Estas columnas se recuentan de forma periódica para controlar la liberación de 35S-proteoglucano. Los medios de control de IL-1 se añaden a los pocilios (450 µl) seguidos por el compuesto (50 µl) con el fin de iniciar el ensayo. Las placas se incuban a 37°C con una atmósfera de CO2 al 5%. A una liberación de 40-50% (cuando los CPM de los medios IL-1 son 4-5 veces los medios de control) determinado por recuento de centelleo líquido (LSC) de las muestras, el ensayo termina (9-12 horas). Los medios se retiran de todos los pocilios y se colocan en tubos de centelleo. Se añade líquido de centelleo y se toman los recuentos radioactivos (LSC). Para solubilizar las capas, se añaden a cada pocilio 500 µl de tampón de digestión de papaína (Tris 0.2 M, pH 7.0, EDTA 5 mM, DTT 5 mM y 1 mg/ml de papaína). Las placas con solución de digestión se incuban a 60°C durante toda la noche. La capa de células se retira de las placas el día siguiente y se coloca en los tubos de centelleo. Se añade líquido de centelleo y se realiza el recuento de las muestras (LSC). Se determina en cada pocilio el porcentaje de recuentos emitidos de los totales presentes. Se realiza el promedio de las muestras por triplicado, restando de cada pocilio el valor de fondo del control. El porcentaje de inhibición de compuesto se basa en muestras en IL-1 como inhibición 0% (100% de los recuentos totales).

Para administración a mamíferos, incluyendo seres humanos para la inhibición de metaloproteinasas de la matriz o la producción de factor de necrosis tumoral (TNF), se pueden usar una diversidad de vías de administración convencionales que incluyen la vía oral, parenteral y tópica. En general, el compuesto activo se puede administrar por vía oral o parenteral en dosis que varían de aproximadamente 0.1 a 25 mg/kg de peso corporal del sujeto que se trata por día, preferiblemente de aproximadamente 0.3 a 5 mg/kg. Sin embargo, se producirá necesariamente alguna variación de la dosis dependiendo del trastorno del sujeto que se trate. El responsable de la administración determinará en cualquier caso la dosis apropiada para el sujeto particular. Los compuestos de la presente invención se pueden administrar en una amplia gama de formas de dosificación diferentes, en general, los compuestos terapéuticamente eficaces se esta invención están presentes en dichas formas de dosificación en niveles de concentración que varían de aproximadamente 5.0% a aproximadamente 70% en peso. Para administración oral, pueden emplearse comprimidos que contienen diferentes excipientes como celulosa microcristalina, citrato sódico, carbonato calcico, fosfato dicálcico y glicina, junto con diferentes disgregantes como almidón (y con preferencia, almidón de maíz, patata o tapioca), ácido algínico y ciertos silicatos complejos, junto a ligantes de granulación como polivinilpirrolidona, sacarosa, gelatina y goma arábica. Además, a efectos de la preparación de comprimidos, son muy útiles con frecuencia agentes lubricantes como estearato de magnesio, laurilsulfato sódico y talco. También pueden emplearse composiciones sólidas de un tipo similar como cargas en cápsulas de gelatina; incluyendo además los materiales preferidos a este respecto lactosa o azúcar de la leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular. Cuando se desean suspensiones acuosas y/o elixires para administración oral, el ingrediente activo se puede combinar con diversos agentes edulcolorantes o aromatizantes, materiales colorantes o tintes y, si así se desea, también agentes de emulsión y/o de suspensión, junto con diluyentes como agua, etanol, propilenglicol, glicerol y las diferentes combinaciones de los mismos. En el caso de animales, estos están contenidos de forma ventajosa en el agua de bebida o en la comida del animal en una concentración de 5-5000 ppm, preferiblemente de 25 a 500 ppm. Para administración parenteral (uso intramuscular, intraperitoneal, subcutáneo e intravenoso), se prepara normalmente una solución inyectable estéril del ingrediente activo. Se pueden emplear soluciones de un compuesto terapéutico de la presente invención en aceite de sésamo o cacahuete o en propilenglicol acuoso. Las soluciones acuosas se ajustarán y tamponarán de modo adecuado, preferentemente a pH mayor que 8, si fuera necesario y el diluyente líquido se hará en primer lugar isotónico. Estas soluciones acuosas son adecuadas a efectos de inyección intravenosa. Las soluciones oleosas son adecuadas a efectos de inyección intraarticular, intramuscular y subcutánea. La preparación de todas estas soluciones en condiciones estériles se realiza de modo sencillo por técnicas farmacéuticas convencionales bien conocidas por los expertos en la técnica. En el caso de animales, los compuestos se pueden administrar por vía intramuscular o subcutánea en niveles de dosis de aproximadamente 0.1 a 50mg/kg/día, de forma ventajosa de 0.2 a 10 mg/kg/día, administrados en una única dosis o hasta en 3 dosis divididas. Para administración ocular tópica, se pueden emplear la aplicación directa al ojo afectado en forma de una formulación de gotas para los ojos, aerosol, geles o ungüentos, o se puede incorporar en colágeno (como poli-2-hidroexietil-metacrilato y copolímeros del mismo), o en una cobertura hidrófila. Los materiales también pueden aplicar como un lente de contacto o a través de un reservorio local o como una formulación para administrar subconjuntivamente. Para administración intraorbital, normalmente se prepara una solución inyectable estéril de ingrediente activo. Se pueden emplear soluciones de un compuesto terapéutico de la presente invención en solución o suspensión acuosa (tamaño de partículas menor que 100 micrómetros). Si fuera necesario, las soluciones acuosas se ajustarán y tamponarán de forma adecuada, con preferencia a un pH de 5 a 8, y el diluyente líquido se hará en primer lugar isotónico. Para aumentar la viscosidad o conseguir una liberación sostenida se pueden añadir pequeñas cantidades de polímeros (como polímeros de celulosa, dextrano, polietilenglicol o ácido algínico) Estas soluciones son adecuadas a efectos de inyección intraorbital. La preparación de todas estas soluciones en condiciones estériles se lleva a cabo fácilmente por técnicas farmacéuticas convencionales bien conocidas por los expertos en la técnica. En el caso de animales, los compuestos se pueden administrar intraorbitalmente en niveles de dosis de aproximadamente 0.1 a 50 mg/kg/día, de forma ventajosa de 0.2 a 10 mg/kg/día, administrados en una única dosis o hasta en 3 dosis divididas. Los compuestos activos de la invención se pueden formular también en composiciones rectales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, conteniendo bases convencionales de supositorios como manteca de cacao u otros glicéridos. Para administración intranasal o administración por inhalación, los compuestos activos de la invención se liberan convenientemente en forma de una solución o suspensión desde un recipiente pulverizador de bombeo que es presionado o bombeado por el paciente o como una presentación de pulverizador en aerosol desde un recipiente presurizado o un nebulizador, usando un propulsor adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la dosis unitaria se puede determinar disponiendo una válvula para liberar una cantidad medida. El recipiente presurizado o nebulizador puede contener una solución o suspensión del compuesto activo. Se pueden formular cápsulas o cartuchos (realizados, por ejemplo, de gelatina) para usar en un inhalador o insuflador, conteniendo una mezcla de polvo de un compuesto de la invención y una base de polvo adecuada como lactosa o almidón.

La presente invención se ilustra por las siguientes preparaciones y ejemplos, aunque no queda limitada por los detalles de los mismos.

EJEMPLO 1 Hidroxamida del ácido 4-r4-(4-fluorofenox¡)bencenosulfonilamino1- tetrahidropiran-4-carboxílico Í?L Ester etílico del ácido 4-ÍN- (d¡fen¡lmet¡leno)aminoltetrahidropiran-4-carboxíl¡co Se añadió una solución de éster etílico de N- (difenilmetileno)glicina (20, 60 gramos, 0.07398 moles) en éter dimetílico del etilenglicol (50 ml), gota a gota mediante un embudo de adición, a una suspensión de hidruro sódico (6.56 g, 0.164 moles) en éster dimetílico de etilenglicol (150 ml) a 0°C. Se añadió entonces a la solución de éter dimetílico de etilenglicol una solución de éter 2-bromoetílico (23.21 g, 0.090 moles) en éter dimetílico de etilenglicol (50 ml) en porciones de 10 ml durante aproximadamente 5 minutos. Se retiró el baño de hielo y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla se diluyó con éter dietílico y se lavó con agua. La capa acuosa se extrajo con éter dietílico. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron proporcionado un aceite amarillo turbio (28.692 g). La cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo primero con 4 It de acetato de etilo al 5%/hexano, seguido por 4 litros de acetato de etilo al 4%/ hexano proporcionó el éster etílico del ácido 4-[N- (difenilmetileno)amino]tetrahidropiran-4-carboxíl¡co como un aceite amarillo claro (16.114 g, 64%). RMN de 1H (CDCI3) d 7.58 (d, 2H), 7.36 (m, 4H), 7.28 (t, 2H), 7.08 (m, 2H), 3.99 (m, 2H), 3.70 (m, 2H), 3.66 (q, 2H), 2.10 (m, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.08 (t, 3H). Espectro de masas de ionización química a presión atmosférica: 338 (M++1 ).

(B) Ester etílico del ácido 4-aminotetrahidropiran-4-carboxílico Se añadió una solución acuosa 1 M (100 ml) de ácido clorhídrico a una solución de éster etílico del ácido 4-[N-(difenilmetileno)amino]tetrahidropiran-4-carboxílico (16.0 g, 0.047 moles) en éster dietílico (120 ml). La mezcla se agitó intensamente a temperatura ambiente durante 16 horas. Las capas se separaron y la capa acuosa se lavó con éter dietílico. La capa acuosa se llevó a pH 10 con solución acuosa diluida de hidróxido amónico y se extrajo con diclorometano. El extracto orgánico se secó sobre sulfato sódico y se concentró proporcionando éster etílico del ácido 4-aminotetrahidropiran-4-carboxílico (7.128 g, 71.7%) como un aceite. RMN de 1H (CDCI3) 4.15 (q, 2H), 3.82 (m, 2H), 3.62 (m, 2H), 2.07 (m, 2H), 1.60 (s, 2H), 1.44 (m, 2H), 1.24 (t, 3H) RMN de 13C (CDCI3) d 176.48, 63.70, 61.09, 54.78, 35.05, 14.15. Espectro de masas de ionización química a presión atmosférica: 210 (M++1).

(C) Ester dietílico del ácido 4-í4-(4-fluorofenox¡)-bencenosulfonilaminoltetrahidropiran-4-carboxílico Se añadió trietilamina (5.94 ml, 0.043 moles) a una solución de éster etílico del ácido 4-aminotetrahidropiran-4-carboxílico(7.00 g, 0.0404 moles) en N,N-dimetilformamida (40 ml). Se añadió en porciones cloruro de 4-(4-fluorofeno-xi) bencenosulfonilo sólido (12.165 g, 0.0424 moles). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 26 horas y luego se eliminó la mayor parte del disolvente por evaporación a vacío. El residuo se repartió entre solución saturada de bicarbonato sódico y diclorometano. La capa acuosa se extrajo con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato sódico. La evaporación del disolvente a vacío proporcionó el éster etílico del ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilam¡no]tetrah¡drop¡ran-4-carboxíl¡co bruto como un aceite ámbar (21.05 g). La cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 25%/hexano, seguida por acetato de etilo al 50%/hexano proporcionó el éster etílico del ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxíl¡co como un sólido blanquecino (12.15 g, 71 %, p.f. 116-117°C). RMN de 1H (CDCI3) d 7.79 (d, 2H), 7.09 (t, 2H), 7.02 (m, 2H), 6.97 (d, 2H), 5.10 (s, 1 H), 4.01 (q, 2H), 3.60 (m, 4H), 2.08 (m, 2H), 1.84 (d ancho, 2H), 1.23 (t, 3H). Espectro de masas de ionización química a presión atmosférica: 424 (M++1 ). ÍOL Acido 4-í4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilamino1tetrahidropiran-4-carboxílico Procedimiento A Se trató una solución de éster etílico del ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico (12.1 g, 0.0286 moles) en tetrahidrofurano (190 ml) con solución acuosa 3M de hidróxido sódico (95 ml, 0.286 moles) y se agitó a temperatura ambiente durante 4 días.

El disolvente se evaporó a vacío y el residuo se repartió entre agua y éter etílico. La capa acuosa. La capa acuosa se lavó con éter dietílico, se acidificó hasta pH 1 con solución acuosa 3M de ácido clorhídrico y se extrajo con diclorometano. Después de lavar con agua, el extracto orgánico se secó sobre sulfato sódico, y se concentró proporcionando el ácido 4-[4-(4-fIuorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico (1 1.241 g, 99%) como una espuma sólida amarillenta.

Procedimiento B Se trató una solución de éster etílico del ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico (34.19 g, 0.807 moles) en etanol (330 ml) con solución acuosa 3M de hidróxido sódico (330 ml, 0.990 moles) y se calentó a reflujo durante toda la noche. El disolvente se evaporó a vacío y el residuo se repartió entre agua y éter dietílico. La capa acuosa se lavó con éter dietílico, se acidificó hasta pH 1 con solución acuosa 3M de ácido clorhídrico y se extrajo con acetato de etilo. Después de lavar con agua, se secó el extracto orgánico sobre sulfato sódico y se concentró proporcionando el ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico (31.26 g, 98%) como un sólido cristalino blanco. RMN de 1H (CDCI3) d 7.73 (d, 2H), 7.03 (t, 2H), 6.96 (m, 2H), 6.91 (d, 2H), 3.56 (m, 2H), 3.43 (m ancho, 3H), 2.01 (m, 2H), 1.80 (d ancho, 2H). Espectro de masas de ionización química a presión atmosférica: 394 (M+-1 ) (¡on -).

(E) N- benciloxiamida del ácido 4-[4-(4-fluorofenoxQbencenosulfonilaminoltetrahidropiran-4-carboxílico Se añadieron, de forma secuencial, diisopropil etilamina (3.89 g, 0.030 moles) y hexafluorofosfato de (benzotriazol- 1-iIoxi)tris(dimetilamino)fosfonio (13.27 g, 0.030 moles) a una solución de ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico (11.22 g, 0.028 moles) en N,N-dimetilformamida anhidra (140 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Se añadieron entonces diisopropil etilamina (4.0 ml, 0.051 moles) adicional y clorhidrato de O-bencil hidroxilamina (5.46 g, 0.034 moles) y la mezcla resultante se agitó a 60°C durante 18 horas. Después de concentrar a vacío, el residuo se trató con solución acuosa 0,5N de ácido clorhídrico y se extrajo con acetato de etilo. El extracto orgánico se lavó con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera. La solución se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y concentró hasta una cuarta parte del volumen original. La adición de un volumen igual de hexano precipitó la N-benciloxiamida del ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico (1 1.595 g, 81.6%) como un sólido cristalino blanco (p.f. 175-176°C). RMN de 1H (CDCI3) d 7.76 (d, 2H), 7.35 (m, 5H), 7.05 (t, 2H), 6.96 (m, 4H), 5.38 (s ancho, 1 H), 4.86 (s, 2H), 3.57 (m, 2H), 3.44 (m, 2H), 2.01 (m, 2H), 1.77 (d, ancho, 2H), 1.54 (s ancho, 1 H). Espectro de masas de ionización química a presión atmosférica: 501 (M++1 ). ía Hidroxamida del ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilamino1tetrahidropiran-4-carboxílico Procedimiento A Se trató una solución de N-benciloxiamida del ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidrop¡ran-4-carboxíl¡co (1 1.28 g, 0.0225 moles) en acetato de etilo (600 ml) con paladio al 5% sobre sulfato de bario (5.0 g) y se sometió a hidrogenación en un agitador de Parr™ a 3.04x105 Pa de presión durante 18 horas. Después de la filtración a través de Nylon (tamaño de poros de 0.45 mm) para separar el catalizador, se aclaró el lecho filtrante con metanol. El filtrado combinado y las aguas de aclarado se evaporaron y el residuo se suspendió en metanol caliente. El enfriamiento proporcionó la hidroxamida del ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico bruta (5.941 g, 64%, p.f. 176-177°C) como un sólido cristalino blanco. Las aguas madres se evaporaron y el residuo recristalizó en metanol al 50%/diclorometano proporcionando hidroxamida del ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)-bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico adicional (0.660 g, p.f. 184-185°C) como agujas blancas. Las aguas madres se evaporaron de nuevo y el residuo se recristalizó en metanol/diclorometano proporcionando producto adicional (1.861 g, p.f. 176-177°C). La recristalización del primer lote en metanol/diclorometano proporcionó hidroxamida del ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico analíticamente pura (3,091 g, p.f. 184-185°C).

Procedimiento B Se añadió cloruro de oxalilo (11.83 g, 0.0932 moles, 1.1 equivalentes) y DMF (0.13 ml) a una suspensión agitada de ácido carboxílico (33.25 g, 0.0841 moles) en cloruro de metileno seco (300 ml) a temperatura ambiente. Se observó cierto burbujeo. La suspensión, que lentamente se convirtió en una solución amarillenta, se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. Mientras, se trató una solución de clorhidrato de hidroxilamina (7.65 g, 0.110 moles, 1.3 eq) en piridina seca (51.4 ml, 0.635 moles, 7.5 eq) a 0°C con clorotrimetilsilano, provocando la formación de un precipitado blanco. Esta suspención se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. Ambos matraces se enfriaron entonces hasta 0°C y la solución de cloruro de ácido se añadió a la suspensión de hidroxilamina sililada. La mezcla resultante se agitó a 0°C durante 1 hora y a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadieron 1000 ml de HCl acuoso 2N y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Las capas se separaron, se extrajo la capa acuosa tres veces con acetato de etilo (500 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera y se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y el volumen del filtrado se redujo hasta 300 ml, momento en el que había precipitado una gran cantidad de sólido blanco cristalino. Este se enfrió durante toda la noche en un refrigerador. El sólido se recogió por filtración a vacío, se aclaró con acetato de etilo/hexano 1 :1 frío y se secó a alto vacío proporcionando 30.311 g del ácido hidroxámico deseado (87.8%) como un sólido cristalino blanco (p.f. 189-190°C). RMN de 1H (DMSO-d6) d 10.35 (s ancho, 1 H), 8.68 (s ancho, 1 H), 7.78 (s, ancho 1 H), 7.74 (d, 2H), 7.26 (t, 2H), 7.16 (m, 2H), 7.04 (d, 2H), 3.40 (m, 2H), 3.31 (m, 2H), 1.78 (m, 4H). RMN de 13C (DMSO) d 169.65, 160.66, 137.50, 129.39, 122.34, 122.25, 117.75, 1 17.44, 117.24, 62.94, 58.45, 33.34. Espectro de masas de ionización química a presión atmosférica: 409 (M+-1 ) (ion -).

PREPARACIÓN A Cloruro de 4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilo Se añadió, gota a gota a 4-fluorofenoxibenceno (36.9 g, 0.196 moles) enfriado en hielo con agitación mecánica, ácido clorosulfónico (26 ml, 0.392 moles). Cuando se completó la adición, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla se vertió entonces en agua helada. El producto, cloruro de 4-(4-fluorofenoxi)benceno-sulfonilo (18.6 g, 33%) se recogió por filtración y se secó al aire.

PREPARACIÓN B 4-(3-Metilbutoxi)bencenosulfonato sódico Se mezcló una solución de ácido 4-hidroxibencenosulfónico-(10.0 g, 43.1 mmoles) e hidróxido sódico (3.3 g, 83 mmoles) en agua (40 ml) con una solución de 1-yodo-3-metilbutano (1 1.3 ml, 86.4 mmoles) en isopropanol (60 ml) y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante 2 días. El isopropanol se separó por evaporación a vacío. El compuesto del título, 10.0 gramos (87%) se recogió por filtración y se lavó con isopropanol.

PREPARACIÓN C Cloruro de 4-(3-rnet¡lbutoxi)bencenosulfonilo Se calentó a reflujo durante 5 horas una mezcla de 4-(3-metilbutoxi)bencenosulfonato sódico (2.5 g, 9.4 mmoles), cloruro de tionilo (10 ml) y 5 gotas de N,N-dimetilformamida. Después de enfriar, se evaporó el exceso de cloruro de tionilo y el residuo se suspendió en acetato de etilo. La solución se enfrió en un baño de hielo y se añadió agua. La fase orgánica se separó y se lavó con agua y salmuera. Después de secar sobre sulfato sódico, el disolvente se evaporó proporcionando el compuesto del título como un aceite, 2.34 g (95%).

PREPARACIÓN D 4-(2-Ciclopentiletoxi)bencenosulfonato sódico Se mezclaron con una solución de 2-(bromoetil)ciclopentano (15.0 g, 84.7 mmoles) en ¡sopropanol (40 ml) una solución de ácido 4-hidroxibencenosulfónico 86.5 g, 28.2 mmoles) e hidróxido sódico (2.2 g, 55 mmoles) en agua (15 ml) y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante 2 días. El isopropanol se eliminó por evaporación a vacío. El compuesto del título, 4.7 g, (57%) se recogió por filtración y se lavó con isopropanol.

PREPARACIÓN E Cloruro de 4-(3-metilbutoxi)bencenosulfonilo Se calentó a reflujo durante 5 horas una mezcla de 4-(2-ciclopentiletoxi)bencenosulfonato sódico (2.5 g, 8.6 mmoles), cloruro de tionilo (15 ml) y unas pocas gotas de N,N-dimetilformamida. Después de enfriar, se evaporó el exceso de cloruro de tionilo y el residuo se suspendió en acetato de etilo. La solución se enfrió en un baño de hielo y se añadió agua. La fase orgánica se separó y se lavó con agua y salmuera. Después de secar sobre sulfato sódico, se evaporó el disolvente proporcionando el compuesto del título como un aceite, 2.24 g, (90%).

PREPARACIÓN F Cloruro de 4-fluorobifenilsulfonilo Se añadió, gota a gota a 4-fluorobifenilo (10.2 g, 59 mmoles), mientras se agitaba en un baño de hielo, ácido clorosulfónico (8.7 g, 0.13 mmoles). Se continuó agitando con enfriamiento en hielo durante 0.5 horas y luego se vertió la mezcla de reacción sobre hielo. El precipitado blanco resultante se recogió por filtración y se disolvió en cloroformo. La solución de cloroformo se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró proporcionando un sólido blanco. El producto deseado, cloruro de 4-fluorobifenilsulfonilo (4.3 g, 27%) se separó del ácido 4-fluorobifenilsulfónico (un subproducto indeseado) por cristalización del primero en acetato de etilo y cristalización del material resultante en hexano.

PREPARACIÓN G 4-(4-Fl?orobenciloxi)bencenosulfonato sódico Se añadió una solución de bromuro de 4-fluorobencilo (3.3 g, 26.5 mmoles) en etanol (20 ml) a una solución de ácido 4-hidroxibencenosulfónico (5.13 g, 22.1 mmoles) en solución acuosa 1 N de hidróxido sódico (23 ml). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 2 días. Tras enfriar en reposo, precipitó un sólido blanco. El producto precipitado, 4-(4-fluorobenciloxi)bencenosulfonato sódico, 4.95 g, (74%) se recogió por filtración y se lavó con acetato de etilo y éter dietílico.

PREPARACIÓN H Cloruro de 4-(4-fluorobenciloxi)bencenosulfon¡lo Se añadió pentacloruro de fósforo (275 mg, 1.31 mmoles) a una suspensión de 4-(4-fluorobenciloxi)bencenosulfonato sódico (0.5 g, 1.64 mmoles) en cloruro de metileno (5 ml). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 7 horas. Después de enfriar en un baño de hielo y extinguir la reacción con agua (15 ml), la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se concentró proporcionando cloruro de 4-(4-fluorobenciloxi)bencenosulfonilo como un sólido blanco (130 mg, 26%).

PREPARACIÓN I Cloruro de 4-(4-clorofenoxi)bencenosulfonilo Se añadió ácido clorosulfónico (9.7 ml, 0.147 moles), gota a gota, a 4-clorofenoxibenceno (12.6 ml, 73.4 mmoles) a temperatura ambiente y con agitación. Cuando se completó la adición, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se vertió en agua helada. El sólido se recogió por filtración, se secó al aire y se recristalizó en éter de petróleo y acetato de etilo proporcionando cloruro de 4-(4-clorofenoxi)bencenosulfonilo (7.43 g, 33%). Habiendo descrito la invención como antecede, se declara como propiedad lo contenido en las siguientes:

Claims (10)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto de fórmula o sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que Q es alquilo d-d, arilo -Cio, heteroarilo C2-C9, (ariloxi C6-C?0) (alquilo d-d), (ariloxi C6-C?0) (arilo d-Cio), (ariloxi C6-C?0) (heteroarilo C2-C9), (aril C6-C?o) (alquilo C?-C6), (aril d-Cio) (arilo C6-C?0), (aril C6-C?0) (heteroarilo C2-C9), (aril C6-C?0) (aril C6-C?0) (alquilo C -C6), (aril C6-C?0) (aril C6-C?0) (arilo C6-C?0), (aril C6-C?0) (aril C6-C?0) (heteroarilo d-d), (heteroaril C2-C9) (alquilo C?-C6), (heteroaril C2-C9) (arilo d-Cio), (heteroaril C2-C9) (heteroarilo C2-C9), (aril C6-C?0) (alcoxi C?-C6) (alquilo d-C6), (aril C6-C?0) (alcoxi CrC6) (arilo C6-C?o), (aril C6-C?0) (alcoxi Ci-d) (heteroarilo C2-C9), (heteroariloxi C2-C9) (alquilo C?-C6), (heteroariloxi C2-C8) (arilo d-Cio), (heteroariloxi C2-C9) (heteroarilo C -C9), (heteroaril C2-C9) (alcoxi C?-C6) (alquilo C C6), (heteroaril C2-C9) (alcoxi C?-C6) (arilo C6-C?0) o (heteroaril C2-C9) (alcoxi CrC6) (heteroarilo C2-C9); donde cada uno de dichos restos arilo C6-C?0 o heteroarilo C2-C9 de dichos arilo -Cio, heteroarilo C2-C9, (ariloxi -Cio) (alquilo C?-C6), (ariloxi d-Cio) (arilo C6-C?0), (ariloxi -Cio) (heteroarilo C2-C9), (aril C6-C?0) (alquilo C?-C6), (aril C6-C?o) (arilo C6-C?o), (aril C6-C?0) (heteroarilo C2-C9), (aril C6-C?0) (aril C6-C?0) (alquilo C?-C6), (aril C6-C?0) (aril C6-C?0) (arilo C6-C?0), (aril C6-C?0) (aril C6-C?0) (heteroarilo C2-C9), (heteroaril C2-C9) (alquilo C?-C6), (heteroaril C2-C9) (arilo C6-C?o), (heteroaril C2-C9) (heteroarilo C2-C9), (aril C6-C 0) (alcoxi C?-C6) (alquilo C?-C6), (aril C6-C?0) (alcoxi C?-C6) (arilo C6-C?o), (aril C6-C?0) (alcoxi C?-C6) (heteroarilo C2-C9), (heteroariloxi C2-C9) (alquilo Ci- ), (heteroariloxi C2-C9) (arilo C6-C?o), (heteroariloxi C2-C9) (heteroarilo C2-C9), (heteroaril C2-C9) (alcoxi CrC6) (alquilo C?-C6), (heteroaril C2-C9) (alcoxi C?-C6) (arilo C6-C?o) o (heteroaril C2-Cg) (alcoxi CrC6) (heteroarilo C2-C9) está opcionalmente sustituido sobre cualquiera de los átomos de carbono del anillo capaces de formar un enlace adicional mediante uno o más sustituyentes por anillo, seleccionados de forma independiente entre fluoro, cloro, bromo, alquilo C1-d, alcoxi C?-C6, perfluoro(alquilo C1-C3), perfluoro(alcoxi C1-C3) y ariloxi d-C10; o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

2.- Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , en el que Q es arilo C6-C?0, (aril C6-C?0) (arilo C6-C?0), (ariloxi C6-C?0) (arilo C6-C?o), (ariloxi -C o) (heteroarilo C2-Cg), heteroarilo C2-C9, (heteroaril C2-C9) (heteroarilo C2-C9), (aril C6-C?o) (heteroarilo C2-Cg), (heteroaril C2-Cg) (arilo C6 C10), (heteroariloxi C2-C9) (arilo C6-C?0), (aril C6-C?0) (alcoxi C?-C6) (arilo C6-C10) o (heteroaril C2-C8) (alcoxi C?-C6) (arilo C6-C?0) opcionalmente sustituidos.

3.- Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , en el que Q es (ariloxi C6-C 0) (arilo C6-C?0) opcionalmente sustituido.

4.- Un compuesto de conformidad con la reivindicación 3, en el que el anillo de (ariloxi C6-C?o) de dicho grupo (ariloxi -C o) (arilo C6-C?o) está opcionalmente mono-sustituido en la posición 4 del anillo.

5.- Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , seleccionándose dicho compuesto del grupo formado por: Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico; Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-clorofenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico; Hidroxiamida del ácido 4-[4-(fenoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidrop¡ran-4-carboxílico; Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-piridiloxi)bencenosulfon¡lam¡no]tetrah¡dropiran-4-carboxílico; Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluorofenil)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico; Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluorofenilmetoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico; Hidroxiamida del ácido (fenilmetoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico; y Hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluorofeniIetoxi)bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carboxílico.

6.- Una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno seleccionado del grupo formado por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad en el trasplante de un órgano, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgica, cáncer, ulceración de tejidos, reestenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis emapollosa, osteoporosis, falta de firmeza en implantes de articulaciones artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardíaca congestiva, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral, traumatismo craneal, lesión de la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, potenciación nootrópica o cognitiva, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión corneal, degeneración macular, curación anómala de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento de tumor, metástasis tumoral, quemaduras corneales, escleritis, SIDA, septicemia y choque séptico en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende una cantidad de un compuesto de la reivindicación 1 , eficaz en dicho tratamiento y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

7.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 , para la fabricación de un medicamento para tratar un trastorno seleccionado del grupo formado por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad en el trasplante de un órgano, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgica, cáncer, ulceración de tejidos, reestenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis ampollosa, osteoporosis, falta de firmeza en implantes de articulaciones artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardíaca congestiva, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral, traumatismo craneal, lesión de la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, potenciación nootrópica o cognitiva, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión corneal, degeneración macular, curación anómala de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento de tumor, metástasis tumoral, quemaduras corneales, escleritis, SIDA, septicemia, choque séptico en un mamífero, incluyendo un ser humano.

8.- Una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno que se puede tratar mediante la inhibición de metaloproteinasas de la matriz en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende una cantidad de un compuesto de la reivindicación 1 , eficaz en dicho tratamiento y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

9.- Una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno que se puede tratar mediante la inhibición de una reprolisina de mamífero en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende una cantidad de un compuesto de la reivindicación 1 , eficaz en dicho tratamiento y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

10.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 , para la fabricación de un medicamento para la inhibición de metaloproteinasas de la matriz en un mamífero, incluyendo un ser humano. 1 1.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 , para la fabricación de un medicamento para la inhibición de una reprolisina de mamífero en un mamífero, incluyendo un ser humano. RESUMEN DE LA INVENCIÓN Un compuesto de fórmula en la que Q es como se ha definido, que es útil en el tratamiento de un trastorno seleccionado del grupo formado por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad en el trasplante de un órgano, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgica, cáncer, ulceración de tejidos, reestenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis emapollosa, osteoporosis, falta de firmeza en implantes de articulaciones artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardíaca congestiva, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral, traumatismo craneal, lesión de la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, potenciación nootrópica o cognitiva, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión corneal, degeneración macular, curación anómala de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento de tumor, metástasis tumoral, quemaduras corneales, escleritis, SIDA, septicemia y choque séptico; además, los compuestos de la presente invención se pueden usar en terapia de combinación con fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE) y analgésicos convencionales, y en combinación con fármacos citotóxicos como adriamicina, daunomicina, cis-platino, etopósido, taxol, taxótero y otros alcaloides como vincristina, en el tratamiento del cáncer. URQUHART/ET/mvh*ald*yac*pbg*jtc*igp*rcp*osu*cgm*mmr*asg* P00/1275F