WO2007021037A1

WO2007021037A1 - 無機系多孔質体及びその製造方法

Info

Publication number: WO2007021037A1
Application number: PCT/JP2006/316671
Authority: WO
Inventors: Kazuki Nakanishi; Koji Fujita; Junko Konishi; Kazuyuki Hirao
Original assignee: Kyoto University; Gl Sciences Incorporated
Priority date: 2005-08-19
Filing date: 2006-08-18
Publication date: 2007-02-22
Also published as: JP4874976B2; JPWO2007021037A1

Abstract

無機系多孔質体であって、特に4族元素化合物より成る所謂マクロ細孔とナノメートル領域の細孔、所謂メソ細孔を制御し且それらを合わせもつモノリス構造を簡単に製造することを目的とし、4族元素化合物多孔質体より成るモノリス構造体で、孔径100nm以上で、3次元網目状に連続した所謂マクロ細孔としての貫通孔を有し、この貫通孔を形成するゲル骨格に形成された孔径2～100nmの所謂メソ細孔としての細孔を有し、貫通孔と細孔の全気孔中の容積の和に対して、細孔の占める容積率が10%以上であり、ゲル骨格1g当りの細孔の容積が10cm3/g以下であり、貫通孔と細孔の容積の和に対して、貫通孔の占める容積率が20～90%である。

Description

無機系'多孔質体及びその製造方法

技術分野

本発明は、無機系多孔質体及ぴその製造方法に関するものであり、特に、 4族元素アルコキシドの相明分離を伴うゾルゲル法を用いて作成した無機系多孔質体及ぴその製造方法に田関するも.のである。

背景技術

一般的なグロマトグラフィー用カラム、あるいは吸着材としては、スチレン . ジビエルベンゼン共重合体等の有機ポリマーよりなるものと、シリ力ゲル等の無機系充填材を筒内に充填したもの、 'さらには円柱状一体型多孔質体の側面を密閉して,両端から通液できるようにしたものが知られている。

有機系の材質で構成されたカラムは、低強度のために耐圧性が低い、溶痰により膨潤 ■収縮してしまう、加熱殺菌不可能である等の難点がある。従って、こうした難点を解消するカラムとして、無機系の材料、特にシリカゲルで構成されたカラムが汎用されている。

しかし、シリカゲルカラムのうち、充填材を筒内に充填したものは力ラム内に試料を流通させるために要する圧力が高く、高速分離に適さないという難点がある。

一方、シリ力系多孔質体ではすでに細孔構造の形成と広範な構造の制御が実現され、液体クロマトグラフィー用の一体型分離媒体としての高性能が確認されている。 '特に本発明の発¹明者、中西は、ケィ素アルコキシドの加水分解重縮合によるゾルゲル法に於いて、スピノーダル分解による相分離を誘起し、その過度的構造をゲル化により固定し、 *連続構造を有するシリカマク口多孔体の発明に至り、国際特許出願をレている。（W O 2 0 0 3 / 0 0 2 4 5 8 )

一体型多孔質体によるカラムは、カラム IEは低く高速分離が可能である。し力、し、充填型、一体型でも基材であるシリ力の化学的性質として、強塩基性条件で長時間使用すると基材が徐々に溶解して性能が損なわれるという難点が判明した。これは、従来のシ.リカを基材とする無機系充填剤一般についても共通の問題である。 ' すなわちシリカは酸性酸化物であって、水に対する溶解度も高い酸化物であるため、強塩基性の条件下で水を含む溶媒に長時間接触すると、ケィ素一酸素一ケィ素結合が切断されて表面から溶解が起こり、物質分離に必要な表面積が失われてしまう。

又、シリカチタア多孔質体をゾルゲル法により製造する発明は、幾つか提案されている。例えば、特開平 6— 1 0 7 4 6 1、特開 2 0 0 1 — 1 7 2 0 S 9等がある。

前者に於いては、二酸化チタンモノリスの製造であるが、その製法上高温での加熱が必須条件であるが、この様な場合、巨大空孔の所謂マク口細孔の形成が困難となり、マク口細孔と通常ナソメートル領域の細孔、所謂メソ細孔の両者同時制御は至難である。

また、後者は、所謂シリカ系多孔質体であり、チタユア含量 1 0 %以下であって、上述したシリ力系の欠点は払拭し得ない。

又、タンパク質の細胞内でのリン酸化は、代謝においてあらゆる影響を与えており、その過程を調べるため、構造解析としてリン酸化ぺプチドを分析することが重要である。リン酸化ペプチドは、混在する他のぺプチドに比べて微量である。質量分析計における感度も低く、微量のリン酸化ぺプチドを直接, H P L C分析することは、不可能である。そのため、固定化金属ブイ -ティ一クロマトグラフィーによりリン酸化ぺプチドだけを選択的に濃縮精製する方法が用いられている。 '

しかし、この方法は、金属の固定化から始まり、途中の洗浄工程を経て、 '最終的にリン酸化べプチドが得られるという煩雑な工程が必要で、時間も掛かってしまう。一方、チタエアゲルのリン酸化合物を選択的に保持する特性を利用して、これらのリン酸化ペプチドを分析する手法も考案されてきている。

しかし、従来の方法から得られるチタニアゲルは、粒子状であり流れる液体との接触部分は少なく.、より強い選択性を持つチタユアゲルが要求されていた。発明の開示

そこで、本発明者等が研究,したところ、酸化チタンを始めとする 4族元素化合物のみの構成による多孔質体が化学的重合反応によって形成できることが解明できた。これにより、一体型であって且つ気孔径及び気孔分布を適切に制御した非シリ力無機系多孔質体、就中 4族元素化合物 ^孔質体の完成に至り、従来の充填型および一体型シリカカラムが有する欠点を生じないことを見いだした。 '

本発明は、このような知見に基づいてなされたものである。その目的は、従来のシリ力系多孔質体が有する課題を解決し、圧力損失が小さく、取扱いの容易な無機系多孔質体、就中 4族元素化合物多孔質体を提供することにある。また、他の目的は、強塩基性条件下でも性能劣化することなく分離や吸着に使うことのできる、無機系多孔質体を提供することにある。更に、上記ゾル'ゲル法によっては、構造制御の困難であつた酸化チタンを始めとする無機系多孔質体の製造方法を提供することにある。

更に、本発明の他の目的は、 4族元素多孔質体特有の性質によるエネルギー変換、センサー等機能資材の提供の他、チタアは、紫外線によつて活性酸素を発生し有機物を分解するために、消臭や滅菌に利用でき、また"クロマトグラフにおいては、リン酸化物の特異的な吸着性を利用し、生体内タンパク質のリン酸化代謝過程を調べるカラムとして利用され、またジルコユアは硫酸を担持させ触媒などに使われて、ハフユアはその撥水性の利用も出来る等の産業上の利用範囲拡大に資することである。上記目的達成の手段は、一つは、 4族元素化合物より成り、孔径 1 0 0 nm以上で 3次元網目状に連続した貫通.孔と、この貫通孔を形成するゲル骨格に形成された孔径 2〜 1 0 0 ,n mの細孔とを有し、貫通孔と細孔の容積の和に対して、細孔の占める容積率が 1 0 °ノ₀以上であることを特徴どする無機系多孔質.体でり、

一つは、ゲル骨格 1 g.当りの細孔の容積が 1 0 c m³/ g以下であつて、貫通孔と細孔の容積の和に対して、 '貫通孔の占める容積率が 2 0〜 9 0 %であることを特徴とする前記の無機系多孔質体であり、

一つは、 4族元素.化合物が、二酸化チタン（T i 0₂)、二酸化ルコニゥム（Z r O₂)、二酸化ハフニウム（H f O ₂.) のいずれかを主成分とすることを特徴とする前記の無機系多孔質体であり、

—つは、 4族元素化合物が二酸化チタン（T i 0₂) であることを特徴とする前記の無機系多孔質体であり、

一つは、 4族元素化合物が二酸化ジルコニウム（Z r 0₂) である事を特徴とする前記の無機系多孔質体であり、

一つは、 4族元素化合物は加水分解性金属化合物を原料とすることを特徴とする前記の無機系多孔質体であり、

一つは、加水分解性金属化合物は金属アルコキシドであることを特徴とする前記の無機系多孔質体であり、

一つは、金属アルコキシドはチタンアルコキシドであることを特徴とする前記の無機系多孔質体であり、

—つは、金属アルコキシドはジルコニゥムアルコキシドであることを特徴とする前記の無機系多孔質体であり、

一つは、チタンアルコキシドはチタェゥム n —プロポキシドであることを特徴とする前記の無機系多孔質体であり.、

一つは、ジノレコ-ゥムァノレコキシドはジ /レコニゥム n —プロポキシドであることを特徴とする前記の無機系多孔質体であり、

一つは、前記の無機系多孔質体を用い^ことを特徴とするクロマトグラフィーカラムであり、 ,

一つは、前記の無機系多孔質体を用いることを特徴と十るリ .ン酸化合物の分離あるいは濃縮用吸着す才料であり、 '

一つは、前記の無機系多孔質体を用いることを特徴とする硫酸化合物の分離あるいは濃縮用吸着材料であり、

一つは、酸性水溶液中に於いて、極性溶媒の存在下で、 4族元素化合物を加水分解し、重合して反応溶液のゲル化を行なう工程、生成したゲルを焼成する工程を含むことを特徴とする 4族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法であり、

一つは、酸性水溶液中に於いて、極性溶媒の存在下で、 4族元素化合物を加水分解し、重合して反応溶液のゲル化を行う工程、生成したゲルを密閉加熱処理を行う工程を含むことを特徴とする 4族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法であり、

一つは、酸性水溶液中に於いて、極性溶媒の存在下で、 4族元素化合物を加水分解し、、重合して反応溶液のゲル化を行う工程、生成したゲルを密閉加熱処理を行うェ,程、以上の工程により得られた多孔質ゲルを焼成する工程を含むことを特徴とする 4族'元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法であり、

一つは、生成したゲル中の有機成分を除去する工程を含むことを特徴とずる前記の 4族元素化合物より成る無機多孔質体の製造方法であり、一つは、反応溶液中の水の濃度を変化させることにより、貫通孔径及び細孔径を制御することを特徴とする前記の 4族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法であり、

一つは、反応溶液中に強酸を滴下し、ゲル化反応速度を制御するととにより、貫通孔痊及び細孔径を制御することを特徴とする前記の 4族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法であり、

一つは、密閉加熱処理によって、細孔径を制御することを特徴とする前記の 4族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方であり、

一つは、密閉加熱処理によ pて、多孔質体の比表面積を制御することを特徴とする前記の 4族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法である。

'本発明無機系多孔質体およびそれを使用したカラムは、以下のような多大の効果を有する。

無機系多孔質体を部分的に密封した一体型力ラムであるため、充填状態によって流量が変化するという問題がおこらず、ロット間のばらつきが小さい。

又、孔径及ぴ容積率が適切に制御された貫通孔を有するので、圧力損失が小さい。従って、入口圧力が同じであれば、単位時間当たりの流量が多くなり、従来よりも短時間で分析することができる。しかも細孔に固定されたすべでの官能基と流体とが反応するので、官能基の消費効率が高い。従って、短い力,ラムで分析可能となる。

又、血液注入カテーテルや注射器に用いるときの取扱い容易である。又、流体の流路の形状■ サイズの均一性が高いので、分析物質の溶液一力ラム内部表面間の分配が場所によってばらっかない。

X、シリカを主成分とするカラムが塩基条件での使用によって性能劣化するのに比べて、本発明無機系多孔質材料は p H = 1 3程度の塩基性条件においても、表面積や細孔構造などの変化がなく、分離媒体およぴ吸着剤としての性能を損なわない。

又、本明のチタニアゲルは、リ酸化合物に対して強い選択性を有し、且つ化学的に安定で試料精製や前処理に有効である。

又、本発明のジルコニァゲルは、硫酸'化合物に対して強い選択性を有し、且つ、化学的に安定で試料精製や,前処理に有効である。

又、本発明の無機系多孔質体は、トリプシン、アル力リフォスファターゼ、グルコースイソメ.ラー i 等の酵素や白金、パラジウム等の触媒あるいは、ォクタデシル基等の官能基が担持されて、液体クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィ一等のクロマトグラフィー用カラムに好 ί に利用され得る。また、シリンジ先端やキヤビラリ一内部に固定して通液することにより、特定のリン酸化合物を分離あるいは濃縮するために用いることができる。また、多数のタンパク質混合物から、 '特異吸着によって特定の性質をもったものだけを吸着■分離するために用いることができる。図面の簡単な説明

図 1は、本発明により得られた多孔質二酸化チタンゲルの走査電子顕微鏡写真であり、図 2は、水銀圧入測定図であり、図 3は、試料の窒素吸着測定図で吸着一脱着等温線図であり、図 4は、細孔径分布図であり、図 5は、試料の電界放射型走查顕微鏡写真であり、図 6は、蒸溜水の量の変化によるモルフォロジ一の変化図であり、図 7は、塩酸水溶液の変化によるモルフォロジ一の変化図であり、図 8は、熱処理温度依存性を示す X線回析パターンであり、図 9は、熱処理した多孔質二酸化チタンゲの走査電子顕微鏡写真であり、図 1 0は、熱処理した多孔質二酸化チタンゲルの水銀圧入測定図であり、図 1 1は、トリブロック重合体の変化によるモルフォロジ一の変化図であり、図 1 2は、本発明により得られた多孔質体の水銀圧入測定図であり、図, 1 3は、多孔質体の窒素吸着測定図で吸着一脱着等温線図であり、図 1 4は、細孔径分布図であり、 ( a ) は累積容積図、（b ) は徼分容積図であり、図 1 5は、窒素吸着の測定結果表であり、図 1 6は、本発明'モノリスによるリン酸化合物の完全分離を示すク口マトグラムであり,、図 1 7は、チタニア膜モノリスによる同物質の不完全分離を示すクロマトグラムであり、図 1 8は、チタユア膜モノリスによる.同物質の不完全分離を示すク口マトグラムであり、図 1 9は、未精製ぺプチド混合物のク口マトグラムであり、図 2 0 は、本発明モソリスで精製したぺプチド混合物のク口マトグラムであり、図 2 1は、未精製ペプチド消化物のクロマトグラムで'あり、図 2 2 'は、本'発明モノリスで精製したぺプチド消化物のク口マトグラムであり、，図 2 3は、シリカゲル充填材によるフエノール/ピリジン分離分析のクロマトグラムであり、図 2 4は、本.発明モノリスによるフエノールピリジン分離分析のク口マトグラムであり、図 2 5は、本発明により得られた多孔質体の走査電子顕微鏡写真であり、図 2 6は、本発明により得られた多孔質体を使用したカラムによるリン酸化試料のク口マトグラムであり、図 2 7は、本発明により得られたジルコニウムゲルの走查電子顕微鏡写真であり、図 2 8は、水銀圧入測定図であり、図 2 9は、焼成温度の変化による結晶構造変化図であり、図 3 0は、極性溶媒変化によるモルフォロジ一の変化を,示す走査電子顕微鏡写図である。発明を実施するための最良の形態

以下本発明について詳細に説明する。本発明は、原理的には上記中西発明'の所謂ゾルゲル反応によるものである。 .

所謂ゾルゲル反応とは、重合可能な低分子化合物を生成し、最終的に凝集体や重合体を得る反応を云う。

一般的なケィ素アルコキシドの場合では、加水分解速度が遅く、それを促進するために酸溶液を加えることも行われるのに対し、金属アルコキシドを用いたゾルゲル法は.、金属アルコキシドの加水分解が生じ、放出されるアルコールにより水の比率が減'り、重縮合が同時に起こりゲル化される。元来、チタンアルコキシド等の 4族元素化合物は、水だけで急速に加水分解と重縮合が生じ、急速に固化してしまう。' そのため、従来ではマクロ孔を持たないコ pィドゲルをさらに焼結などで縮合させゲル化させていたが、機械的強度が弱かった。

又、ジルコニウムアルコキシドでは、安定化した結晶構造を作成するには、 1 0 0 0 °c以上での高温焼成が行われているが、高温焼成では、収縮により製造工程で割れ目が生じるため、目的に応じた固体を作成することが難しかった。

本発明は、例えば極性溶媒を添加した酸性溶液中においてチタンアルコキシド等の 4族元素化合物を加水分解■ 重合して、その反応溶硖のゲル化を行った後、生成した多孔質ゲル中の有機成分を除去し、その後焼成することによって製造される 4族元素化合物、詳しくは 4族元素酸化物の無機系多孔質体及びその製造方法である。

反応溶液は 4族元素化合物と水と酸性溶液を含んで、加水分解及ぴ重合反応をさせる溶液であり、極性溶媒を添加して均一化を図ることもある。

本発明で使用される、 4族元素化合物、詳しくは 4族元素酸化物の無機系多孔質体の原料としての 4族元素化合物としては、加水分解性金属化合物等が挙げられる。

本発明の無機系多孔質体は 1種又は 2種:^上の 4族元素化合物詳しくは 4族元素酸化物から成り、その原料としての 4族元素化合物として 1 種又は 2種以上の 4族元素化合物、特に加水分解性金属化合物を用いることが出来る。

加水分解性金属化合物としては、アルコールの水酸基の水素を金属原子で置換した金属アルコキシド等が挙げられる。

金属アルコキシドとしては、チタンアルコキシド、ジルコニウムアルコキシド、ハフェゥムアルコキシド等が挙げられる。

チタンアルコキシドとしては、チタニウム n—プロポキシド、 ' チタ二ゥムイソプロボキ,シド、チタゥム n—ブトキシド、チタニウム s —ブトキシド、チタユウム t.一ブトキシド等が挙げられる。

ジルコニウムアルコキシドとしては、 'ジルコニウムプロポキシド、ジノレコユウムイソプロポキシド、ジノレコニゥム _n—ブトキシド、ジノレコェゥム s —ブトキシド、ジルコニウム tーブトキシド等が挙げられる。ハフユウムァ /レコキシドとしては、ハフニウムプロポキシ'ド.、ハフ二ゥムイソプロポキシド、ハフユウ.ム n—ブトキシド、ハフニウム s—ブトキシド、ハフニウム t 一ブトキシド等が挙げられる。

さらにこれらの混合物およびこれらを適宜重合させて酸化物含量を上げた物等を挙げることができる。またォキシ塩化ジルコニウムなどの 4 族元素のォキシ塩化物も同様に用いることができる。

又、テトラクロ口チタンゃテトラクロ口ジルコア等の 4族元素ハライド化合物等を用いることも出来る。伹し、これらのハライド化合物では、加水分解の進行によ,つて酸が生じてくるため、添加する酸などの細かい制御が必要となる。

これまで述べたような 4族元素化合物は総て ^水分解性を有しており、本発明に必須であるゾルゲル反応の原料となり、その反応を進行させ、 ' 有^に作用する。その結果として、 4族元素化合物、詳しくは 4族元素酸化物の多孔質体を製造することが出来る。

本発明では、上述のような急速な重縮合を抑えるために強酸条件下で加水分解■ 重合反応を行なう。.強酸条件下では、加水分解された金属水酸化物が比較的反応性の低い多量体となるとともにイオン化し、求核攻撃が抑えられ、急速な重縮合反応を抑制することになる。

一方、加水分解も同時に生じ、アルコールが作成されるので、酸の抑制効果も溶液中では減ってしまう。そのため、常に抑制させるために : H 3 . 5以下を維持できるように、酸性溶液を滴下添加することが望ましい。均一な溶液を得る.ため 2分以上、一 5 °C以上 1 0 °C以下の低温で撹拌しながら反応を行うことが望ましい。

酸性溶液としでは、塩酸、硝酸等の鉱酸、酢酸、 .クェン酸等の有機酸等が使用できるが、十分な抑制効果を得るためには、 1 0重量％以上の濃度が望ましい。

次に、水を加えて撹拌する'ことで、さらに加水分解を進行させる。カロえる水の量が多い程、加氷分解の進行が早くなり、さらに酸濃度が下がるため重縮合も早くなり、最終のモノリスの貫通孔は小さくなる。. この添加する水の量によって、貫通孔の孔径を制御することができる。

加える水量は、最初の酸溶液に含まれる水の容量によるが、反応溶液に含まれる水量としては、完全に加水分解を起こさせるためには、金属アルコキシドの 2〜 1 0 0倍モル程度が好ましい。水を滴下しながら、添加した方が溶液温度変化が少なくなり、アルコール分の蒸発が抑えられるので好ましい。

これに更に、反応溶液を均一化させるため、極性溶媒、例えばホルムァミドなどを添加し撹拌する。全体量によるが、均一化させるためには、滴下しながら 2分以上の撹拌が望ましい。酸性条件下では、重縮合に対し T逆反応の加水分解が進み易く、ゾルゲノレ転移による反応系の固化に長時間を要するので、極性溶媒から生じる化合物によって中和させる事が望ましい。例えば、ホルムアミドの場合では、加えた酸量の 0 . 5 m o 1以上が好ましく、加水分解により生じるアンモニアによって酸が中和されることになる。 . .

この均一化した反応溶液を目的に応じた密閉容器に入れ、固化させることで 4族元素化合物のモノリス多孔質体が得られる。尚、密閉容器の形状としては、使用用途により、種々.の形状を適宜選択すれば良く、どのような形状を使用しても構わない。又、密閉容器の材も種々の材質を適宜選択すれば良い。例えば、モノリス多孔質体として、密閉容器から取り出して使う場合では、密閉容器の内表面とモノリス多孔質体が結合しないようなポリマー材質が好ましい。

逆に、容器内部にモノリス多孔質体を作る場合には、容器内面とモノリス多孔質体が反応するガラスやフューズドシリカキヤビラリ一ゃガラス化などの反応性を付加しだ容器が好ましい。

得られるモノリス多孔質体の貫通孔及び細孔の孔径、形状などは、これら使用するアルコキシド、酸、水、極性溶媒の比率で制御する；とができるので、目的に応じたモノリス多孔質体を自由に作れることになる。恒温水槽中に保持することにより固化するゾルゲル反応に於いて、転移と相分離が同時に起こり、溶媒リツチ相と骨格相とからなるゲルが生成する。この反応抑制剤としての酸の使用により、貫通孔とゲル骨格が互いに連続した共連続構造が得られる。得られたゲルは、ゲル骨格にポリマーなどの添加なしで細孔が生成する。この理由については判然としないが、重合程で生成する一次粒子のサイズが大きいためかと推測される。

又、この方法において、更にポリマーを添加すると、その割合に応じて力 ti水分解と重縮合の速度が変化するため、，ポリマーの添加無しの場合から添加量に応じた細孔の孔径、形状などの態様を.変化させることができ、目的に適した細孔形成を行うことができる。ポリマーの添加なしで作成する方法が基本となるが、この発明手法では、加水分解と重縮合を同時に起こすことが出来るため、ポリマー添加の緩衝効果から、骨榕形成時間を予測し、. 孔径、形状.など細孔形成を広範囲に制御することが可能になる。

ゲル形成後、約 2 4時間熟成させ所望温度で乾燥させ多孔質 4族元素酸化物ゲルを得る。得られた多孔質 4族元素酸化物ゲルには、孔径の揃つた貫通孔が三次元網目.状に絡み合った構造で形成される。該多孔質 4 族元素酸化物ゲル中の有機成分を除去し、その後焼成することによって、 4族元素酸化物多孔質体が製造される。

多孔質ゲルの固化したものを塩基性水溶液などに浸漬して密閉条件下で 1 0 0 °C以上に加熱する密閉加熱処理工程を、加水分解工程と焼成ェ程との中間に加えると、細¾径及び細孔容積率を制御し易ぐなる。尚、水の塩基性は必ずしも必須条件ではなく、水の特性を十分活かせる水溶液であれば、これに限定されない。 .

密閉加熱処理の一つである水熱処理は、シリカゲルなどの多孔質体では、侵食効果があることが知られているが、本発明の 4族元素化合物では侵食され難い。本発明では、加水分解と重縮合を同時に起こす特徴があるため、焼成前では、骨格が緩い状態で結合されており、その多孔質体内の含有水分により、又は水などを添加して密閉状態で加熱処理を行う事で、貫通孔を変化させずに状態を変化させることができ、細孔径を自由に制御することが出来る。

求める細孔径の寸法を使用溶媒種、加熱温度、反応時間の選択で、自由に調整することが出来るため、結果として目的に応じた表面積を持づモノリスゲルを作成する事ができる。この調整は、加熱温度、加熱時間の選定、ゲル中の含有水だけでも行うことが出来るが、水を含む溶媒を添加することもでき、水を含む溶媒の存在下ならば、どのような温度でも密閉状態であれば良い。又、この処理によって、表面の状態を変化させることも可能になり、試料成分との相互作用も制御することが可能となる。

又、極性溶媒に代えて、水溶性有機高分子、界面活性剤、両親媒性物質を用いても良い。

更に、極性溶媒に水溶性有機高分子、界面活性剤、両親媒性物質を加えることで、ゲル化速度を、れらの添加物質の緩衝効果により制御することができ、細孔の孔径、形状などをより広範囲で自由に作成することができる。

そして、本発明の 4族元素化合物による無機系多孔質体は、図 1に示すように、 _μ πιサイズの骨格（ゲル骨格）と mサイズの複数の貫通孔が周期的に形成され、絡み合い、又、網目構造を作るゲル骨格は細孔を有している。従って、無機系多孔質体は、流路となる貫通孔と細孔を有する二重孔構造を形成している。

本発明の貫通孔は所謂マク口細孔を意味し、本発明の細孔は所謂メソ細孔を意味するもので、貫通孔は無機系多孔質体の一端に開口し、途中枝分れし、他の貫通孔と合流し、他端に開口している。

又、本発明の 4族元素化合物、詳しくは 4族元素酸化物による無機系多孔質体は、貫通孔とこの貫通孔を形成するゲル骨格に形成された細孔の孔径、細孔の全容積、，カラムとして使用する場合の全容積に対する貫通孔の容積率、細孔と貫通孔との合計容¾に対する細孔の.容積率を重要な構成要件とする。無機系多孔質体やカラムの ί体構造は、反応系の組成及び温度や ρ Η値、有機高分子の分子量、その他 4族元素化合物の反応性に影響を及ぼす各種条件によって変わる。従って、立体構造の制御の方法を一律に述べることは困難であるが、前述した条件が同じであれば細孔径等がほぼ同じ目的物を再現性良く提供できる。

中間物質として生成する多孔質ゲルからの有機成分たる有機高分子の除去は、乾燥前のゲルを洗浄することによってある程度なすことができる。又、除去成分によっては、密閉加熱処理で有機成分たる有機高分子の除去を兼ねることもできる。しかし、 '洗浄過程の後に有機高分子が分解あるいは燃焼する温度までゲルを充.分長時間加熱してこれを完全に除 ' 去する方が有効である。

本発明 4族元素化合物、詳,しくは 4族元素酸化物による無機系多孔質体の製造に使用する有機高分子は、理論的には適当な濃度の水溶液となし得る水溶性有機高分子であって、且つ' 4族元素化合物の加水分解によつて生成するアルコールを含む反応系中に、均一に溶解し得るものであば良いが、具体的には高分子金属塩であるポリスチレンスルホン酸のナトリウム塩またはカリウム塩、高分子酸であって解離してポリアニォンとなるポリアクリル酸、高分子塩基であって水溶液中でポリカチオンを生ずるポリアリルァミンおよびポリエチレンィミン、あるいは中性高分子であって主鎖にエーテル結合を持つポリエチレンォキシド、側鎖にピロリドン環を有するポリビュルピロリドン等が好適である。また界面活性を有する化合物、例えばポリエーテルを含むポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールそれぞれのプロック鎖から構成されるジブロックあるいはトリブロック共重合体（Pluronic F 127, P123, F68, L122,L121 ほか、いずれもドイツ BASF社製品）も好適に用いられる。さらにハロゲン化アルキルアンモウム等の力チオン性界面活性剤、ドデシル硫酸ナトリウム等のァ-オン性界面活性剤、ラウリルジメチルァミノ酢酸（LDA) 等の両イオン性界面活性剤も同様に用いるこ' とできる。

有機高分子に代えて、極性溶媒であるホルムアミド、ァセトアミ，ド、 N—メチルホルムァミド、 N—メチルァセトアミド等の酸アミド類、ェチレングリコール、グリセリン等の多価アルコールおよび糖アルコールなども用いることができる。

尚、本発明の 4族元素化合物による無機系多孔質体は、カラムとして使用する場合、その立体構造が上記の条件を充足していれば、後述の作用効果を発揮するものである。従って.、その製造法は、限定されない。本発明の:^ ¾で作られたチタニアゲルは、 3次元網目構造のモノリス構造であり、リン酸化合物を選択的に保持する特性があり、その分離に寄与する接触部分が多ぐ、クロマトグラフィー用ゲルとして従来より強い選択性を得ることができる。また、従来のシリカゲルやチタ二アコ一ティングシリカゲルなどと比べて、本発明ゲルは、純チタユアから作られており化学的安定性が高く、固定化金属アブイエティ一クロマトダラフィ一と異なり、バッファーだけで、濃縮、溶出ができ、得られたリン酸化ぺプチドの純度を高くすることができ、溶出液には不純物が含まれず、試料精製や前処理に有効である。

本発明の 4族元素化合物の無機系多孔質体の貫通孔、細孔について、該無機系多孔質体をカラムとして使用する場合の作用を中心に述べる。試料溶液等の流体は、カラムの一端から入って三次元網目状に連続した貫通孔を通過し、他端から出る。通過途中、従来の充填型カラムにおけるビーズを用いた場合のような極端に狭い流路がなく、しかも貫通孔の孔径が 1 0 0 n m以上であるから、流体が受ける抵抗は小さい。従って、圧力損失も小さい。

貫通孔'の孔径が同じであるなら、カラム全体に対する貫通孔の容積率が高いほど、圧力損失が小さくなるので好ましいが、容積率が 9 0 %を' 超^ると機械的強度が著しく損なわれてしまい、単体でク口マトグラフィ一用などのカラムを構成することが困難となる。他方、容積率が 2 .0 % に満たないとかえつて充填型カラムよりも圧力損失が大きくなる。クロマトグラフィ一用として好適な容積率の範囲.は、 5 0〜 8 0 %である。そしで、貫通孔を形成するゲル骨格に細孔が形成されているので、比表面積が高い。従って、その細孔に、例えばォクタデシル基等の官能基を化学的修飾によって固定したり、グルコースィソメラーゼ、トリプシン等の酵素や白金、パラジウム等の触媒を担持させておくと、流体が通過する過程でこれらの分子と効率よく反応する。しかも官能基が細孔内に固定されているので、 .流体 p流れが速くても官能基が流されることはない。また本発明の無機系多孔質体がアナター:^結晶相を主成分とする二酸化チタンである場合には、溶液中の'リン酸基を有する化合物を特異的に'吸着することができ、液体クロマトグラフィー法の応用によって当 ^物質の選択的な濃縮や検出を行うことが可能である。

但し、貫通孔、細孔を合わせた全気孔中の細孔の占める容積率.は 1 0 % 以上を必要とする。 1 0 %よりも少ないと、貫通孔の前記容積率を 9 0 % まであげたとしても、官能基をほとんど固定することができないらである。他方、ゲル骨格 1 g当りの細孔の容積は 1 0 c in ³ / g以下であることを必要とする。ゲル骨格 1 g当りの細孔の容積が 1 0 c m ³ Z g を超えると機械的強度が著しく損なわれてしまい、単体でクロマトダラフィー用などのカラムを構成することが困難となる。クロマトグラフィ用として好適な細孔容積率及び容積の範囲は、全気孔に対する容積率が 5 0 %以上、ゲル骨格 1 g当りの細孔の容積が 2 c m ³ / g以上である。

尚、カラム全体に対する貫通孔の容積率及び細孔の全容積が、上記好適な上限値より高くても、本発明の範囲であれば、外周を筒体で覆うなどて機械的に補強することによって、クロマトグラフィーその他に適用可能である。

又、本発明の無機系多孔質材料が 4族元素化合物、例えば二酸化チタンである場合には、貫通孔の大きさを概ね 1 .0 /x m以上とし、しかもその割合を高くすることにより、体液の循環する部位に埋め込むこと k:より、生体に無害 ¾薬剤徐放担体とすることができる。酸化チタンは通常の生体条件下では体液への溶出は非常に'少なく、しばしば検出限界以下である。多孔質酸化チタン上には、表面の結晶相を適切に制御した場合には、生体内で骨の成分であるアパタイト層が該多孔質酸化チタン上に形成され、生体はこれを自身,の骨とみなすために、何らの拒否反応を起こすことなく生体組織と親和する。したがってこの種の酸化チタン多孔質材料は、生体内への埋入によて不都合な拒絶反応を起こさない、生体組織親和基材或いは安全な薬剤徐放担体として利用することができる。二酸化ジルコ二ゥムの場合では、硫酸化合物の分や選択的な捕集に有効であるが、他の金属を琅り込み固化する性質があり、化学的安定性が高く、廃棄物処理として有効利用が考えられる。さらに、本発明の方法では、全体を自由な形に作る事が出来るため、用途に応じた多孔質体を得ることが出来る。ぐ実施例 1 >

まずチタニウム（IV ) _n—プロボキシド（アルドリッチ製） 1 7 . 4 0 4 gに 3 5重量。 /₀塩酸水溶液 2. 6 4 5 mLを滴下し、 5分間攪拌した。これに蒸溜水 2 0. 4 0 4 m Lを滴下し、分間攪拌した。さらに、ホルムアミド 1. 2 0 3 m Lを滴下し、 5分間攪拌した。得られた透明溶液を密閉容器に移し、 3 0°Cの恒温水槽中に保持したところ約 1時間後に固化した。固化した試料を 2 4時間熟成させ、 6 0°Cで乾燥した。これによつて、多孔質二酸化チタンゲルを得た。

得られた多孔質二酸化チタンゲルには 2 μ m程度の揃った貫通孔が三次元網目状にからみあった構造で存在しているとが、走査電子顕微鏡 (日立， . S— 2 6 0 0 N) 図 .（ 5 0 0 0倍）（図 1 ) 及び水銀圧入装置 (M i c r o m e r i t i c s , P QR E S I Z E R 9 3 2 0) により測定した測定図（図 2) によって確かめられた。 6 0°Cで乾燥した多孔質二酸化チタンゲルを 6 0 °C/h の昇温速度で 3 0 0 °Cまで加熱した。貫通孔の内壁に 5 nm程度の細孔が多数存在していることが、窒素吸着測定（ 3 0 0°Cで熱処理した多孔質二酸化チタンゲルの ¾定）によって確かめられた（図 3に示す吸養一脱着等温線図、図 4に示す細孔径分布図）。なお、 6 0 °Cで乾燥した多孔質二酸化チタンゲルの気孔容積およぴ気孔径は、熱処理を終えた多孔質二酸化チタンゲルのそれにほぼ一致しており、細孔の存在は電界放射型走査電子顕微鏡（0本電子， J SM - 6 7 0 0 F ) によっても確認された（図 5 )。 , 6 0 °Cで乾燥した多孔質二酸化チタンゲルには、 .アナターゼ相の二酸化チタンナノ^晶が形成されてい.ることが、 X線回折測定装置（R i g a k u , R I NT) によって確かめられた（図 8 )。 X線回折ピークの半値幅を用いて Scherrerの式を適用すると、ナノ結晶の結晶子サイズが約 1 0 nmであると評価された。 6 0 ^Zhの昇温速度で 3 0 0 °C、 5 0 0 °C、 7 0 0 °C、 9 0 0 °Cまで加熱して、各温度で 2時間保持した後、 X線回折測定を行った。 3 0 0°C、 5 0 0°Cで加熱した多孔質二酸化チタンゲルではアナターゼ相の二酸化チタンが形成されているが、 7 0 0°Cおよび 9 0 0 °C以上での熱処理ではルテル相へ構造転移していることが確かめられた。

9 0 0 °Cでの熱処理した多孔質二酸化チタンゲルにおいて、三次元網目状にからみあった貫通孔は維持されており、貫通孔径は乾燥した多孔質酸化チタンゲルとほぼ一致していることが、走査電子顕微鏡による図（図 9 ) 及び水銀圧入測定した図（図 1 0 ) によって確かめられた。

<実施例 1一 a >

上記反応溶液に蒸溜水を最大 2 1. 2 1 4 m Lまで添加して固化させると、水の量が多いほど得られる多孔体の貫通孔径は小さくなり、最小 0. 5 m程度までこれを連続的に制御することができた（図 6 )。図 6— aは、蒸溜水を 2 0. 4 0 4mL加えたもので、 2 /i.m程度の揃った貫通孔が三次元網目状態で存在している。蒸溜水の量を 2 0. 9 4 4 mLにしたものが図 6— b、 2 1. 2 1 4m Lにしたものが図 6— cである。貫通孔は順に小さ,く変化していることがわかる。

<実施例 l _ b >

また、用いる 3 5重量％塩酸水溶液の量を、最小 2. 4 3 6 mLから最大 2. 8 0 6 mLまで変化させて、生成する多孔体の貫通孔径を最大 5 μ mから最小 0 · ·2 μ mの範囲で制御することが出来た（走査電子顕微鏡による図 7)。

図 7— aは、塩酸を 2. 7 5 4 m L加えたもので、 3 μ πι程度の揃つた貫通孔が三次元網目状態で存在している。塩酸の量を 2. 6 4 5 m L にしたものが図 7— b、 2. 4 3 6 mLにしたものが図 7— cである。

<実施例 1 _ c >

さらに、反応温度を 4 0°Cから 8 0°Cまで変化させても同様に、蒸溜水の濃度および 3 5重量％塩酸水溶液の濃度を調節することにより、上記と同様の範囲内で貫通孔径を制御することができた。

ぐ実施例 2 >

まずチタェゥム（IV) n—プロボキシド（アルドリッチ製） 1 1 . 6 0 2 gに 3 5重量％塩酸水溶液 1 . 6 2 4 m Lを滴下し、 5分間攪拌した。これにトリブロック共重合体（F 6 8、ドイツ B A S F社製） 0. ' 1 0 gを加え、蒸溜水 1 4. 0 7 1 m Lを滴下し、 5分間攪拌した。さらに、ホルムアミド 0. 7 3 8 m Lを滴下し、 5分間攪拌した。得られた透明溶液を密閉容器に移し、 4 0 °Cの恒温水槽中に保持したところ約 1時間後に固化した。固化した試料を 2 4時間熟成させ、 6 0 °Cで乾燥した。これによつて、 .多孔質二酸化チタンゲルを得た。

得られた多孔質二酸化チタンゲルには 3 μ m程度の揃った貫通孔が三次元網目状にからみあった構造で存在じていることが、電子顕微鏡及び水銀圧入測定によって確かめられた。，6 0 °Cで乾燥した試料を 6 0 °C/ h の昇温速度で 3 0 0 °Cまで加熱した。貫通孔の内壁に έ n m程度の細孔が多数存在しているこ.とが、窒素吸着装置（M i c r o m e r i t i c s， A S A P— 2 0 1.0 ) の測定によつて確かめられた。なお、 6 0 °C で乾燥した試料の気孔容積および気孔径は、熱処理を終えた多孔質二酸化チタンゲルのそれにほぼ一致していた。

6 0 °Cで乾燥した多孔質二酸化チタンゲルには、アナターゼ相の二酸化チタンナノ結晶が形成されていることが、 X線回折測定に'よって確かめられた。 X線回折ピークの半値幅を用いて S c h e r r e r の式を適用すると、ナノ結晶の結晶子サイズが約 1 0 n mであると評価された。 6 0 °CZh の昇温速度で 3 0 0 °C、 5 0 0 °C、 7 0 0 °C、 9 0 0 °Cまで加熱して、各温度で 2時間保持した後、 X線回折測定を行った。 3 0 0 °C と 5 0 0 °Cで加熱した試料ではアナターゼ相の二酸化チタンが形成されているが、 7 0 0 °Cと 9 0 0°Cの熱処理ではルチル相へ構造転移しているとが確かめられた。

9 0 0°Cでの熱処理レた試料において、三次元網目状にからみあった貫通孔は維持されており、貫通孔径は乾燥試料とほぼ一致していること力電子顕微鏡及び水銀圧入測定によって確かめられた。

<実施例 2— 1 >

記反応溶液に蒸溜水を最大 1 4. 6 3 0 m Lまで添加して固化させると、得られる多孔体の貫通孔径は小さくなり、最小 0. 程度までこれを連続的に制御することができた。

ぐ実施例 2— 2 >

また、'用いる 3 5重量％塩酸水溶液の量を、最小 1. 4 9 5 mLから最大 1. 6 9 1 m Lまで変化させる力、あるいは、 F 6 8 (トリブロック共重合体）の量 Xを、最小 0. 0 6 g'カゝら最大 0. 1 2 gまで変化させて、生成する F 6 8の量の変化によ,るモルフォロジ一変化を示す（図 1 1 )。多孔体の貫通孔径を最大 5 ： mから最小 0.' 2 i mの範囲で制御することができた。さ.らに、反応温度を 3 0°Cに下げるか、あるいは、 5 0 °Cから 8 0 °Cの範囲で上昇させても同様に、蒸溜水の濃度および 3 5重量％塩酸水溶液の濃度を調節することにより、上記と同様の範囲内で貫通孔径を制御することができた。

' <実施例 2— 3 >.

極性溶媒に水溶性有機高分子であるポリエチレンォキシドを共存させ、モノリスゲルを作成した。

まず、チタニウム（IV) n—プロポキシド（アルドリッチ社製） 3 4.

8 0 7 gに 3 5重量％塩酸水溶液 5. 8 2 6 5 m Lを滴下し、 5分間撹拌した。これにポリエチレンォキシド（アルドリツチ社製） MW : 1 0， 0 0 0、 1. 0 5 gを加え、蒸留水 1. 3 9 3 5 5 m Lを滴下し、 5分間撹拌した。更に、 N—メチルホルムアミド量を滴下し、 5分間撹拌した。'得られた透明溶液を密閉容器に移し、 40 °Cの恒温水槽中に保持したところ、約 1時間後に,固化した。固化した試料を 24時間熟成させ、 6 0°Cで乾燥した。これによつて、多孔質二酸化チタンゲルを得た。

N—メチルホルムアミドの添加量（X) を変化させる事で、多孔体の貫通孔径を最大 5 a mから最小 0.2 μ mの範囲で制御することができ、水 0圧入装置 (前出）測定の測定図により、確かめられた（図 1 2)。図 1 2における 1〜 5が示す曲線の実験条件は、下記のとおりである。

1 ： X = 4. 8 2 0 D m L (0. 0 8 1 m o 1 )

2 ： x = 4. 9 9 9 1 m L (0. 0 8 4 m o 1 )

3 ： X = 5. 1 7 7 6 m L (0. 0 8 7 m o 1 )

4 ： X = 5. 3 5 6 2 m L (0. 0 9 0 m o 1 )

5 ： X = 5. 5 3 4 7 m L (0. 0 9 3 m o 1 )

水溶性有機高分子の共存下でも孔径,を自由に作れることが実証できた。く実施例 2— 4 >

実施例 2— 3と同様の.方法で、孔径等を制御された貫通孔を持つチタユア多孔質体を得て、更に、焼成前に密閉容器中で、加熱処理（以下、密閉加熱処理という）を行うことで、細孔を調整した。

まず、チタニウム（IV) n—プロボキシド（アルドリツチ社製） 1 1. 6 0 2 gに 3 5重量■%塩酸水溶液 1. 9 4 2 mLを滴下し、 5分間攪拌した。

これにポリエチレンォキシド（アルドリツチ社製） MW : 1 0 , 000、 0. 3 5 gを加え、蒸留水 1. 3 9 3 5 5 mLを滴下し、 5分間撹拌した。更に、 N—メチルホルムアミド 1. 7 8 54 mLを滴下し、 5分間撹拌した。得られた透明溶液を密閉容器に移し、 6 0°Cの恒温水槽中に保持したところ、約 1時間後にゲル化した。ゲル化した試料を 24時間熟成させ、 6 0°Cで乾燥した。：更に、この多孔質体を乾燥させずに、耐圧性のある密封できる容器に入れて、密封して加熱した。熟成後、 1 0 0°C、 1 5 0°C、 2 0 0°Cで密閉加熱処理を行い、更に、やれぞれを 400 Cで焼成した多孔質体、熟成後、.密閉加熱処理を行わず 6 0°Cで乾燥させた多孔質体、熟成後、密閉加熱処理を行わず、 6 0°Cで乾燥させ、さらに 400°Cで焼成した .多¾質体、合計 8種を得た。

各多孔質体を窒素吸着装置（M i c r o m e r t i c s , A S.A P - 20 1 0) により、表面積および細孔径を前出の窒素吸着測定装置により測定した結果、吸着一脱着等温線図（図 1 3 )、細孔径分布図（累積容積図 1 4 ( a )、微分容積図 1 4. (b)) を得た。

図 1 3に示す咴着ー脱着等温^では、各多孔質体のデータにヒステリシスが観察される。これが、高圧側で観'察されるほど細孔サイズは大きくなることを示し、吸着等温線（2つのうち下の曲線）の增加が急になるほど、細孔サイズが揃っていることを示している。密閉加熱処理を施すと、細孔サイズは大きくなり ,、サイズが比較的揃うことが分かる。尚、各データは得られた数値どおりに作製すると重なって見づらいため、 ① から順に 1 5 0 c m

gずつ上にずらして表示している。

図 1 4一 1に示す累積細孔容積では、曲線の立ち上がる位置や立ち上がり方で細孔のサイズや分布を評価でき、最終的な到達点で細孔がどれくらいの体積を占めているかが分かる。 2 00 °Cで密閉加熱処理後、 6 0 °Cで乾燥した多孔質体⑦は、曲線の立ち上がりが 1 0 nmくらいであり、比較的鋭いカーブを形成している一方、細孔サイズが小さぐなつてもダラダラと増加しているので、ある程度細孔サイズは揃っているものの分布があることが確認される。

加えて、この多孔質体⑦は 8つの多孔質体の中で細孔の占める体積が最も大きいことも確認される。 ' 又、' 2 0 0 °Cで密閉加熱処理後、 4 0 0 °Cで熱処理した⑧のデータから、熱処理によっても細孔はほとんど消失しないことも分かる。

更に、 6 0 °Cで乾燥した多孔質体①では、ほとんど細孔が存在しないことも分かる。

図 1 4一 2に示す微分細孔容積では、ピークの位置で細孔の平均サイズが確認される。

更に、ピーク幅が狭いほど、細孔サイズが揃い、分布が少ないことが確認される。 2 0 0 °Cで密閉加熱処理後、 6 0 °C'で乾燥した多孔質体⑦、および 2 0 0 °Cで密閉加熱処理後、 4 0 0 °C.で熱処理した多孔質体⑧では、細孔サイズはともに平均 1 0 n mである。

これらの図から得られた数値を表にして図 1 5に示す。

全体をまとめると、

6 0 °Cの乾燥状態では、細孔径、比.表面積はほとんど存在しないが、密閉加熱処理を行なうと、比表面積、細孔径が増大するととが分かる。 4族元素化合物特有の効果を,高めるためには、様々な試料との接触機会が多くなる比表面積が大きく制御された多孔質体が適しており、この密閉加熱処理が有効である事が分かる。更に、処理温度に応じて、その細孔径を制御する事が可能となる。

'更に、密閉加熱処理を行った後に焼成する事で、細孔径を大きくする事が可能となる。

焼成加熱温度を変化せると、貫通孔を大きく変化させず、細孔径を目的に応じて変化させることが出来る。密閉加熱処理は多孔質体を侵食させる効果があることは、周知の事実.であるが、貫通孔はほとんど変化しないことにより、侵食作用でないことも実証された。更に、焼成工程を加えることで、細孔径を大きくすることができ、目的に応じた多孔質体を制御作成できることが実証できた。 • 6.0°Cで乾燥後、多孔質体重量に対して、 2 0 °/。重量のイオン交換水を含水し、同様の処理を.行ったが、同様の結果になり、イオン交換水を添加しても細孔径および比表面積が制御できることが実証された。 · く実施例 3 >

まず、チタ-ゥム（IV) n—プロボキシド（アルドリツチ製） 1 7. 4 0' 4 gに 3 5重量％塩酸水溶液 2. 6 4 5 m Lを滴下し、 5分間攪拌した。 - これに蒸溜水 2 0. 6 74 mLを滴下し、 5分藺攪拌した後、ホルムァミド 1. 2 0 3 mLを滴下し、さらに 5分間攪拌して均一化し、ゾルーゲル反応液とした。この反応液 5 m を長さ 2 0 0 mm、内径 6 mmの寸法の円筒形密閉容器に入れ、その容器を恒温水槽に入れてゾルーゲル反応液の温度を 3 0°Cに 1時間保持し、加水分解 ·重縮合を行い、固化させ、 2 4時間熟成後、 6 0°Cで乾燥して、カラム形状の試料を得た。

<実施例 4 > '

実施例 3で、得られた円筒; Rのモノリスゲルを 4 0 0°Cで熱処理を行い、アナターゼ相を持つ外径 2. 1 mmの固いモノリスゲルを得た。長さ 1 5 0 mmに切断し、ポリプロピレンチューブに挿入し、 1 5 0 °Cで加熱し、ポリプロピレンチューブを収縮させてカラム化した。両端に接ジョイントを取り付け、 HP L C分析を行い、そのリン酸化合物保持力を従来タイプのカラムと比較した。

比較例として、細孔 1 0 nm©外径 2. 1 mm、長さ 1 5 0 mmのシリカモノリスにチタニウム（IV) イソプロキシドをコーティングし、 4 0 0°Cで熱処理したチタユアコーティングモノリスを作成し、実施例 4 と同様な方法でカラム化したカラム、及び、粒子充填タイプカラムとして、細孔 1 0 n m、粒子径 5 /X mチタユアゲルを 2. 1 mm X 1 5 0 m mに充填した H P L Cカラムを用意した。 ■ 3種のカラムで、リン酸基の無いアデノシン、リン酸基の一つ結合したアデノシンモノフォス,フエ一ト、リン酸基の二つ結合したアデノシンジフォスフエ一ト、リン酸基の 3つ結合したアデノシントリフォスフエードを試料（各 1 /z gZmL) として分析比較した。

実験装置：

セミ' ミクロ H P L C対応ポンプ PU 7 1 2、

紫外可視検出器 UV 70 2 (セミミクロセル）、

データステーシヨン E Z C h r om E l i t e (以上ジーエルサイエンス社製）、

低拡散テンレスインジェクター RHEODYNE 8 1 2 5 (レオダイン社製）

実験条件：

溶離液 0. 1 M リン酸緩衝液（p H,7) /ァセトニトリル = 5 0 5 0

流速 0. 2 m L / m i n.

検出 U V 2 6 0 n m

注入量 0. 1 // L

カラム温度室温

'本発明チタニアモソリスでの実施例 4による分析結果を（図 1 6 ) に示す。図中 1〜4は以下を表す。

1 ：アデノシン、 2 : アデノシンモノフォスフェート、 3 : アデノシンジフォスフェート、 4 : アデノシントリフォスフェート

4成分ともにリン酸化の程度によって完全に分離され、高い選択性を有する事が判明した。 3次元網目構造をとつているため、試料との接触が大きいためと考えられる。

比較例のチタ二アコ一ティングタイプでは、リン酸化合物を保持する特性を持つが、アデノシンとリン酸基が一つのアデノシンモノフォスフヱートは分離せず 1つの.ピークとなった（図 1 7 )。

この事から、同様の構造であるシリ力モノリス表面にチタユア膜を作成しても、細孔内部まではコーティングされず、選 ί尺性が低い事が判明した。

)の比較例のチタニア粒子タイプでは、 4成分の分離は見られたものの本発明であるモノリスタイプに比べて、選択性が低い結果であった（図 1 8 )。

本発明チタ-ァモノリスは、シリカコーティングタイプ、チタユア粒子タイプより選択性が,優れており、リン酸化合物の選択的な保持能力が大きいことが判明した。

ぐ実施例 5 >

チタニウム（W) n—プロポキシド. （アルドリッチ製） 1 7. 4 0 4 gに 3 5重量％塩酸水溶液 2. 6 4 5 m Lを滴下し、 5分間攪拌した。これに蒸留水 2 0. 4 0.4 m を滴下し、 5分間攪拌した後、ホルムァミド 1. 2 0 3 m Lを滴下し、さらに 5分間攪拌して均一化し、ゾルーゲル反応液とした。この反応液 5 m Lを長さ 2 0 0 mm、内 fe 6 mmの寸法の円筒形密閉容器に入れ、その容器を恒温水槽に入れてゾル一ゲル反応液の温度を 3 0 °Cに 1時間保持し、加水分解 .縮重合を行い、固化させ、 2 4時間熟成後、 6 0 °Cで乾燥して、外径 3. 3 mmの貫通孔径 1 μ m棒状のチタニアモノリスを得た。

このモノリスを厚さ 1 . 5 mmにダイヤモンドカッターで切断し、円盤状のモノリスとした。 4 5 0 °Cで焼成し、径 2. 8 mm厚さ 1 . 2 m mのフィルター状の固いチタニアモノリスを得た。

さらに、同じ貫通孔径を持ち円盤状のシリカモノリスにチタニウム (IV) イソプロキシドをコーティングし 4 0 0°Cで熱処理したチタユアコティングモリスを作成した。

これらのモノリスを 0, 1M水酸化ナトリゥム水溶液中で一夜攪拌し続けたところ、チタニアコーティングタイプでは、溶解した。 · 本発明チタニアモノリスでは、重量変化は無くアル力リ溶液中でも安定である事が実証された。

ぐ実施例 6 >

実施例 5で、アル力リ溶液中で一夜攪拌したフィルター状モノリを、ピぺットチップに超音波融着器により融着した。

このチタエアモノリスを融着したピぺットチップをピぺッターに使用して、リン酸化ペプチドが選択的に濃縮精製できるかを調べた。

濃縮精製工程は次のようである。

1. ピぺッターの目盛りを 2 0 0 μ Lにあわせる。

2. コンディショニングのため、 5 0, %ァセトニトリル水溶液（0. 1 〜 1 %ギ酸）で 3回ピペッティングする。

3. 吸着のため、試料を 2 0〜 2 5回ピペッティングする。

4. 洗浄のため、 5 0 %ァセトエトリル + 0. 51^じ 1水溶液（0. 1 % ギ酸）でピペッティングする。 '

5. 溶出のため、 0. 2Μ リン酸バッファー（ρ Η 7. 0)で 1 0回ピぺッティングし、試料を得る。，標準のリン酸化ペプチド '（TRDIYpETDYYRK) . ( 0. 0 1 m g / m L) と非リン酸化ペプチド (TRDIYETDYYRK) (0. 0 5 m g /m L) の混合試料 1 0 μ Lを、 Inertsil (登録商標） WP 3 0 0 C 1 8 5 μ m ( 1 5 0 X 2. 1 mm I . D . )カラムを用いて、 0. 1 % トリフルォロ酢酸添加 1 0 %ァセトニトリルから 0. 1 %トリフルォロ酢酸添加 40 %ァセトニトリルへの 1 5分グラジェント分析を行い、 UV 2 1 0 nmで検出した。 '実験装置：

HP L Cポンプ G L 7,4 1 1 (低圧グラジェントュュット内蔵）、カラムオーブン G L— 74 3 0、

オートサンプラー GL— 74 20、

U V検出器 G L - 74 5 0

専ソフトウェア E Z C h r om E l i t e (以上ジーエルサイェンス社製） . 濃縮精製を行わない未精製の混合試料の分析結果を図 1 9に示す。本発明チタニアモノリスゲルを用いて上記のピぺッティング方法で精製した混合試料の分析結果を図 20に示す。図 20中 1及ぴ 2は以下を表す。 1 ：リン酸化べプチド

2 ：非リン酸化ぺプチド

精製を行わない試料では非リン酸化,ぺプチドがそのまま検出されているが、図 2 0ではリン酸化ペプチドだけが精製濃縮され T、検出されていることがわかる。なお、そ ρ回収率は約 7 0 %であった。

本発明チタニアモノリスは、リン酸化ペプチドを効率良く、高い回収率で精製できる事が確認された。

ざらに、同じ方法で、実際のタンパク質であるカゼイン（0. 5 m g/mL) 溶液 5 O./ gをトリプシン消化したぺプチドを試料として精製し、 HPLC分析を行なった。

試料 1 0 μ ΐ, を、 Ine sil (登録商標） WP3 00 C 1 8 5 // m ( 1 5 0 X 2. 1 mm I . D . ；)カラムを用いて、 0. 1 %トリフルォロ酢酸添力 U 1 0 %ァセトニトリルから 0. 1.%トリフルォロ酢酸添加 9 0 %ァセトニトリルへの 1 5分グラジェント分析を行い、 UV 2 1 0 n mで検出した。実験に使用した装置は、標準品の分析で使用したものと同様である。 '精製を行なつでいないカゼィンのぺプチド消化物の分析では、他のぺプチドが混在し、リン酸化ぺプチドを検出する事は出来ない（図 2 1 )。

しかし、本発明のチタニアモノリスを融着したピぺットチップで前処理濃縮した結果、 3カゼィンの消化ぺプチド中のリン酸化ぺプチド 2種 FQpSEEQQQTEDELQD K (分子量： 2 0 6 1 )、

R ELEELNVPGEIVEpSLpSpSpSpSEESLTR (分子量： 3 1 2 2 ) を検出、同定する事が出来た（図 2 2 )。図 2 2中 1及び 2は以下を表す。 1 ： FQpSEEQQQTEDELQDK (分子量： 2 0 6 1 )

2 ： RELEELNVPGEIVEpSLpSpSpSpSEESLTR (分子量： 3 1 2 2 ) 実試料のタンパク消化物に含まれる微量のリン酸化べプチドも選択的な精製回収でき、生体内代斷研究にも十分対応できる事が実証された。チタ二アコ一ティングモノリスでも同様の結果は得られるが、アル力リ加水分解などを行なった生体 ^料などでは、モノリスが溶解してしまい、中和後の精製が必要となる。

本発明のモノリスを用いた精製では、アルカリ耐久性もあり、中和ェ程も必要なく、固定化金属ァフイエティークロマトグラフィ一のような煩雑な工程も必要なく、簡単にリン酸化ぺプチドを選択的に濃縮精製でさる。

前処理自動化装置であるハミルトンマイク口ラボスターを使用し、その専用チップに同じように本発明チタユアモノリスを融着ざせ、使用する前処理チップを構成した。さらに前述の手動ピベッティングプロトコールを装置に入力し自動で精製を行なわせ、分析を行なった結果 > 同等のクロマトグラムを得ることができた _Ό

このように、自動化装置に本発明チタニアモノリスを組み込む事で前処理の自動化も可能となる。

ぐ実施例 7 > • チタウム（ r V) n—プロボキシド（アルドリッチ製） 1. 7 k g に 3 5重量％塩酸水溶液 2 6 4m Lを滴下し、 5分間攪拌した。これに蒸留水 2 L を滴下し、 5分間攪拌した後、ホルムアミド 1.5 0 m'Lを滴下し、ざらに 5分間攪拌して均一化し、ゾルーゲル反応液どした。この反応液 5 0 0 m Lを長さ 2 0 0 mm、内径 6 0 m mの寸法の円筒开密閉容^に入れ、その容器を恒温水檜に入れてゾルーゲル反応液の温度を 3

0°C 1時間保持し、加水分解 .縮重合を行い、固化させ、 2 4時間熟成後、 6 0°Cで乾燥して.、円筒状のモノリスゲルを得た。 4 0 0°Cで熱処理を行い、アナターゼ相を持つ外径 2 0 mmの固いモノリスゲルを得た。長さ 1 5 0 mmに切断し、ポリプロピレンチューブに挿入し、 1 5 o°cで加熱し、ポリプロピレンチューブを収縮させてカラム化した。このチタユアモノリスカラムに化学修飾を施し、従来のシリ力充填剤と比較した。

チタエアモノリス重量に対して、 1 w t %ブタジエンモノマーと 0. 0 1 w t %ァゾビスイソプチ口,二トリルを 1 Lへキサンに溶解した。この溶液中にゲルを浸漬し減圧にしながら、へキサン溶媒を蒸発させ、 1 2 0°Cで 1 2時間反応、ブタジエンポリマーを化学結合させた。

ごの化学修飾チタユアモノリスを実施例 4と同じ方法で力ラム化した。比較例として、細孔径 1 0 n mを持つシリ力粒子に同様のコーテ,ィング処理を施し、内径 2 0 mm長さ 1 5 0 mmの分取カラムに充填した。弱酸性試料であるフノールと塩基性試料であるピリジンの混合物 1 m 1 を注入し 3 0 %メタノ一ル溶離液で、流速 2 0 m L/m i nで分取分析し U V 3 0 0 nmで検出した。

実験装置：

HP L C分取システム P L C 5 6 1 (ジーエルサイエンス社製）図 2 3及び 2 4に示す 1及び 2は以下を表す。 1 ：.フエノ一ノレ、

2 ：ピリジン

図 2 3は、比較例のシリカゲル充填剤による分析であるが、シラノール基の影響により塩基性化合物であるピリジンが吸着しピークがテーリングしている。本発明チタユアゲルに化学修飾したカラムでは、フエノ一の逆相保持は同じように得られ、さらに、ピリジンの吸着が無く、早く溶出された（図 24)。

本発明のチタニアモノリスは、従来のゲルと同様に化学種を結合させる事により、種々の特性を付け加え得る事が.可能である。シリカゲルのような吸着活性点も無く、化学的耐^性が高く、ゲルの溶解が無く精製用に使われる分取ク口マトグラフィーにも適している。

<実施例 8 >

チタニウム（ I V) n—プロポキシ,ド（アルドリッチ社製） 1 1. 6 0 2 gに 3 5重量％塩酸水溶液 1. 9 4 2 2 mLを滴下し、 5分間撹拌した。これにポリエチレンォ,キシド（アルドリッチ社製） MW ： 1 0， 0 0 0、 0. 3 5 gを加え、蒸留水 1. 3 9 3 5 5 mLを滴下し、 5分間撹拌した。さらに、 N—メチルホルム'ァミド 1.. 7 8 5 4mLを滴下し、更に、 5分間撹拌して均一化し、ゾルーゲル反応液とした。この反 ^液 5 m Lを長さ 1.5 0 mm、内径 6 mmの寸法の P FA (パーフルォ口アルコキシアルカン）チューブに入れて両端を密栓し、そのチューブを恒温水槽に入れてゾルゲル反応液の温度を 3 0 に 1時間保持し、加水分解、重縮合を行い、ゲル化させ、内径 5 Omm, 長さ 1 5 O mmのステンレス製耐圧容器に入れ、 2 0 0 °Cで密閉加熱処理を行い、 40 0 °C で焼成した。

比表面積 1 5 3 m²/ g、平均細孔径 1 3 n m、貫通孔径 5 μ mの制御された 3. 9 mm X 5 0 mmの多孔質体が得られた。得られた試料の走査電子顕微鏡写真を図 2 5に示す。

得られた多孔質体をポリプロピレンチューブに挿入し、 1 5 0°Cで加熱し、ポリプロピレンチューブを収縮させてカラム化した。両端に接続ジョイントを取り付け、 H P L C分析を行い、リン酸基の一結合したアデノシンモノフォスフェート、リン酸基の二つ結合したアデノシンジフ;^スフェート、リン酸基の三つ結合したアデノシントリフォスフエ一トを試料（各 1 /1 gZmL) として分析比較した。実験に使用した装置は、実施例 4で使用したものと同様である。

実験条件：

溶離液 0. 1 M リン酸バッファー（リン酸 1カリウム、リン酸 2カリゥムを混合） p H= 7 ZA C N= 5 0 Z 5 0

検出波長 2 8 0 nm

至 ί皿

流速 0. 5 m L / . i n

検出 UV 2 8 0 nm

注入量 5 /z L

カラム温度室温

本発明の密閉加熱処理により、細孔径をコントロールしたチタエアモノリスでの分析結果.を図 2 6に示す。図 2 6中 1〜 3は以下を表す。 1 ：アデノシンモノフォスフェート

2 ：アデノシンジフォスフェート

3 ：アデノシントリフォスフェート

細孔径が適切に制御されているため、より短い時間で、リン酸化の程度によって 3成分を分離する事ができ、充填タイプ（図 1 8 ) に比べて、テーリングが無く対象性の良いクロマトグラムが得られた。密閉加熱処理により、表面活性状態を変える事ができ、かつ細孔径を制御することで、'高速分析に適用できるカラムも作成できる事が実証された。

<実施例 9 >

二酸化チタンと同様に極性筚媒に水溶性有機高分子であるポリエチレンォキシドを共存させ、二酸化ジルコニウムモノリスゲルを作製した。まず、ジルコニウム（IV) n—プロポキシド（アルドリッチ社製、 7 0 w t % i n 1 - p r o p a n o l ) 9. 3 5 9 4 gに 6 0重量⁰ /o硝酸水溶液 1. 6 7 4 2 mLを滴下し、 5分間撹拌した。これに蒸留水 6. 9 6 1 2 m Lを滴下し、ポリエチレンォキシド（ F 1 u k a社製） MW： 3 5， 0 0 0、 0. 1 5' gを加え、 3 0分間撹拌した。さらに、 N—メチルホルムアミドを 2. 6 7 8 1 mL滴下し、 5分間撹拌した。得られた透明溶液を密 ¾容器に移し、 8 0°Cの恒温槽中に保持したところ、約 1時間後に固化した。固化した試料を 2'4時間熟成ざせ、 6 0°Cで乾燥した。これによつて、多孔質体二酸化ジルコニウムゲルを得た（図 2 7)。 N—メチルホルムアミドの添加量を変化させる事で、多孔質体の貫通孔径を最大 5 /X mから最小 1 の範囲で制御することが出来た（図 2 8)。図 2 8中 1、 2は以下を表す。

1 ： N—メチルホルムァミド 2. 6 7 8 l mL

2 ： N—メチルホルムアミド 2. 9 1 6 1 m L

水溶性有機高分子の共存下で孔径を自由に作れる事実証できた。，実施例 9に記載の実施例の走査電子顕微鏡写真（図 2 7) 'と N—メチルホルムアミドの添加量'を 2. 9.1 6 1 m Lと変化させて得た走査電子顕微鏡写真（図 3 0) によっても貫通孔の変化が観察された。

<実施例 9一 1 >

さらに、実施例 9ゲルを用いて、焼成温度に於ける結晶構造変化を調ベた。本発明の方法では、固化した時点ではアモルファスであるが、 3 0 o°cの低温で熱処理すると、化学的に安定である正方晶あるいは立方晶が得られており'、多孔質体構造は得られている。さらに、 1 ' ² 0 0 °C で焼成する事で、単斜晶,単相に多孔質体構造を壌さず、結晶構造だけを変化させる事が出来る（図 2 9 )。図 2 9中四角のブロットは単斜晶、丸のプロットは正方晶又は立方晶を表す。

多孔質体の構造は、ゲルの固化時点で決まる事から、密閉容器の形状によって、目的に応じて自由な ¾を作成することができる。その後に、焼成する事で、化学的な性質が変化する結晶構造を目的に応じて作,製可能である事が実証された。産業上の利用可能性 .

この発明は、クロマトグラフィーカラムゃ吸着材として利用できる無機系多孔質体に関する。この発明の無機系多孔質体は、トリプシン、ァルカリフォスファタ—ゼ、グルコース,イソメラーゼ等の酵素や白金、パラジウム等の触媒あるいは、ォクタデシル基等の官能基が担持されて、液体クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー等のクロマトグラフィー用カラムに好適に利用され得る。また、シリンジ先端やキヤビラリ一内部に固定して通液することにより、特定のリン酸化合物を分離あるいは濃縮するために用いることができる。また多数のタンパク質混合物から、特異吸着によって特定の性質をもったものだけを吸着 ■ 分離するために用いることができる。

Claims

請求の範囲

1. 4族'元素化合物より成り、孔径 1 0 0 nm以上で 3次元網目状に連 5 続した貫通孔と、この貫通孔を形成するゲル骨格に形成された孔径 2〜' 1 0' 0 n mの細孔とを有し、貫通孔と細孔の容積の和に対して、細孔の占め容積率が 1 0 %以上であることを特徴とする.無機系多孔質体。 • .

2. ゲル骨格 1 g当りの細孔の容積が 1 0 c g以下であって、貫通孔と細孔の容積の和に'対して、貫通孔の占める容積率が 2 0〜 9 0 % 10 であることを特徴とする請求項 1記載の無機系多孔質体。 '

3. 4族元素化合物が、二酸化チタン（T i 〇 ₂)、二酸化ジルコニゥム（Z r 0₂)、二酸化ハフニウム（H f'〇₂) のいずれかを主成分とするこを特徴とする請求項 1又は請求項 2記載の無機系多孔質体。

4. 4族元素化合物が、二酸化チタン（T i 0₂) であることを特徴と 15 する請求項 1〜 2の何れかに己載の無機系多孔質体。

5. 4族元素化合物が、.二酸化ジルコニウム（Z r〇 ₂) であることを特徴とする請求項 1〜 2の何れかに記載の無機系多孔質体。

6. 4族元素化合物は加水分解性金属化合物を原料とすることを特徴とする請求項 1〜 5の何れかに記載の無機系多孔質体。， 0

7. 加水分解性金属化合物は金属アルコキシドであることを'特徴とする請求項 6記載の無機系多孔質体。

8. 金属アルコキシドはチタンアルコキシドであることを特徴とする請求項 7に記載の無機系多孔質体。

9. 金属アルコキシドはジルコニウムアルコキシドであることを特徴と 5 する請求項 7記載の無機系多孔質体。

1 0. チタンアルコキシドはチタニウム n—プロポキシドであることを特徴とする請求項 8記載の無機系多孔質体。

1 1 . ジノレコユウムァノレ,コキシドはジノレコニゥム n—プロポキシドであることを特徴とする請求項 9記載の無機系多孔質体。

1 2 . 請求項 1〜 1 1の何れかに記載の無機系多孔質,体を用いることを特徴とするクロマトグラフィーカラム。

1 3 . 請求項 1〜 1 1 の何れかに記載の無櫸系多孔質体を用いることを特徴とするリン酸化合物の分離あるいは濃縮用吸着材料。

1 4 . 請求項 1〜 1 1の何れかに記載の無機系^孔質体を用いることを特徴とする硫酸化合物の分離あるいは濃縮用.吸着材料。

1 5 . 酸性水溶液中に.於いて、極性溶媒の存在下で、 4族元素化合物を加水分解し、重合して反応溶液のゲル化を行なう工程、生成したゲルを焼成する工程を含むことを特徴とする 4 '族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法。

1 6 . 酸性水溶液中に於いて、極性溶媒の存在下で、 4 元素化合物を加水分解し、重合して反応溶液のゲル化を行う工程、生成したゲルを密閉加熱処理を行う工程を含むことを特徴とする 4族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法。

1 7 . 酸性水溶液中に於いて、極性溶媒の存在下で、 4族元素化合物を加水分解し、重合して反応溶液のゲル化を行う工程、生成したゲルを密閉加熱処理を行う工程、以上の工程により得られた多孔質ゲルを焼成する工程を含むことを特徴とする 4.族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法。

1 8 . 生成したゲル中の有機成分を除去する工程を含むことを特徴とする請求項 1 5〜 1 7の何れかに記載の 4族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法。

1 9 . 反応溶液中の水の濃度を変化させることにより、貫通孔径及び細孔径を制御するこ'とを特徴とする請求項 1 5〜 1 8の何れかに記載の 4 族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法。

2 0 . 反応溶液中に強酸を滴下し、ゲルィ匕反応速度を制御することにより、貫通孔径及び細孔径を制御することを特徴とする請求項 1 5〜 1 9 の何れかに記載の 4族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法。

2 1 . 密閉加熱処理によって、細孔径を制钾することを特徴とする請求項 1 6〜 2 0の何れかに記載の 4族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法。

2 2 . 密閉加熱処理によって、多孔質体の比表面積を制御することを特徴とする請求項 1 6〜.² 1の何れかに記載の 4族元素化合物より成る無機系多孔質体の製造方法。