SU763463A1 - Способ получени дегидрогеназ - Google Patents
Способ получени дегидрогеназ Download PDFInfo
- Publication number
- SU763463A1 SU763463A1 SU782621686A SU2621686A SU763463A1 SU 763463 A1 SU763463 A1 SU 763463A1 SU 782621686 A SU782621686 A SU 782621686A SU 2621686 A SU2621686 A SU 2621686A SU 763463 A1 SU763463 A1 SU 763463A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- dehydrogenase
- deae
- agarose
- chromatography
- dehydrogenases
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 title claims description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 9
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical class [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 6
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 241000589781 Pseudomonas oleovorans Species 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 5
- 102000004567 6-phosphogluconate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 4
- 108020001657 6-phosphogluconate dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical class N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 229940080469 phosphocellulose Drugs 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 claims description 3
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical class [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 claims description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 2
- 229910052500 inorganic mineral Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011574 phosphorus Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 3
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- BIRSGZKFKXLSJQ-SQOUGZDYSA-N 6-Phospho-D-gluconate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O BIRSGZKFKXLSJQ-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N dithioerythritol Chemical compound SC[C@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N 0.000 description 2
- DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N hexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000220479 Acacia Species 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N D-Glucose 6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 101150111247 GRS1 gene Proteins 0.000 description 1
- VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N Glc6P Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M Glycolate Chemical compound OCC([O-])=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001425930 Latina Species 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 101100479551 Methanopyrus kandleri (strain AV19 / DSM 6324 / JCM 9639 / NBRC 100938) glyS gene Proteins 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 150000001722 carbon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 101150003862 grsA gene Proteins 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 lath Chemical compound 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000002826 nitrites Chemical class 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical class CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
1
Изобретение относитс к микробиологической промышленности, а именно, к способу получени дегидрогеназ микробиологическим путем,j
Известен способ получени дегидрогеназ , предусматривающий культивирование бактерий рода Pseudbmonas на питательной среде, содержащей источ- Q НИКИ углерода, азота, фосфора и минеральные соли, дезинтеграцию с последующей обработкой бесклеточного экстракта сульфатом стрептсмицина, сульфатом аммони и очистку фвр ент- ного препарата 1 ,
в качестве источника фермента используют бактерии Pseudoraonas multivoraus, выращенные на среде с глюкозой. Выход глюкозо-6-фосфат ди- 20 гидрогеназы 30%, активность 140 ед/мг белка.
Известный способ предполагает получение только одной, а именно, глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы.25
Недостатками известного способа вл ютс невысокий выход фермента и использование г.Г1юкозы в. качестве рубстрата дл выращивани бактерий.30
Цель изобретени - повышение выхода целевого продукта и удешевление .его.
Указанна цель достигаетс тем, что в качестве продуцента используют штамм Pseudomonas oleovorans 52, выращенный на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода метанол или метиламин, а очистку ферментных препаратов провод т фракционированием на сефадексе G-150 и хроматографированием на ДЭАЕ-агарозе с получением фракций,содержащих глюкозо-б.-фосфат дегидрогеназу и 6-фосфоглюконат дегидрог.еназу.
Посл.е хроматографии на ДЭАЭ-агарозе . фракцию, сод-ержащую 6-фрсфоглюкрнат дегидрогеназу, допйлнительно очищают , на колонке с фосфоцеллюлозой.
Способ осуществл ют следующим образом .
Штамм Pseudomonas oleovorans 52 выращивают в течение 24 ч на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода 2-5% метанола или метиламина. Клетки отдел ют, разрушают с помощью ультразвукового дезинтегратора , белки экстрагируютбуферным раствором. Белковый экстракт обрабатывают последовательно сульфатом стрептомицина и сульфатом аммони .По лученный ферментный препара т фракционируют на колонке с сефадексом G-150, Фракцию, содержащую обе дегидрогеназы , хроматографируют на колонке с ДЭАЭ-агарозой дл их разделени . Выход глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы 35-40%, удельна активность 160-170 ед/мг белка. Фракцию, содержащую 6-фосфоглюковат дегидрогеназу, полученную после хроматографировани на ДЭАЭ-агарозе далее хроматографируют на колонке с фосфоцеллюлозой, Выход 6-фосфоглюконат дегидрогеназы 15-20%, удельна активность 15-17 ед/мг белка. Характеристика штамма PseudomonaS oleovorans № 52. Штамм выделен из активного ила и хранитс в коллекции культур микроорганизмов кафедры микробиологии биологического факультета МГУ, Морфологи и культуральные свойства . Грс1мотрицательные подвижные палоч ки с одним пол рным жгутиком. Средний размер клеток 1,0-1,8 х «0,4-0,7 мкм. Колонии на МПА-округлые гладкие , выпуклые,непрозрачные,белые ари старении приобретают цвет кофе с молоком,до 1 мм в диаметре,кра ров ные, структура однородна , легко сни маютс с агара петлей. Культура обил но растет на МПА, на сусле-агаре и голодном агаре роста нет. Физиологи и биохимические свойства . Штамм 52 - облигатный аэроб, же латину не разжижает, молоко не пептонизирует; сероводород и ачмиак при росте на МПБ не образует; нитраты во станавливает до нитритов и далее до газообразных продуктов. Оптимальна температура дл роста 25-27°С, опти мальное значение рН 7,0-8,0.Штамм растет на средах с углеводородами (гексадекан) и спиртами (метанол, этанол, пропанол, н-бутанол, изобут нол и глицерин). Из органических кислот рост бактерий обеспечивают малат , сукцинат, пируват, цитрат, л тат, бензоат, бутират, фумарат, гли колат; из углеводов-глюкоза, сахаро за, фруктоза, мальтоза, рамноза, галактоза, ксилоза. Из одноуглеродных соединений Ps.oleovorans № 52 нар ду с метанолом использует метил амин, но не растет на средах с форм альдегидом, формиатом, диметиламином и триметиламинс. При росте на средах с метанолом,метиламином и др гими субстратами образует большое количество полисахаридной слизи. Ис пользование одноуглеродных соединений PS.oleovorans 52 осуществл е.тс поср)едством гексулоэофосфатного цикла (вариант Энтнера-Дудорона) . Пример 1.Pseudomonas oleovorans №52 выращивают в ферментере с рабочим объемом 70 л на среде следующего состава,-(г на 1 л среды) 2,0; NaCl 0,5; (NHj),,SO4 2,0; MgS04 0,025; FeSO. 0,01; метанол 5,0, рН среды довод т до 7,2 10%-ным раствором NaOH. Температура выращивани -30с, скорость перемешивани - 600 об/мин аэраци - 0,5 объема воздуха Ё минуту на 1 объем среды. После 24 ч куль тивировани клетки собирают на сепа-раторе АСГ-ЗМ. Все дальнейшие операции провод т при + 4°С. В качеству буферного раствора используют 20 мМ трис-НС1, рН 7,1 содержащий 2,5 мй MgCIjj и 10 М дитиоэритритола (буфер А). Клетки (100 г) разрушают на уль тразвуковом дезинтеграторе MSE (20 кГц 3x1 мин), белки экстрагируют буфером А и освобождают от клеточных обломков и неразрушенных клеток центрифугированием (20000д, 40 мин). К экстракту добавл ют сульфат стрептомицина до концентрации 1%, центрифугируют (lOOOOg, 20 мин) и осадок отбрасывают. К супернатанту добавл ют сульфат аммони до 50%-ного насыщени . Осадок отбрасывают.- Ферменты осаждают, довод концентрацию сульфата аммони до 60%-ного насыщени . Осадок раствор ют в минимальном объеме буфера А, Нерас творившийс осадок удал ют центрифугированием (20000д, 15 мин). Раствор нанос т на колонку с Сефадексом G-15О (250 мл) и элюиpyioT ферменты буфером А, Фракции элюата, содержащие обе дегидрогеназы, нанос т на колонку с ДЭАЭ-агарозой, Фракции элюата, содержащие 6-фосфоглюконат дегидрогенаэу, диализуют против 0,05 М ацетного буфера, рН 5, 6, содержащего дитиоэритритола и Нанос т на колонку (40 мл) с фосфоцеллюлозой . Фермент элюируют градиентом , концентрации NaCl в том же буфере (0-0,4 М). Далее препарат концентрируют переосаждением сульфатом аммони или на колонке с ДЭАЭ-агарозой. К полученным щзепаратам дл стабилизации ферментов прибавл ют глицв-) до концентрации 50%. Выход глюкозо-6-фосфат дегидрогенаэы 40%, удельна активность 170 ед/мг. Выход 6-фосфоглюконат дегидрогеназы 20%, удельна активность 17 ед/мг белка, iT р и М е р 2.Способ осуществл ют согласно примеру 1,но в качестве источника углерода используют 5 г/л метиламина . Выход ферментов и их удельна активность соответствуют полученным . в примере 1, Описанный способ позвол ет получить в одксал процессе глюкоэо-6-фосфат дегидрогеназу и 6-фосфоглюконат
дегидрогенаэу с хорошим выходе и 13ЫСОКОЙ удельной активностью, а также использовать в качестве субстратов дешевое непищевое сырье взамен глюкозы.
Claims (2)
1. Способ получени дегидрогеназ, предусматривающий культивирование бактерий рода Pseudomonas на питательной среде, содержащей источники углерода, азота.фосфора и минеральные соли, дезинтеграцию с последующей- обработкой бесклеточного экстракта сульфатом стрептомицина, сульфатом аммони и очистку ферментного препарата, отличающийс тем, что, с целью повыиени выхода . целевого продукта и удешевлени его, в качестве,продуцента используют
штамм Pseudomonas oleovorans 52, выращенный на питательной среде,содержащей в качестве ис-ГОчника углерода метанол или метиламин, а очистку ферментных препаратов провод т фракционированием на сефадекср G-150 и хроматографированием на ДЭАЕ-агарозе с получением фракций, содержащих глюкозо-б-фосфат дегидрогеназу и 6-фосфоглюконат дегидрогеназу ,
2. Способ поп,1, отличающийс тем, что после хроматографии на ДЭАЕ-агарозё фракцию, содержащую б-фосфоглюкЬнат дегидрогеназу , дополнительно очищают на колон5 ке с фосфоцеллюлозой,
Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе
il, Vander Wyk J.C., Lessie T.G. The Journal of Bacteriology 120.
0 1033, 1974.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU782621686A SU763463A1 (ru) | 1978-05-26 | 1978-05-26 | Способ получени дегидрогеназ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU782621686A SU763463A1 (ru) | 1978-05-26 | 1978-05-26 | Способ получени дегидрогеназ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU763463A1 true SU763463A1 (ru) | 1980-09-15 |
Family
ID=20767202
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU782621686A SU763463A1 (ru) | 1978-05-26 | 1978-05-26 | Способ получени дегидрогеназ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU763463A1 (ru) |
-
1978
- 1978-05-26 SU SU782621686A patent/SU763463A1/ru active
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4443542A (en) | Process for the production of butanol and novel microorganism composition used therein | |
| Quesada-Chanto et al. | Effect of oxygen supply on biomass, organic acids and vitamin B12 production by Propionibacterium shermanii | |
| JPS63254986A (ja) | アルコ−ルの製造法 | |
| US3553081A (en) | Process of microbiological oxidation | |
| SU763463A1 (ru) | Способ получени дегидрогеназ | |
| US4210720A (en) | Process for fermentatively producing vitamin B12 | |
| JPH01277495A (ja) | Ｌ―チロシン及びｌ―フエニルアラニンの２，５―ジヒドロキシフエニル酢酸への生物学的変換法 | |
| US3980520A (en) | Process for the production of l-malic acid by microbiological fermentation and means suitable for carrying out the same | |
| US4010072A (en) | Process for preparing L-tartaric acid | |
| JPH01187090A (ja) | ε−ポリリシンの製造方法およびε−ポリリシン生産菌 | |
| US3905866A (en) | Process for production of L-lysine by fermentation | |
| US5610045A (en) | Producing a high content of acetate kinase using bacillus stearothermophilus | |
| US4317884A (en) | Method for the production of yeast on ethanol and means therefor | |
| US2886490A (en) | Process of producing cobalamines by fermenting culture media with nocardia rugosa | |
| GB1451020A (en) | Process for producing bacterial cells | |
| US3720584A (en) | Process for the production of monohydroxy carboxylic acids | |
| JP3030916B2 (ja) | βーグルコオリゴ糖の製造方法 | |
| US3703439A (en) | Process for the preparation of l-beta-(3,4-dihydroxyphenyl)-alpha-alanine by fermentation | |
| KR950009200B1 (ko) | D-알라닌의 제조방법 | |
| JPS5829078B2 (ja) | 補酵素ｑ↓１↓０の製造法 | |
| JPH0378106B2 (ru) | ||
| SU1056909A3 (ru) | Способ получени глицерин-дегидрогеназы | |
| US4123329A (en) | Process for producing L-lysine by fermentation | |
| SU763464A1 (ru) | Способ получени над-зависимой алкогольдегидрогеназы | |
| US3551294A (en) | Erythromycin process |