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KR20050118672A - 고혈압 진단을 위한 인간의 혈청- 및글루코코르티코이드-의존성 키나제 1 유전자의 신규다형체의 용도, 및 장기 ｑ／ｔ 증후군의 진단 및 치료를위한 혈청- 및 글루코코르티코이드-의존성 키나제 유전자패밀리의 용도 - Google Patents

고혈압 진단을 위한 인간의 혈청- 및글루코코르티코이드-의존성 키나제 1 유전자의 신규다형체의 용도, 및 장기 ｑ／ｔ 증후군의 진단 및 치료를위한 혈청- 및 글루코코르티코이드-의존성 키나제 유전자패밀리의 용도 Download PDF

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KR20050118672A
KR20050118672A KR1020057014578A KR20057014578A KR20050118672A KR 20050118672 A KR20050118672 A KR 20050118672A KR 1020057014578 A KR1020057014578 A KR 1020057014578A KR 20057014578 A KR20057014578 A KR 20057014578A KR 20050118672 A KR20050118672 A KR 20050118672A
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gene
hsgk1
syndrome
sgk
long
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KR1020057014578A
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플로리안 랑
안드레아스 부스얀
Original Assignee
플로리안 랑
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Publication date
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Abstract

본 발명은 hsgk의 분절을 포함하는 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산의 고혈압 진단 용도에 관한 것으로, 이때 상기 분절은 길이가 10개 이상의 뉴클레오티드/염기 쌍이고, 또한 hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에서의 뉴클레오티드 G 삽입의 존재 또는 부재로 인해 발생되는 다형체를 포함한다.
본 발명은 또한 장기 Q/T 증후군을 진단하기 위한, sgk 패밀리의 인간 동족체의 과발현 또는 기능적 분자 개질과 Q/T 간격의 길이 사이의 직접적인 상관관계의 용도, 및 장기 Q/T 증후군을 진단하기 위한, sgk 유전자 패밀리의 인간 동족체의 핵산 또는 그의 분절중 하나의 용도에 관한 것이다. 구체적으로, sgk 유전자 패밀리의 인간 동족체에서의 개별적인 뉴클레오티드의 다형체(단일 뉴클레오티드 다형체; single nucleotide polymorphism = SNP)는 또한 이 경우 장기 Q/T 증후군에 대한 유전적으로 결정되는 소인을 진단하는데 이용될 수 있다.
추가적인 관점에서, 본 발명은 장기 Q/T 증후군의 치료 및/또는 예방용 약제를 제조하기 위한, sgk 패밀리 유전자의 발현을 증가시키는 기능 활성화제 또는 전사 인자의 용도에 관한 것이다.

Description

고혈압 진단을 위한 인간의 혈청- 및 글루코코르티코이드-의존성 키나제 1 유전자의 신규 다형체의 용도, 및 장기 Ｑ／Ｔ 증후군의 진단 및 치료를 위한 혈청- 및 글루코코르티코이드-의존성 키나제 유전자 패밀리의 용도{USE OF A NOVEL POLYMORPHISM IN THE HSGK1 GENE FOR THE DIAGNOSIS OF HYPERTENSION AND USE OF THE SGK GENE FAMILY FOR THE DIAGNOSIS AND THERAPY OF THE LONG Q/T SYNDROME}
본 발명은 고혈압을 진단하기 위한 hsgk 분절 함유 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산의 용도에 관한 것으로, 상기 분절은 길이가 10개 이상의 뉴클레오티드/염기 쌍이며, 상기 분절은 또한 hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에서의 뉴클레오티드 G 삽입의 존재 또는 부재로 인해 발생되는 다형체를 포함한다.
본 발명은 또한 장기 Q/T 증후군을 진단하기 위한, sgk 패밀리의 인간 동족체의 과발현 또는 기능적 분자 개질과 Q/T 간격의 길이 사이의 직접적인 상관관계의 용도, 및 장기 Q/T 증후군을 진단하기 위한, sgk 유전자 패밀리의 인간 동족체의 핵산 또는 그의 분절중 하나의 용도에 관한 것이다. 구체적으로, sgk 유전자 패밀리의 인간 동족체에서의 개별적인 핵산의 다형체(단일 뉴클레오티드 다형체; single nucleotide polymorphism = SNP)는 또한 이 경우 장기 Q/T 증후군에 대한 유전적으로 결정되는 소인을 진단하는데 이용될 수 있다.
추가적인 관점에서, 본 발명은 장기 Q/T 증후군의 치료 및/또는 예방용 약제를 제조하기 위한, sgk 패밀리 유전자의 발현을 증가시키는 기능 활성화제 또는 전사 인자의 용도에 관한 것이다.
다수의 세포외 신호는 이들 신호를 원형질 막(plasma membrane) 및 그의 수용체로부터 세포질 및 세포 핵 내로 신속하게 전달하기 위한 세포내 포스포릴화/탈포스포릴화 캐스케이드를 이끌어낸다. 포스페이트기를 개별적인 기질상으로 전달하는 다수의 개별적인 단백질, 특히 키나제에 의해 이들 가역적인 신호 전달 캐스케이드의 특이성이 가능해진다.
혈청 및 글루코코르티코이드에 의해 발현이 증가되는 세린/트레오닌 키나제인 혈청- 및 글루코코르티코이드-의존성 키나제(sgk)는 래트 유방암종 세포로부터 처음으로 클로닝되었다[웹스터(Webster) 등, 1993]. 인간의 sgk, 즉 hsgk1은 간세포로부터 클로닝되었다[왈데거(Waldegger) 등, 1997]. 세포 부피를 조절함으로써 hsgk1의 발현이 영향을 받는 것으로 밝혀졌다. 래트 sgk의 발현에 관한 한 세포 부피에 대한 이러한 의존성은 아직 입증되지 못하였다. 또한, 래트 키나제가 내피 Na+ 채널(ENaC)을 자극하는 것으로 밝혀졌다[첸(Chen) 등, 1999; 나레이-페예스-토쓰(Naray-Peyes-Toth) 등, 1999]. ENaC는 다시 신장의 Na+ 배출에서 결정적인 역할을 한다. WO 02/074987 A2호에서 설명하는 바와 같이, ENaC의 활성이 증가되면 나트륨 이온의 신장 체류가 연장되고, 이러한 방식으로 고혈압이 발병하게 된다.
마지막으로, 인간 sgk 인간 패밀리의 2가지 추가적인 일원, 즉 hsgk2 및 hsgk3이 클로닝되었으며[고바야시(Kobayashi) 등, 1999], 이들 두 유전자는 모두 hsgk1과 마찬가지로 PI3 키나제 경로를 거쳐 인슐린 및 IGF1에 의해 활성화된다. 전기생리학적 실험에 의해, hsgk2와 hsgk3을 동시 발현시키면 마찬가지로 ENaC의 활성이 상당히 증가되는 것으로 밝혀졌다.
DE 197 08 173 A1호로부터, hsgk1은 세포 부피의 변화가 결정적인 병태생리학적 역할을 하는 다수의 질환, 예컨대 고나트륨혈증, 저나트륨혈증, 진성 당뇨병, 신부전, 과다 이화작용, 간 뇌병증 및 세균 또는 바이러스 감염증과 관련하여 실질적인 진단능을 가짐이 명백하다.
WO 00/62781호는, hsgk1 내피 Na+ 채널을 활성화시킴으로써 신장의 Na+ 흡수를 증가시킨다고 보고하였다. 이러한 신장의 Na+ 재흡수 증가에는 고혈압이 수반되기 때문에, 이 경우 hsgk1의 발현 증가에 의해 고혈압이 발병되는 반면, hsgk1의 발현 감소에 의해 궁극적으로 저혈압이 발병되는 것으로 추정되었다.
DE 100 421 37호도 인간 동족체 hsgk2 및 hsgk3의 과발현 또는 과다 활성과, ENaC의 과다 활성화, 그로부터 야기되는 신장의 Na+ 재흡수의 증가 및 이로부터 발병되는 고혈압 사이의 유사한 관계를 보고하였다. 뿐만 아니라, 이 문헌에서는 이미 본태 고혈압과 관련된 키나제 hsgk2 및 hsgk3의 진단능을 논의하였다.
WO 02/074987 A2호에는 hsgk1 유전자의 개별적인 뉴클레오티드의 두가지 상이한 다형체[단일 뉴클레오티드 다형체(SNP)]의 발생과 고혈압의 유전적으로 결정된 소인 사이의 관계가 개시되어 있다. 이 경우에서, 다형체는 hsgk1 유전자의 인트론 6(T→C)에서의 다형체 및 엑손 8(C→T)에서의 다형체이다. 특히, WO 02/074987 A2호의 표 5로부터, 분석된 두 SNP 사이에 강한 불균형 상관관계[즉, 엑손 8에서의 SNP의 CC 캐리어는 대부분(즉, 64%)이 인트론 6 TT 캐리어이기도 한 반면, 엑손 8 TT 캐리어는 소수(2%)만이 동시에 인트론 6 CC 캐리어임]가 있음이 명백하다. 인트론 6 및 엑손 8에서의 다형체의 발생 사이에서 관찰된 이들 상관관계는, 고혈압 소인을 입증하기 위하여 두 다형체(인트론 6 및 엑손 8)의 유전자형을 분석(이 경우, 고도의 기술이 투입되어야 하고 시간이 많이 걸림)해야 하는 필요성을 입증한다.
따라서, 본 발명의 목적은 한 형태 또는 다른 형태로서의 발생이 엑손 8 및 인트론 6에서의 공지되어 있는 두 가지 다형체보다 환자에서 고혈압의 표현형 발생과 더욱 우수한 상관관계를 가질 수 있는 hsgk1 유전자에서의 다른 다형체를 제공하는 것이다. 구체적으로, 고혈압 소인과 상관관계를 갖고 한 형태 또는 다른 형태로서의 존재로 인해 hsgk1 단백질의 기능적 분자 개질을 초래하는 단일 SNP를 제공하는 것이 매우 유리하다.
이 목적은, 위치 732/733에 뉴클레오티드 G의 삽입을 포함하는 hsgk1 유전자의 신규 다형체를 제공함으로써 달성되었다. 이러한 위치 732/733에서의 뉴클레오티드 G의 삽입을 갖는(InsG/InsG) 개체가 더욱 흔히 발생되고, 더욱 낮은 고혈압 발병 소인을 갖는 것으로 밝혀졌다. 반면, 위치 732/733에서의 이러한 삽입을 갖지 않는(WT/WT) 개체는 더욱 희귀하게 발생되며, 고혈압 발병 소인이 현저하게 더 높다. 지금까지 수득된 결과에 따라, 인트론 2의 위치 732/733에서의 다형체와 관련된 유전자형과 고혈압 발병 소인 사이의 이 상관관계는 엑손 8 및 인트론 6에서의 다형체와 관련된 상응하는 상관관계보다 훨씬 더 높은 중요성을 갖는 것으로 보인다(표 1 참조).
뿐만 아니라, 공지의 예측 프로그램을 사용하여 얻어진 예측에 기초하여, hsgk1 유전자의 특이적인 스플라이스 변이체의 발현은 hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에서의 G 삽입의 존재 또는 부재에 의존하는 것으로 추정된다. hsgk1 유전자의 이러한 특이적인 스플라이스 변이형의 발현에 의해 hsgk1 단백질의 기능적 분자 개질이 이루어지고, 이에 따라 hsgk1 활성이 개질될 수 있다(특히, hsgk1 활성이 증가됨). hsgk1 단백질의 이러한 분자 개질, 특히 hsgk1의 활성 증가의 생리학적 결과에 따라 궁극적으로 고혈압 증상이 발생될 수 있다.
제1 관점에서, 본 발명은 서열 번호 1 또는 서열 번호 2에 기재된 핵산 서열의 분절을 포함하는 단리된 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산의 고혈압 진단 용도에 관한 것으로, 상기 분절은 길이가 10개 이상, 바람직하게는 15개 이상, 특히 20개 이상의 뉴클레오티드/염기 쌍이고, 상기 분절은 위치 732/733에 뉴클레오티드 G 삽입을 갖거나 갖지 않는 hsgk1 유전자의 인트론 2에서의 다형체를 포함한다.
서열 번호 1은 hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에 뉴클레오티드 G(또는 GTP)의 삽입이 없는 hsgk1의 게놈 DNA 서열, 즉 소위 "야생형(WT)" 서열을 기재하며, 서열 번호 2는 hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에 뉴클레오티드 G(또는 GTP)의 삽입이 있는 hsgk1의 게놈 DNA 서열, 즉 소위 "삽입 G(InsG)" 서열을 기재한다.
제2 관점에서, 본 발명은 서열 번호 1 또는 2에 기재된 서열 분절을 포함하는 하나 이상의 단리된 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산을 포함하는 고혈압 진단용 키트에 관한 것이다. 이와 관련하여, 서열 번호 1 또는 2로부터의 상기 분절은 길이가 10개 이상, 바람직하게는 15개 이상, 특히 20개 이상의 뉴클레오티드/염기 쌍이다. 또한, 서열 번호 1 또는 2로부터의 상기 분절은 위치 732/733에 뉴클레오티드 G의 삽입을 갖거나 갖지 않는 hsgk1 유전자의 인트론 2에서의 다형체를 포함해야 한다.
다르게는, 고혈압 진단용 키트는 전술한 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산에 덧붙여 또는 상기 핵산 대신, hsgk 단백질의 상기 영역에 관련되고 hsgk1 단백질에서의 그의 존재가 상응하는 코딩 hsgk 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에서의 뉴클레오티드 G 삽입의 존재에 의존하는 하나 이상의 항체를 또한 포함한다. 예를 들어 hsgk1 유전자의 위치 732/733에서의 G 삽입의 존재가 엑손의 스플라이싱(splice out)을 유도하였다면, 정확하게 이 스플라이싱된 단백질 영역에 대해 유도된 항체를 개체의 다형체 검출에 사용할 수 있다. 따라서, 이러한 항체를 사용하여 고혈압 발병 소인을 진단할 수 있다.
제3 관점에서, 본 발명은
(a) 개체로부터 신체 샘플을 취하는 단계;
(b) 필요에 따라, 상기 단계 (a)에 따른 신체 샘플로부터 게놈 DNA, cDNA 또는 mRNA를 단리 및/또는 증폭시키는 단계; 및
(c) hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에 뉴클레오티드 G의 삽입을 갖는 대립유전자를 정량하는 단계
를 포함하는, 고혈압 진단 방법에 관한 것이다.
상기 단계 (a)에서는, 바람직하게는 포유동물, 특히 인간인 테스트 개체로부터 신체 샘플을 취한다. 본 발명에 따른 이 진단 방법에서, 바람직하게 이용되는 환자로부터의 신체 샘플은 세포물질을 포함하고 비교적 적은 노력으로 환자로부터 수득될 수 있는 혈액 샘플 또는 타액 샘플이다. 그러나, 마찬가지로 세포를 포함하는 다른 신체 샘플, 예컨대 조직 또는 세포 샘플 등도 이용할 수 있다.
상기 단계 (b)에서는, 표준 방법[샘브룩(Sambrook, J.) 및 러셀(Russell D. W.) (2001) 뉴욕주 콜드 스프링 하버, CSHL Press]을 이용하여, 필요에 따라 상기 단계 (a)로부터의 신체 샘플로부터 게놈 DNA 또는 cDNA 또는 mRNA를 준비 및/또는 증폭시킨다. 이와 관련하여, 당해 분야의 숙련자가 숙지하고 있는 임의의 적합한 방법을 이용할 수 있다. 또한, 특히 자체에 PCR 증폭 단계가 포함되는 검출 방법이 상기 단계 (c)에 이용되는 경우에는, 적절한 경우 DNA 단리 단계 또는 DNA 증폭 단계를 생략할 수 있다.
상기 단계 (c)에서는, hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에 뉴클레오티드 G 삽입을 갖는 대립유전자의 수를 최종 정량한다. 이와 관련하여, 2개의 WT 대립유전자를 갖는 개체는 고혈압 발병 소인을 가짐이 분명하다. 당업자에게 공지되어 있는 다양한 방법을 이용함으로써, hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에서의 다형체에 관련된 대립유전자의 정량/확인을 수행할 수 있다. 몇몇 바람직한 방법이 아래에 더욱 상세하게 설명된다. 그러나, hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에 뉴클레오티드 G 삽입을 갖는 대립유전자 수의 정량은 아래 기재되는 하기 바람직한 방법으로만 한정되지는 않는다. hsgk1 유전자의 인트론 2의 상기 위치 732/733에서의 신체 샘플로부터의 DNA, 바람직하게는 게놈 DNA의 서열을 직접 결정함으로써, 위치 732/733에서의 다형체와 관련하여 유전자형(또는 대립유전자의 수)을 바람직하게 확인할 수 있다. 이렇게 하기 위하여, 공지의 서열 결정 방법을 이용하여, hsgk1 유전자의 위치 732/733의 바로 인접한 부위로부터의 서열을 갖는 짧은 올리고뉴클레오티드를 서열 결정 프라이머로서 입수할 필요가 있다.
특이적인 하이브리드화 프로브와 신체 샘플로부터의 게놈 DNA를 하이브리드화시킴에 기초하는 임의의 공지된 방법이, 위치 732/733에서의 다형체와 관련된 유전형을 확인하는데(또는 상기 다형체와 관련된 대립유전자의 수를 정량하는데) 마찬가지로 바람직한 다른 방법을 구성한다.
써던 블롯팅(Southern blotting)은 하이브리드화 방법의 일례이다. 예컨대, hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에서의 G 삽입의 존재가 파괴되거나, 또는 제한 엔도뉴클레아제에 대한 절단 부위를 형성하는 경우에는, WT 대립유전자에서의 상응하는 분절 길이와는 상이한 길이를 갖는 핵산 분절을 검출하기 위해 특이적인 하이브리드화 프로브를 사용할 수 있다. 이러한 방식으로, 위치 732/733에서의 문제의 다형체와 관련하여 특이적인 유전자형을 검출할 수 있다.
위치 732/733에서의 G 삽입의 존재 또는 부재의 결과로서, 특정 엑손이 결여된 다른 스플라이싱 변이체가 발현된다면, 스플라이싱 변이체에 없는 엑손으로부터의 특이적인 하이브리드화 프로브를 사용하여, 상기 위치 732/733에서의 다형체와 관련된 유전자형을 검출할 수 있다.
하이브리드화 방법의 다른 예는, 길이가 바람직하게는 15 내지 25개의 뉴클레오티드이고 위치 732/733에 G 삽입을 갖거나 갖지 않는 표지된 단일 가닥 올리고뉴클레오티드를 사용하여 신체 샘플로부터의 게놈 DNA를 하이브리드화하는 것이다. 공지된 방법을 이용하여 각각의 개별적인 올리고뉴클레오티드에 대해 실험적으로 테스트할 수 있는 매우 특이적인 하이브리드화 조건하에서는, 완전히 하이브리드화된 올리고뉴클레오티드를 단일 염기 부정합을 보유하는 올리고뉴클레오티드와 구분할 수 있다.
위치 732/733에서의 다형체와 관련된 유전자형을 확인하기 위한(또는 상기 다형체와 관련된 대립유전자의 수를 정량하기 위한) 다른 바람직한 방법은 특히 PCR 올리고뉴클레오티드 연장 분석법(elongation assay) 또는 연결 분석법(ligation assay)이다.
PCR 올리고뉴클레오티드 연장 분석법의 경우에는, 예컨대 서열 번호 2의 분절의 서열 및 그의 3' 말단에 다형체 위치 732/733에서의 G를 갖는 올리고뉴클레오티드를 제공할 수 있다. 이 올리고뉴클레오티드를 WT 대립유전자(G 삽입 없음)의 샘플 분절로 하이브리드화시키는 경우에는, 3' 말단에서의 부정합으로 인해 후속 PCR 반응에서 이 분절을 연장 및 궁극적으로는 증폭시킬 수 없다. 반면, 이 올리고뉴클레오티드를 InsG 대립유전자와 하이브리드화시키는 경우에는, 올리고뉴클레오티드의 3' 말단에서의 완벽한 염기 쌍 형성에 의해 연장이 이루어지고 궁극적으로는 PCR 증폭 생성물을 수득할 수 있다.
연결 분석법은 궁극적으로는 PCR 올리고뉴클레오티드 연장 분석법과 동일한 원리, 즉 말단에 정확한 염기 쌍을 갖는 이중 가닥 핵산 분절만이 다른 이중 가닥 핵산 분절에 연결될 수 있다는 원리에 기초한다. 따라서, 특이적인 연결 생성물의 출현은 hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에서의 G 삽입의 존재 또는 부재에 의존할 수 있다.
본 발명에 따른 다형체와 고혈압 소인과의 상관관계에 덧붙여, 놀랍게도 소위 Q/T 간격의 길이와 본 발명에 따른 다형체의 두번째 상관관계가 발견되었다. hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733과 관련하여 WT/WT 유전자형을 갖는 개체에서는, InsG/InsG 유전자형을 갖는 개체에서보다, 현저하게 더 짧은 Q/T 간격이 관찰된다. 이형접합성(WT/InsG) 개체는 중간 Q/T 간격을 갖는다(표 3 참조). 상당히 연장된 Q/T 간격에 의해, 소위 장기 Q/T 증후군이 발병되는데, 이 증후군의 증상은 심장 박동 교란부터 심실 세동을 거쳐 급성 심장사까지 이를 수 있다. 따라서, InsG/InsG 유전자형을 갖는 개체는 장기 Q/T 증후군 발병 소인을 가짐이 분명하다.
Q/T 간격의 길이와 hsgk1 유전자의 유전자 구성 사이, 특히 Q/T 간격의 길이와 hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에서의 다형체 사이의 입증된 직접적인 상관관계 때문에, sgk 패밀리의 다른 인간 동족체의 핵산이 장기 QT 증후군을 진단하는데 마찬가지로 적합할 것으로 추정된다.
ECG 측정 기기를 사용하여 검출될 수 있는 Q, R 및 S파는 탈분극을 평가하기 위한 실험값을 구성한다. Q/T 간격은 T파의 전파 개시(Q 편향의 출현)로부터 T파의 종결을 특징으로 하는 탈분극 종결까지 ECG 측정 기기를 사용하여 검출되는 시간으로서 정의된다. 따라서, Q/T 간격은 심장의 새로운 흥분 상태의 개시와 휴지 상태로의 복귀 사이의 경과 시간을 구성한다. 따라서, 현저하게 연장된 Q/T 간격은 심장 박동 교란을 야기하고, 궁극적으로는 이미 언급된 장기 Q/T 증후군을 야기하게 된다.
따라서, 본 발명은 또한 장기 QT 증후군을 진단하기 위한, sgk 패밀리의 인간 동족체, 특히 hsgk1 유전자의 과발현 또는 기능적 분자 개질과 Q/T 간격의 길이 사이의 직접적인 상관관계의 용도에 관한 것이다.
이와 관련하여, 상기 의미에서 기능적 분자 개질을 포괄하는 sgk 패밀리의 인간 동족체는 상응하는 단백질의 특성, 특히 촉매 특성 또는 기질 특이성이 변화되도록 하는 방식으로 돌연변이된 sgk 패밀리의 동족체로 이해된다.
Q/T 간격과 sgk 패밀리의 인간 동족체의 유전자 구성 사이의 직접적인 상관관계는, 유전자 hsgk1, hsgk2 또는 hsgk3에서의 개별 돌연변이가 개별적인 환자에게 발생될 수 있음을 암시하며, 이 때 이들 돌연변이는 키나제 hsgk1, hsgk2 또는 hsgk3의 발현 수준 또는 기능적 특성을 개질시키고, 이러한 방식으로 유전자에 의해 발생되는 Q/T 간격의 연장 및 궁극적으로는 장기 Q/T 증후군 발병 소인을 야기하도록 한다. 이들 돌연변이는 예컨대 sgk 유전자 좌의 조절 유전자 영역 또는 인트론 서열에서 발생될 수 있다. 한편, sgk 좌의 유전자 구성에서의 개별적인 차이는 또한 유전자의 코딩 영역에 영향을 줄 수 있다. 코딩 영역에서의 돌연변이는 적절한 경우 예컨대 키나제의 촉매 특성이 개질되는 것과 같이 상응하는 키나제의 기능 변화를 야기하고, 이들 개질된 특성은 또한 궁극적으로 Q/T 간격에 영향을 끼친다. 따라서, 전술한 두 유형의 돌연변이는 모두 Q/T 간격의 연장을 야기함으로써, 궁극적으로 장기 Q/T 증후군 발병 소인을 야기할 수 있다.
환자에서 장기 Q/T 증후군의 발병 소인을 야기하는 sgk 패밀리의 인간 동족체의 상기 돌연변이는 통상적으로 이들 동족체의 엑손 영역 또는 인트론 영역에서의 소위 단일 뉴클레오티드 다형체(SNP)이다. hsgk 유전자의 엑손 영역에서의 SNP에 후속된다는 점에서 돌연변이형으로 칭해지는 덜 빈번하게 발생되는 형태는 적절한 경우 상응하는 hsgk 단백질에서 아미노산 치환을 야기하고, 결과적으로 키나제의 기능이 개질되도록 할 수 있다. 돌연변이형에서, hsgk 유전자의 인트론 영역 또는 조절 서열에서의 SNP는 적절한 경우 상응하는 키나제의 발현 수준을 변화시킬 수 있다. 그러나, 인트론 영역에서의 SNP도 미성숙 mRNA의 다른 스플라이싱에 영향을 끼친다면 키나제의 기능적 개질을 야기할 수 있다.
본 발명은 또한 장기 Q/T 증후군의 발병 소인을 진단하기 위한, sgk 패밀리의 인간 동족체의 서열 또는 그의 분절중 하나, 특히 hsgk1 유전자 자체 또는 그의 분절중 하나를 포함하는 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산의 용도에 관한 것이다. 이와 관련하여, 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산은 바람직하게는 10개 이상의 뉴클레오티드/염기 쌍의 길이를 갖는다.
전술한 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산에 덧붙여, sgk 패밀리의 인간 동족체의 기질, 특히 hsgk1의 기질에 대해 유도된 특정 항체도 장기 Q/T 증후군 및 고혈압의 발병 소인을 진단하는데 적합하다. 이들 진단 항체는 바람직하게는 sgk 패밀리의 인간 동족체, 특히 hsgk1의 에피토프(이는 포스포릴화된 형태 또는 포스포릴화되지 않은 형태로 기질의 포스포릴화 부위를 함유함)에 관련된다.
바람직한 실시태양에서는, sgk 패밀리의 인간 동족체의 기질로서 유비퀴틴 단백질 리가제 Nedd4-2(기탁 번호 BAA23711)를 이용한다. 이 유비퀴틴 단백질 리가제는 sgk 패밀리의 인간 동족체에 의해 특이적으로 포스포릴화되는 단백질이다[데본느빌(Debonneville) 등, Phosphorylation of Nedd4-2 by Sgk 1 regulates epithelial Na(+) channel cell surface expression. EMBO J., 2001, 20: 7052-7059; 스나이더(Snyder) 등, Serum and glucocorticoid-regulated kinase modulates Nedd4-2 mediated inhibition of the epithelial Na(+) channel. J. Biol. Chem. 2002, 277: 5-8]. hsgk1에 대한 포스포릴화 부위는 공통 서열(R X R X X S/T)(여기에서, R은 아르기닌이고, S는 세린이고, T는 트레오닌이며, X는 임의적인 아미노산임)을 갖는다. Nedd4-2(기탁 번호 BAA23711)에는, 전술한 공통 서열이 꼭 맞는 hsgk1에 대한 두 가지 가능한 포스포릴화 부위(아미노산 위치 382의 세린 및 아미노산 위치 468의 세린)가 있다.
따라서, 장기 Q/T 증후군의 발병 소인을 진단하기 위한 상기 항체는 바람직하게는 기질 Nedd4-2, 특히 바람직하게는 hsgk1에 대해 가능한 포스포릴화 부위의 서열, 즉 공통 서열(R X R X X S/T)을 갖는 Nedd4-2 단백질의 영역에 대해 유도된다. 구체적으로, 이들 항체는 2개의 가능한 포스포릴화 부위, 즉 아미노산 위치 382의 세린 및/또는 아미노산 위치 468의 세린을 포괄하는 Nedd4-2 단백질 영역에 관련된다.
본 발명은 또한 Q/T 간격의 연장을 증상으로서 나타내는 장기 QT 증후군 또는 다른 질환을 진단하기 위한 키트에 관한 것이다. 이러한 장기 QT 증후군 진단용 키트는 바람직하게는 sgk 단백질 패밀리의 인간 동족체 또는 특히 엄격한 조건하에서 sgk 유전자 패밀리의 인간 동족체와 하이브리드화할 수 있는 핵산에 대해 유도된 항체를 포함한다. 키트는 또한 sgk 단백질 패밀리의 인간 동족체에 대해 유도된 항체 및 엄격한 조건하에서 sgk 유전자 패밀리의 인간 동족체로 하이브리드화하는 핵산에 대해 유도된 항체를 함께 포함할 수 있다. 특히 바람직하게는, 장기 Q/T 증후군을 진단하기 위한 본 발명에 따른 키트는 또한 hsgk1 단백질 또는 엄격한 조건하에서 hsgk1 유전자로 하이브리드화할 수 있는 핵산에 대해 유도된 항체를 포함할 수 있다.
이와 관련하여, 엄격한 조건하에서의 하이브리드화는 관련 전문 서적[샘브룩 및 러셀 (2001) 뉴욕주 콜드 스프링 하버, CSHL Press]에 기재된, 하이브리드화 온도 및 하이브리드화 용액 중 포름아미드 함량과 관련된 하이브리드화 조건 하에서의 하이브리드화를 의미하는 것으로 이해된다.
특히, 진단 키트는 뉴클레오티드 G 삽입을 갖거나 갖지 않는 hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에서의 다형체를 포함하고 길이가 10개 이상의 뉴클레오티드/염기 쌍인, 서열 번호 1 또는 2에 기재된 서열을 갖는 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산을 하이브리드화 프로브로서 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 진단 키트는 특히 hsgk1 단백질에서의 존재가 hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에서의 G 삽입의 존재에 의존하는 hsgk1 단백질의 영역에 특이적으로 유도된 항체를 제공한다. 특히, 미성숙 mRNA내 상기 G 삽입의 존재 또는 부재로 인해 달리 스플라이싱되어 성숙 mRNA 및 이로부터 발생되는 단백질에 존재하지 않는 영역은 진단 항체가 유도될 수 있는 면역원성 에피토프로서 사용하기에 적합하다. 상응하게는, 위치 732/733에서의 G 삽입에 따라 스플라이싱되는 이러한 유전자 영역으로 하이브리드화할 수 있는 hsgk1 유전자의 핵산 영역도 진단 하이브리드화 프로브로서 사용하기 적합하다.
장기 Q/T 증후군 진단용 키트는 또한 바람직하게는 hsgk1 유전자에 공지 SNP를 포함하는 핵산 분절, 특히 엑손 8(C2617T, D240D)에 SNP를 포함하는 핵산 분절, 인트론 6(T2071C)에 SNP를 포함하는 핵산 분절 및/또는 위치 732/733(G 삽입)에서 인트론 2에 SNP를 포함하는 핵산 분절을 특이적인 하이브리드화 프로브로서 포함할 수 있다.
본 발명에서 입증된, hsgk1 유전자 패밀리의 유전자의 유전자 구성과 Q/T 간격의 길이 사이의 상관관계로 인해, 장기 Q/T 증후군 및 마찬가지로 연장된 Q/T 간격이 수반되는 유사한 질환을 치료하기 위한 sgk 패밀리의 기능 활성화제 또는 양성 전사 조절제를 사용할 수 있게 된다. 이와 관련하여, "기능 활성화제(functional activator)"는 sgk 패밀리의 상응하는 키나제의 생리학적 기능을 활성화시키는 성분으로서 이해된다. "양성 전사 조절제"는 sgk 패밀리의 상응하는 키나제의 발현을 활성화시키는 성분으로서 이해된다.
결과적으로, 본 발명은 또한 Q/T 간격을 감소시키고, 특히 장기 QT 증후군을 치료 및/또는 예방하기 위한, sgk 패밀리의 인간 동족체, 특히 hsgk1의 기능 활성화제 또는 양성 전사 조절제의 용도에 관한 것이다. sgk 패밀리의 인간 동족체, 특히 hsgk1의 공지의 기능 활성화제 및/또는 양성 전사 조절제는 글루코코르티코이드, 미네랄로코르티코이드, 알도스테론, 고나도트로핀 및 다수의 시토킨, 특히 TGF-β이다.
그러므로, 본 발명은 또한 장기 QT 증후군 치료 및/또는 예방용 약제를 제조하기 위한, 글루코코르티코이드, 미네랄로코르티코이드, 알도스테론, 고나도트로핀 및 시토킨을 포함하는 성분의 군으로부터 선택되는 기질의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 성분의 군으로부터 선택되는 성분을 포함하는 장기 Q/T 증후군 치료 및/또는 예방용 약제에 관한 것이다.
하기 실시예에 의해 본 발명을 상세하게 설명한다.
실시예 1
본 발명의 내용 내에서, 상이한 환자(쌍둥이)의 hsgk1 유전자의 유전자형을 이들 환자에서 측정된 수축기 혈압 값 및 확장기 혈압 값과 비교한 상관관계 연구를 수행하였다.
이란성 쌍둥이 75쌍을 상관관계 분석에 이용하였다[부스얀(Busjahn) 등, J. Hypertens 1996, 14: 1195-1199; 부스얀 등, Hypertension 1997, 29: 165-170]. 실험 대상은 모두 독일-카프카스 인종에 속하였고, 독일의 상이한 지역에서 출생하였다. 이란성(dizygotism)을 입증하고 추가적인 분자 유전자 분석을 위하여, 쌍둥이 및 그의 부모들로부터 혈액을 채취하였다. 실험 대상은 각각 사전 의학적 검사를 받았다. 실험 대상중 그 어느 누구도 의학적으로 인정된 만성 질환에 걸리지 않은 것으로 확인되었다. 5분 후, 숙련된 의사가 표준화된 수은 혈압계를 사용하여 앉은 자세의 테스트 대상의 혈압을 측정하였다(1분 간격을 두고 2회 측정하였음). 두 측정치의 평균을 혈압 값으로서 사용하였다.
상관관계 연구에 이란성 쌍둥이를 이용하는 이점은 이들의 연령이 동일하고, 이들의 표현형에 대한 외부의 영향이 최소인 것으로 판단되는 것이다[마틴(Martin) 등, Nat Genet 1997, 17: 387-392]. 복잡한 유전 질환을 설명하는데 있어서 쌍둥이에 대한 연구의 중요성이 마틴 등에 의해 최근에 기재되었다(1997).
폴리머라제 연쇄 반응(PCR)을 이용하여 5개의 마이크로새틀라이트(microsatellite) 마커를 증폭시킴으로써, 쌍둥이의 이란성을 확인하였다. 이러한 마이크로새틀라이트 마커의 분석에서는, 상이한 개별 인간에서 매우 가변적인 영역을 함유하는 특이적인 올리고뉴클레오티드를 사용하는 PCR에 의해 데옥시리보핵산(DNA) 분절을 증폭시킨다. 증폭된 분절의 크기 면에서의 작은 차이에 의해 게놈의 이들 영역에서의 고도의 가변성을 검출할 수 있어, 상응하는 유전자 위치에 다양성이 있는 경우에, PCR 생성물을 겔-전기 영동 분별시킨 후 이중 밴드, 즉 소위 마이크로새틀라이트 밴드를 생성시킨다[벡커(Becker) 등, J. Reproductive Med 1997, 42: 260-266].
표적 유전자, 이 경우 hsgk1 유전자의 분자 유전자 분석을 수행하기 위하여, hsgk1 위치에 인접한 3개의 추가적인 마이크로새틀라이트 마커 영역(d6s472, d6s1038, d6s270)을 PCR에 의해 증폭시킨 다음, 다른 쌍둥이 및 그의 부모로부터의 상응하는 샘플과 비교하였다. 이러한 방식으로, 쌍둥이가 연구중인 대립유전자와 관련하여 동일하거나 상이한, 부로로부터 유전된 대립유전자를 갖는지의 여부를 결정할 수 있었다. 구조 방정식 모델화(SEM) 모델을 사용하여 상관관계 분석을 수행하였다[이브즈(Eaves) 등, Behav Genet 1996, 26: 519-525; 닐(Neale), 1997: Mx: Statistical modeling, 벨몬트주 23298 리치몬드 박스 126 엠씨브이: 정신의학 분야, 제4판]. 이 모델은 이들이 동일한 대립유전자를 갖지 않을 확률, 동일한 대립유전자를 1개 또는 2개 가질 확률이 특징인 테스트 쌍의 분산-공분산 행렬에 기초한다. 표현형에 관련된 분산은 모든 유전자의 유전적 배경에 기초한 분산(A), 표적 유전자(이 경우에는, hsgk1 유전자)의 유전적 배경에 기초한 분산(Q) 및 외부 영향으로 인한 분산(E)으로 나뉘어졌다.
[수학식 1]
VAR = A2 + Q2 + E2
테스트 쌍의 공분산은 3가지 가능한 대립유전자 조합 IBD0, IBD1 및 IBD2(여기에서, IBD=유전에 의한 일란성; 0, 1 또는 2개의 동일한 대립유전자)에 대해 다음과 같이 정의되었다:
[수학식 2]
COV (IBD0) = 0.5A2
[수학식 3]
COV (IBD1) = 0.5A2 + 0.5Q2
[수학식 3]
COV (IBD2) = 0.5A2 + Q2
hsgk1 위치의 유전자 구성과 테스트 대상의 혈압 사이의 상관관계를 평가하기 위하여, 표적 유전자 hsgk1과 관련된 유전자 분산을 고려한 모델 및 개별적으로 고려하지 않은 모델 사이의 차이를 χ2 통계치로서 계산하였다. 각 쌍 및 각 유전자 위치에 대하여, 부모 유전자형에 기초한 소위 다항목 모델[MAPMAKER/SIBS; 크루글리악(Kruglyak) 등, Am J Hum Genet 1995, 57: 439-454]에 의해 대립유전자 비를 계산하였다.
상기 χ2 통계치(S.A.G.E. 유전자 역학의 통계적 분석, Release 2.2. Computer program package, Department of Epidemiology and Biostatistics, Case Western Reserve University, 미국 오하이오주 클리블런드, 1996)과 비교할 때 분산-공분산 평가에 기초한 분석 방법의 더욱 큰 정보 가치는 최근 시뮬레이션 연구에서 확인되었다[펄커(Fulker) 등, Behav Gen 1996, 26: 527-532]. 랜더(Lander) 및 크루글리악의 기준과 관련하여 유의한 상관관계를 보장하기 위하여 p < 0.01의 오차 확률을 허용하였다(랜더 등, Nat Genet 1995, 11: 241-246).
표 1은 이 상관관계 연구의 결과를 보여준다.
표현형 최대 χ2 p
수축기 혈압 값(누움) 4.44 0.04
확장기 혈압 값(누움) 14.36 0.0002
수축기 혈압 값(앉음) 5.55 0.019
확장기 혈압 값(앉음) 4.92 0.027
수축기 혈압 값(섬) 1.91 0.17
확장기 혈압 감(섬) 4.83 0.028
표 1에서 볼 수 있는 바와 같이, p < 0.01의 허용된 오차 확률을 초과하지 않거나 약간만 초과하는 확인된 오차 확률 p의 낮은 값은, hsgk1 유전자 위치와 관련된 유전자 분산과 측정된 혈압의 표현형에 의해 확인된 분산 사이에 직접적인 상관관계가 있음을 입증한다.
실시예 2
hsgk1 유전자의 게놈 체계는 이미 기재되어 있다[왈데거 등, Genomics, 51, 299(1998)](http://www.ensembl.org/Homo_sapiens/geneview?gene=ENSG00000118515.
고혈압 발병 소인과 관련되어 발생되는 SNP를 확인하기 위하여, 먼저 데이터베이스에 공개된 hsgk1 유전자의 SNP를 조사하여, 이들이 단순한 서열 결정 실수가 아닌 진정한 SNP인지의 여부 및 SNP가 고혈압 소인의 진단 검출의 기초를 형성하기에 충분히 다형성인지의 여부를 결정하였다. T로 C를 대체하는데 관련된 엑손 8의 SNP rs 1057293(http://www.ensembl.org/Homo_sapiens/snpview?snp=1057293; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/snp_ref.cgi?type=rs&rs=1057293) 및 엑손 7로의 인트론 6의 공여 스플라이스 부위에서 첫번째 SNP로부터 정확하게 551bp의 거리만큼 떨어져서 hsgk1 유전자에 존재하고 C로 T를 대체하는데 관련된 두번째 SNP를 이러한 방식으로 이미 위치시켰다.
실시예 3
쌍둥이 75쌍의 무작위적인 표본으로부터 혈액 샘플을 채취하였다. PCR에 의해 혈액 샘플로부터 hsgk1 유전자의 게놈 DNA를 증폭시킨 후, 적합한 서열 결정 프라이머를 사용하여 hsgk1 유전자의 엑손 및 인트론(프로모터 영역은 아님)의 서열을 직접 완벽하게 결정하였다. 상이한 테스트 대상으로부터 유래된 hsgk1 유전자의 서열을 비교하였을 때, 위치 732/733에서의 추가적인 뉴클레오티드 G의 삽입으로 이루어진 인트론 2에서의 추가적인 다형체가 발견되었다. 뿐만 아니라, 개별 테스트 대상의 hsgk1 유전자의 위치 732/733에서의 상기 G 삽입의 존재 또는 부재는 개별 테스트 대상에서 측정된 혈압과 상당한 상관관계를 나타내었으며; 평균적으로, InsG/InsG 유전자형은 덜 흔한 WT/WT 유전자형 및 이형 WT/InsG 유전자형보다 훨씬 더 낮은 수축기 혈압 값 및 확장기 혈압 값을 나타내었다(표 3 참조). 대조적으로, hsgk1 유전자의 다른 다형체는 표 2에서 볼 수 있는 바와 같이 덜 중요한 측정된 혈압과의 상관관계를 나타내거나[예컨대, 인트론 6(C2071T) 및 엑손 8(T2617C, D240D)], 또는 측정된 혈압과의 상관관계를 나타내지 않았다[예를 들어, 인트론 3 위치 Ins 13+xT, T1300-1312 및 인트론 4(C1451T) 및 인트론 7 위치 2544delA].
테스트 대상에서 마찬가지로 측정된 ECG 값은 또한 개별 테스트 대상에 대해 결정된 Q/T 간격과 hsgk1 유전자의 위치 732/733에서의 인트론 2의 다형체에 관련된 테스트 대상의 유전자형의 두드러진 상관관계가 있음을 보여주었으며; 이와 관련하여, 덜 흔한 WT/WT 유전자형을 갖는 테스트 대상은 이형 WT/InsG 테스트 대상보다 현격하게 더 짧은 Q/T 간격을 나타낸 한편, 이형 WT/InsG 테스트 대상은 다시 더욱 흔한 InsG/InsG 유전자형을 갖는 테스트 대상보다 훨씬 더 짧은 Q/T 간격을 나타내었다(표 3 참조). 보다 긴 Q/T 간격은 수축성 심장 박동 교란(예컨대 특히 장기 Q/T 증후군)의 위험을 증가시킨다. 그 결과, hsgk1 유전자의 위치 732/733에서의 인트론 2의 다형체의 유전자형과 한편으로는 장기 Q/T 증후군의 소인 사이에서, 또한 다른 한편으로는 고혈압 소인 사이에서, 역 상관관계가 발견된다. 이들 상관관계는 각각의 경우 고혈압 및 장기 Q/T 증후군의 치료 및 예방에 이용될 수 있다.
SNP/DNA 번호 인트론 2위치 insG732^733 인트론 3위치ins13+xTT1300^1312 인트론 4C1451T 인트론 6C2071T 인트론 7위치delA2544delA 엑손 8T2617C,D240D
1899 wt/wt ins13+xT C/C C/T wt/wt T/C
2022 wt/wt ins13+xT C/C C/C wt/wt C/C
2094 insG/wt ins13+xT C/C C/C wt/wt T/T
1902 insG/wt ins13+xT C/C T/T wt/wt C/C
2041 wt/wt ins13+xT C/C C/C wt/wt C/C
2108 insG/wt ins13+xT C/C C/T wt/wt T/C
1921 insG/wt ins13+xT C/C C/T delA/wt C/C
2048 insG/wt ins13+xT C/C T/T wt/wt C/C
2115 wt/wt ins13+xT C/C C/T wt/wt T/C
1934 insG/wt ins13+xT C/C C/T wt/wt T/C
2049 insG/wt ins13+xT C/C C/T wt/wt C/C
2133 insG/insG ins13+xT C/C T/T wt/wt C/C
1944 wt/wt ins13+xT C/C C/T wt/wt C/C
2072 insG/insG ins13+xT C/C T/T wt/wt C/C
2159 insG/wt ins13+xT C/C T/T wt/wt C/C
1983 wt/wt ins13+xT C/C C/C wt/wt T/C
2076 insG/wt ins13+xT C/C C/T wt/wt T/C
2166 wt/wt ins13+xT C/C C/C wt/wt T/C
2011 wt/wt ins13+xT C/C C/C wt/wt T/C
2084 insG/wt ins13+xT C/C C/T wt/wt C/C
2278 wt/wt ins13+xT C/C C/C wt/wt T/T
2020 insG/insG ins13+xT C/C T/T wt/wt C/C
2085 wt/wt ins13+xT C/C C/T wt/wt T/C
2338 insG/insG ins13+xT C/T T/T wt/wt C/C
측정된 양/유전자형 wt/wt wt/ins ins/ins 유의성
(평균±표준편차) n=7 n=14 n=7
수축기 혈압 123±17 116±10 117±15 <0.05
확장기 혈압 73±14 70±9 72±9 n.s.
Q/T 간격 403±13 411±17 428±10 <0.05

Claims (20)

  1. 서열 번호 1 또는 서열 번호 2에 기재된 핵산 서열의 분절을 함유하는 단리된 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산의 고혈압 진단 용도로서, 상기 분절의 길이가 10개 이상의 뉴클레오티드/염기 쌍이고, 또한 상기 분절이 위치 732/733에 뉴클레오티드 G 삽입을 갖거나 갖지 않는 hsgk1 유전자의 인트론 2의 다형체를 포함하는 것을 특징으로 하는 용도.
  2. 제1항에 따른 하나 이상의 단리된 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산을 포함하는, 고혈압 정량 진단용 키트.
  3. hsgk 단백질의 영역에 대해 유도된 하나 이상의 항체를 포함하는 고혈압 정량 진단용 키트로서, hsgk1 단백질내 상기 영역의 존재가 코딩 hsgk 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에서의 뉴클레오티드 G 삽입의 존재에 의존하는 것을 특징으로 하는 키트.
  4. (a) 신체 샘플을 취하는 단계;
    (b) 필요에 따라, 상기 단계 (a)에 따른 신체 샘플로부터 게놈 DNA, cDNA 또는 mRNA를 단리 및/또는 증폭시키는 단계; 및
    (c) hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에 뉴클레오티드 G의 삽입을 갖는 대립유전자를 정량하는 단계
    를 포함하는, 고혈압 진단 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 단계 (a)로부터의 신체 샘플이 혈액, 타액, 조직 및 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 대립유전자는 신체 샘플로부터 단리된 게놈 DNA 또는 cDNA의 서열을 직접 결정함으로써 상기 단계 (c)에 따라 정량하는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대립유전자는 신체 샘플로부터 단리된 게놈 DNA 또는 cDNA를 특이적으로 하이브리드화시킴으로써 상기 단계 (c)에 따라 정량하는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제4항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대립유전자는 PCR 올리고 연장 분석법 또는 연결 분석법에 의해 상기 단계 (c)에 따라 정량하는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 장기 QT 증후군을 진단하기 위한, sgk 패밀리의 인간 동족체의 과발현 또는 기능적 분자 개질과 Q/T 간격의 길이 사이의 직접적인 상관관계의 용도.
  10. 장기 QT 증후군을 진단하기 위한, sgk 패밀리의 인간 동족체의 서열, 또는 10개 이상의 뉴클레오티드/염기 쌍의 길이를 갖는 그의 분절을 포함하는 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산의 용도.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, sgk 패밀리의 인간 동족체가 hsgk1 유전자인 것을 특징으로 하는 용도.
  12. 제11항에 있어서, hsgk1 유전자의 핵산 또는 그의 분절중 하나가 10개 이상의 뉴클레오티드/염기 쌍의 길이를 갖고, 상기 핵산이 뉴클레오티드 G의 삽입을 갖거나 갖지 않는 hsgk1 유전자의 인트론 2의 위치 732/733에서의 다형체를 포함하는 것을 특징으로 하는 용도.
  13. sgk 패밀리의 인간 동족체의 기질에 대해 유도된 항체의 장기 Q/T 증후군 발병 소인 진단용 용도로서, 상기 항체가 포스포릴화된 형태 또는 포스포릴화되지 않은 형태로 포스포릴화 부위를 함유하는 인간 동족체의 에피토프에 대해 유도된 것인 용도.
  14. 제13항에 있어서, sgk 패밀리의 인간 동족체의 기질이 기탁 번호 BAA23711의 Nedd4-2인 것을 특징으로 하는 용도.
  15. sgk 단백질 패밀리의 인간 동족체에 대해 유도된 항체 또는 엄격한 조건하에서 sgk 유전자 패밀리의 인간 동족체와 하이브리드할 수 있는 핵산을 포함하거나, 또는 이들 항체와 핵산을 함께 포함하는, 장기 QT 증후군 진단용 키트.
  16. 제15항에 있어서, sgk 패밀리의 인간 동족체가 hsgk1 유전자인 것을 특징으로 하는 키트.
  17. Q/T 간격을 감소시키기 위한, sgk 패밀리의 인간 동족체, 특히 hsgk1의 기능 활성화제 또는 양성 전사 조절제의 용도.
  18. 제17항에 있어서, 상기 기능 활성화제 또는 양성 전사 조절제가 글루코코르티코이드, 미네랄로코르티코이드, 알도스테론, 고나도트로핀 및 시토킨, 특히 TGF-β로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
  19. 장기 QT 증후군의 치료 및/또는 예방용 약제를 제조하기 위한, 글루코코르티코이드, 미네랄로코르티코이드, 알도스테론, 고나도트로핀 및 시토킨, 특히 TGF-β로 이루어진 군으로부터 선택되는 성분의 용도.
  20. 글루코코르티코이드, 미네랄로코르티코이드, 알도스테론, 고나도트로핀 및 시토킨, 특히 TGF-β로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 포함하는, 장기 QT 증후군의 치료 및/또는 예방용 약제.
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