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KR102542715B1 - 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트 약제, 이의 제조방법 및 이의 용도 - Google Patents

폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트 약제, 이의 제조방법 및 이의 용도 Download PDF

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KR102542715B1
KR102542715B1 KR1020227021889A KR20227021889A KR102542715B1 KR 102542715 B1 KR102542715 B1 KR 102542715B1 KR 1020227021889 A KR1020227021889 A KR 1020227021889A KR 20227021889 A KR20227021889 A KR 20227021889A KR 102542715 B1 KR102542715 B1 KR 102542715B1
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위안창 왕
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Abstract

본 발명은 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트 약제, 이의 제조방법 및 이의 용도에 관한 것으로, 특히 화학식(I)로 표시되는 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트 약제 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 폴리에틸렌 글리콜 컨쥬게이트 약제 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 이의 중간체, 상기 폴리에틸렌 글리콜 컨쥬게이트 약제 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물, 및 약제의 제조에서 이의 용도에 관한 것이다.
[화학식 I]
Figure 112022066845063-pct01657

Description

폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트 약제, 이의 제조방법 및 이의 용도
본 발명은 의약 분야에 속하는 것으로서, 폴리에틸렌 글리콜 컨쥬게이트된 약물(polyethylene glycol conjugated drug), 이의 제조 방법 및 이의 용도에 관한 것이다.
페길화 약물(Pegylated drug)은 약물 분자의 수용성을 증가시킬 수 있는 원래 약물에 비해 큰 이점이 있고(이는 파클리탁셀(paclitaxel), 캄프토테신(camptothecin) 또는 백금과 같이 용해도가 극히 낮은 약물에 매우 중요함); 약물 응집(drug agglomeration), 면역원성(immunogenicity) 및 항원성(antigenicity)을 예방하거나 감소시킬 수 있다. 대부분의 저분자 항암제는 혈액 순환에 몇 분 동안만 머무를 수 있는 반면에, 고분자(항암제) 컨쥬게이트는 수십, 수백 시간 또는 그 이상 동안 머무를 수 있어, "투과성 및 유지력 강화" 효과, 즉 종양 모세혈관의 누출로 인한 EPR 효과에 유리하다. 고분자-(항암제) 컨쥬게이트의 증가된 유체역학적 부피로 인해, 약물의 신장 제거가 약화되고, 약물이 효소 분해로부터 보호되며, 혈장 내 약물의 반감기가 연장되고, 약물의 생체이용률이 증가한다. 또한, EPR 수동 표적화(passive targeting) 또는 능동 표적화(active targeting)를 통해 질병이 있는 장기, 조직 또는 세포에 항암제를 고농축시킬 수 있어, 소분자 항암제가 전신에 퍼짐으로써 야기되는 독성 부작용을 크게 감소시킬 수 있다. 또한, 고분자-(항암제) 컨쥬게이트는 약물의 세포 흡수를 세포내이입 경로(endocytic pathway)로 제한할 수 있으며, 이는 리소좀으로의 약물 전달에 도움이 되어, p-당단백질 펌핑으로 인한 약물 내성을 피할 수 있고; 고분자-(항암제) 컨쥬게이트는 또한 면역 기능을 자극하거나 회복시킬 수 있으며, 이는 암세포를 죽이는데 도움이 된다.
미국의 NEKTA사와 ENZON사는 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물의 개발에 성공했다. 현재, FDA가 시장에 진입하도록 승인한 15개의 폴리에틸렌 글리콜 복합 약물이 있으며, 36개의 새로운 임상 약물이 1상, 2상, 3상 임상 시험 또는 NDA 단계에 있다. 그러나, 상기 페길화 약물은 모두 페길화된 단일 약물(pegylated single drug)이다.
중국 특허 ZL201510996205.4는 화학요법 약물인 젬시타빈(gemcitabine)과 Chk1 억제제인 AZD7762를 4-팔(arm) 폴리에틸렌 글리콜 담체에 동시에 이식함을 개시하고 있다. Chk1 억제제 자체는 항암 효과가 없으나, 젬시타빈과 병용 시 화학요법제의 효과를 높일 수 있다. 중국 특허 ZL201710761441.7 및 ZL201710761572.5는 두 가지 항암제가 폴리에틸렌 글리콜의 한 이식 부위에 동시에 이식되어, 서로 다른 암세포 생물학적 신호 채널 및 표적의 억제 및 서로 다른 치료 방법 간의 자유로운 조합을 실현한다고 개시하고 있다.
본 발명은 관련 기술의 기술적 문제 중 하나를 적어도 어느 정도 해결하는 것에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 우수한 종양 억제 활성을 갖는 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물을 제공한다. 본 발명의 제조방법을 통해, 본 발명의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물을 효율적이고 편리하게 제조할 수 있다.
폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물
본 발명의 제1 측면에서, 본 발명은 화학식(I)의 폴리에틸렌 글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
본 발명의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물에서, 복수개의 동일하거나 상이한 약물 분자는 연결 사슬(linking chain)로서 아미노산 또는 폴리펩티드와, 연결 브릿지(linking bridge)로서 아미노기(예를 들면, 2개의 카르복실기를 갖는 천연 아미노산)를 사용함으로써 함게 컨쥬게이트된다. 약물의 유형, 비율 및 약물 로딩을 조정할 수 있다. 화학식(I)에서, PEG는 단일-팔(arm) 폴리에틸렌 글리콜 세그먼트이고, 이의 수 평균 분자량은 2k 내지 40k, 예를 들어 5k 내지 10k 또는 10k 내지 40k, 예를 들어 약 2k, 약 5k, 약 10k, 약 20k, 약 30k 또는 약 40k일 수 있다. 특정 양태에서, PEG는 말단 아미노기를 통해 주쇄 상의 카르복실기와 반응하여 아미드 결합을 형성한다. 또는, PEG는 말단 카르복실기를 통해 주쇄의 아미노기와 반응하여 아미드 결합을 형성한다. 특정 양태에서, PEG의 분자량은 이의 말단 아미노기(즉, 반응성 기를 보유하는 PEG 유도체)를 포함하고, 일부 양태에서, PEG의 분자량은 폴리에틸렌 글리콜 및 전체로서의 X 또는 X'의 분자량이고, 2k 내지 40k, 예를 들면 2k 내지 3k, 3k 내지 5k, 5k 내지 10k, 또는 10k 내지 40k, 예를 들면 약 2k, 약 3k, 약 5k, 약 10k, 약 40k일 수 있다.
[화학식 I]
Figure 112022066845063-pct00001
상기 화학식(I)에서,
M은 -C(=O)-C1-6 알킬렌-C(=O)-, -C(=O)-, -NH-C1-6 알킬렌-NH-, -C(=O)-C1-6 알킬렌-NH-,
Figure 112022066845063-pct00002
,
Figure 112022070603992-pct00003
또는 PEGm이고; 여기서, PEGm은 단일-팔(arm) 또는 다중-팔(예를 들어, 4-팔, 8-팔, 바람직하게는 4-팔) 폴리에틸렌글리콜 세그먼트이고, 이의 수평균 분자량은 5k-40k, 바람직하게는 5k-10k 또는 10k-40k, 더 바람직하게는 5k 또는 10k이고;
A1, A1'은 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00004
Figure 112022066845063-pct00005
또는
Figure 112022066845063-pct00006
이고;
A2는 독립적으로 직접 결합이거나
Figure 112022066845063-pct00007
이고;
L1은 독립적으로 직접 결합 또는 -C(=O)-C1-6알킬렌-C(=O)-이고;
W1, W1', W2는 각각 독립적으로 Q1,
Figure 112022066845063-pct00008
,
Figure 112022066845063-pct00009
Figure 112022066845063-pct00010
또는
Figure 112022066845063-pct00011
이고;
Z4, Z3, Z2, Z1, Z0은 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00012
Figure 112022066845063-pct00013
Figure 112022066845063-pct00014
또는
Figure 112022066845063-pct00015
이고;
Q는 -N-AC이고;
Q1은 -N1-AC1이고;
Q2는 -N2-AC2이고;
N, N1, N2는 각각 독립적으로 GFLG, G,
Figure 112022066845063-pct00016
또는
Figure 112022066845063-pct00017
(바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00018
)이고;
AC, AC1, AC2는 각각 독립적으로 약물 분자(예를 들면, 항종양 활성을 갖는 약물 분자), 바람직하게는 PCB, DOX, LPT, SB7, PKA, SN38, PTX 또는 NPB이고;
n1, n2는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
Y, Y'는 각각 독립적으로 직접 결합, GLFG, -C(=O)-C1-6알킬렌-C(=O)-,
Figure 112022066845063-pct00019
또는
Figure 112022066845063-pct00020
이고;
X, X'는 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00021
, 또는
Figure 112022066845063-pct00022
이고;
PEG는 단일-팔 폴리에틸렌글리콜 세그먼트이며, 이의 수 평균 분자량은 독립적으로 5k-40k이고;
j1은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
j2, j3은 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
일부 양태에서, PEGm은 카르보닐을 통해 화학식(I)의 화합물의 잔류 구조에 연결되는 것임을 유의해야 한다.
또는, 본 발명의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물에서, 복수개의 동일하거나 상이한 약물 분자는 연결 사슬로서 아미노산 또는 폴리펩티드와, 연결 브릿지로서 아미노기(예를 들면, 2개의 카르복실기를 갖는 천연 아미노산)를 사용함으로써 함게 컨쥬게이트된다. 약물의 유형, 비율 및 약물 로딩을 조정할 수 있다. 화학식(I)에서, PEG는 단일-팔(arm) 폴리에틸렌 글리콜 세그먼트이고, 이의 수 평균 분자량은 2k 내지 40k, 예를 들어 5k 내지 10k 또는 10k 내지 40k, 예를 들어 약 2k, 약 5k, 약 10k, 약 20k, 약 30k 또는 약 40k일 수 있다. 특정 양태에서, PEG는 말단 아미노기를 통해 주쇄 상의 카르복실기와 반응하여 아미드 결합을 형성한다. 또는, PEG는 말단 카르복실기를 통해 주쇄의 아미노기와 반응하여 아미드 결합을 형성한다. 특정 양태에서, PEG의 분자량은 이의 말단 아미노기(즉, 반응성 기를 보유하는 PEG 유도체)를 포함하고, 일부 양태에서, PEG의 분자량은 폴리에틸렌 글리콜 및 전체로서의 X 또는 X'의 분자량이고, 2k 내지 40k, 예를 들면 2k 내지 3k, 3k 내지 5k, 5k 내지 10k, 또는 10k 내지 40k, 예를 들면 약 2k, 약 3k, 약 5k, 약 10k, 약 40k일 수 있다.
[화학식 I]
Figure 112022066845063-pct00023
상기 화학식(I)에서,
M은 -C(=O)-C1-6 알킬렌-C(=O)-, -C(=O)-, -NH-C1-6 알킬렌-NH-, -C(=O)-C1-6 알킬렌-NH-,
Figure 112022066845063-pct00024
,
Figure 112022066845063-pct00025
또는
Figure 112022066845063-pct00026
이고;
A1, A1'은 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00027
또는
Figure 112022066845063-pct00028
이고;
A2는 독립적으로 직접 결합이거나
Figure 112022066845063-pct00029
이고;
L1은 독립적으로 직접 결합 또는 -C(=O)-C1-6알킬렌-C(=O)-이고;
W1, W1', W2는 각각 독립적으로 Q1,
Figure 112022066845063-pct00030
,
Figure 112022066845063-pct00031
Figure 112022066845063-pct00032
또는
Figure 112022066845063-pct00033
이고;
Z4, Z3, Z2, Z1, Z0은 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00034
Figure 112022066845063-pct00035
또는
Figure 112022066845063-pct00036
이고;
Q는 -N-AC이고;
Q1은 -N1-AC1이고;
Q2는 -N2-AC2이고;
N, N1, N2는 각각 독립적으로 GFLG, G,
Figure 112022066845063-pct00037
또는
Figure 112022066845063-pct00038
이고;
AC, AC1, AC2는 각각 독립적으로 약물 분자(예를 들면, 항종양 활성을 갖는 약물 분자), 바람직하게는 PCB, DOX, LPT, SB7, PKA, SN38 또는 PTX이고;
n1, n2는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
Y, Y'는 각각 독립적으로 직접 결합, GLFG, -C(=O)-C1-6알킬렌-C(=O)-,
Figure 112022066845063-pct00039
또는
Figure 112022066845063-pct00040
이고;
X, X'는 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00041
, 또는
Figure 112022066845063-pct00042
이고;
PEG는 단일-팔 폴리에틸렌글리콜 세그먼트이며, 이의 수 평균 분자량은 독립적으로 5k-40k이고;
j1은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
j2, j3은 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
일부 양태에서, 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물은 하기 화학식(II), 화학식(III), 화학식(IV) 또는 화학식(V)으로 표시되는 구조를 갖는다:
Figure 112022066845063-pct00043
일부 양태에서, 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물은 화학식(II)로 나타내는 구조를 갖는다:
상기 화학식(II)에서,
M은 -C(=O)-C1-6 알킬렌-C(=O)-,
Figure 112022066845063-pct00044
, -NH-C1-6알킬렌-NH-,
Figure 112022066845063-pct00045
Figure 112022066845063-pct00046
또는 PEGm, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00047
Figure 112022070603992-pct00048
또는 PEGm이고, PEGm은 단일-팔(arm) 또는 다중-팔(예를 들어, 4-팔, 8-팔, 바람직하게는 4-팔) 폴리에틸렌글리콜 세그먼트이고, 이의 수평균 분자량은 5k-40k, 바람직하게는 5k -10k 또는 10k-40k, 보다 바람직하게는 5k 또는 10k이고,
A1은 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00049
Figure 112022066845063-pct00050
또는
Figure 112022066845063-pct00051
, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00052
Figure 112022066845063-pct00053
또는
Figure 112022066845063-pct00054
이고,
Y는 독립적으로 직접 결합,
Figure 112022066845063-pct00055
, GLFG, -C(=O)-C1-6알킬렌-C(=O)-,
Figure 112022066845063-pct00056
또는
Figure 112022066845063-pct00057
, 바람직하게는 직접 결합,
Figure 112022066845063-pct00058
, GLFG,
Figure 112022066845063-pct00059
,
Figure 112022066845063-pct00060
또는
Figure 112022066845063-pct00061
이고,
X는 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00062
, 또는
Figure 112022066845063-pct00063
이고,
W1은 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00064
Figure 112022066845063-pct00065
또는
Figure 112022066845063-pct00066
이고,
Z4, Z3, Z2, Z1, Z0는 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00067
Figure 112022066845063-pct00068
Figure 112022066845063-pct00069
또는
Figure 112022066845063-pct00070
, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00071
Figure 112022066845063-pct00072
,
Figure 112022066845063-pct00073
또는
Figure 112022066845063-pct00074
이고,
Q는 -N-AC이고,
Q1은 -N1-AC1이고,
Q2는 -N2-AC2이고,
N, N1, N2는 각각 독립적으로 G, GFLG,
Figure 112022066845063-pct00075
또는
Figure 112022066845063-pct00076
(바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00077
)이고,
AC, AC1, AC2는 각각 독립적으로 SN38, PKA, PCB, LPT, SB7, PTX 또는 NPB이며,
PEG의 수 평균 분자량은 독립적으로 5k-40k이다.
또는, 일부 양태에서, 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물은 화학식(II)로 나타내는 구조를 갖는다:
상기 화학식(II)에서,
M은 -C(=O)-C1-6 알킬렌-C(=O)-,
Figure 112022066845063-pct00078
, -NH-C1-6알킬렌-NH-,
Figure 112022066845063-pct00079
Figure 112022066845063-pct00080
또는
Figure 112022066845063-pct00081
, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00082
Figure 112022066845063-pct00083
또는
Figure 112022066845063-pct00084
이고;
A1은 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00085
바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00086
또는
Figure 112022066845063-pct00087
이고,
Y는 독립적으로 직접 결합, GLFG, -C(=O)-C1-6알킬렌-C(=O)-,
Figure 112022066845063-pct00088
또는
Figure 112022066845063-pct00089
, 바람직하게는 직접 결합, GLFG,
Figure 112022066845063-pct00090
,
Figure 112022066845063-pct00091
또는
Figure 112022066845063-pct00092
이고,
X는 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00093
, 또는
Figure 112022066845063-pct00094
이고,
W1은 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00095
Figure 112022066845063-pct00096
또는
Figure 112022066845063-pct00097
이고,
Z4, Z3, Z2, Z1, Z0는 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00098
또는
Figure 112022066845063-pct00099
, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00100
또는
Figure 112022066845063-pct00101
이고,
Q는 -N-AC이고,
Q1은 -N1-AC1이고,
Q2는 -N2-AC2이고,
N, N1, N2는 각각 독립적으로 G, GFLG,
Figure 112022066845063-pct00102
또는
Figure 112022066845063-pct00103
이고,
AC, AC1, AC2는 각각 독립적으로 SN38, PKA, PCB, LPT 또는 SB7이며,
PEG의 수 평균 분자량은 독립적으로 5k-40k이다.
일부 양태에서,
M은 -C(=O)-C1-6 알킬렌-C(=O)-이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00104
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00105
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00106
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00107
이고, Z4, Z2 및 Z1은
Figure 112022066845063-pct00108
이고, Z3 및 Z0은
Figure 112022066845063-pct00109
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00110
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00111
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00112
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00113
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00114
이고, Z4, Z2 및 Z1은
Figure 112022066845063-pct00115
이고, Z3 및 Z0은
Figure 112022066845063-pct00116
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1 및 N2는 GFLG이고, AC1은 PCB이고, AC2는 PKA이다.
일부 양태에서, M은 -NH-C1-6 알킬렌-NH-이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00117
이고, Y는 GLFG이고, X는
Figure 112022066845063-pct00118
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00119
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00120
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00121
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00122
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00123
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00124
이고, Y는 GLFG이고, X는
Figure 112022066845063-pct00125
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00126
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00127
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00128
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00129
이고, Q는 -N-AC이고, N은 G이고, AC는 SN38이다.
일부 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00130
또는
Figure 112022066845063-pct00131
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00132
이고, Y는 직접 결합 또는 -C(=O)-C1-6 알킬렌-C(=O)-이고, X는
Figure 112022066845063-pct00133
또는
Figure 112022066845063-pct00134
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00135
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00136
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00137
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00138
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00139
이고, Y는 직접 결합이고, X는
Figure 112022066845063-pct00140
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00141
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00142
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00143
이고, Q는 -N-AC이고, N은 GFLG이고, AC는 LPT이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00144
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00145
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00146
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00147
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00148
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00149
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00150
이고, Q는 -N-AC이고, N은 GFLG이고, AC는 PCB이다.
일부 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00151
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00152
이고, Y는 직접 결합이고, X는
Figure 112022066845063-pct00153
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00154
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00155
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00156
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00157
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00158
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00159
이고, Y는 직접 결합이고, X는
Figure 112022066845063-pct00160
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00161
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00162
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00163
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00164
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1, N2는 GFLG이고, AC1은 NPB이고, AC2는 PCB이다.
일부 양태에서, M은 PEGm이고, PEGm은 단일-팔(arm) 폴리에틸렌글리콜 세그먼트이고, 이의 수 평균 분자량은 5k-40k, 바람직하게는 5k-10k 또는 10k-40k, 더 바람직하게는 5k이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00165
이고, Y는 직접 결합이고, X는
Figure 112022066845063-pct00166
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00167
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00168
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00169
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00170
이다.
일부 특정 양태에서, M은 PEGm이고, PEGm은 단일-팔(arm) 폴리에틸렌글리콜 세그먼트이고, 이의 수 평균 분자량은 5k-40k, 바람직하게는 5k-10k 또는 10k-40k, 더 바람직하게는 5k이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00171
이고, Y는 직접 결합이고, X는
Figure 112022066845063-pct00172
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00173
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00174
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00175
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00176
이고, Q는 -N-AC이고, N은 G이고, AC는 SN38이다.
일부 양태에서, M은 PEGm이고, PEGm은 단일-팔(arm) 폴리에틸렌글리콜 세그먼트이고, 이의 수 평균 분자량은 5k-40k, 바람직하게는 5k-10k 또는 10k-40k, 더 바람직하게는 10k이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00177
이고, Y는 직접 결합이고, X는
Figure 112022066845063-pct00178
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00179
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00180
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00181
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00182
이다.
일부 특정 양태에서, M은 PEGm이고, PEGm은 단일-팔(arm) 폴리에틸렌글리콜 세그먼트이고, 이의 수 평균 분자량은 5k-40k, 바람직하게는 5k-10k 또는 10k-40k, 더 바람직하게는 10k이고; A1은
Figure 112022066845063-pct00183
이고, Y는 직접 결합이고, X는
Figure 112022066845063-pct00184
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00185
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00186
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00187
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00188
이고, Q는 -N-AC이고, N은 G이고, AC는 SN38이다.
일부 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00189
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00190
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00191
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00192
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00193
이고, Z3은
Figure 112022066845063-pct00194
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00195
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00196
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00197
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00198
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00199
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00200
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00201
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00202
이고, Z3은
Figure 112022066845063-pct00203
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00204
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00205
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00206
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1, N2는 GFLG이고, AC1은 LPT이고, AC2는 PCB이다.
일부 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00207
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00208
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00209
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00210
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00211
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00212
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00213
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00214
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00215
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00216
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00217
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00218
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00219
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00220
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00221
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00222
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1, N2는 GFLG이고, AC1은 LPT이고, AC2는 PCB이다.
일부 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00223
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00224
이고, Y는 직접 결합이고, X는
Figure 112022066845063-pct00225
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00226
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00227
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00228
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00229
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00230
이고, Y는 직접 결합이고, X는
Figure 112022066845063-pct00231
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00232
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00233
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00234
이고, Q는 -N-AC이고, N은
Figure 112022066845063-pct00235
이고, AC는 PTX이다.
일부 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00236
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00237
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00238
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00239
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00240
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00241
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00242
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00243
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00244
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00245
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00246
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00247
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00248
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00249
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00250
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00251
이고, Q는 -N-AC이고, N은 G이고, AC는 SN38이다.
일부 양태에서,
M은
Figure 112022066845063-pct00252
, -C(=O)-C1-6 알킬렌-C(=O)-,
Figure 112022066845063-pct00253
또는
Figure 112022066845063-pct00254
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00255
또는
Figure 112022066845063-pct00256
이고, Y는 직접 결합, GLFG, -C(=O)-C1-6 알킬렌-C(=O)- 또는
Figure 112022066845063-pct00257
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00258
또는
Figure 112022066845063-pct00259
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00260
또는
Figure 112022066845063-pct00261
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00262
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00263
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00264
이다.
또는, 일부 양태에서,
M은
Figure 112022066845063-pct00265
, -C(=O)-C1-6 알킬렌-C(=O)-,
Figure 112022066845063-pct00266
또는
Figure 112022066845063-pct00267
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00268
또는
Figure 112022066845063-pct00269
이고, Y는 직접 결합, GLFG, -C(=O)-C1-6 알킬렌-C(=O)- 또는
Figure 112022066845063-pct00270
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00271
,
Figure 112022066845063-pct00272
또는
Figure 112022066845063-pct00273
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00274
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00275
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00276
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00277
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00278
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00279
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00280
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00281
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00282
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00283
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00284
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00285
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1 및 N2는 GFLG이고, AC1은 SB7이고, AC2는 PCB이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00286
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00287
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00288
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00289
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00290
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00291
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00292
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00293
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1 및 N2는 GFLG이고, AC1은 SB7이고, AC2는 PCB이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00294
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00295
이고, Y는 GLFG이고, X는
Figure 112022066845063-pct00296
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00297
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00298
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00299
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00300
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1 및 N2는 GFLG이고, AC1은 SB7이고, AC2는 PCB이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00301
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00302
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00303
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00304
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00305
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00306
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00307
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00308
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1 및 N2는 GFLG이고, AC1은 SB7이고, AC2는 PCB이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00309
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00310
이고, Y는 GLFG이고, X는
Figure 112022066845063-pct00311
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00312
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00313
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00314
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00315
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1 및 N2는 GFLG이고, AC1은 SB7이고, AC2는 PCB이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00316
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00317
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00318
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00319
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00320
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00321
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00322
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00323
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1 및 N2는 GFLG이고, AC1은 SB7이고, AC2는 LPT이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00324
또는
Figure 112022066845063-pct00325
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00326
이고, Y는 직접 결합이고, X는
Figure 112022066845063-pct00327
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00328
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00329
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00330
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00331
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1 및 N2는 GFLG이고, AC1, AC2 각각은 독립적으로 PCB, SB7 또는 LPT이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00332
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00333
이고, Y는
Figure 112022066845063-pct00334
이고, X는
Figure 112022066845063-pct00335
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00336
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00337
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00338
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00339
이고, Q는 -N-AC이고, N은 GFLG이고, AC는 PCB이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00340
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00341
이고, Y는 직접 결합이고, X는
Figure 112022066845063-pct00342
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00343
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00344
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00345
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00346
이고, Q는 -N-AC이고, N은 GFLG이고, AC는 NPB이다.
일부 양태에서, 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물은 화학식(III)으로 나타내는 구조를 갖는다:
상기 화학식(III)에서,
M은
Figure 112022066845063-pct00347
, -C(=O)-C1-6 알킬렌-NH- 또는 -C(=O)-C1-6알킬렌-C(=O)-, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00348
또는
Figure 112022066845063-pct00349
이고,
A1, A1'은 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00350
또는
Figure 112022066845063-pct00351
, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00352
또는
Figure 112022066845063-pct00353
이고,
Y, Y'는 각각 독립적으로 직접 결합이거나
Figure 112022066845063-pct00354
이고,
X 및 X'는
Figure 112022066845063-pct00355
이고,
W1, W1'은 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00356
, Q1,
Figure 112022066845063-pct00357
,
Figure 112022066845063-pct00358
,
Figure 112022066845063-pct00359
또는
Figure 112022066845063-pct00360
이고,
Z4, Z3, Z2, Z1, Z0은 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00361
,
Figure 112022066845063-pct00362
또는
Figure 112022066845063-pct00363
, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00364
또는
Figure 112022066845063-pct00365
이고,
Q는 -N-AC이고,
Q1은 -N1-AC1이고,
Q2는 -N2-AC2이고,
N, N1, N2는 각각 독립적으로 GFLG, G,
Figure 112022066845063-pct00366
또는
Figure 112022066845063-pct00367
이고,
AC, AC1, AC2는 각각 독립적으로 SN38, PKA, PCB, PTX, LPT, SB7 또는 DOX이며,
PEG의 수 평균 분자량은 독립적으로 5k-40k이다.
또는, 일부 양태에서, 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물은 화학식(III)으로 나타내는 구조를 갖는다:
상기 화학식(III)에서,
M은
Figure 112022066845063-pct00368
, -C(=O)-C1-6 알킬렌-NH- 또는 -C(=O)-C1-6알킬렌-C(=O)-, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00369
또는
Figure 112022066845063-pct00370
이고,
A1, A1'은 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00371
또는
Figure 112022066845063-pct00372
, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00373
또는
Figure 112022066845063-pct00374
이고,
Y, Y'는 각각 독립적으로 직접 결합이거나
Figure 112022066845063-pct00375
이고,
X 및 X'는
Figure 112022066845063-pct00376
이고,
W1, W1'은 각각 독립적으로 Q1,
Figure 112022066845063-pct00377
,
Figure 112022066845063-pct00378
, 또는
Figure 112022066845063-pct00379
이고,
Z4, Z3, Z2, Z1, Z0은 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00380
,
Figure 112022066845063-pct00381
또는
Figure 112022066845063-pct00382
, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00383
또는
Figure 112022066845063-pct00384
이고,
Q1은 -N1-AC1이고,
Q2는 -N2-AC2이고,
N1, N2는 각각 독립적으로 GFLG, G,
Figure 112022066845063-pct00385
또는
Figure 112022066845063-pct00386
이고,
AC1, AC2는 각각 독립적으로 SN38, PKA, PCB, PTX, LPT, SB7 또는 DOX이며,
PEG의 수 평균 분자량은 독립적으로 5k-40k이다.
일부 양태에서,
M은
Figure 112022066845063-pct00387
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00388
이고, A1'은
Figure 112022066845063-pct00389
이고, Y는 직접 결합이고, Y'는
Figure 112022066845063-pct00390
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00391
이고, W1'은
Figure 112022066845063-pct00392
이고, Z4, Z2 및 Z0은
Figure 112022066845063-pct00393
이고, Z3 및 Z1은
Figure 112022066845063-pct00394
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00395
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00396
이고, A1'은
Figure 112022066845063-pct00397
이고, Y는 직접 결합이고, Y'는
Figure 112022066845063-pct00398
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00399
이고, W1'은
Figure 112022066845063-pct00400
이고, Z4, Z2 및 Z0은
Figure 112022066845063-pct00401
이고, Z3 및 Z1은
Figure 112022066845063-pct00402
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1은 G이고, N2는 GFLG이고, AC1은 SN38이고, AC2는 PKA이다.
일부 양태에서, M은 -C(=O)-C1-6 알킬렌-NH-이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00403
이고, A1'은
Figure 112022066845063-pct00404
이고, Y는 직접 결합이고, Y'는
Figure 112022066845063-pct00405
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00406
이고, W1'은 Q1이고, Z2 및 Z0은
Figure 112022066845063-pct00407
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00408
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00409
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00410
이고, A1'은
Figure 112022066845063-pct00411
이고, Y는 직접 결합이고, Y'는
Figure 112022066845063-pct00412
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00413
이고, W1'은 Q1이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00414
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00415
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00416
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1은 G 또는
Figure 112022066845063-pct00417
이고, N2는 GFLG이고, AC1은 PTX 또는 DOX이고, AC2는 PCB 또는 LPT이다.
일부 양태에서, M은 -C(=O)-C1-6 알킬렌-C(=O)-이고, A1 및 A1'은
Figure 112022066845063-pct00418
이고, Y 및 Y'는 직접 결합이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00419
이고, W1'은
Figure 112022066845063-pct00420
이고, Z3 및 Z1은
Figure 112022066845063-pct00421
이고, Z2 및 Z0은
Figure 112022066845063-pct00422
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00423
이고, A1 및 A1'은
Figure 112022066845063-pct00424
이고, Y 및 Y'는 직접 결합이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00425
이고, W1'은
Figure 112022066845063-pct00426
이고, Z3 및 Z1은
Figure 112022066845063-pct00427
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00428
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00429
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1 및 N2는 GFLG이고, AC1은 SB7이고, AC2는 PCB이다.
일부 양태에서, M은 -C(=O)-C1-6알킬렌-C(=O)-이고, A1 및 A1'은
Figure 112022066845063-pct00430
이고, Y 및 Y'는 직접 결합이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00431
이고, W1'은 Q1이고, Z1 및 Z0은
Figure 112022066845063-pct00432
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00433
이고, A1 및 A1'은
Figure 112022066845063-pct00434
이고, Y 및 Y'는 직접 결합이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00435
이고, W1'은 Q1이고, Z1 및 Z0은
Figure 112022066845063-pct00436
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1 및 N2는 GFLG이고, AC1은 PCB이고, AC2는 LPT이다.
일부 양태에서, M은 -C(=O)-C1-6 알킬렌-NH-이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00437
이고, A1'은
Figure 112022066845063-pct00438
이고, Y 및 Y'는 직접 결합이고, W1 및 W1'은
Figure 112022066845063-pct00439
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00440
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00441
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00442
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00443
이고, A1은
Figure 112022066845063-pct00444
이고, A1'은
Figure 112022066845063-pct00445
이고, Y 및 Y'는 직접 결합이고, W1 및 W1'은
Figure 112022066845063-pct00446
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00447
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00448
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00449
이고, Q는 -N-AC이고, N은 GFLG이고, AC는 SB7이다.
일부 양태에서, 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물은 화학식(IV)로 나타내는 구조를 갖는다:
상기 화학식(IV)에서,
M은
Figure 112022066845063-pct00450
또는
Figure 112022066845063-pct00451
이고,
A1은
Figure 112022066845063-pct00452
, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00453
이고,
X는
Figure 112022066845063-pct00454
이고,
W1은 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00455
, 또는
Figure 112022066845063-pct00456
이고,
Z4, Z3, Z2, Z1, Z0은 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00457
, 또는
Figure 112022066845063-pct00458
, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00459
또는
Figure 112022066845063-pct00460
이고,
Q는 -N-AC이고,
Q1은 -N1-AC1이고,
Q2는 -N2-AC2이고,
N1과 N2는 GFLG이고,
AC1, AC2는 각각 독립적으로 PCB, SB7, LPT, PKA이고,
PEG의 수 평균 분자량은 독립적으로 5k-40k이다.
일부 양태에서,
상기 화학식(IV)에서,
M은
Figure 112022066845063-pct00461
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00462
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00463
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00464
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00465
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00466
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00467
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00468
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00469
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00470
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1 및 N2는 GFLG이고, AC1은 LPT이고, AC2는 SB7이다.
일부 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00471
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00472
이고, Z4 및 Z1은
Figure 112022066845063-pct00473
이고, Z3, Z2 및 Z0은
Figure 112022066845063-pct00474
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00475
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00476
이고, Z4 및 Z1은
Figure 112022066845063-pct00477
이고, Z3, Z2 및 Z0은
Figure 112022066845063-pct00478
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1 및 N2는 GFLG이고, AC1은 PCB이고, AC2는 PKA이다.
일부 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00479
또는
Figure 112022066845063-pct00480
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00481
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00482
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00483
이다.
일부 특정 양태에서, M은
Figure 112022066845063-pct00484
또는
Figure 112022066845063-pct00485
이고, W1은
Figure 112022066845063-pct00486
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00487
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00488
이고, Q는 -N-AC이고, N은 GFLG이고, AC는 LPT 또는 PCB이다.
일부 양태에서, 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물은 화학식(V)로 나타내는 구조를 갖는다:
상기 화학식(V)에서,
L1은 -C(=O)-C1-6 알킬렌-C(=O)-, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00489
이고,
A2는
Figure 112022066845063-pct00490
, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00491
이고,
M은
Figure 112022066845063-pct00492
이고,
A1은
Figure 112022066845063-pct00493
, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00494
이고,
Y는
Figure 112022066845063-pct00495
이고,
X는
Figure 112022066845063-pct00496
이고,
W1, W2는 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00497
이고,
Z2, Z1, Z0은 각각 독립적으로
Figure 112022066845063-pct00498
또는
Figure 112022066845063-pct00499
, 바람직하게는
Figure 112022066845063-pct00500
또는
Figure 112022066845063-pct00501
이고,
Q1은 -N1-AC1이고,
Q2는 -N2-AC2이고,
N1과 N2는 GFLG이고,
AC1, AC2는 각각 독립적으로 PCB 또는 SB7이며,
PEG의 수 평균 분자량은 5k-40k이다.
일부 양태에서,
상기 화학식(V)에서,
W1 및 W2는
Figure 112022066845063-pct00502
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00503
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00504
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00505
이다.
일부 특정 양태에서, W1 및 W2는
Figure 112022066845063-pct00506
이고, Z2는
Figure 112022066845063-pct00507
이고, Z1은
Figure 112022066845063-pct00508
이고, Z0은
Figure 112022066845063-pct00509
이고, Q1은 -N1-AC1이고, Q2는 -N2-AC2이고, N1 및 N2는 GFLG이고, AC1은 PCB이고, AC2는 SB7이다.
본 발명의 제2 측면에서, 본 발명은 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공하고, 상기 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물은 하기 화학식의 화합물들로부터 선택된다:
Figure 112022066845063-pct00510
Figure 112022066845063-pct00511
Figure 112022066845063-pct00512
Figure 112022066845063-pct00513
Figure 112022066845063-pct00514
Figure 112022066845063-pct00515
Figure 112022066845063-pct00516
Figure 112022066845063-pct00517
Figure 112022066845063-pct00518
Figure 112022066845063-pct00519
Figure 112022066845063-pct00520
Figure 112022066845063-pct00521
Figure 112022066845063-pct00522
Figure 112022066845063-pct00523
Figure 112022066845063-pct00524
Figure 112022066845063-pct00525
Figure 112022066845063-pct00526
Figure 112022066845063-pct00527
Figure 112022066845063-pct00528
Figure 112022066845063-pct00529
Figure 112022066845063-pct00530
Figure 112022066845063-pct00531
Figure 112022066845063-pct00532
Figure 112022066845063-pct00533
Figure 112022066845063-pct00534
Figure 112022066845063-pct00535
Figure 112022066845063-pct00536
중간체 및 제조방법
본 발명의 제3 측면에서, 본 발명은 상기 언급된 화학식(II)의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제조하기 위한 중간체를 제공하고, 상기 중간체는 하기 화학식의 화합물들로부터 선택된다:
Figure 112022066845063-pct00537
Figure 112022066845063-pct00538
Figure 112022066845063-pct00539
Figure 112022066845063-pct00540
Figure 112022066845063-pct00541
Figure 112022066845063-pct00542
Figure 112022066845063-pct00543
Figure 112022066845063-pct00544
Figure 112022066845063-pct00545
.
본 발명의 제4 측면에서, 본 발명은 상기 언급된 화학식(II)의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제조하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 하기 단계를 포함한다:
(1) M, A1, W1, Y 및 j1이 상기 정의된 바와 같은 중간체
Figure 112022066845063-pct00546
또는
Figure 112022066845063-pct00547
를 제조하는 단계로서,
중간체
Figure 112022066845063-pct00548
의 제조에서, Y가 직접 결합이 아닌 경우, -Y-OH는 말단 카르복실기를 갖고, Y가 직접 결합인 경우,
Figure 112022066845063-pct00549
는 말단 카르복실기를 가지며,
중간체
Figure 112022066845063-pct00550
의 제조에서, Y가 직접 결합이 아닌 경우, -Y-H는 말단 아미노기를 갖고, Y가 직접 결합인 경우,
Figure 112022066845063-pct00551
는 말단 아미노기를 갖는 것인, 단계;
(2) 아미노기 또는 활성화된 아미노기를 갖는 PEG와 중간체
Figure 112022066845063-pct00552
를 아미드화 반응시키거나, 또는 카르복실기 또는 활성화된 카르복실기를 갖는 PEG와 중간체
Figure 112022066845063-pct00553
를 아미드화 반응시켜, 상기 언급된 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물을 수득하는 단계.
본 발명의 제5 측면에서, 본 발명은 상기 언급된 화학식(III)의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제조하기 위한 중간체를 제공하고, 상기 중간체는 하기 화학식의 화합물들로부터 선택된다:
Figure 112022066845063-pct00554
Figure 112022066845063-pct00555
Figure 112022066845063-pct00556
Figure 112022066845063-pct00557
Figure 112022066845063-pct00558
.
본 발명의 제6 측면에서, 본 발명은 상기 언급된 화학식(III)의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제조하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 하기 단계를 포함한다:
(1) M, A1, A1', W1, W1', Y, Y' 및 j1이 상기 정의된 바와 같은 중간체
Figure 112022066845063-pct00559
를 제조하는 단계로서,
Y 또는 Y'가 직접 결합이 아닌 경우, -Y-H 또는 -Y'-H는 말단 아미노기를 갖고,
Y 또는 Y'가 직접 결합인 경우,
Figure 112022066845063-pct00560
또는
Figure 112022066845063-pct00561
는 말단 아미노기를 갖는 것인, 단계;
(2) 카르복실기 또는 활성화된 카르복실기를 갖는 PEG와 중간체
Figure 112022066845063-pct00562
를 아미드화 반응시켜, 상기 정의된 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물을 수득하는 단계.
본 발명의 제7 측면에서, 본 발명은 상기 언급된 화학식(IV)의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제조하기 위한 중간체를 제공하고, 상기 중간체는 하기 화학식의 화합물들로부터 선택된다:
Figure 112022066845063-pct00563
본 발명의 제8 측면에서, 본 발명은 상기 언급된 화학식(IV)의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제조하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 하기 단계를 포함한다:
(1) M, A1, W1 및 j1이 상기 정의된 바와 같고,
Figure 112022066845063-pct00564
가 말단 아미노기를 갖는, 중간체
Figure 112022066845063-pct00565
를 제조하는 단계; 및
(2) 카르복실기 또는 활성화된 카르복실기를 갖는 PEG와 중간체
Figure 112022066845063-pct00566
를 아미드화 반응시켜, 상기 정의된 바와 같은 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물을 수득하는 단계.
본 발명의 제9 측면에서, 본 발명은 상기 언급된 화학식(V)의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제조하기 위한 중간체를 제공하고, 상기 중간체는 하기 화학식의 화합물로부터 선택된다:
Figure 112022066845063-pct00567
.
본 발명의 제10 측면에서, 본 발명은 상기 언급된 화학식(V)의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제조하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 하기 단계를 포함한다:
(1) M, A1, A2, W1, W2, L1, Y 및 j1이 상기 정의된 바와 같으며, -Y-OH는 말단 카르복실기를 갖는, 중간체
Figure 112022066845063-pct00568
를 제조하는 단계; 및
(2) 아미노기 또는 활성화된 아미노기를 갖는 PEG와 중간체
Figure 112022066845063-pct00569
를 아미드화 반응시켜, 상기 정의된 바와 같은 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물을 수득하는 단계.
약제학적 조성물 및 약제학적 용도
본 발명의 하나의 측면에서, 본 출원은 치료적 및/또는 예방적 유효량의 본 발명에 따른 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고; 상기 조성물은 담체 및/또는 운반체와 같은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 담체 및/또는 운반체는, 이온 교환기, 알루미나, 알루미늄 스테아레이트, 레시틴, 혈청 단백질, 예를 들면 인간 혈청 단백질, 완충 물질, 예를 들면 포스페이트, 글리세린, 소르브산, 포타슘 소르베이트, 포화된 식물 지방산의 부분 글리세리드의 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예를 들어 프로타민 설페이트, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연염, 콜로이드 실리카, 삼규산마그네슘, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스 재료, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 폴리아크릴레이트, 밀랍, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌 블록 폴리머 및 라놀린을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
약제학적 조성물은 임의의 약제학적으로 허용가능한 투여 형태로 제조될 수 있다. 또한, 약제학적 조성물은 경구, 비경구, 직장 또는 폐 투여와 같은 임의의 적절한 투여 방식으로 이러한 치료를 필요로 하는 개체에게 적용될 수 있다. 경구 투여의 경우, 약제학적 조성물은 정제, 캡슐제, 환제, 과립제 등과 같은 통상적인 고형 제제로 제조될 수 있고; 이는 또한 경구 용액 및 경구 현탁액과 같은 경구 액체 제제 및 시럽으로 제조될 수 있다. 약제학적 조성물이 경구 제제로 제조되는 경우, 적절한 충전제, 바인더, 붕해제, 윤활제 등이 첨가될 수 있다. 비경구 투여의 경우, 약제학적 조성물은 주사용 용액, 주사용 멸균 분말 및 주사용 농축 용액을 포함하는 주사 제제로 제조될 수 있다. 약제학적 조성물을 주사 제제로 제조하는 경우, 현재 약제학적 분야에서 통상적인 방법으로 제조될 수 있다. 주사 제제의 경우, 첨가물을 첨가하지 않아도 되거나, 약물의 성질에 따라 적절한 첨가물을 첨가할 수 있다. 직장 투여의 경우, 약제학적 조성물은 좌제 등으로 제조될 수 있다. 폐 투여의 경우, 약제학적 조성물은 흡입제 또는 스프레이로 제조될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 약제학적 조성물은 주사 용액과 같은 주사 제제로 제조될 수 있다. 또는, 생리 식염수가 주사 용액의 담체로 사용된다.
다른 측면에서, 본 출원은 질병(예를 들면, 암)의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조에서 본 발명의 폴리에틸렌 글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 상기 질병은 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물의 유효성분에 의해 치료되는 질병을 말한다.
다른 측면에서, 본 출원은 질병(예를 들면, 암)의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 폴리에틸렌 글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다. 상기 질병은 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물의 유효성분에 의해 치료되는 질병을 말한다.
본 발명에서, 암은 결장암, 백혈병, 림프종, 방광암, 골암, 뇌종양, 수모세포종(medulloblastoma), 신경교종, 유방암, 선종/유암종, 부신 피질암, 췌장 섬 세포암, 자궁경부암, 자궁내막암, 난소암, 대장암, 피부암, 식도암, 눈암, 담낭암, 위암, 두경부암, 간암, 흑색종, 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 신장암, 구강암, 폐암, 비인두암 암, 신경모세포종, 난소암, 췌장암, 갑상선암, 부갑상선 음경암, 전립선암, 요도암, 질암, 외음부암, 항문암, 육종 등 상기 암의 전이를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 세포 증식을 특징으로 하는 질병 상태를 말한다.
다른 측면에서, 본 출원은 유효량의 본 발명의 폴리에틸렌 글리콜 컨쥬게이트된 약물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 질병 (예를 들면, 암)을 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다. 투여 요법은 최적의 목적하는 반응을 제공하도록 조정될 수 있다. 예를 들면, 약물의 단일 양이 투여 될 수 있고, 여러번 분할된 투여량이 시간이 지남에 따라 투여 될 수 있거나, 투여량은 치료 상황의 긴급성에 의해 지시된 바와 같이 비례하여 감소되거나 증가될 수 있다. 용량 값은 완화될 상태의 유형 및 중증도에 따라 달라질 수 있으며, 단일 또는 다중 용량을 포함할 수 있다는 점에 유의해야 한다. 임의의 특정 개인에 대해 특정 투여 요법은 개인의 필요 및 조성물을 투여하거나 조성물의 투여를 감독하는 사람의 전문적인 판단에 따라 시간이 지남에 따라 조정되어야 함을 추가로 이해해야 한다.
본 발명에서, "개체(individual)"는 인간 또는 인간이 아닌 동물을 포함한다. 예시적인 인간 개체는 본 명세서에 기재된 것과 같은 질병을 앓고 있는 인간 개체(환자로 지칭됨) 또는 정상 개체를 포함한다. 본 발명에서 "비인간 동물"은 비포유동물(예를 들면, 조류, 양서류 및 파충류)과 같은 모든 척추동물 및 비인간 영장류, 가축(livestock) 및/또는 가축(domesticated animal)(예를 들면, 양, 개, 고양이, 소, 돼지 등)을 포함한다.
용어의 설명 또는 정의
본 발명에서, 폴리에틸렌 글리콜과 컨쥬게이트 되기에 적합한 활성 성분은 적어도 하나의 아미노기, 하이드록실기, 카르복실기 또는 아실기를 갖는 약물 분자, 예를 들어, 적어도 하나의 아미노기, 하이드록실기, 카르복실기 또는 아실기를 갖는 항암 활성을 갖는 약물 분자, 예를 들면 MK2, LPT, PCB, SB7, PKA, NPB 등일 수 있고, 이는 하기 의미를 나타낸다:
Figure 112022066845063-pct00570
하기에서 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술적, 과학적 용어의 의미는 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 통상적으로 이해되는 것과 동일하게 의도된다. 본 명세서에서 사용된 기술에 대한 언급은 해당 기술 분야의 숙련자에게 자명한 그러한 기술적 변경 또는 동등한 기술 대체를 포함하여 해당 기술 분야에서 일반적으로 이해되는 기술을 언급하기 위한 것이다. 하기 용어가 당업자에 의해 잘 이해된다고 믿어지지만, 하기 정의는 여전히 본 발명을 더 잘 설명하기 위해 제시된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "PEG"는 폴리에틸렌 글리콜에 대한 약어이며, 단일-팔 폴리에틸렌 글리콜, 다중-팔 폴리에틸렌 글리콜 및 이들의 유도체, 예를 들면 말단에 아미노 또는 카르복실기와 같은 반응성 관능기를 갖는 유도체를 포함하는 -CH2CH2O-의 반복 단위를 갖는 단독 중합체를 말한다. 본 발명에 있어서, 다중-팔 폴리에틸렌글리콜의 팔은 중합도가 동일한 것이 바람직하다. 다중-팔 폴리에틸렌 글리콜의 분자량을 언급할 때, 분자량은 각 팔의 총 분자량을 의미한다. 본 발명의 구조식에서, 폴리에틸렌글리콜의 반복단위의 아래첨자 "m" 또는 "n"은 폴리에틸렌글리콜의 중합도를 나타낸다. 폴리에틸렌 글리콜이 다중-팔 폴리에틸렌 글리콜인 경우, 아래첨자 "m" 또는 "n"은 각 팔의 중합도를 나타낸다.
본 명세서의 다양한 부분에서, 본 발명의 개시된 화합물에 대한 치환기는 그룹 종 또는 범위의 관점에서 개시된다. 본 발명은 이들 그룹 종 및 범위의 각 구성원의 모든 독립적인 하위 조합을 포함한다는 것이 특히 지적된다. 예를 들면, 용어 "C1-C6 알킬"은 구체적으로 독립적으로 개시된 메틸, 에틸, C3 알킬, C4 알킬, C5 알킬 및 C6 알킬을 지칭한다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "알킬(alkyl)"은 1 내지 6개의 탄소 원자(C1-C6 알킬 기) 또는 1 내지 4개의 탄소 원자(C1-C4 알킬 기), 또는 1 내지 3개의 탄소 원자(C1-C3 알킬 기)를 갖는 포화, 직쇄 또는 분지쇄, 1가 탄화수소기를 말하고, 여기서 알킬 기는 독립적으로 그리고 임의로 중수소, 아미노, 하이드록실, 시아노, F, Cl, Br, I, 머캅토, 니트로, 옥소(=O) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있다. 알킬기의 예로는 메틸(Me, -CH3), 에틸(Et, CH2CH3), n-프로필 (n-Pr, -CH2CH2CH3), 이소-프로필 (i-Pr, -CH(CH3)2), n-부틸 (n-Bu, -CH2CH2CH2CH3), 이소-부틸 (i-Bu, -CH2CH(CH3)2), sec-부틸 (s-Bu, -CH(CH3)CH2CH3), tert-부틸 (t-Bu, -C(CH3)3), n-펜틸 (-CH2CH2CH2CH2CH3), 2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-펜틸 (-CH(CH2CH3)2), 2-메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH2CH3), 3-메틸-2-부틸 (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-메틸-1-부틸 (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-메틸-1-부틸 (-CH2CH(CH3)CH2CH3), n-헥실 (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-헥실 (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-헥실 (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-메틸-2-펜틸 (-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-메틸-3-펜틸 (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-메틸-3-펜틸 (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-디메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-디메틸-2-부틸 (-CH(CH3)C(CH3)3), n-헵틸, n-옥틸 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 본 명세서에 사용된 용어 "알킬" 및 이의 접두사 "알크(alk)"는 모두 직쇄 및 분지쇄 포화 탄소 사슬을 포함한다.
용어 "알킬렌(alkylene)"은 선형 또는 분지쇄 포화 알킬기에서 2개의 수소 원자를 제거하여 수득한 포화 2가 탄화수소기를 말하며, 예를 들어 C1-C6 알킬로부터 유도된 "C1-C6 알킬렌", "C1-C4 알킬로부터 유도된 "C1-C4 알킬렌", C1-C3 알킬로부터 유도된 "C1-C3 알킬렌"이다. 그리고, 상기 알킬렌기는 치환 또는 비치환될 수 있으며, 여기서 치환기는 중수소, 하이드록실, 아미노, 할로겐, 시아노, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로사이클릴, 머캅토, 니트로 또는 아릴옥시일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 알킬렌기의 예는, 메틸렌(-CH2-), 에틸렌(-CH2-CH2-), 이소프로필리덴(-CH2-CH(CH3)-), 에탄-1,1-디일, 2-메톡시프로판-1,1-디일, 2-하이드록시프로판-1,1-디일, 2-메틸-2-하이드록시프로판-1,1-디일 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 여기서, 알킬기의 의미는 상술한 바와 같다.
또한, 다른 방식으로 명확하게 표시되지 않는 한, 본 개시 내용 전체에서 사용되는 "각각 … 독립적으로" 및 "… 및 … 각각 독립적으로는"은 상호 교환 가능하며, 둘 다 넓은 의미로 이해해야 한다. 이는, 다른 그룹에서 동일한 기호로 표현되는 특정 옵션은 서로 영향을 미치지 않거나, 동일한 그룹에서 동일한 기호로 표현되는 특정 옵션이 서로 영향을 미치지 않는다는 것을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 "직접 결합(direct bond)"이라는 특정 변수는 연결기가 존재하지 않음과 동시에 이에 상응하는 연결기 상의 치환체가 존재하지 않는 것을 의미한다. 예를 들면, -X-Y-Z의 경우, Y가 직접 결합이면, -X-Z로 표시함과 동시에 이에 상응하는 Y 상의 치환기는 존재하지 않는다.
본 명세서 사용되는, 본 발명의 화합물의 "약제학적으로 허용가능한 염(pharmaceutically acceptable salt)"은 염산염, 헥사플루오로인산염, 메글루민 염 등의 화합물의 산 부가 염 및 염기 부가 염을 포함한다.
본 명세서에 사용되는, 화학식에서 물결선 "
Figure 112022066845063-pct00571
"는 화학식으로 나타내는 구조에 다른 기가 결합하는 위치를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "유효량(effective amount)"은, 투여된 후 특정 정도로 치료되는 질환의 하나 이상의 증상을 완화시키는 화합물의 양을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "치료하는(treating)"은 그러한 용어가 적용되는 질병 또는 상태 또는 그러한 질병 또는 상태의 하나 이상의 증상의 진행을 역전, 완화 또는 억제하거나, 그러한 질병 또는 상태 또는 그러한 질병 또는 상태의 하나 이상의 증상을 예방하는 것을 의미한다.
유리한 효과
본 발명의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물은 우수한 항종양 활성을 갖는다. 본 발명의 제조방법을 통해, 본 발명의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 약물은 효율적이고 편리하게 제조될 수 있다.
도 1은 약물 44-2 및 27-134의 제조를 나타낸다.
도 2는 약물 44-2 및 27-134의 측정된 흡광도 값을 나타낸다.
도 3은 MDA-MB-231 암세포에 대한 약물 44-2의 억제 효과를 나타낸다.
도 4는 Colo205 암세포에 대한 약물 27-134의 억제 효과를 나타낸다.
도 5는 약물 44-2 및 27-134의 IC50 계산 결과를 나타낸다.
도 6, 도 7 및 도 8은 실시예 3에서 각 그룹의 종양 성장 경향을 나타낸다.
도 9, 도 10 및 도 11은 실시예 3에서 각 그룹의 종양 중량 억제율을 나타내는 모식도이다.
도 12는 실시예 3에서 각 그룹의 안락사된 동물의 사진이다.
도 13은 실시예 3의 각 그룹의 종양 사진이다.
도 14는 실시예 4에서 각 그룹의 종양 성장 경향을 나타낸다.
도 15는 실시예 4에서 각 그룹의 종양 중량 억제율의 모식도이다.
이하, 실시예와 함께 본 발명의 양태를 상세히 설명할 것이다. 그러나, 당업자는 하기 실시예가 본 발명을 예시하기 위해 사용된 것일 뿐, 본 발명의 범위를 제한하지 않는다는 것을 이해할 것이다. 실시예 중 특별한 조건이 없는 것은 일반적으로 통상적인 조건 또는 제조사에서 권장하는 조건으로 구현된다. 제조사를 지정하지 않고 사용되는 시약이나 기구는 모두 시중에서 구입할 수 있는 종래 제품이다.
실시예에서 약어의 의미는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00572
일부 원료의 출처와 구조는 다음과 같다:
M-NH2-2K.HCl
JenKem,
Figure 112022066845063-pct00573
M-NH2-3K.HCl
JenKem,
Figure 112022066845063-pct00574
M-NH2-5K.HCl
JenKem,
Figure 112022066845063-pct00575
M-SCM-10K
JenKem,
Figure 112022066845063-pct00576
실시예 1 화합물의 합성
1. 37-14(화합물 번호 10)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00577
Figure 112022066845063-pct00578
Figure 112022066845063-pct00579
Figure 112022066845063-pct00580
자세한 내용은 다음과 같다:
25-71
Figure 112022066845063-pct00581
Boc-Glu-OH (Ark Pharm에서 구입, 15.0 g, 60.6673 mmol), HBTU(Aladdin에서 구입, 69.0225 g, 182.0022 mmol), HOBT(Innochem에서 구입, 24.5921 g, 182.0022 mmol) 및 H-Glu (OBn)2·TosOH (Ark Pharm에서 구입, 63.6473 g, 127.4014 mmol)을 1000 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(300 mL)로 녹인 후, 30분 동안 -5 ℃에서 반응시켰다. 그 후, DIEA (90.2 mL, 546.0066 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 1시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 소듐 비카보네이트 용액(400 mL)과 에틸 아세테이트(300 mL)를 분액깔때기에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 이어서, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 진탕시키고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 그 후, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL)을 유기상에 추가로 첨가하고, 수득된 용액을 진탕시키고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 증발 건조시키고, 오븐에서 건조시켜, 생성물 25-71을 수득했다: 67.9 g.
25-73
Figure 112022066845063-pct00582
25-71 (52.5355 g, 60.6673 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고 디클로로메탄(10 mL)으로 녹이고, 트리플루오로아세트산(TFA, 67.6 mL, 910.0101 mmol)을 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 교반하여 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압 하에 농축하고 증발시켜, 디클로로메탄을 제거하였다. 반응 용액을 2L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 소듐 비카보네이트 용액 (400 mL)과 에틸 아세테이트 (300 mL)를 분별 깔대기에 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 이어서, 포화 소듐 비카보네이트 용액 (300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 진탕시키고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 그 후, 탈이온수(300 mL)를 유기상에 더 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고 증발 건조시켰다. 수득된 건조물을 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매(100 mL)에 용해시키고, 실리카겔 분말 150 mL를 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(60% -100% 에틸 아세테이트: 40%-0% 석유 에테르 및 1%-4% 메탄올: 99%-96% 에틸 아세테이트)으로 용리를 수행했다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜 생성물 25-73: 44.4 g을 수득했다, 수율: 95.56%.
16-34
Figure 112022066845063-pct00583
2-(2-아미노에톡시)에탄올(18.8680g, 190.2226mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 붓고, 디클로로메탄(100 mL)으로 희석한 후, 트리에틸아민(38.4972mL, 380.4452mmol)을 첨가하고, (Boc) 2O (49.8261g, 228.2671mmol)를 교반하면서 천천히 첨가하고, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 증발 건조시킨 후, 소듐 비카보네이트 분말을 첨가하고, 수득된 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 50% 에틸 아세테이트/석유 에테르로 용리의 작업을 수행하여, 생성물 27.3g을 수득했다, 수율 70%.
16-36
Figure 112022066845063-pct00584
16-24(27.3g, 132.8144mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, 보호 목적으로 질소를 주입하고, 칼륨 tert-부톡사이드의 THF 용액을 첨가하고, 혼합 용액을 0 ℃에 놓고 반응시켜, 에틸 브로모아세테이트 (17.6265mL, 159.3773mmol)을 첨가한 후, 수득된 용액을 먼저 3시간 동안 교반한 후, 실온에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 증발 건조시키고, 탈이온수와 에틸 아세테이트를 추출을 위해 첨가하고, 유기상을 분리하였다. 수상에 생성물이 없을 때까지, 수성상을 에틸 아세테이트로 추출하고, 수득된 유기상을 합하였다. 유기상을 무수 소듐 설페이트 분말로 건조시킨 후, 흡인 여과를 수행하고, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 30%-100% 에틸 아세테이트/석유 에테르로 구배 용리를 수행하여, 생성물 20g을 수득했다, 수율 52%.
24-36
Figure 112022066845063-pct00585
250 mL 플라스크에 16-36(17.9g, 61.4402mmol)을 첨가하고, 1,4-디옥산을 첨가하고, 수산화리튬(3.2386g, 135.1685mmol)을 교반하면서 추가로 첨가하고, 30분 후 용액이 투명해질 때까지 탈이온수를 첨가하였다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 메틸 tert-부틸 에테르와 n-헥산의 혼합 용매(1:1)로 3회 추출했다(100 mL×3). 수성상을 진한 염산으로 pH=1로 조정한 후, 에틸 아세테이트로 3회 추출하고(300 mL×3), 에틸 아세테이트 상을 합하고, 용해 및 포화 염화나트륨으로 3회 세척하여(100 mL×3), 수득된 용액을 농축시켰다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 40%-100% 에틸 아세테이트/석유 에테르로 용리 작업을 수행하여, 생성물 10.1g을 수득했다, 수율 62%.
25-75
Figure 112022066845063-pct00586
Boc-LC-OH(24-36 합성 방법에 따라 합성, 15.0236 g, 57.0608mmol), HBTU(32.4596 g, 85.5912 mmol), HOBT(11.5651g, 85.5912mmol) 및 25-73(43.7 g, 57.0608 mmol)을 500 mL의 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF(150 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (61.5mL, 342.3648 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 2시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 소듐 비카보네이트 용액(400 mL)과 에틸 아세테이트(300 mL)를 분액깔때기에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 이어서, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 진탕시키고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 그 후, 탈이온수(300 mL)를 유기상에 더 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고 증발 건조시켰다. 수득된 건조물을 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매(100 mL)에 용해시키고, 실리카겔 분말 150 mL를 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1% 암모니아수: 1%-2% 메탄올: 98%-97% 디클로로메탄)으로의 용리 작업을 수행했다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시켜, 생성물 25-75: 42.1g을 수득했다, 수율: 72.97%.
22-181
Figure 112022066845063-pct00587
25-75 (26.7 g, 26.4064 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 트리플루오로아세트산(TFA, 19.6 mL, 264.064 mmol)을 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 교반하여 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압 하에 농축하고 증발시켜, 디클로로메탄을 제거하였다. 그 후, 반응 용액을 2L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 소듐 비카보네이트 용액 (400 mL)과 에틸 아세테이트 (300 mL)를 분별 깔대기에 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 이어서, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 진탕시키고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 그 후, 탈이온수(300 mL)를 유기상에 더 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 증발 건조시키고, 오븐에서 건조시켜, 생성물 22-181: 20.3 g을 수득했다, 수율: 84.2%.
35-3
Figure 112022066845063-pct00588
Fmoc-L-Lys (Boc)-OH (Accela에서 구매, 1.39 g, 2.967 mmol), 22-181 (2.70 g, 2.967 mmol), HBTU (1.69 g, 4.4505 mmol), HOBT (0.6 g, 4.4505 mmol)를 100mL 플라스크에 첨가하고, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (2.21 mL, 13.3515 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액은 1시간 동안 -5 ℃에서 반응시킨 후, 실온으로 옮기고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기로 옮기고, 포화 식염수(200 mL)와 에틸 아세테이트(250 mL)로 추출하여, 유기층을 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 1)로 세척하고, 수득된 유기상을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 1)로 세척하고, 농축하고 증발 건조시켜, 생성물 35-3을 수득했다: 4.0 g.
35-4
Figure 112022066845063-pct00589
35-3 (4.04 g, 2.967 mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 트리플루오로아세트산(3.31 mL, 44.505 mmol)을 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 교반하여 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 소량으로 농축하였다. 교반하면서 세척하는 조작은 n-헥산(120 mL)의 첨가를 수행하여 트리플루오로아세트산을 제거하고, 상청액을 버리고, 저급 유성 용액에 n-헥산(120 mL)을 첨가하였다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 마지막으로, 점성의 유성 생성물을 수득했다. 유성 생성물을 건조시켜 35-4를 수득했다: 3.74 g
25-102
Figure 112022066845063-pct00590
Boc-GFLG-OBn(문헌에 따라 합성됨, 6.8282 g, 11.7184 mmol) 및 10% Pd/C (50 mg)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(30 mL)로 용해시켰다. 수소화 반응기를 밀폐하고, 1.6 MPa의 압력으로 수소를 주입한 후, 혼합 용액을 상온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 취출하여, 다진 규조토를 채운 샌드 코어 깔대기(sand core funnel)에 균일하게 적가한 후 흡인여과하였다. 임의의 생성물을 함유하지 않을 때까지 DMF(60 mL)로 규조토를 세척하여, 반응 생성물 용액을 수득했다.
35-6
Figure 112022066845063-pct00591
35-4 (3.74 g, 32.967 mmol), 25-102 (1.75 g, 3.560 mmol), HBTU (1.69 g, 4.451 mmol), HOBT (0.6 g, 4.451 mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 30분 동안 넣고 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (4.4 mL, 26.703 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 1시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기로 옮기고, 탈이온수(200 mL)와 에틸 아세테이트(200 mL)로 추출하여, 유기층을 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하고, 증발 건조시키고, 오븐에서 건조하여, 생성물 35-6을 수득했다: 5.1 g.
35-7
Figure 112022066845063-pct00592
35-6(5.1 g, 2.967 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF(20 mL)로 용해시키고, 모르폴린(3.9 mL, 44.505 mmol)을 첨가한 후, 혼합 용액을 1시간 동안 상온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 포화식염수(200 mL)와 에틸아세테이트(200 mL)로 추출하여, 유기층을 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기 상을 포화 식염수 용액(200 mL × 1)으로 세척하고 농축했다. 실리카겔 분말(30 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 1%의 암모니아수와 3~5%의 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액으로 건조시료 로딩, 컬럼크로마토그래피 및 용리의 작업을 수행했다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 오븐에서 건조시켜, 생성물 35-7: 3.4 g을 수득했다, 수율 77%.
35-11
Figure 112022066845063-pct00593
35-7 (3.4 g, 2.27 mmol), 석신산(0.12 g, 1.03 mmol, InnoChem에서 구입), HBTU (1.17 g, 3.09 mmol), HOBT (0.42 g, 3.09 mmol)를 500mL 플라스크에 첨가하고, 혼합 용액을 약 30분 동안 교반하여 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (1.53 mL, 9.27 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액은 1시간 동안 -5 ℃에서 반응시킨 후, 실온으로 옮기고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 소듐 비카보네이트 용액(200 mL)과 에틸 아세테이트(250 mL)로 추출하여, 유기층을 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 3)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기 상을 포화 식염수 용액(200 mL × 2)으로 세척하고 농축했다. 실리카겔 분말(30 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1%의 암모니아수와 5%의 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합용액으로 용리의 작업을 수행했다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 오븐에서 건조시켜, 생성물 35-11: 3.0 g을 수득했다, 수율 96%.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.59 - 8.43 (m, 1H), 8.36 - 8.26 (m, 2H), 8.20 - 8.14 (m, 1H), 8.01 - 7.87 (m, 6H), 7.78 - 7.61 (m, 3H), 7.38 - 7.11 (m, 55H), 6.93-6.95 (m, 2H), 5.21 - 4.97 (m, 15H), 4.53-4.52 (m, 1H), 4.42 - 4.22 (m, 7H), 4.15-4.13 (m, 1H), 3.89-3.87 (m, 3H), 3.76 - 3.43 (m, 19H), 3.18-3.16 (m, 5H), 2.31-2.98 (m, 7H), 2.84 - 2.64 (m, 6H), 2.44 - 2.38 (m, 8H), 2.37 - 2.28 (m, 8H), 2.21 - 2.10 (m, 5H), 2.08 - 1.81 (m, 11H), 1.81 - 1.68 (m, 3H), 1.51 - 1.40 (m, 4H), 1.50 - 1.41 (m, 7H), 1.29 - 1.16 (m, 18H), 1.28 - 1.16 (m, 12H), 0.93 - 0.75 (m, 12H).
30-30
Figure 112022066845063-pct00594
Boc-GFLG-OH(25-102 합성법에 따라 합성, 13.97 mmol), PCB(5 g, 11.17 mmol), HBTU(6.35 g, 16.76 mmol) 및 HOBT(2.26g, 16.76 mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF(100 mL)를 용해시키고, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (8.31 mL, 50.28 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 저온에서 2시간 동안 반응시킨 후, 상온으로 옮기고, 교반하여 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 필터 케이크를 탈이온수(1000 mL)로 세척하고, 침전에 의해 황색 고체를 분리한 후, 건조하여 생성물 10.3 g을 수득했다.
30-33
Figure 112022066845063-pct00595
30-30 (10.3 g, 11.17 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄(50 mL)으로 용해시킨 후, TFA (12.45 mL, 167.55 mmol)를 첨가하고, 혼합 용액을 교반하여 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 감압 농축한 후, n-헥산(50 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(400 mL)로 3회 침전시켰다. 여과하여 고체 생성물을 수득하고, 디클로로메탄 및 메탄올로 용해시켰다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 5% 메탄올 및 1% 암모니아수를 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행했다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조시켜, 생성물 8.6 g, 수율 94%를 수득했다.
28-258
Figure 112022066845063-pct00596
Fmoc-Glu-OtBu (3.223 g, 7.5915 mmol, Ark pharm에서 구입), 30-33(30-33의 합성법에 따라 합성)(5.2 g, 6.3263 mmol), HBTU (3.5988 g, 9.4895 mmol), HOBT (1.282 g, 9.4895 mmol)를 500 mL 플라스크에 첨가하고, 10분간 교반했다. 그 후, DIEA (4.7 mL, 28.4684 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 교반하여 밤새 0 ℃에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(300 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(50 mL)를 침전을 위해 첨가하고, 상층액을 버리고, n-헥산(300 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(50 mL)를 더 침전시키기 위해 더 낮은 유성 액체상에 첨가하고, 이러한 조작을 5회 반복하여, 점성 유성 생성물을 수득했다. 그 후, 유성 생성물을 건조시켜, 생성물 28-258: 7.78 g을 수득했다.
28-260
Figure 112022066845063-pct00597
28-258 (7.78 g, 6.3263 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄(30 mL)으로 용해시키고, TFA(9/396 mL, 126.52 mmol)을 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 교반하여 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 농축하고, 농축된 반응 용액에 메틸 tert-부틸 에테르(300 mL)를 첨가하여 고체를 분리하고, 흡인 여과를 수행했다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(80 mL x 3)로 세척하고, 건조하여 생성물 28-260: 8.1 g을 수득했다.
25-130
Figure 112022066845063-pct00598
Boc-GFLG-OH(25-102 합성 방법에 따라 합성됨, 4.9738 g, 10.0977 mmol), HBTU (4.4186 g, 11.6513 mmol), HOBT (1.5743 g, 11.6513 mmol) 및 SB-743291 (4.0162 g, 7.7675 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (60 mL)로 용해한 후, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (5.8 mL, 34.9538 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 1시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 소듐 비카보네이트 용액(400 mL)과 에틸 아세테이트(300 mL)를 분액깔때기에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 이어서, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 진탕시키고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 그 후, 탈이온수(300 mL)를 유기상에 더 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 추출을 위해 정치한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 증발 건조시키고, 오븐에서 건조시켜, 생성물 25-130: 7.7023 g을 수득했다.
25-132
Figure 112022066845063-pct00599
25-130 (7.7023 g, 7.7675 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄(5 mL)으로 용해시키고, TFA(8.7 mL, 116.5125 mmol)을 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 교반하여 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 증발시켜 디클로로메탄을 제거하였다. 그 후, 침전을 위해 수득된 용액에 n-헥산(150 mL)과 메틸 tert-부틸에테르(30 mL)를 첨가하고, 상층액을 버린 후, 침전을 위해 더 낮은 유성 용액에 n-헥산(150 mL)과 메틸 tert-부틸에테르(30 mL)를 첨가하였다. 이러한 조작을 3회 반복하여, 유성 고체를 수득했다. 오일상의 고체를 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 침전을 위해 수득된 용액에 메틸 tert-부틸 에테르(150 mL)를 첨가하여 분말상의 고체를 분리한 후, 여과에 의해 고체 생성물을 수득했다. 수득된 생성물을 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매(50 mL)에 용해시키고, 실리카겔 분말(80 mL)을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1% 암모니아수:3%-4% 메탄올:96%-95% 디클로로메탄)으로 용리를 수행했다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 생성물 25-132: 5.4g를 수득했다, 수율: 77.98%.
28-264
Figure 112022066845063-pct00600
28-260 (7.4 g, 6.3263 mmol), 25-132 (5.9218 g, 6.6426 mmol), HBTU (3.5988 g, 9.4895 mmol), HOBT (1.2823 g, 9.4895 mmol)를 500 mL 플라스크에 첨가시키고, DMF(110 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 10분 동안 0 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (4.7 mL, 28.4684 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0 ℃에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(300 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(50 mL)를 침전을 위해 첨가하여, 상층액을 버리고, n-헥산(300 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(50 mL)를 추가 침전을 위해 더 낮은 유성 액체상에 첨가하고, 이러한 조작을 6회 반복하여 점성 유성 생성물을 수득했다. 유성 생성물을 메탄올(10 mL), 디클로로메탄(40 mL)에 용해시키고, 수득된 용액에 메틸 tert-부틸 에테르(450 mL)를 첨가하여 고체를 분리한 후, 여과를 수행하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(100 mL × 3)로 세척하고, 건조하여, 생성물 28-264: 12.9g를 수득했다.
28-265
Figure 112022066845063-pct00601
500 mL 플라스크에 28-264 (12.9 g, 6.3263 mmol)를 첨가하고, DMF(50 mL)에 용해시키고, 모르폴린(16.5 mL, 189.789 mmol)을 첨가하고, 혼합 용액을 상온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(300 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(50 mL)를 침전을 위해 반응 용액의 층에 첨가하고, 상층액을 버리고, n-헥산(300 mL)과 메틸 tert -부틸 에테르(50 mL)를 추가 침전을 위해 저급 유성 액상에 첨가하고, 이러한 조작을 5회 반복하여 점성 유성 생성물을 수득했다. 유성 생성물을 디클로로메탄(20 mL), 메탄올(80 mL)로 용해시키고, 수득된 용액에 메틸 tert-부틸 에테르(350 mL)를 첨가하여 고체를 분리한 후 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(120 mL × 2)로 세척하고, 건조하여, 생성물 28-265: 11.5 g를 수득했다.
37-1
Figure 112022066845063-pct00602
28-265(11.54 g, 6.3263 mmol), Boc-Gly-OH(1.3299 g, 7.5916 mmol, Ark pharm에서 구입), HBTU(3.5988 g, 9.4895 mmol), HOBT(1.2823 g, 9.4895 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF(80 mL)로 용해시기고, 혼합 용액을 10분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (4.7053 mL, 28.4684 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 30분 동안 계속 반응시킨 후, 실온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(300 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(50 mL)를 침전을 위해 첨가하고, 상층액을 버리고, n-헥산(300 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(50 mL)를 더 침전시키기 위해 더 낮은 유성 액체상에 첨가하고, 이러한 조작을 4회 반복하여, 점성 유성 생성물을 수득했다. 그 후, 디클로로메탄(70 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(350 mL)를 유성 생성물에 첨가하여 고체를 분리하고 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(50 mL × 3)로 세척하고, 진공 오븐에서 건조하여, 생성물 37-1: 12.5 g을 수득했다.
37-2
Figure 112022066845063-pct00603
37-1(12.537 g, 6.3263 mmol)을 500 mL 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄(30 mL)으로 용해시키고, TFA(14.09 mL, 189.789 mmol)를 첨가하고, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 메틸 tert-부틸 에테르(250 mL)를 반응 용액에 첨가하여 고체를 분리하고 흡인 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(100 mL × 3)로 세척하고, 메탄올(60 mL) 및 디클로로메탄(240 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말(25 g)을 첨가하고, 그 후 수득된 혼합물을 건조될 때까지 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 15% 암모니아수와 7%-8% 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액으로 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리의 조작을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 37-2: 9.7g를 수득했다, 수율 82%.
35-13
Figure 112022066845063-pct00604
35-11 (0.38 g, 0.124 mmol) 및 Pd/C (0.0210 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 1.8 MPa의 압력으로 수소를 투입한 후, 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과하고, 규조토를 DMF(20 mL × 3)로 세척하여 35-13을 포함하는 DMF 용액을 수득했다.
35-14
Figure 112022066845063-pct00605
37-2 (2.0 g, 1.063 mmol), HBTU (0.56 g, 1.4832 mmol), HOBT (0.2 g, 1.4832 mmol)를 35-13 (0.364 g, 0.1236 mmol)을 함유하는 DMF(90 mL) 용액에 첨가한 후, 혼합 용액을 교반하여 10분 동안 -5 ℃에서 반응시켰다. 그 후, DIEA (0.74 mL, 4.4496 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 60분 동안 계속 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(100 mL)과 메틸 tert-부틸에테르(30 mL)를 반응 용액에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 층을 형성하고, 상청액을 버리고, n-헥산(100 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르(30 mL)를 더 낮은 액체에 첨가하고, 이러한 조작을 6회 반복하여, 점성 유성 생성물을 수득했다. 그 후, 디클로로메탄(30 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르(250 mL)를 유성 생성물에 첨가하여 고체를 분리하고, 흡인 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(100 mL × 3)로 세척하고, 메탄올(30 mL)/디클로로메탄(120 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말(15 g)을 첨가한 후, 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수 및 5%-7% 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 조작을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시켜, 생성물 35-14: 1.2g를 수득했다, 수율 56%.
35-16
Figure 112022066845063-pct00606
250 mL 플라스크에 35-14(1.2 g, 0.0695 mmol)를 첨가하고, 디클로로메탄(15 mL)에 용해시킨 후, TFA(1.0322 mL, 13.6 mmol)를 첨가하고, 상온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 소량 농축하고, 농축액에 메틸 tert-부틸 에테르(100 mL)를 첨가하여 분말상의 고체를 분리하고, 흡인 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(50 mL × 3)로 세척하고, 메탄올(30 mL) 및 디클로로메탄(120 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말(10 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 1% 암모니아수:6%-7% 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액으로 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리의 작업을 수행했다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시켜, 생성물 35-16: 0.74 g을 수득했다, 수율 67%.
37-14
Figure 112022066845063-pct00607
35-16 (0.3011 g, 0.01754 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (25 mL)로 용해시키고 M-SCM-40K (1.5227 g, 0.0369 mmol, JenKem에서 구입)를 첨가하고, 초음파 처리를 수행하여 반응물을 용해시켰고, 혼합 용액은 실온에서 저속 교반으로 암실에서 7일 동안 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(120 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(40 mL)를 첨가하고, 상청액을 버리고, n-헥산 (120 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(40 mL)를 하부 액체에 첨가하였다. 이러한 조작을 3회 반복하여, 점성 유성 생성물을 수득했다. 유성 생성물에 메틸 tert-부틸 에테르(100 mL)를 첨가하여 고체를 분리하고 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(50 mL × 3)로 세척하고, 메탄올(30mL) 및 디클로로메탄(120 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말(25 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 1% 암모니아수와 6%-7% 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액으로 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리의 조작을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 1시간 동안 건조시키고, 무수 에탄올(5 mL) 및 디클로로메탄(20 mL)으로 용해시켰다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르(80 mL)를 수득된 용액에 첨가하여, 고체를 분리하고 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(50 mL × 2)로 세척하고, 진공 오븐에서 건조하여, 생성물 37-14: 0.98 g를 수득했다, 수율: 58%.
1H-NMR (600MHz, DMSO-d 6) δ 10.18 - 10.11 (m, 4H), 9.21 - 8.97 (m, 4H), 8.24 - 7.89 (m, 61H), 7.58 - 7.43 (m, 12H), 7.30 - 7.08 (m, 99H), 5.91 - 5.77 (m, 4H), 4.64 - 4.68 (m, 23H), 4.38 - 4.14 (m, 57H), 4.07 - 3.89 (m, 81H), 3.60 - 3.45 (m, 7482H), 3.24 - 2.96 (m, 7H), 2.82 - 2.65 (m, 43H), 2.42 - 2.40 (m, 12H), 2.35 - 2.26 (m, 32H), 2.25 - 2.03 (m, 11H), 1.95 - 1.67 (m, 26H), 1.63 - 1.41 (m, 40H), 1.37 - 1.15 (m, 19H), 1.17 - 1.05 (m, 17H), 0.90 - 0.77 (m, 72H), 0.52 - 0.46 (m, 8H).
2. 10-109 (화합물 번호 16)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00608
Figure 112022066845063-pct00609
Figure 112022066845063-pct00610
Figure 112022066845063-pct00611
Figure 112022066845063-pct00612
Figure 112022066845063-pct00613
자세한 내용은 다음과 같다:
23-210
Figure 112022066845063-pct00614
Boc-Glu-(OH) -OBn (Accela에서 구입, 10 g, 29.64 mmol), Glu-(OBn)2·TosOH (16.3 g, 32.61 mmol), HBTU (16.9 g, 44.46 mmol) 및 HOBT (6.1 g, 44.46 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (200 mL)로 용해시키고, 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (22 mL, 133.4 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 저온에서 2시간 동안 반응시킨 후, 상온으로 옮기고, 교반하여 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 포화 탄산수소나트륨 수용액(200 mL)을 반응 용액에 첨가한 후, 에틸아세테이트(200 mL × 3)로 3회 추출하여, 수득된 유기층을 합하였다. 포화 염화나트륨 용액(200 mL × 2)을 유기상에 첨가한 후, 에틸 아세테이트(100 mL × 2)로 2회 추출하였다. 마지막으로, 유기상을 무수 소듐 설페이트로 건조시키고, 농축하고 증발 건조시켜, 생성물 31.4 g(칭량)을 수득했다.
29-1
Figure 112022066845063-pct00615
23-210 (31.4 g, 29.64 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (100 mL)으로 용해시키고, TFA (33 mL, 444.6 mmol) 첨가하고, 혼합 용액을 교반하여 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 농축하고 감압하에 증발 건조시켰다. 반응 용액에 포화 탄산수소나트륨 용액 (200 mL)을 첨가한 후, 에틸아세테이트(200 mL × 3)로 3회 추출하여, 수득된 유기층을 합하였다. 유기층에 포화 염화나트륨 용액 (200 mL)을 첨가한 후, 에틸 아세테이트 (100 mL × 2)로 2회 추출하였다. 마지막으로, 유기상을 무수 소듐 설페이트로 건조시킨 후, 다음 반응을 위해 증발 건조시켰다.
29-3
Figure 112022066845063-pct00616
29-1 (16.2 g, 29.64 mmol), 10-102 (24-36의 합성법에 따라 합성, 38.5 g, 38.5mmol), HBTU (16.8 g, 44.4 mmol) 및 HOBT (6 g, 44.4 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (200 mL)로 용해시킨 후, 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (22 mL, 133.2 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 저온에서 2시간 동안 반응시킨 후, 상온으로 옮기고, 교반하여 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 포화 탄산수소나트륨 수용액 (200 mL)을 첨가한 후, 에틸아세테이트로 3회 (200 mL × 3) 추출하여 수득된 유기상을 합하였다. 포화 염화나트륨 용액(200 mL × 2)을 유기상에 첨가한 후, 에틸 아세테이트(100 mL × 2)로 2회 추출하였다. 마지막으로, 유기상을 무수 소듐 설페이트로 건조시키고, 농축하고 증발 건조시켜, 생성물 34.1 g(칭량)을 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 45% 에틸 아세테이트로 용리의 작업을 수행했다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시켰다. 순수한 생성물 11.1 g을 수집하고, 냉장고에 넣어두었다가 나중에 사용하고, 조 생성물 10.7 g을 수집하여 다음 탈보호 반응에 투입하였다.
30-28
Figure 112022066845063-pct00617
Boc-GFLG-OBn(문헌에 따라 합성됨, 19.0 g, 32.6 mmol), 10% Pd/C 촉매 (300 mg)를 수소화 반응기에 첨가하고, 용매의 수준이 교반기 이상인 DMF (50 mL)로 용해시켰다. 그 후, 수소화 반응기를 밀봉하여 "3개의 펌핑 및 3개의 충전" 작업(즉, 약 3분 동안 진공 워터 펌프로 반응 시스템의 공기 펌핑 - 수소 충전 - 수소 펌핑 - 수소 충전 - 수소 펌핑 - 수소 충전)을 수행하여, 수소화 반응기의 압력이 18 Psi가 되도록 하고, 수득된 용액을 실온에서 밤새 반응시켰다. 둘째 날에는, TLC(thin-layer chromatography) 모니터링을 통해 반응이 완료된 것을 확인한 후, 워크업 절차를 수행하였다. 반응 용액을 꺼내고, 다진 규조토로 채워진 흡입 깔때기에 균일하게 적가하였다. 반응기가 임의의 생성물을 포함하지 않을 때까지, 반응기를 DMF (90 mL)로 세척하여, 반응 생성물을 수득했다.
30-29
Figure 112022066845063-pct00618
30-28 (17.9 mmol), LPT (8 g, 13.77 mmol), HBTU (7.83 g, 20.65 mmol) 및 HOBT (2.79 g, 20.65 mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (100 mL), 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (10.24 mL, 61.96 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 저온에서 2시간 동안 반응시킨 후, 상온으로 옮기고, 교반하여 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 탈이온수 (1000 mL)를 첨가하여 DMF를 세척했다. 담황색 고체를 침전 분리하고 건조하여, 생성물 14.53 g을 수득했다.
14-128
Figure 112022066845063-pct00619
30-29 (14.53 g, 13.77 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄(150 mL)으로 용해시킨 후, TFA (15.34 mL, 206.55 mmol)를 첨가하고, 혼합 용액을 교반하여 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 감압 농축하고, 포화 탄산수소나트륨 용액(200 mL)을 첨가하여 TFA를 중화하고, 수상의 생성물을 에틸 아세테이트(150 mL × 3)로 3회 추출하고, 수득된 유기상을 합하였다. 유기상을 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 흡인여과하고, 여액을 농축, 건조하였다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 5% 메탄올/0.5% 암모니아수/디클로로메탄으로 용리의 작업을 수행했다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하여, 순수한 생성물 13.15 g을 수득했다.
10-85
Figure 112022066845063-pct00620
29-3 (1.95 g, 2.46 mmol) 및 10% Pd/C (0.1 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시켰다. 그 후, 수소화 반응기를 밀봉하여 "3회 펌핑 및 3회 충전" 조작을 수행하여, 수소화 반응기의 압력이 0.18 MPa가 되도록 하고, 수득된 용액을 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과하였다. 필터 케이크를 DMF(20 mL × 3)로 세척하여, 생성물 10-85를 수득했다, 수율 100%.
10-86
Figure 112022066845063-pct00621
10-85 (1.28 g, 2.46 mmol), GFLG-LPT (14-128 합성법에 따라 합성, 8.0 g, 8.37 mmol), HBTU (4.20g, 11.07 mmol), HOBT (1.49 g, 11.07 mmol)를 500 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (40 mL)로 용해시킨 후, 30분 동안 0 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (5.69 mL, 34.44 mmol)를 3분에 걸쳐 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(100 mL)으로 흔들고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 반응 용액에서 분말상의 고체를 분리하여, 흡인여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL × 3)로 세척하고, 세척된 필터 케이크를 모아, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 10-86: 8.2g을 수득했다: 수율 100%.
10-87
Figure 112022066845063-pct00622
10-86 (8.2 g, 2.46 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (8 mL), TFA (2.7 mL, 36.90 mmol)로 용해시킨 후, 상온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 회전 증발시켜, 점성의 유성 생성물을 수득한 후, 유성 생성물에 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)를 첨가하였다. 수득된 용액 중 분말상의 고체를 침전 분리하여 흡인여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL × 3)로 세척하고, 세척된 필터 케이크를 수집하고, 메탄올/디클로로메탄(1:4)의 혼합 용매(100 mL), 실리카겔 분말(40g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜, 분말상의 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수와 4.5%-6% 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 구배 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 18-87: 5.56 g을 수득했다: 수율 70%.
10-83
Figure 112022066845063-pct00623
29-3 (9.9g, 12.5019mmol)을 디클로로메탄 (10 mL)으로 일부 용해시킨 후, TFA (18.5716mL, 250.0379mmol)를 첨가하고, 초음파 처리하여, 화합물을 완전히 용해시켰다. 분쇄된 유리 마개를 사용하고, 혼합 용액을 상온에서 교반하였다. TLC 검출 및 인몰리브덴산(phosphomolybdic acid)으로 발색시킨 후, 반응을 완료하였다. 반응 용액을 증발 건조시키고, 디클로로메탄을 제거한 후, 수득된 고체를 에틸 아세테이트 (200 mL)로 용해시켰다. 수성상이 알칼리성이 될 때까지, 포화 소듐 비카보네이트 용액을 첨가하였다. 그 후, 유기상을 분리하고, 수상에 생성물이 없을 때까지 수성상을 에틸 아세테이트로 추출하고, 수득된 유기상을 합하였다. 그 후, 유기 상을 포화 식염수로 3회 세척하고(100 mL × 3), 농축 및 증발 건조하여, 생성물 8.7 g, 추가 할당량 0.1 g을 수득했다.
10-92
Figure 112022066845063-pct00624
10-83 (1.6 g, 2.31 mmol), Fmoc-Lys (Boc) -OH (1.14g, 2.43 mmol), HBTU (1.32g, 3.47 mmol), HOBT (0.47 g, 3.47 mmol)를 500 mL 플라스크에 첨가하고, 적당량의 DMF (40 mL)를 용해하고, 혼합된 용액을 30분 동안 0 ℃에서 교반하여 반응시킨다. 그 후, DIEA (1.72 mL, 10.39 mmol)를 3분에 걸쳐 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(100 mL)으로 흔들고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 반응 용액에서 분말상의 고체를 분리하여, 흡인여과하였다. 필터 케이크를 수집하고, 메탄올/디클로로메탄(1:4) 실리카겔 분말(30g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상의 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1%-5% 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합용액을 사용한 구배 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 10-92: 2.4 g를 수득했다: 수율 92.3%.
10-88
Figure 112022066845063-pct00625
10-92 (0.57 g, 0.506 mmol) 및 10% Pd/C (0.1 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시킨 후, 수소화 반응기를 밀봉하여 "3개의 펌핑 및 3개의 충전" 조작을 수행하여, 수소화 반응기의 압력이 0.18 MPa가 되도록 하고, 수득된 용액을 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과하였다. 필터 케이크를 DMF(20 mL × 3)로 세척하여, 생성물 10-88: 0.434을 수득했다, 수율 100%.
10-89
Figure 112022066845063-pct00626
10-88 (0.434 g, 0.506 mmol), 10-87 (5.56 g, 1.722 mmol), HBTU (0.864g, 2.277 mmol), HOBT (0.307 g, 2.277 mmol)를 500 mL 플라스크에 첨가하고, 적절한 양의 DMF (40 mL)으로 용해시키고, 혼합 용액을 교반하여 30분 동안 0 ℃에서 반응시켰다. 그 후, DIEA (1.171 mL, 7.084 mmol)를 30분에 걸쳐 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(100 mL)으로 흔들고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 반응 용액에서 분말상의 고체를 분리하여, 흡인여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(40 mL × 3)로 세척하고 세척된 필터 케이크를 모아 진공 오븐에서 건조시켜 생성물 10-89: 5.34g를 수득했다, 수율 100%.
10-90
Figure 112022066845063-pct00627
10-89 (5.34 g, 0.506 mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (10 mL)로 용해시키고, 모르폴린 (0.88 mL, 10.12 mmol)을 첨가한 후, 혼합 용액을 1시간 동안 상온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(100 mL)으로 흔들고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 반응 용액에서 분말상의 고체를 분리하여, 흡인여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL × 3)로 세척하고, 세척된 필터 케이크를 수집하고, 메탄올/디클로로메탄(1:4)의 혼합 용매(100 mL)와 용해시켰다. 실리카겔 분말(30 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수와 3%-7% 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 구배 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 10-90: 2.65 g을 수득했다, 수율 51%.
10-71
Figure 112022066845063-pct00628
30-33 (3.5 g, 4.26 mmol), Fmoc-Lys (Boc) -OH (2.2 g, 4.69 mmol), HBTU (2.42 g, 6.39 mmol), HOBT (0.86 g, 6.39 mmol)를 250 mL에 플라스크에 첨가하고, 적당량의 DMF (40 mL)를 용해시키고,30분 동안 0 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (3.17 mL, 19.17 mmol)를 30분에 걸쳐 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(100 mL)으로 흔들고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 반응 용액에서 분말상의 고체를 분리하여, 흡인여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(40 mL x 3)로 세척하고 세척된 필터 케이크를 모아 진공 오븐에서 건조시켜 생성물 10-71: 5.42g을 수득했다, 수율 100%.
10-76
Figure 112022066845063-pct00629
10-71 (5.42 g, 4.26 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (10 mL)로 용해시키고, 모르폴린(7.42 mL, 85.2 mmol)을 첨가한 후, 혼합 용액을 1시간 동안 상온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(100 mL)으로 흔들고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 반응 용액에서 분말상의 고체를 분리하여, 흡인여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL × 3)로 세척하고, 세척된 필터 케이크를 수집하고, 메탄올/디클로로메탄(1:4)의 혼합 용매(100 mL)와 용해시켰다. 수득된 용액을 농축하고, 진공오븐에서 건조하여, 생성물 10-76: 4.473 g을 수득했다, 수율 100%.
10-77
Figure 112022066845063-pct00630
10-76 (4.473 g, 4.26 mmol), 석신산 무수물 (1.29 g, 12.89 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, 적당량의 DMF (40 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 30분 동안 0 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (2.82 mL, 17.04 mmol)를 30분에 걸쳐 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(100 mL)으로 흔들고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 반응 용액에서 분말상의 고체를 분리하여, 흡인여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL × 3)로 세척하고, 세척된 필터 케이크를 수집하고, 메탄올/디클로로메탄(1:4)의 혼합 용매(100 mL)와 용해시켰다. 실리카겔 분말(30 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수와 5%~8% 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액을 이용한 구배 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 10-77: 2.98 g을 수득했다, 수율 61%.
10-97
Figure 112022066845063-pct00631
10-77 (0.28 g, 0.245mmol), 10-90 (2.65 g, 0.62 mmol), HBTU (0.139 g, 0.368 mmol), HOBT (0.049 g, 0.368 mmol)를 250 mL 플라스크게 첨가하고, 적당량의 DMF (40 mL)를 용해시키고, 혼합 용액을 30분 동안 0 ℃에서교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (0.18 mL, 1.1 mmol)를 30분에 걸쳐 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(100 mL)으로 흔들고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 위의 조작을 3번 반복했다. 반응 용액에서 분말상의 고체를 분리하여, 흡인여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(40 mL × 3)로 세척하고 세척된 필터 케이크를 모아 진공 오븐에서 건조시켜 생성물 10-97: 2.8g을 수득했다, 수율 100%.
10-98
Figure 112022066845063-pct00632
10-97 (2.8g, 0.245 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄(8 mL), TFA (0.546 mL, 7.35 mmol)를 용해시키고, 혼합 용액을 상온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 회전 증발시켜, 점성의 유성 생성물을 수득한 후, 유성 생성물에 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)를 첨가하였다. 수득된 용액 중 분말상의 고체를 침전 분리하여 흡인여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL × 3)로 세척하고, 세척된 필터 케이크를 수집하고, 메탄올/디클로로메탄(1:4)의 혼합 용매(100 mL)와 용해시켰다. 실리카겔 분말(30 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수와 5%-10% 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 구배 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 10-98: 1.38 g을 수득했다, 수율: 60%
10-109
Figure 112022066845063-pct00633
10-98 (1.29 g, 0.1134 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (10 mL)로 용해시키고 M-SCM-20K (0.54 g, 0.054 mmol, JenKem에서 구입)를 첨가하여, 혼합 용액을 실온에서 저속 교반으로 1주일 동안 암실에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL)를 첨가하여, 고체를 분리하고 흡인 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(40 mL × 3)로 세척하고, 메탄올/디클로로메탄(1:4)의 혼합 용매 (100 mL), 실리카겔 분말(10g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상의 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수와 6%-12% 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 구배 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 10-109: 0.7 g를 수득했다, 수율 51%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 7.46 - 6.89 (m, 225H), 4.21 - 4.08 (m, 111H), 3.55-3.49 (m, 3882H), 3.08 - 2.64 (m, 209H), 2.45-2.40 (m, 10H), 2.34-2.28 (m, 28H), 0.88-0.83 (m, 60H).
3. 39-17 (화합물 번호 14)의 합성
합성 경로는 다음과 같다
Figure 112022066845063-pct00634
Figure 112022066845063-pct00635
Figure 112022066845063-pct00636
자세한 내용은 다음과 같다:
41-1
Figure 112022066845063-pct00637
Boc-Glu-OH (1.2g, 4.8mmol), GFLF-PCB (30-33 합성법에 따라 합성, 8.2 g, 9.7mmol), HBTU (5.5g, 14.4mmol) 및 HOBT (1.9 g, 14.4mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시키고, 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (7.1 mL, 43.2mmol)를 천천히 적가하고, 수득된 용액을 2시간 동안 계속 반응시킨 후, 상온으로 옮겨 교반하면서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 탈이온수 (200 mL)를 반응 용액에 첨가하고, 담황색 고체를 침전에 의해 분리하고 흡인여과하였다. 여과 케이크를 건조하여, 생성물 22g(칭량)을 수득했다.
41-2
Figure 112022066845063-pct00638
41-1 (22 g, 11.8 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 용해시키고, TFA (26.3 mL, 354mmol)를 적가한 후, 수득된 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 농축시키고, n-헥산 (100 mL)과 메틸 tert-부틸에테르 (300 mL)로 침전시킨 후 흡인여과하였다. 필터 케이크를 디클로로메탄(80 mL), 메탄올(20 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수/3% 메탄올/디클로로메탄-1% 암모니아수/5% 메탄올/디클로로메탄을 사용한 구배 용리의 조작을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고 농축하여, 생성물 5.9 g, 수율 70.2%를 수득했다.
41-4
Figure 112022066845063-pct00639
41-2 (5.9g, 3.36mmol), Boc-LC-OH (0.88 g, 3.36mmol), HBTU (1.9g, 5.04mmol) 및 HOBT (0.68 g, 5.04mmol)를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (2.5 mL, 15.12mmol)를 천천히 적가하고, 수득된 용액을 2시간 동안 계속 반응시킨 후, 상온으로 옮겨 교반하면서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산 (100 mL)과 메틸 tert-부틸에테르 (300 mL)를 수득된 침전 용액에 첨가하여 고체를 분리하고, 흡인여과하였다. 필터 케이크를 진공에서 건조시켰다.
41-6
Figure 112022066845063-pct00640
41-4 (7.9 g, 3.9 mmol)를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 용해시키고, TFA (8.7 mL, 117mmol)를 적가한 후, 수득된 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 농축하고, n-헥산 (100mL)과 메틸 tert-부틸에테르(300 mL)로 침전시키고, 흡인여과하여, 고체 생성물을 분리하여 건조시켰다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수:3% 메탄올/디클로로메탄 - 1% 암모니아수:5% 메탄올/디클로로메탄으로 구배 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고 농축하여, 생성물을 수득했다.
24-205
Figure 112022066845063-pct00641
반응물 15-91(35-3 합성법에 따라 합성, 0.33g, 0.1503mmol) 및 10% Pd/C (30mg)를 마이크로 반응기에 첨가하고, DMF (30 mL), H2 (20psi)를 투입한 후, 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 필터 케이크로서 규조토를 흡인여과하여 Pd/C를 제거한 후, 규조토를 DMF로 4회 세척하여, 다음 반응에 사용되는 24-205의 DMF 용액을 수득했다.
41-7
Figure 112022066845063-pct00642
41-6 (0.84g, 0.44mmol), 24-247 (24-205 합성법에 따라 합성, 0.88 g, 0.091mmol), HBTU (0.07g, 0.546mmol) 및 HOBT (0.2 g, 0.546mmol)를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시킨 후, 수득된 용액을 -5 ℃에서 30분간 교반하였다. 그 후, DIEA (0.27mL, 1.638mmol)를 천천히 적가하고, 수득된 용액을 2시간 동안 계속 반응시킨 후, 상온으로 옮겨 교반하면서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산 (100 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (300 mL)로 반응 용액을 침전시켜 고체를 분리하고, 흡입여과하였다. 필터 케이크를 진공에서 건조시켰다.
41-9
Figure 112022066845063-pct00643
반응물 41-7 (0.7 g, 0.082 mmol)에 DMF (30 mL)를 용해시키고, 모르폴린(0.214mL, 2.46mmol)을 첨가한 후, 반응이 종료될 때까지 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL)와 n-헥산 (200 mL)을 첨가하여 침전시켜 분말 생성물을 수득하고, 흡인 여과하였다. 컬럼 크로마토그래피, 건조 샘플 로딩 및 1% 암모니아수:5% 메탄올/디클로로메탄--1% 암모니아수:12% 메탄올/디클로로메탄으로 구배 용리의 작업을 수행하여, 생성물 0.5g을 수득했다.
39-1
Figure 112022066845063-pct00644
Boc-Asp-OH (damas-beta에서 구입, 0.18g, 0.8mmol), GFLG-SB7 (25-132 합성법에 따라 합성됨, 1.5 g, 1.68mmol), HBTU (0.9 g, 2.4mmol) 및 HOBT (0.32 g, 2.4mmol)를 250 mL의 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (1.19 mL, 7.2 mmol)를 천천히 적가하고, 수득된 용액을 2시간 동안 계속 반응시킨 후, 상온으로 옮겨 교반하면서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 탈이온수 (200 mL)를 반응 용액에 첨가하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL × 3)로 3회 추출하고, 수득된 유기상을 합하였다. 유기상을 포화 염화나트륨 용액 (200 mL)으로 2회 세척하고, 농축하고 증발 건조시켰다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수:2% 메탄올/디클로로메탄-1% 암모니아수:3% 메탄올/디클로로메탄으로 구배 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시켜, 다음 반응에 사용되는 생성물을 수득했다.
39-5
Figure 112022066845063-pct00645
39-1 (1.5 g, 0.8mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄(20 mL)으로 용해시키고, TFA (1.78 mL, 24mmol)을 첨가한 후, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 농축하고, 포화 탄산수소나트륨 수용액(200 mL), 에틸아세테이트(100 mL)로 추출하고, 유기층을 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 3회 추출하고, 수득된 유기상을 합하였다. 유기상을 포화 염화나트륨 용액 (200 mL)으로 2회 세척하고, 증발 건조시켜, 생성물 1.1g을 수득했다, 수율 73.3%.
39-6
Figure 112022066845063-pct00646
39-5(1.1g, 0.58mmol), Fmoc-Lys (Boc) -OH (0.28 g, 0.609mmol), HBTU (0.32 g, 0.87mmol) 및 HOBT (0.11 g, 0.87mmol)를 250 mL의 둥근 바닥플라스크에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (0.43 mL, 2.61mmol)를 천천히 적가하고, 수득된 용액을 2시간 동안 계속 반응시킨 후, 상온으로 옮겨 교반하면서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 탈이온수 (200 mL), 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추출하고, 유기층을 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 3회 추출하고, 수득된 유기상을 합하였다. 유기상을 포화 염화나트륨 용액 (200 mL)으로 2회 세척하고, 농축하고 증발 건조시켜, 생성물 1.3 g을 수득했다.
39-8
Figure 112022066845063-pct00647
39-6 (1.5g, 0.58 mmol)을 250 mL 둥근 바닥플라스크에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시키고, 모르폴린 (1.51 mL, 17.4 mmol)을 첨가하고, 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 탈이온수 (200 mL), 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추출하고, 유기층을 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 3회 추출하고, 수득된 유기상을 합하였다. 유기상을 포화 염화나트륨 용액 (200 mL)으로 2회 세척하고, 농축하고 증발 건조시키고, 수득된 생성물을 다음 반응에 사용하였다.
39-10
Figure 112022066845063-pct00648
39-8 (0.58mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시켰다. 그 후, DIEA (0.38ml, 2.32mmol)를 첨가한 후, 혼합 용액을 상온에서 30분간 교반하여 반응시켰다. 무수 석신산 (0.17g, 2.32mmol)을 첨가하고, 수득된 용액을 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 탈이온수 (200 mL), 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추출하고, 유기층을 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 3회 추출하고, 수득된 유기상을 합하였다. 유기상을 포화 염화나트륨 용액 (200 mL)으로 2회 세척하고, 농축하고 증발 건조시키고, 수득된 생성물을 다음 반응에 사용하였다.
39-14
Figure 112022066845063-pct00649
반응물 41-9 (0.5g, 0.06 mmoL), 39-10 (0.134g, 0.060mmoL), HBUT (0.034g, 0.09mmoL), HOBT (0.012g, 0.09mmoL)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (0.044mL, 0.27mmoL)를 천천히 적가하고, 1시간 후, 수득된 용액을 상온으로 옮겨 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 메틸 tert-부틸 에테르 (100mL)와 n-헥산 (200 mL)을 침전을 위한 반응 용액에 첨가하여, 분말 생성물을 수득했다. 컬럼 크로마토그래피, 건조 샘플 로딩 및 1% 암모니아수:4% 메탄올/디클로로메탄--1% 암모니아수:10% 메탄올/디클로로메탄으로 용리의 작업을 수행했다. 용리 생성물을 증발 건조시켜, 생성물 0.5g, 수율 80%를 수득했다.
39-15
Figure 112022066845063-pct00650
39-14 (0.5g)를 초음파 조건에서 디클로로메탄 (5mL), TFA (0.106mL, 1.42mmol)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 농축하고, 메틸 tert-부틸 에테르(100 mL) 및 n-헥산(200 mL)을 침전을 위해 수득된 용액에 첨가하여, 분말 생성물을 수득했다. 컬럼 크로마토그래피, 건조 샘플 로딩 및 1% 암모니아수:6% 메탄올/디클로로메탄--1% 암모니아수:10% 메탄올/디클로로메탄으로 구배 용리의 작업을 수행했다.
1H-NMR (600MHz, DMSO-d 6) δ 10.19 - 10.15 (m, 7H), 9.11 - 8.89 (m, 7H), 8.36 - 8.00 (m, 37H), 7.94 - 7.85 (m, 13H), 7.54 - 7.47 (m, 11H), 7.30 - 7.11 (m, 89H), 6.74 - 6.63 (m, 2H), 5.87 - 5.78 (m, 6H), 4.66 - 3.37 (m, 118H), 3.29 - 2.53 (m, 123H), 2.45 - 2.39 (m, 24H), 2.34 - 2.18 (m, 59H), 2.14 - 1.42 (m, 107H), 0.94 - 0.76 (m, 72H).
39-17
Figure 112022066845063-pct00651
반응물 39-15 (1g)를 DMF 용액 (20 mL)에 용해시킨 후, M-SCM-20K (0.4g)를 첨가하고, 수득된 용액을 어두운 곳에서 저속 교반으로 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL)와 n-헥산 (100 mL)으로 침전시켜 고체를 분리하고, 흡입여과하였다. 필터 케이크를 디클로로메탄 (50 mL)으로 용해하고, 실리카 겔 분말을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피, 건조 샘플 로딩 및 디클로로메탄-1% 암모니아수:6% 메탄올/디클로로메탄으로 구배 용리의 작업을 수행하였다. 용리 생성물을 수집하고, 증발 건조시킨 후, 무수 에탄올 (10 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 초음파 처리하여, 균일한 상을 수득한 후, n-헥산 (50 mL)을 첨가하여 침전시켰다. 이러한 침전 조작을 3회 반복하였다. 침전물을 진공 건조하여, 생성물 0.15g을 수득했다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 10.20 - 10.12 (m, 2H), 9.00 - 8.90 (m, 2H), 8.16 - 7.83 (m, 40H), 7.42 - 7.04 (m, 123H), 4.64 -4.13 (m, 129H), 4.03- 3.97 (m, 35H), 3.81 - 3.80 (m, 26H), 3.70 - 3.66 (m, 149H), 3.51- 3.50 (m, 876H), 3.27 - 2.64 (m, 20H), 2.43 - 2.24 (m, 54H), 2.17- 1.41 (m, 24H), 0.97 - 0.73 (m, 72H).
4. 43-27 (화합물 번호 6)의 합성
합성 경로는 다음과 같다
Figure 112022066845063-pct00652
Figure 112022066845063-pct00653
Figure 112022066845063-pct00654
Figure 112022066845063-pct00655
34-15
Figure 112022066845063-pct00656
Boc-L-Lys (Fmoc)-OH (Aladdin에서 구입, 2.78 g, 5.927 mmol), 22-181 (5.4 g, 5.927 mmol), HBTU (3.38 g, 8.891 mmol), HOBT (1.2 g, 8.891 mmol)를 100 mL의 플라스크에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시킨 후, 수득된 용액을 -5 ℃에서 약 30분간 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (5.878 mL, 35.565 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 3시간 동안 교반하면서 -5 ℃에서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 탈이온수 (200 mL) 및 에틸아세테이트 (200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(150 mL x 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 1)로 세척하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 건조하여 생성물 34-15를 수득했다: 8.07g.
34-17
Figure 112022066845063-pct00657
34-15 (8.0 g, 5.927 mmol)을 500 mL 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (15 mL)으로 용해시키고, 트리플루오로아세트산(4.4 mL, 59.271 mmol)을 첨가하고, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하면서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 소량 농축하고, n-헥산 (150 mL)을 층에 첨가하여 수득된 용액을 교반하고, 상청액을 버리고, n-헥산 (150 mL)을 더 낮은 유성 생성물에 첨가하고, 이러한 조작을 6회 반복하였다. 최종적으로 점성이 있는 유상의 생성물을 수득하고 건조하여, 생성물 34-17을 수득했다: 7.5 g.
34-19
Figure 112022066845063-pct00658
34-17 (7.5 g, 5.92 mmol), 34-18 (25-102의 합성법에 따라 합성, 3.5 g, 7.11 mmol), HBTU (3.36g, 8.88 mmol), HOBT (1.2 g, 8.88 mmol)를 500 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시킨 후, 수득된 용액을 -5 ℃에서 약 30분간 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (8.8 mL, 53.28 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 3시간 동안 교반하면서 -5 ℃에서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 탈이온수 (200 mL) 및 에틸아세테이트 (200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(150 mL x 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수 (200 mL × 1)로 세척하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 건조하여, 생성물 34-19를 수득했다: 10.3g.
34-21
Figure 112022066845063-pct00659
34-19 (10.3 g, 5.92 mmol)를 500 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시키고, 모르폴린 (7.8 mL, 88.8 mmol)을 첨가한 후, 수득된 용액을 상온에서 1시간 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 식염수(150 mL)와 에틸 아세테이트 (250 mL)로 추출하여, 유기층을 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(200mL x1)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수 용액(200 mL × 2)으로 세척하고, 농축하고 증발 건조시켰다. 그 후, 수득된 건조 생성물을 메탄올(30 mL) 및 디클로로메탄(120 mL)에 용해시키고, 실리카겔 분말(15 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 3% 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하여, 생성물 34-21: 5.37 g을 수득했다, 수율 60%.
43-8
Figure 112022066845063-pct00660
34-21 (1.6 g, 1.06 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (30 mL)으로 용해시키고, 트리에틸아민 (0.29 mL, 2.12 mmol)을 첨가하고, 0 ℃에서 15분 동안 교반한 후, 페닐 클로로포르메이트(0.13 mL, 1.06 mmol)를 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0 ℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 디클로로메탄 (250 mL)과 포화 염화나트륨 용액 (200 mL)으로 추출하고, 유기층을 분리하였다. 수성상을 디클로로메탄 (200 mL × 1)으로 세척하고, 수득된 유기상을 합쳤다. 실리카겔 분말 (20g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 4% 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하여, 생성물 43-8: 0.9 g을 수득했다, 수율 56%.
43-11
Figure 112022066845063-pct00661
43-8 (0.9 g, 0.55 mmol), 34-21 (0.83 g, 0.55 mmol)을 100 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시키고, 트리에틸아민 (0.0771 mL, 0.55 mmol)을 첨가하고, 혼합 용액을 밤새 80 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 에틸아세테이트(200 mL)와 포화식염수(200 mL)로 추출하고, 유기층을 분리하였다. 유기상을 포화 식염수 (150 mL)로 세척하고, 실리카겔 분말 (10 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수 및 5%-36%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하여, 생성물 43-11: 44.4 g을 수득했다, 수율 57%.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.57 - 8.48 (m, 2H), 8.37 - 8.24 (m, 2H), 8.21 - 8.12 (m, 2H), 8.08 - 7.95 (m, 4H), 7.94 - 7.80 (m, 4H), 7.76 - 7.65 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.44 - 7.25 (m, 40H), 7.24 - 7.10 (m, 11H), 7.01 - 6.81 (m, 2H), 5.17 - 5.01 (m, 15H), 4.54 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.41 - 4.16 (m, 10H), 3.94 - 3.86 (m, 4H), 3.78 - 3.68 (d, J = 4.4 Hz, 4H), 3.66 - 3.49 (m, 13H), 3.45 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.42 - 3.36 (m, 6H), 3.24 - 3.15 (d, J = 5.5 Hz, 4H), 3.08 - 2.97 (m, 2H), 2.94 - 2.86 (m, 4H), 2.83 - 2.71 (m, 3H), 2.46 - 2.32 (m, 9H), 2.23 - 2.11 (m, 4H), 1.81 - 1.68 (m, 4H), 1.68 - 1.53 (m, 5H), 1.53 - 1.42 (m, 7H), 1.34 (d, J = 5.9 Hz, 18H), 1.31 - 1.10 (m, 19H), 0.93 - 0.75 (m, 13H).
43-15
Figure 112022066845063-pct00662
34-23 (43-11의 합성법에 따라 합성, 0.377 g, 0.1236 mmol) 및 10% Pd/C (0.0400 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF (30 mL)에 용해시키고, 수소를 1.8 MPa의 압력으로 도입한 후, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 꺼내 규조토로 여과하고, 다음 반응을 위한 원료로서 규조토를 DMF (20 mL x 3)로 세척하였다.
43-21
Figure 112022066845063-pct00663
43-15 (0.288 g, 0.1236 mmol), 37-2 (2.0 g, 1.063 mmol), HBTU (0.56 g, 1.4832 mmol), HOBT (0.2 g, 1.4832 mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (40 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 20분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (0.74 mL, 4.4496 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 교반하여 30분 동안 -5 ℃에서 반응시킨 후, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산 (120 mL)과 메틸 tert-부틸에테르 (30 mL)로 3회 침전시켜, 점성의 유성 생성물을 수득했다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (250 mL)를 유성 생성물에 첨가하여 고체를 분리하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL × 3)로 세척하고, 디클로로메탄 (150 mL) 및 메탄올 (30 mL)로 용해하고, 실리카 겔 분말 (10 g)을 첨가하고, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수 및 5%-6%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조시켜, 생성물 43-21: 1.6g을 수득했다, 수율 75%.
43-24
Figure 112022066845063-pct00664
43-21 (1.6 g, 0.09 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 용해시키고, 트리플루오로아세트산(1 mL, 13.47 mmol)을 첨가하고, 혼합 용액을 교반하여 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 소량 농축하고, 메틸 tert-부틸 에테르 (150 mL)를 농축액에 첨가하여 고체를 분리하고, 흡인 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL×3)로 세척하고, 메탄올 (30 mL), 디클로로메탄(120 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말 (20 g)을 첨가하고, 수득된 용액을 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수 및 6%-8%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 43-24: 1.11g를 수득했다, 수율 73%.
43-27
Figure 112022066845063-pct00665
43-24 (0.4 g, 0.023 mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고 DMF (25 mL)로 용해시키고, M-SCM-40K (1.983 g, 0.048 mmol)를 첨가하고, 초음파 처리하여 반응물을 용해시키고, 혼합 용액은 실온에서 저속 교반으로 암실에서 7일 동안 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산 (150 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL)를 첨가하고, 상층액을 버리고, n-헥산(150 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL)를 하부 액체에 첨가하였다. 이러한 조작을 3회 반복하여, 점성 유성 생성물을 수득했다. 그 후, 유성 생성물에 메틸 tert-부틸 에테르(120 mL)를 첨가하여 고체를 분리하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL × 3)로 세척하고, 메탄올 (30 mL) 및 디클로로메탄(120 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말 (15 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수 및 5%-6%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시켜 고체를 수득했다. 고체를 진공 오븐에서 1시간 동안 건조시키고, 무수 에탄올 (5mL)과 디클로로메탄 (20 mL)으로 용해시켰다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르(80 mL)를 수득된 용액에 첨가하여, 고체를 분리하고 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL × 2)로 세척하고, 진공 오븐에서 건조하여, 생성물 43-27: 0.9 g을 수득했다, 수율: 38%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 10.16 - 10.13 (m, 5H), 8.99 - 8.93 (m, 6H), 8.29 - 7.95 (m, 84H), 7.92 - 7.85 (m, 14H), 7.59 - 7.44 (d, J = 3.3 Hz, 70H), 7.33 - 7.03 (m, 154H), 4.53 - 4.41 (m, 55H), 3.72 - 3. 41 (m, 7336H), 3.20 - 3.03 (m, 123H), 2.42 - 2.38 (m, 25H), 2.36 - 2.15 (48, 71H), 1.94 - 1.69 (m, 48H), 1.65 - 1.39 (m, 71H), 1.36 - 1.08 (m, 235H), 0.99 - 0.68 (m, 124H), 0.56 - 0.39 (m, 16H).
5. 27-134 (화합물 번호 18)의 합성
합성 경로는 다음과 같다
Figure 112022066845063-pct00666
Figure 112022066845063-pct00667
Figure 112022066845063-pct00668
27-120
Figure 112022066845063-pct00669
27-119 (35-3의 합성법에 따라 합성, 1g, 0.7345mmol)가 로딩된 플라스크에 DMF (10 mL)를 첨가하고, 초음파 진동을 가하여 화합물을 완전히 용해시키고, 모르폴린 (0.64 mL, 7.345 mmol)을 첨가하고, 혼합 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 포화 탄산수소나트륨 용액 (100 mL)과 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출하고, 정치하여 층을 형성하고, 유기층을 분리하였다. 그 후, 수성 상을 에틸 아세테이트(200 mL*3)로 세척하고, 수득된 유기 상을 합하였다. 유기상을 증발 건조시키고, 약 50 mL로 농축한 후, 포화 염화나트륨 용액 (100mL*3)으로 세척하였다. 수득된 유기상을 합했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 27-120을 수득했다(1.4317g, 100%).
27-121
Figure 112022066845063-pct00670
석신산(0.039g, 0.3339mmol), HBTU (0.3798g, 1.0017mmol), HOBT (0.1354g, 1.0017mmol)를 27-120 (0.8368g, 0.7345mmol)이 로딩된 플라스크에 첨가하고, 적당량의 DMF로 용해시킨 후, 수득된 용액을 -5 ℃에 두고, DIEA (0.50mL, 3.0051mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 30분 동안 반응시킨 후, 상온으로 옮기고, 교반하여 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 과량의 포화 탄산수소나트륨 용액을, 용액이 알칼리성이 될 때까지 첨가하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출하고, 정치하여 층을 형성하고, 유기층을 분리하였다. 그 후, 수성 상을 에틸 아세테이트(200 mL*3)로 세척하고, 수득된 유기 상을 합하였다. 유기상을 증발 건조시키고, 약 100 mL로 농축시켰다. 농축 용액을 꺼내고, 포화 염화나트륨 용액(100mL*3)으로 세척하고, 수득된 유기상을 합하였다. 유기상을 증발 건조시키고, 메탄올/디클로로메탄(1:4)의 혼합 용매(100mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말 (50 mL)을 첨가하고, 증발 건조, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수 및 6% 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리하는 조작을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 건조하여, 생성물 27-121 (0.5811g, 73.72%)을 수득했다.
27-123
Figure 112022066845063-pct00671
27-121 (0.5811g, 0.2462 mmol)을 수소화 반응기에 첨가하고, Pd/C (0.1 g) 및 DMF (20 mL)를 첨가하고, 1.4 MPa의 압력으로 수소를 투입한 후, 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과하였다. 필터 케이크를 DMF (15 mL x 3)로 세척하고, 여액을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣어, 다음 반응의 원료로서 27-123을 수득했다.
27-128
Figure 112022066845063-pct00672
35-12 (37-2의 합성법에 따라 합성, 1.8g, 0.9566mmol), HBTU (0.54g, 1.4348 mmol), HOBT (0.19g, 1.4348 mmol)을 27-123 (0.1782g, 0.1087mmol)이 로딩된 플라스크에 첨가하고, 적당량의 DMF로 용해시킨 후, 수득된 용액을 -5 ℃에 두고, DIEA (0.23mL, 4.3045mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 30분 동안 반응시킨 후, 상온으로 옮기고, 교반하여 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 메틸 tert-부틸 에테르:n-헥산=1:5의 혼합 용액(250 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 정치하고, 상청액을 버리고, 위의 조작을 3회 반복하였다. 그 후, 수득된 용액에 메틸 tert-부틸 에테르 (200 mL)를 첨가하여 고체를 분리하고, 흡인 여과하였다. 그 후, 필터 케이크를 메탄올/디클로로메탄(1:4)의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말 (40 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 증발 건조시켜 분말상의 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수 및 3-5%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공오븐에서 건조하여, 생성물 27-128 (0.8 g, 44.69 %)을 수득했다.
27-132
Figure 112022066845063-pct00673
27-128 (0.8g, 0.0483mmol)이 로딩된 플라스크에 디클로로메탄을 첨가하고, 초음파 진동을 가하여 화합물을 완전히 용해시킨 후, TFA (0.107 mL, 1.4503 mmol)를 첨가하고, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액 중의 디클로로메탄을 증발시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어서 고체를 분리하고, 흡인 여과하였다. 필터 케이크를 메탄올/디클로로메탄(1:4)의 혼합 용매 (100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말 (40 mL)을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 크로마토그래피 및 1% 암모니아수와 7~10% 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합용액으로 용리의 조작을 수행하였다. 그 후, 용리물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조하여, 생성물 27-132 (0.5633g, 71.34%)를 수득했다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 10.21-10.17 (m, 4H), 9.15 - 8.87 (m, 8H), 8.47 - 7.69 (m, 91H), 7.60 - 6.88 (m, 202H), 6.78 - 6.62 (m, 4H), 5.93 - 5.60 (m, 13H), 5.35-5.29 (m, 1H), 4.57-4.53 (m, 9H), 4.27 (m, 23H), 4.07 - 3.22 (m, 166H), 3.21 - 2.85 (m, 40H), 2.85 - 2.53 (m, 28H), 2.44 - 2.04 (m, 87H), 2.04 - 1.95 (m, 7H), 1.83-1.79 (m, 41H), 1.55-1.49 (m, 55H), 1.38 - 0.99 (m, 92H), 0.86-0.82 (m, 103H), 0.52-0.47 (m, 39H).
27-134
Figure 112022066845063-pct00674
27-132 (0.2633 g, 0.01610 mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시키고, M-SCM-20K (0.7955 g, 0.03703 mmol, JenKem에서 구입)를 첨가하고, 초음파 진동을 가해 화합물을 용해시킨 후, 혼합 용액을 실온에서 저속 교반으로 1주일 동안 암실에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 메틸 tert-부틸 에테르 (200 mL)와 n-헥산 (70 mL)을 반응 용액에 첨가하여 고체를 분리하고, 흡인 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(40 mL × 3)로 세척하고, 메탄올/디클로로메탄(1:4)의 혼합 용매 (100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(50 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 증발 건조시켜, 분말상의 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수 및 7%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조하여, 생성물 27-134 (0.5876g, 61.85 %)를 수득했다.
1H-NMR (600MHz, DMSO-d 6) δ9.06-9.02 (m, 19H), 8.98-8.92 (m, 11H), 8.28 - 7.93 (m, 69H), 7.87-7.82 (m, 25H), 7.55-7.49 (m, 32H), 7.44 - 6.95 (m, 116H), 6.92-6.88 (m, 10H), 6.76 - 6.63 (m, 26H), 5.40 - 5.25 (m, 29H), 4.62 - 4.43 (m, 38H), 4.39 - 4.07 (m, 64H), 3.72-3.68 (m, 3897H), 3.19 - 3.10 (m, 20H), 2.91-2.86 (m, 19H), 2.83 - 2.57 (m, 62H), 2.36 - 2.06 (m, 66H), 2.05 - 1.89 (m, 38H), 1.51-1.45 (m, 50H), 1.39 - 0.97 (m, 242H), 0.95 - 0.64 (m, 87H).
6. 44-2 (화합물 번호 3)의 합성
합성 경로는 다음과 같다
Figure 112022066845063-pct00675
Figure 112022066845063-pct00676
Figure 112022066845063-pct00677
25-189
Figure 112022066845063-pct00678
7-에틸-10-하이드록시캄프토테신(SN38로도 지칭됨, 20 g, 50.9684 mmol) 및 tert-부틸 다이페닐클로로실란 (Innochem에서 구입, TBDPSCl, 79.5 mL, 305.8104 mmol)을 1L 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (250 mL)과 트리에틸아민 (Et3N, 42.5 mL, 305.8104 mmol)으로 용해시킨 후, 수득된 용액을 37 ℃의 오일 욕에 넣고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 농축하고, 감압 하에 증발 건조하여, 디클로로메탄을 제거하고, 수득된 고체를 디클로로메탄 (20 mL)에 용해시키고, 수득된 용액을 n-헥산(200 mL)으로 침전시켜 n-헥산(200 mL) 고체 생성물을 분리하고 여과하였다. 필터 케이크를 n-헥산 (100 mL)으로 세척하고, 여액을 2℃-8℃의 냉장고에 30분간 보관한 후, 꺼내어 여과하고, 필터 케이크를 n-헥산 (100 mL)으로 세척하였다. 이러한 조작을 5회 반복하여, 고체 생성물을 수득했다. 고체 생성물을 오븐에서 건조시켜, 생성물 25-189: 23.9 g를 수득했다, 수율: 74.34%.
25-199
Figure 112022066845063-pct00679
Boc-글리신 (Boc-Gly-OH, 7.9647 g, 45.4661 mmol), 25-189 (23.9 g, 37.8884 mmol) 및 DMAP (0.9258 g, 7.5777 mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (100 mL)으로 용해시키고, 혼합 용액을 30분 동안 0℃에서 교반한 후, 디사이클로헥실카르보디이미드(DCC, 15.6350 g, 75.7767 mmol)를 첨가하고, 수득된 용액을 3시간 동안 0℃에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 여과하여 DCC를 제거하고, 필터 케이크를 디클로로메탄(60 mL)으로 세척하고, 여액을 수집하고, 증발 건조시켜, 생성물 25-199: 29.8549 g를 수득했다.
25-200
Figure 112022066845063-pct00680
25-199 (29.8549 g, 37.8884 mmol)을 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (20 mL)으로 용해시키고, TFA (42.2 mL, 568.326 mmol)를 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 교반하여 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압 하에 농축시키고 증발시켜, 디클로로메탄을 제거하고, 수득된 용액을 n-헥산 (150 mL)으로 침전시키고, 상청액을 버린 후, 하부 유성 용액을 n-헥산(150 mL)으로 침전시켰다. 이러한 조작을 3회 반복하여, 유성 고체를 수득했다. 유성 고체를 디클로로메탄 (20 mL)으로 용해하고, 실리카겔 분말(100 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1%-4% 메탄올:99%-96% 디클로로메탄)으로 용리의 작업을 수행했다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 25-200: 23.4557 g을 수득했다, 수율: 90.04%.
25-211
Figure 112022066845063-pct00681
Boc-Gly-OH(알라딘에서 구입, 3.0 g, 17.1252 mmol), HBTU (9.7418 g, 25.6878 mmol), HOBT (3.4709 g, 25.6878 mmol) 및 H-Glu (OBzl)- OBzl·TosOH (8.5554 g, 17.1252 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (12.7 mL, 77.0634 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 1시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 2시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2 L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 소듐 비카보네이트 용액 (400 mL)과 에틸 아세테이트 (300 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 추출을 위해 흔든 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 그 후, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL)을 유기상에 추가로 첨가하고, 수득된 용액을 추출을 위해 진탕시킨 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 이어서, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 추출을 위해 진탕시킨 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 유기상을 농축하고 증발 건조시키고, 수득된 고체를 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매 (50 mL)로 용해하고, 실리카겔 분말 (50 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발 조작, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1%-2% 메탄올:99%-96% 에틸 아세테이트)으로 용리을 수행했다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 25-211: 6.9213 g을 수득했다, 수율: 83.41%.
25-220
Figure 112022066845063-pct00682
25-211 (2.6890 g, 5.5382 mmol) 및 10% Pd/C (50 mg)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시켰다. 수소화 반응기를 밀폐하고, 1.6 MPa의 압력으로 수소를 주입한 후, 혼합 용액을 상온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 취출하여, 다진 규조토를 채운 샌드 코어 깔대기에 균일하게 적가한 후, 흡인여과하였다. 임의의 생성물을 함유하지 않을 때까지 DMF(60 mL)로 규조토를 세척하여, 반응 생성물 용액을 수득했다.
25-222
Figure 112022066845063-pct00683
25-220 (1.6853 g, 5.5382 mmol), HBTU (6.3009 g, 16.6146 mmol), HOBT (2.2450 g, 16.6146 mmol) 및 25-200 (8.3810 g, 12.1841 mmol)을 500 mL의 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해하고, 혼합 용액을 -30분 동안 5 ℃에서 교반하였다. 그 후, DIEA (8.2 mL, 49.8438 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 1시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 2시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 우선 1L 분별 깔때기에 옮기고, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL)과 에틸 아세테이트 (200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 추출을 위해 흔든 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 그 후, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 진탕시켜 추출한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 이어서, 탈이온수 (300mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 25-222: 9.0 g을 수득했다, 수율: 98.85%.
MALDI-TOF MS: [M - H+]1641.76.
25-224
Figure 112022066845063-pct00684
25-222 (9.0 g, 5.4745 mmol)을 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 용해시키고, TFA (6.1 mL, 82.1178 mmol)를 교반하면서 첨가하고, 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압농축하고 증발시켜 디클로로메탄을 제거한 후, 반응 용액을 2L 분별 깔대기로 옮기고, 포화 염화나트륨 용액 (400 mL) 및 에틸아세테이트 (200 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 그 후, 탈이온수 (300 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하여 추출한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 유기상을 농축하고 증발 건조시키고, 수득된 고체를 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매 (70 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말 (50 mL)을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(2%-7% 메탄올:98%-93% 에틸 아세테이트)로 용리의 작업을 수행했다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 25-224: 6.0 g을 수득했다, 수율: 70.99%.
MALDI-TOF MS: [M + Na+]1565.64.
25-203
Figure 112022066845063-pct00685
Fmoc-Glu (OtBu)-OH (Ark Pharm에서 구입, 4.0646 g, 9.5134 mmol), HBTU (5.4118 g, 14.2701 mmol), HOBT (1.9282 g, 14.2701 mmol) 및 25-201(22-181의 합성 방법에 따라 합성, 9.1 g, 9.9890 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (60 mL)로 용해시킨 후, 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (7.1 mL, 42.8103 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 2시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 우선 2L 분별 깔때기에 옮기고, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL)과 에틸 아세테이트 (200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 추출을 위해 흔든 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 그 후, 탈이온수 (300 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하여 추출한 후, 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 25-203: 12.5430 g을 수득했다.
25-210
Figure 112022066845063-pct00686
25-203 (12.5430 g, 9.5134 mmol)을 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 용해시키고, 트리플루오로아세트산(TFA, 10.6 mL, 142.701 mmol)을 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 교반하여, 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압 하에 농축하고 증발시켜, 디클로로메탄을 제거하였다. 그 후, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL) 및 에틸 아세테이트 (300 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하여, 수상을 분리하였다. 그 후, 포화 염화나트륨 용액 (300mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 다음으로, 탈이온수(300mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고 증발 건조시키고, 수득된 고체를 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매 (50 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(50 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1%-5% 메탄올:99%-95% 디클로로메탄)의 용리의 작업을 수행했다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 25-210: 9.0 g을 수득했다, 수율: 74.94%.
MALDI-TOF MS: [M + Na+]1284.24.
25-221
Figure 112022066845063-pct00687
25-210 (9.0 g, 7.1295 mmol), HBTU (3.9376 g, 10.3828 mmol), HOBT (1.4029 g, 10.3828 mmol) 및 에틸렌디아민 일수화물(TCI에서 구입, 0.2 mL, 3.4609 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (60 mL)로 용해시킨 후, 수득된 용액을 -5 ℃에서 약 30분간 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (5.1 mL, 31.1483 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 2시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 1L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 염화나트륨 용액 (300mL) 및 에틸 아세테이트(300 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 진탕 추출하여, 수상을 분리하였다. 그 후, 포화 염화나트륨 용액 (300mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 다음으로, 탈이온수(300mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 증발 건조시키고, 오븐에서 건조시켜, 생성물 25-221: 8.8211g을 수득했다.
MALDI-TOF MS: [M + Na+]2570.22.
25-226
Figure 112022066845063-pct00688
25-221 (8.8211 g, 3.4609 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (10 mL)로 용해시키고, 모르폴린(4.5 mL, 51.9135 mmol)을 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 1L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL) 및 에틸 아세테이트(300 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 진탕 추출하여, 수상을 분리하였다. 그 후, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 다음으로, 탈이온수(300 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 증발 건조시키고, 오븐에서 건조시켜, 생성물 25-226: 7.2828 g을 수득했다.
MALDI-TOF MS: [M + Na+]2125.39.
25-227
Figure 112022066845063-pct00689
25-226 (3.2368 g, 1.5382 mmol), HBTU (1.7500 g, 4.6146 mmol), HOBT (0.6235 g, 4.6146 mmol) 및 25-207 (25-102의 합성 방법에 따라 합성됨)(1.7426 g, 3.5379 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (60 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (2.3 mL, 13.8438 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 1시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 2시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 2L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 탄산수소나트륨 용액 (300 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하여 수상을 분리하였다. 그 후, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 다음으로, 탈이온수(300 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고 증발 건조시키고, 수득된 고체를 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매 (50 mL)로 용해하고, 실리카겔 분말 (50 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1% 암모니아수:2%-6% 메탄올:97%-93% 디클로로메탄)으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 25-227: 2.0618 g을 수득했다, 수율: 43.9%.
MALDI-TOF MS: [M + Na+]3076.43.
25-236
Figure 112022066845063-pct00690
25-227 (0.6519 g, 0.2135 mmol) 및 10% Pd/C (50 mg)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시켰다. 수소화 반응기를 밀폐하고, 1.6 MPa의 압력으로 수소를 주입한 후, 혼합 용액을 상온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 취출하여, 다진 규조토를 채운 샌드 코어 깔대기에 균일하게 적가한 후, 흡인여과하였다. 규조토를 DMF (50 mL)로 세척하여, 임의의 생성물이 없어질 때까지, 반응 생성물 용액을 수득했다.
25-238
Figure 112022066845063-pct00691
25-236 (0.4980 g, 0.2135 mmol), HBTU (0.9716 g, 2.5620 mmol), HOBT (0.3462 g, 2.5620 mmol) 및 25-224 (2.9 g, 1.8784 mmol)의 용액을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF(30 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 30분 동안 -5℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (1.3 mL, 7.6860 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 3시간 동안 교반하면서 -5 ℃에서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 1L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 진탕 추출하여, 수상을 분리하였다. 그 후, 탈이온수(300 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고 증발 건조시키고, 수득된 고체를 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매 (50 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말 (30 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(3%-10% 메탄올: 97%-90% 디클로로메탄)으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 25-238: 1.9233 g을 수득했다, 수율: 61.96%.
25-243
Figure 112022066845063-pct00692
25-238 (1.9233 g, 0.1323 mmol)을 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄(5 mL)으로 용해시키고, 트리플루오로아세트산(TFA, 0.2 mL, 1.9843 mmol)을 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 증발시켜 디클로로메탄을 제거하였다. 그 후, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL) 및 에틸 아세테이트 (300 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하여, 수상을 분리하였다. 그 후, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고 증발 건조시키고, 수득된 고체를 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매 (50 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말 (30 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1%-5% 메탄올: 99%-95% 디클로로메탄)으로 용리의 조작을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 25-243: 0.7924 g을 수득했다, 수율: 71.01%.
25-260
Figure 112022066845063-pct00693
25-243 (0.4738 g, 0.033 mmol) 및 M-SCM-40K (Jenkem Technology에서 구입, 3.0 g, 0.0727 mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (20mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 실온에서 암실에서 1주일 동안 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(100 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(10 mL)를 첨가하여 침전을 시켜, 반응 용액을 층화하고, 상청액을 버리고, n-헥산 (300 mL)과 메틸 tert -부틸 에테르 (50 mL)를 추가 침전을 위해 저급 유성 액체 상에 첨가하였다. 이러한 조작을 3회 반복하여, 점성의 유성 생성물을 최종적으로 수득했다. 그 후, 디클로로메탄(5 mL)을 점성 유성 생성물에 첨가하고, 수득된 용액을 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 세척하여, 고체 생성물을 수득했다. 고체 생성물을 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매(50 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말 (40 ml)를 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(4%-12% 메탄올:96%-88% 디클로로메탄)으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 25-260: 1.6 g을 수득했다, 수율: 50.17%.
44-2
Figure 112022066845063-pct00694
25-260 (0.8233 g, 0.0085 mmol)을 THF (20 mL)에 용해시키고; TBAF·3H2O (0.0860g, 0.2726 mmol)을 THF (10 mL)로 용해시키고; TBAF의 THF 용액을 25-260의 THF용액에 첨가하고, 일정량의 묽은 염산 용액 (30 mL, 0.05 mol/L)을 첨가한 후, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 증발 건조시키고, 무수 에탄올 (20 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 감압 하에서 농축하고, 증발 건조시켰다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 수득된 고체를 DMF (1.0 mL)에 용해시키고, 이소프로판올 (50 mL)을 수득된 용액에 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 필터 케이크를 DMF (3.0 mL)로 추가로 용해시키고, 이소프로판올 (50 mL)을 수득된 용액에 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 필터 케이크를 이소프로판올 (30 mL)로 세척했다. 2단계에서 얻은 고체를 디클로로메탄 (2.0 mL)에 용해시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL)를 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 그 후, 필터 케이크를 디클로로메탄 (2.0 mL)에 용해시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL)를 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)로 세척하고, 건조하여, 생성물 44-2: 0.5519 g를 수득했다, 수율: 69.79%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ9.45-9.29 (m, 80H), 9.09-7.93 (m, 103H), 7.65-7.56 (m, 20H), 7.30-7.19 (m, 81H), 6.97-6.95 (s, 40H), 5.46-5.42 (m, 59H), 5.15-5.12 (m, 87H), 4.05-3.54 (m, 6944H), 2.93-2.89 (m, 97H), 2.74 - 2.66 (m, 39H), 2.34-2.31 (m, 20H), 2.09-2.06 (m, 106H), 1.90-1.72 (m, 104H), 1.48-1.45 (m, 31H), 1.31-1.21 (m, 119H), 0.95-0.84 (m, 96H).
7. 42-52 (화합물 번호 1)의 합성
합성 경로는 다음과 같다.
Figure 112022066845063-pct00695
Figure 112022066845063-pct00696
Figure 112022066845063-pct00697
Figure 112022066845063-pct00698
42-20
Figure 112022066845063-pct00699
Fmoc-Glu-OtBu (Accela에서 구입, 3.2226 g, 7.5741 mmol), HBTU (4.3086 g, 11.3612 mmol), HOBT (1.5351 g, 11.3612 mmol) 및 44-19(22-181의 합성 방법에 따라 합성, 6.9 g, 7.5741 mmol)을 500 mL 둥근 바닥플라스크에 첨가하고, DMF (60 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (7.5 mL, 45.4460 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 2시간 동안 교반하여 -5 ℃에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 2L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 진탕 추출하여, 수상을 분리하였다. 그 후, 포화 염화나트륨 용액 (200 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고 증발 건조시키고, 수득된 고체를 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매(50 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(80 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(4%-12% 메탄올:96%-88% 디클로로메탄)으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 42-20: 6.9 g을 수득했다, 수율: 69.10%.
42-25
Figure 112022066845063-pct00700
42-20 (5.0 g, 3.7923 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 용해시키고, TFA (4.2 mL, 56.8845 mmol)을 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 교반하여 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압 농축하고 증발시켜 디클로로메탄을 제거한 후, 수득된 용액을 2L 분별 깔대기로 옮기고, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 그 후, 포화 염화나트륨 용액 (200 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 다음으로, 탈이온수 (300 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 유기상을 농축하고, 증발 건조시키고, 오븐에서 건조시켜, 생성물 42-25: 4.7872 g을 수득했다.
33-143
Figure 112022066845063-pct00701
1,2-비스(2-아미노에톡시)에탄(TCI에서 구입, 50 mL, 340.7327 mmol)을 500mL 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (150 mL)으로 용해시키고, 트리에틸아민(94.8928 mL, 681.4654 mmol)을 첨가헌 후, 디-tert-부틸 디카보네이트(이노켐에서 구매, 74.3751 g, 340.7321 mmol)를 실온에서 교반하면서 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 실리카겔 분말을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상의 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수 및 2%-3%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조시켜, 생성물 33-143, 수율 10%를 수득했다.
42-27
Figure 112022066845063-pct00702
42-25 (4.7872 g, 3.7923 mmol), HBTU (2.1573 g, 5.6885 mmol), HOBT (0.7686 g, 5.6885 mmol) 및 33-143 (0.9888 g, 3.9819 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (60mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (2.8 mL, 17.0654 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 끝날 때, 수득된 용액을 2시간 동안 교반하면서 -5 ℃에서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 2L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 진탕 추출하여, 수상을 분리하였다. 그 후, 포화 염화나트륨 용액 (200 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 42-27: 5.4 g을 수득했다, 수율: 95.40%.
42-30
Figure 112022066845063-pct00703
42-27 (5.4 g, 3.6177 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (10 mL)로 용해시키고, 모르폴린(4.7 mL, 54.2635 mmol)을 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 2L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 염화나트륨 용액 (300 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 진탕 추출하여, 수상을 분리하였다. 그 후, 포화 염화나트륨 용액 (200 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고 증발 건조시키고, 수득된 고체를 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매 (50 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말 (80 mL)을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1% 암모니아수:1%-6% 메탄올:98%-93% 디클로로메탄)으로 용리 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 42-30: 3.0140g을 수득했다, 수율: 65.58%.
42-34
Figure 112022066845063-pct00704
42-30 (3.0140 g, 2.3724 mmol), HBTU (1.2269 g, 3.2352 mmol), HOBT (0.4371 g, 3.2352 mmol) 및 글루타르산 (0.1425 g, 1.0784 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 30분 동안 -5℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (1.6 mL, 9.7056 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 2시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 2L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 탄산수소나트륨 용액 (300 mL) 및 에틸 아세테이트(200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하여 추출하고, 수상을 분리하였다. 그 후, 포화 염화나트륨 용액 (200 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수상을 분리하였다. 마지막으로, 유기상을 농축하고 증발 건조시키고, 수득된 고체를 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매 (50 mL)로 용해하고, 실리카겔 분말 (50 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1% 암모니아수:2%-5% 메탄올:97%-94% 디클로로메탄)으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 42-34: 2.8437 g를 수득했다, 수율: 100%.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ8.60 - 8.22 (m, 5H), 8.19 - 7.63 (m, 11H), 7.55 - 7.11 (m, 40H), 5.10-5.07 (m, 16H), 3.56-3.47 (m, 20H), 3.19-3.17 (m, 8H), 3.09 - 3.01 (m, 4H), 2.99 - 2.65 (m, 16H), 2.43-2.42 (m, 8H), 2.17-2.09 (m, 32H), 1.36-1.34 (m, 18H).
42-15
Figure 112022066845063-pct00705
42-14의 용액(25-102의 합성법에 따라 합성됨, 5.5320 g, 11.2308 mmol), HBTU (5.8080 g, 15.3147 mmol), HOBT (2.0693 g, 15.3147 mmol) 및 PKA (PKA는 임상 신약 PKI-587의 탈-말단 디메틸 유도체임)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (80 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (7.6 mL, 45.9441 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 1시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산 (150 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)를 반응 용액에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버리고, n-헥산(150 mL)과 메틸 tert- 부틸 에테르 (30 mL)를 하부 액체에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버렸다. 이러한 조작을 3회 반복하여 점성 생성물을 수득했다. 그 후, 점성이 있는 생성물을 디클로로메탄 (5 mL)에 용해시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL)를 수득된 용액에 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 세척하고, 진공 오븐에서 건조하여, 생성물 42-15: 10.8450 g를 수득했다.
42-18
Figure 112022066845063-pct00706
42-15 (10.8450 g, 10.2098 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 용해시키고, TFA (11.4 mL, 153.1470mmol)을 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압 하에 농축시키고, 증발시켜, 디클로로메탄을 제거한 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (150 mL)를 수득된 용액에 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 세척하고, 오븐에서 건조하여, 생성물 42-18: 9.8230 g을 수득했다, 수율: 100%.
42-24
Figure 112022066845063-pct00707
42-20 (1.8683 g, 1.4170 mmol) 및 10% Pd/C (50 mg)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(30 mL)로 용해시켰다. 수소화 반응기를 밀폐하고, 1.6 MPa의 압력으로 수소를 주입한 후, 혼합 용액을 상온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 취출하여, 다진 규조토를 채운 샌드 코어 깔대기에 균일하게 적가한 후, 흡인여과하였다. 임의의 생성물을 함유하지 않을 때까지 DMF(60mL)로 규조토를 세척하여, 반응 생성물 용액을 수득했다.
42-26
Figure 112022066845063-pct00708
42-24 (1.3574 g, 1.4170 mmol), HBTU (3.2243 g, 8.5020 mmol), HOBT (1.1488 g, 8.5020 mmol) 및 42-18 (8.0 g, 6.2350 mmol)의 용액을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (80 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (4.2 mL, 25.5060 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 3시간 동안 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산 (150 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)를 반응 용액에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버리고, n-헥산(150 mL)과 메틸 tert- 부틸 에테르 (30 mL)를 하부 액체에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버렸다. 이러한 조작을 3회 반복하여 점성 생성물을 수득했다. 그 후, 점성이 있는 생성물을 디클로로메탄 (5 mL)에 용해시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL)를 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 세척하고, 진공 오븐에서 건조하여, 생성물 42-26: 6.7086 g을 수득했다.
42-28
Figure 112022066845063-pct00709
42-26 (6.7086 g, 1.4170 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 용해시키고, TFA (1.6 mL, 21.2550 mmol)를 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압하에 농축하고 증발시켜 디클로로메탄을 제거하고, 메틸 tert-부틸 에테르 (150 mL)를 수득된 용액에 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/디클로로메탄 용액 (60 mL)으로 용해하고, 실리카겔 분말 (70 ml)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(2%-11% 메탄올:98%-89% 디클로로메탄)으로 용리의 조작을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 42-28: 5.4 g을 수득했다, 수율: 81.46%.
42-32
Figure 112022066845063-pct00710
42-28 (4.4 g, 0.9405 mmol), HBTU (0.5350 g, 1.4108 mmol), HOBT (0.1906 g, 1.4108 mmol) 및 25-254 (30-33의 합성 방법에 따라 합성됨)(0.8504 g, 1.0346 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (60 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (0.7 mL, 4.2324 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 3시간 동안 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산 (150 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)를 반응 용액에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버리고, n-헥산(150 mL)과 메틸 tert- 부틸 에테르 (30 mL)를 하부 액체에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버렸다. 이러한 조작을 3회 반복하여 점성 생성물을 수득했다. 그 후, 점성이 있는 생성물을 디클로로메탄 (5 mL)에 용해시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL)를 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/디클로로메탄 용액 (60 mL)으로 용해하고, 실리카겔 분말 (50 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(3%-15% 메탄올:97%-85% 디클로로메탄)으로 용리의 조작을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 42-32: 3.6 g을 수득했다, 수율: 69.82%.
42-36
Figure 112022066845063-pct00711
42-32 (3.6 g, 0.6567 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 모르폴린(0.9 mL, 9.8505 mmol)을 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산 (150 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)를 반응 용액에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버리고, n-헥산(150 mL)과 메틸 tert- 부틸 에테르 (30 mL)를 하부 액체에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버렸다. 이러한 조작을 3회 반복하여 점성 생성물을 수득했다. 그 후, 점성이 있는 생성물을 디클로로메탄 (5 mL)에 용해시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL)를 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/디클로로메탄 용액 (60 mL)으로 용해하고, 실리카겔 분말 (30 ml)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1% 암모니아수:2%-7% 메탄올:97%-92% 디클로로메탄)으로 용리의 조작을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 42-36: 3.2 g을 수득했다, 수율: 92.64%.
42-40
Figure 112022066845063-pct00712
42-36 (3.2 g, 0.6084 mmol), HBTU (0.3461 g, 0.9126 mmol), HOBT (0.1233 g, 0.9126 mmol) 및 Boc-LC-OH (24-36 합성 방법에 따라 합성된, 0.1762 g, 0.6692 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (60 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (0.5 mL, 2.7378 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 1시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산 (150 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)를 반응 용액에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버리고, n-헥산(150 mL)과 메틸 tert- 부틸 에테르 (30 mL)를 하부 액체에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버렸다. 이러한 조작을 3회 반복하여 점성 생성물을 수득했다. 그 후, 점성이 있는 생성물을 디클로로메탄 (5 mL)에 용해시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL)를 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 42-40: 3.3473 g을 수득했다.
42-41
Figure 112022066845063-pct00713
42-40 (3.3473 g, 0.6084 mmol)을 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고 디클로로메탄 (10 mL)으로 용해시키고, TFA (0.7 mL, 9.1260 mmol)을 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 교반하여 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압 하에 농축하고 증발시켜 디클로로메탄을 제거하고, 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL)를 수득된 용액에 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득한 후, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/디클로로메탄 용액 (60 mL)으로 용해하고, 실리카겔 분말 (40 ml)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1% 암모니아수:3%-10% 메탄올:96%-89% 디클로로메탄)으로 용리의 조작을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 42-41: 2.1 g,을 수득했다, 수율: 63.86%.
42-37
Figure 112022066845063-pct00714
42-34 (1.0 g, 0.3792 mmol) 및 10% Pd/C (40 mg)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시켰다. 수소화 반응기를 밀폐하고, 1.6 MPa의 압력으로 수소를 주입한 후, 혼합 용액을 상온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 취출하여, 다진 규조토를 채운 샌드 코어 깔대기에 균일하게 적가한 후, 흡인여과하였다. 임의의 생성물을 함유하지 않을 때까지 DMF(60mL)로 규조토를 세척하여, 반응 생성물 용액을 수득했다.
42-43
Figure 112022066845063-pct00715
42-41 (2.1 g, 0.3885 mmol), HBTU (0.2007 g, 0.5292 mmol), HOBT (0.0715 g, 0.5292 mmol) 및 42-37 용액 (0.0845 g, 0.0441 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시킨 후, 반응 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (0.3 mL, 1.5876 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5 ℃에서 1시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산 (150 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)를 반응 용액에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버리고, n-헥산 (150 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)를 침전을 위해 하부액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이러한 조작을 5회 반복하여, 점성이 있는 생성물을 수득했다. 그 후, 점성이 있는 생성물을 디클로로메탄 (5 mL)에 용해시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL)를 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매 (80 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말 (30 ml)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1% 암모니아수:4%-8% 메탄올:95%-91% 디클로로메탄)으로 용리 조작을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 42-43: 1.0 g을 수득했다, 수율: 50.38%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 10.31-10.27 (m, 52H), 8.53 - 7.91 (m, 88H), 7.80-7.71 (m, 28H), 7.62 - 7.26 (m, 55H), 7.04-6.98 (m, 32H), 5.76 (s, 48H), 5.44-5.22 (m, 80H), 4.78 - 4.27 (m, 76H), 4.07-4.02 (m, 61H), 3.92 - 3.20 (m, 2292H), 3.17-3.03 (m, 53H), 2.67-2.59 (m, 118H), 2.33-2.09 (m, 98H), 1.78-1.61 (m, 54H), 1.41 - 0.70 (m, 127H).
42-50
Figure 112022066845063-pct00716
42-43 (1.0 g, 0.0222 mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (5 mL)으로 용해시키고, TFA (0.1 mL, 0.6615 mmol)를 교반하면서 첨가한 후, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 증발시켜 디클로로메탄을 제거하고, 메틸 tert-부틸 에테르 (150 mL)를 수득된 용액에 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/디클로로메탄 용액 (50 mL)으로 용해하고, 실리카겔 분말 (30 ml)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1% 암모니아수:4%-10% 메탄올:95%-89% 디클로로메탄)으로 용리의 조작을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 42-50: 0.4772 g을 수득했다, 수율: 47.97%.
42-52
Figure 112022066845063-pct00717
42-50 (0.4472 g, 0.0106 mmol) 및 M-SCM-20K (0.5004 g, 0.0233 mmol)를 500 mL 둥근 바닥플라스크에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시킨 후, 반응 용액을 7일 동안 실온에서 암실에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산 (150 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)를 반응 용액에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버리고, n-헥산(150 mL)과 메틸 tert- 부틸 에테르 (30 mL)를 하부 액체에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버렸다. 이러한 조작을 3회 반복하여 점성 생성물을 수득했다. 그 후, 점성이 있는 생성물을 디클로로메탄 (5 mL)에 용해시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL)를 첨가하여 침전시켜, 분말상의 고체를 수득하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매 (80 mL)로 용해하고, 실리카겔 분말 (40ml)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 용리액(1% 암모니아수: 4%-10% 메탄올:95%-89% 디클로로메탄)으로 용리의 조작을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 42-52: 0.547 g을 수득했다, 수율: 58.96%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 9.36 - 8.90 (m, 144H), 8.53 - 7.94 (m, 349H), 7.94 - 7.48 (m, 250H), 7.32-7.22 (m, 231H), 7.15-7.09 (m, 27H), 7.03-6.96 (m, 16H), 4.54-4.23 (m, 380H), 4.10 - 3.36 (m, 3418H), 3.19-3.03 (m, 106H), 2.90-2.73 (m, 50H), 2.63-2.59 (m, 380H), 2.41-2.30 (m, 61H), 2.22- 2.12 (m, 95H), 1.98-1.49 (m, 288H), 1.40-1.35 (m, 59H), 1.15-1.03 (m, 75H), 0.91-0.85 (m, 240H).
8. 37-200 (화합물 번호 2)의 합성
합성 경로는 다음과 같다.
Figure 112022066845063-pct00718
Figure 112022066845063-pct00719
Figure 112022066845063-pct00720
37-192
Figure 112022066845063-pct00721
펜타테트라민 디설페이트 (4.33 g, 13.20 mmol, Pharmaron에서 구입)를 500 mL 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (30 mL)으로 용해시키고, 트리에틸아민(14.8 mL, 105.6 mmol)을 첨가한 후, 혼합 용액을 30분 동안 0℃에서 교반하여 반응시켰다. 페닐 클로로포르메이트 (9.95 mL, 79.2 mmol)를 천천히 적가하고, 혼합 용액을 상온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기로 옮기고, 디클로로메탄 (200 mL)과 탈이온수 (200 mL)로 추출하여, 유기상을 분리하였다. 수성상을 디클로로메탄(200 mL × 1)으로 세척하고, 수득된 유기상을 합하고, 실리카겔 분말 (15 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 5%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하여, 생성물 37-192: 3.3 g를 수득했다, 수율 42%.
37-45
Figure 112022066845063-pct00722
35-31 (2.73 g, 2.196 mmol, 34-17의 합성법에 따라 합성), tert-부틸 석시네이트 (0.459 g, 2.635 mmol, purchased from InnoChem), HBTU (1.249 g, 3.294 mmol), HOBT (0.445 g, 3.294 mmol)을 500 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (70 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 -5 ℃에서 약 30분간 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (1.633 mL, 9.882 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 3시간 동안 교반하면서 -5 ℃에서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 탈이온수 (200 mL) 및 에틸아세테이트 (200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(150 mL x 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수 (200 mL × 1)로 세척하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 건조하여, 생성물 37-45: 3.1g를 수득했다.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.52 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 8.30 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.99 - 7.93 (m, 4H), 7.88 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.68 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.43 - 7.18 (m, 22H), 5.16 - 5.01 (m, 7H), 4.45 - 4.07 (m, 7H), 3.70 - 3.46 (m, 4H), 3.43 - 3.29 (m, 10H), 3.24 - 3.12 (m, 4H), 2.46 - 2.28 (m, 7H), 2.17 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 1.39 - 1.24 (m, 9H).
47-19
Figure 112022066845063-pct00723
37-45 (0.5137 g, 0.3624 mmol) 및 Pd/C (0.010g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 1.8 MPa의 압력으로 수소를 투입한 후, 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 꺼내고 규조토로 여과하였다. 그 후, 규조토를 DMF (20 mL x 3)로 세척하고, DMF 용액을 다음 반응을 위한 원료로 합쳤다.
47-21
Figure 112022066845063-pct00724
47-19 (0.38 g, 0.3624 mmol), 37-2 (3g, 1.5944 mmol), HBTU (0.8246 g, 2.1744 mmol), HOBT (0.2938 g, 2.1744 mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (95 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 20분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (1.078 mL, 6.523 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반한 후, 상온으로 이동시켜 하여 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산 (120 mL)과 메틸 tert-부틸에테르 (30 mL)로 3회 침전시켜, 점성의 유성 생성물을 수득했다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (250mL)를 유성 생성물에 첨가하여 고체를 분리하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL × 3)로 세척하고, 디클로로메탄 (150 mL) 및 메탄올 (30 mL)로 용해하고, 실리카 겔 분말 (10 g)을 첨가하고, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수 및 4%-8%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조시켜, 생성물 47-21: 2.5 g을 수득했다, 수율:
43-123
Figure 112022066845063-pct00725
47-21 (2.5 g, 0.2938 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 모르폴린 (7.67 mL, 88.14 mmol)을 첨가한 후, 상온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(100 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(20 mL)를 첨가하여 침전시켜 반응 용액을 층화하고, 상층액을 버리고, n-헥산 (100 mL)과 메틸 tert -부틸 에테르 (20 mL)를 저급 유성 액체 상에 첨가하여 추가 침전시켰다. 이러한 조작을 3회 반복하여, 점성 유성 생성물을 수득했다. 메틸 tert-부틸 에테르 (150 mL)를 유성 생성물에 첨가하여 고체를 분리한 후, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(40 mL × 2)로 세척하고, 디클로로메탄(20 mL) 및 메탄올(80 mL)로 용해하고, 실리카겔 분말 (10 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1%의 암모니아수 및 6%-10%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하여, 생성물 43-123: 1.85 g을 수득했다, 수율 77%.
37-195
Figure 112022066845063-pct00726
43-123 (1.85 g, 0.2628 mmol), 37-192 (0.0326 g, 0.0531 mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 트리에틸아민 (0.0336 mL, 0.239 mmol)을 첨가하고, 수득된 용액을 밤새 80℃에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(100 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(20 mL)를 첨가하여 침전시켜 반응 용액을 층화하고, 상층액을 버리고, n-헥산 (100 mL)과 메틸 tert -부틸 에테르 (20 mL)를 저급 유성 액체 상에 첨가하여 추가 침전시켰다. 이러한 조작을 3회 반복하여, 점성 유성 생성물을 수득했다. 메틸 tert-부틸 에테르 (150 mL)를 유성 생성물에 첨가하여 고체를 분리한 후, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(40 mL × 2)로 세척하고, 디클로로메탄(20mL) 및 메탄올 (80 mL)로 용해하고, 실리카겔 분말 (10 g)을 첨가하고, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1%의 암모니아수 및 6%-7%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하여, 생성물 37-195: 0.7 g을 수득했다, 수율 40%.
37-199
Figure 112022066845063-pct00727
37-195 (0.7 g, 0.021 mmol)를 100 mL 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 용해시키고, TFA (4.67 mL, 6.29 mmol)를 첨가한 후, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 메틸 tert-부틸 에테르(100 mL)를 반응 용액에 첨가하여 고체를 분리하고, 흡인 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL × 3)로 세척하고, 메탄올 (20 mL) 및 디클로로메탄 (80 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말 (10 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수 및 6%-8%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜 생성물 37-199: 0.697 g을 수득했다, 수율 43%.
37-200
Figure 112022066845063-pct00728
37-199 (0.3g, 0.009 mmol)를 100 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (40 mL)로 용해시키고, M-NH2-5K.HCl (0.2772 g, 0.0543 mmol, JenKem에서 구입), HBTU (0.21 g, 0.543 mmol), HOBT (0.073g, 0.543 mmol)를 첨가한 후, -5 ℃에서 약 10분 동안 저속으로 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (0.7 mL, 4.32 mmol)를 천천히 적가하고, 수득된 용액을 -5 ℃에서 20분 동안 계속 반응시킨 후, 실온으로 옮기고, 저속에서 7일 동안 암실에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산 (100 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)를 반응 용액에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버리고, n-헥산 (100 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)를 하부 액체에 첨가하였다. 이러한 조작을 3회 반복하여, 점성 유성 생성물을 수득했다. 유성 생성물에 메틸 tert-부틸 에테르(100 mL)를 첨가하여 고체를 분리하고 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL x 3)로 세척하고, 메탄올 (40 mL) 및 디클로로메탄 (160 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말 (10 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수와 4%-7%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 1시간 동안 건조시키고, 무수 에탄올 (2 mL) 및 디클로로메탄 (30 mL)으로 용해시켰다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르(200 mL)를 수득된 용액에 첨가하여 고체를 분리하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL × 2)로 세척하고, 진공 오븐에서 건조하여, 생성물 37-200: 0.27 g을 수득했다, 수율: 56%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 10.19 - 10.05 (m, 16H), 9.06 - 8.84 (m, 15H), 8.32 - 7.77 (m, 251H), 7.59 - 7.46 (m, 45H), 7.31 - 7.05 (m, 313H), 5.92 - 5.66 (m, 25H), 4.61 - 4.49 (m, 25H), 4.43 - 4.29 (m, 14H), 4.26 - 4.16 (m, 40H), 4.05 - 3.84 (m, 31H), 3.70 - 3.61 (m, 113H), 3.58 - 3. 41 (m, 1856H), 3.26 - 3.24 (m, 28H), 3.20 - 3.17 (m, 44H), 3.14 - 3.11 (m, 32H), 3.07 - 2.87 (m, 99H), 2.81 - 2.69 (m, 75H), 2.67 - 2.60 (m, 35H), 2.45 - 2.37 (m, 87H), 2.36 - 2.28 (m, 118H), 2.27 - 2.08 (m, 116H), 1.94 - 1.69 (m, 145H), 1.62 - 1.42 (m, 151H), 1.30 - 1.16 (m, 44H), 0.94 - 0.75 (m, 247H), 0.53 - 0.46 (m, 35H).
9. 35-78 (화합물 번호 4)의 합성
합성 경로는 다음과 같다.
Figure 112022066845063-pct00729
Figure 112022066845063-pct00730
Figure 112022066845063-pct00731
Figure 112022066845063-pct00732
Figure 112022066845063-pct00733
45-57
Figure 112022066845063-pct00734
펜타에리스리톨 (5 g, 36.7242 mmol, 알라딘(Aladdin)에서 구입)을 500 mL 플라스크에 첨가하고, 칼륨 tert-부톡사이드 (146.8968 mL, 146.8968 mmol)의 THF 용액을 첨가한 후, 혼합 용액을 20분 동안 0 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, 벤질 브로모아세테이트 (24.5129 mL, 161.5865 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0 ℃에서 2시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2L 분별 깔대기에 옮기고, 탈이온수 (300 mL), 에틸 아세테이트 (300 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하였다. 수성상을 에틸 아세테이트 (250 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기 상을 포화 식염수 용액 (200 mL × 1)으로 세척하고, 농축하고 증발 건조시키고, 수득된 고체를 디클로로메탄 (300 mL)으로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (55 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜, 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 20% 에틸 아세테이트가 포함된 석유 에테르 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜 생성물 45-57: 12.3 g을 수득했다, 수율 46%.
35-33
Figure 112022066845063-pct00735
35-32(42-25의 합성법에 따라 합성, 9.364 g, 7.418 mmol), Gly-OtBu.HCl (1.243 g, 7.418 mmol, InnoChem에서 구입), HBTU (4.219 g, 11.126mmol), HOBT (1.503 g, 11.126 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (11.034 mL, 66.758 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 1시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기로 옮기고, 탈이온수(200 mL)와 에틸 아세테이트(200 mL)로 추출하여, 유기층을 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수 (200 mL × 2)로 세척하고, 증발 건조시키고, 오븐에서 건조하여, 생성물 35-33: 10.2 g을 수득했다.
35-34
Figure 112022066845063-pct00736
35-33 (10.203 g, 7.418 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 모르폴린 (9.69 mL, 111.27 mmol)을 첨가한 후, 혼합 용액을 1시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 포화식염수(200 mL)와 에틸아세테이트(200 mL)로 추출하여, 유기층을 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수 용액 (200 mL × 1)으로 세척하고, 농축하고 증발 건조시키고, 실리카 겔 분말 (35g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 0.5% 암모니아수와 3% 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 건조시켜, 생성물 35-34: 5.2 g을 수득했다, 수율 61%.
35-35
Figure 112022066845063-pct00737
35-34 (5.2 g, 4.509 mmol), 석신산 무수물 (1.35 g, 13.527 mmol,, InnoChem에서 구입)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (4.47mL, 27.053 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 1시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기로 옮기고, 탈이온수(200 mL)와 에틸 아세테이트(200 mL)로 추출하여, 유기층을 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수 (200 mL x 2)로 세척하고, 증발 건조시키고, 오븐에서 건조시켜, 생성물 35-35: 4.7 g를 수득했다, 수율: 83%.
35-36
Figure 112022066845063-pct00738
35-35 (4.7 g, 3.75 mmol), 35-31 (34-17의 합성법에 따라 합성, 5.203 g, 4.125 mmol), HBTU (2.133 g, 5.625 mmol), HOBT (0.76 g, 5.625 mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시킨 후, 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (2.789 mL, 16.875 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 1시간 동안 계속 교반하면서 반응시킨 후, 상온으로 이동시켜 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 포화 염화나트륨 용액 (270 mL)과 에틸 아세테이트 (240 mL)로 추출하여, 유기층을 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수 용액 (200 mL × 2)으로 세척하고, 증발 건조시키고, 실리카 겔 분말 (15 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 4%-6% 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 35-36: 6.3 g을 수득했다, 수율: 67%.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.52 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 8.31 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 8.20 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.96 (m, 2H), 7.86 (m, 3H), 7.78 - 7.54 (m, 4H), 7.54 - 7.46 (m, 2H), 7.39 - 7.26 (m, 42H), 4.26 - 4.16 (m, 11H), 4.12 - 3.84 (m, 3H), 3.72 - 3.47 (m, 15H), 3.25 - 3.10 (m, 10H), 2.99 - 2.84 (m, 3H), 2.81 - 2.67 (m, 2H), 2.45 - 2.34 (m, 13H), 2.23 - 2.11 (m, 6H), 1.42 - 1.34 (m, 9H), 1.29 - 1.24 (d, J = 6.6 Hz, 28H).
35-48
Figure 112022066845063-pct00739
35-36 (0.463 g, 0.185 mmol) 및 Pd/C (0.030 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 1.8 MPa의 압력으로 수소를 투입한 후, 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 꺼내고 규조토로 여과하였다. 그 후, 규조토를 DMF (20 mL × 3)로 세척하여, C7이 포함된 DMF 용액을 수득했다.
35-49
Figure 112022066845063-pct00740
35-48 (0.329 g, 0.185 mmol), 37-2 (37-2의 합성법에 따라 합성, 3.0 g, 1.594 mmol), HBTU (0.842 g, 2.22 mmol), HOBT (0.3 g, 2.22 mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (90 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 20분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (1.1 mL, 6.66 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반한 후, 상온으로 이동시켜 하여 -밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산 (150 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL)로 3회 침전시켜, 점성의 유성 생성물을 수득했다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (250mL)를 유성 생성물에 첨가하여 고체를 분리하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL × 3)로 세척하고, 디클로로메탄(130 mL) 및 메탄올(25 mL)로 용해하고, 실리카겔 분말 (15 g)을 첨가하고, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 0.5% 암모니아수와 5%-12%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조시켜, 생성물 35-49: 2.7 g를 수득했다, 수율 87%.
35-73
Figure 112022066845063-pct00741
35-49 (2.7 g, 0.1615 mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고 DMF (30 mL)로 용해시켜, 피페리딘(0.479 mL, 4.8443 mmol)을 첨가한 후, 혼합 용액을 1시간 동안 상온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(100 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르(20 mL)를 첨가하여 침전시켜 반응 용액을 층화하고, 상층액을 버리고, n-헥산 (100 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (20 mL)를 저급 유성 액체 상에 첨가하여 추가 침전시켰다. 이러한 조작을 3회 반복하여, 점성 유성 생성물을 수득했다. 메틸 tert-부틸 에테르 (150 mL)를 유성 생성물에 첨가하여 고체를 분리한 후, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르(40 mL × 2)로 세척하고, 디클로로메탄(20 mL) 및 메탄올(80 mL)로 용해하고, 실리카겔 분말 (10 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수와 5%-7%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합용액으로 용리의 작업을 수행하여, 생성물 35-73: 1.2 g을 수득했다, 수율 45%.
35-74
Figure 112022066845063-pct00742
45-57 (0.118 g, 0.1655 mmol) 및 Pd/C (0.01 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 1.8 MPa의 압력으로 수소를 투입한 후, 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 꺼내고 규조토로 여과하였다. 그 후, 규조토를 DMF (20 mL × 3)로 세척하여, 35-74를 함유하는 DMF 용액을 수득했다.
35-75
Figure 112022066845063-pct00743
35-73 (1.2 g, 0.0727 mmol), 35-74 (0.375 g, 0.0165 mmol), HBTU (0.375 g, 0.99 mmol), HOBT (0.134 g, 0.99 mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해한 후, 혼합 용액을 20분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (0.492 mL, 2.975 mmol)를 천천히 적가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반한 후, 상온으로 이동시켜 하여 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산 (150 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL)로 3회 침전시켜, 점성의 유성 생성물을 수득했다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (250 mL)를 유성 생성물에 첨가하여 고체를 분리하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL × 3)로 세척하고, 디클로로메탄 (130 mL) 및 메탄올 (25 mL)로 용해하고, 실리카겔 분말 (10 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수와 6%-9%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조시켜, 생성물 35-75: 0.8 g을 수득했다, 수율 73%.
35-77
Figure 112022066845063-pct00744
35-75 (0.8g, 0.012 mmol)를 100 mL 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 용해시키고, TFA (10 mL, 134.65 mmol)를 첨가한 후, 혼합 용액을 상온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 메틸 tert-부틸 에테르 (70 mL)를 반응 용액에 첨가하여 고체를 분리하고, 흡인 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL×3)로 세척하고, 메탄올 (20 mL)과 디클로로메탄 (80 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말 (10 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수와 4%-8% 메탄올을 포함하는 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 35-77: 0.4 g을 수득했다, 수율 51%.
35-78
Figure 112022066845063-pct00745
35-77 (0.4g, 0.0061 mmol)을 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (25 mL), M-NH2-20K·HCl (0.379g, 0.036 mmol, JenKem에서 구입), HBTU (0.137 g, 0.36 mmol), HOBT (0.049 g, 0.36 mmol)를 첨가한 후, 혼합 용액을 -5 ℃에서 약 10분간 저속으로 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (0.1313 mL, 0.7945 mmol)를 천천히 적가하고, 수득된 용액을 20분 동안 -5 ℃에서 계속 반응시킨 후, 실온으로 옮기고, 암실에서 저속으로 7일 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산 (100 mL)과 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)를 반응 용액에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버리고, n-헥산 (100 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)를 침전을 위해 하부 액체에 첨가하였다. 이러한 조작을 3회 반복하여, 점성 유성 생성물을 수득했다. 유성 생성물에 메틸 tert-부틸 에테르(100 mL)를 첨가하여 고체를 분리하고 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL × 3)로 세척하고, 메탄올 (40 mL) 및 디클로로메탄 (160 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말 (10 g)을 첨가한 후, 수득된 혼합물을 증발 건조시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수와 4%-7%의 메탄올이 포함된 디클로로메탄 혼합 용액으로 용리의 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 증발 건조시키고, 진공 오븐에서 1시간 동안 건조시키고, 무수 에탄올 (2 mL) 및 디클로로메탄 (30 mL)으로 용해시켰다. 그 후, 메틸 tert-부틸 에테르 (140 mL)를 수득된 용액에 첨가하여 고체를 분리하고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (50 mL × 2)로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 35-78: 0.46 g,을 수득했다, 수율: 70%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 10.23 - 9.98 (m, 34H), 9.12 - 8.76 (m, 32H), 8.25 - 8.13 (m, 116H), 8.12 - 7.95 (m, 240H), 7.84 - 7.64 (m, 95H), 7.57 - 7.31 (m, 99H), 7.21 - 6.91 (m, 630H), 5.88 -5.63 (m, 56H), 4.76 - 4.48 (m, 64H), 4.33 - 4.26 (m, 154H), 4.05 - 3.83 (m, 116H), 3.71 - 3.62 (m, 241H), 3.59- 3.41 (m, 3840H), 3.42 - 3.37 (m, 91H), 3.27 - 3.21 (m, 393H), 3.19 - 3.11 (m, 149H), 3.09 - 3.93 (m, 72H), 2.85 - 2.73 (m, 102H), 2.52 - 2.42 (m, 116H), 2.34 - 2.07 (m, 369H), 1.91 - 1.84 (m, 120H), 1.78 - 1.63 (m, 123H), 1.61 - 1.52 (m, 265H), 1.29 - 0.92 (m, 89H), 0.85 - 0.63 (m, 461H), 0.60 - 0.47 (m, 81H).
10. 33-200 (화합물 번호 5)의 합성
합성 경로는 다음과 같다.
Figure 112022066845063-pct00746
Figure 112022066845063-pct00747
Figure 112022066845063-pct00748
Figure 112022066845063-pct00749
Figure 112022066845063-pct00750
Figure 112022066845063-pct00751
45-1
Figure 112022066845063-pct00752
24-143 (34-17의 합성법에 따라 합성, 5g, 3.6723mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시킨 후, 수득된 용액을 저온 및 -5°C의 항온조에 두었다. 그 후, DIEA (2.5390mL, 18.3615mmol)를 첨가한 후, 혼합 용액을 상온에서 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 무수 석신산 (1.1025 g, 11.0170mmol)을 첨가하고, 1시간 후, 수득된 용액을 실온에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 에틸아세테이트 (200 mL)와 탈이온수 (150 mL)를 첨가하여 추출하고, 유기층을 분리하였다. 수상에 생성물이 없을 때까지, 수상을 에틸 아세테이트로 두번(100 mL × 2) 추출하여, 수득된 유기상을 합하였다. 유기상을 포화 식염수 (100 mL)로 1회 세척하고, 농축하고, 증발 건조시켜, 생성물 5g, 추가 할당량 0.1g, 수율 100%를 수득했다.
45-6
Figure 112022066845063-pct00753
반응물 45-1 (4.9g, 3.5990mmol), NH2-Gly-OtBu·HCl (purchased from Accela, 0.4721g, 3.5990mmol), HBTU (2.0473g, 5.3985mmol), HOBT (0.7294g, 5.3985mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시킨 후, 혼합 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 그 후, DIEA (4mL, 24.2933mmol)를 천천히 적가하고, 수득된 용액을 반응이 완료될 때까지 낮은 온도에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1L 분별 깔대기에 옮기고, 에틸아세테이트 (200 mL)와 탈이온수 (150 mL)를 첨가하여 추출하고, 유기층을 분리하였다. 수상에 생성물이 없을 때까지, 수상을 에틸 아세테이트로 두번(100 mL × 2) 추출하고, 수득된 유기상을 합하였다. 유기상을 포화 식염수 (100 mL)로 1회 세척하고, 농축하고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 컬럼크로마토그래피 및 50%-100% 에틸 아세테이트/석유 에테르로 용리하는 조작을 수행하여, 생성물 3.5g을 수득했다, 수율 66%.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.34 - 8.18 (m, 2H), 8.01 - 7.85 (m, 4H), 7.72 -7.64 (m, 3H), 7.43 - 7.22 (m, 26H), 5.14 - 5.03 (m, 8H), 4.41 - 4.06 (m, 8H), 3.94 - 3.86 (m, 2H), 3.71 - 3.66 (m, 2H), 3.58 - 3.49 (m, 4H), 3.42 - 3.36 (m, 2H), 3.22 - 3.13 (m, 3H), 2.98 - 2.88 (m, 2H), 2.47 - 1.81 (m, 17H), 1.39 - 1.37 (m, 9H), 1.28 - 1.20 (m, 3H).
MALDI-TOF MS: [M+H+]1474.70, [M+Na+]1496.70.
33-190
Figure 112022066845063-pct00754
반응물 45-6 (0.4702g, 0.3189mmol) 및 10% Pd/C (50mg)를 마이크로 반응기에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, H2 (20psi)를 투입한 후, 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토를 필터 케이크로서 흡인여과하여 Pd/C를 제거한 후, 규조토를 DMF로 3~4회 세척하여, 다음 반응을 위한 생성물의 DMF 용액을 수득했다.
33-191
Figure 112022066845063-pct00755
33-162(37-2의 합성법에 따라 합성, 3g, 1.5944mmol), HBTU (0.7256g, 1.9134mmol), HOBT (0.2585g, 1.9134mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, 33-190의 DMF 용액으로 용해하고, 초음파 처리를 수행하여, 반응물을 완전히 용해시킨 후, 수득된 용액을 -5 ℃에서 30분간 교반하였다. 그 후, DIEA (0.9487mL, 5.7402mmol)를 천천히 적가하고, 수득된 용액을 반응이 완료될 때까지 낮은 온도에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL), n-헥산 (150 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 초음파 처리를 5분 동안 수행하고, 수득된 용액을 냉장고에 두고, 20분 동안 정치시키고, 상청액을 버리고, 에틸 아세테이트 (20 mL)를 아래 액체에 첨가하고, 초음파 처리를 2분간 수행하고, n-헥산 (100mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 흡인 여과하였다. 필터 케이크를 20% 메탄올/디클로로메탄 (70 mL)에 용해하고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수:5% 메탄올/디클로로메탄-1% 암모니아수:10% 메탄올/디클로로메탄으로 구배 용리 조작을 수행하여, 생성물 1.9 g을 수득했다, 수율 70%.
33-192
Figure 112022066845063-pct00756
33-191 (1.9 g, 0.2218mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시키고, 모르폴린 (0.5796mL, 6.6540mmol)을 첨가한 후, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 메틸 tert-부틸 에테르 (150 mL), n-헥산 (100 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 초음파 처리를 5분간 수행하고, 흡인 여과하였다. 필터 케이크를 20% 메탄올/디클로로메탄 (50 mL)으로 용해하고, 실리카겔 분말을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수:7%/ 디클로로메탄-1% 암모니아수:15% 메탄올/디클로로메탄으로 용리의 작업을 수행하여, 생성물 1.3g을 수득했다, 수율 72%.
45-2
Figure 112022066845063-pct00757
디펜타에리트리톨(ACROS사, 5g, 19.6634mmol)을 500 mL 플라스크에 첨가하고, 보호 목적으로 질소를 주입하고, 칼륨 tert-부톡사이드의 THF 용액(141.57mL, 141.5762mmol)을 첨가하고, 수득된 용액을 1시간 동안 0 ℃에서 교반했다. 페닐 브로모아세테이트 (30.4445g, 141.5762mmol)를 첨가한 후, 수득된 용액을 3시간 동안 교반하여 반응시킨 후, 상온에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 증발 건조시키고, 탈이온수와 에틸 아세테이트를 추출을 위해 첨가하고, 유기상을 분리하였다. 수상에 생성물이 없을 때까지 ,수성상을 에틸 아세테이트로 추출하고, 수득된 유기상을 합하였다. 유기상을 무수 소듐 설페이트 분말로 건조하고, 흡인여과하고, 건조 샘플 로딩, 컬럼크로마토그래피, 3%-5% 에틸 아세테이트/석유 에테르로 구배 용리하는 작업을 수행하여, 생성물 13.9를 수득했다, 수율 62%.
45-12
Figure 112022066845063-pct00758
반응물 45-2 (0.2541g, 0.0223mmol) 및 10% Pd/C (50mg)를 마이크로 반응기에 첨가하고, DMF(30mL)로 용해시키고, H2(20psi)를 투입한 후, 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토를 필터 케이크로서 흡인여과하여 Pd/C를 제거한 후, 규조토를 DMF로 3~4회 세척하여, 다음 반응을 위한 생성물의 DMF 용액을 수득했다.
33-195
Figure 112022066845063-pct00759
33-192 (1.3g, 0.1558mmol), HBTU (0.0761g, 0.2007mmol), HOBT (0.0271g, 0.2007mmol)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, 45-12의 DMF 용액으로 용해시킨 후, 초음파 처리를 수행하여 반응물을 완전히 용해시킨 후, 수득된 용액을 -5 ℃에서 30분간 교반하였다. 그 후, DIEA (0.0995mL, 0.6021mmol)를 천천히 적가하고, 수득된 용액을 반응이 완료될 때까지 낮은 온도에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL), n-헥산 (150 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 초음파 처리를 5분 동안 수행하고, 수득된 용액을 냉장고에 두고, 20분 동안 정치시키고, 상청액을 버리고, 에틸 아세테이트 (20 mL)를 아래 액체에 첨가하고, 초음파 처리를 2분간 수행하고, n-헥산 (100mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 흡인 여과하였다. 필터 케이크를 20% 메탄올/디클로로메탄 (70mL)으로 용해하고, 실리카겔 분말을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수:5% 메탄올/디클로로메탄-1% 암모니아수:15% 메탄올/디클로로메탄으로 구배 용리 조작을 수행하여, 생성물 0.8g을 수득했다, 수율 53%.
33-197
Figure 112022066845063-pct00760
33-195 (0.8g, 0.0158mmol)을 디클로로메탄 (10mL)으로 용해시키고, TFA (0.03572mL, 0.4749mmol)를 첨가하고, 초음파 처리를 수행하여, 화합물을 완전히 용해시켰다. 분쇄된 유리 마개를 사용하고, 혼합 용액을 상온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 메틸 tert-부틸 에테르 (150mL)와 n-헥산 (100mL)을 반응 용액에 직접 첨가하고, 흡인 여과하였다. 필터 케이크를 진공 건조하여, 생성물 0.6g을 수득했다, 수율 75%.
33-200
Figure 112022066845063-pct00761
반응물 33-197 (0.6g, 0.0119mmoL), M-NH2HCL-10K (0.1g, 0.0099mmoL), HBTU (0.0056g, 0.0149mmoL), HOBT (0.0020g, 0.0149mmoL)를 250 mL 플라스크에 첨가하고, 초음파 조건에서 DMF (15mL)로 용해시킨 후, 수득된 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하였다. 그 후, DIEA (0.0073mL, 0.0446mmoL)를 천천히 적가하고, 수득된 용액을 1시간 동안 교반한 후, 실온에서 암실에서 저속으로 반응시켰다. 반응이 종료되면, 메틸 tert-부틸 에테르 (200mL)를 반응 용액에 첨가하여 침전시키고, 흡인여과하여 분말 생성물을 수득했다. 분말 생성물을 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말(3g)을 수득된 용액에 첨가하였다. 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 6% 메탄올/디클로로메탄-1% 암모니아수:10% 메탄올/디클로로메탄으로 구배 용리 작업을 수행하였다. 그 후, 용리 생성물을 수집하고 증발 건조시키고, 수득된 고체를 초음파 조건에서 디클로로메탄 (5 mL)으로 용해시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (150mL), n-헥산 (50mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 흡입 여과를 수행했다. 필터 케이크를 디클로로메탄으로 더 용해시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 및 n-헥산을 첨가하여 침전시키고, 용해 및 침전 과정을 3회 반복하여, 생성물 0.5g을 수득했다, 수율 71%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 10.17 - 10.13 (m, 18H), 8.97 -8.93 (m, 32H), 8.25 - 7.88 (m, 412H), 7.59 - 7.48 (m, 93H), 7.32 - 7.16 (m, 459H), 5.92 - 5.67 (m, 58H), 4.40 - 3.99 (m, 672H), 3.51 - 3.50 (m, 3560H), 3.29 - 2.99 (m, 344H), 2.94 - 2.64 (m, 264H), 2.45 - 2.05 (m, 133H), 1.93 - 1.06 (m, 301H), 0.99 - 0.74 (m, 432H).
11. 40-123 (화합물 번호 7)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00762
Figure 112022066845063-pct00763
Figure 112022066845063-pct00764
Figure 112022066845063-pct00765
45-8
Figure 112022066845063-pct00766
반응물 42-27을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시켰고, 모르폴린 (7.2mL, 83.4mmoL)을 첨가했고, 이어서 혼합 용액을 교반하여 실온에서 3시간 동안 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 메틸 tert-부틸 에테르 (100mL) 및 n-헥산 (200mL)을 반응 용액에 첨가하여 분말 생성물을 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 1% 암모니아수: 2% 메탄올/ 디클로메탄--1% 암모니아수 6% 메탄올/ 디클로로메탄의 구배 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 작동시켜, 4g의 생성물을 수득했다.
45-9
Figure 112022066845063-pct00767
반응물 E4 (4g, 3.14mmoL), SA-OtBu ((Accela로부터 구매, 0.54, 3.14mmoL), HBUT (1.78g, 4.71mmoL), HOBT (0.63g, 4.71mmoL)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (40 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 0.5 시간 동안 0 ℃에서 교반했다. 이어서, DIEA (2.3mL, 14.13mmoL)을 천천히 적가하고, 이어서 수득된 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 추출을 위해 탈이온수 (100mL) 및 에틸 아세테이트 (100mL)을 반응 용액에 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수상 중에 생성물이 없어질 때까지 수상을 에틸 아세테이트로 3번 추출하고 (50 mL × 3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수 용액으로 2번 세척하고 (50 mL × 2), 건조를 위해 증발시키고, 생성물 3.5g을 수율 79%로 수득했다.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ8.58 - 8.43 (m, 1H), 8.35 - 8.23 (m, 1H), 8.06 - 7.76 (m, 4H), 7.74 - 7.65 (m, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 20H), 5.13 - 5.02 (m, 8H), 4.41 - 4.13 (m, 4H), 3.95 - 3.85 (m, 2H), 3.53 - 3.46 (m, 9H), 3.25 - 2.99 (m, 8H), 2.89-2.87 (m, 1H), 2.73-2.71 (m, 1H), 2.46 - 2.30 (m, 9H), 2.21 - 1.79 (m, 12H), 1.37 - 1.34 (m, 18H).
MALDI-TOF MS: [M+H+]1426.75, [M+Na+]1448.75.
33-145
Figure 112022066845063-pct00768
반응물 Fmoc-E (OtBu) (OH) (1.39g, 3.29 mmoL), GFLG-LPT (14-128을 합성하는 방법에 따라 합성함, 3g, 3.13mmoL), HBUT (1.78g, 4.7mmoL), HOBT (0.63g, 4.7mmoL)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 0.5 시간 동안 -5 ℃에서 교반하였다. 이어서, DIEA (2.34mL, 14.2mmoL)을 천천히 적가하고, 1시간 후 수득된 용액을 실온으로 이동시키고, 교반시켜 반응시켰다. 반응 종료시, 추출을 위해 탈이온수 (100mL) 및 에틸 아세테이트 (100mL)을 반응 용액에 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수상 중에 생성물이 없어질 때까지 수상을 에틸 아세테이트로 3번 추출하고 (50 mL × 3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수 용액으로 2번 세척하고 (50 mL × 2), 건조를 위해 증발시켰다. 수율 100%.
33-147
Figure 112022066845063-pct00769
33-145 (3.13mmol)을 초음파 조건 하에서 디클로로메탄 (5mL) 및 TFA (6.63mL, 89.4mmol)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 농축시키고, 침전을 위해 메틸 tert-부틸 에테르 (100mL) 및 n-헥산 (200mL)을 수득된 용액에 첨가하여 분말 생성물을 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 2% 메탄올/ 디클로메탄--6% 메탄올/ 디클로로메탄의 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 작동시켜, 2.8g의 생성물을 수율 70%로 수득했다.
39-11
Figure 112022066845063-pct00770
반응물 33-147 (2.8g, 2.14 mmoL), GFLG-SB7 (25-132을 합성하는 방법에 따라 합성함, 2g, 2.247mmoL), HBUT (1.21g, 3.21mmoL), HOBT (0.43g, 3.21mmoL)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 0.5 시간 동안 -5 ℃에서 교반하였다. 이어서, DIEA (1.59mL, 9.63mmoL)을 천천히 적가하고, 1시간 후, 수득된 용액을 실온으로 이동시키고 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 추출을 위해 탈이온수 (100mL) 및 에틸 아세테이트 (100mL)을 반응 용액에 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수상 중에 생성물이 없어질 때까지 수상을 에틸 아세테이트로 3번 추출하고 (50 mL × 3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수 용액으로 2번 세척하고 (50 mL × 2), 건조를 위해 증발시켜서, 생성물 4.6g을 수득했다. 수율 100%.
39-12
Figure 112022066845063-pct00771
반응물 39-11 (2.14mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시키고, 모르폴린 (5.59mL, 64.2mmoL)을 첨가하고, 혼합 용액을 3시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 추출을 위해 탈이온수 (300mL) 및 에틸 아세테이트 (150mL)을 반응 용액에 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수상 중에 생성물이 없어질 때까지 수상을 에틸 아세테이트로 3번 추출하고 (50 mL × 3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 수율 100%.
39-13
Figure 112022066845063-pct00772
반응물 39-12 (2.14 mmoL), Boc-Gly-OH (0.39, 2.247mmoL), HBUT (1.21g, 3.21mmoL), HOBT (0.43g, 3.21mmoL)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 0.5 시간 동안 -5 ℃에서 교반하였다. 이어서, DIEA (1.59mL, 9.63mmoL)을 천천히 적가하고, 1시간 후, 수득된 용액을 실온으로 이동시키고 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 추출을 위해 탈이온수 (300mL) 및 에틸 아세테이트 (150mL)을 반응 용액에 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수상 중에 생성물이 없어질 때까지 수상을 에틸 아세테이트로 3번 추출하고 (50 mL × 3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수 용액으로 2번 세척하고 (50 mL × 2), 건조를 위해 증발시켰다, 수율 100%.
39-20
Figure 112022066845063-pct00773
39-13 (2.14mmol)을 초음파 조건 하에서 디클로로메탄 (5mL) 및 TFA (4.7mL, 64.2mmol)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 농축시키고, 침전을 위해 메틸 tert-부틸 에테르 (100mL) 및 n-헥산 (200mL)을 수득된 용액에 첨가하여 분발 혼합물을 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 1% 암모니아수: 3% 메탄올/ 디클로메탄--1% 암모니아수: 6% 메탄올/ 디클로로메탄의 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 작동시켜, 3g의 생성물을 수율 69%로 수득했다.
45-29
Figure 112022066845063-pct00774
반응물 45-9 (0.22g, 0.1551mmoL)을 수소화 반응기 (hydrogenation reactor) 중에 첨가하고, DMF을 내벽을 따라 적가하여 반응물을 용해시키고, 10% Pd/C (0.05 g)을 첨가하고, 수소를 주입하고, 수득된 용액을 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을, 압축 규조토 (compacted diatomaceous eart)로 충전된 모래 중심 깔때기 (sand core funnel)를 통해 흡입 여과하여 Pd/C를 제거하고, 이어서 규조토를 DMF (40ml)로 3-4번 세척하여, 다음 반응을 위한 생성물 용액을 수득했다.
45-30
Figure 112022066845063-pct00775
반응물 39-20 (1.5g, 0.7445 mmoL), 45-29 (0.10551mmoL), HBUT (0.3529g, 0.9306mmoL), HOBT (0.1257g, 0.9306mmoL)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 0.5 시간 동안 -5 ℃에서 교반하였다. 이어서, DIEA (0.4614mL, 2.7918mmoL) was 천천히 적가하고, 1시간 후, 수득된 용액을 실온으로 이동시키고 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 메틸 tert-부틸 에테르 (100mL) 및 n-헥산 (200mL)을 반응 용액에 첨가하여 분말 생성물을 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 1% 암모니아수: 4% 메탄올/ 디클로메탄--1% 암모니아수: 10% 메탄올/ 디클로로메탄의 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행하였다. 용리 생성물을 건조를 위해 증발시켜, 1.4g의 생성물을 수율 40%로 수득했다.
45-35
Figure 112022066845063-pct00776
45-35 (1.4g)을 초음파 조건 하에서 디클로로메탄 (5mL) 및 TFA (0.5741mL, 7.73mmol)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 농축시키고, 침전을 위해 메틸 tert-부틸 에테르 (100mL) 및 n-헥산 (200mL)을 반응 용액에 첨가하여 분말 생성물을 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 1% 암모니아수: 5% 메탄올/ 디클로메탄--1% 암모니아수 10% 메탄올/ 디클로로메탄의 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 작동시켜, 1.2g의 생성물을 수율 80%로 수득했다.
45-65
Figure 112022066845063-pct00777
반응물 35-74 (2g, 5.4mmol), 숙시닐 알코올 (succinyl alcohol) (5.5082g, 47.86mmol), DMAP (0.2922g, 2.392)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크 중에 첨가하고, 디클로로메탄 (50mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 -5 ℃에서 교반하고, DCC (9.8750g, 47.86mmol)을 빠르게 배치식으로 첨가했다. 수득된 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 여과하고 여과액을 건조를 위해 증발시켰다. 건조 샘플을 로딩하고 10% 에틸 아세테이트/석유 에테르(petroleum ether)-에틸 아세테이트의 구배 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 작동시켜, 3g의 생성물을 수율 81%로 수득했다.
40-121
Figure 112022066845063-pct00778
반응물 45-35 (1.2g, 0.101mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (20mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 저온 및 항온조 (low-temperature and constant temperature bath) (-5°C) 내에 위치시키고 30분 동안 교반하고, DIEA (0.1mL)을 적가했다. 이어서 45-65 (0.015g, 0.021mmoL)을 첨가했다. 용해 후, 수득된 용액을 저속 교반하면서 어둠 속에서 실온에서 반응시켰다. 반응 종료시, 메틸 tert-부틸 에테르 (150mL)을 원뿔형 플라스크 (conical flask) 내에 첨가하고, 반응 용액을 원뿔형 플라스크에 부었고, 이어서 n-헥산 (200mL)을 첨가하여 생성물을 분리하였고, 흡입 여과를 수행했다. 7% 메탄올/ 디클로로메탄-1% 암모니아수: 10% 메탄올/ 디클로로메탄의 구배 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 작동시켜, 0.7g의 생성물을 수득했다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6)δ 10.14-10.12 (m, 12H), 9.02-9.00 (m, 4H), 8.95 -8.94 (m, 14H), 8.18-8.16 (m, 41H), 8.13-8.05 (m, 90H), 7.86-7.83 (m, 30H), 7.55 - 7.47 (m, 41H), 7.26 - 7.17 (m, 274H), 7.11-7.08 (m, 65H), 7.02-7.00 (m, 44H), 6.73-6.64 (m, 6H), 4.39 - 4.13 (m, 71H), 4.03 - 3.45 (m, 268H), 3.22 - 2.66 (m, 207H), 2.41-2.38 (m 59H), 2.31-2.28 (m, 99H), 2.26 - 1.97 (m, 127H), 1.88-1.47 (m, 281H), 0.97 - 0.73 (m, 288H).
40-123
Figure 112022066845063-pct00779
M-NH2·HCL -10K (0.0528g, 0.05mmoL), 40-121 (0.37g, 0.012mmoL), HOBT (0.009g, 0.072mmoL), HBTU (0.027g, 0.072mmoL)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF 용액 (20mL)으로 용해시키고, 30분 후 수득된 용액을 저온 및 항온조 내에 위치시켰다. 이어서 DIEA (0.035mL, 0.216mmol)을 적가하고, 1시간 후, 수득된 용액을 실온으로 이동시키고 저속으로 어둠 속에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 메틸 tert-부틸 에테르 (50mL) 및 n-헥산 (150mL)을 반응 용액에 첨가하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 20% 메탄올: 80% 디클로로메탄 (50mL)로 용해시켰다. 건조 샘플을 로딩하고 1% 암모니아수: 5-10% 메탄올/ 디클로메탄의 구배 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피(칼럼 높이: 5cm)를 작동시켰다. 용리 생성물을 건조를 위해 증발시키고, 무수 에탄올 (5mL) 및 디클로로메탄 (2mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 초음파 처리하여 균질상을 얻었고, n-헥산 (100mL)을 첨가하고, 흡입 여과를 수행했다. 용해 및 침전 과정을 3번 반복했다. 침전물을 진공에서 건조시켜, 생성물 0.45g을 수득했다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6)δ 10.12-10.10 (m, 16H), 8.93-8.91 (m, 16H), 8.19-8.06 (m, 172H), 7.84-7.67 (m, 65H), 7.21-7.11 (m, 354H), 4.54 -3.89 (m, 134H), 3.48-3.46 (m, 3578H), 3.21-3.11 (m, 175H), 2.89-2.87 (m, 28H), 2.79-2.66 (m, 80H), 2.43-2.07 (m, 353H), 1.93-1.43 (m, 340H), 0.96 - 0.74 (m, 288H).
12. 41-40(화합물 번호 13)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00780
Figure 112022066845063-pct00781
Figure 112022066845063-pct00782
Figure 112022066845063-pct00783
Figure 112022066845063-pct00784
Figure 112022066845063-pct00785
Figure 112022066845063-pct00786
39-27
Figure 112022066845063-pct00787
반응물 Fmoc-Glu-OH (Aladdin로부터 구매, 0.7719g, 2.0899mmol), 31-155 (27-120을 합성하는 방법에 따라 합성함, 5g, 4.3887mmol), HBUT (2.3777g, 6.2697mmol), HOBT (0.8472g, 6.2697mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (40 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하였다. 이어서, DIEA (3.1208mL, 18.8091mmol)을 천천히 적가하고, 수득된 용액을 2시간 동안 저온에서 반응시키고, 이어서 실온에서 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 이동시키고, 추출을 위해 탈이온수 (200mL) 및 에틸 아세테이트 (300mL)를 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 3번 추출하고 (100 mL × 3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수 용액으로 2번 세척하고 (150 mL × 2), 농축시키고, 건조를 위해 증발시켜, 생성물 5.5g을 수율 100%로 수득했다.
39-29
Figure 112022066845063-pct00788
반응물 39-27 (5.4 g, 2.0899mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 실온에서 교반하였다. 이어서 모르폴린 (4.5544mL, 52.2475mmol)을 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 2시간 동안 실온에서 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 추출을 위해 탈이온수 (200mL) 및 에틸 아세테이트 (300mL)을 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 3번 추출하고 (100 mL × 3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수 용액으로 2번 세척하고 (150 mL × 2), 100mL로 농축시키고, 실리카 겔 분말 (15g)을 첨가했다. 1% 암모니아수: 0.5% 메탄올/ 디클로메탄--1% 암모니아수: 2% 메탄올/ 디클로로메탄의 구배 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 작동시켜, 3.9848g의 생성물을 수율 73%로 수득했다.
41-26
Figure 112022066845063-pct00789
반응물 31-155 (27-120을 합성하는 방법에 따라 합성함, 1g, 0.87mmol)을 DMF (20 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 0℃에서 교반하고, DIEA (0.58mL, 3.51mmol)을 적가했다. 30분 후, 석신산 무수물 (0.26g, 2.16mmol)을 첨가했다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 추출을 위해 탈이온수 (100mL) 및 에틸 아세테이트 (100mL)을 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수상 중에 생성물이 없어질 때까지 수상을 에틸 아세테이트로 3번 추출하고 (50 mL × 3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 건조를 위해 증발시켰다, 수율 100%.
41-27
Figure 112022066845063-pct00790
반응물 39-29 (2.0g, 0.87mmol), 41-26 (0.4721g, 0.87mmol), HBTU (0.49g, 1.30mmol), HOBT (0.17g, 1.30mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하였다. 이어서, DIEA (0.64 mL, 3.91mmol)을 천천히 적가하고, 반응이 종료될 때까지 수득된 용액을 저온에서 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 추출을 위해 에틸 아세테이트 (200mL) 및 탈이온수 (150mL)을 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 2번 추출하고 (100 mL × 2), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수 용액으로 한번 세척하고 (100mL), 농축시키고, 실리카 겔 분말을 첨가하고, 증발시키고, 50%-100% 에틸 아세테이트/석유 에테르의 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행하여, 생성물 1.8g을 수율 60%로 수득했다.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ8.57 - 8.47 (m, 3H), 8.35 - 7.88 (m, 10H), 7.75 -7.65 (m, 3H), 7.39 - 7.27 (m, 60H), 6.76 - 6.61 (m, 3H), 5.15 - 5.02 (m, 24H), 4.42 - 4.29 (m, 9H), 3.93 - 3.87 (m, 5H), 3.61 - 3.47 (m, 13H), 3.42 - 3.36 (m, 7H), 2.90 - 2.80 (m, 6H), 2.47 - 2.39 (m, 12H), 2.23 - 1.68 (m, 31H), 1.38 - 1.14 (m, 55H).
41-33
Figure 112022066845063-pct00791
반응물 41-27 (0.41g, 0.113mmol) 및 10% Pd/C (0.166g)을 DMF (30mL)로 용해시키고, 수소화 반응기 내에 첨가하고, 장치를 준비시키고, 수소를 18Ps의 압력으로 주입하고, 이어서 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 규조토를 필터 케이크로 이용하여 흡입 여과하여 Pd/C를 제거하고, 이어서 규조토를 DMF로 4번 세척하여 (25mLХ4), 생성물 용액을 수득했다.
41-34
Figure 112022066845063-pct00792
반응물 39-20 (3.0g, 1.48mmol), 41-33 (0.2858g, 0.113mmol), HBTU (0.77g, 2.034mmol), HOBT (0.27g, 2.034mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 30분 동안 -5 ℃에서 교반하였다. 이어서, DIEA (1.0mL, 6.102mmol)을 천천히 적가하고, 반응이 종료될 때까지 수득된 용액을 저온에서 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 메틸 tert-부틸 에테르 (100mL) 및 n-헥산 (200mL)을 반응 용액에 첨가하여 분말 생성물을 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 1% 암모니아수: 2% 메탄올/ 디클로메탄--1% 암모니아수: 10% 메탄올/ 디클로로메탄의 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 작동시켜, 1.64g의 생성물을 수율 55%로 수득했다.
41-35
Figure 112022066845063-pct00793
41-34 (1.64g, 0.06215mmol)을 초음파 조건 하에서 디클로로메탄 (5mL) 및 TFA (0.41mL, 5.5935mmol)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 농축시키고, 침전을 위해 메틸 tert-부틸 에테르 (100mL) 및 n-헥산 (200mL)을 수득된 용액에 첨가하여 분말 생성물을 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 1% 암모니아수: 5% 메탄올/ 디클로메탄--1% 암모니아수: 10% 메탄올/ 디클로로메탄의 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 작동시켜, 1.13g의 생성물을 수율 70%로 수득했다.
41-40
Figure 112022066845063-pct00794
반응물 41-35 (1.1g, 0.04350mmol) 및 M-SCM-10K (1.43g, 0.14355mmol)을 DMF 용액 (20mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 어둠 속에서 저속 교반하면서 반응시켰다. 반응 종료시, 메틸 tert-부틸 에테르 (50mL) 및 n-헥산 (100mL)을 이용해 반응 용액을 침전시키고, 흡입 여과를 수행했다. 건조 샘플을 로딩하고 디클로로메탄--1% 암모니아수: 8% 메탄올/ 디클로메탄의 구배 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 작동시켰다. 이어서 용리 생성물을 건조를 위해 증발시키고, 무수 에탄올 (10mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 초음파 처리하여 균질 상을 얻었고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 (50mL)을 첨가했다. 이러한 침전 과정을 3번 반복했다. 침전물을 진공에서 건조시켜, 생성물 1g을 수득했다. 수율 41%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ8.58 - 8.53 (m, 5H), 8.13 - 7.92 (m, 111H), 7.72 - 7.65 (m, 34H), 7.58 - 7.46 (m, 51H), 7.41 - 7.33 (m, 88H), 7.30 - 7.16 (m, 241H), 5.29 - 5.23 (m, 12H), 5.16 - 5.08 (s, 19H), 4.15 - 4.12 (m, 48H), 4.05 - 3.97 (m, 75H), 3.51 - 3.50 (m, 3285H), 3.25 - 3.23 (m, 173H), 3.16 - 2.98 (m, 242H), 2.93 - 2.85 (m, 54H), 2.76 - 2.72 (m, 50H), 2.68 - 2.65 (m, 55H), 2.36 - 2.27 (m, 74H), 0.94 - 0.75 (m, 216H).
13. 39-55(화합물 번호 12)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00795
Figure 112022066845063-pct00796
Figure 112022066845063-pct00797
Figure 112022066845063-pct00798
Figure 112022066845063-pct00799
39-31
Figure 112022066845063-pct00800
33-22 (22-181을 합성하는 방법에 따라 합성함, 0.5g, 0.54mmol)을 100 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, 초음파 조건 하에서 디클로로메탄 (10mL)로 용해시켰다. 페닐 클로로포르메이트 (Phenyl chloroformate) (0.3mL, 2.19mmol)을 첨가하고, 수득된 용액을 30분간 0 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 이어서 페닐 클로로포르메이트 (0.13mL, 1.09mmol)을 천천히 적가하고, 수득된 용액을 2시간 동안 저온에서 반응시켰다. 반응 종료시, 추출을 위해 탈이온수 (200mL) 및 에틸 아세테이트 (300mL)을 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 3번 추출하고 (100 mL × 3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수로 2번 세척하고 (150 mL × 2), 건조를 위해 증발시켜, 생성물 0.5g을 수득했다.
39-30
Figure 112022066845063-pct00801
39-29 (1.4g, 0.59mmol), 39-31 (0.5g, 0.54mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (30mL)로 용해시켰다. 이어서, DIEA (0.1mL)을 첨가하고, 이어서 반응이 종료될 때까지 혼합 용액을 80℃에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 추출을 위해 탈이온수 (100mL) 및 에틸 아세테이트 (150mL)을 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 3번 추출하고 (50 mL × 3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수 용액으로 2번 세척하고 (100 mL × 2), 50mL로 농축시키고, 실리카 겔 분말(6g)을 첨가하고, 증발시키고, 2% 메탄올/ 디클로로메탄-3% 메탄올/ 디클로로메탄의 구배 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행하여, 생성물 1.3g을 수율 65.38%로 수득했다.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ8.57 - 8.47 (m, 3H), 8.40 - 8.06 (m, 6H), 8.01 - 7.65 (m, 4H), 7.38 - 7.28 (s, 60H), 7.22 - 7.11 (m, 1H), 5.14 - 5.03 (m, 24H), 4.42 - 4.31 (m, 8H), 3.94 - 3.86 (m, 5H), 3.60 - 3.48 (m, 13H), 2.88 - 2.81 (m, 4H), 2.47 - 2.37 (m, 11H), 2.22 - 2.13 (m, 6H), 2.10 - 1.72 (m, 23H), 1.37 - 1.31 (m, 29H), 1.26 - 1.21 (m, 18H), 0.88 - 0.82 (m, 2H).
39-51
Figure 112022066845063-pct00802
39-30 (0.16g, 0.048mmol) 및 10% Pd/C (70mg)을 DMF (30mL)로 용해시키고, 수소화 반응기 내에 첨가하고, 장치를 준비시키고 수소를 18Ps의 압력으로 주입하고, 이어서 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 필터 케이크로 규조토를 이용하여 흡입 여과하여 Pd/C를 제거하고, 이어서 규조토를 DMF로 4번 세척하여 (25 mL × 4), 생성물 용액을 수득했다.
39-52
Figure 112022066845063-pct00803
39-20 (1.25g, 0.625mmol), 39-51 (0.048mmol), HBTU (0.32g, 0.864mmol), HOBT (0.11g, 0.864mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (30mL)로 용해시키고, 초음파 처리를 수행하여 반응물을 완전히 용해시키고, 수득된 용액을 30분간 -5 ℃에서 교반하였다. 이어서, DIEA (0.42mL, 2.59mmol)을 천천히 적가하고, 수득된 용액을 2시간 동안 저온에서 교반하고, 이어서 반응이 종료될 때까지 실온에서 반응시켰다. 반응 종료시, 메틸 tert-부틸 에테르 (250mL)을 반응 용액에 첨가하고, 초음파 처리를 5분간 수행하고, 상청액을 버리고, 에틸 아세테이트 (20mL)을 하층 액체에 첨가하고, 3분간 초음파 처리를 수행하고, 메틸 tert-부틸 에테르 (150mL) 및 n-헥산 (100mL)을 고체로 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 20% 메탄올/ 디클로로메탄 (20mL)로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (10g)을 첨가했고, 증발시키고, 1% 암모니아수: 6% 메탄올/ 디클로로메탄-1% 암모니아수: 15% 메탄올/ 디클로로메탄의 구배 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행하여, 생성물 0.6g을 수득했다.
39-53
Figure 112022066845063-pct00804
39-52 (0.6g)을 디클로로메탄 (15mL) 및 TFA (0.2267mL, 3.0521mmol)로 용해시키고, 초음파 처리를 수행하여 화합물을 완전히 용해시켰다. 불투명 유리 스토퍼 (ground glass stopper)을 사용하고, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 증발시켜 디클로로메탄을 제거하고, 에틸 아세테이트 (20mL)를 첨가하고, 초음파 처리를 2분간 수행하고, 메틸 tert-부틸 에테르 (150mL) 및 n-헥산 (70mL)을 첨가하고, 흡입 여과를 수행했다. 초음파 조건 하에서 여과 케이크를 20% 메탄올/ 디클로로메탄으로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (6g) 을 첨가하고, 회전 증발기로 증발시키고, 1% 암모니아수: 6% 메탄올/ 디클로로메탄-1% 암모니아수: 15% 메탄올/ 디클로로메탄의 구배 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행하여, 생성물 0.3g을 수득했다.
39-55
Figure 112022066845063-pct00805
39-53 (0.6g)을 DMF (20mL)로 용해시키고, M-SCM-20K (0.9378g)을 첨가하고, 초음파 처리를 수행하여 반응물을 용해시키고, 이어서 수득된 용액을 저속으로 어둠 속에서 반응시켰다. 반응 종료시, 메틸 tert-부틸 에테르 (150mL), n-헥산 (70mL)을 반응 용액에 첨가하여 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 20% 메탄올/ 디클로로메탄로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (10g) 을 첨가하고, 증발시키고, 디클로로메탄-1% 암모니아수: 15% 메탄올/ 디클로로메탄의 구배 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행하였다. 용리 생성물을 모으고, 건조를 위해 증발시키고, 이어서 무수 에탄올 (3mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 초음파 처리하여 균질상을 수득했다. 이어서, 메틸 tert-부틸 에테르 (150mL), n-헥산 (50mL)을 첨가하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 무수 에탄올로 추가로 용해시키고 (3mL), 침전을 위해 메틸 tert-부틸 에테르 및 n-헥산을 첨가했다. 용해 및 침전의 과정을 3번 반복했다. 흡입 여과를 수행하고, 여과 케이크를 건조시켜, 생성물 0.8g을 수득했다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ9.93 - 9.81 (m, 7H), 9.09 - 9.01 (m, 14H), 8.79 - 7.94 (m, 163H), 7.87 - 6.50 (m, 404H), 5.79- 5.70 (m, 5H), 5.29- 5.23 (m, 18H), 4.81 - 4.00 (m, 138H), 3.51 - 3.50 (m, 2227H), 3.25 - 2.64 (m, 177H), 2.36 - 1.91 (m, 101H), 1.55 - 1.32 (m, 293H), 0.88 - 0.72 (m, 216H).
14. 29-235(화합물 번호 15)의 합성
Figure 112022066845063-pct00806
Figure 112022066845063-pct00807
Figure 112022066845063-pct00808
Figure 112022066845063-pct00809
Figure 112022066845063-pct00810
Figure 112022066845063-pct00811
Figure 112022066845063-pct00812
Figure 112022066845063-pct00813
Figure 112022066845063-pct00814
Figure 112022066845063-pct00815
Figure 112022066845063-pct00816
Figure 112022066845063-pct00817
26-250
Figure 112022066845063-pct00818
Boc-Lys (Boc)-OH (Arm Pharm로부터 구입함, 0.3769 g, 1.0879 mmol), 26-232 (22-181을 합성하는 방법에 따라 합성함, 0.989 mmol), HBTU (0.5627 g, 1.4835 mmol), HOBT (0.2005 g, 1.4835 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (40 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 30분간 -5 ℃에서 교반하였다. 이어서 DIEA (0.7356 mL, 4.4505 mmol)을 3분 동안 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 1시간 동안 교반하면서 -5 ℃에서 반응을 지속시키고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하였다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 추출을 위해 순수한 물 (120 mL) 및 에틸 아세테이트 (80 mL)을 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 3번 추출하고 (80 mL x 3) 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 염화 나트륨 용액으로 세척하고 (80 mL x 3) 농축시키고, 건조를 위해 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 조 생성물 26-250을 수득했다: 수율 100%.
26-255
Figure 112022066845063-pct00819
26-250 (0.989 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 용해시키고, TFA (2.2182 mL, 29.87 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 건조를 위해 증발시켜 오일의 생성물을 수득했다. 잔여물을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 용해시키고, 거품이 없어질 때까지 중화를 위해 과량의 고체 중탄산 나트륨을 수득된 용액에 첨가하고, 여과를 수행했다. 실리카 겔 분말 (15 g)을 여과액에 첨가하고, 수득된 용액을 이어서 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 1% 암모니아수 및 3%-6% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 구배 용리를 이용해 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 26-255을 수득했다: 0.8 g, 수율 81%.
26-258
Figure 112022066845063-pct00820
26-255 (0.8 g, 0.7698 mmol), 41-26 (2.0990 g, 1.6936 mmol), HBTU (0.8761 g, 2.3095 mmol), HOBT (0.3121 g, 2.3095 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반하여 반응시켰다. 이어서 DIEA (1.1458 mL, 6.9285 mmol)을 3분 동안 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 1시간 동안 교반하면서 -5℃에서 반응을 지속시키고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 추출을 위해 순수한 물 (120 mL) 및 에틸 아세테이트 (80 mL)을 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (80 mL x 3) 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 염화 나트륨 용액으로 세척하고 (80 mLⅹ 3), 농축시키고 건조를 위해 증발시켰다. 수득된 고체를 메탄올/ 디클로로메탄 (1: 4) 용액 (200 mL)으로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (15 g) 을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 3%-5% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 구배 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조를 위해 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 26-258을 수득했다: 1.6884 g, 수율 63%.
29-152
Figure 112022066845063-pct00821
29-147 (42-20을 합성하는 방법에 따라 합성함, 1.7952 g, 1.3616 mmol) 및 10% Pd/C (0.03 g)을 수소화 반응기 내에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 수소화 반응기를 이어서 밀봉하여 "3번 펌핑 및 3번 충전 (three pumping and three charging)"작업을 수행하여, 수소화 반응기의 압력이 0.18 MPa로 읽히도록 하였고, 이어서 수득된 용액을 밤새 실온에서 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 규조토로 충전시켰다. 여과 케이크를 DMF로 세척하여 (20 mL x 3) 생성물 29-152을 수득했다, 수율 100%.
29-153
Figure 112022066845063-pct00822
29-152 (1.3616 mmol), 42-18 (6.0 g, 6.2632 mmol), HBTU (3.0990 g, 8.1696mmol), HOBT (1.1040g, 8.1696 mmol)을 500 mL 플라스크 내에 첨가하고, DMF로 용해시키고 (60 mL), 이어서 혼합 용액을 30분 동안 0 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 이어서 DIEA (4.0532 mL, 24.5088 mmol)을 7분 동안 천천히 적가하고, 수득된 용액을 밤새 0℃에서 교반하면서 반응을 지속시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 n-헥산 (100 mL)로 진탕하고 (shake), 상청액을 버렸다. 앞선 작업을 3번 반복했다. 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 이어서 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 앞선 작업을 3번 반복했다. 분말 고체를 반응 용액으로부터 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL x 3)로 세척하고, 세척된 여과 케이크를 모으고, 메탄올/ 디클로로메탄 (1: 4)의 혼합 용매 (100 mL)로 용해시켰다. 실리카 겔 분말 (30 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 1% 암모니아수 및 5%-8% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 구배 용리를 이용해 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 29-153을 수득했다: 3.6 g, 수율 47%.
29-157
Figure 112022066845063-pct00823
29-153 (3.6 g, 1.3493 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, 디클로로메탄로 용해시키고 (10 mL), 이어서 TFA (1.5031 mL, 20.2401 mmol)을 첨가하고, 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 건조를 위해 증발시켜 오일 생성물을 수득했다. 이어서, 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL) 을 첨가하여 분말 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (40 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 29-157을 수득했다, 수율 100%.
29-162
Figure 112022066845063-pct00824
29-157 (1.3493 mmol), GFLG-PCB (30-33을 합성하는 방법에 따라 합성함, 1.220g, 1.4842 mmol), HBTU (0.7676 g, 2.0240 mmol), HOBT (0.2735 g, 2.0240 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (60 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분 동안 0 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 이어서 DIEA (1.0 mL, 6.0719 mmol)을 3분 동안 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 밤새 0℃에서 교반하면서 반응을 지속시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 n-헥산 (100 mL)로 진탕시키고, 상청액을 버렸다. 앞선 작업을 3번 반복했다. 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 이어서 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 앞선 작업을 3번 반복했다. 분말 고체를 반응 용액으로부터 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (40 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 29-162을 수득했다: 수율 100%.
29-164
Figure 112022066845063-pct00825
29-162 (1.3493 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF로 용해시키고 (15 mL), 모르폴린 (1.2 mL, 13.493 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 1시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 n-헥산으로 진탕시키고 (100 mL), 상청액을 버렸다. 앞선 작업을 3번 반복했다. 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 이어서 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 앞선 작업을 3번 반복했다. 분말 고체를 반응 용액으로부터 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (40 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고, 메탄올/ 디클로로메탄 (1: 4)의 혼합 용매(100 mL) 으로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (15 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 1% 암모니아수 및 5%-9% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 구배 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 29-164을 수득했다: 4.1 g, 수율 59%.
29-167
Figure 112022066845063-pct00826
29-164 (4.1 g, 0.7795 mmol), Boc-Gly-OH (0.1502 g, 8574 mmol), HBTU (0.4434 g, 1.1692 mmol), HOBT (0.1578 g, 0.1.1692 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (40 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 -5 ℃에서 교반하여 반응시켰다. 이어서 DIEA (0.5797 mL, 3.5076 mmol)을 천천히 적가하고, 수득된 용액을 1 시간 동안 -5℃에서 교반하면서 반응을 지속시키고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 n-헥산 (100 mL)으로 진탕시키고, 상청액을 버렸다. 앞선 작업을 3번 반복했다. 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 이어서 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 앞선 작업을 3번 반복했다. 분말 고체를 반응 용액으로부터 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (40 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고, 진공 오븐에서 건조하여, 생성물을 수득했다, 수율 100%.
29-194
Figure 112022066845063-pct00827
29-167 (0.7795 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, 디클로로메탄 (5 mL)으로 용해시키고, TFA (0.8683 mL, 11.6921 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 건조를 위해 증발시켜 오일 생성물을 수득했다. 이어서, 메틸 tert-부틸 에테르 (250 mL)을 첨가하여 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (100 mL x 3) 메탄올 (60 mL) /디클로로메탄 (240 mL) 용액으로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (15 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 1% 암모니아수 및 3%-8% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조를 위해 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물을 수득했다: 3.2g, 수율 76%.
29-196
Figure 112022066845063-pct00828
반응물 26-258 (0.2545g, 0.073mmol), 10% Pd/C (40 mg)을 수소화 반응기 내에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 이어서 수소를 1.8 MPa의 압력으로 주입하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 규조토로 충전시켰다. 이어서 규조토를 DMF로 세척하고 (20 mL x 3), DMF 용액을 다음 반응에서 원료로 합쳤다.
29-197
Figure 112022066845063-pct00829
반응물 29-194 (3.2 g, 0.9211 mmol), 29-196 (0.073mmol), HBTU (0.5 g, 1.3159 mmol), HOBT (0.1778 g, 1.3159mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 30 분간 -5℃에서 교반하였다. 이어서, DIEA (0.6525mL, 3.9477mmol)을 천천히 적가하고, 수득된 용액을 교반하여 1시간 동안 -5℃에서 반응시키고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 메틸 tert-부틸 에테르 (100mL)을 반응 용액에 첨가하고, 수득된 용액을 냉장고에 위치시키고 30분간 후 꺼내고, 고체를 분리시키고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 모으고, 메탄올/ 디클로로메탄 (1: 4)의 혼합 용매 (100 mL)으로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (15 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 1% 암모니아수: 3% 메탄올/ 디클로메탄--1% 암모니아수: 10% 메탄올/ 디클로로메탄의 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 작동시켜, 2.2g의 생성물을 수율 67%로 수득했다.
1H-NMR (600MHz, DMSO-d 6) δ 10.17-10.13 (m, 10H), 9.10-8.84 (m, 88H), 8.35 - 7.43 (m, 676H), 7.37-6.69 (m, 420H), 5.87-5.73 (m, 12H), 4.60 - 4.09 (m, 217H), 3.96 - 3.43 (m, 1173H), 3.21 - 2.65 (m, 524H), 2.30 - 1.66 (m, 440H), 1.59 - 1.08 (m, 541H), 0.92-0.75 (m, 360H).
29-201
Figure 112022066845063-pct00830
29-197 (2.2 g)을 초음파 조건 하에서 디클로로메탄 (10 mL) 및 TFA (4 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 건조를 위해 증발시켜 오일의 생성물을 수득했다. 메틸 tert-부틸 에테르 (100mL)을 첨가하여 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 모으고, 메탄올/ 디클로로메탄 (1: 4)의 혼합 용매 (100 mL)로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (15 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 1% 암모니아수: 4% 메탄올/ 디클로로메탄--1% 암모니아수: 10% 메탄올/ 디클로로메탄의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행하여, 생성물 1.4g을 수율 52%로 수득했다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 10.13-10.07 (m, 10H), 9.37-9.29 (m, 63H), 9.09 - 8.84 (m, 51H), 8.55-8.49 (m, 20H), 8.03-7.38m, 560H), 7.12-7.06 (m, 376H), 6.74 - 6.64 (m, 13H), 5.36-5.28 (m, 12H), 4.57 - 4.19 (m, 153H), 3.85-3.60 (m, 803H), 3.16 - 3.01 (m, 317H), 2.30 - 2.10 (m, 150H), 1.91-1.72 (m, 143H), 1.54-1.44 (m, 127H), 1.34-1.15 (m, 940H), 0.93 - 0.76 (m, 360H).
29-235
Figure 112022066845063-pct00831
반응물 29-201 (1.0g) 및 M-SCM-20K (1.2163g, 0.0589mmol)을 DMF 용액(20mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 1주일 동안 어둠 속에서 저속 교반하면서 반응시켰다. 반응 종료시, 메틸 tert-부틸 에테르 (100mL)을 반응 용액에 첨가하고, 수득된 용액을 냉장고에 위치시키고 30분 후 꺼내고, 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 모으고, 메탄올/ 디클로로메탄 (1: 4)의 혼합 용매 (100 mL)로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (15 g) 을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 1% 암모니아수: 3% 메탄올/ 디클로로메탄--1% 암모니아수: 8% 메탄올/ 디클로로메탄의 구배 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행하였다. 이어서 용리 생성물을 건조를 위해 증발시키고, 무수 에탄올로 용해시키고(10mL), 수득된 용액을 초음파 처리하여 균질상을 얻고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 (50mL)을 첨가했다. 이러한 침전 작업을 3번 반복했다. 침전물을 진공에서 건조시켜, 생성물 1.3g을 수득했다. 수율 61%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 10.05-9.88 (m, 10H), 9.41-9.30 (m, 62H), 9.11 - 8.89 (m, 50H), 8.58-8.51 (m, 20H), 8.11-7.40m, 562H), 7.15-7.08 (m, 378H), 6.78 - 6.66 (m, 13H), 5.38-5.31 (m, 15H), 4.58 - 4.21 (m, 151H), 3.95-3.65 (m, 796H), 3.52 - 3.43 (m, 3706H), 3.19 - 3.07 (m, 321H), 2.32- 2.13 (m, 148H), 1.93-1.76 (m, 146H), 1.58-1.46 (m, 125H), 1.36-1.16 (m, 935H), 0.98 - 0.74 (m, 366H).
15. 37-108(화합물 번호 17)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00832
Figure 112022066845063-pct00833
Figure 112022066845063-pct00834
Figure 112022066845063-pct00835
Figure 112022066845063-pct00836
Figure 112022066845063-pct00837
Figure 112022066845063-pct00838
37-39
Figure 112022066845063-pct00839
에리스리톨 (Erythritol) (Aladdin로부터 구입, 2.5g, 20.4717 mmol)을 500 mL 내에 첨가하고, THF (130mL)로 용해시키고, 이어서 수득된 용액을 0℃에서 반응시켰다. 질소 기체의 보호 하에서, 포타슘 tert-부톡사이드 (1 mol/L) (98.2642 mL, 98.2642 mmol)의 THF 용액을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 5시간 동안 교반하면서 반응을 지속시켰다. 이어서 벤질 브로모아세테이트 (14.5937 mL, 92.1225 mmol)를 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 교반하면서 2시간 동안 반응을 지속시키고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 포화 중탄산 나트륨 용액 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (250 mL)를 첨가하고, 추출을 위해 수득된 용액을 진탕했다. 수상을 에틸 아세테이트로 세척하고 (200 mL x 2), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수 용액으로 세척하고 (200 mL x 2), 농축시키고 건조를 위해 증발시켰다. 수득된 고체 생성물을 디클로로메탄으로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (50 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고 1.5%-5% 에틸 아세테이트를 함유하는 석유 에테르 혼합 용액의 용리를 사용해 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조를 위해 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 37-39을 수득했다: 4.8g, 수율 33%.
37-49
Figure 112022066845063-pct00840
37-39 (1.03 g, 1.441 mmol) 및 10% Pd/C (0.040 g)을 수소화 반응기 내에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 이어서 수소를 1.8 MPa의 압력으로 주입하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 규조토로 충전시켰다. 이어서 규조토를 DMF로 세척하고 (20 mL x 3), DMF 용액을 다음 반응을 위한 원료로 합했다.
37-67
Figure 112022066845063-pct00841
37-49 (0.14 g, 0.3013 mmol), 37-66 (35-4을 합성하는 방법에 따라 합성함, 1.9g, 1.506 mmol), HBTU (1.537 g, 4.0528 mmol), HOBT (0.5473 g, 4.0528 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반하여 반응시켰다. 이어서 DIEA (2.01 mL, 12.1585 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 1시간 동안 반응을 지속하고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 탈이온수 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 세척하고 (200 mL x 2), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수 용액으로 세척하고 (200 mL x 2), 건조를 위해 증발시키고, 오븐에서 건조하여, 생성물 37-67을 수득했다: 1.61 g.
37-68
Figure 112022066845063-pct00842
37-67 (1.6053 g, 0.3013 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 모르폴린 (2.6245 mL, 30.125 mmol)을 첨가하고, 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 포화 식염수 용액 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 세척하고 (200 mL x 2), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 식염수 용액으로 세척하고 (200 mL × 1), 농축시키고 건조를 위해 증발시키고, 실리카 겔 분말 (20 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 0.5% 암모니아수 및 5%-8% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조를 위해 증발시키고, 오븐에서 건조하여, 생성물 37-68을 수득했다: 0.59 g, 수율 45%.
37-79
Figure 112022066845063-pct00843
33-143 (3.7248 g, 15.0 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, 디클로로메탄 (30 mL)로 용해시키고, 트리에틸아민 (2.598 mL, 18.4912 mmol)을 첨가하고, 이어서 수득된 용액을 30분간 0℃에서 교반하여 반응시켰다. 페닐 클로로포르메이트 (Phenyl chloroformate) (1.39 mL, 11.0947 mmol)을 천천히 적가하고, 이어서 수득된 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 디클로로메탄 (200 mL) 및 탈이온수 (200 mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수상을 디클로로메탄로 세척하고 (200 mL × 1), 수득된 유기상들을 합치고, 실리카 겔 분말 (10 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 3% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행하여, 생성물 37-79을 수득했다: 2.34 g, 수율 69%.
37-81
Figure 112022066845063-pct00844
37-68 (0.59 g, 0.1329 mmol), 37-79 (0.2938 g, 0.7975 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (40 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 밤새 80℃에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 에틸 아세테이트 (200 mL) 및 포화 식염수 용액 (200 mL)으로 추출하고, 유기상을 분리했다. 유기상을 포화 식염수 용액으로 세척하고 (150 mL), 실리카 겔 분말 (15 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 6%-8% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행하여, 생성물 37-81을 수득했다: 0.27 g, 수율 39%.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.32 - 8.14 (m, 20H), 7.41 - 7.38 (m, 80H), 7.26 - 7.10 (m, 4H), 6.21 - 5.93 (m, 8H), 5.34- 5.20 (m, 32H), 4.51 - 4.45 (m, 16H), 3.96 - 3.81 (m, 24H), 3.63 - 3.04 (m, 32H), 2.21 - 2.05 (m, 64H), 1.84 - 1.55 (m, 16H), 1.48 - 1.33 (m, 36H), 1.25 (m, 9H).
37-89
Figure 112022066845063-pct00845
37-81 (0.27 g, 0.0488 mmol) 및 10% Pd/C (0.070 g)을 수소화 반응기 내에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 수소를 1.8 MPa의 압력으로 주입하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 규조토로 충전시켰다. 이어서 규조토를 DMF로 세척하고 (20 mL x 3), DMF 용액을 다음 반응을 위한 원료로 합했다.
37-91
Figure 112022066845063-pct00846
37-89 (0.1998 g, 0.0488 mmol), 37-38 (39-20을 합성하는 방법에 따라 합성함, 1.769 g, 0.87796 mmol), HBTU (0.4442 g, 1.1712 mmol), HOBT (0.1583 g, 1.1712 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반하여 반응시켰다. 이어서 DIEA (0.58 mL, 3.5136 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 1시간 동안 반응을 지속하고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, n-헥산 (250 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL)을 반응 용액의 층에 첨가하고, 상청액을 버리고, n-헥산 (250 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (40 mL)을 추가 침전을 위해 하부 오일 액체 상에 첨가하고, 이러한 작업을 4번 반복하여, 점성의(viscous) 오일의 생성물을 수득했다. 메틸 tert-부틸 에테르 (150 mL)을 오일 생성물에 첨가하여 고체를 분리하고, 이어서 여과를 수행하고, 실리카 겔 분말 (15 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 1% 암모니아수 및 8%-10% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조를 위해 증발시키고, 오븐에서 건조하여, 생성물 37-91을 수득했다: 1.2 g, 수율: 68%.
37-101
Figure 112022066845063-pct00847
37-91 (1.2 g, 0.0488 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, 디클로로메탄 (20 mL)로 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (trifluoroacetic acid) (0.7248 mL, 9.76 mmol), 및 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL)을 반응 용액에 첨가하여 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (40 mL x 3) 메탄올 (20 mL) 및 디클로로메탄 (80 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (15 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 1% 암모니아수 및 8%-12% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조를 위해 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 37-101을 수득했다: 0.69g, 수율 40%.
37-108
Figure 112022066845063-pct00848
37-101 (0.3 g, 0.0084 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (35 mL)로 용해시키고, M-SCM-10K (0.5348 g, 0.0505 mmol, JenKem로 구입함)을 첨가하고, 초음파 처리를 수행하여 반응물을 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 실온에서 저속 교반하면서 7일 동안 어둠속에서 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 n-헥산 (150 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, n-헥산 (130 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (30 mL)을 하층 액체에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복하여, 점성의 오일의 생성물을 수득했다. 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL)을 오일 생성물에 첨가하여 고체를 분리하고, 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (50 mL x 3), 메탄올 (30 mL) 및 디클로로메탄 (120 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (15 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 1% 암모니아수 및 6%-9% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조를 위해 증발시키고, 1시간 동안 진공 오븐에서 건조시켰다. 수득된 건조 생성물을 무수 에탄올 (7 mL) 및 디클로로메탄 (20 mL)로 용해시키고, 이어서 메틸 tert-부틸 에테르 (100 mL)을 수득된 용액에 첨가하여 고체를 분리하고, 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (50 mL x 2) 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 37-108을 수득했다: 0.3 g, 수율: 52%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ8.49 - 8.22 (m, 49H), 8.12 - 8.03 (m, 212H), 7.91 - 7.66 (m, 48H), 7.36 - 7.01 (m, 388H), 6.97 - 6.85 (m, 16H), 6.70 - 6.01 (m, 40H), 5.34 - 5.16 (m, 64H), 4.92 - 4.26 (m, 144H), 4.09 - 4.03 (m, 152H), 3.76 - 3.54 (m, 86H), 3.51 - 3.41 (m, 3722H), 3.44 - 3.19 (m, 160H), 2.93 - 2.72 (m, 48H), 2.46 - 2.05 (m, 192H), 1.84 - 1.55 (m, 144H), 1.25 - 0.91 (m, 297H).
16. 29-226(화합물 번호 8)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00849
Figure 112022066845063-pct00850
Figure 112022066845063-pct00851
Figure 112022066845063-pct00852
Figure 112022066845063-pct00853
Figure 112022066845063-pct00854
Figure 112022066845063-pct00855
Figure 112022066845063-pct00856
Figure 112022066845063-pct00857
Figure 112022066845063-pct00858
29-168
Figure 112022066845063-pct00859
Fmoc-Glu-OtBu (4 g, 9.401 mmol, InnoChem로부터 구입함), H-Gly-OtBu·HCl (1.7 g, 10.3415 mmol, InnoChem로부터 구입함), HBTU (5.3 g, 14.1021 mmol) 및 HOBT (1.9 g, 14.1021 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (70 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 0℃에서 교반했다. 이어서 DIEA (7.0 mL, 42.3061 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 밤새 0℃에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 순수한 물 (100 mL) 및 에틸 아세테이트 (80 mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (80 mL ⅹ 2), 수득된 유기상들을 합쳤다. 이어서 유기상을 포화 염화 나트륨 용액으로 추출하고 (150 mLⅹ 3), 농축시키고, 건조를 위해 증발시키고, 건조시키켜, 조 생성물을 수득했다.
29-171
Figure 112022066845063-pct00860
29-168 (9.401 mmol)을 500 mL 플라스크 내에 첨가하고, 디클로로메탄 (10 mL) 및 TFA (7.0 mL, 94.01 mmol)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 회전 증발기를 거치게 하여 오일의 생성물을 수득하고, 이어서 오일의 생성물을 1 L 분별 깔때깔 때 이동시키고, 포화 중탄산 나트륨 용액 (100 mL)을 첨가하여 pH를 염기성으로 조절하고, 이어서 추출을 위해 에틸 아세테이트 (80 mL)을 첨가하고, 유기상을 분리했다. 유기상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (80 mL ⅹ 2), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 이어서 포화 염화 나트륨 용액으로 추출하고 (100 mL x 3) 농축시키고, 건조를 위해 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 조 생성물을 수득했다, 수율 100%.
29-173
Figure 112022066845063-pct00861
29-171 (9.401 mmol), H-Glu-(OtBu)2 (2.6789 g, 10.3415 mmol), HBTU (5.3 g, 14.1021 mmol) 및 HOBT (1.9 g, 14.1021 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (70 mL)로 용해시키고, 이어서 30분간 혼합 용액을 0℃에서 교반했다. 이어서 DIEA (7.0 mL, 42.3061 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 순수한 물 (100 mL) 및 에틸 아세테이트 (80 mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (80 mL ⅹ 2), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 염화 나트륨 용액으로 추출하고 (150 mLⅹ 3), 농축시키고, 건조를 위해 증발시키고, 건조시켜, 조 생성물을 수득했다.
29-184
Figure 112022066845063-pct00862
29-173 (9.401 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (10 mL)로 용해시키고, 모르폴린 (8.2 mL, 94.01 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 1시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 순수한 물 (100 mL) 및 에틸 아세테이트 (80 mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (80 mL ⅹ 2), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 염화 나트륨 용액으로 추출하고 (150 mLⅹ3), 농축시키고, 실리카 겔 분말 (20 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 1% 암모니아수 및 4%-8% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 구배 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 3.7 g을 수율 74%로 수득했다.
29-185
Figure 112022066845063-pct00863
Fmoc-Gly-OH (2.2 g, 7.5985 mmol, InnoChem로부터 구입함), 29-184 (3.7 g, 6.9078 mmol), HBTU (3.9 g, 10.3616 mmol), HOBT (1.400 g, 10.3616 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (70 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 0℃에서 교반했다. 이어서 DIEA (5.1 mL, 31.0849 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 순수한 물 (100 mL) 및 에틸 아세테이트 (80 mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (80 mL ⅹ 2), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 염화 나트륨 용액으로 추출하고 (150 mLⅹ 3), 농축시키고, 실리카 겔 분말 (25 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 3%-7% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 구배 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 4.5 g을 수율 77%로 수득했다.
29-209
Figure 112022066845063-pct00864
29-185 (0.9281 g, 1.0354 mmol) 및 10% Pd/C 촉매 (30 mg)를 수소화 반응기 내에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 이어서 수소화 반응기를 밀봉하고, 수소화 반응기의 압력이 18 psi로 읽히도록 수소를 주입하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 꺼내고 압축 규조토로 충전된 흡인 깔때기 (suction funnel)에 균등하게 적가했다. 반응 장치 및 규조토를 DMF로 세척하고 (30 mL x 3), 여과액을 모아서, 반응 생성물을 수득했다.
K-7
Figure 112022066845063-pct00865
Boc-Glu-(OH)2 (0.39 g, 1.5738 mmol, InnoChem로부터 구입함), 34-17 (4.5 g, 3.3051 mmol), HBTU (1.8 g, 4.7216 mmol) 및 HOBT (0.6380 g, 4.7216 mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 0℃에서 교반했다. 이어서 DIEA (2.3 mL, 14.1647 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 순수한 물 (100 mL) 및 에틸 아세테이트 (80 mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (80 mL ⅹ 2), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 염화 나트륨 용액으로 추출하고 (150 mLⅹ 3), 농축시키고, 건조를 위해 증발시키고, 건조시켜, 조 생성물을 수득했다.
K-8
Figure 112022066845063-pct00866
K-7 (1.5738 mmol)을 500 mL 내에 첨가하고, 디클로로메탄 (10 mL), TFA (1.7531 mL, 15.738 mmol)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 건조를 위해 증발시켜 오일의 생성물을 수득했다. 오일의 생성물을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 포화 중탄산 나트륨 용액 (100 mL)을 첨가하여 pH를 염기성으로 조절하고, 이어서 에틸 아세테이트 (80 mL)를 추출을 위해 첨가하고, 유기상을 분리하고, 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (80 mL ⅹ 2), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 염화 나트륨 용액으로 추출하고 (100 mLⅹ3), 농축시키고, 실리카 겔 분말 (20 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 3%-8% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 구배 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 3.2 g을 수율 77%로 수득했다.
29-210
Figure 112022066845063-pct00867
K-8 (3.0 g, 1.1389 mmol), 29-209 (1.0354 mmol), HBTU (0.5891 g, 1.5531 mmol) 및 HOBT (0.2099 g, 1.5531 mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 0℃에서 교반했다. 이어서, DIEA (0.7701 mL, 4.6595 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 n-헥산 (100 mL)로 진탕시키고, 상청액을 버렸다. 앞선 작업을 3번 반복했다. 이어서 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 앞선 작업을 3번 반복했다. 고체를 반응 용액으로부터 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (40 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고, 메탄올/ 디클로로메탄 (1: 4)의 혼합 용매 (100 mL)로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (10 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 3%-8% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 구배 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 2.7 g을 수율 79%로 수득했다.
K-10
Figure 112022066845063-pct00868
24-36 (4 g, 15.1924 mmol), H-Glu-(OBn)2 (6.9 g, 13.8112 mmol, InnoChem로부터 구입함), HBTU (7.8567 g, 20.7169 mmol), HOBT (2.8 g, 20.7169 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (70 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반했다. 이어서 DIEA (10.2723 mL, 62.1506 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 1시간 동안 -5℃에서 교반하고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기에 이동시키고, 포화 중탄산 나트륨 용액 (100 mL) 및 에틸 아세테이트 (80 mL) 로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (80 mL ⅹ 2), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 포화 염화 나트륨 용액으로 추출하고 (150 mLⅹ3), 농축시키고, 실리카 겔 분말 (20 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 1%-3% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 구배 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 8.7 g을 수율 62%로 수득했다.
K-11
Figure 112022066845063-pct00869
K-10 (2.7 g, 4.7469 mmol) 및 10% Pd/C 촉매 (30 mg)을 수소화 반응기 내에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 이어서 수소화 반응기를 밀봉하고, 수소화 반응기의 압력이 18 psi로 읽히도록 수소를 주입하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 꺼내고 압축 규조토가 충전된 흡인 깔때기에 균등하게 적가했다. 반응 장치 및 규조토를 DMF로 세척하고 (30 mL x 3), 여과액을 모아서, 반응 생성물을 수득했다.
K-12
Figure 112022066845063-pct00870
K-11 (2.1484 mmol), G-SN38-TBDPS (25-200을 합성하는 방법에 따라 합성함, 3.0 g, 4.3614 mmol), HBTU (2.4443 g, 6.4453 mmol) 및 HOBT (0.8710 g, 6.4453 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반하여 반응시켰다. 이어서 DIEA (3.1959 mL, 19.3360 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 1 시간 동안 -5℃에서 교반하고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 반응 플라스크를 냉장고에 위치시키고 30분후 이를 꺼내고, 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (30 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고 건조시켜, 조 생성물을 수득했다.
K-13
Figure 112022066845063-pct00871
K-12 (2.1484 mmol)을 500 mL 플라스크 내에 첨가하고, 디클로로메탄 (5 mL) 및 TFA (2.3932 mL, 32.226 mmol)로 용해시키고, 이어서 수득된 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 건조를 위해 증발시켜 오일의 생성물을 얻었고, 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)을 오일의 생성물에 첨가하여 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (30 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고, 메탄올/ 디클로로메탄 (1: 4)의 혼합 용매 (100 mL)로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (20 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 3%-8% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 구배 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 2.7 g을 수율 72%로 수득했다.
K-14
Figure 112022066845063-pct00872
K-11 (2.5985 mmol), 42-18 (6.0 g, 6.2363 mmol), HBTU (2.9563 g, 7.7953 mmol) 및 HOBT (1.0534 g, 7.7953 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반하였다. 이어서 DIEA (3.8653 mL, 23.360 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 1시간 동안 -5℃에서 교반하고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 반응 플라스크를 냉장고에 위치시키고 30분 후 이를 꺼내고, 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (30 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고 건조시켜, 조 생성물을 수득했다.
K-15
Figure 112022066845063-pct00873
K-14 (2.5985 mmol)을 500 mL 플라스크 내에 첨가하고, 디클로로메탄 (5 mL), 및 TFA (2.8946 mL, 38.9775 mmol)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 건조를 위해 증발시켜 오일의 생성물을 얻었고, 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)을 오일의 생성물에 첨가하여 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (30 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고, 메탄올/ 디클로로메탄 (1: 4)의 혼합 용매 (100 mL)로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (20 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 1% 암모니아수 및 3%-8% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 구배 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 3.3 g을 수율 61%로 수득했다.
29-212
Figure 112022066845063-pct00874
29-210 (0.6579 g, 0.1972 mmol) 및 10% Pd/C 촉매 (30 mg)을 수소화 반응기 내에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 이어서 수소화 반응기를 밀봉하고, 수소화 반응기의 압력이 18 psi로 읽히도록 수소를 주입하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 꺼내고 압축 규조토가 충전된 흡인 깔때기에 균등하게 적가했다. 반응 장치 및 규조토를 DMF로 세척하고 (30 mL x 3), 여과액을 모아서 반응 생성물을 수득했다.
29-213
Figure 112022066845063-pct00875
K-15 (3.3 g, 1.6566 mmol), 29-212 (0.5391g, 0.1972 mmol), HBTU (0.8975 g, 2.3667 mmol) 및 HOBT (0.3198 g, 2.3667 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 0℃에서 교반하였다. 이어서 DIEA (1.1735 mL, 7.1 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 반응 플라스크를 냉장고에 위치시키고 30분 후 이를 꺼내고, 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (30 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고 건조시켜, 조 생성물을 수득했다.
29-214
Figure 112022066845063-pct00876
29-213 (0.1972 mmol)을 500 mL 플라스크 내에 첨가하고, 디클로로메탄 (5 mL), 및 TFA (0.22 mL, 2.958 mmol)으로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 건조를 위해 증발시켜 오일의 생성물을 얻었고, 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)을 오일의 생성물에 첨가하여 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (30 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고, 메탄올/ 디클로로메탄 (1: 4)의 혼합 용매 (100 mL)로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (20 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 3%-9% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 구배 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 2.7 g을 수율 69%로 수득했다.
29-216
Figure 112022066845063-pct00877
29-214 (2.7 g, 0.1405 mmol), K-13 (0.5117 g, 0.2951 mmol), HBTU (0.1599g, 0.4215 mmol), HOBT (0.057 g, 0.4215 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 0℃에서 교반하였다. DIEA (0.2090 g, 1.2645mmol)을 이어서 첨가하고, 수득된 용액을 밤새 교반하면서 0℃에서 반응을 지속시켰다. 반응 종료시, 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL)을 첨가하고, 반응 플라스크를 냉장고에 위치시키고 30분 후 이를 꺼내고, 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (30 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고 건조시켜, 조 생성물을 수득했다.
29-220
Figure 112022066845063-pct00878
29-216 (0.1405 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (8 mL)로 용해시키고, 모르폴린 (0.3378 mL, 3.8778 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 n-헥산 (100 mL)로 진탕시키고, 상청액을 버렸다. 앞선 작업을 3번 반복했다. 이어서 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL) 및 소량의 n-헥산 (10 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 진탕하고, 상청액을 버렸다. 앞선 작업을 3번 반복했다. 분말 고체를 반응 용액으로부터 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (40 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고, 메탄올/ 디클로로메탄 (1: 4) 용액 (10 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 tert-부틸 에테르로 침전시켰다. 이러한 작업을 3번 반복하여 조 생성물을 수득했다.
29-221
Figure 112022066845063-pct00879
M-SCM-5K (0.8773 g, 0.1667 mmol, JenKem로부터 구입함)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시켰다. 이어서, DIEA (0.3443 mL, 2.0833mmol)을 첨가하고, 수득된 용액을 10분간 0℃에서 교반하고, 이어서 29-220 (1.0 g, 0.0416 mmol)의 DMF (20 mL) 용액을 약 2시간 동안 드롭 깔때기 (drop funnel)로 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 15분간 0 ℃에서 교반하고, 이어서 실온으로 이동시키고 일주일 동안 저속으로 어둠속에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 메틸 tert-부틸 에테르 (80 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 반응 플라스크를 냉장고에 위치시키고 30분 후 이를 꺼내고, 고체를 분리하고, 흡입 여과를 수행했다. 여과 케이크를 메틸 tert-부틸 에테르로 세척하고 (30 mL x 3), 세척된 여과 케이크를 모으고, 메탄올/ 디클로로메탄 (1: 4)의 혼합 용매 (100 mL)로 용해시키고, 실리카 겔 분말 (10 g)을 첨가하고, 이어서 수득된 혼합물을 건조를 위해 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플을 로딩하고, 4%-15% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액의 구배 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 진공 오븐에서 건조시켜, 생성물 1.6 g을 수율 58%로 수득했다.
1H-NMR (600MHz, DMSO-d 6) δ 9.27 - 9.02 (m, 62H), 8.36-7.95 (m, 171H), 7.77-7.51 (m, 115H), 7.34 - 7.12 (m, 157H), 6.69-6.65 (m, 13H), 4.57-4.50 (m, 34H), 4.31-4.17 (m, 71H), 3.91-3.80 (m, 207H), 3.55-3.45 (m, 1430H), 3.26-3.20 (m, 12H), 3.12-3.05 (m, 71H), 2.93-2.88 (m, 12H), 2.81-2.65 (m, 50H), 2.25-2.19 (m, 61H), 1.89 - 1.19 (m, 298H), 0.85-0.79 (m, 96H).
29-226
Figure 112022066845063-pct00880
250 mL 플라스크 내 29-221을 THF (10 mL)로 먼저 용해시키고, 이어서 희석 염산 (10 mL, 0.05 mol/L)으로 용해시키고, TBAF (67 mg, 0.256 mmol)을 첨가하고, 이어서 수득된 용액을 3시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 먼저 증발시켜 오일의 생성물을 수득하고, 이어서 무수 에탄올을 오일의 생성물에 첨가하여 물을 제거하고, 수득된 용액을 건조를 위해 증발시켰다. 이러한 작업을 3번 반복하고, 고체 생성물을 수득했다. 고체 생성물을 DMF (20 mL)로 용해시키고, 이어서 이소프로판올 (30 mL)로 침전시켰다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 수득된 고체 생성물을 디클로로메탄 및 소량의 무수 에탄올로 용해시키고, 이어서 메틸 tert-부틸 에테르로 침전시켰다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 침전물을 건조시켜, 생성물 1.1 g을 수율 72%로 수득했다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 9.06-9.00 (m, 40H), 8.29-8.22 (m, 50H), 8.15 - 7.95 (m, 96H), 7.73 - 7.47 (m, 121H), 7.29-7.08 (m, 170H), 4.59-4.11 (m, 99H), 3.95 - 3.73 (m, 240H), 3.53-3.48 (m, 1434.3H), 3.24 - 3.00 (m, 110H), 2.92-2.87 (m, 9H), 2.80-5.65 (m, 45H), 2.14-2.08 (m, 45H), 1.91 - 1.28 (m, 244H), 0.85-0.81 (m, 96H)
17. 27-253(화합물 번호 9)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00881
Figure 112022066845063-pct00882
Figure 112022066845063-pct00883
Figure 112022066845063-pct00884
Figure 112022066845063-pct00885
Figure 112022066845063-pct00886
Figure 112022066845063-pct00887
Figure 112022066845063-pct00888
Figure 112022066845063-pct00889
Figure 112022066845063-pct00890
27-181
Figure 112022066845063-pct00891
29-168 (3.33 g, 5.8079 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시키고, 초음파 처리를 수행하여 화합물을 완전히 용해시키고, 모르폴린 (5.06 mL, 58.079 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 포화 염화 나트륨 용액 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)으로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수상을 이어서 에틸 아세테이트로 추출하고 (200 mL × 3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 감압 하에서 농축시키고, 건조시켜, 생성물 4.2 g을 과중으로(overweight) 수득했다.
27-184
Figure 112022066845063-pct00892
27-181 (2.03 g, 5.8079 mmol), Fmoc-Gly-OH (1.72 g, 5.8079 mmol, InnoChem로부터 구입함), HBTU (3.3 g, 8.7119 mmol) 및 HOBT (1.13 g, 8.7119 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF로 용해시키고 (100 mL), 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반하였다. 이어서 DIEA (4.32 mL, 26.1356 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 2시간 동안 -5℃에서 반응시키고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 포화 염화 나트륨 용액 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)으로 추출하고, 유기상을 분리했다. 이어서 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (200 mLХ3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 감압 하에서 농축시키고, 실리카 겔 분말 (60 ml)을 첨가하고, 증발시키고, 건조 샘플을 로딩하고, 용리액(2%-3% 메탄올: 97%-98% 디클로로메탄)의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 감압 하에서 농축시키고, 건조시켜, 생성물 2.68 g을 수율 73.42%로 수득했다.
27-201
Figure 112022066845063-pct00893
27-184 (2.68 g, 4.9669 mmol) 및 10% Pd/C 촉매 (100 mg)을 수소화 반응기 내에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시키고, 이어서 수소화 반응기를 밀봉하고, 수소를 18 psi의 압력으로 주입하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. TLC 모니터링으로부터 반응이 완료되었음을 확인한 후, 반응 용액을 꺼내고 압축 규조토로 충전된 모래 중심 깔때기에 균등하게 적가하고, 이어서 흡입 여과를 수행했다. 규조토를 DMF로 세척하여 (30 mL × 3), 반응 생성물 용액을 수득했다.
27-202
Figure 112022066845063-pct00894
27-201 (1.57 g, 2.9123 mmol), 34-17 (3.34 g, 2.6475 mmol), HBTU (1.50 g, 3.9713 mmol) 및 HOBT (0.54 g, 3.9713 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF로 용해시키고 (100 mL), 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반하였다. 이어서 DIEA (1.97 mL, 11.9138 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 2 시간 동안 -5℃에서 반응시키고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 포화 염화 나트륨 용액 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)을 추출을 위해 반응 용액에 첨가하고, 유기상을 분리했다. 이어서 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (200 mL × 3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 감압 하에서 농축시키고, 실리카 겔 분말 (60 ml)을 첨가하고, 증발시키고, 건조 샘플을 로딩하고, 용리액 (3 % 메탄올: 97 % 디클로로메탄)으로 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 감압 하에서 농축시키고, 건조시켜, 생성물 3.58 g을 수율 75.84 %로 수득했다.
27-204
Figure 112022066845063-pct00895
27-202 (3.58 g, 1.9456 mmol) 및 10% Pd/C 촉매 (100 mg)를 수소화 반응기 내에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시키고, 이어서 수소화 반응기를 밀봉하고, 수소를 18 psi의 압력으로 주입하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. TLC 모니터링으로부터 반응이 완료되었음을 확인한 후, 반응 용액을 꺼내고 압축 규조토로 충전된 모래 중심 깔때기에 균등하게 적가하고, 이어서 흡입 여과를 수행했다. 규조토를 DMF로 세척하여 (30 mLХ3), 반응 생성물 용액을 수득했다.
M-6
Figure 112022066845063-pct00896
K-11 (0.65 g, 1.6590 mmol), 30-33 (3 g, 3.6498 mmol), HBTU (0.94 g, 2.4885 mmol) 및 HOBT (0.34 g, 2.4885 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF로 용해시키고 (100 mL), 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반하였다. 이어서 DIEA (1.23 mL, 7.4655 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 2 시간 동안 -5℃에서 반응시키고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 n-헥산 (50 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (400 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 흡입 여과로 수득하고, 건조시켜, 생성물 5.9g을 과중으로 수득했다.
M-7
Figure 112022066845063-pct00897
M-6 (3.32 g, 1.6590 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, 디클로로메탄 (50 mL)로 용해시키고, TFA (2.35 mL, 16.590 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시키고, 반응 종료시, 반응 용액을 감압 하에서 농축시키고, 침전을 위해 n-헥산 (50 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (400 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 흡입 여과에 의해 수득하고, 디클로로메탄 및 메탄올로 용해시켰다. 건조 샘플을 로딩하고, 7% 메탄올/1 % 암모니아수/ 디클로로메탄로 용리하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조시켜, 생성물 2.5 g을 수율 79.36 %로 수득했다.
27-212
Figure 112022066845063-pct00898
M-7 (2.5 g, 1.3244 mmol), 27-204 (0.43 g, 0.3010 mmol), HBTU (0.69 g, 1.806 mmol) 및 HOBT (0.24 g, 1.806 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF로 용해시키고 (100 mL), 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반하였다. 이어서 DIEA (0.90 mL, 5.418 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 2시간 동안 -5℃에서 반응시키고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 n-헥산 (50 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (400 mL)를 반응 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 흡입 여과에 의해 수득하고, 건조시켜, 생성물 4.5g을 과중으로 수득했다.
27-234
Figure 112022066845063-pct00899
27-212 (2.69 g, 0.3010 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, 디클로로메탄 (50 mL)로 용해시키고, TFA (0.22 mL, 3.010 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시키고, 반응 종료시, 반응 용액을 감압 하에서 농축시키고, 침전을 위해 n-헥산 (50 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (400 mL)를 수득된 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 흡입 여과에 의해 수득하고, 디클로로메탄 및 메탄올로 용해시켰다. 건조 샘플을 로딩하고 8% 메탄올/ 디클로로메탄의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조시켜, 생성물 1.9g을 수율 71.76 %로 수득했다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ10.17-10.13 (m, 8H), 8.99-8.91 (m, 8H), 8.34 - 8.14 (m, 16H), 8.14 - 7.94 (m, 24H), 7.88- 7.67 (m, 30H), 7.45 - 7.05 (m, 49H), 5.83-5.77 (m, 10H), 5.35-5.28 (m, 5H), 4.56 -3.98 (m, 51H), 3.74 - 3.49 (m, 60H), 3.15 - 2.99 (m, 48H), 2.81 - 2.66 (m, 19H), 2.41 - 2.03 (m, 68H), 1.89-1.85 (m, 50H), 1.57-1.51 (m, 43H), 1.34- 1.23 (m, 18H), 0.98 - 0.77 (m, 72H).
27-214
Figure 112022066845063-pct00900
파클리탁셀(Paclitaxel) (PTX로도 언급됨, 0.5 g, 0.5855 mmol), TBDMS-Cl (Innochem로부터 구입함, 0.53 g, 3.5310 mmol), 이미다졸 (0.2 g, 2.9425mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, 무수 DMF (20mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 디클로로메탄 (200mL)로 희석하고, 포화 NH4Cl (50mL), 탈이온수 (50mL), 및 포화 염화 나트륨 용액 (100mL)로 차례로 세척하고, 수득된 유기상을 무수 황산 나트륨으로 건조했다. 건조 샘플을 로딩하고, 석유 에테르: 에틸 아세테이트=1: 1의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조시켜, 생성물 0.35g을 수율 62.5 %로 수득했고, 이때 파클리탁셀의 2' 위치의 하이드록시가 TBDMS로 보호되었다.
27-235
Figure 112022066845063-pct00901
Fmoc-Gly-OH (0.44 g, 1.4476 mmol), EDCI (0.28 g, 1.4476 mmol), DMAP (0.02g, 0.1810 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, 무수 디클로로메탄 (50mL) 및 무수 DMF (25mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 15분 간 실온에서 교반하여 반응시켰다. 이어서 27-214 (0.35 g, 0.3619 mmol)을 첨가하고, 수득된 용액을 밤새 실온에서 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 디클로로메탄 (200mL)로 희석하고, 포화 NH4Cl (100mL), 탈이온수 (50mL), 및 포화 염화 나트륨 용액 (100mL)로 차례로 세척하고, 수득된 유기상을 무수 황산 나트륨으로 건조시켰다. 건조 샘플을 로딩하고 3% 메탄올/ 디클로로메탄의 용리를 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조시켜, 생성물 0.31g을 수율 68.89 %로 수득했고, 이때 7번 위치의 하이드록시에서 에스테르화가 일어났다.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ8.83 (m, 1H), 7.99 (m, 2H), 7.92 - 7.81 (m, 4H), 7.76 - 7.59 (m, 6H), 7.57 - 7.27 (m, 12H), 7.21 (m, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.86 (m, 1H), 5.56 - 5.40 (m, 3H), 5.01 (m, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.66 (m, 3H), 2.45 (s, 3H), 1.99 (s, 6H), 1.65 (s, 5H), 1.55 (s, 3H), 1.00 (m, 6H), 0.80 (s, 9H), 0.05 (m, 6H).
27-239
Figure 112022066845063-pct00902
27-235 (0.31 g, 0.2487 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, 피페리딘 (0.25ml, 2.487 mmol) 및 DMF (5 mL)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 피페리딘을 제거하여, 반응 생성물의 DMF 용액을 수득했다.
27-240
Figure 112022066845063-pct00903
27-234 (1.9g, 0.2135 mmol), 27-239 (0.2487mmol), HBTU (0.12 g, 0.3203 mmol) 및 HOBT (0.04 g, 0.3203 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반하였다. 이어서 DIEA (0.17 mL, 0.9608 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 2시간 동안 -5 ℃에서 반응시키고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 n-헥산 (50 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (400 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 흡입 여과에 의해 수득하고, 소량의 메탄올 및 디클로로메탄의 혼합 용매로 용해시키고, 침전을 위해 n-헥산 (50 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (400 mL)를 이어서 수득된 용액에 첨가하고, 흡입 여과를 수행했다. 용해 및 침전의 과정을 3번 반복하여, 생성물 1.6g을 수율 75.82 %로 수득했다.
27-243
Figure 112022066845063-pct00904
27-240 (1.6 g, 0.1615 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (10 mL)로 용해시키고, 초음파 처리를 수행하여 화합물을 완전히 용해시키고, 모르폴린 (0.14 mL, 1.615 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 n-헥산 (25 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (200 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 흡입 여과로 수득하고, 디클로로메탄 및 메탄올로 용해시켰다. 건조 샘플을 로딩하고 7 % 메탄올 / 디클로로메탄의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조시켜, 생성물 1.2 g을 수율 78.43%로 수득했다.
27-247
Figure 112022066845063-pct00905
27-243 (1.2g, 0.1268 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시키고, M-SCM-5K (1.45 g, 0.2790 mmol, JenKem로부터 구입함)을 첨가하고, 초음파 진동을 수행하여 화합물을 용해시키고, 혼합 용액을 실온에서 저속 교반하면서 일주일 동안 어둠 속에서 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 n-헥산 (25 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (200 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 흡입 여과로 수득하고, 디클로로메탄 및 메탄올로 용해시켰다. 건조 샘플을 로딩하고 9 % 메탄올 / 디클로로메탄의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조시켜, 생성물 1.9 g을 수율 75.70 %로 수득했다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ10.16-10.12 (m, 8H), 9.02-8.98 (m, 11H), 8.08-7.98 (m, 55H), 7.72-7.64 (m, 14H), 7.56 - 7.09 (m, 49H), 7.05-6.98 (m, 2H), 6.69-6.65 (m, 3H), 5.80- 5.37 (m, 21H), 5.14 - 4.75 (m, 20H), 4.56-4.30 (m, 35H), 4.03-4.38 (m, 45H), 3.51 (s, 1120H), 3.44 - 3.04 (m, 65H), 2.77- 2.68 (m, 13H), 2.41 - 2.04 (m, 55H), 2.02 - 1.69 (m, 39H), 1.68 - 1.26 (m, 66H), 1.18 - 1.12 (m, 5H), 1.06 - 0.69 (m, 45H), 0.09-0.06 (m, 3H).
27-253
Figure 112022066845063-pct00906
27-247 (1.9 g, 0.0958 mmol), TBAF (0.06 g, 0.1916 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, THF (20 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 1.5 시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 고체 생성물을 얻고, 고체 생성물을 DMF (5 mL)로 용해시키고, 침전을 위해 이소프로판올을 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 여과로 수득했다. 수득된 고체 생성물을 디클로로메탄 (10 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 tert-부틸 에테르로 침전시켰다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 수득된 고체 생성물을 건조시켜, 생성물 0.75 g을 수율 62.5 %로 수득했다.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ10.16-10.10 (m, 8H), 9.02-8.97 (m, 11H), 8.55 - 7.81 (m, 58H), 7.70-7.62 (m, 9H), 7.21-6.99 (m, 53H), 6.71-6.66 (m, 5H), 5.88-5.84 (m, 10H), 5.37- 4.96 (m, 10H), 4.59-4.28 (m, 27H), 4.14 - 3.81 (m, 32H), 3.57-3.48 (s, 1101H), 3.19-3.15 (m, 61H), 2.81-2.76 (m, 7H), 2.44- 2.27 (s, 68H), 1.82 - 1.43 (m, 89H), 1.36-1.32 (m, 36H), 0.90 - 0.79 (m, 40H).
18. 49-5(화합물 번호 11)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00907
Figure 112022066845063-pct00908
Figure 112022066845063-pct00909
Figure 112022066845063-pct00910
Figure 112022066845063-pct00911
Figure 112022066845063-pct00912
Figure 112022066845063-pct00913
Figure 112022066845063-pct00914
27-216
Figure 112022066845063-pct00915
27-202 (3 g, 1.6826 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, 디클로로메탄 (50 mL)로 용해시키고, TFA (1.25 mL, 16.826 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시키고, 반응 종료시, 반응 용액을 감압 하에서 농축시키고, 추출을 위해 포화 염화 나트륨 용액 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)를 수득된 용액에 첨가하고, 유기상을 분리했다. 이어서 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (200 mLХ3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 감압 하에서 농축시키고, 건조시켜, 생성물 4.3 g을 과중으로 수득했다.
27-218
Figure 112022066845063-pct00916
27-216 (2.90 g, 1.6826 mmol), Gly-OtBu (0.24 g, 1.8509 mmol, InnoChem로부터 구입함), HBTU (0.96 g, 2.5239 mmol) 및 HOBT (0.34 g, 2.5239 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF로 용해시키고 (100 mL), 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반하였다. 이어서 DIEA (1.25 mL, 7.5717 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 2시간 동안 -5℃에서 반응시키고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 포화 염화 나트륨 용액 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)을 추출을 위해 반응 용액에 첨가하고, 유기상을 분리했다. 이어서 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (200 mLХ3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 감압 하에서 농축시키고, 진공에서 건조시켜, 생성물 6.6 g을 과중으로 수득했다.
27-221
Figure 112022066845063-pct00917
27-218 (2 g, 1.0867 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, 디클로로메탄 (50 mL)로 용해시키고, TFA (0.81 mL, 10.867 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시키고, 반응 종료시, 반응 용액을 감압 하에서 농축시키고, 포화 염화 나트륨 용액 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)을 추출을 위해 반응 용액에 첨가하고, 유기상을 분리했다. 이어서 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (200 mLХ3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 감압 하에서 농축시키고, 건조시켜, 생성물 4.3 g을 과중으로 수득했다.
27-224
Figure 112022066845063-pct00918
27-221 (1.94 g, 1.0867 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, 디클로로메탄 (20 mL)로 초음파에 의해 용해시키고, Boc-NHNH2 (0.16 g, 1.1954 mmol), DCC (0.67 g, 3.2601 mmol) 및 DMAP (0.026 g, 0.2173 mmol)을 플라스크에 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 포화 식염수 용액 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)을 추출을 위해 반응 용액에 첨가하고, 유기상을 분리했다. 이어서 수상을 에틸 아세테이트로 추출하고 (200 mLХ3), 수득된 유기상들을 합쳤다. 유기상을 감압 하에서 농축시키고, 건조 샘플을 로딩하고 3% 메탄올 / 디클로로메탄의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조시켜, 생성물 1.62g을 수율 78.64%로 수득했다.
27-259
Figure 112022066845063-pct00919
27-224 (1.62 g, 0.8535 mmol), 및 10% Pd/C 촉매 (100 mg)를 수소화 반응기 내에 첨가하고, DMF (30 mL)로 용해시키고, 이어서 수소화 반응기를 밀봉하고, 수소를 18 psi의 압력으로 주입하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시켰다. TLC 모니터링으로부터 반응이 완료되었음을 확인한 후, 반응 용액을 꺼내고 압축 규조토로 충전된 모래 중심 깔때기에 균등하게 적가하고, 이어서 흡입 여과를 수행했다. 규조토를 DMF로 세척하여 (30 mLХ3), 반응 생성물 용액을 수득했다.
27-205
Figure 112022066845063-pct00920
K-11 (0.69 g, 1.4272 mmol), 14-128 (3 g, 3.1398 mmol), HBTU (1.62 g, 4.2816 mmol) 및 HOBT (0.58 g, 4.2816 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF (50 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반했다. 이어서 DIEA (2.12 mL, 12.8448 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 2시간 동안 -5℃에서 반응시키고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 n-헥산 (50 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (400 mL)를 반응 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 흡입 여과로 수득하고, 건조시켜, 생성물 5.1g을 수득한 것으로 칭량되었다.
27-231
Figure 112022066845063-pct00921
27-205 (3.03g, 1.4272 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, 디클로로메탄 (50 mL)로 용해시키고, TFA (1.06 mL, 14.272 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시키고, 반응 종료시, 반응 용액을 감압 하에서 농축시키고, 침전을 위해 n-헥산 (50 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (400 mL)를 수득된 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 흡입 여과로 수득하고, 디클로로메탄 및 메탄올로 용해시켰다. 건조 샘플을 로딩하고 8% 메탄올/1% 암모니아수/ 디클로로메탄의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조시켜, 생성물 2g을 수율 69.20%로 수득했다.
27-260
Figure 112022066845063-pct00922
27-259 (0.35g, 0.2248mmol), 27-231 (2g, 0.9891mmol), HBTU (0.51 g, 1.3488mmol) 및 HOBT (0.18g, 1.3488mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF로 용해시키고 (100 mL), 이어서 혼합 용액을 30분간 -5℃에서 교반했다. 이어서 DIEA (0.67mL, 4.0464 mmol)을 천천히 적가했다. 첨가 종료시, 수득된 용액을 2시간 동안 -5℃에서 반응시키고, 이어서 실온으로 이동시키고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 n-헥산 (50 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (400 mL)를 반응 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 수득된 고체 생성물을 디클로로메탄 및 메탄올로 용해시키고, 건조 샘플을 로딩하고 6% 메탄올 / 디클로로메탄의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조시켜, 생성물 1.3g을 수율 60.46%로 수득했다.
27-265
Figure 112022066845063-pct00923
27-260 (1.3g, 0.1361 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, DMF로 용해시키고 (10 mL), 초음파 처리를 수행하여 화합물을 완전히 용해시키고, 모르폴린 (0.12mL, 1.361mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 n-헥산 (25 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (200 mL)를 반응 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 흡입 여과로 수득하고, 디클로로메탄 및 메탄올로 용해시켰다. 건조 샘플을 로딩하고 6% 메탄올 / 디클로로메탄의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조시켜, 생성물 0.91g을 수율 73.39%로 수득했다.
49-1
Figure 112022066845063-pct00924
49-265 (0.91g, 0.0999 mmol)을 250 mL 플라스크 중에 첨가하고, DMF (20 mL)로 용해시키고, M-SCM-5K (1.14 g, 0.2198 mmol, JenKem로부터 구입함)을 첨가하고, 초음파 진동을 수행하여 화합물을 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 실온에서 저속 교반하여 1주일 동안 어둠 속에서 반응시켰다. 반응 종료시, 침전을 위해 n-헥산 (25 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (200 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 흡입 여과로 수득하고, 디클로로메탄 및 메탄올로 용해시켰다. 건조 샘플을 로딩하고 9% 메탄올 / 디클로로메탄의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조시켜, 생성물 1.23g을 수율 63.07%로 수득했다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ9.85-9.79 (m, 6H), 8.77-8.71 (m, 7H), 8.55 - 7.91 (m, 63H), 7.89 - 7.63 (m, 23H), 7.47 - 6.98 (m, 93H), 6.69 - 6.54 (s, 7H), 5.27-5.21 (m, 14H), 4.72 - 4.57 (m, 20H), 4.41 - 4.12 (m, 32H), 3.85 - 3.79 (m, 43H), 3.55-3.48 (m, 1115H), 3.27 - 3.12 (m, 19H), 3.09 - 2.95 (m, 32H), 2.90 - 2.60 (m, 32H), 2.14 - 1.70 (m, 31H), 1.54 - 1.14 (m, 95H), 0.86-0.79 (m, 51H).
49-3
Figure 112022066845063-pct00925
49-1 (1.23g, 0.0632 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, 디클로로메탄 (20 mL)로 용해시키고, TFA (0.094 mL, 1.264 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시키고, 반응 종료시, 침전을 위해 n-헥산 (25 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (200 mL)를 반응 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 흡입 여과로 수득하고, 디클로로메탄 및 메탄올로 용해시켰다. 건조 샘플을 로딩하고 9% 메탄올 / 디클로로메탄의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조시켜, 생성물 0.98g을 수율 80.33%로 수득했다.
49-5
Figure 112022066845063-pct00926
49-3 (0.98g, 0.0506 mmol)을 500 mL 건조된 둥근 바닥 플라스크 내에 첨가하고, 무수 메탄올 (10mL)로 용해시키고, TFA (0.018 mL, 0.253 mmol) 및 아드리아마이신 (adriamycin) (DOX로도 언급됨, 0.028g, 0.0506 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합 용액을 밤새 실온에서 교반하여 반응시키고, 반응 종료시, 침전을 위해 n-헥산 (25 mL) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (200 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 상청액을 버리고, 이어서 침전을 위해 n-헥산 및 메틸 tert-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 고체 생성물을 흡입 여과로 수득하고, 디클로로메탄 및 메탄올로 용해시켰다. 건조 샘플을 로딩하고 9% 메탄올 / 디클로로메탄의 용리를 사용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행했다. 이어서 용리 생성물을 모으고, 농축시키고, 건조시켰다. 수득된 건조 생성물을 무수 알코올 (5mL) 및 디클로로메탄 (1mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 tert-부틸 에테르 (40mL)로 침전시켰다. 이러한 작업을 3번 반복했다. 여과를 수행하고, 여과 케이크를 건조시켜, 생성물 0.65g을 수율 65%로 수득했고, 이때 하이드라존 (hydrazone) 결합의 형성이 아드리아마이신의 13번 위치의 카보닐에서 일어났다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 10.28 (s, 5H), 8.98-8.94 (m, 8H), 8.58-8.51 (m, 8H), 8.34-7.92 (m, 79H), 7.49-7.45 (m, 10H), 7.46-7.10 (m, 82H), 6.68 (s, 5H), 6.54 (s, 3H), 5.26 (s, 20H), 4.80-4.71 (m, 16H), 4.56 (s, 10H), 4.41-4.06 (m, 42H), 3.95-3.74 (m, 45H), 3.52-3.50 m, 1289H), 3.11-2.97 (m, 57H), 2.78-2.74 (m, 26H), 2.11 (s, 26H), 1.60-1.52 (m, 40H), 1.00-0.61 (m, 72H).
19. 39-42(화합물 번호 19)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00927
Figure 112022066845063-pct00928
39-40
Figure 112022066845063-pct00929
GFLG-LPT(1.0g, 1.04mmol, 14-128을 합성하는 방법에 따라 합성됨), 39-51(0.08mmol), HBTU(0.54g, 1.44mmol), HOBT(0.19g, 1.44mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(30mL)로 용해시키고, 반응물을 완전히 용해시키기 위해 초음파 처리를 수행한 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(0.71mL, 4.32mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 저온에서 2시간 동안 교반한 다음, 반응이 종료될 때까지 실온에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(250mL)를 첨가하고, 5분 동안 초음파 처리를 수행하고, 상청액을 버리고, 에틸 아세테이트(20mL)를 하부 액체에 첨가하고, 3분 동안 초음파 처리를 수행하고, 메틸 3급-부틸 에테르(150mL) 및 n-헥산(100mL)을 첨가하여 고형물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 20% 메탄올/ 디클로로메탄(20mL)으로 용해시키고, 실리카겔 분말(10g)을 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피 및 3% 메탄올/ 디클로로메탄-10% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 구배 용리 작업을 수행하여 생성물 0.2g을 수득했다.
39-41
Figure 112022066845063-pct00930
39-40(0.2g)을 디클로로메탄(15mL), 및 TFA(0.033mL, 0.444mmol)로 용해시키고, 초음파 처리하여 상기 화합물을 완전히 용해시켰다. 불투명 유리 스토퍼를 사용하고, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 증발시켜 디클로로메탄을 제거하고, 에틸 아세테이트(20mL)를 첨가하고, 2분 동안 초음파 처리를 수행한 다음, 메틸 3급-부틸 에테르(150mL) 및 n-헥산(70mL)을 첨가하여 침전시켜 고형물을 분리하였다. 이를 흡인 여과하고, 필터 케이크를 진공에서 건조시켜 생성물 0.2g을 수득했다.
39-42
Figure 112022066845063-pct00931
39-41(0.6g)을 DMF(20mL)로 용해시키고, M-SCM-5K(0.9378g)를 첨가하고, 초음파 처리하여 반응물을 용해시킨 다음, 수득된 용액을 어두운 곳에서 저속으로 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(150mL), n-헥산(70mL)을 첨가하여 고형물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 20% 메탄올/ 디클로로메탄으로 용해시키고, 실리카겔 분말(10g)을 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수: 4% 메탄올 디클로로메탄-1% 암모니아수: 8% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 구배 용리 작업을 수행했다. 용리 생성물을 수집하고, 건조되도록 증발시키고, 무수 에탄올(3mL)로 용해시킨 다음, 수득된 용액을 초음파로 처리하여 균질한 상을 수득했다. 이어서, 메틸 3급-부틸 에테르(150mL), n-헥산(50mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 무수 에탄올(3mL)로 추가로 용해시키고, 메틸 3급-부틸 에테르 및 n-헥산으로 침전시켰다. 용해와 침전의 과정을 3회 반복하였다. 이를 흡인 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 생성물 0.15g을 수득했다.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ10.06 - 9.84 (m, 3H), 8.84 - 8.36 (m, 4H), 8.29- 7.65 (m, 85H), 7.57 - 6.79 (m, 187H), 6.73-6.51 (m, 15H), 4.83 - 4.07 (m, 86H), 3.50 - 3.49 (m, 512H), 3.08-2.99 (m, 81H), 1.70 - 1.17 (m, 125H), 0.90-0.80 (m, 72H).
20. 41-32(화합물 번호 20)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00932
41-29
Figure 112022066845063-pct00933
반응물 GFLG-LPT(1.0g, 1.48mmol, 14-128를 합성하는 방법에 따라 합성됨), 41-33(0.077mmol), HBTU(0.35g, 0.924mmol), HOBT(0.1g, 0.924mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(30 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(0.45mL, 2.772mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 반응이 종료될 때까지 저온에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(100mL) 및 n-헥산(200mL)을 첨가하여 침전시켜 분말 생성물을 수득했다. 컬럼 크로마토그래피, 건조 샘플 로딩, 및 1% 암모니아수: 2% 메탄올/ 디클로로메탄--1% 암모니아수: 10% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 0.6g을 수득했다.
41-31
Figure 112022066845063-pct00934
41-29(0.6g)를 초음파 조건에서 디클로로메탄(5mL) 및 TFA(0.17mL, 2.31mmol)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 농축하고, 메틸 3급-부틸 에테르(100mL) 및 n-헥산(200mL)을 수득된 용액에 첨가하여 침전시켜 분말을 수득했다. 상기 분말을 진공에서 건조시켜 생성물 0.6g을 수득했다.
41-32
Figure 112022066845063-pct00935
반응물 41-31(0.6g, 0.044mmol) 및 M-SCM-5K(1.6g, 0.30mmol)를 DMF 용액(20mL)으로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 어두운 곳에서 저속 교반으로 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(50mL) 및 n-헥산(100mL)으로 침전시키고, 이를 흡인 여과했다. 컬럼 크로마토그래피, 건조 샘플 로딩, 및 디클로로메탄--1% 암모니아수: 8% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 구배 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 건조되도록 증발시키고, 무수 에탄올(10mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 초음파로 처리하여 균질한 상을 얻은 다음, n-헥산(50mL)을 첨가하여 침전시켰다. 이러한 침전 작업은 3회 반복되었다. 침전물을 진공에서 건조시켜 생성물 0.4g을 수득했다.
1H-NMR (600MHz, DMSO-d 6) δ 9.91 - 9.83 (m, 8H), 8.80 - 8.72 (m, 10H), 8.58 - 8.50 (m, 10H), 8.27 - 7.96 (m, 82H), 7.63 -7.49 (m, 128H), 7.24 - 7.14 (m, 51H), 6.71 - 6.50 (m, 7H), 5.29 - 5.21 (m, 22H), 4.52 - 4.40 (m, 82H), 4.04 -3.98 (m, 54H), 3.51-3.50 (m, 600H), 3.17 - 3.14 (m, 83H), 3.03 - 2.97 (m, 122H), 2.88 - 2.86 (m, 15H), 0.91 - 0.70 (m, 72H).
21. 33-207(화합물 번호 21)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00936
Figure 112022066845063-pct00937
33-194
Figure 112022066845063-pct00938
GFLG-PCB(30-33을 합성하는 방법에 따라 합성됨, 2g, 2.43mmol), HBTU(1.15g, 3.03mmol), HOBT(0.41g, 3.03mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, 33-190의 DMF 용액으로 용해시키고, 초음파 처리하여 반응물을 완전히 용해시킨 다음, 수득된 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(1.5mL, 9.108mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 반응이 종료될 때까지 저온에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(100mL), n-헥산(150mL)을 첨가하고, 5분 동안 초음파 처리를 수행하고, 수득된 용액을 냉장고에 넣고, 20분 동안 정치시키고, 상청액을 버리고, 에틸 아세테이트(20mL)를 하부 액체에 첨가하고, 2분 동안 초음파 처리를 수행하고, n-헥산(100mL)을 첨가하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 진공에서 건조시켜 생성물 1.4g을 수득했다.
33-196
Figure 112022066845063-pct00939
33-194(1.4 g, 0.32mmol)를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(70 mL)로 용해시키고, 모르폴린(0.84mL, 9.6mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(150mL), n-헥산(100mL)을 첨가하고, 5분 동안 초음파 처리하여 고형물을 분리했다. 이를 흡인 여과하고, 필터 케이크를 진공에서 건조시켜 생성물 1.3g을 수득했다.
33-199
Figure 112022066845063-pct00940
33-196(1.3g, 0.316mmol), HBTU(0.153g, 0.406mmol), HOBT(0.0541g, 0.406mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, 45-12의 DMF 용액(19mL, 0.0452mmol)으로 용해시키고, DMSO(80mL)를 첨가하고, 초음파 처리하여 반응물을 완전히 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(0.2mL, 1.22mmol)를 서서히 적가하고, 1시간 후, 수득된 용액을 실온에서 교반하면서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 탈이온수(100mL)를 첨가하여 고형물을 분리하고, 수행했다. 필터 케이크를 진공에서 건조시켜 생성물 1.3g을 수득했다.
33-204
Figure 112022066845063-pct00941
33-199(1.3g, 0.316mmol)를 디클로로메탄(10mL)으로 용해시키고, TFA(0.7mL, 9.48mmol)를 첨가하고, 초음파 처리하여 상기 화합물을 완전히 용해시켰다. 불투명 유리 스토퍼를 사용하고, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(150mL) 및 n-헥산(100mL)을 바로 첨가하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 진공에서 건조시켜 생성물 1.2g을 수득했다.
33-207
Figure 112022066845063-pct00942
반응물 33-199(1.20g, 0.048mmoL), M-NH2HCL-5K(2.0g, 0.38mmoL), HBTU(0.21g, 0.576mmoL), HOBT(0.077g, 0.576mmoL)를 250 mL 플라스크에 넣고, 초음파 조건에서 DMF(75mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(0.0073mL, 0.0446mmoL)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 1시간 동안 교반한 다음, 어두운 곳에서 실온에서 저속으로 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(200mL)를 첨가하여 침전시키고, 이를 흡인 여과하여 분말 생성물을 수득했다. 분말 생성물을 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔(6g)을 첨가했다. 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 6% 메탄올/디클로로메탄 - 1% 암모니아수: 10% 메탄올/디클로로메탄을 사용한 구배 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 건조되도록 증발시키고, 수득된 고형물을 초음파 조건에서 디클로로메탄(5mL)으로 용해시키고, 메틸 3급-부틸 에테르(150mL) 및 n-헥산(50mL)을 첨가하고, 이를 흡인 여과했다. 이어서, 필터 케이크를 디클로로메탄으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르 및 n-헥산으로 침전시켰다. 용해와 침전의 과정을 3회 반복하여 생성물 0.5g을 수득했다.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ10.58 - 10.39 (m, 14H), 9.05 -8.89 (m, 13H), 8.23 - 7.66 (m, 169H), 7.26 - 6.91 (m, 165H), 3.51 - 3.50 (m, 1957H), 3.26 - 3.22 (m, 148H), 2.97 - 2.83 (m, 232H), 2.34 - 2.28 (m, 86H), 1.94- 1.45 (m, 282H), 0.94-0.75 (m, 144H).
22. 29-160(화합물 번호 22)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure 112022066845063-pct00943
29-150
Figure 112022066845063-pct00944
반응물 30-33(3.5 g, 4.2581 mmol), 29-149(W3을 합성하는 방법에 따라 합성됨, 0.3275mmol), HBTU(2.2359 g, 5.8958 mmol), HOBT(0.7967 g, 5.8958mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(50 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(2.9mL, 17.6873mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온으로 옮기고 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(100mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 냉장고에 넣고, 30분 후에 꺼내고, 고형물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 수집하고, 건조시켜 조 생성물을 수득했다.
29-154
Figure 112022066845063-pct00945
29-150(0.3275mmol)을 초음파 조건에서 디클로로메탄(10 mL) 및 TFA(0.3648mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 건조되도록 증발시켜 유상 생성물을 수득했다. 메틸 3급-부틸 에테르(100mL)를 상기 유상 생성물에 첨가하여 고형물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 수집하고, 메탄올/디클로로메탄(1: 4)의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(15 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 컬럼 크로마토그래피, 건조 샘플 로딩, 및 1% 암모니아수: 4% 메탄올/ 디클로로메탄--1% 암모니아수: 10% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 1.0g을 수득했다, 수율 30%.
29-160
Figure 112022066845063-pct00946
반응물 29-154(0.4g) 및 M-SCM-10K(0.75g, 0.07mmol)를 DMF 용액(20mL)으로 용해시킨 다음, 수득된 용액을 어두운 곳에서 저속 교반으로 1주 동안 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(100mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 냉장고에 넣고, 30분 후에 꺼내고, 고형물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 수집하고, 메탄올/ 디클로로메탄(1: 4)의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(15 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시키켜 분말상 고체를 수득했다. 컬럼 크로마토그래피, 건조 샘플 로딩, 및 1% 암모니아수: 3% 메탄올/ 디클로로메탄--1% 암모니아수: 8% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 구배 용리 작업을 수행했다. 용리 생성물을 건조되도록 증발시키고, 무수 에탄올(8mL) 및 소량의 디클로로메탄으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(50mL)로 침전시켰다. 이러한 침전 작업은 3회 반복되었다. 침전물을 진공에서 건조시켜 생성물 0.6g을 수득했다. 수율 55%.
1H-NMR (600MHz, DMSO-d 6) δ 10.18-10.09 (m, 8H), 9.12-8.90 (m, 17H), 8.25 - 7.82 (m, 72H), 7.503-7.44 (m, 13H), 7.19-7.15 (m, 41H), 7.05 - 6.97 (m, 11H), 6.90-6.81 (m, 7H), 6.69-6.64 (m, 5H), 5.36-5.26 (m, 9H), 4.59 - 4.32 (m, 27H), 4.05-3.84 (m, 31H), 3.52-3.48 (m, 1925H), 2.32-2.85 (m, 28H), 2.76-2.69 (m, 39H), 2.43-2.38 (m, 23H), 2.33-2.22 (m, 50H), 1.99 - 1.74 (m, 85H), 1.60-1.45 (m, 59H), 1.37- 1.32 (m, 48H), 1.25-1.18 (m, 40H), 0.89-0.78 (m, 72H).
23. 35-98(화합물 번호 23)의 합성
Figure 112022066845063-pct00947
Figure 112022066845063-pct00948
Figure 112022066845063-pct00949
37-88
Figure 112022066845063-pct00950
디글리콜아민(25.84 mL, 260.59 mmol, TCI에서 구매함)을 1 L 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(50 mL)으로 용해시키고, 트리에틸아민(72.64 mL, 521.18 mmol)을 첨가한 다음, 수득된 용액을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 3급-부틸 디카보네이트를 디클로로메탄으로 용해시키고, 플라스크에 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 밤새 교반하면서 0℃에서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 소량으로 농축하고, 실리카겔 분말(50 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 50%-60% 에틸 아세테이트를 함유하는 석유 에테르 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 37-88: 53.4861g을 수득했다.
37-148
Figure 112022066845063-pct00951
37-88(53.4861 g, 260.59 mmol)을 1 L 플라스크에 넣고, 0℃에서 30분 동안 교반하여 반응시키고, 칼륨 3급-부톡사이드의 THF 용액(286.64 mL, 1mol/L, 286.64 mmol)을 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 1시간 동안 추가로 교반했다. 이어서, 에틸 브로모아세테이트(28.82 mL, 260.59 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0℃에서 30분 동안 추가로 교반한 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 탈이온수(200 mL) 및 에틸 아세테이트(200 mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 1)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시켰다. 이어서, 수득된 건조 생성물을 메탄올(30 mL) 및 디클로로메탄(120 mL)으로 용해시키고, 실리카겔 분말(100 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 20% 에틸 아세테이트를 함유하는 석유 에테르 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 37-148: 52.1 g을 수득했다, 수율 68.6%.
37-151
Figure 112022066845063-pct00952
37-148(52.1 g, 178.8 mmol)을 1 L 플라스크에 넣고, 1,4-디옥산(100 mL)으로 용해시키고, 수산화리튬(9.4 g, 393.4 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 30분 동안 교반하여 반응시킨 다음, 순수한 물(200 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 2시간 동안 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, n-헥산(125 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(125 mL)로 추출했다. 수성상을 진한 염산으로 pH=2로 조정한 다음, 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 50%-60% 에틸 아세테이트를 함유하는 석유 에테르 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 37-151: 45.1 g을 수득했다, 수율: 96%.
35-82
Figure 112022066845063-pct00953
Boc-Glu-OH(20.0 g, 80.89 mmol, Ark Pharm에서 구입함), HBTU(92.02 g, 242.66 mmol), HOBT(32.8 g, 242.66 mmol) 및 H-GlU(OBn)2·TsOH(84.861 g, 161.8 mmol, Ark Pharm에서 구입함)를 1000 mL 플라스크에 넣고, DMF(200 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(120.32 mL, 728 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 1시간 동안 교반하면서 -5℃에서 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 상기 반응 용액을 2 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(600 mL) 및 에틸 아세테이트(300mL)로 추출하고, 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 1)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 35-82: 70 g을 수득했다.
35-84
Figure 112022066845063-pct00954
35-82(70 g, 80.89 mmol)를 1000 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(50 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 트리플루오로아세트산(300 mL, 4044.5 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 농축하고, 에틸 아세테이트(300 mL) 및 포화 중탄산나트륨 용액(300 mL)을 첨가하고, 기포가 많이 발생하고, pH가 7이 넘을 때까지 중탄산나트륨 고체를 더 첨가한 다음, 추출했다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 1)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 건조되도록 증발시켜 35-84: 62 g을 수득했다.
35-85
Figure 112022066845063-pct00955
37-151(19.36 g, 73.5364 mmol), HBTU(41.83 g, 110.3045 mmol), HOBT(14.91g, 110.3045 mmol) 및 35-84(61.95 g, 80.89 mmol)를 1000 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(200 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(54.69 mL, 330.9136 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 1시간 동안 교반하면서 -5℃에서 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 2 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(500 mL) 및 에틸 아세테이트(300mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 1)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 소량으로 농축하고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 50%-70% 에틸 아세테이트를 함유하는 석유 에테르 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 35-85: 51g을 수득했다, 수율: 69%.
35-86
Figure 112022066845063-pct00956
35-85(23.4 g, 23.14 mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(30 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 트리플루오로아세트산(85.93 mL, 1157.13 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 농축하고, 에틸 아세테이트(300 mL) 및 포화 중탄산나트륨 용액(300 mL)을 첨가하고, 기포가 많이 발생하고, pH가 7이 넘을 때까지 중탄산나트륨 고체를 더 첨가한 다음, 추출했다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 1)로 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 건조되도록 증발시켜 35-86: 18.2g을 수득했다, 수율: 86%.
35-88
Figure 112022066845063-pct00957
35-86(18.2 g, 19.98 mmol), HBTU(11.36 g, 29.97 mmol), HOBT(4.05g, 29.97 mmol) 및 Boc-Lys (Fmoc) -OH(8.5 g, 18.16 mmol, Accela에서 구매함)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(100 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 0℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(14.86 mL, 89.90 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(300 mL) 및 에틸 아세테이트(200mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 1)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 소량으로 농축하고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 80%-100% 에틸 아세테이트를 함유하는 석유 에테르 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 35-88: 19.6g을 수득했다, 수율: 79%.
35-89
Figure 112022066845063-pct00958
35-88(7.0 g, 5.1413 mmol)을 250 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(20 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 트리플루오로아세트산(5.7270 mL, 77.1191 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 농축하고, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(300 mL) 및 에틸 아세테이트(200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트(150 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 35-89: 6.4853 g을 수득했다.
35-90
Figure 112022066845063-pct00959
35-89(4.2 g, 3.33 mmol), HBTU(1.72 g, 4.54 mmol), HOBT(0.61g, 4.54 mmol) 및 모노-3급-부틸 석시네이트(0.53 g, 3.03 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(40 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 0℃에서 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(2.25 mL, 13.62 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 탈이온수(300 mL) 및 에틸 아세테이트(200mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 1)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 소량으로 농축하고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 3% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 35-90: 4.3 g을 수득했다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.62 - 8.53 (m, 1H), 8.40 - 8.24 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.95 - 7.81 (m, 1H), 7.88 - 7.82 (d, J = 7.5 Hz, 3H), 7.77 - 7.64 (m, 3H), 7.51 - 7.43 (m, 2H), 7.38 - 7.29 (m, 22H), 7.24 - 7.12 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.15 - 5.01 (m, 9H), 4.46 - 4.15 (m, 8H), 3.92 - 3.82 (m, 2H), 3.64 - 3.50 (m, 4H), 3.38 - 3.27 (m, 2H), 3.20 -3.13 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 3.01 - 2.89 (m, 3H), 2.48 - 2.32 (m, 10H), 2.18 - 2.10 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.05 - 1.71 (m, 7H), 1.56 - 1.46 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 1.40 - 1.37 (m, 2H), 1.36 - 1.21 (m, 10H).
35-93
Figure 112022066845063-pct00960
35-90(0.622 g, 0.4390 mmol) 및 Pd/C(0.0300 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(30 mL)로 용해시키고, 수소를 1.8 MPa의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과했다. 이어서, 규조토를 DMF(20 mL × 3)로 세척하고, 다음 반응을 위한 원료로서 DMF 용액을 합했다.
37-53
Figure 112022066845063-pct00961
Boc-Leu-OH.H2O(40 g, 160.44 mmol, InnoChem에서 구입함), Gly-OBn.TsOH(56.837 g, 168.462 mmol, Ark pharm에서 구입함), HBTU(66.93 g, 176.48 mmol), HOBT(23.85 g, 176.48 mmol)를 1000 mL 플라스크에 넣고, DMF(250 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 20분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(145.85 mL, 882.4356 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 추가로 교반한 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(250 mL) 및 에틸 아세테이트(300 mL)를 첨가하여 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 3)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켰다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 30%-40% EA를 함유하는 석유 에테르 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 37-53: 60.7g을 수득했다.
37-54
Figure 112022066845063-pct00962
37-53(60.7 g, 160.44 mmol)을 1000 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(40mL)으로 용해시키고, TFA(95 mL, 1283.52.9 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(350 mL) 및 에틸 아세테이트(300 mL)를 첨가하여 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트(1500 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 37-54: 45g을 수득했다.
37-56
Figure 112022066845063-pct00963
37-54(45 g, 160.44 mmol), Boc-Phe-OH(40.438 g, 152.42 mmol, aladdin에서 구매함), HBTU(66.93 g, 1276.48 mmol), HOBT(23.85 g, 176.48 mmol)를 1000 mL 플라스크에 넣고, DMF(250 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 -5℃에서 20분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(119.85 mL, 722 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 추가로 교반한 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(350 mL) 및 에틸 아세테이트(300 mL)를 첨가하여 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 3)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(250 mL × 2)로 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 37-56: 84g을 수득했다.
37-59
Figure 112022066845063-pct00964
37-56(84 g, 160.44 mmol)을 1000 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(40mL)으로 용해시키고, TFA(95 mL, 1283.52.9 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2 L 삼각 플라스크로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(350 mL)을 첨가하고, 기포가 많이 발생하고, pH가 7이 넘을 때까지 중탄산나트륨 고체를 서서히 첨가하여 고형물을 분리하고, 여과했다. 필터 케이크를 순수한 물(100 mL × 2)로 세척하고, 건조시켜 생성물 37-59: 68g을 수득했다.
37-62
Figure 112022066845063-pct00965
37-59(68.27 g, 152.42 mmol), Boc-Gly-OH(25.37 g, 144.799 mmol, aladdin에서 구매함), HBTU(63.58 g, 167.66 mmol), HOBT(63.58 g, 167.66 mmol)를 1000 mL 플라스크에 넣고, DMF(250 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 20분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(113.3 mL, 685.89 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 추가로 교반한 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(300 mL) 및 에틸 아세테이트(350 mL)를 첨가하여 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 3)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(250 mL × 2)로 세척하고, 실온에서 1.5시간 동안 정치시켜 고형물을 분리하고, 여과했다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트: 석유 에테르(3: 7) (150 mL × 5)로 세척하여 생성물 37-62: 72.8g을 수득했다.
37-149
Figure 112022066845063-pct00966
37-62(30 g, 51.4871 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(20 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 트리플루오로아세트산(30.6 mL, 411.9 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 농축하고, 포화 중탄산나트륨 용액(200 mL)을 첨가하고, 기포가 많이 발생하고, 이어서 pH가 7이 넘을 때까지 중탄산나트륨 고체를 서서히 첨가하여 고형물을 분리하고, 여과했다. 필터 케이크를 탈이온수(150 mL×4)로 세척하고, 건조시켜 생성물 37-149: 24.85 g을 수득했다.
37-152
Figure 112022066845063-pct00967
Boc-Glu-OH(5.7864 g, 23.4032 mmol, Ark pharm에서 구매함), 37-149 (24.85 g, 51.4871 mmol), HBTU(26.626 g, 70.2096 mmol), HOBT(9.4874 g, 70.2096 mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(150 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 10분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(34.8 mL, 210.628 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 추가로 교반한 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(200 mL) 및 에틸 아세테이트(300 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출했다. 수성상을 에틸 아세테이트(150 mL × 1)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시켰다. 건조 생성물을 메탄올(20 mL) 및 디클로로메탄(100 mL)으로 용해시키고, 실리카겔 분말(50 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 4%-8% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물 37-152: 19.2 g을 수득했다, 수율: 69.8%.
37-154
Figure 112022066845063-pct00968
37-152(19.2 g, 16.3215 mmol)를 1000 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(30 mL)으로 용해시키고, 트리플루오로아세트산(9.6966 mL, 130.5722 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 소량으로 농축하고, 메틸 3급-부틸 에테르(200 mL)를 농축 용액에 첨가하여 고형물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(100 mL × 3)로 세척하고, 건조시켜 생성물 37-154: 17.5 g을 수득했다.
37-156
Figure 112022066845063-pct00969
Boc-Gly-OH(3.4310 g, 19.5858 mmol, Ark pharm에서 구매함), 37-154(17.5 g, 16.3215 mmol), HBTU(9.2847g, 24.4823 mmol), HOBT(3.3083 g, 24.4823 mmol)를 1000 mL 플라스크에 넣고, DMF(150 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 10분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(12.14 mL, 73.4468 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 추가로 교반한 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 에틸 아세테이트(200 mL), 메틸 3급-부틸 에테르(200 mL), n-헥산(300 mL)을 첨가하여 고형물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(100 mL × 3)로 세척하고, 건조시켜 생성물 37-156: 19.2 g을 수득했다.
37-158
Figure 112022066845063-pct00970
37-156(10.499 g, 8.5125 mmol) 및 10% Pd/C(0.10 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(50 mL)로 용해시키고, 수소를 1.8 MPa의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과했다. 이어서, 규조토를 DMF(20 mL × 3)로 세척하고, 다음 반응을 위한 원료로서 수득된 DMF 용액을 합했다.
37-159
Figure 112022066845063-pct00971
37-158(8.965 g, 0.4390 mmol), 팔보시클립(8 g, 17.8763 mmol, PCB로도 지칭됨), HBTU(9.6848 g, 25.5375 mmol), HOBT(3.4509 g, 25.5375 mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(130 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 20분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(12.6626 mL, 76.6125 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반한 다음 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(100 mL)를 첨가하여 고형물을 분리하고, 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(100 mL × 3)로 세척하고, 건조시켜 생성물 37-159: 16.3g을 수득했다.
37-161
Figure 112022066845063-pct00972
37-159(16.3 g, 8.5125 mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(30 mL)으로 용해시키고, 트리플루오로아세트산(18.964 mL, 255.375 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(250mL)를 첨가하여 고형물을 분리하고, 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(50 mL × 3)로 세척하고, 디클로로메탄(240 mL) 및 메탄올(60 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(50 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1% 암모니아수 및 5% - 7% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조시켜 생성물 37-161: 11.2g을 수득했다, 수율 73%.
35-94
Figure 112022066845063-pct00973
35-93(0.464 g, 0.4390 mmol), 37-161(3.5 g, 1.9315 mmol), HBTU(0.9988 g, 2.6338 mmol), HOBT(0.3559 g, 2.6338 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(50 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 20분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(1.306 mL, 7.9015 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 40분 동안 교반한 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(100 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 2회 침전시켜 점성이 있는 유상 생성물을 수득했다. 메틸 3급-부틸 에테르(100 mL)를 유상 생성물에 첨가하여 고형물을 분리하고, 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(50 mL × 2)로 세척하고, 건조시켜 생성물 35-94: 3.614g을 수득했다.
35-95
Figure 112022066845063-pct00974
35-94(3.614 g, 0.4390 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(25 mL)로 용해시키고, 모르폴린(1.7 mL, 19.7507 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)를 반응 생성물에 첨가하여 고형물을 분리한 다음, 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(50 mL × 3)로 세척하고, 디클로로메탄(200 mL) 및 메탄올(50 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(20 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1% 암모니아수 및 5%-9% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조시켜 생성물 35-95: 0.7 g을 수득했다, 수율 20%.
37-172
Figure 112022066845063-pct00975
45-57(0.0412 g, 0.0565 mmol) 및 10% Pd/C(0.10 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(50 mL)로 용해시키고, 수소를 1.8 MPa의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과했다. 이어서, 규조토를 DMF(20 mL × 3)로 세척하고, 다음 반응을 위한 원료로서 DMF 용액을 합했다.
35-96
Figure 112022066845063-pct00976
37-172(0.007 g, 0.0199 mmol), 35-95(0.7 g, 0.0874 mmol), HBTU(0.45 g, 1.192 mmol), HOBT(0.16 g, 1.192 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(35 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 20분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(0.59 mL, 3.575 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 20분 동안 교반한 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 1회 침전시켜 점성이 있는 유상 생성물을 수득했다. 메틸 3급-부틸 에테르(100 mL)를 유상 생성물에 첨가하여 고형물을 분리하고, 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(50 mL × 2)로 세척하고, 건조시켜 생성물 35-96: 0.6434 g을 수득했다.
35-97
Figure 112022066845063-pct00977
35-96(0.6436 g, 0.0199 mmol)을 250 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(25 mL)으로 용해시키고, 트리플루오로아세트산(2.073 mL, 27.92 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 소량으로 농축하고, 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)를 농축 용액에 첨가하여 고형물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(50 mL × 3)로 세척하고, 메탄올(30 mL)과 디클로로메탄(120 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말(10 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1% 암모니아수 및 5% - 8% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 35-97: 0.23 g을 수득했다, 수율 36%.
35-98
Figure 112022066845063-pct00978
35-97(0.23 g, 0.0072 mmol)을 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(10 mL)로 용해시키고, M-NH2.HCl-10K(0.452 g, 0.043 mmol, JenKem에서 구매함), HBTU(0.163 g, 0.43 mmol), HOBT(0.058 g, 0.43 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 15분 동안 저속으로 교반했다. 이어서, DIEA(0.1226 mL, 0.7415 mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 -5℃에서 20분 동안 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 어두운 곳에서 어두운 곳에서 7일 동안 저속으로 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL)를 첨가하고, 상청액을 버리고, 및 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL)를 하부 액체에 첨가했다. 이러한 작업은 2회 반복되었고, 점성이 있는 유상 생성물이 얻어졌다. 메틸 3급-부틸 에테르(100 mL)를 첨가하여 점성 생성물을 수득했다. 점성 생성물을 메탄올(30 mL)과 디클로로메탄(120 mL)의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말(15 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1% 암모니아수 및 8%-11% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시키고, 무수 에탄올(10 mL) 및 디클로로메탄(15 mL)으로 용해시켰다. 이어서, 메틸 3급-부틸 에테르(200 mL)를 수득된 용액에 첨가하여 고형물을 분리하고, 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(50 mL × 3)로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물 35-98: 0.3g을 수득했다, 수율 57%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 9.24 - 9.10 (m, 5H), 8.53 - 8.13 (m, 134H), 7.96- 7.82 (m, 85H), 7.86 - 7.64 (m, 68H), 7.59- 7.42 (m, 68H), 7.41 - 7.34 (m, 71H), 7.30 - 7.21 (m, 69H), 7.17 - 7.04 (m, 28H), 6.99 - 6.73 (m, 5H), 6.68 - 6.53 (m, 5H), 4.45 - 4.23 (m, 8H), 4.14 - 4.01 (m, 21H), 3.79 - 3.54 (m, 304H), 3.51 - 3.42 (m, 3763H), 3.14 - 3.03 (m, 205H), 2.98 - 2.73 (m, 298H), 2.79 - 2.70 (m, 270H), 2.62 - 2.51 (m, 17H), 2.40 - 2.35 (m, 26H), 2.31 - 2.24 (m, 22H), 2.12 - 1.90 (m, 21H), 1.84 - 1.62 (m, 17H), 1.44 - 1.29 (m, 221H), 1.25 - 1.16 (m, 173H).
24. 44-172(화합물 번호 24)의 합성
Figure 112022066845063-pct00979
Figure 112022066845063-pct00980
25-241
Figure 112022066845063-pct00981
Boc-Gly-OH(3.0 g, 17.1252 mmol, Ark pharm에서 구매함), HBTU(9.7418 g, 25.6878 mmol), HOBT(3.4709 g, 25.6878 mmol) 및 H-GlU(OBzl)-OBzl·TosOH(8.5554 g, 17.1252 mmol, Ark pharm에서 구매함)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(50 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(12.7 mL, 77.0634 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하면서 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 2시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(400 mL) 및 에틸 아세테이트(300 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 포화 염화나트륨 용액(300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 그리고, 포화 염화나트륨 용액(300 mL)을 유기상에 추가로 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시켰다. 수득된 고체 생성물을 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매(50 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(50 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(1%-2% 메탄올: 99%-98% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 25-241: 6.9213 g을 수득했다, 수율: 83.41%.
42-105
Figure 112022066845063-pct00982
25-241(2.0 g, 4.1276 mmol) 및 10% Pd/C(100 mg)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(30 mL)로 용해시켰다. 수소화 반응기를 밀봉하고, 수소를 2.0 MPa의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 꺼내어 압축 규조토로 채워진 샌드 코어 깔때기에 균일하게 적가한 다음, 이를 흡인 여과했다. 규조토를 생성물이 없어질 때까지 DMF로 세척하여 반응 생성물 용액을 수득했다.
43-116
Figure 112022066845063-pct00983
Boc-GFLG-OBn(9.9g, 17 mmol, 37-62를 합성하는 방법에 따라 합성됨) 및 10% Pd/C(0.025 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(40 mL)로 용해시키고, 수소를 2.1 MPa의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과했다. 이어서, 규조토를 DMF(20 mL × 3)로 3회 세척하고, 다음 반응을 위한 원료로서 여액을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣었다.
42-89
Figure 112022066845063-pct00984
43-116의 DMF 용액(8.4534 g, 17.1618 mmol), 니라파립(4.5821 g, 14.3015 mmol, NPB로도 지칭됨), HBTU(8.1356 g, 21.4523 mmol) 및 HOBT(2.8986 g, 21.4523 mmol)를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(60 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(10.6 mL, 64.3568 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하면서 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 염화나트륨 수용액(300 mL) 및 에틸 아세테이트(200mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수성상을 분리했다. 이어서, 에틸 아세테이트(200mL)를 수성상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수성상을 분리했다. 수득된 유기상을 합한 다음, 포화 염화나트륨 수용액(300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수성상을 분리했다. 이어서, 탈이온수(300mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수성상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시킨 다음, 오븐에서 건조시켜 생성물 42-89: 11.3695 g을 수득했다.
42-90
Figure 112022066845063-pct00985
42-89(11.3695 g, 14.3015 mmol)를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(30 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 TFA(15.9 mL, 214.5225 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 증발시켜 디클로로메탄을 제거한 다음, 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 얻었고, 이를 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매(60 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(65 mL)을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(0%-2% 메탄올: 100%-98% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 42-90: 8.6g을 수득했다, 수율: 86.6%.
42-107
Figure 112022066845063-pct00986
42-105의 용액(1.2560 g, 4.1276 mmol), 42-90(6.3095 g, 9.0807 mmol), HBTU(4.6961 g, 12.3828 mmol) 및 HOBT(1.6732 g, 12.3828 mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(60 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(6.1 mL, 37.1484 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하면서 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하고 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복하여 유상 고체를 수득했다. 상기 유상 고체를 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 분리한 다음, 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하고, 오븐에서 건조시켜 생성물 42-107: 6.8432 g을 수득했다.
42-110
Figure 112022066845063-pct00987
42-107(6.4832 g, 4.1276 mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(15 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 TFA(4.6 mL, 61.9140 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압하에 농축시켜 디클로로메탄을 제거한 다음, 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 얻었고, 이를 여과했다. 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(100 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(70 ml)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(0.5% 암모니아수: 2%-10% 메탄올: 97.5%-89.5% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 42-110: 2.9609 g을 수득했다, 수율: 46.05%.
44-156
Figure 112022066845063-pct00988
Fmoc-Lys (Boc)-OH(3.6002 g, 7.6839 mmol, Accela에서 구매함), 35-86 (9.1 g, 9.9890 mmol), HBTU(4.3710 g, 11.5258 mmol) 및 HOBT(1.5574 g, 11.5258 mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(7.6mL, 46.4032 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 3시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 염화나트륨 수용액(300 mL) 및 에틸 아세테이트(200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 에틸 아세테이트(100 mL)를 수성상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 수득된 유기상을 합하고, 포화 염화나트륨 수용액(300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 탈이온수(300 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 44-148: 10.4619 g을 수득했다.
44-157
Figure 112022066845063-pct00989
44-156(10.4619 g, 7.6839 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(10 mL)로 용해시키고, 교반하면서 모르폴린(10.0 mL, 115.2583 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 5회 반복하여 점성 고체를 수득했다. 점성 고체를 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매(60 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(50 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(1%-5% 메탄올: 99%-95% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 44-157: 8.7542 g을 수득했다, 수율: 100%.
45-91
Figure 112022066845063-pct00990
글리세린(5g, 54.295mmol, Innochem에서 구매함)을 500 mL 플라스크에 넣고, 질소를 보호 목적으로 도입하고, 칼륨 3급-부톡사이드의 THF 용액(211mL, 211.7505mmol)을 첨가하고, 수득된 용액을 0℃에서 3시간 동안 교반하고, 벤질 브로모아세테이트(30.964g, 195.46mmol)를 첨가하고, 수득된 용액을 2시간 동안 교반한 다음, 실온에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 건조되도록 증발시킨 다음, 탈이온수 및 에틸 아세테이트를 첨가하여 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상에 생성물이 없어질 때까지 수성상을 에틸 아세테이트로 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 무수 황산나트륨 분말로 건조시키고, 이를 흡인 여과하고, 여액을 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1%-2% 에틸 아세테이트/석유 에테르를 사용한 구배 용리에 적용하여 생성물 9g을 수득했다, 수율 31%.
36-186
Figure 112022066845063-pct00991
45-91(0.5 g, 0.9318 mmol) 및 10% Pd/C(0.0200 g)를 반응기에 넣고, DMF(30 mL)로 용해시켰다. 이어서, 반응기 내의 공기를 워터 펌프에 의해 진공 상태가 되도록 펌핑하고, 수소를 0.16 MPa의 압력으로 도입한 다음, 수소를 배기하고, 반응기를 워터 펌프로 진공 상태가 되도록 펌핑한 다음, 수소를 다시 도입했다. 이러한 작업을 3회 반복했다. 마지막으로, 수소를 다시 도입하고, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과했다. 필터 케이크를 DMF(20 mL × 3)로 세척하고, 다음 단계를 위한 원료로서 DMF 용액을 합했다.
44-161
Figure 112022066845063-pct00992
36-186 용액(0.5021 g, 1.8862 mmol), 44-157(8.5957 g, 7.5448 mmol), HBTU(3.2190 g, 8.4879 mmol) 및 HOBT(1.1469 g, 8.4879 mmol)를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(4.2 mL, 25.4637 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 3시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(400 mL) 및 에틸 아세테이트(300 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 에틸 아세테이트(200 mL)를 수성상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 수득된 유기상을 합하고, 탈이온수(300 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 탈이온수(300 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시켰다. 수득된 고체 생성물을 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매(60 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(50 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(2%-8% 메탄올: 98%-92% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 44-161: 3.2551 g을 수득했다, 수율: 47.54%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.33 - 8.02 (m, 18H), 7.50 - 7.17 (m, 60H), 5.36 - 4.94 (m, 24H), 4.55 - 4.50 (m, 12H), 3.95 - 3.87 (m, 6H), 3.67 - 3.47 (m, 25H), 3.39 - 3.16 (m, 16H), 2.47 - 2.38 (m, 24H), 2.25 - 1.94 (m, 12H), 1.94 - 1.79 (m, 6H), 1.57 - 1.46 (m, 6H), 1.38 (s, 27H), 1.26 - 1.23 (m, 6H).
44-166
Figure 112022066845063-pct00993
44-161(1.0 g, 0.2755 mmol, 자체 제조(home-made)) 및 10% Pd/C(50 mg)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(30 mL)로 용해시켰다. 수소화 반응기를 밀봉하고, 수소를 1.6 MPa의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 꺼내어 압축 규조토로 채워진 샌드 코어 깔때기에 균일하게 적가한 다음, 이를 흡인 여과했다. 규조토를 생성물이 없어질 때까지 DMF로 세척하여 반응 생성물 용액을 수득했다.
44-167
Figure 112022066845063-pct00994
44-166(0.3181 g, 0.1248 mmol), 42-110(2.8 g, 1.7974 mmol), HBTU(0.8519 g, 2.2464 mmol) 및 HOBT(0.3035 g, 2.2464 mmol)의 용액을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(30 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(1.1 mL, 6.7392 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복하여 유상 고체를 수득했다. 상기 유상 고체를 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 분리한 다음, 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하고, 오븐에서 건조시켜 생성물 44-167: 2.4242 g을 수득했다.
44-168
Figure 112022066845063-pct00995
44-167(1.7663 g, 0.0840 mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(20 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 TFA(1.0 mL, 12.6010 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압하에 농축시켜 디클로로메탄을 제거한 다음, 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 얻었고, 이를 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(50 mL)을 수득된 용액에 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(1% 암모니아수: 3%-10% 메탄올: 96%-89% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 44-168: 0.9538 g을 수득했다, 수율: 54.79%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 - 8.57 (m, 20H), 8.46 - 7.80 (m, 196H), 7.77 - 7.44 (m, 53H), 7.44 - 7.04 (m, 166H), 5.33 - 5.31 (m, 3H), 4.67 - 4.18 (m, 77H), 4.11 - 3.92 (m, 46H), 3.86 - 3.84 (m, 40H), 3.79 - 3.57 (m, 44H), 3.19 - 3.04 (m, 45H), 2.94 - 2.89 (m, 52H), 2.88 - 2.71 (m, 102H), 2.17 - 1.90 (m, 60H), 1.61 - 1.51 (m, 96H), 1.28 - 1.21 (m, 178H), 0.96 - 0.78 (m, 144H).
44-172
Figure 112022066845063-pct00996
44-168(0.8105 g, 0.0420 mmol) 및 M-SCM-10K(2.0019 g, 0.1890 mmol, JenKem에서 구매함)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(10 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(0.7 mL, 4.2 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 10분 동안 교반하면서 계속 반응시킨 다음, 실온에서 1주 동안 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(20 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 조작을 5회 반복하여 유상 고체를 수득했다. 상기 유상 고체를 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 분리한 다음, 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 필터 케이크를 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(50 mL)을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(1% 암모니아수: 2%-10% 메탄올: 97%-89% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 44-172: 0.6468 g을 수득했다, 수율: 29.53%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 - 8.57 (m, 20H), 8.46 - 7.80 (m, 196H), 7.77 - 7.44 (m, 53H), 7.44 - 7.04 (m, 166H), 5.33 - 5.31 (m, 3H), 4.67 - 4.18 (m, 77H), 4.11 - 3.92 (m, 46H), 3.86 - 3.84 (m, 40H), 3.79 - 3.57 (m, 44H), 3.58 - 3.44 (m, 2853H), 3.24 - 3.04 (m, 45H), 2.94 - 2.89 (m, 52H), 2.88 - 2.71 (m, 102H), 2.17 - 1.90 (m, 60H), 1.61 - 1.51 (m, 96H), 1.28 - 1.21 (m, 178H), 0.94 - 0.77 (m, 144H).
25. 41-126(화합물 번호 25)의 합성
Figure 112022066845063-pct00997
Figure 112022066845063-pct00998
Figure 112022066845063-pct00999
39-81
Figure 112022066845063-pct01000
N-Boc-L-글루탐산 5-벤질 에스테르(10g, 29.6mmoL, aladdin에서 구매함), H-GlU(Obzl) -Obzl·TsOH(16.2g, 32.6mmol, Ark pharm에서 구매함), HOBT(6g, 44.4mmoL), HBTU(16.8g, 44.4mmoL)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시키고, 초음파 처리하여 반응물을 완전히 용해시킨 다음, 수득된 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(22mL, 133.4mmoL)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 반응이 종료될 때까지 이 조건 하에 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 탈이온수(100 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트(100 mL×3)로 3회 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액(100 mL×2)으로 2회 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켰다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 30% 에틸 아세테이트/석유 에테르를 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물을 수득했다.
39-83
Figure 112022066845063-pct01001
39-81(29.6mmol)을 디클로로메탄(5mL)으로 용해시키고, TFA(22mL, 296mmol)를 첨가하고, 초음파 처리하여 상기 화합물을 완전히 용해시켰다. 불투명 유리 스토퍼를 사용하고, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 포화 중탄산나트륨 용액(300 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트(100 mL×3)로 3회 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액(100 mL)으로 2회 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켰다.
41-115
Figure 112022066845063-pct01002
Fmoc-L-Lys(Boc)-OH(5.1430g, 10.9767mmol, Accela에서 구매함), 39-83(6g, 10.9767mmol), HBTU(6.2442g, 16.4651mmol), HOBT(1.8257g, 16.4651mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(50 mL)로 용해시키고, 이어서 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. DIEA(8.2mL, 19.3954mmol)를 서서히 적가한 다음, 수득된 용액을 -5℃에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 순수한 물 및 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기상을 농축하여 생성물 4.6g을 수득했다.
41-116
Figure 112022066845063-pct01003
반응물 41-115(4.6g, 4.6132mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(30 mL)로 용해시키고, 모르폴린(8mL, 92.2639mmoL)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 포화 식염수(150mL) 및 에틸 아세테이트(200mL)를 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 상기 수성상에 생성물이 없어질 때까지 에틸 아세테이트(50mL×3)로 3회 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 식염수(50mL×2)로 2회 세척하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 4g을 수득했다.
41-117
Figure 112022066845063-pct01004
41-116(4g, 5.1620mmol), 39-114(1.8g, 5.1620mmol), HBTU(2.9364g, 7.7429mmol), HOBT(1.0462g, 7.7429mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(40 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. DIEA(8.45mL, 50.9319mmol)를 서서히 적가한 다음, 수득된 용액을 -5℃에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 석유 에테르로 침전시키고, 하부 액체를 수집한 다음, 순수한 물을 첨가하고, 이를 흡인 여과했다. 상기 작업을 3회 반복했다. 수득된 고체를 수집하고, 건조시켜 생성물 5g을 수득했다, 수율 87%.
41-118
Figure 112022066845063-pct01005
반응물 41-117(5g, 5.6303mmol)을 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(30 mL)로 용해시키고, 모르폴린(9mL, 103.24mmoL)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 석유 에테르로 침전시키고, 하부 액체를 수집한 다음, 순수한 물을 첨가하고, 이를 흡인 여과했다. 수득된 고체를 수집하고, 건조시켜 생성물 2.6g을 수득했다, 수율 58%.
41-119
Figure 112022066845063-pct01006
41-118(2.6g, 2.9353mmol), HBTU(1.4312g, 3.7740mmol), HOBT(0.5099g, 3.7740mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, 45-121(즉, 36-186, 0.8387mmol)의 DMF 용액으로 용해시키고, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. DIEA(2.1mL, 12.852mmol)를 서서히 적가한 다음, 수득된 용액을 -5℃에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 포화 식염수(150mL) 및 에틸 아세테이트(200mL)를 첨가하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 수성상에 생성물이 없어질 때까지 에틸 아세테이트(50mL×3)로 3회 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 식염수(50mL×2)로 2회 세척하고, 건조되도록 증발시켰다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1%-7% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 0.5g을 수득했다, 수율 55.6%.
41-120
Figure 112022066845063-pct01007
41-119(0.1g, 0.0348mmol) 및 10% Pd/C(150mg)를 수소화 반응기에 첨가하고, 서서히 첨가되는 DMF(35mL)로 교반하면서 용해시키고, 수소를 300 psi의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 다음날, 반응 용액을 규조토를 채운 샌드 코어 깔때기를 통해 흡인 여과하여 Pd/C를 제거함으로써 생성물의 DMF 용액을 얻었고, 다음 반응에 바로 사용하였다.
41-93
Figure 112022066845063-pct01008
Fmoc-Glu-OH(1.6433g, 4.4485mmol, aladdin에서 구매함), GFLG-NPB(42-90을 합성하는 방법에 따라 합성됨, 6.8g, 9.7867mmol), HBTU(5.0615g, 13.3455mmol), HOBT(1.8032g, 13.3455mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(50 mL)로 용해시킨 다음, 수득된 용액을 -5℃의 저온 항온 조건 하에 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(6.6mL, 40.0365mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 이 조건 하에 3시간 동안 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(30mL) 및 n-헥산(200mL)을 첨가하여 침전시키고, 이를 흡인 여과했다. 수득된 고체 분말을 500mL 둥근 바닥 플라스크로 옮기고, 건조되도록 증발시켜 생성물 10.2g을 수득했다, 수율 100%.
41-95
Figure 112022066845063-pct01009
41-93(7.6g, 4.4485mmol)을 DMF(40mL)로 용해시키고, 모르폴린(7.8mL, 88.97mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 에틸 아세테이트(100mL) 및 n-헥산(200mL)을 첨가하여 침전시키고, 이를 흡인 여과했다. 수득된 고체 분말을 500mL 둥근 바닥 플라스크로 옮기고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피, 및 3% 메탄올／ 디클로로메탄을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 4.4g을 수득했다, 수율 65.7%.
36-81
Figure 112022066845063-pct01010
37-62(14.95 g, 25.654 mmol 및 10% Pd/C (0.300 g)를 반응기에 넣고, DMF(40 mL)로 용해시켰다. 이어서, 상기 반응기 내의 공기를 워터 펌프에 의해 진공 상태에 도달하도록 펌핑하고, 수소를 0.16 MPa의 압력으로 도입한 다음, 수소를 배기하고, 상기 반응기를 워터 펌프에 의해 진공 상태에 도달하도록 펌핑한 다음, 수소를 다시 도입했다. 이러한 작업을 3회 반복했다. 마지막으로, 수소를 다시 도입하고, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과했다. 필터 케이크를 DMF(20 mL × 3)로 세척하고, 다음 단계를 위한 원료로서 DMF 용액을 합했다.
36-84
Figure 112022066845063-pct01011
36-81(5.3g, 10.7255 mmol), 팔보시클립(4 g, 8.9380 mmol, PCB로도 지칭됨), HBTU(5 g, 13.4069 mmol), HOBT(1.8g, 13.4069 mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, -5℃에서 약 20분 동안 교반시켰다. 이어서, DIEA(6.6 mL, 40.2208 mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(50mL)를 하부 유상 생성물에 첨가하였다. 이러한 작업을 3회 반복하여 유상 생성물을 수득했다. 메틸 3급-부틸 에테르(200 mL)를 상기 유상 생성물에 첨가하여 고형물을 분리한 다음, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 건조시켜 36-84: 15.9g을 수득했다.
36-98
Figure 112022066845063-pct01012
36-84(15.9 g, 8.938 mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(10 mL) 및 TFA(6.6 mL, 89.38 mmol)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 10 mL로 농축하고, 메틸 3급-부틸 에테르(200 mL)를 수득된 용액에 첨가하여 분말 생성물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(50 mL × 3)로 세척하고, 20% 메탄올: 80% 디클로로메탄 용액의 혼합 용매(200 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(60 ml)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 고체 분말을 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 0.5% 암모니아수: 2%-5% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 36-98: 8.5 g을 수득했다, 수율: 91.4%.
41-92
Figure 112022066845063-pct01013
Fmoc-GlU(OtBu)-OH(3.3522g, 7.7879mmol, Ark pharm에서 구매함), 36-98(6.8g, 8.2728mmol), HBTU(4.7061g, 12.4092mmol), HOBT(1.6767g, 12.4092mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(20 mL)로 용해시킨 다음, 수득된 용액을 -5℃의 저온 항온 조건 하에 0.5시간 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(6.2mL, 37.2276mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 이 조건 하에 3시간 동안 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(30mL) 및 n-헥산(200mL)을 첨가하여 침전시키고, 이를 흡인 여과했다. 수득된 고체 분말을 500mL 둥근 바닥 플라스크로 옮기고, 20% 메탄올／디클로로메탄으로 용해시키고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피, 및 2% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 8.9g을 수득했다, 수율 100%.
41-97
Figure 112022066845063-pct01014
41-92(8.9g, 7.2447mmol)를 반응 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄(20mL), 및 TFA(8mL, 108.6709mmol)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 증발시켜 디클로로메탄을 제거하고, 메틸 3급-부틸 에테르(30mL) 및 n-헥산(200mL)을 첨가하여 침전시키고, 이를 흡인 여과했다. 수득된 고체 분말을 500mL 둥근 바닥 플라스크로 옮기고, 건조되도록 증발시켜 생성물 8.5g을 수득했다, 수율 100%.
41-98
Figure 112022066845063-pct01015
41-95(4.4g, 2.9319mmol), 41-97(3.6121g, 3.0785mmol), HBTU(1.6679g, 4.3979mmol), HOBT(0.5492g, 4.3979mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(20 mL)로 용해시킨 다음, 수득된 용액을 0℃의 저온 항온 조건 하에 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(2.2mL, 13.1936mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 이 조건 하에 3시간 동안 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(30mL) 및 n-헥산(200mL)을 첨가하여 침전시키고, 이를 흡인 여과했다. 수득된 고체 분말을 2L 둥근 바닥 플라스크로 옮기고, 건조되도록 증발시켜 생성물 7.7873g을 수득했다.
41-103
Figure 112022066845063-pct01016
41-98(6.2g, 2.3343)을 DMF(20 mL)로 용해시키고, 모르폴린(6mL, 70.0298mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(100mL) 및 n-헥산(200mL)을 첨가하여 침전시키고, 이를 흡인 여과했다. 수득된 고체 분말을 500mL 둥근 바닥 플라스크로 옮기고, 건조되도록 증발시켜 생성물 5.68g을 수득했다.
41-104
Figure 112022066845063-pct01017
41-103(5.5g, 2.2598mmol), Boc-Gly-OH(0.4157g, 2.3728mmol, aladdin에서 구매함), HBTU(1.2855g, 3.3897mmol), HOBT(0.4580g, 3.3897mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(20 mL)로 용해시킨 다음, 수득된 용액을 -5℃의 저온 항온 조건 하에 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(1.7mL, 10.1692mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 이 조건 하에 3시간 동안 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 에틸 아세테이트(30mL) 및 n-헥산(200mL)을 첨가하여 침전시키고, 흡인 여과를 여러 번 수행했다. 수득된 고체 분말을 2L 둥근 바닥 플라스크로 옮기고, 다음 반응을 위해 건조되도록 증발시켰다.
41-105
Figure 112022066845063-pct01018
41-104(5.8g, 2.2598mmol), 및 디클로로메탄(20mL)을 플라스크에 넣고, TFA(5mL, 67.2110mL)를 서서히 적가한 다음, 수득된 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 디클로로메탄을 회전 증발기로 제거하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트(30mL) 및 n-헥산(200mL)으로 침전시키고, 흡인 여과를 여러 번 수행했다. 수득된 고체 분말을 500mL 둥근 바닥 플라스크로 옮기고, 건조되도록 증발시켜 생성물 5.5g을 수득했다, 수율 98%.
41-122
Figure 112022066845063-pct01019
41-105(0.8660g, 0.3476mmol), HBTU(0.1975g, 0.5215mmol), HOBT(0.0705g, 0.5215mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, 41-120(0.0348mmol)의 DMF 용액으로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(2mL, 12.1005mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 -5℃에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 순수한 물을 첨가하여 고형물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 건조시켜 생성물 0.84g을 수득했다, 수율 100%.
41-125
Figure 112022066845063-pct01020
41-122(0.84g, 0.0348mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, 초음파 조건에서 디클로로메탄(30mL)으로 용해시키고, TFA(0.3mL, 0.2326mmol)를 첨가한 다음, 수득된 용액을 실온에서 밤새 교반했다. 다음날, 반응 용액을 먼저 증발시켜 디클로로메탄을 제거한 다음, 메틸 3급-부틸 에테르를 첨가하여 침전시키고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 건조시켜 생성물 0.8g을 수득했다, 수율 100%.
41-126
Figure 112022066845063-pct01021
41-125(0.8g, 0.0348mmol)를 DMF(20mL)로 용해시키고, M-SCM-10K(1.1058g, 0.1044mmol, JenKem에서 구매함)를 첨가하고, 초음파 처리하여 반응물을 용해시킨 다음, 수득된 용액을 어두운 곳에서 저속으로 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(150mL), n-헥산(70mL)을 첨가하여 고형물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 20% 메탄올/ 디클로로메탄으로 용해시키고, 실리카겔 분말(3g)을 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피, 및 1% 암모니아수+5%-10% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 구배 용리 작업을 수행하여 생성물 0.35g을 수득했다, 수율 19.4%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 10.13-10.12 (m, 7H), 9.29-9.27 (m, 16H), 8.95-8.92 (m, 7H), 8.57-8.56 (m, 17H), 8.18-8.16 (m, 37H), 8.14 - 7.95 (m, 137H), 7.89-7.87 (m, 50H), 7.59-7.54 (m, 43H), 7.35-7.25 (m, 176H), 5.83-5.81 (m, 7H), 5.16-5.08 (m, 6H), 4.57- 4.35 (m, 58H), 4.13-4.10 (m, 25H), 4.08-4.06 (m, 49H), 3.84-3.82 (m, 26H), 3.72-3.65 (m, 128H), 3.51-3.49 (m, 2888H), 3.24-3.19 (m, 30H), 3.13-3.10 (m, 44H), 3.06-3.02 (m, 40H), 2.91-2.90 (m, 14H), 2.78-2.74 (m, 35H), 2.65-2.60 (m, 26H), 2.41-2.30 (m, 47H), 2.21-1.96 (m, 84H), 1.83-1.75 (m, 91H), 1.64-1.39 (m, 156H), 1.20 -1.16 (m, 24H), 0.90-0.85 (m, 162H).
26. 49-136(화합물 번호 26)의 합성
Figure 112022066845063-pct01022
Figure 112022066845063-pct01023
49-96
Figure 112022066845063-pct01024
Fmoc-Lys (Boc) -OH(3 g, 6.4029mmol, Accela에서 구매함), HBTU(3.64g, 9.6044mmol), HOBT(1.30g, 9.6044mmol)를 H-GlU(OBn)2(3.36g, 6.7230mmol, Ark pharm에서 구매함)가 담긴 플라스크에 넣고, 적당량의 DMF로 용해시킨 다음, -5℃에서, DIEA(4.76mL, 28.8131mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 30분 동안 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 포화 NaCl 용액(200mL) 및 EA(200mL)로 추출하고, 정치시켜 층이 형성되도록 하고, 유기상을 분리했다. 이어서, 수성상을 EA(200mL×3)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 건조되도록 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(6.96g, 초과 생산량(extra-quota))을 수득했다.
49-118
Figure 112022066845063-pct01025
49-96(2g, 2.5710 mmol) 및 10% Pd/C(0.05 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(20 mL)로 용해시키고, 수소를 300Psi의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과했다. 필터 케이크를 DMF(15 mL × 3)로 3회 세척하고, 여액을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣어 다음 반응을 위한 원료로 사용되는 생성물을 수득했다.
49-101
Figure 112022066845063-pct01026
49-17(3.69g, 10.4459mmol)이 담긴 플라스크에 39-84(8 g, 10.4459mmol), HBTU(5.94g, 15.6689mmol), HOBT(2.12g, 15.6689mmol)를 넣고, 적당량의 DMF로 용해시킨 다음, -5℃에서, DIEA(7.77mL, 47.0066mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 30분 동안 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 포화 NaCl 용액(200mL) 및 EA(200mL)로 추출하고, 정치시켜 층이 형성되도록 하고, 유기상을 분리했다. 이어서, 수성상을 EA(200mL×3)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 건조되도록 증발시키고, 수득된 고체를 메탄올/ 디클로로메탄(1: 4)의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(100 mL)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 100% 디클로로메탄을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(9.6g, 83.48 %)을 수득했다.
49-104
Figure 112022066845063-pct01027
49-101(9.6g, 8.7193mmol)이 담긴 플라스크에 DMF를 넣고, 초음파 진동을 가하여 상기 화합물을 완전히 용해시키고, 모르폴린(7.59mL, 87.193mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 포화 NaCl 용액(200mL) 및 EA(200mL)로 추출하고, 정치시켜 층이 형성되도록 하고, 유기상을 분리했다. 이어서, 수성상을 EA(200mL×3)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 건조되도록 증발시키고, 수득된 고체를 메탄올/ 디클로로메탄(1: 4) 용액의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(100 mL)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 3%~5% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(5.3g, 69.19 %)을 수득했다.
49-119
Figure 112022066845063-pct01028
49-118(1.53g, 2.5710mmol)이 담긴 플라스크에 49-104(4.74g, 5.3991mmol), HBTU(2.92g, 7.7130mmol), HOBT(1.04g, 7.7130mmol)를 넣고, 적당량의 DMF로 용해시킨 다음, -5℃에서, DIEA(4.76mL, 28.8131mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 30분 동안 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 포화 NaCl 용액(200mL) 및 EA(200mL)로 추출하고, 정치시켜 층이 형성되도록 하고, 유기상을 분리했다. 이어서, 수성상을 EA(200mL×3)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 건조되도록 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(8.65g, 초과 생산량)을 수득했다.
49-123
Figure 112022066845063-pct01029
49-119(5.96g, 2.5710mmol)가 담긴 플라스크에 DMF를 첨가하고, 초음파 진동을 가하여 상기 화합물을 완전히 용해시키고, 모르폴린(5.19mL, 25.710mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 포화 NaCl 용액(200mL) 및 EA(200mL)로 추출하고, 정치시켜 층이 형성되도록 하고, 유기상을 분리했다. 이어서, 수성상을 EA(200mL×3)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 건조되도록 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(7.6g, 초과 생산량)을 수득했다.
49-124
Figure 112022066845063-pct01030
49-123(5.39g, 2.5710mmol)이 담긴 플라스크에 Boc-Gly-OH(0.49g, 2.8281mmol, aladdin에서 구매함), HBTU(1.46g, 3.8565mmol), HOBT(0.52g, 3.8565mmol)를 넣고, 적당량의 DMF로 용해시킨 다음, -5℃에서, DIEA(4.76mL, 28.8131mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 30분 동안 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 포화 NaCl 용액(200mL) 및 EA(200mL)로 추출하고, 정치시켜 층이 형성되도록 하고, 유기상을 분리했다. 이어서, 수성상을 EA(200mL×3)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 건조되도록 증발시키고, 수득된 고체를 메탄올/ 디클로로메탄(1: 4)의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(100 mL)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 2%-5% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(3.2g, 55.27%)을 수득했다.
49-125
Figure 112022066845063-pct01031
49-124(1g, 0.4437 mmol) 및 10% Pd/C(0.05 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(20 mL)로 용해시키고, 수소를 300Psi의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과했다. 필터 케이크를 DMF(15 mL × 3)로 3회 세척하고, 여액을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣어 다음 반응을 위한 원료로 생성물을 수득했다.
49-128
Figure 112022066845063-pct01032
49-125(0.68g, 0.4437mmol)가 담긴 플라스크에 47-98(2.56g, 3.7271mmol), HBTU(2.02g, 5.3244mmol), HOBT(0.72g, 5.3244mmol)를 넣고, 적당량의 DMF로 용해시킨 다음, -5℃에서, DIEA(2.64mL, 15.9732mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 30분 동안 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 포화 NaCl 용액(200mL) 및 EA(200mL)로 추출하고, 정치시켜 층이 형성되도록 하고, 유기상을 분리했다. 이어서, 수성상을 EA(200mL×3)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 건조되도록 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(4.3g, 초과 생산량)을 수득했다.
49-134
Figure 112022066845063-pct01033
49-128(3.06g, 0.4437mmol)이 담긴 플라스크에 디클로로메탄을 넣고, 초음파 진동을 가하여 상기 화합물을 완전히 용해시키고, TFA(2.27mL, 4.437mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 증발시켜 디클로로메탄 및 대부분의 TFA를 제거한 다음, 메틸 3급-부틸 에테르(200 mL)를 수득된 용액에 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버렸다. 이러한 작업을 3회 반복했다. 이를 흡인 여과하고, 고체 생성물이 얻어졌다. 수득된 고체 생성물을 디클로로메탄과 메탄올의 혼합 용매로 용해시켰다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 3-6% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(1.3g, 43.92%)을 수득했다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.39 (s, 4H), 8.05-7.98 (m, 24H), 7.81-7.36 (m, 99H), 7.10-7.04 (m, 6H), 5.39-5.24 (m, 14H), 3.16-2.65 (m, 122H), 1.37-1.16 (m, 62H), 1.05-0.80 (m, 72H).
49-135
Figure 112022066845063-pct01034
49-134(1.3g, 0.1943 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(20 mL) 및 M-SCM-5K(2.27 g, 0.4274 mmol, JenKem에서 구매함)로 용해시키고, 초음파 진동을 가하여 상기 화합물을 용해시킨 다음, -5℃에서, DIEA(0.90mL, 5.4401mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 30분 동안 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 어두운 곳에서 1주 동안 저속으로 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(25 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(200 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산 및 메틸 3급-부틸 에테르를 수득된 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복했다. 이를 흡인 여과하고, 고체 생성물이 얻어졌다. 수득된 고체 생성물을 디클로로메탄과 메탄올의 혼합 용매로 용해시켰다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 6-10% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(2.1g, 63.25%)을 수득했다.
49-136
Figure 112022066845063-pct01035
49-135(2.1g, 0.1229 mmol), TBAF(0.51 g, 1.9671 mmol), THF(20mL) 및 묽은 HCl(20mL)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 감압 하에 농축하여 고체 생성물을 얻었고, 상기 고체 생성물을 DMF(5 mL)로 용해시키고, 수득된 용액에 이소프로판올을 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복했다. 고체 생성물이 여과에 의해 얻어졌다. 수득된 고체 생성물을 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 수득된 용액에 메틸 3급-부틸 에테르를 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 건조시켜 생성물(1.2 g, 64.17%)을 수득했다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ8.10-7.91 (m, 21H), 7.81-7.24 (m, 25H), 7.06-6.95 (m, 8H), 5.36-5.10 (m, 22H), 3.55-3.46 (m, 1056H), 3.18-2.36 (m, 133H), 1.37-1.16 (m, 62H).
27. 40-176(화합물 번호 27)의 합성
Figure 112022066845063-pct01036
Figure 112022066845063-pct01037
36-143
Figure 112022066845063-pct01038
36-81(8.45g, 17.1618 mmol), 라파티닙(8.3 g, 14.3015 mmol, LPT로도 지칭됨), HBTU(8.1 g, 21.4522 mmol), HOBT(2.9g, 21.4522 mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, -5℃에서 약 20분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(10.6 mL, 64.3567 mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화된 NaHCO3 용액(200 mL) 및 에틸 아세테이트(200 mL)를 첨가하여 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액(100ml × 2)으로 세척하고, 건조되도록 증발시켜 36-143: 14g을 수득했다, 수율: 92.8%.
36-145
Figure 112022066845063-pct01039
36-143(14 g, 14.3015 mmol)을 500 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(20mL)으로 용해시키고, TFA(10.6 mL, 143.015 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 10 mL로 농축하고, 수득된 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(200 mL)를 첨가하여 분말 생성물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(50 mL × 3)로 세척하고, 20% 메탄올: 80% 디클로로메탄의 혼합 용매(200 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(60 ml)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1% 암모니아수: 5%-10% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 36-145: 6.2 g을 수득했다, 수율 92.1%.
40-164
Figure 112022066845063-pct01040
Fmoc-L-Lys(Boc)-OH(0.18g, 0.3855mmol, Accela에서 구매함), 44-208(2g, 0.3855mmol, 화합물 번호 29), HBTU(0.2193g, 0.5783mmol), HOBT(0.0781g, 0.5783mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(40 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. DIEA(0.2878mL, 1.7348mmol)를 서서히 적가한 다음, 수득된 용액을 -5℃에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르 및 n-헥산을 첨가하여 침전시키고, 이를 흡인 여과했다. 수득된 고체를 10% 메탄올/ 디클로로메탄으로 용해시키고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수+4%-8% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 구배 용리 작업을 수행하여 생성물 1.8g을 수득했다, 수율 82.9%.
40-165
Figure 112022066845063-pct01041
40-164(1.8g, 0.3193mmol)를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(30 mL)로 용해시키고, 모르폴린(0.5563mL, 6.3852mmol)을 첨가하고, 초음파 처리하여 반응물을 완전히 용해시킨 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(150mL) 및 n-헥산(100mL)을 첨가하여 고체 생성물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 건조시켜 생성물 1.7293g을 수득했다, 수율 100%.
40-167
Figure 112022066845063-pct01042
Fmoc-Gly-OH(0.0949 g, 0.3193 mmol, Accela에서 구매함), 40-165(1.7 g, 0.3193 mmol), HBTU(0.1817g, 0.4790 mmol), HOBT(0.0647g, 0.4790mmol)를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(50 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 0℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(0.2384 mL, 1.4369mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(150mL) 및 n-헥산(100mL)을 첨가하여 고체 생성물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 건조시켜 생성물 1.8g을 수득했다, 수율, 100%.
40-169
Figure 112022066845063-pct01043
40-167(1.8g, 0.3193mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(30 mL)로 용해시키고, 모르폴린(0.5563mL, 6.3852mmol)을 첨가하고, 초음파 처리하여 상기 화합물을 완전히 용해시킨 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(150mL) 및 n-헥산(100mL)을 첨가하여 고체 생성물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 수득된 고체를 10% 메탄올/ 디클로로메탄으로 용해시키고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피 및 1% 암모니아수+4%-8% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 구배 용리 작업을 수행하여 생성물 1.5g을 수득했다, 수율 85.85%.
40-171
Figure 112022066845063-pct01044
40-169(1.5g, 0.2741mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(20 mL)로 용해시키고, DIEA(0.1895mL, 1.1420mmol), 및 4ARM-SCM-10K(0.6222g, 0.0571mmol)를 첨가하고, 초음파 처리하여 반응물을 용해시킨 다음, 수득된 용액을 어두운 곳에서 저속으로 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(200mL)를 첨가하여 고체 생성물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 고체 생성물을 10% 메탄올/ 디클로로메탄으로 용해시키고, 실리카겔 분말(5g)을 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피, 및 5%-15% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 구배 용리 작업을 수행하여 생성물 1.2g을 수득했다, 수율 66.67%.
40-175
Figure 112022066845063-pct01045
40-171(1.2g, 0.0371mmol)을 250 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(15mL)으로 용해시키고, TFA(0.1379mL, 1.8562mmol)를 첨가하고, 초음파 처리하여 상기 화합물을 완전히 용해시켰다. 불투명 유리 스토퍼를 사용하고, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 증발시켜 디클로로메탄을 제거하고, 메틸 3급-부틸 에테르(150mL)를 첨가하고, 2분 동안 초음파 처리하여 고체 생성물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 상기 고체 생성물을 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매로 용해시키고, 실리카겔 분말을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 회전 증발기로 건조되도록 증발시켰다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1% 암모니아수+5%-15% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 구배 용리 작업을 수행하여 생성물 0.8g을 수득했다, 수율 80.21%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 10.15-9.90 (m, 14H), 9.05-9.03 (m, 1H), 8.94-8.93 (m, 2H), 8.76-8.71 (m, 12H), 8.61-8.55 (m, 11H), 8.25-7.58 (m, 155H), 7.52-7.41 (m, 16H), 7.36-6.99 (m, 198H), 6.71-6.63 (m, 10H), 6.57-6.50 (m, 4H), 5.29-5.22 (m, 26H), 4.80 - 4.52 (m, 39H), 4.42-4.10 (m, 58H), 4.06 - 3.89 (m, 14H), 3.86 - 3.74 (m, 31H), 3.70-3.56 (m, 65H), 3.54 - 3.42 (m, 907H), 3.22-2.98 (m, 81H), 2.91-2.60 (m, 37H), 2.43 - 2.09 (m, 68H), 1.93-1.44 (m, 124H), 1.39-1.14 (m, 144H), 0.90-0.75 (m, 120H).
40-176
Figure 112022066845063-pct01046
40-175(0.8g, 0.0282mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(20 mL)로 용해시키고, DIEA(0.0932mL, 0.5640mmol), 및 M-SCM-5K(0.6206g, 0.1186mmol)를 첨가하고, 초음파 처리하여 반응물을 용해시킨 다음, 수득된 용액을 어두운 곳에서 저속으로 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(150mL)를 첨가하여 고체 생성물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 10% 메탄올/ 디클로로메탄으로 용해시키고, 수득된 용액에 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피, 및 5%-15% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 구배 용리 작업을 수행하여 생성물 0.9g을 수득했다, 수율 69.23%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 9.88-9.81 (m, 9H), 8.94-8.55 (m, 17H), 8.21-7.98 (m, 61H), 7.87-7.71 (m, 21H), 7.47-7.45 (m, 12H), 7.23-7.14 (m, 292H), 6.67-6.53 (m, 11H), 5.26 -5.23 (m, 19H), 4.75-4.57 (m, 17H), 4.35-4.19 (m, 35H), 3.51-3.33 (m, 2730H), 3.06-3.01 (m, 111H), 2.62-2.60 (m, 62H), 2.40-2.37 (m, 68H), 2.18 - 1.76 (m, 221H), 1.60-1.48 (m, 91H), 1.24-1.16 (m, 57H), 0.88-0.78 (m, 120H).
28. 46-51(화합물 번호 28)의 합성
Figure 112022066845063-pct01047
Figure 112022066845063-pct01048
Figure 112022066845063-pct01049
Figure 112022066845063-pct01050
39-227
Figure 112022066845063-pct01051
H-GlU(oBzl)-oBzl(15 g, 30.02mmol), Boc-Gly-OH(5.25g, 30.02 mmol), HBTU(6.08 g, 45.03mmol), HOBT(17.07 g, 45.03 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(30 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(22.33 mL, 135.11 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 1시간 동안 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 순수한 물(200 mL) 및 에틸 아세테이트(200 mL)를 첨가하여 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 염화나트륨 용액(100ml×2)으로 세척하고, 농축하고, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 20%-50% 에틸 아세테이트/석유 에테르를 사용한 구배 용리 작업을 수행하여 생성물 10g을 수득했다, 수율 69%.
33-232
Figure 112022066845063-pct01052
39-227(2 g, 4.28 mmol) 및 10% Pd/C(0.075 g)를 반응기에 넣고, DMF(40 mL)로 용해시키고, 수소를 0.16 MPa의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과했다. 필터 케이크를 DMF(20 mL×3)로 세척하고, 다음 단계를 위한 원료로 DMF 용액를 합했다.
33-233
Figure 112022066845063-pct01053
14-128(6 g, 6.27mmol), HBTU(3.2 g, 8.55mmol), HOBT(1.15g, 8.55 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(30 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(4.2 mL, 25.65 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 1시간 동안 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(100 mL × 3)을 첨가하여 침전시키고, 하부 유상 생성물을 소량의 디클로로메탄으로 용해시키고, 수득된 용액에 메틸 3급-부틸 에테르를 첨가하여 고체 생성물을 분리했다. 고체 생성물을 건조시켜 생성물 8 g, 초과 생산량을 수득했다.
33-235
Figure 112022066845063-pct01054
33-233(8g, 9.4 mmol)을 500 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(20mL)으로 용해시키고, TFA(13 mL, 188 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 10 mL로 농축하고, 수득된 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(200 mL)를 첨가하여 분말 생성물을 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(50 mL × 3)로 세척하고, 20% 메탄올: 80% 디클로로메탄의 혼합 용매(200 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(100mL)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 0.5%-1% 암모니아수: 4%-7% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 6g을 수득했다.
44-180
Figure 112022066845063-pct01055
35-85(5.4828 g, 5.4225 mmol)를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 TFA(6.0 mL, 81.3375 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압하에 농축시켜 디클로로메탄을 제거하고, 수득된 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(400 mL) 및 에틸 아세테이트(200mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 에틸 아세테이트(100mL)를 수성상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 수득된 유기상을 합하고, 탈이온수(400 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 탈이온수(300mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 44-180: 4.7556 g을 수득했다, 수율: 96.27%.
44-181
Figure 112022066845063-pct01056
44-180(4.7556g, 5.2202mmol), Boc-L-Lys(Fmoc)-OH(2.2235 g, 4.7456 mmol), HBTU(2.6996g, 7.1185 mmol) 및 HOBT(0.9618g, 7.1185mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(4.7 mL, 46.1032 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 4시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 염화나트륨 용액(400 mL) 및 에틸 아세테이트(200mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 에틸 아세테이트(100mL)를 수성상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 수득된 유기상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액(300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 탈이온수(300mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 44-181: 6.4613 g을 수득했다.
44-182
Figure 112022066845063-pct01057
44-181(6.4613 g, 4.7456 mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 TFA(5.3 mL, 71.184 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압하에 농축시켜 디클로로메탄을 제거하고, 수득된 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 염화나트륨 용액(300 mL) 및 에틸 아세테이트(200mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 에틸 아세테이트(100mL)를 수성상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 수득된 유기상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액(300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 탈이온수(300mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 44-182: 5.9861 g을 수득했다.
44-183
Figure 112022066845063-pct01058
44-182(5.9861g, 4.7456mmol), 모노-3급-부틸 석시네이트(0.9920 g, 4.7456 mmol), HBTU(2.6996g, 7.1185 mmol) 및 HOBT(0.9618g, 7.1185mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(4.7 mL, 46.1032 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 4시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 염화나트륨 용액(400 mL) 및 에틸 아세테이트(200mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 에틸 아세테이트(100mL)를 수성상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 수득된 유기상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액(300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 탈이온수(300mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시켰다. 수득된 건조 생성물을 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(60 mL)을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(1%-2% 메탄올: 99%-98% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 44-183: 4.6123 g을 수득했다, 수율: 69.45%.
46-36
Figure 112022066845063-pct01059
44-183(1.9313 g, 1.3624 mmol) 및 10% Pd/C(80 mg)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(30 mL)로 용해시켰다. 수소화 반응기를 밀봉하고, 수소를 2.0 MPa의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 꺼내어 압축 규조토로 채워진 샌드 코어 깔때기에 균일하게 적가한 다음, 이를 흡인 여과했다. 규조토를 생성물이 없어질 때까지 DMF로 세척하여 반응 생성물 용액을 수득했다.
46-39
Figure 112022066845063-pct01060
46-36(0.4349g, 0.4114mmol), 46-35(4.1058 g, 1.9748 mmol, 33-235를 합성하는 방법에 따라 합성됨), HBTU(0.9361g, 2.4684 mmol) 및 HOBT(0.3335g, 2.4684mmol)의 용액을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(1.2 mL, 7.4054 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복하여 유상 고체를 수득했다. 유상 고체를 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 분리한 다음, 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하고, 오븐에서 건조시켜 생성물 46-39: 3.8267 g을 수득했다.
46-41
Figure 112022066845063-pct01061
46-39(3.8267 g, 0.4114 mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 TFA(4.6 mL, 61.71 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압하에 농축시켜 디클로로메탄을 제거한 다음, 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 얻었고, 이를 여과했다. 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(100 mL)로 세척하여 생성물 46-41: 2.794 g을 수득했다, 수율: 73.46%.
46-42
Figure 112022066845063-pct01062
46-41(2.794g, 0.3022mmol), 36-98(0.3726 g, 0.0.4533 mmol), HBTU(0.1719g, 0.4533 mmol) 및 HOBT(0.0613g, 0.4533mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(0.3 mL, 1.8132 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복하여 유상 고체를 수득했다. 유상 고체를 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 분리한 다음, 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하고, 오븐에서 건조시켜 생성물 46-42: 3.0369 g을 수득했다.
46-44
Figure 112022066845063-pct01063
46-42(3.0369 g, 0.3022 mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(10 mL)로 용해시키고, 교반하면서 모르폴린(0.5 mL, 5.4395 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복하여 유상 고체를 수득했다. 상기 유상 고체를 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 분리한 다음, 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하여 생성물 46-44: 0.4886 g을 수득했다, 수율: 16.5%.
42-92
Figure 112022066845063-pct01064
Boc-L-Lys(Fmoc)-OH(9.0g, 19.2086 mmol), 글리신 벤질 에스테르 염산염(4.2608 g, 21.1295 mmol), HBTU(10.9270 g, 28.8129 mmol) 및 HOBT(3.8932 g, 28.8129 mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(60 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(14.3 mL, 86.4387 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 3시간 동안 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 염화나트륨 수용액(300 mL) 및 에틸 아세테이트(200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수성상을 분리했다. 이어서, 에틸 아세테이트(100 mL)를 수성상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수성상을 분리했다. 수득된 유기상을 합한 다음, 포화 염화나트륨 수용액(300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수성상을 분리했다. 이어서, 탈이온수(300 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출하고, 수성상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 오븐에서 건조시켜 생성물 42-92: 11.8271 g을 수득했다.
42-93
Figure 112022066845063-pct01065
42-92(11.8271 g, 19.2086 mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(40 mL)으로 용해시키고, TFA(21.4 mL, 288.129 mmol)를 교반하면서 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 증발시켜 디클로로메탄을 제거한 다음, 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 얻었고, 이를 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하고, 마지막으로 오븐에서 건조시켜 생성물 42-93: 9.9040 g을 수득했다.
42-128
Figure 112022066845063-pct01066
42-93(9.9040 g, 19.2086 mmol), 모노-3급-부틸 석시네이트(3.6805 g, 21.1295 mmol), HBTU(10.9270 g, 28.8129 mmol) 및 HOBT(3.8932 g, 28.8129 mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(100 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(14.2 mL, 86.4387 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 염화나트륨 수용액(400 mL) 및 에틸 아세테이트(300mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 에틸 아세테이트(200mL)를 수성상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 수득된 유기상을 합하고, 염화나트륨 수용액(300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 탈이온수(300mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 42-128: 12.9040 g을 수득했다.
42-133
Figure 112022066845063-pct01067
42-128(12.9040 g, 19.2086 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(20 mL)로 용해시키고, 교반하면서 모르폴린(25.1 mL, 288.1290 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(400 mL) 및 에틸 아세테이트(300mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 에틸 아세테이트(200mL)를 수성상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 수득된 유기상을 합하고, 탈이온수(400 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 탈이온수(300mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 42-133: 8.6350 g을 수득했다.
42-134
Figure 112022066845063-pct01068
42-133(7.5191 g, 16.7263 mmol), 44-149(즉, 36-186, 2.4930 g, 4.6462 mmol), HBTU(7.9291 g, 20.9079 mmol) 및 HOBT(2.8251 g, 20.9079 mmol)의 용액을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(10.4 mL, 62.7237 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 중탄산나트륨 용액(400 mL) 및 에틸 아세테이트(300 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 에틸 아세테이트(200 mL)를 수성상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 수득된 유기상을 합하고, 탈이온수(300 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 탈이온수(300 mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 농축된 생성물을 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매(60 mL)로 용해시키고, 수득된 용액에 실리카겔 분말(40 ml)을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(2%-8% 메탄올: 98%-92% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 42-134: 4.8 g을 수득했다, 수율: 66.19%.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.38 - 8.35 (m, 3H), 8.11 - 8.01 (m, 3H), 7.56 (t, J = 5.2 Hz, 3H), 7.44 - 7.27 (m, 15H), 5.12 (s, 6H), 4.36 - 4.17 (m, 3H), 3.97 - 3.80 (m, 6H), 3.33 (s, 11H), 3.06 (m, 6H), 2.45 - 2.31 (m, 12H), 1.69 - 1.46 (m, 12H), 1.36 (m, 27H), 1.32 - 1.26 (m, 6H).
46-46
Figure 112022066845063-pct01069
42-134(0.5 g, 0.3204 mmol) 및 10% Pd/C(50 mg)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(30 mL)로 용해시켰다. 수소화 반응기를 밀봉하고, 수소를 2.0 MPa의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 꺼내어 압축 규조토로 채워진 샌드 코어 깔때기에 균일하게 적가한 다음, 이를 흡인 여과했다. 규조토를 생성물이 없어질 때까지 DMF로 세척하여 반응 생성물 용액을 수득했다.
46-47
Figure 112022066845063-pct01070
46-46(0.0194g, 0.0151mmol), 46-44(0.4886 g, 0.0497 mmol), HBTU(0.0257 g, 0.0678 mmol) 및 HOBT(0.0092g, 0.0678mmol)의 용액을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(100 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(0.1 mL, 1.057 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복하여 유상 고체를 수득했다. 유상 고체를 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 분리한 다음, 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하고, 오븐에서 건조시켜 생성물 46-47: 0.4628 g을 수득했다.
46-49
Figure 112022066845063-pct01071
46-47(0.4628g, 0.0151 mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 TFA(5 mL, 2.265 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압하에 농축시켜 디클로로메탄을 제거한 다음, 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 얻었고, 이를 여과했다. 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르로 세척하고(100 mL), 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매(80 mL)로 용해시키고, 수득된 용액에 실리카겔 분말(50 mL)을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(1% 암모니아수: 6%-10% 메탄올: 93%-89% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 46-49: 0.2613 g을 수득했다, 수율: 56.64%.
46-51
Figure 112022066845063-pct01072
46-49(0.2613 g, 0.0085 mmol), M-NH2ㆍHCl-10K(0.3253 g, 0.0308 mmol), HBTU(0.0146 g, 0.0385 mmol) 및 HOBT(0.0052 g, 0.0385 mmol)를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(20 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(0.1 mL, 1.9422 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 어두운 곳에서 1주 동안 저속으로 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 5회 반복하여 분말상 고체를 얻었고, 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(100 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매(60 mL)로 용해시키고, 수득된 용액에 실리카겔 분말(50 mL)을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(1% 암모니아수: 5%-15% 메탄올: 94%-84% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 46-51: 0.2251 g을 수득했다, 수율: 42.66%.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.97 - 8.53 (m, 41H), 8.32 - 7.90 (m, 183H), 7.90 - 7.60 (m, 57H), 7.54 - 7.45 (m, 27H), 7.38 - 6.99 (m, 254H), 6.67 - 6.53 (m, 21H), 5.26 - 5.24 (m, 42H), 4.87 - 4.03 (m, 168H), 3.87 - 3.40 (m, 2876H), 3.24 - 3.11 (m, 110H), 3.10 - 2.93 (m, 142H), 2.92 - 2.70 (m, 108H), 2.69 - 2.61 (m, 20H), 2.43 - 2.00 (m, 104H), 1.86 - 1.47 (m, 162H), 1.23-1.11 (m, 61H), 0.99 - 0.66 (m, 162H).
29. 44-234(화합물 번호 29)의 합성
Figure 112022066845063-pct01073
Figure 112022066845063-pct01074
36-200
Figure 112022066845063-pct01075
35-84(8.99g, 11.7386mmol), Boc-L-Lys (Fmoc)-OH(5.0 g, 10.6714 mmol), HBTU(6.0706g, 16.0072 mmol) 및 HOBT(2.1629g, 16.0072mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(10.6 mL, 64.0287 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 3시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 염화나트륨 용액(300 mL) 및 에틸 아세테이트(200mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 에틸 아세테이트(100mL)를 수성상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 수득된 유기상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액(300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 탈이온수(300mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 36-200: 12.9804 g을 수득했다.
44-207
Figure 112022066845063-pct01076
36-200(11.9 g, 9.7832 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(20 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 TFA(10.9 mL, 146.748 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압하에 농축시켜 디클로로메탄을 제거한 다음, 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 얻었고, 이를 여과했다. 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(100 mL)로 세척하여 생성물 44-207: 8.351 g을 수득했다, 수율: 76.47%.
44-208
Figure 112022066845063-pct01077
모노-3급-부틸 석시네이트(1.5638g, 8.9775mmol), 44-207(8.351 g, 7.4812 mmol), HBTU(4.2558g, 11.2218 mmol) 및 HOBT(1.5163g, 11.2218mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(9.9 mL, 59.8499 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 3시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 염화나트륨 용액(300 mL) 및 에틸 아세테이트(200mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 에틸 아세테이트(100mL)를 수성상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 수득된 유기상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액(300 mL)을 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 이어서, 탈이온수(300mL)를 유기상에 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 추출한 다음, 수성상으로부터 유기상을 분리했다. 마지막으로, 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시켰다. 수득된 건조 생성물을 20% 메탄올/디클로로메탄의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 수득된 용액에 실리카겔 분말(50 mL)을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(2%-8% 메탄올: 98%-92% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 44-208: 2.5268 g을 수득했다, 수율: 35.85%.
44-212
Figure 112022066845063-pct01078
44-208(2.5268 g, 1.9858 mmol) 및 10% Pd/C(60 mg)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(30 mL)로 용해시켰다. 수소화 반응기를 밀봉하고, 상기 반응기에 수소를 2.2 MPa의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 꺼내어 압축 규조토로 채워진 샌드 코어 깔때기에 균일하게 적가한 다음, 이를 흡인 여과했다. 규조토를 생성물이 없어질 때까지 DMF로 세척하여 반응 생성물 용액을 수득했다.
44-213
Figure 112022066845063-pct01079
44-212(1.0846g, 1.1893mmol), 36-145(5.0 g, 5.2329 mmol), HBTU(2.7062g, 7.1358 mmol) 및 HOBT(0.9642g, 7.1358mmol)의 용액을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(3.5 mL, 21.4074 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 3시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복하여 유상 고체를 수득했다. 상기 유상 고체를 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 분리한 다음, 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하고, 오븐에서 건조시켜 생성물 44-213: 5.5443 g을 수득했다.
44-215
Figure 112022066845063-pct01080
44-213(5.5443 g, 1.1893 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(20 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 TFA(1.3 mL, 17.8395 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압하에 농축시켜 디클로로메탄을 제거한 다음, 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 얻었고, 이를 여과했다. 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(100 mL)로 세척하여 생성물 44-215: 5.0 g을 수득했다, 수율: 91.28%.
44-218
Figure 112022066845063-pct01081
44-215(5.0g, 1.0856mmol), 36-98(1.16 g, 1.4113 mmol), HBTU(0.6176g, 1.6284 mmol) 및 HOBT(0.22g, 1.6284mmol)를 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(1.1 mL, 6.5136 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 3시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복하여 유상 고체를 수득했다. 상기 유상 고체를 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 분리한 다음, 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하고, 오븐에서 건조시켜 생성물 44-218: 5.8728 g을 수득했다.
44-219
Figure 112022066845063-pct01082
44-218(5.8728 g, 1.0856 mmol)을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(20 mL)로 용해시키고, 교반하면서 모르폴린(1.9 mL, 21.7120 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 5회 반복하여 유상 고체를 수득했다. 상기 유상 고체를 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 분리한 다음, 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(60 mL)을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(1% 암모니아수: 3%-15% 메탄올: 96%-84% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 44-219: 0.8841 g을 수득했다, 수율: 15.7%.
44-221
Figure 112022066845063-pct01083
46-46(0.0611 g, 0.0473 mmol), 44-219((0.8841 g, 0.1704 mmol), HBTU(0.0808 g, 0.2130 mmol) 및 HOBT(0.0288 g, 0.2130 mmol)의 용액을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(30 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(0.1mL, 0.6628 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 어두운 곳에서 밤새 교반시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복하여 유상 고체를 수득했다. 상기 유상 고체를 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 분리한 다음, 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하고, 오븐에서 건조시켜 생성물 44-221: 0.7946 g을 수득했다.
44-232
Figure 112022066845063-pct01084
44-221(0.7946 g, 0.0473 mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(20 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 TFA(0.5 mL, 7.095 mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 감압하에 농축시켜 디클로로메탄을 제거한 다음, 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 얻었고, 이를 여과했다. 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(100 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매(60 mL)로 용해시키고, 수득된 용액에 실리카겔 분말(30 ml)을 첨가하고, 증발 작업, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(1% 암모니아수: 3%-10% 메탄올: 96%-89% 디클로로메탄)을 사용한 용리를 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 44-232: 0.2239 g을 수득했다, 수율: 28.46%.
44-234
Figure 112022066845063-pct01085
44-232(0.2239g, 0.0135mmol), M-NH2·HCl-10K(0.5547 g, 0.0525 mmol), HBTU(0.0230g, 0.0606 mmol) 및 HOBT(0.0082g, 0.0606mmol)를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(0.1 mL, 0.5385 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 어두운 곳에서 1주 동안 교반했다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 침전시키고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가하여 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복하여 유상 고체를 수득했다. 상기 유상 고체를 디클로로메탄(10 mL)으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(150 mL)로 침전시켜 분말상 고체를 분리한 다음, 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)로 세척하고, 20% 메탄올/ 디클로로메탄의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 수득된 용액에 실리카겔 분말(50 mL)을 첨가하고, 증발, 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 용리액(1% 암모니아수: 3%-10% 메탄올: 96%-89% 디클로로메탄)을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 생성물 44-234: 0.2549 g을 수득했다, 수율: 39.2%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.95 - 8.51 (m, 17H), 8.26 - 7.92 (m, 115H), 7.53- 7.46 (m, 16H), 7.35 - 7.25 (m, 38H), 7.19 - 7.17 (m, 84H), 4.84 - 4.07 (m, 110H), 4.05 - 3.98 (m, 13H), 3.53 - 3.51 (m, 2874H), 3.25 - 2.94 (m, 117H), 2.89 - 2.85 (m, 73H), 2.77 - 2.73 (m, 47H), 2.69 - 2.61 (m, 16H), 2.41 - 2.29 (m, 52H), 2.23 - 1.75 (m, 71H), 1.59 - 1.48 (m, 77H), 1.34 - 1.23 (m, 30H), 0.85 - 0.83 (m, 60H)
30. 35-167(화합물 번호 32)의 합성
Figure 112022066845063-pct01086
Figure 112022066845063-pct01087
Figure 112022066845063-pct01088
Figure 112022066845063-pct01089
Figure 112022066845063-pct01090
Figure 112022066845063-pct01091
Figure 112022066845063-pct01092
Figure 112022066845063-pct01093
35-124
Figure 112022066845063-pct01094
Fmoc-Gl-OH(3.57 g, 9.66mmol), HBTU(10.99g, 28.9 mmol), HOBT(3.91g, 28.9mmol) 및 H-Glu-(OtBu)-OtBu.HCl(6.57 g, 20.28 mmol)을 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(150 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 0℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(8.78mL, 53.11 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 탈이온수(200 mL) 및 에틸 아세테이트(250mL)를 첨가하여 추출하고, 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL)로 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 35-124: 8.2g을 수득했다.
35-125
Figure 112022066845063-pct01095
35-124(8.2 g, 9.62 mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(30 mL)으로 용해시키고, 트리플루오로아세트산(21.4 mL, 288.6 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(200mL)를 첨가하여 고형물을 분리하고, 이를 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(50 mL × 2)로 세척하고, 건조시켜 생성물 35-125: 6 g을 수득했다.
35-121
Figure 112022066845063-pct01096
Fmoc-Gly-OH(9 g, 30.27mmol), HBTU(16g, 42.19 mmol), HOBT(6g, 44.4mmol) 및 H-Glu-(OtBu)-OtBu.HCl(8 g, 27.05 mmol)을 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 0℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(25mL, 148.5 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 탈이온수(200 mL) 및 에틸 아세테이트(300mL)를 첨가하여 추출하고, 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 35-121: 14 g을 수득했다, 수율: 87.5%.
35-122
Figure 112022066845063-pct01097
35-121(14 g, 26 mmol)을 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(200 mL)로 용해시키고, 모르폴린(14 mL, 260 mmol)을 첨가하고, 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 탈이온수(200 mL) 및 에틸 아세테이트(200 mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 1)로 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 35-122: 68.2 g을 수득했다.
35-126
Figure 112022066845063-pct01098
35-122(8.1 g, 25.6mmol), HBTU(12.1g, 31.98 mmol), HOBT(4.3g, 31.98mmol) 및 35-125(3.35 g, 5.33 mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(50 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 0℃에서 약 20분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(15.9mL, 95.94 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2 L 분별 깔때기로 옮기고, 탈이온수(250 mL) 및 에틸 아세테이트(300mL)로 추출하고, 수성상을 에틸 아세테이트(150 mL × 1)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 1)로 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켰다. 수득된 건조 생성물을 메탄올(20 mL) 및 디클로로메탄(80 mL)으로 용해시키고, 실리카겔 분말(30 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 5%-8% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 35-126: 9.7 g을 수득했다.
35-128
Figure 112022066845063-pct01099
35-126(9.7 g, 5.33 mmol)을 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(150 mL)로 용해시키고, 모르폴린(4.6 mL, 53.3 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 n-헥산(200 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(50 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 흔들어 층이 형성되도록 하고, 상청액을 버린 다음, n-헥산(200 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(50 mL)를 하부 유상 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 4회 반복하여 최종적으로 유상 생성물을 수득했다. 상기 유상 생성물을 건조시켜 35-128: 6.36g을 수득했다, 수율: 75%.
35-111
Figure 112022066845063-pct01100
Fmoc-Gl-OtBU(5 g, 11.8mmol), HBTU(6.7g, 17.7 mmol), HOBT(2.4g, 17.7mmol) 및 H-Gly-OBn.HCl(2.5 g, 12.37 mmol)을 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 0℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(11mL, 64.9 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 탈이온수(200 mL) 및 에틸 아세테이트(300mL)를 첨가하여 추출하고, 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 2)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 35-111: 5.7 g을 수득했다.
35-112
Figure 112022066845063-pct01101
35-111(6.7 g, 11.8 mmol)을 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(45 mL)로 용해시키고, 모르폴린(8.22 mL, 94.4 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 탈이온수(150 mL) 및 에틸 아세테이트(250 mL)를 첨가하여 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 3)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 1)로 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 35-112: 3.2 g을 수득했다, 수율 78%.
35-113
Figure 112022066845063-pct01102
35-112(3.2 g, 9.1mmol), HBTU(5.2g, 13.65 mmol), HOBT(1.8 g, 13.65mmol) 및 Fmoc-Gly-OH(3.2g, 10.92 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(30 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 0℃에서 약 20분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(7 mL, 42.39 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2 L 분별 깔때기로 옮기고, 탈이온수(250 mL) 및 에틸 아세테이트(300mL)로 추출하고, 수성상을 에틸 아세테이트(150 mL × 1)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 1)로 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켰다. 수득된 건조 생성물을 메탄올(20 mL) 및 디클로로메탄(80 mL)으로 용해시키고, 실리카겔 분말(30 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 30%-70% 석유 에테르를 함유하는 에틸 아세테이트 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 35-113: 5.7 g을 수득했다.
35-114
Figure 112022066845063-pct01103
35-113(5.7 g, 9.1 mmol)을 250 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(30 mL)으로 용해시키고, 트리플루오로아세트산(20.4 mL, 273 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 소량으로 농축하고, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL)를 첨가하여 수득된 용액의 층을 형성하고, 상청액을 버리고, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL)를 하부 액체에 첨가하여 점성이 있는 유상 생성물을 수득했다. 상기 유상 생성물을 건조시켜 생성물 35-114: 3.59g을 수득했다, 수율 68%.
35-142
Figure 112022066845063-pct01104
35-128(10.2 g, 6.4mmol), HBTU(1.36 g, 3.59 mmol), HOBT(0.49g, 3.59 mmol) 및 35-114(3 g, 5.3 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(40 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 0℃에서 약 20분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(5mL, 29.15 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 탈이온수(250 mL) 및 에틸 아세테이트(300mL)로 추출하고, 수성상을 에틸 아세테이트(150 mL × 1)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 1)로 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켰다. 수득된 건조 생성물을 메탄올(20 mL) 및 디클로로메탄(80 mL)으로 용해시키고, 실리카겔 분말(15 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 4%-8% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 35-142: 4 g을 수득했다, 수율 81%.
35-144
Figure 112022066845063-pct01105
35-142(9.2g, 1.86 mmol) 및 10% Pd/C(0.050 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(40 mL)로 용해시키고, 수소를 1.8 MPa의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과했다. 이어서, 규조토를 DMF(20 mL × 3)로 세척하고, 다음 반응을 위한 원료로서 DMF 용액을 합했다.
35-115
Figure 112022066845063-pct01106
Boc-Lys (Fmoc) -OH(4.7 g, 10mmol), HBTU(5.7g, 15 mmol), HOBT(2.0g, 15mmol) 및 H-Gly-OBn.HCl(2.2 g, 11 mmol)을 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(50 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(9.1mL, 55 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하면서 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, 포화 염화나트륨 용액(200 mL) 및 에틸 아세테이트(250mL)로 추출하고, 수성상을 에틸 아세테이트(200 mL × 1)로 세척하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 35-115: 6.5g을 수득했다.
35-116
Figure 112022066845063-pct01107
35-115(7.9 g, 12.81 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(20 mL)으로 용해시키고, 교반하면서 트리플루오로아세트산(7.4 mL, 100 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 소량으로 농축하고, n-헥산(150 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL)로 2회 침전시켜 점성이 있는 유상 생성물을 수득했다. 상기 유상 생성물을 건조시켜 생성물 35-116: 5.2g을 수득했다.
35-146
Figure 112022066845063-pct01108
35-144(8.9 g, 4.3mmol), HBTU(2.45g, 6.45 mmol), HOBT(0.9g, 6.45mmol) 및 35-116(2.7g, 4.3 mmol)을 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(200 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 0℃에서 약 20분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(3.9mL, 23.65 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(200 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL)를 첨가하여 반응 용액의 층을 형성하고, 상청액을 버리고, n-헥산(200 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL)를 하부 유상 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3회 반복하여 점성이 있는 유상 생성물을 수득했다. 상기 유상 생성물을 건조시켜 생성물 35-146: 11 g을 수득했다.
35-148
Figure 112022066845063-pct01109
35-146(11g, 4.3 mmol) 및 10% Pd/C(0.050 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(40 mL)로 용해시키고, 수소를 1.8 MPa의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과했다. 이어서, 규조토를 DMF(20 mL × 3)로 세척하고, 다음 반응을 위한 원료로서 DMF 용액을 합했다.
35-155
Figure 112022066845063-pct01110
35-148(6.8 g, 2.75mmol), HBTU(1.4g, 3.75 mmol), HOBT(0.51g, 3.75mmol) 및 35-128(4g, 2.5 mmol)을 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(150 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 0℃에서 약 20분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(1.86mL, 11.25 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(200 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL)를 첨가하여 반응 용액의 층을 형성하고, 상청액을 버리고, n-헥산(200 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL)를 하부 유상 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3회 반복하여 점성이 있는 유상 생성물을 수득했다. 상기 유상 생성물을 디클로로메탄 및 메탄올로 용해시키고, 실리카겔 분말(20g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 0.5% 암모니아수 및 4%-10% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 건조시켜 생성물 35-155: 1.2 g을 수득했다, 수율: 12%. 1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ8.13- 8.05 (m, 22H), 7.85- 7.55 (m, 8H), 7.38- 7.28 (m, 8H), 4.71-4.33 (m, 7H), 4.31 - 4.09 (m, 14H), 3.85-3.42 (m, 12H), 3.18 - 2.35 (m, 4H), 2.31-2.29 (m, 32H), 2.07 - 1.91 (m, 26H), 1.89 - 1.55 (m, 6H), 1.45-1.38 (m, 144H), 1.25 - 1.11 (m, 2H).
35-157
Figure 112022066845063-pct01111
35-155(1.2 g, 0.3 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(25 mL)로 용해시키고, 모르폴린(4 mL, 43.68 mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(100 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 반응 용액의 층을 형성하고, 상청액을 버리고, n-헥산(100 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3회 반복하여 점성이 있는 유상 생성물을 수득했다. 상기 유상 생성물을 건조시켜 생성물 35-157: 1.02 g을 수득했다.
35-159
Figure 112022066845063-pct01112
35-157(1.02g, 0.3 mmol)을 250 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(30 mL) 및 트리플루오로아세트산(10 mL, 134 mmol)으로 용해시키고, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 소량으로 농축하고, n-헥산(100 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 수득된 용액의 층을 형성하고, 상청액을 버리고, n-헥산(100 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 액체에 첨가하여 점성이 있는 유상 생성물을 수득했다. 상기 유상 생성물을 건조시켜 생성물 35-159: 0.8g을 수득했다.
35-161
Figure 112022066845063-pct01113
35-159(0.1 g, 0.0367 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(20 mL)로 용해시켰다. 이어서, DIEA(0.6 mL, 3.63 mmol)를 첨가하고, 수득된 용액을 30분 동안 교반하고, M-SCM-10K(0.85 g, 0.081 mmol, JenKem에서 구매함)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온으로 옮기고, 어두운 곳에서 7일 동안 저속으로 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(100 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 반응 용액의 층을 형성하고, 상청액을 버리고, n-헥산(100 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3회 반복하여 유상 생성물을 수득했다. 상기 유상 생성물을 메탄올(30 mL) 및 디클로로메탄(120 mL) 용액으로 용해시키고, 실리카겔 분말(20 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1% 암모니아수 및 6%-10% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물 35-161: 0.87g을 수득했다, 수율: 58%.
35-167
Figure 112022066845063-pct01114
35-161(0.5 g, 0.02 mmol), 35-99(0.45 g, 0.5 mmol, 25-132를 합성하는 방법에 따라 합성됨), HBTU(0.l5 g, 0.05 mmol), HOBT(0.06 g, 0.05 mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(35 mL)로 용해시키고, 혼합 용액을 -5℃에서 20분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(0.22 mL, 1.4 mmol)를 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반하여 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 어두운 곳에서 6일 동안 저속으로 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, n-헥산(100 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하여 반응 용액의 층을 형성하고, 상청액을 버리고, n-헥산(100 mL) 및 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 하부 유상 용액에 첨가했다. 이러한 작업을 3회 반복하여 점성이 있는 유상 생성물을 수득했다. 상기 유상 생성물을 메탄올(30 mL) 및 디클로로메탄(120 mL) 용액으로 용해시키고, 실리카겔 분말(15 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1% 암모니아수 및 7%-10% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물을 수득했다. 35-167: 0.24g, 수율: 50%. 1H -NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 9.04-9.03 (m, 2H), 8.37-8.34 (m, 29H), 8.18 - 8.02 (m, 42H), 8.01 - 7.80 (m, 48H), 7.61-7.59 (m, 38H), 7.39 -7.36 (m, 25H), 7.27 - 6.95 (m, 190H), 6.69-6.66 (m, 4H), 4.67 - 4.49 (m, 13H), 4.38 - 4.23 (m, 16H), 4.19 - 4.12 (m, 10H), 3.90-3.87 (m, 11H), 3.79-3.75 (m, 9H), 3.70-3.68 (m, 16H), 3.61-3.58 (m, 20H), 3.51-3.49 (m, 1941H), 3.14 - 3.03 (m, 68H), 2.68 - 2.59 (m, 73H), 2.35-2.34 (m, 39H), 1.61 - 1.54 (m, 16H), 1.48 (m, 34H), 1.34-1.32 (m, 31H), 1.23-1.21 (m, 186H), 0.95 - 0.81 (m, 139H), 0.52 -0.05 (m, 28H).
31. 41-137(화합물 번호 30)의 합성
Figure 112022066845063-pct01115
Figure 112022066845063-pct01116
Figure 112022066845063-pct01117
Figure 112022066845063-pct01118
Figure 112022066845063-pct01119
49-17
Figure 112022066845063-pct01120
6-아미노 카프로산(4.61g, 35.1407mmol)을 1L 플라스크에 넣고, THF: H2O=1: 1의 혼합 용액(150 mL)을 첨가하여 상기 화합물을 완전히 용해시키고, 수득된 용액을 0℃에서 교반했다. 이어서, 탄산나트륨 고체(7.45g, 70.2814mmol)를 첨가하고, 초음파 처리하여 상기 화합물을 용해시키고, 수득된 용액을 0℃에서 30분 동안 교반하여 반응시켰다. Fmoc-Cl(10g, 38.6548mmol)을 30mL THF에 용해시킨 다음, 반응 용액에 서서히 적가했다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 실온으로 옮기고, 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 시트르산 50g을 450mL 탈이온수에 용해시키고, 반응 용액에 첨가하여 pH를 3으로 조정했다. 이어서, 수득된 용액을 1 L 분별 깔때기로 옮기고, EA(300mL×3)로 추출했다. 유기상을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켰다. 수득된 고체 생성물을 메탄올/ 디클로로메탄(1: 4)의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(50mL)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 2% 메탄올/ 디클로로메탄 용액을 사용한 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(7.7 g, 86.51 %)을 수득했다.
45-158
Figure 112022066845063-pct01121
파클리탁셀(10g, 11.71mmol, PTX로도 지칭됨, Beisheng, Chongqing에서 구매함), 이미다졸(3.986g, 58.5mmol, Innochem에서 구매함)을 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(100mL)로 용해시키고, 3급-부틸 디메틸 클로로실란(10.59g, 70.26mmol, Innochem에서 구매함)을 질소 보호 하에 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액 및 디클로로메탄으로 추출했다. 유기상을 농축하고, 건조되도록 증발시켜 생성물 11.3g을 수득했다, 수율 100%.
45-161
Figure 112022066845063-pct01122
49-17(4.2g, 11.9297mmol), 45-158(11g, 11.3616mmol), DMAP(0.2776g, 2.2723mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(50 mL)으로 용해시키고, DCC (11.7212mL, 56.808mmol)를 -5℃에서 교반하는 조건 하에 배치로 첨가한 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 포화 염화나트륨 용액 및 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트로 1회 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 2회 세척하고, 상기 유기상에 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 20%-25% 에틸 아세테이트/석유 에테르를 사용한 구배 용리 작업을 수행하여 생성물 8g, 수율 54.05%을 수득했다.
45-163
Figure 112022066845063-pct01123
45-161(7.5g, 5.7535mmol)을 500 mL 플라스크에 넣고, DMF로 용해시키고, 모르폴린(10.024mL, 115.0695mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 포화 염화나트륨 용액 및 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 에틸 아세테이트로 1회 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 2회 세척하고, 상기 유기상에 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 20%-25% 에틸 아세테이트/석유 에테르를 사용한 구배 용리 작업을 수행하여 생성물 4.5g을 수득했다, 수율 72.58%.
41-123
Figure 112022066845063-pct01124
Fmoc-E (OH)2(2g, 5.34142mmol, aladdin에서 구매함), E(OtBu)2(3.3632g, 11.3698mmol, Innochem에서 구매함), HBTU(6.1598g, 16.2426mmol), HOBT(2.1947g, 16.2426mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(20 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 0℃의 저온 항온 조건 하에 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(8mL, 48.7277mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 이 조건 하에 3시간 동안 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2 L 분별 깔때기로 옮기고, 에틸 아세테이트(150mL) 및 탈이온수(300mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 수성상에 생성물이 없어질 때까지 에틸 아세테이트(300mL)로 여러 번 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 농축하고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피, 및 4% 메탄올/ 디클로로메탄을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 5g, 초과 생산량 0.4g을 수득했다.
41-124
Figure 112022066845063-pct01125
41-123(5g, 5.8684mmol)을 DMF로 용해시키고, 모르폴린(10.2mL, 117.638mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 석유 에테르로 침전시키고, 상청액을 버리고, 하부 액체에 순수한 물을 첨가하고, 이를 흡인 여과했다. 고형물을 수집하고, 합하고, DMF로 용해시키고, 순수한 물을 첨가하고, 흡인 여과했다. 필터 케이크를 건조시켜 생성물 3.3g을 수득했다, 수율 89%.
41-127
Figure 112022066845063-pct01126
Fmoc-Lys(Boc)-OH(2.455g, 5.2399mmol, aladdin에서 구매함), 41-124(3.3g, 5.2399mmol), HBTU(2.9528g, 7.8760mmol), HOBT(1.0520g, 7.8760mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(20 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 0℃의 저온 항온 조건 하에 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(3.9mL, 23.5797mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 이 조건 하에 3시간 동안 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2 L 분별 깔때기로 옮기고, 에틸 아세테이트(150mL) 및 탈이온수(300mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 수성상에 생성물이 없어질 때까지 에틸 아세테이트(300mL)로 여러 번 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 유기상을 농축하고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피, 및 50% 에틸 아세테이트/석유 에테르를 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 3.4g을 수득했다, 수율 77%.
41-128
Figure 112022066845063-pct01127
45-91(0.6183g, 1.1523mmol)을 수소화 반응기에 첨가하고; DMF(30mL)로 용해시키고, 10% Pd/C(100mg)를 첨가하고, DMF(30mL)를 첨가하여 반응물을 용해시켰다. H2(300psi)를 도입하고, 수득된 용액을 밤새 교반하여 다음 반응을 위한 생성물을 수득했다.
41-130
Figure 112022066845063-pct01128
41-127(3.4g, 4.0764mmol)을 DMF로 용해시키고, 모르폴린(7.1mL, 81.5280mmol)을 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2 L 분별 깔때기로 옮기고, 에틸 아세테이트(150mL) 및 탈이온수(300mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 수성상에 생성물이 없어질 때까지 에틸 아세테이트(300mL)로 여러 번 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 건조시켜 생성물 3.49g을 수득했다.
41-131
Figure 112022066845063-pct01129
41-130(3.5g, 4.0764mmol), 41-128(1.523mol), HBTU(1.9664g, 5.1852mmol), HOBT(0.7006g, 5.1852mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(20 mL)로 용해시키고, 수득된 용액을 0℃의 저온 항온 조건 하에 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(2.6mL, 15.5556mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 이 조건 하에 3시간 동안 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 2 L 분별 깔때기로 옮기고, 에틸 아세테이트(150mL) 및 탈이온수(300mL)로 추출하고, 유기상을 분리했다. 수성상을 수성상에 생성물이 없어질 때까지 에틸 아세테이트(300mL)로 여러 번 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 건조되도록 증발시키고, 건조시켜 다음 반응을 위한 생성물(3.5g, 초과 생산량 0.3g)을 수득했다.
41-132
Figure 112022066845063-pct01130
41-131(3.2g, 1.1523mmol)을 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(20mL)으로 용해시키고, TFA(20mL, 276.552mmol)를 첨가한 다음, 수득된 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 먼저 증발시켜 TFA의 일부를 제거한 다음, EA(200mL) 및 n-헥산(200mL)으로 침전시키고, 이를 흡인 여과했다. 수득된 고체 분말을 2L 둥근 바닥 플라스크로 옮기고, 건조되도록 증발시켜 생성물 2g을 수득했다.
41-133
Figure 112022066845063-pct01131
41-132(0.28g, 0.1545), M-SCM-5K(3.279g, 0.6178mmol, JenKem에서 구매함)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(30 mL)로 용해시킨 다음, 수득된 용액을 0℃의 저온 항온 조건 하에 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(1mL, 6.0172mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 어두운 곳에서 1주 동안 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(200mL) 및 n-헥산(50mL)으로 침전시키고, 이를 흡인 여과하여 분말 생성물 1g을 수득했다, 수율 38.46%.
41-134
Figure 112022066845063-pct01132
41-133(0.1064g, 0.0062mmol), 45-163(0.1g, 0.0925mmol), HBTU(0.0421g, 0.1109mmol), HOBT(0.0150g, 0.1109mmol)를 100 mL 플라스크에 넣고, DMF(20 mL)로 용해시킨 다음, 수득된 용액을 0℃의 저온 항온 조건 하에 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(0.5mL, 0.3329mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 이 조건 하에 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(200mL) 및 n-헥산(50mL)으로 침전시키고, 흡인 여과하여 분말 생성물을 수득했다. 수득된 분말 생성물을 용해시켜 용액을 수득했다. 수득된 용액을 농축하고, 실리카겔 분말을 첨가하고, 증발, 컬럼 크로마토그래피, 및 ４% 메탄올／ 디클로로메탄을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 0.1g을 수득했다, 수율 55.56%.
41-137
Figure 112022066845063-pct01133
41-134(0.7g, 0.0234mmol), TBAF(1.4684g, 5.6160mmol)를 100 mL 플라스크에 첨가하고, THF(20 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(200mL) 및 n-헥산(50mL)으로 침전시키고, 흡인 여과하여 분말 생성물을 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 4% 메탄올/디클로로메탄을 사용한 용리 작업을 수행하여 생성물 0.35g을 수득했다, 수율 50%.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.55-8.54 (m, 8H), 7.96-7.94 (m, 3H), 7.82-7.80 (m, 7H), 7.57-7.39 (m, 21H), 7.29-7.24 (m, 18H), 7.22-7.21 (m, 28H), 6.97-6.90 (m, 48H), 6.78-6.61 (m, 86H), 5.77-5.76 (m, 9H), 5.37-5.32 (m, 3H), 5.09 - 5.04 (m, 5H), 4.52 - 4.42 (m, 3H), 4.35-4.23 (m, 9H), 3.51-3.49 (m, 1414H), 3.32-3.31 (m, 41H), 3.06 -3.01 (m, 77H), 2.74-2.71 (m, 26H), 2.61-2.59 (m, 14H), 2.05 - 1.96 (m, 55H), 1.74-1.67 (m, 44H), 1.46 - 1.39 (m, 76H), 1.24-1.21 (m, 91H), 1.16-1.14 (m, 22H), 1.05-1.01 (m, 112H), 0.87-0.79 (m, 28H).
32. 49-166(화합물 번호 31)의 합성
Figure 112022066845063-pct01134
Figure 112022066845063-pct01135
Figure 112022066845063-pct01136
Figure 112022066845063-pct01137
Figure 112022066845063-pct01138
Figure 112022066845063-pct01139
Figure 112022066845063-pct01140
39-80
Figure 112022066845063-pct01141
Boc-Glu-OH(5.0g, 20.22mmol, aladdin에서 구매함), H-GlU(OBzl)-OBzl·TsOH(21.2g, 42.46mmol, Ark pharm에서 구매함), HOBT(8g, 60.66mmol), HBTU(23g, 60.66mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, DMF(80 mL)로 용해시키고, 초음파 처리하여 반응물을 완전히 용해시킨 다음, 수득된 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DIEA(30mL, 181mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 반응이 종료될 때까지 저온에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 탈이온수(100 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트(100 mL×3)로 3회 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액(100 mL)으로 2회 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켰다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 40% 에틸 아세테이트/석유 에테르-50% 에틸 아세테이트/석유 에테르를 사용한 구배 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켰다.
39-84
Figure 112022066845063-pct01142
39-80(19.2mmol)을 디클로로메탄(5mL)으로 용해시키고, TFA(14mL, 192mmol)를 첨가하고, 초음파 처리하여 상기 화합물을 완전히 용해시켰다. 불투명 유리 스토퍼를 사용하고, 혼합 용액을 실온에서 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 포화 중탄산나트륨 용액(300 mL)을 첨가하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트(100 mL×3)로 3회 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액(100 mL)으로 2회 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시켰다.
47-96
Figure 112022066845063-pct01143
7-에틸-10-하이드록시캠프토테신(15.00g, 38.23mmol, SN38로도 지칭됨)을 1000 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(150 mL)으로 용해시키고, 3급-부틸 디페닐클로로실란(59.64ml, 229.36mmol, Accela에서 구매함), 트리에틸아민(31.88ml, 229.36mmol)을 첨가한 다음, 수득된 용액을 37℃에서 오일욕에 넣고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 증발시켜 점성 용액을 얻었고, 상기 점성 용액을 n-헥산(150ml)으로 침전시켜 고체 생성물을 얻었고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 건조시켜 생성물(23.15g, 96%)을 수득했다.
47-97
Figure 112022066845063-pct01144
47-96(23.15g, 36.70 mmol), Boc-Gly-OH(8.71g, 49.70 mmol, aladdin에서 구매함), DMAP(0.94g, 7.65 mmol)를 1000 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(150 mL)으로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 0℃에서 30분 동안 교반했다. 이어서, DCC(39.41 g, 191.15 mmol)를 각 배치에 대해 30분의 간격으로 3개의 배치로 첨가하였다. 첨가가 종료되면, 수득된 용액을 0℃에서 2시간 동안 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(200 mL) 및 석유 에테르(50 mL)로 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복하고, 이를 여과하여 고체 생성물을 수득했다. 상기 고체 생성물을 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(27.53 g, 94%)을 수득했다.
47-98
Figure 112022066845063-pct01145
47-97(27.53g, 34.50mmol)을 1000 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(50 mL) 및 트리플루오로아세트산(28.40ml, 382.30mmol)으로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 실온에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 탈이온수(200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트(100 mL×3)로 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액(200 mL×2)으로 세척하고, 농축하고, 실리카겔 분말을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 생성물을 수득했다. 컬럼 크로마토그래피 및 구배 용리(1%-3% CH3OH, 나머지 CH2Cl2 사용) 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하여 생성물(16.98g, 72%)을 수득했다.
29-242
Figure 112022066845063-pct01146
Fmoc-Lys (Boc) -OH(5.0g, 10.6714 mmol, aladdin에서 구매함), H-Gly-OBn(3.7802g, 11.2050 mmol, Innochem에서 구매함), HBTU(6.0705g, 16.0072mmol), HOBT(2.1630g, 16.0072mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(50 mL)로 용해시킨 다음, 수득된 용액을 0℃에서 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(7.9371mL, 48.0215mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 교반하면서 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 탈이온수(200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트(100 mL×3)로 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액(200 mL)으로 2회 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜 조 생성물을 수득했다.
29-243
Figure 112022066845063-pct01147
29-242(6.57g, 10.6714 mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, 적당량의 디클로로메탄으로 용해시키고, TFA(7.9248mL, 106.714mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 증발시켜 유상 용액을 얻었고, 포화 중탄산나트륨 용액을 첨가하여 용액이 알칼리성이 될 때까지 pH를 조정하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트(100 mL×3)로 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액(200 mL)으로 2회 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜 조 생성물을 수득했다.
29-245
Figure 112022066845063-pct01148
Boc-Lys (Boc) -OH(4.2805g, 11.7385 mmol, Ark pharm에서 구매함), 29-243(5.50g, 10.6714 mmol), HBTU(6.0705g, 16.0072mmol), HOBT(2.1630g, 16.0072mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(50 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 0℃에서 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(7.9371mL, 48.0215mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 0℃에서 밤새 계속 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 탈이온수(200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트(100 mL×3)로 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액(200 mL)으로 2회 세척하고, 농축하고, 건조되도록 증발시키고, 진공 오븐에서 건조시켜 조 생성물을 수득했다.
29-246
Figure 112022066845063-pct01149
29-245(9.0g, 10.6714mmol)가 담긴 500 mL 플라스크에 모르폴린(9.24mL, 106.714mmol)을 넣고, DMF(10mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 탈이온수(200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트(100 mL×3)로 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액(200 mL)으로 2회 세척하고, 농축하고, 실리카겔 분말을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 생성물을 수득했다. 컬럼 크로마토그래피 및 구배 용리(1% 암모니아수, 4%-5% 메탄올, 나머지 디클로로메탄 사용) 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하여 생성물 29-246: 3.7g을 수득했다. 수율 56%.
21-221
Figure 112022066845063-pct01150
에리트리톨(4.5g, 36.849mmol)을 500mL 2구 플라스크에 넣고, 초음파 조건에서 THF(60mL)로 용해시킨 다음, 수득된 용액을 0℃에서 교반했다. 보호 목적으로 질소를 도입한 후, 칼륨 3급-부톡사이드(200mL, 184.245mmol)를 첨가하고, 수득된 용액을 0℃에서 2시간 동안 교반했다. 이어서, 벤질 브로모아세테이트(29.187mL, 184.245mmol)를 첨가하고, 수득된 용액을 3시간 동안 교반한 다음, 실온에서 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 순수한 물 및 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기상을 농축했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1%-2% 에틸 아세테이트/석유 에테르를 사용한 구배 용리 작업을 수행하여 생성물 5g을 수득했다, 수율 20%.
38-120
Figure 112022066845063-pct01151
21-221(0.64g, 0.9793mmol) 및 10% Pd/C(100mg)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(30mL)를 서서히 첨가하여 교반하면서 반응물을 용해시키고, 수소를 300 psi의 압력으로 도입한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 다음날, 반응 용액을 규조토로 채워진 샌드 코어 깔때기를 통해 흡인 여과하여 Pd/C를 제거하여 생성물의 DMF 용액을 얻었고, 이를 다음 반응에 바로 사용했다.
29-248
Figure 112022066845063-pct01152
38-120(0.39g, 1.0966 mmol), 29-246(3.0g, 4.8249 mmol), HBTU(2.4951g, 6.5795mmol), HOBT(0.8891g, 6.5795 mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(50 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(3.2624mL, 19.7384mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하면서 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 탈이온수(200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트(100 mL×3)로 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액(200 mL)으로 2회 세척하고, 농축하고, 실리카겔 분말을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 생성물을 수득했다. 컬럼 크로마토그래피 및 구배 용리(50%-80% 에틸 아세테이트, 나머지 석유 에테르 사용) 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하여 생성물(1.6g, 53%)을 수득했다.
49-79
Figure 112022066845063-pct01153
29-248(0.52g, 0.1878mmol) 및 10% Pd/C(0.0, 5 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(30 mL)로 용해시켰다. 이어서, 수소화 반응기를 밀봉하고, "3회 펌핑 및 3회 충전" 작동을 수행하여 수소화 반응기의 압력이 0.18 MPa로 판독되었고, 이어서 수득된 용액을 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과했다. 필터 케이크를 DMF(20 mL×3)로 세척하여 생성물의 DMF 용액을 다음 반응을 위한 원료로 수득했다.
49-80
Figure 112022066845063-pct01154
49-79(0.45g, 0.1878mmol), M-NH2HCl-5K(4.91g, 0.9389mmol, JenKem에서 구매함), HBTU(0.43g, 1.1237mmol), HOBT(0.15g, 1.1267mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(60 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(0.56mL, 3.3780mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하면서 계속 반응시킨 다음, 어두운 곳에서 실온에서 3일 동안 저속으로 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(100 mL)과 함께 흔들고, 상청액을 버렸다. 상기 작업을 3회 반복했다. 이어서, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(80 mL)와 소량의 n-헥산(10 mL)과 함께 흔들고, 상청액을 버렸다. 상기 작업을 3회 반복했다. 반응 용액으로부터 분말상 고체를 분리하고, 흡인 여과를 수행했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL × 3)로 세척하고, 세척된 필터 케이크를 수집하고, 메탄올/ 디클로로메탄(1: 4)의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(20 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1% 암모니아수 및 3%-7% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 구배 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(3.2g, 73.73%)을 수득했다.
49-153
Figure 112022066845063-pct01155
49-80(3.2 g, 0.1383 mmol)을 250 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(5 mL) 및 TFA(0.82 mL, 11.0640mmol)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 어두운 곳에서 실온에서 밤새 저속으로 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 회전 증발시켜 유상 용액을 얻었고, 이어서 상기 유상 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)를 첨가했다. 수득된 용액으로부터 분말상 고체를 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL × 3)로 세척하고, 세척된 필터 케이크를 수집하고, 메탄올/ 디클로로메탄(1: 4)의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(20 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 3%-12% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 구배 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(1.74g, 56.35 %)을 수득했다.
49-157
Figure 112022066845063-pct01156
39-84(5.16g, 6.7433 mmol), 모노-3급-부틸 석시네이트(1.40g, 8.0920 mmol, Accela에서 구매함), HBTU(3.84g, 10.1149mmol), HOBT(1.36g, 10.1149 mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(50 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(10.03mL, 60.6897mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하면서 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액에 탈이온수(200 mL)를 첨가하고, 수득된 용액을 에틸 아세테이트(100 mL×3)로 추출하고, 수득된 유기상을 합했다. 상기 유기상을 포화 염화나트륨 용액(200 mL)으로 2회 세척하고, 농축하고, 실리카겔 분말을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 생성물을 수득했다. 컬럼 크로마토그래피 및 구배 용리(50%-90% 에틸 아세테이트, 나머지 석유 에테르) 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하여 생성물(5.66g, 90.99%)을 수득했다.
49-158
Figure 112022066845063-pct01157
49-157(2.8g, 3.0367mmol) 및 10% Pd/C(0.08 g)를 수소화 반응기에 첨가하고, DMF(30 mL)로 용해시켰다. 이어서, 수소화 반응기를 밀봉하고, "3회 펌핑 및 3회 충전" 작동을 수행하여 수소화 반응기의 압력이 0.18 MPa로 판독되었고, 이어서 수득된 용액을 실온에서 밤새 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 규조토로 여과했다. 필터 케이크를 DMF(20 mL×3)로 세척하여 생성물의 DMF 용액을 다음 반응을 위한 원료로 수득했다.
49-159
Figure 112022066845063-pct01158
49-158(1.71g, 3.0367mmol), 47-98(8.77g, 12.7541mmol), HBTU(6.90g, 18.2202mmol), HOBT(2.46g, 18.2202mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(60 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 약 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(13mL, 78.9542mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하면서 계속 반응시킨 다음, 실온으로 옮기고, 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(100 mL)과 함께 흔들고, 상청액을 버렸다. 상기 작업을 3회 반복했다. 이어서, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(80 mL)와 소량의 n-헥산(10 mL)과 함께 흔들고, 상청액을 버렸다. 상기 작업을 3회 반복했다. 수득된 용액으로부터 분말상 고체를 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL × 3)로 세척하고, 세척된 필터 케이크를 수집하고, 메탄올/ 디클로로메탄(1: 4)의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(60 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 3%-7% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 구배 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(11.3g, 초과 생산량)을 수득했다.
49-161
Figure 112022066845063-pct01159
49-159(9.84g, 3.0367mmol)를 250 mL 플라스크에 넣고, 디클로로메탄(8 mL)으로 용해시키고, TFA(8mL)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 실온에서 밤새 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 회전 증발시켜 유상 용액을 얻었고, 이어서 상기 유상 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(60 mL)를 첨가했다. 수득된 용액으로부터 분말상 고체를 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL × 3)로 세척하고, 세척된 필터 케이크를 수집하고, 메탄올/ 디클로로메탄(1: 4)의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(60 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 1%-4% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 구배 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(2.7g, 27.92%)을 수득했다.
49-162
Figure 112022066845063-pct01160
49-153(1.19g, 0.0535mmol), 49-161(1.5g, 0.4710mmol), HBTU(0.24g, 0.6422mmol), HOBT(0.08g, 0.6422mmol)를 500 mL 플라스크에 넣고, DMF(60 mL)로 용해시킨 다음, 혼합 용액을 -5℃에서 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, DIEA(0.60mL, 3.6395mmol)를 서서히 적가하고, 수득된 용액을 -5℃에서 1시간 동안 교반하면서 계속 반응시킨 다음, 어두운 곳에서 실온에서 밤새 저속으로 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 n-헥산(100 mL)과 함께 흔들고, 상청액을 버렸다. 상기 작업을 3회 반복했다. 이어서, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르(80 mL)와 소량의 n-헥산(10 mL)과 함께 흔들고, 상청액을 버렸다. 상기 작업을 3회 반복했다. 수득된 용액으로부터 분말상 고체를 분리하고, 이를 흡인 여과했다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르(40 mL × 3)로 세척하고, 세척된 필터 케이크를 수집하고, 메탄올/ 디클로로메탄(1: 4)의 혼합 용매(100 mL)로 용해시키고, 실리카겔 분말(20 g)을 첨가한 다음, 수득된 혼합물을 건조되도록 증발시켜 분말상 고체를 수득했다. 건조 샘플 로딩, 컬럼 크로마토그래피, 및 3%-15% 메탄올을 함유하는 디클로로메탄 혼합 용액을 사용한 구배 용리 작업을 수행했다. 이어서, 용리 생성물을 수집하고, 농축하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(0.95g, 37.25%)을 수득했다.
49-166
Figure 112022066845063-pct01161
49-162(0.95g, 0.0199mmol)를 500ml 플라스크에 넣고, 초음파에 의해 THF(10ml) 및 묽은 염산(10ml, 0.05mmol/L)으로 용해시키고, TBAF(0.5g, 1.9133mmol)를 첨가한 다음, 혼합 용액을 어두운 곳에서 실온에서 3시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응이 종료되면, 반응 용액을 건조되도록 증발시켰다. 수득된 건조 생성물을 DMF(5ml)로 용해시키고, 수득된 용액을 이소프로판올로 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복했다. 침전물을 무수 에탄올과 소량의 디클로로메탄으로 용해시키고, 수득된 용액을 메틸 3급-부틸 에테르로 침전시켰다. 이러한 작업을 3회 반복했다. 이어서, 수득된 고체를 수집하고, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물(0.75g, 93.75%)을 수득했다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.36-8.18 (m, 32H), 8.12-7.89 (m, 56H), 7.81-7.76 (m, 16H), 7.35 (s, 100H), 7.05-6.96 (m, 27H), 5.95-5.18 (m, 124H), 4.25-3.81 (m, 156H), 3.53-3.49 (m, 3706H), 3.12-2.78 (m, 123H), 2.08 (s, 109H), 1.47-1.20 (m, 211H), 0.99-0.78 (m, 136H).
실시예 2 활성 검정
이하에서는 27-134(화합물 번호 18), 44-2(화합물 번호 3)를 예시로 채택했으며, 다른 화합물에 대한 시험 방법은 동일했고, 암세포에 대한 억제 효과도 유의했다.
I. 실험 재료:
1. 고객 샘플(Customer sample): Colo205, MDA-MB-231 암세포, 2종 약물(27-134, 44-2)
2. 실험 장비 및 시약: PerkinElmer 다기능 마이크로플레이트 판독기, CCK8 세포 증식 및 세포독성 검출 키트
II. 실험 방법
약물 제형화: 각 약물에 대해 7.4537mM의 몰 농도에 상응하는 생리 식염수를 사용하여 약물을 0.1g/ml로 제형화했다.
1. 세포를 배양하고 트립신으로 분해했다. 세포를 상응하는 배지와 함께 단일 세포 현탁액으로 불어넣었다(blown). 현탁액을 웰당 100 μl로 96웰 플레이트에 접종했으며, 세포 밀도는 약 10 내지 15%였다. 아직 처리되지 않은 세포가 벽에 부착될 때까지 37℃ 및 5% CO2의 인큐베이터에서 6시간 동안 배양을 계속했다.
2. 약물 농도 요건에 따라, 농도가 다른 약물 함유 배양 배지를 다중 희석 방법으로 준비했다. 도 1에 도시된 바와 같이, 동일한 약물의 상이한 구배 조합의 2개 그룹을 하나의 플레이트에서 스크리닝했다.
3. 약물 구배: 2 단계로 제조된 상응하는 약물이 포함된 신선한 배양 배지(총 부피는 200 μl이고, 약물 농도는 도 1에 나타냄) 100 μl를 각각 첨가하고, 48시간 동안 배양을 계속했다.
4. 48시간의 약물 처리 후, 원래의 배지를 버렸다.
5. 배지(10% CCK8 함유) 100 μl를 각 웰에 첨가하고, 세포 배양기에서 2시간 동안 배양을 계속했다.
6. 450nm에서 흡광도를 측정했으며, 그 결과는 도 2에 나타내었다.
III. 실험 결과 분석:
1. 판독값으로부터 각 약물 농도에서 세포 억제율을 다음과 같이 계산했다:
Figure 112022066845063-pct01162
2. 플롯:
도 3에 나타낸 바와 같은 MDA-MB-231 암세포에 대한 약물 44-2의 억제 효과.
도 4에 나타낸 바와 같은 Colo205 암세포에 대한 약물 27-134의 억제 효과.
3. 개별 약물에 대한 IC50 계산
결과는 도 5에 나타내었다.
실시예 3 인간 유방암 BT474 세포의 NPG 마우스 피하 이식 종양 모델에 대한 다중 시험 샘플의 생체 내 항종양 효능 사전 테스트.
1. 실험 재료:
제조 방법:
시험 샘플 희석액: 적당량의 PEG300 및 무수 알코올을 취하고, 염화나트륨 주사액을 가하여 PEG300과 무수 알코올의 함량이 20%(v/v)가 되도록 하였다.
시험 샘플: 41-32, 41-40 및 39-55를 각각 적당량 취하고, 각각의 시험 샘플 희석액 적당량을 첨가하여 각각 농도가 8.3 mg/mL, 4.6 mg/mL 및 5.5 mg/mL인 용액을 제조하였다.
SB7.HCL: 적당량의 SB7.HCL(전환 계수(conversion factor): 93.4%)을 취하고, 소정량의 에탄올(5%, V/V)을 첨가하여 용해시키고, 완전히 용해시킨 후, 적당량의 염화나트륨 주사액을 가하여 0.5 mg/mL 농도의 용액을 제조하였다.
LPT: 적당량의 LPT를 취하고, 소정량의 0.5% CMC-Na 용액을 첨가한 후 자석 교반기로 균일하게 교반하여 0.56 mg/mL 농도의 용액을 제조하였다.
음성 대조군: 시험 샘플 희석액을 그대로 사용했다.
제조된 용액의 보존 및 처리: 제조된 시험 샘플 및 대조 샘플은 투여 전 2 내지 8℃에서 또는 아이스박스에 보관하였고, 투여 후 남은 시험 샘플 및 대조 샘플은 의료 폐기물로 처리하였다.
인간 유방암 세포 BT474: RPMI1640 + 10% FBS, 37℃, 5% CO2 조건 하에 배양된 중국과학원 상하이 생물 과학 연구소의 세포 자원 센터(Cell Resource Center of Shanghai Institutes for Biological Sciences of Chinese Academy of Sciences)에서 입수되었다.
동물 종 및 계통: NPG 마우스
동물 등급: SPF 등급
동물 출처: Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd.
종양 접종 시 동물 연령: 약 4-5주.
종양 접종 시 동물 체중: 약 15-18g. 동성 동물의 체중은 평균 체중의 80-120% 사이였다.
동물의 성별 및 수: 암컷, 60마리의 마우스, 36마리의 모델링 동물이 최종 실험을 위해 선별되었으며, 나머지 동물은 수의사에게 옮겨지거나 안락사되었다.
동물은 독립 환기 시스템(independent ventilation system, IVC)에서 사육되었고, 한 케이지에서 최대 6마리의 같은 그룹의 동물을 사육했으며, SPF 등급의 축사를 제공했으며, 환경 조건은 다음과 같이 제어되었다: 실온 20-26℃, 40-70%의 상대 습도 및 12시간 명암 교대 조명.
사료: 검증된 마우스 사료(제조업체: Beijing Keao Xieli Feed Co., Ltd.)를 매일 제공했다. 동물들은 자유롭게 먹고 물을 마셨다.
2. 실험 방법:
BT474 세포를 부활시켜 세포 계대 증폭을 진행하였다. 충분한 수로 증폭되면, 대수 성장기의 세포를 세포 접종을 위해 수집하였다. 세포 접종 전 에스트로겐 서방정(17 베타-ESTRADIOL, 제품 번호: SE-121, Innovative Research of America)을 NPG 마우스의 목 뒤쪽 피부 아래에 이식했다. 농도 7.5×107/mL의 BT474 세포 현탁액과 Matrigel Basement membrane Matrix(BD Co.)를 1:1의 부피비로 혼합하여 농도 3.75×107/mL의 세포 현탁액을 수득했다. 세포 현탁액 0.2 mL를 마우스의 우측 유방 지방 패드에 접종했다. 접종 후 종양 성장이 관찰되었으며, 종양 부피가 66.83-324.35 mm3인 36마리의 종양 발생 동물을 최종 선별하여 시험에 사용하였다.
종양 발생 동물을 종양 부피와 체중에 따라 다음을 포함하는 6개 그룹으로 무작위로 나누었다: 그룹 1(음성 대조군 그룹, 시험 샘플 희석액), 그룹 2(LPT, 20 mg/kg), 그룹 3(SB7+ LPT, 5+5.6 mg/kg), 그룹 4(41-32, 즉, 화합물 번호 20, 83 mg/kg), 그룹 5(41-40, 즉, 화합물 번호 13, 46 mg/kg) 및 그룹 6(39-55, 즉, 화합물 번호 12, 55 mg/kg), 각 그룹에 6마리의 동물, 투여량 10 mL/kg. 음성 대조군인 SB7, 41-32, 41-40 및 39-55를 정맥내 주사했고; LPT는 위내 투여되었다. 그룹 2와 그룹 4는 3일마다 1회 투여(D19에 약물 용량 부족으로 인해 한 번 투여 중단)한 반면, 나머지 그룹은 4주의 기간 동안 주 1회 투여했으며, D29에 동물을 안락사시켰다. 실험 기간 동안 동물의 일반적인 임상 증상을 매일 2회 관찰하였고, 체중과 종양 직경을 매주 2회 측정하였다. 안락사 후 종양을 제거하고 종양 중량을 측정했다. 종양 부피, 상대 종양 부피 RTV, 상대 종양 증식율 T/C% 및 종양 중량 억제율 IRTW%를 계산했다. 투여 그룹의 상대 종양 증식율 T/C%는 40% 이하였으며, 상기 투여 그룹의 RTV는 음성 대조 그룹의 RTV와 비교하여 유의하게 상이하여(P ≤ 0.05) 효과적인 것으로 간주되었고, 60% 이상의 IRTW를 유효성 보조 참조 지표로 사용했다.
A. 종양 직경 측정:
시험 동물: 모든 동물
시험 시간: 그룹화 날(즉, D1, 최초 투여일), 최초 투여 후 주 2회, 안락사 전, 슬라이드 캘리퍼를 사용하여 종양의 장경 및 단경을 측정하여 기록하고, 종양 부피를 계산하였다.
종양 부피는 다음 공식에 따라 계산되었다:
V=1/2×장경×단경2
B. 종양 부피에 따른 치료 효능 평가
상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식율 T/C%는 다음 공식에 따라 계산되었다:
RTV=Vt/V0
Vt: 매일 종양을 측정하여 얻은 종양 부피
V0: 초기 종양 부피(투여 전)
T/C%= 투여 그룹의 평균 RTV/대조 그룹의 평균 RTV × 100%
T/C%가 40% 이하이고, 투여 그룹의 RTV가 대조 그룹의 RTV와 비교하여 통계적으로 다른 경우(P < 0.05), 종양 성장 억제 효과가 달성되었고; 반면에 T/C%가 40%를 초과하면, 종양 성장이 억제되지 않았다.
C. 종양 중량에 따른 치료 효능 평가
실험 후, 종양 결절을 제거하고 무게를 측정하고, 그룹들 간의 종양 중량의 차이를 비교하여 종양 억제율 IRTW를 추가로 계산했다. 60% 초과의 IRTW를 유효성 참조 지표로 사용했다. 계산은 다음 공식에 따라 수행되었다:
IRTW (%) = (W대조 그룹-W투여 그룹) /W대조 그룹×100 %
3. 실험 결과:
실험 전반에 걸쳐 그룹 2의 동물 1마리가 D19에 사망했고; 그룹 3의 동물 2마리가 각각 D15 및 D25에 사망했는데, 이중 한 마리는 해부 후 방광에 흰색 모래와 같은 입자가 채워져 있는 것이 관찰되었으며, 사망 원인은 에스트로겐 정제의 접종과 관련이 있는 것으로 여겨졌고; 다른 두 마리의 사망 원인은 대조군의 독성과 관련이 있는 것으로 추정되었다. 그룹 1-6의 동물들의 체중은 모두 점차 증가했으며, 그룹들 간에 유의한 차이(P >0.05)가 관찰되지 않았다.
음성 대조 그룹(그룹 1)에서는 실험 내내 종양이 점차적으로 증가하였고, 실험 종료(D29)까지, 그룹 1의 평균 종양 부피는 1938.55±511.20mm3였고, 평균 RTV는 14.98±8.63이었으며; 그룹 2-6의 평균 종양 부피는 각각 313.80±241.46mm3, 1463.75±1088.95mm3, 1232.77±652.36mm3, 1616.52±985.05mm3, 346.96±203.35mm3였고, 이들의 평균 RTV는 각각 8.13±2.92, 8.80±3.57, 8.27±3.92, 11.61±8.28, 2.26±1.32였으며, D15-D29 동안 그룹 6의 종양 부피는 그룹 1보다 유의하게 낮았고(P≤0.05); D12에 그룹 6의 RTV는 그룹 1보다 유의하게 낮았고(P ≤ 0.05), 종양 부피와 RTV는 다른 그룹들 간에 유의한 차이가 관찰되지 않았다(P >0.05).
각 그룹의 종양 성장 경향을 도 6, 도 7 및 도 8에 나타내었다.
실험 종료(D29)까지, 그룹 2-6의 T/C% 값은 각각 54.27%, 58.74%, 55.21%, 77.54% 및 15.07%였고, 이들의 IRTW% 값은 각각 45.73%, 41.26%, 44.79%, 22.46% 및 84.93%였고, 그룹 6의 T/C%는 D12-D29 동안 40% 미만으로 감소했다.
실험이 끝나면, 안락사 후 동물의 종양 중량을 측정했다. 그룹 1-6의 평균 종양 중량은 각각 1.807±0.350 g, 1.226±0.370 g, 1.185±0.934 g, 0.899±0.428 g, 1.287±0.746 g, 0.266±0.167 g이었고, 그룹 6의 종양 중량은 그룹 1의 종양 중량보다 현저히 낮았다(P ≤ 0.05). 그룹 2-6의 IRTW%는 각각 32.15%, 34.42%, 50.25%, 28.78%, 85.28%였다.
각 그룹의 종양 중량 억제율의 개략도는 도 9, 도 10, 및 도 11에 나타내었다. 도 12는 각 그룹의 안락사된 동물 사진을 보여준다. 도 13은 각 그룹의 종양 사진을 보여준다.
결론: 실험 조건 하에서, 투여 그룹은 모두 인간 유방암 BT474 세포의 NPG 마우스 피하 이식 종양 모델에서 상이한 정도의 종양 성장 억제 효과를 나타냈다. 꼬리 정맥 주사에 의해 55 mg/kg의 용량으로 투여된 시험 샘플 39-55는 인간 유방암 BT474 세포의 NPG 마우스 피하 이식 종양 모델의 종양 성장에 대해 명백한 억제 효과를 나타냈고, 이 효과는 꼬리 정맥 주사에 의해 5 mg/kg의 용량으로 투여된 SB7과 5.6 mg/kg의 용량으로 위내 투여된 LPT의 조합의 효과에 비해 우수했다. 20 mg/kg의 용량으로 위내 투여된 LPT, 83 mg/kg의 용량으로 정맥내 주사로 투여된 41-32, 및 46 mg/kg의 용량으로 정맥내 주사로 투여된 41-40은 인간 유방암 BT474 세포의 NPG 마우스 피하 이식 종양 모델에 대해 특정 억제 효과를 나타냈다.
실시예 4 인간 결장암 COLO-205 세포의 BALB/c 누드 마우스 피하 이식 종양 모델에 대한 시험 샘플의 생체 내 항종양 효능 사전 테스트
1. 실험 재료
시험 샘플
명칭: 39-17(즉, 화합물 번호 14); 농도: 10 mg/mL.
비히클/음성 대조군
명칭: 염화나트륨 주사액; 로트 번호: 4B19091206; 규격: 100 mL: 0.9 g; 특성: 무색 투명한 액체; 보존 조건: 밀폐 용기에 보존; 제조사: Shandong Qidu Pharmaceutical Co., Ltd.
시험 샘플 및 대조군의 제조:
제조 방법:
시험 샘플: 희석하지 않고 그대로 사용됨.
SB7.HCL: 적당량의 SB7.HCL(전환 계수: 93.4%)을 취하고, 소정량의 에탄올(5%, V/V)을 첨가하여 용해시키고, 완전히 용해시킨 후, 적당량의 염화나트륨 주사액을 가하여 0.3 mg/mL 농도의 용액을 제조하였다.
PCB: 적당량의 PCB를 취하고, 소정량의 0.5% CMC-Na 용액을 첨가한 후 자석 교반기로 균일하게 교반하여 1.04 mg/mL 농도의 용액을 제조하였다.
음성 대조군: 염화나트륨 주사액을 그대로 사용했다.
제조된 용액의 보존 및 처리: 제조된 시험 샘플 및 대조 샘플은 투여 전 2 내지 8℃에서 또는 아이스박스에 보관하였고, 투여 후 남은 시험 샘플 및 대조 샘플은 의료 폐기물로 처리하였다.
인간 결장암 COLO-205 세포: RPMI1640 + 10% FBS, 37℃, 5% CO2 조건 하에 배양된 중국 의학 아카데미 기초 의학 연구소의 세포 자원 센터(Cell Resource Center of Institute of Basic Medicine of Chinese Academy of Medical Sciences)에서 입수되었다.
동물 종 및 계통: BALB/c 누드 마우스
동물 등급: SPF 등급
동물 출처: Beijing Charles River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.
종양 접종 시 동물 연령: 약 4-5주.
종양 접종 시 동물 체중: 약 15-18g. 동성 동물의 체중은 평균 체중의 80-120% 사이였다.
동물의 성별 및 수: 수컷, 25마리의 마우스, 18마리의 모델링 동물이 최종 실험을 위해 선별되었으며, 나머지 동물은 더 사육되거나 안락사되었다.
동물은 독립 환기 시스템(IVC)에서 사육되었고, 각 케이지에 최대 6마리의 같은 그룹의 동물을 사육했으며, SPF 등급의 축사를 제공했으며, 환경 조건은 다음과 같이 제어되었다: 실온 20-26℃, 40-70%의 상대 습도 및 12시간 명암 교대 조명.
사료: 검증된 마우스 사료(제조업체: Beijing Keao Xieli Feed Co., Ltd.)를 매일 제공했다. 동물들은 자유롭게 먹고 물을 마셨다.
2. 실험 방법:
COLO-205 세포를 부활시켜 세포 계대 증폭을 진행하였다. 충분한 수로 증폭되면, 대수 성장기의 세포를 세포 접종을 위해 수집하였다. 실제 세포수에 따라, 세포의 농도를 5×107/mL로 조정하고, 마우스 1마리당 0.2 mL씩 25마리 마우스의 오른쪽 겨드랑이에 피하 접종하였다. 접종 후 종양 성장이 관찰되었다. 종양 부피가 약 100-300 mm3일 때, 종양 부피가 너무 큰 동물과 종양이 발생하지 않은 동물을 제외하고 종양 부피의 크기에 따라 동물들을 스크리닝하고, 최종적으로 18마리의 종양 발생 동물을 시험용으로 스크리닝하였다.
18마리의 종양 발생 동물을 다음을 포함하는 3개의 그룹으로 무작위로 나누었다: 그룹 1(음성 대조군 그룹, 염화나트륨 주사액), 그룹 2(SB7+ PCB, 3+10.4 mg/kg), 및 그룹 3(39-17, 153 mg/kg), 각 그룹에 6마리의 동물, 음성 대조군인 SB7, PCB에 대해 10 mL/kg의 투여 부피, 39-17에 대해 15.3 mL/kg의 투여 부피. 음성 대조군인 SB7 및 39-17은 정맥내 주사되었고, PCB는 3주의 기간 동안 주당 1회 위내 투여되었고, D22에 동물을 안락사시켰다. 실험 기간 동안, 동물의 일반적인 임상 증상을 매일 2회 관찰하였고, 체중과 종양 직경을 매주 2회 측정하였다. 안락사 후 종양을 제거하고 종양 중량를 측정했다. 종양 부피, 상대 종양 부피 RTV, 상대 종양 증식율 T/C% 및 종양 중량 억제율 IRTW%를 계산했다. 투여 그룹의 상대 종양 증식율 T/C%는 40% 이하였으며, 상기 투여 그룹의 RTV는 음성 대조 그룹의 RTV와 비교하여 유의하게 상이하여(P ≤ 0.05) 효과적인 것으로 간주되었고, 60% 이상의 IRTW를 유효성 참조 지표로 사용했다.
A. 종양 직경 측정:
시험 동물: 모든 동물
시험 시간: 그룹화 날(즉, D1, 최초 투여일), 최초 투여 후 주 2회, 안락사 전, 슬라이드 캘리퍼를 사용하여 종양의 장경 및 단경을 측정하여 기록하고, 종양 부피를 계산하였다.
종양 부피는 다음 공식에 따라 계산되었다:
V=1/2×장경×단경2
B. 종양 부피에 따른 치료 효능 평가
상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식율 T/C%는 다음 공식에 따라 계산되었다:
RTV=Vt/V0
Vt: 매일 종양을 측정하여 얻은 종양 부피
V0: 초기 종양 부피(투여 전)
T/C%= 투여 그룹의 평균 RTV/대조 그룹의 평균 RTV × 100%
T/C%가 40% 이하이고, 투여 그룹의 RTV가 대조 그룹의 RTV와 비교하여 통계적으로 다른 경우(P < 0.05), 종양 성장 억제 효과가 달성되었고; 반면에 T/C%가 40%를 초과하면, 종양 성장이 억제되지 않았다.
C. 종양 중량에 따른 치료 효능 평가
실험 후, 종양 결절을 제거하고 무게를 측정하고, 그룹들 간의 종양 중량의 차이를 비교하여 종양 억제율 IRTW를 추가로 계산했다. 60% 초과의 IRTW를 유효성 참조 지표로 사용했다. 계산은 다음 공식에 따라 수행되었다:
IRTW (%) = (W대조 그룹-W투여 그룹) /W대조 그룹×100 %
3. 실험 결과:
실험 전반에 걸쳐 그룹 3의 동물 1마리가 D8에 사망했고, 사후 체중은 14.5 g으로, 사망 전 체중이 더 크게 감소하여 39-17의 독성과 관련이 있는 것으로 추정되었으며; 그룹 1의 2마리의 동물은 각각 D19 및 D20에 사망했으며, 이때 사망 전 1마리의 동물에서 종양 궤양이 관찰되었으며, 이는 더 큰 종양 부하와 관련이 있는 것으로 추정되었다. 그룹 1에 속한 동물의 체중은 점차 감소하였고, 그룹 2에 속한 동물의 체중은 약간 증가하였다가 감소하였으며, 그룹 3에 속한 동물의 체중은 점차 증가하였다. 그룹 3에 속한 동물의 체중은 D8-D22 동안 그룹 1의 체중보다 명백히 더 높았고(P ≤ 0.05), D12-D22 동안 그룹 2의 체중보다 유의하게 더 높았다(P ≤ 0.05).
음성 대조 그룹(그룹 1)에서는 실험 내내 종양이 점차적으로 증가하였고, 실험 종료(D22)까지, 그룹 1의 평균 종양 부피는 1900.58±489.19mm3였고, 평균 RTV는 16.03±6.43이었으며; 그룹 2-3의 평균 종양 부피는 각각 774.06±228.43mm3, 33.83±37.01mm3였고, 이들의 평균 RTV는 각각 6.38±1.81, 0.24±0.21이었고, D5-D22 동안 그룹 2의 종양 부피는 그룹 1의 종양 부피보다 현저히 낮았고(P ≤ 0.05), D5-D22 동안 그룹 3의 종양 부피는 그룹 1 및 2의 종양 부피보다 현저히 낮았고(P ≤ 0.05); D5-D19 동안 그룹 2의 RTV는 그룹 1의 RTV보다 현저히 낮았고(P ≤ 0.05), D5-D22 동안 그룹 3의 종양 부피는 그룹 1 및 2의 종양 부피보다 현저히 낮았다(P ≤ 0.05).
각 그룹의 종양 성장 경향을 도 14에 나타내었다.
실험 종료(D22)까지, 그룹 2-3의 T/C% 값은 각각 59.68%, 1.88%였고, 이들의 IRTW% 값은 각각 40.32%, 98.12%였다. 그룹 3의 T/C%는 D5-D22 동안 40% 미만으로 감소했고, 그룹 1의 T/C%보다 현저히 낮았다(P ≤ 0.05).
실험이 끝나면, 안락사 후 동물의 종양 중량을 측정했다. 그룹 1-3의 평균 종양 중량은 각각 1.551±0.290 g, 0.607±0.173 g, 0.036±0.036 g이었고, 그룹 2-3의 종양 중량은 그룹 1의 종양 중량보다 현저히 낮았다(P ≤ 0.05). 그룹 2-3의 IRTW%는 각각 60.86%, 97.68%였다.
각 그룹의 종양 중량 억제율의 개략도는 도 15에 나타내었다.
결론: 실험 조건 하에서, 꼬리 정맥 주사에 의해 153 mg/kg의 용량으로 투여된 시험 샘플 39-17은 인간 결장암 COLO-205 세포의 피하 이식 종양 모델의 종양 성장에 명백한 억제 효과가 있었고, 꼬리 정맥 주사에 의해 3 mg/kg의 용량으로 투여된 SB7과 10.4 mg/kg의 용량으로 위내 투여된 PCB의 조합도 종양 모델의 종양 성장에 명백한 억제 효과가 있었다. 39-17의 효과는 PCB와 SB7의 조합보다 명백히 우수했다.
본 발명의 특정 실시예가 상세하게 설명되었지만, 당업자는 개시된 모든 교시에 따라 세부사항에 대해 다양한 수정 및 변경이 이루어질 수 있고, 이러한 변경은 본 발명의 보호 범위 내에 있음을 이해할 것이다. 본 발명의 전체 범위는 첨부된 청구범위 및 이의 임의의 등가물에 의해 제공된다.

Claims (23)

  1. 하기 화학식(I)의 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 I]
    Figure 112022113326925-pct01673

    상기 화학식(I)에서,
    M은 -C(=O)-C1-6 알킬렌-C(=O)-, -C(=O)-, -NH-C1-6 알킬렌-NH-, -C(=O)-C1-6 알킬렌-NH-,
    Figure 112022113326925-pct01674
    ,
    Figure 112022113326925-pct01675
    또는 PEGm이고; 여기서, PEGm은 단일-팔(arm) 또는 다중-팔 폴리에틸렌글리콜 세그먼트이고, 이의 수 평균 분자량은 5k-40k, 또는 5k-10k, 또는 10k-40k이고;
    A1, A1'은 각각 독립적으로
    Figure 112022113326925-pct01676

    Figure 112022113326925-pct01677
    또는
    Figure 112022113326925-pct01678
    이고;
    A2는 독립적으로 직접 결합이거나
    Figure 112022113326925-pct01679
    이고;
    L1은 독립적으로 직접 결합 또는 -C(=O)-C1-6알킬렌-C(=O)-이고;
    W1, W1', W2는 각각 독립적으로 Q1,
    Figure 112022113326925-pct01680
    ,
    Figure 112022113326925-pct01681

    Figure 112022113326925-pct01682
    또는
    Figure 112022113326925-pct01683
    이고;
    Z4, Z3, Z2, Z1, Z0은 각각 독립적으로
    Figure 112022113326925-pct01684

    Figure 112022113326925-pct01685

    Figure 112022113326925-pct01686
    또는
    Figure 112022113326925-pct01687
    이고;
    Q는 -N-AC이고;
    Q1은 -N1-AC1이고;
    Q2는 -N2-AC2이고;
    N, N1, N2는 각각 독립적으로 GFLG, G,
    Figure 112022113326925-pct01688
    또는
    Figure 112022113326925-pct01689
    이고;
    AC, AC1, AC2는 각각 독립적으로 PCB, DOX, LPT, SB7, PKA, SN38, PTX 또는 NPB이고;
    n1, n2는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
    Y, Y'는 각각 독립적으로 직접 결합, GLFG, -C(=O)-C1-6알킬렌-C(=O)-,
    Figure 112022113326925-pct01690
    또는
    Figure 112022113326925-pct01691
    이고;
    X, X'는 각각 독립적으로
    Figure 112022113326925-pct01692
    , 또는
    Figure 112022113326925-pct01693
    이고;
    PEG는 단일-팔 폴리에틸렌글리콜 세그먼트이며, 이의 수 평균 분자량은 독립적으로 5k-40k이고;
    j1은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
    j2, j3은 각각 독립적으로 0 또는 1이고
    상기 약어 "PCB"는 팔보시클립을 나타내고, 약어 "DOX"는 아드리아마이신 (adriamycin)을 나타내고, 약어 "LPT"는 라파티닙을 나타내고, 약어 "SB7"은 SB-743921을 나타내고, 약어 "PKA"는
    Figure 112022113326925-pct02108
    을 나타내고, 약어 "SN38"은 7-에틸-10-하이드록시캄프토테신을 나타내고, 약어 "PTX"는 파클리탁셀을 나타내고, 약어 "NPB"는 니라파립을 나타내고, 약어 "G"는 글리신 잔기를 나타내고, 약어 "L"은 류신 잔기를 나타내고, 약어 "F"은 페닐알라닌 잔기를 나타내고, 약어 "GFLG"은 글리신-페닐알라닌-류신-글리신 잔기를 나타내고, 약어 "GLFG"는 글리신-류신-페닐알라닌-글리신 잔기를 나타낸다.
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  11. 제1항에 있어서, 상기 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 화합물은 하기 화학식의 화합물들로부터 선택되는 것인, 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염:
    Figure 112022113326925-pct01597

    Figure 112022113326925-pct01598

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  16. 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 약제학적 조성물로서,
    상기 조성물은 치료적 및/또는 예방적 유효량의 제1항 또는 제11항에 기재된 폴리에틸렌글리콜 컨쥬게이트된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하고,
    상기 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 암은 결장암, 백혈병, 림프종, 방광암, 골암, 뇌종양, 수모세포종(medulloblastoma), 신경교종, 유방암, 선종/유암종, 부신 피질암, 췌장 섬 세포암, 자궁경부암, 자궁내막암, 난소암, 대장암, 피부암, 식도암, 눈암, 담낭암, 위암, 두경부암, 간암, 흑색종, 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 신장암, 구강암, 폐암, 비인두암 암, 신경모세포종, 췌장암, 갑상선암, 부갑상선 음경암, 전립선암, 요도암, 질암, 외음부암, 항문암, 육종 및 이들 암의 전이로부터 선택되는 것인, 약제학적 조성물.
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