KR102089836B1

KR102089836B1 - 트립토판분해효소 음성균과 인터페론 감마 형성을 유도하는 균주를 이용한 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 또는 이를 이용한 치료방법

Info

Publication number: KR102089836B1
Application number: KR1020170032383A
Authority: KR
Inventors: 김석진
Original assignee: (주)바이오일레븐
Priority date: 2017-03-15
Filing date: 2017-03-15
Publication date: 2020-03-16
Anticipated expiration: 2037-03-15
Also published as: KR20180105381A; CN110446497A; WO2018169297A1; JP2020512014A

Abstract

본 발명은 유산균, 비피도박테리아, 스트렙토코커스 및 이의 혼합물에서 선택된 IFN 감마를 유도하는 미생물과 조합하여, 유산균, 비피도박테리아, 스트렙토코커스 및 이의 혼합물에서 선택된 트립토판 분해 효소-음성 미생물을 포함하는 식품, 기능성 식품, 약학 및 식품 보조 조성물에 관한 것이다.

Description

트립토판분해효소 음성균과 인터페론 감마 형성을 유도하는 균주를 이용한 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 또는 이를 이용한 치료방법{The pharmaceutical composition for treating or preventing for inflammation disease using Tryptophanase-negative bacteria and bacteria inducing Interferon gamma and method using thereof}

본 발명은 인터페론 감마(IFN 감마)를 유도하는 유산균과 함께, 트립토판을 대사할 수 없는 유산균(lactic bacteria)(트립토판분해효소-음성 박테리아)을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 관한 조성물은 키뉴레닌 대사 경로의 활성화에 의해 이익을 얻는 모든 질환들에서, 예컨대 예를 들어 임신중 내성, 만성 염증의 제어, 자가 면역의 보호, 자가면역 질환 증상의 경감을 위한 예방 및 치료, 장기 거부 예방의 보조, 및 에너지(아데노신 트리포스페이트, ATP), 니코틴아미드 및 관련 화합물(니코틴아미드 아데닌 뉴클레오타이드 및 니코틴아미드 아데닌 뉴클레오타이드 포스페이트; NAD 및 NADP)의 생성에서, 식이, 건강기능성 식품 및 약학 분야에서 그리고 식품첨가제로서, 사용될 수 있다.

트립토판은 필수 아미노산이고, 따라서 척추동물 유기체가 생산할 수 없는 아미노산군의 하나이므로 음식을 통해 섭취해야 한다. 단백질 생산을 위해 신체가 사용하는 것이외에도, 트립토판은 포유동물의 생리적 기능에 필수적이고, 상이한 대사 경로를 통해 처리되어 생물기원 아민 예컨대 세로토닌, 멜라토닌, 트립타민 등, 집합적으로 키뉴레닌으로 알려진 수많은 분해 생성물의 생성을 초래하며, 최종적으로 에너지 대사에 중요한 보효소인, 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD+)의 합성에 기여한다. 따라서, 전신 및 세포 트립토판 수준은 음식 섭취에 의해서 뿐만 아니라, 무엇보다도 그를 전환시키거나 또는 분해시키는 대사 경로의 활성에 의해 결정된다.

체내에서, 트립토판은 인돌 고리를 개방시켜 대사되어 포밀키뉴레닌 및 키뉴레닌이 형성된다. 이 과정은 니코틴산 및 니코틴아미드, 비타민 B 복합체의 생합성, 및 ATP 생성의 초기 단계를 나타낸다(도 1).

트립토판의 키뉴레닌 화합물, 또는 키뉴레닌으로의 전환을 촉매하는 것을 담당하는 효소는 인돌아민 2,3-디옥시게나제(이하 본원에서 IDO라고 함)이다. 이 특성은 IDO에 면역 반응을 억제하는 능력을 제공하는데, 트립토판 프로세싱이 T 림프구의 성장 및 증식에 필수적인, 이 아미노산을 미세환경에서 고갈되게 야기하고, 또한 T 림프구의 아폽토시스를 야기할 수 있는 대사산물을 생성시킬 수 있기 때문이다. IDO의 면역조절 효과를 설명하는데 가장 인정받는 가설 중 하나는 단백질 발현 시 결과에 따른 트립토판 고갈이 T 세포를 세포 주기의 G1기에 억류시켜, 그들 클로날 확장을 방해하고 그들을 프로아폽토시스 신호에 더 감응성이게 만든다는 것이다(Munn et al., 1999). 대안적인 가설은 IDO가 항원-제시 세포(APC)의 생물학적 특성에 부정적인 영향을 미쳐서, 항원을 제시하는 그 능력을 감소시키거나 또는 억제성 리간드(예를 들어, CD95 리간드)의 발현을 증가시키거나 또는 면역조절성 사이토카인 예컨대 IL-10 또는 TGF-β의 방출을 촉진시킬 수 있다는 것이다(Mellor and Munn, 2004).

사실 IDO는 숙주 자신에 손상을 줄 수 있는 과도한 면역 활성화를 제한하도록 염증성 상태에 대응하는 역조절 기전으로서 중요한 역할을 한다. 체내 IDO는 면역성 및 내성의 효과를 균형잡아, 수지상 세포를 통한 T 세포의 반응을 제어한다. 강력한 보조제로서 알려진, 탈메틸화된 CpG 서열을 함유하는 올리고데옥시뉴클레오타이드(CpG ODN)가 인터페론-감마(IFN-γ), 인터페론-알파(IFN-α) 및 다른 프로염증성 사이토카인의 유도를 통해 매우 다양한 조직에서 IDO의 작용인자로서 작용한다는 것이 또한 밝혀졌다(Mellor et al., 2005). 이러한 증거는 CpG ODN이 특히 강력한 면역자극제라는 사실에도 불구하고, 일부 조건에서, IDO에 의해 매개되는 역조절 효과를 유도할 수 있다는 실질적인 관점에서 중요할 수 있다.

본 발명은 유산균(lactic bacteria), 비피도박테리아(bifidobacteria), 스트렙토코커스(streptococci) 및 이의 혼합물에서 선택된 IFN 감마를 유도하는 미생물과 조합하여, 유산균, 비피도박테리아, 스트렙토코커스 및 이의 혼합에서 선택된 트립토판분해효소-음성 미생물을 포함하는, 식이, 건강기능성 식품, 약학 및 식품 첨가제 조성물에 관한 것이다.

조성물에서 함께 작용하는 IFN 감마를 유도시키는 그들 능력에 대해 선택되는 유산균, 비피도박테리아, 스트렙토코커스 및 이의 혼합물에서 선택된 미생물과 조합한, 트립토판 분해효소 활성이 없어 선택되는 유산균, 비피도박테리아, 스트렙토코커스 및 이의 혼합물에서 선택된 미생물은, 예를 들어, 경구, 장 또는 직장으로 투여시, 장내 균총을 변경시켜, 트립토판 분해효소-음성 박테리아의 비율을 증가시켜 결과적으로 숙주 세포에 대한 트립토판의 이용률이 더 커지고, 도 2에 예시한 바와 같이, 본 발명과 관련된 조합으로 투여된 IFN 감마 유도 박테리아에 의해서 그 생산이 유도된, IFN 감마에 의해 IDO의 활성화가 더욱 자극된다는 것을 이제 발견하였다.

키뉴레닌 경로는 염증의 제어 및 에너지(ATP,NAD, NADH, 니코틴아미드)의 생성에 필수적이다. 따라서, 본 발명의 조성물은 특히 국소, 전신 및 뇌 수준에서의 만성 염증의 예방 및 치료, 예를 들어 장의 염증성 질환, 만성 간 질환(지방 간염, 만성 간염), 항바이러스 치료, 중추 및 말초 신경계의 만성 염증성 질환, 자가면역 질환, 대변 이식, 이식 후 항거부 치료, 임신 중 태아의 내성 증가, 트립토판 대사 안정화 및 조절 및 초기 유아기의 미세아교세포의 염증, 예를 들어 자폐증, 트립토판 이상대사 상황의 다양한 이유로 발생되는, 노년층의 편도체, 해마 및/또는 전두엽의 변화, 심혈관 질환 및 당뇨병에서 효과적이다. 본 발명이 관련된 조성물은 또한 에너지가 부족한 개체에서 또는 신체에 보다 높은 에너지 생산이 요구되는 경우 에너지(아데노신 트리포스페이트, ATP), 니코틴아미드 및 관련 화합물(니코틴아미드 아데닌 뉴클레오타이드 및 니코틴아미드 아데닌 뉴클레오타이드 포스페이트; NAD 및 NADP)를 생산하는데도 효과적이다.

본 발명에 따른 바람직한 미생물은 트립토판 분해효소가 부재하고 IFN-γ의 생성을 유도하는 능력에 대해 선택된, 유산균, 비피도박테리아 및 스트렙토코커스, 및 이의 혼합물에서 선택된다. 이들은 실활 박테리아 형태, 예를 들어 열, 방사선 또는 이 목적에 유용한 임의의 다른 방법에 의해 사멸된 박테리아, 또는 생활 박테리아로서, 또는 동시에 두 형태로서 사용될 수 있다.

본 발명의 다른 목적은 식품, 상기 박테리아 균주를 함유하는 식품, 식이, 약학, 및 기능성 식품 용도 및 식품 보충제로서의 조성물이다. 언급된 모든 박테리아 균주는 상업적으로 입수할 수 있다.

다른 목적은 본 발명의 하기 구체적인 설명을 통해 분명해 진다.

본 발명자들은 만성 염증성 병태를 예방, 치료 및 완화시키고 이를 필요로 하는 모든 경우에서 신체 에너지 생성을 향상시키도록, 투여된 포유동물, 인간 또는 동물에서 IDO 효소와 그에 따라 키뉴레닌 대사 경로를 활성화시키고 상승시키기 위해, IFN 감마를 유도시키는 능력에 대해 선택된 유산균과 함께 트랍토판 분해 효소가 없는 균주를 선택함으로써, 상승적 방식으로, 식품 산업에서 사용되고 이미 알려져 있는 유산균, 비피도박테리아 및 스트렙토코커스를 사용하는 것이 가능함을 발견하였다.

도 1: TOx 경로. 간외부 인간 TOx 경로를 IDO 억제인자 및 유도인자와 함께 도시하였다. IDO1, 인돌아민 2,3-디옥시게나제 1; IDO2, 인돌아민 2,3-디옥시게나제 2; AFMID, 아릴포름아미다제; KMO, 키뉴레닌 3-모노옥시게나제; KAT, 키뉴레닌 아미노트랜스퍼라제; KYNU, 키뉴레니나제; HAAO, 3-하이드록시안트라닐레이트 3,4-디옥시게나제; ACMSD, 아미노카르복시뮤코네이트 세미알데하이드 디카르복실라제; QPRT, 퀴놀레이트 포스포리보실트랜스퍼라제(문헌 [F. Murray. Science Translational Medicine vol 2, issue 32, 19 May 2010] 참조)
도 2: IFN 감마를 유도하는 그들 능력에 대해 선택된 유산균 프로바이오틱스와 조합한, 트립토판 분해효소 활성이 없어 선택된 유산균, 비피도박테리아 및 스트렙토코커스는 함께 협동적으로 작용함으로써, 숙주 세포에 대해 트립토판 이용률이 더욱 높아지고 여기서 본 발명과 관련된 조합으로 투여된 IFN 감마-유도 박테리아에 의해 그 생성이 유도된, IFN 감마에 의해 IDO 활성이 더욱 자극된다.
도 3: 엘. 파라카세이(L. paracasei)를 사용한 인돌 검사의 결과.

본 발명의 목적을 위해서, "식품 조성물"은 본 발명에 따른 박테리아가 부가되거나 또는 본 발명에 따른 박테리아로 제제화되는 적어도 하나의 식품을 포함하는 조성물을 의미한다.

본 발명자는 만성 염증성 병태를 예방, 치료 및 완화시키고 필요한 모든 경우에서 신체의 에너지 생성을 향상시키도록, 투여되는 포유동물, 인간 또는 동물에서 IDO 효소와 그에 따라 키뉴레닌 대사 경로를 활성화 및 상승시키기 위해, IFN 감마를 유도하는 능력에 대해 선택된 유산균과 함께, 트립토판 분해효소가 없는 균주를 선택함으로써, 상승적 방식으로, 식품 산업에서 사용되고 이미 알려져 있는 유산균, 비피토박테리아 및 스트렙토코커스를 사용하는 것이 가능하다는 것을 발견하였다.

본 발명에 따른 조성물은 사실 장내 미생물균총을 변화시켜 트립토판 대사에 영향을 미칠 수 있어서, 골수 이식 및 대변 이식을 포함한, 장기 거부의 예방, 임신 중 태아의 내성, 국소, 전신 및 뇌 염증의 예방 및 치료, 및 바이러스 질환을 포함한 자가면역 질환의 예방 및 치료를 보조하여, 염증성 병태에 긍정적인 영향을 준다.

본 발명에 따른 조성물은 초기 유아기에 트립토판 대사의 안정화 및 조절 및 예를 들어 자폐증의 미세아교세포의 염증에 특히 유리하다. 다른 바람직한 응용 분야는 트립토판 이상대사 상황에서의 다양한 이유(병원 또는 호스피스에 체류, 항생제 치료 또는 장내 균총을 변화시키는 약물, 예컨대 항바이러스 및 항종양 약물에 의한 치료)로 발생하는, 노년층에서의 편도체, 해마 및/또는 전두엽 변화의 치료를 위한 용도이다.

본 발명에 따른 조성물의 다른 중요한 효과는 에너지 부족 상태에서 그리고 스포츠 수행능을 향상시키기 위해, 포유동물, 인간, 및 동물에서 ATP, NAD 및 NADP의 생성의 상승이다.

본 발명에 따른 조성물은 만성 염증 및 다른 상기 표시한 병적 상태를 특징으로 하는 질환의 예방 및 치료에서 사용하기 위해 인간 또는 동물에 투여될 수 있다. 상기 조성물은 증상을 보이거나(예를 들어, 염증성 장질환을 앓는 환자), 또는 증상은 없지만 염증의 검출 가능한 위험성(반복적인 자연 유산 경험이 있는 임신 개체)이 있는 개체, 인간 또는 동물을 비롯하여, 무증상 개체에게, 예방 목적(예를 들어, 아테롬성 동맥경화증 및 노인성 치매의 예방)으로, 또는 단지 신체 기능 향상을 위해 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 섭취는 숙주의 장내에서 트립토판을 이용할 수 없는 박테리아인, 트립토판 분해효소-음성 박테리아의 수를 증가시키게 된다. 이는 IDO 효소(인돌아민 2-3 디옥시게나제)가 이용할 수 있는 트립토판의 비율을 증가시키며, 그 다음으로 IDO는 IFN-γ 활성을 상승시키는데, IFN-γ은 IFN-γ의 생성을 유도하는 박테리아에 의해, 본 발명과 관련된 조성물의 제2 성분에 의한 자극 후에 숙주의 면역적격 세포에 의해 상당한 양으로 생산된다. 따라서, 상기 조성물은 기질(트립토판)을 더욱 이용할 수 있게 하며 또한 IFN-γ의 생산을 강력화시켜서 IDO를 상승시킨다. 그러므로, 키뉴레닌 경로는 치료되는 개체에서 상승된다. 키뉴레닌 경로는 염증의 제어 및 에너지(ATP,NAD, NADH, 니코틴아미드)의 생성에 핵심적이다.

본 발명자들은 먼저 트립토판 분해효소 활성이 없는 유산균, 비피도박테리아 및 스트렙토코커스를 선택하였다. 박테리아의 트립토판 분해효소 활성 부재는 인돌에 대해 코백스(Kovacs) 시약(산성 용액 중 p-디메틸-아미노-벤즈알데하이드)을 사용해 검정하였다. 인돌은 트립토판의 대사 분해 부산물 중 하나이다. 트립토판 분해효소를 함유하는 박테리아는 트립토판을 가수분해하고 탈아민화할 수 있어, 인돌, 피루브산 및 암모니아가 생성된다. 이들 검정을 위해, 박테리아 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli)가 트립토판 분해효소 활성 존재에 대한 양성 표준으로 사용되었다. 이 시험예는 실시예에 예시한다.

인돌 시험을 사용하여 검정시, 하기의 박테리아들이 트립토판 분해효소 활성이 없는 것으로 확인되었고, 구체적으로 에스. 써모필러스(S. Thermophilus), 엘. 플란타럼(L. plantarum), 엘. 파라플란타럼(L. paraplantarum), 엘. 액시도필러스(L. acidophilus), 엘. 카세이(L. casei), 엘. 파라카세이(L. paracasei), 엘. 헬베티커스(L. helveticus), 비. 락티스(B. lactis), 비. 브레베(B. breve), 비. 인판티스(B. infantis), 비. 롱검(B. longum), 엘. 락티스(L. lactis), 엘. 브레비스(L. brevis), 피. 플로이덴레이치(P. Freudenreichii)이다.

다음으로, 발명자들은 IFN-γ의 생성을 유도시키는 그들 능력에 대해 유산균을 선택하였다. IFN-γ 생성은 건강한 개체의 림프구를 1:1 비율로 배양 중에 시험 하에 박테리아로 자극시킨 후 IFN-γ를 측정하는 ELISA 키트를 사용해 측정하였다. 시험예는 실시예에 예시하였다.

본 발명의 목적을 위해서, 0.2 ng/mL 이상으로 IFN-γ 생성을 유도할 수 있는 균주만을 선택 가치가 있다고 간주하였다: IFN-γ의 생성을 유도하는 최고의 3가지 균주는 에스. 써모필러스(S. Thermophilus)(1.8 ng/mL), 엘. 액시도필러스(L. acidophilus)(1.5 ng/mL), 비. 락티스(B. lactis)(1.3 ng/mL), 비. 비피덤(B. bifidum)(1.3 ng/mL) 및 엘. 헬베티커스(L. helveticus)(1.2 ng/mL)인 것으로 입증되었다.

따라서, 본 발명의 목적을 위해서, 에스. 써모필러스, 엘. 플란타럼, 엘. 파라플란타럼, 엘. 액시도필러스, 엘. 카세이, 엘. 파라카세이, 엘. 헬베티커스, 비. 락티스, 비. 브레베, 비. 인판티스, 비. 롱검, 엘. 락티스, 엘. 브레비스, 및 피. 플로이덴레이치에서 선택된, 트립토판 분해효소 활성이 없는 박테리아의 적어도 하나의 균주, 및 바람직하게 에스. 써모필러스, 엘. 액시도필러스, 엘. 헬베티커스, 비. 락티스 및 비. 비피덤에서 선택된, IFN-γ의 생성을 유도하는 박테리아의 적어도 하나의 균주를 포함하는 조성물이 개발되었다.

단독으로 또는 혼합물로 사용되는 특히 바람직한 균주를 하기 표 1에 열거하였다.

트립토판 분해효소 음성 균주	IFN-γ 생성 균주
엘. 헬베티커스 라프티 L10	엘. 헬베티커스 R0052 엘. 헬베티커스 HA-128
비. 비피덤 BB01 비. 비피덤 MB109	비. 비피덤 R0071
비. 롱검 HA-135	비. 롱검 로셀-175 비. 롱검 ATCC SD5588
비. 인판티스 R0033	비. 인판티스 HA-116 비. 인판티스 BI02
비. 브레베 로셀-70	비. 브레베 HA-129 비. 브레베 ATCC SD5206
엘. 액시도필러스 HA-122 엘. 액시도필러스 ATCC SD5212	엘. 액시도필러스 R0052 엘. 액시도필러스 로셀-418 엘. 액시도필러스 LBA091
엘. 카세이 ATCC SD5213	엘. 카세이 로셀-215 엘. 카세이 HA-108
엘. 파라카세이 HA-196 엘. 파라카세이 ATCC SD5275	엘. 파라카세이 라프티 L26 ND 엘. 파라카세이 LP01
엘. 플란타럼 P83 엘. 플란타럼 P94 엘. 플란타럼 D747	엘. 플란타럼 로셀-1012 엘. 플란타럼 HA-119 엘. 플란타럼 ATCC SD5209
엘. 브레비스 HA-112	엘. 브레비스 LBR01 엘. 브레비스 ATCC SD5214
엘. 살리바리우스 HA-11 엘. 살리바리우스 LS01
락토바실러스 델브루엑키 ssp. 불가리커스 SP96	락토바실러스 델브루엑키 ssp. 락티스LL82 MDX
비. 락티스 ATCC SD5219 비. 락티스 HA-194	비. 락티스 라프티 B94 비. 락티스 ATCC SD5220 비. 락티스 ATCC SD5219 비. 락티스 BL086
피. 플로이덴레이치 ssp 세르마니 HA-182 피. 플로이덴레이치 ssp 플로이덴레이치 HA-273
스트렙토코커스 써모필러스 SP4 CS 스트렙토코커스 써모필러스 SP4 MDX 스트렙토코커스 써모필러스 (TH-4®)	스트렙토코커스 써모필러스 ATCC SD5207 스트렙토코커스 써모필러스 SP4

바람직하게, 본 발명에 따른 조성물에서 그들 농도는 그램 당 1.10⁹ 내지 5.10¹² 박테리아로 가변적이다. 트립토판 분해효소 활성이 없는 박테리아와 IFN-γ의 생성을 유도하는 박테리아간 비율은 1:1 내지 1000:1 또는 심지어 1:1000 범위이고, 치료하려는 개체에 의한 염증 반응 정도 또는 1일 식이 트립토판 투입량을 기반으로 당업자가 선택할 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 단일 용량으로 또는 수회 용량으로 투여되며, 유산균 또는 유산균에서 유래된 성분의 1일 섭취량이 바람직하게 1일 체중 기준으로 0.01 내지 200 mg/kg, 보다 바람직하게 1일 체중 기준으로 0.1 내지 100 mg/kg이다.

본 발명에 따라서, IFN-γ의 생성을 유도하는 박테리아는 실활될 수 있고, 따라서 방사선 또는 포유동물에서 IFN-γ의 생성을 유도하는 그들 능력에 영향을 미치지 않는 당업자에게 공지된 임의의 다른 수단에 의해 불활성화된다.

본 발명에 따른 조성물은 건조되거나 또는 동결건조되거나 또는 조성물의 액상 성분에 영향을 주는 임의의 공정을 겪을 수 있다. 액체부, 대체로 물을 제거하는 단계는 동결건조 또는 건조 또는 분무 건조, 또는 진공 하 건조 및 공기 건조를 포함한, 박테리아의 건조에 적합한 임의의 건조 공정을 통해 편리하게 수행할 수 있다.

본 발명에 관한 조성물은 트립토판, 5-하이드록시트립타민 또는 멜라토닌, 및 식품, 식이, 기능성식품 및 약학 조성물의 제조에서 현재 사용되는 보통의 부형제에서 선택된 1 이상의 성분을 더 함유할 수 있다.

약학적으로 허용되는 작용제 예컨대 부형제, 분해제, 윤활제, 결합제, 산화 억제제, 착색제, 응집 억제제, 흡수 촉진제, 용해 보조제 및 안정화제가 또한 적합하게 조성물에 부가될 수 있다. 상기 조성물은 또한 식품 보충제(예를 들어, 캡슐, 정제, 과립, 스프레더블 크림), 건강 암시 식품(예를 들어, 건강을 위한 특정 용도의 음식 제품, 기능성 표시의 식품) 또는 기능성 식품(예를 들어, 다이어트 제품, 식품 보충제)의 형태로 제조된다.

본 발명에 따른 조성물은 문헌에 공지된 일반적인 기능석 식품 및 약학 형태, 예를 들어 정제, 과자류, 캡슐, 과립, 음료, 동결건조물, 용액, 현탁물, 에멀션, 펠렛, 시럽, 좌제 또는 질좌약으로 생산될 수 있고, 활성 성분이 부형제 및/또는 비히클과 혼합되어 통상 제조되며, 경우에 따라 공보조제 및/또는 분산제가 부가되고, 예를 들어 물이 희석제로 사용되고 다른 유기 용매가 또한 보조제의 형태로 사용될 수 있다.

보조제는 예를 들어, 물, 무독성 유기 용매 예컨대 파라핀, 식물성 기름(땅콩유 또는 깨유), 알콜(예를 들어, 에탄올, 글리세린), 글리콜(프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 고형 기질 예컨대 천연 미네랄 가루(카올린, 탈크), 합성 미네랄 가루(예를 들어, 실리케이트), 당류(예를 들어, 사탕수수당), 유화제(알킬 설포네이트 또는 아릴 설포네이트 등), 분산제(예를 들어, 말토스, 리그닌, 메틸셀룰로스, 전분 및 폴리비닐피롤리돈) 및 윤활제(예를 들어, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 스테아르산, 나트륨 라우릴 설포네이트) 및 유사 물질일 수 있다.

활성 성분과 부형제 간 비율은 바람직하게 1:10 내지 100:1로 다양할 수 있다.

조성물은 단독으로 또는 식품 또는 식이 성질(예컨대, 콩에서 단리된 단백질, 분말 알부민, 건조 스피룰리나 조류, 건조 계란, 호박씨, 맥주 효모) 또는 기능성식품 및 약학 성질의 다른 활성 성분과 조합하여 투여될 수 있고 사전용량화되어 포장된 유닛으로 제조된 성분의 키트 형태로 포장될 수 있다.

투여는 정상 방식으로, 바람직하게는 경구로 수행된다. 이러한 경우, 이 목적에 적합한 약학 형태는 또한 나트륨 시트레이트, 칼슘 카보네이트 또는 포스페이트를 포함하는 다른 첨가제를 다양한 첨가제 예컨대 전분, 젤라틴, 및 일반적인 부형제 이외에도 유사한 생성물 예컨대 락툴로스, 덱스트로스, 락토스, 말토스와 함께 함유할 수 있다. 상용성 착색제 또는 향미제가 액상 형태의 경우에 부가될 수 있다.

본 발명과 관련된 조성물은 본원에 제시된 활성 성분의 활성을 상승시킬 수 있는 사용된 박테리아와 상용성인 약물을 포함하여, 아미노산 및 비타민에서 선택된 1 이상의 성분을 더 포함할 수 있다. 이들 약물 중에서, 예를 들어 항염증제, 해열제, 방부제, 진통제, 항류마티스제, 항박테리아제, 간보호제, 항고지혈제, 항바이러스제 및 화학요법제 및 항종양 약물이 사용될 수 있다.

본 발명에 따라서, 액상 형태의 식품 예컨대 과일 주스, 및 제한없이 우유, 요거트, 아이스크림, 치즈, 버터, 크림을 포함한, 우유 및 치즈 제품, 또는 우유를 사용한 모든 음식 제품을 포함한, 유제품에 선택된 박테리아를 부가하여 제제화된 식품 조성물이 특히 유리한 조성물로 간주되고, 트립토판이 풍부한 식품, 예를 들어, 아몬드, 견과류, 콩에서 단리된 단백질, 분말 알부민, 분말 계란, 맥주 효모, 건조 스피룰리나 조류 및 파르메산을 포함하는 식품 조성물이 또한 특이 유리한 것으로 고려된다.

본 발명과 관련된 조성물은 인간 또는 동물용 식품, 기능성 식품, 식품 보충제, 동물 또는 사람 용도의 약물, 또는 약학 제품으로서 사용될 수 있다.

유산균의 양은 본 발명에 따른 조성물이 식품으로서 사용되는 상황에서는 특별히 제한되지 않는다. 그 양은 예를 들어, 식품의 0.00001 내지 100 중량%, 바람직하게 0.001 내지 50 중량%, 보다 바람직하게 0.1 내지 10 중량%이다.

본 발명에 따른 약학, 기능성식품 및 영양 조성물은 최종 생성물을 얻기 위해 박테리아 균주 및/또는 적합한 보조제(들)와 그들의 효소 생성물을 혼합하여 제조될 수 있다.

본 발명의 제1 바람직한 실시형태에서, 식품 및/또는 식이 및/또는 기능성식품 및/또는 약학 조성물은

제제 1

스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)(40 - 60%)

비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve)(10 - 15%)

비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis)(10 -15%)

비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)(10 - 15%)

엘. 액시도필러스(2 - 5%)

엘. 플란타럼(3 - 5%)

엘. 파라카세이(4 - 4.9%)

엘. 델브루엑키 하위종 불가리커스(L. delbrueckii subsp bulgaricus)(0.1 - 1%)(중량% 기준),

경우에 따라 경우에 따라 0 내지 80 중량%의 부형제 또는 0 내지 20 중량%의 상용성 약물

을 포함한다.

제2의 바람직한 실시형태에서, 본 발명에 따른 조성물은 제1의 바람직한 실시형태에서와 동일한 %로,

제제 2

스트렙토코커스 써모필러스 (40 - 60%)

비피도박테리움 브레베(10 - 15%)

비피도박테리움 락티스(10 - 15%)

엘. 액시도필러스(2 - 5%)

엘. 카세이(3 - 5%)

엘. 헬베티커스(4 - 4.9%).

에서 선택된 동결건조된 유산균 균주(중량% 기준),

경우에 따라 0 내지 80 중량%의 부형제 및 0 내지 20 중량%의 상용성 약물

을 포함한다.

제3의 바람직한 실시형태에서, 본 발명에 따른 조성물은

제제 3

스트렙토코커스 써모필러스(34 - 57%)

비피도박테리움 락티스(3 - 10%)

엘. 액시도필러스(3 - 5%)

엘. 플란타럼(3 - 8%)

엘. 카세이(3 - 4.9%)

엘. 헬베티커스(0.1 - 1%)

엘. 브레비스(5 - 50%)

에서 선택된 동결건조된 유산균 균주(중량% 기준),

을 포함한다.

제4의 바람직한 실시형태에서, 본 발명에 따른 조성물은

제제 4

스트렙토코커스 써모필러스(34 - 57%)

비피도박테리움 롱검(3 - 10%)

비피도박테리움 인판티스(3 - 5%)

엘. 액시도필러스(3 - 8%)

엘. 플란타럼(3 - 4.9%)

엘. 파라카세이(0.1 - 1%)

엘. 헬베티커스(0.1 - 1%)

엘. 브레비스(5 - 50%)

에서 선택된 동결건조된 유산균 균주(제3의 바람직한 실시형태와 동일한 %),

을 포함한다.

제5의 바람직한 실시형태에서, 본 발명에 따른 조성물은

제제 5

엘. 브레비스(15 -20%)

피. 세르마니(P. shermanii)(5 -20%)

에서 선택된 동결건조된 유산균 균주(중량% 기준),

0 내지 80 중량%의 부형제 및 0 내지 20 중량%의 상용성 약물

을 포함한다.

제6의 바람직한 실시형태에서, 본 발명에 따른 조성물은

제제 6

엘. 브레비스(25 -30%)

피. 세르마니(5 - 30%)

에서 선택된 동결건조된 유산균 균주(중량% 기준),

0 내지 80 중량%의 부형제 및 0 내지 20 중량%의 상용성 약물

을 포함한다.

본 발명에 따른 조성물의 제7의 바람직한 실시형태에서,

제제 7

엘. 브레비스 (10 - 40%)

에서 선택된 동결건조된 유산균 균주(중량% 기준),

0 내지 80 중량%의 부형제 및 0 내지 20 중량%의 상용성 약물

을 포함한다.

본 발명은 이하의 실시예를 참조하여 이제 설명하지만, 그 범주를 한정하는 것으로 간주하지 않는다.

실시예

실시예 1 내지 7에서 제조된 유산균 혼합물을 본 발명의 조성물을 제조하기 위해 사용하였다.

실시예 1

균주*	양(중량기준)
에스. 써모필러스 ATCC SD5207; 에스. 써모필러스 SP4; 에스. 써모필러스 SP4 CS; 에스. 써모필러스 SP4 MDX; 에스. 써모필러스 (TH-4®)	40 - 60%
비. 브레베 로셀-70; 비. 브레베 HA-129; 비. 브레베 ATCC SD5206	10 - 15%
비. 인판티스 R0033; 비. 인판티스 HA-116; 비. 인판티스 BI02	10 -15%
비. 롱검 HA-135; 비. 롱검 로셀-175; 비. 롱검 ATCC SD5588	10 - 15%
엘. 액시도필러스 R0052; 엘. 액시도필러스 로셀-418; 엘. 액시도필러스 HA-122; 락토바실러스 액시도필러스 ATCC	2 - 5%
엘. 플라타럼 로셀-1012; 엘. 플라타럼 HA-119; 엘. 플라타럼 ATCC SD5209; 엘. 플라타럼 P83; 엘. 플라타럼 P94; 엘. 플라타럼 D747	3 - 5%
엘. 파라카세이 라프티 L26 ND; 엘. 파라카세이 HA-196; 엘. 파라카세이 ATCC SD5275; 엘. 파라카세이 LP01	4 - 4.9%
엘. 델브루엑키 ssp. 불가리커스 SP96; 엘. 델브루엑키 ssp. 락티스 LL82 MDX	0.1 - 1%

* 각 균주는 단독으로 또는 혼합물로 취하였다.

실시예 2

균주*	양
에스. 써모필러스 ATCC SD5207; 에스. 써모필러스 SP4; 에스. 써모필러스 SP4 CS; 에스. 써모필러스 SP4 MDX; 에스. 써모필러스 (TH-4®)	40 - 60%
비. 브레베 로셀-70; 비. 브레베 HA-129; 비. 브레베 ATCC SD5206	10 - 15%
비. 락티스 라프티 B94; 비. 락티스 HA-194; 비. 락티스 ATCC SD5220; 비. 락티스 ATCC SD5219; 비. 락티스 BL086	20 - 30%
엘. 액시도필러스 R0052; 엘. 액시도필러스 로셀-418; 엘. 액시도필러스 HA-122; 락토바실러스 액시도필러스 ATCC	2 - 5%
엘. 카세이 로셀-215; 엘. 카세이 HA-108; 엘. 카세이 ATCC SD5213	3 - 5%
엘. 헬베티커스 R0052; 엘. 헬베티커스 라프티 L10; 엘. 헬베티커스 HA-128	4 - 4.9%

* 각 균주는 단독으로 또는 혼합물로 취하였다.

실시예 3

균주*	양
에스. 써모필러스 ATCC SD5207; 에스. 써모필러스 SP4; 에스. 써모필러스 SP4 CS; 에스. 써모필러스 SP4 MDX; 에스. 써모필러스 (TH-4®)	34 - 57%
엘. 브레비스 HA-112; 엘. 브레비스 LBR01; 엘. 브레비스 ATCC SD5214	5 - 50%
엘. 플라타럼 로셀-1012; 엘. 플라타럼 HA-119; 엘. 플라타럼 ATCC SD5209; 엘. 플라타럼 P83; 엘. 플라타럼 P94; 엘. 플라타럼 D747	3 - 8%
비. 락티스 라프티 B94; 비. 락티스 HA-194; 비. 락티스 ATCC SD5220; 비. 락티스 ATCC SD5219; 비. 락티스 BL086	6 -20%
엘. 액시도필러스 R0052; 엘. 액시도필러스 로셀-418; 엘. 액시도필러스 HA-122; 락토바실러스 액시도필러스 ATCC	3 - 5%
엘. 카세이 로셀-215; 엘. 카세이 HA-108; 엘. 카세이 ATCC SD5213	3 - 4.9%
엘. 헬베티커스 R0052; 엘. 헬베티커스 라프티 L10; 엘. 헬베티커스 HA-128	0.1 - 1%

* 각 균주는 단독으로 또는 혼합물로 취하였다.

실시예 4

균주*	양
에스. 써모필러스 ATCC SD5207; 에스. 써모필러스 SP4; 에스. 써모필러스 SP4 CS; 에스. 써모필러스 SP4 MDX; 에스. 써모필러스 (TH-4®)	34 - 57%
비. 롱검 HA-135; 비. 롱검 로셀-175; 비. 롱검 ATCC SD5588	6 - 20%
비. 인판티스 R0033; 비. 인판티스 HA-116; 비. 인판티스 BI02	3 -5%
엘. 액시도필러스 R0052; 엘. 액시도필러스 로셀-418; 엘. 액시도필러스 HA-122; 락토바실러스 액시도필러스 ATCC	3 - 8%
엘. 플라타럼 로셀-1012; 엘. 플라타럼 HA-119; 엘. 플라타럼 ATCC SD5209; 엘. 플라타럼 P83; 엘. 플라타럼 P94; 엘. 플라타럼 D747	3 - 4.9%
엘. 파라카세이 라프티 L26 ND; 엘. 파라카세이 HA-196; 엘. 파라카세이 ATCC SD5275; 엘. 파라카세이 LP01	0.1 - 1%
엘. 헬베티커스 R0052; 엘. 헬베티커스 라프티 L10; 엘. 헬베티커스 HA-128	0.1 - 1%
엘. 브레비스 HA-112; 엘. 브레비스 LBR01; 엘. 브레비스 ATCC SD5214	5 - 50%

* 각 균주는 단독으로 또는 혼합물로 취하였다.

실시예 5

균주*	양
엘. 브레비스 HA-112; 엘. 브레비스 LBR01; 엘. 브레비스 ATCC SD5214	15 - 20%
피. 세르마니	5 - 20%

* 각 혼합물은 단독으로 또는 혼합물로 취하였다.

실시예 6

균주*	양
엘. 브레비스 HA-112; 엘. 브레비스 LBR01; 엘. 브레비스 ATCC SD5214	25 - 30%
피. 세르마니	5 - 30%

* 각 균주는 단독으로 또는 혼합물로 취하였다.

실시예 7

균주*	양
엘. 브레비스 HA-112; 엘. 브레비스 LBR01; 엘. 브레비스 ATCC SD5214	10 - 40%

* 엘. 브레비스 HA-112와 엘. 브레비스 LBR01 및/또는 엘. 브레비스 ATCC SD5214의 혼합물

실시예 1-7에서 제조된 혼합물에 전분 및/또는 당류 및/또는 약물 예컨대 항바이러스제를 100%가 되게 부가하였다.

락토바실러스 및 비피도박테리아 혼합물의 동결건조

이하 표시한 락토바실러스, 비피토박테리아 및 스트렙토코커스의 혼합물을 다음과 같이 제조하였다.

자석 교반기가 장착된 1,000 mL 비이커에서, 21 g의 D-말토스를 5℃로 적합하게 냉각된 350 mL의 탈염수에 용해시켰다. 완벽하게 투명한 노란빛 용액이 수 분의 교반 후 얻어졌다. 이 용액을 2℃∼5℃의 온도로 냉각하여 유지하면서, 45 g의 락토바실러스 혼합물을 교반 하에 부가하였다. 온도를 2℃∼5℃로 유지하면서 대략 5분 동안 상기 현탁물을 교반하였다. 다음으로 현탁물을 냉장고에서 -20℃로 사전냉각시킨 AISI 316 스테인레스강에 부었다.

상기 현탁물은 실제로 순간적으로 얼어버리는 경향이 있다. 박테리아 혼합물의 양호하고, 지속적인 미생물 안정성을 확보하는데 필요한 조건인 5% 이하의 분말 습도로 동결건조된 생성물을 얻기 위한 목적으로 동결건조 주기를 시작하였다. 동결건조 조건은 하기와 같다.

에드워드 미니패스트(Edward Minifast) 2000 동결건조기

냉각기 온도: -47℃

플레이트 온도: -45℃

진공 주기 시작전 생성물 온도: -40℃

동결건조 가열 램프: -5℃의 생성물 온도까지 2시간 마다 5℃. 생성물은 온도 회복 램프가 25℃의 생성물 온도까지 2시간 마다 5℃의 속도로 재개된 후 이 온도에서 12시간 방치된다.

생성물 미적재.

실시예 4

상기 기술된 균주들의 혼합물을 사용해, 하기의 제제를 제조하였다:

150 bln CFU/사셰 용량의 8종/9종 균주의 혼합물을 함유하는 어린이 사셰

균주 혼합물 0.5 g

락토스 0.352 g

수크로스 1.5 g

아세설팜 K 및/또는 아스파탐 0.035 g

향미제 0.100 g

실리카 0.013 g

총 사셰 중량 2.5 g

450 bln CFU/사셰 용량의 8종/9종 균주의 혼합물을 함유하는 성인 사셰

균주 혼합물 1.5 g

말토스 4.38 g

아스파탐 0.04 g

향미제 0.07 g

실리카 0.01 g

총 사셰 중량 6.0 g

사용할 수 있는 향미제는 매우 다양하다. 최고 결과는 레몬향 및 딸기향으로 얻었다.

트립토판 분해효소-음성 박테리아 균주의 선택 - 인돌 시험

엘. 파라카세이를 사용해 수행한 실험 결과를 예로서 보고한다.

엘. 파라카세이 및 이. 콜라이(도 3)를 MRS 액체배지(de Man, Rogosa and Sharp)에서 배양하였고(+37℃에서 18시간) 1% 트립토판 액체배지로 옮겼다. +37℃에서 24시간 및 48시간 동안 항온배양 후, 시험관에 직접 코백스 시약 5액적을 부가하여 인돌 시험을 수행하였다.

인돌 시험(Manual of Clinical Microbiology - ASM, 1985, page 1094)은 p-디메틸아미노벤즈알데하이드의 알데하이드 기와 인돌 간 반응에 기인한 자주색 복합체의 형성을 기반으로 한다.

24시간 및 48시간 시험은 도 3(좌: 이콜라이; 우: 엘파라카세이)에 예시한 바와 같이 이.콜라이에 대해서만 양성이었다.

인돌 시험으로 검정한 하기 박테리아는 트립토판 분해효소 활성을 갖지 않는 것으로 확인되어서 본 발명에 유용한 것으로 간주하였다: 에스. 써모필러스, 엘. 플란타럼, 엘. 액시도필러스, 엘. 파라카세이, 엘. 헬베티커스, 비. 락티스, 비. 브레베, 비. 인판티스, 비. 롱검, 엘. 락티스, 엘. 브레비스, 피. 플로이덴레이치. 인돌 시험에 음성인 다른 박테리아 예컨대 보르데텔라(Bordetella), 해모필러스(Haemophilus), 프로테우스 미라빌리스(Proteus mirabilis), 슈노모나스(Pseudomonas)는 본 발명의 목적에 사용할 수 없는데, 무엇보다도 이들이 병원성이거나 또는 잠재적으로 병원성이기 때문이다.

IFN-γ의 생성을 유도할 수 있는 박테리아 균주의 선택

건강한 도너의 말초 혈액을 헤파린 첨가 튜브에 수집하고 인산염 완충 염수(PBS)로 1:2로 희석하였다. 단핵 세포를 밀도 구배 원심분리를 통해 단리하고 글루타민, HEPES 완충액, 페니실린, 스트렙토마이신 및 10%의 태아 소 혈청(Flow Laboratories)이 보충된 RPMI-1640 중에 1 × 10⁶/mL로 희석하였다. 시험을 위해 박테리아로 자극시, 박테리아를 웰의 세포 현탁물에 1:1의 비율로 부가하였고 항온반응시간은 37℃, 5% CO₂에서 24시간이었다.

인터페론-γ 측정

Abcam의 인터페론 감마(IFNG) 인간 ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) 키트는 세포 용해물 및 조직 용해물에서 인간 인터페론 감마의 정량 측정을 위한 시험관내 효소-연결 면역흡착 검정법이다.

이 검정법은 96웰 플레이트 상에 코팅된 인간 인터페론 감마에 특이적인 항체를 적용한다. 표준물 및 샘플을 웰에 파이펫팅해 넣어 샘플에 존재하는 인터페론 감마가 고정된 항체에 의해 웰에 결합된다. 웰을 세척하고 바이오틴화된 항-인간 인터페론 감마 항체를 부가하였다. 미결합된 바이오틴화된 항체를 세척해 내고, HRP-접합된 스트렙타비딘을 웰에 파이펫팅해 넣었다. 웰을 다시 세척하고, TMB 기질 용액을 웰에 부가하여 색상이 결합된 인터페론 감마의 양에 비례하여 발색되었다. 정지 용액이 색상을 파란색에서 노란색으로 변화시켰고, 그 색상 강도를 450 nm에서 측정하였다.

본 발명의 목적을 위해, 시험관 내에서 0.2 ng/mL이 넘게 IFN-γ 수준을 유도할 수 있는 균주를 본 발명의 목적을 위해 사용할 수 있다. 바람직하게 에스. 써모필러스(1.8 ng/mL), 엘. 액시도필러스(1.5 ng/mL), 비. 락티스(1.3 ng/mL), 비. 비피덤(1.3 ng/mL) 및 엘. 헬베티커스(1.2 ng/mL)이다.

AIDS를 앓는 환자에서 항염증성 활성

항레트로바이러스 요법(ART)은 HIV-감염된 사람의 생명을 극적으로 호전시켰다. 그러나, ART에도 불구하고 지속되는, 잔여 면역 활성화 및 염증은 관련 비-AIDS 질환의 높은 위험성과 연관되었다(Ishizaka A. et al, 2016). 다양한 증거들이 HIV-1 감염이 장 면역 항상성, 점막 구조 및 미생물 조성 변화를 유도함을 보여주었다. 우리는 ART 하의 만성 HIV-1 감염 환자의 말초 혈액 및 장세포 면역 활성화에 대한 6개월간 조성물(조성물 N°1) 보충의 영향을 분석하였다.

장상피의 손상, 변경된 장내 미생물총 조성, 신경인지 손상 및 트립토판 경로의 변경 간에 강력한 상관성이 HIV 환자에서 관찰되었음을 고려해 볼때, 우리는 식이 프로바이오틱 보충 전과 후에 다음을 평가하였다:

a) 장 생검에서 상피 무결성에 대한 염증성 침윤 및 손상;

b) 장에 의한 IDO의 생성;

c) 뇌척수액(CSF)의 네옵테린의 수준;

d) 말초 혈액의 세로토닌 수준;

e) 말초 혈액의 트립토판 양.

프로바이오틱 보충 전 및 후에 환자에서 말초 혈액을 샘플링하고 대장내시경을 하였다. 검사 전 24시에 PEG 투여를 통해 결장 세척을 수행하였다. 큰컵 포셉(Radial Jaw 4, Boston Scientific, Natick,Massachusetts, USA)을 사용해 의식하 진정(미다졸람 5 mg/iv)시켜 내시경 시술을 수행하였다. 모든 HIV-1 양성 환자들은 말단 회장의 적어도 10 cm에 대해 통상의 또는 가는 스코프(모델 CF 또는 PCF-160 AI, Olympus Medical Europe GmbH, Hamburg, Germany)를 사용한 전체 대장내시경 및 역행 일리오스코피(Ileoscopy)를 받았다. 우리는 말단 회장, 맹장, 상행, 횡행 및 하행 결장에서 표본(각 부위에서 2생검)을 얻었다.

각 현미경 시야에서 평가된 모든 수를 5개의 무작위로 선별한 조직학적 섹션 시야에서 계산하고, 40XHPFS에서 평가하였다. 각 항원에 대해 면역조직화학적으로 양성인 모든 세포를 계측하였다.

조직학적 검사는 주로 상피내 림프구(I.E.L)(단핵 세포, 예컨대 마크로파지, 림프구, 혈장 세포, 및 호중구)의 양을 400X 배율에서 점수매겨 세포 침윤 및 응집의 평가를 포함하였다.

염증 세포의 수는 이전에 기술된 바와 같은, 반정량적 방법을 사용해 평가하였고(ref. IBD Working Group of the European Society for Paediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition), 결과는 전체 표본에 대한 평균으로 보고하였다.

아폽토시스 세포의 상피 및 림프구 수준의 동소발생 검출을 위해, 말단 데옥 시뉴클레오티딜 트랜스퍼라제-매개 디그옥시게닌데옥시우리딘 트리포스페이트 닉-말단 표지화(TUNEL)를 문헌 [Gavrieli et al., (Gavrieli Y et al.,)]에서 수행된 별법에 따라 모든 HIV-1 양성 환자에서 얻은 내시경 회장 및 결장 생검 표본의 조직학적 섹션에 적용하였다. 그 섹션을 20 ㎍/mL의 프로테이나제 K(Sigma Chemical, St Louis, MO)로 15분간 실온에서 분해시킨 후 수돗물로 세척하였다. 내생성 퍼옥시다제를 20분간 3% 수소 퍼옥시다제를 사용해 켄칭한 후 인산염-완충 염수(PBS)로 세척하였다. 평형화 후, 섹션을 습윤 챔버에서 말단 데옥시뉴클레오티딜 트랜스퍼라제 효소와 1시간 동안 37℃에서 항온반응시켰다. 이후, 섹션을 30분간 정지-세척 완충액에 함침시키고 PBS로 세정한 후, 항디그옥시게닌 퍼옥시다제와 습윤 챔버에서 30분간 항온반응시켰으며, 이어서 디아미노벤지딘 및 과산화수소를 1 내지 3분간 부가하여 아폽토시스 핵이 발색되도록 하였다. 마지막으로, 섹션을 해리스 헤마톡실린으로 대비염색하였다.

CSF를 요추 천자로 수집하여, 원심분리하고 세포 무함유 상등액 샘플을 분취액으로 -80℃에 저장하였다. 전체 혈액의 20 밀리리터를 각 실험 방문시 에틸렌디아민테트라아세트산(BD Biosciences, San Jose, CA)을 함유하는 진공 채혈관에 정맥 천자로 수집하였다. 혈장을 원심분리로 즉시 분리하여 -80℃에 저장하였다.

트립토판의 양과 관련하여 크로마토그래피 용리를 80:20(v/v) 비율의 나트륨 아세테이트(30 mM, pH 6.5) 및 아세토니트릴(용매 A) 및 50:50(v/v)의 프로판-2-올과 아세토니트릴(용매 B)의 2원 구배 시스템을 사용해 수행하였다. 데이터 분석은 전용 소프트웨어(Millennium³²)를 사용해 수행하였다.

결과:

무엇보다 우리는 HIV-1 감염된 환자의 LPL에서 그 양을 측정하여, GALT에서, 트립토판 대사에 관여하는, IDO의 수준을 평가하였다. 우리는 우리가 실험한 개체 군에서, 프로바이오틱 보충 후 IDO의 수준이 더 높음을 발견하였다(변동 계수 > 100%). 대조적으로 트립토판의 양은 프로바이오틱 식이 통합 6개월 후 모든 환자에서 감소하였다.

또한, 장 및 CNS 둘 모두에서 염증률을 평가하기 위해, 우리는 상피내 림프구(IEL) 밀도 및 아폽토시스를 겪는 장세포의 속도에 집중하여, 프로바이오틱 보충 전 및 후에 수집한 장 생검에서 염증성 침윤을 평가하였다. 우리는 프로바이오틱 보충 후 장 상피를 침윤하는 IEL의 감소가 상피 및 장 크립트 둘 모두에서 장세포 아폽토시스 지수 수준의 통계적으로 유의한 감소와 절대적으로 연관되었음을 발견하였다(p=0.04).

유사하게, 모든 실험한 개체군에서, 우리는 프로바이오틱 보충 전(TO) 및 후(T6)에 CSF에서 네옵테린 수준의 유의한 감소 및 세로토닌 수준의 유의한 증가를 발견하였다.

결론적으로 조합 항레트로바이러스 요법(cART) 하의 6명의 HIV-1+에서 6개월 동안 프로바이오틱 보충은 변경된 트립토판 대사와 관련된 IDO를 높은 수준으로 유도하였다.

또한 모든 환자에서 프로바이오틱 보충 6개월 후에 장과 CSF 모두에서 일반 염증이 유의하게 감소되는 것으로 관찰되었다.

상기 결과 데이터는 다음과 같다.

Claims

유산균, 비피도박테리아, 스트렙토코커스 및 이의 혼합물에서 선택된 IFN 감마를 유도하는 미생물; 및
유산균, 비피도박테리아, 스트렙토코커스 및 이의 혼합물에서 선택된 트립토판 분해효소-음성 미생물을 포함하되;
상기 IFN 감마를 유도하는 미생물은 0.2ng/ml 이상으로 IFN 감마 생성을 유도할 수 있고, 이를 통해 IDO(인돌아민 2,3-디옥시게나제) 상승 및 키뉴레닌 대사활성화를 통해 염증 감소를 나타내는, 면역조절성 항염증 조성물.
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제1항에 있어서, 국소, 전신 및 뇌 수준에서의 만성 염증의 예방 및 치료, 장의 염증성 질환, 중추 및 말초 신경계의 만성 염증성 질환, 자가면역 질환 및 자폐증의 치료 중 하나 이상에서 사용하기 위한 조성물.
제1항에 있어서, HIV-감염자의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 조성물.
제1항에 있어서, 초기 유아기에 트립토판 대사를 안정화하고 조절하는데 사용하기 위한 조성물.
제1항에 있어서, 포유동물, 인간 또는 동물에서 키뉴레닌 대사 경로의 활성화를 통해 트립토판 이상대사 상황에서 발생하는 노년층의 편도체, 해마 또는 전두엽의 변화를 치료하는데 사용하기 위한 조성물.
유산균, 비피도박테리아, 스트렙토코커스 및 이의 혼합물에서 선택된 IFN 감마를 유도하는 미생물; 및
유산균, 비피도박테리아, 스트렙토코커스 및 이의 혼합물에서 선택된 트립토판 분해효소-음성 미생물을 포함하고;
상기 IFN 감마를 유도하는 미생물은 0.2ng/ml 이상으로 IFN 감마 생성을 유도할 수 있고, 이를 통해 IDO(인돌아민 2,3-디옥시게나제)의 상승 및 키뉴레닌 대사 활성화를 통해 에너지 대사 활성화 성분의 생산 상승에 효과가 있는, 에너지 보충용 조성물.
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제1항에 있어서, 경구, 장 또는 직장 투여를 위한 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 미생물은 생활 또는 실활 형태, 또는 이의 혼합물로 사용되는 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 실활 형태는 열 또는 방사선으로 사멸시켜 얻는 것인 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 미생물은 건조 또는 동결건조 또는 분무 건조 형태이거나, 진공 건조 또는 공기 건조 처리되는 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 트립토판, 5-하이드록시트립타민, 멜라토닌 또는 식품, 식이, 기능성 식품 또는 약학 조성물의 제조에 사용되는 부형제에서 선택된 1 이상의 성분을 더 포함하는 조성물.
제1항에 있어서, 보조제, 부형제, 분해제, 윤활제, 결합제, 산화 억제제, 착색제, 응집 억제제, 흡수 촉진제, 용해 보조제 및 안정화제에서 선택된 약학적으로 허용되는 작용제를 더 포함하는 조성물.
제16항에 있어서, 보조제는 물, 무독성 유기 용매, 파라핀, 식물성 기름, 땅콩유 또는 깨유, 알콜, 에탄올, 글리세린, 글리콜, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜, 고형 기질, 천연 미네랄 가루, 카올린 또는 탈크, 합성 미네랄 가루, 실리케이트, 당류, 사탕수수당, 유화제, 알킬 설포네이트 또는 아릴 설포네이트; 분산제, 말토스, 리그닌, 메틸셀룰로스, 전분 또는 폴리비닐피롤리돈; 윤활제, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 스테아르산, 나트륨 라우릴 설포네이트; 락툴로스, 덱스트로스, 락토스, 말토스, 다양한 첨가제, 전분, 젤라틴과 함께, 나트륨 시트레이트, 칼슘 카보네이트 또는 포스페이트를 포함하는 다른 첨가제; 착색제, 향미제에서 선택되는 하나 또는 그 이상인 것인 조성물.
제9항에 있어서, 다른 식품 기능성식품 또는 식이 활성 성분, 아몬드, 견과류, 콩에서 단리된 단백질, 분말 알부민, 분말 계란, 맥주 효모, 건조 스피룰리나 조류, 파르메산; 콩에서 단리된 단백질, 알부민 분말, 건조 스피룰리나 조류, 분말 계란, 호박씨, 맥주 효모; 아미노산 및 비타민 중에서 선택되는 하나 또는 그 이상과 조합하여 투여하는 조성물.
제1항에 있어서, 항염증제, 해열제, 방부제, 진통제, 항류마티스제, 항박테리아제, 간보호제, 항고지혈제, 항바이러스제, 화학요법제 및 항종양 약물 중에서 단독으로 또는 조합으로 선택되는 다른 약학적 활성 화합물을 더 포함하는 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 사전용량화 또는 포장된 유닛으로 제조된 성분을 갖는 키트 형태로 포장되는 조성물.
제9항에 있어서, 우유, 요거트, 아이스크림, 치즈, 버터 및 크림 중에서 선택되는 하나 이상의 유제품 형태, 또는 과일 주스 형태의 식품 조성물인 조성물.
제21항에 있어서, 유산균, 비피도박테리아, 스트렙토코커스의 양은 식품의 0.00001 내지 100 중량%인, 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 박테리아는 하기 목록에서 단독으로 또는 그들의 혼합물로 선택되는 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 중량 기준으로,
스트렙토코커스 써모필러스(40 - 60%)
비피도박테리움 브레베(10 - 15%)
비피도박테리움 인판티스(10 - 15%)
비피도박테리움 롱검(10 - 15%)
엘. 액시도필러스(2 - 5%)
엘. 플랜타럼(3 - 5%)
엘. 파라카세이(4 - 4.9%)
엘. 델브루엑키 하위종 불가리커스(0.1 - 1%)
을 포함하는 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 중량 기준으로
스트렙토코커스 써모필러스 (40 - 60%)
비피도박테리움 브레베(10 - 15%)
비피도박테리움 락티스(10 - 15%)
비피도박테리움 락티스(10 - 15%)
엘. 액시도필러스(2 - 5%)
엘. 카세이(3 - 5%)
엘. 헬베티커스(4 - 4.9%)
을 포함하는 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 중량 기준으로
스트렙토코커스 써모필러스(34 - 57%)
비피도박테리움 락티스(3 - 10%)
비피도박테리움 락티스(3 - 10%)
엘. 액시도필러스(3 - 5%)
엘. 플란타럼(3 - 8%)
엘. 카세이(3 - 4.9%)
엘. 헬베티커스(0.1 - 1%)
엘. 브레비스(5 - 50%)
을 포함하는 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 중량 기준으로,
스트렙토코커스 써모필러스(34 - 57%)
비피도박테리움 롱검(3 - 10%)
비피도박테리움 롱검(3 - 10%)
비피도박테리움 인판티스(3 - 5%)
엘. 액시도필러스(3 - 8%)
엘. 플란타럼(3 - 4.9%)
엘. 파라카세이(0.1 - 1%)
엘. 헬베티커스(0.1 - 1%)
엘. 브레비스(5 - 50%)
을 포함하는 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 중량 기준으로,
엘. 브레비스(15 - 20%)
피. 세르마니(5 - 20%),
0 내지 80 중량%의 부형제 및 0 내지 20 중량%의 상용성 약물
을 포함하는 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 중량 기준으로,
엘. 브레비스(25 - 30%)
피. 세르마니(5 - 30%),
을 포함하는 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 중량 기준으로
스트렙토코커스 써모필러스(34wt% 내지 60wt%)
를 포함하는 조성물.
제1항 또는 제9항에 있어서, 중량 기준으로
엘. 브레비스(10 - 40%),
0 내지 80 중량%의 부형제 및 0 내지 20 중량%의 상용성 약물
을 포함하는 조성물.
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