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KR100500793B1 - C형간염바이러스감염증진단약 - Google Patents

C형간염바이러스감염증진단약 Download PDF

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KR100500793B1
KR100500793B1 KR1019970016607A KR19970016607A KR100500793B1 KR 100500793 B1 KR100500793 B1 KR 100500793B1 KR 1019970016607 A KR1019970016607 A KR 1019970016607A KR 19970016607 A KR19970016607 A KR 19970016607A KR 100500793 B1 KR100500793 B1 KR 100500793B1
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complex
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시스멕스 가부시키가이샤
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Abstract

보다 고감도로 신속하게 다수의 검체를 측정할 수 있는 HCV 감염증 진단약 및 감염 바이러스 항체의 검출방법을 제공한다.
HCV항원과, HCV항원 및 캐리어단백질(Carrier Protein)의 화학결합에 의해서 조제한 복합항원을 고상(固相)(Solid Phase)으로 감작(感作)시켜서 얻어지는 C형 간염바이러스 감염증 진단약과, C형 간염바이러스 감염증 진단약을 검체시료에 첨가하여 담체입자의 응집도를 측정하는 C형 간염바이러스 항체의 검출방법에 관한 것이다.

Description

C형 간염바이러스 감염증 진단약
본 발명은 면역응집반응을 이용하여 C형 간염바이러스(HCV) 감염증을 검출하는 진단약에 관한 것이다.
C형 간염은 1988년 미국의 카이론사(Chiron Corporation)의 연구그룹에 의해서 HCV 유전자가 바이러스에 앞서서 발견되었다. 이 HCV에 대한 항체를 검출하기 위해서 각종의 재조합(recombination)항원이나 합성 펩티드(peptides)가 검토되어 HCV 관련항체를 검출하는 키트(kit)가 개발되고 있다. 또한 검출방법으로서는 우무겔(agar gel)확산법, 대향면역 전기영동법, 방사면역측정법, 효소면역측정법, 수동적(passive)적혈구응집법, 라텍스(유액)응집법 등이 있다.
HCV 관련 항체를 검출하기 위해서 사용되는 HCV항원 단백질로서는 구조영역 단백질로서 코어(core)및 엔빌로프 단백질(envelope protein), 비구조영역 단백질로서 NS1∼NS5 단백질이 알려져 있다. 1개의 HCV항원 단백질로는 검출감도가 충분히 높지 않고, 특이성에도 문제가 있기 때문에 구조영역과 비구조영역의 단백질을 적당하게 조합하여 사용되고 있다 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 : 10011-10015, 1992). 그리고, 검출감도를 더욱 높이기 위한 시도도 진행되고 있다. 예를 들면, 입자응집법에서는 감작(感作)하는 HCV항원의 수를 더 증가시키거나, HCV항원 활성 폴리펩티드(Polypeptide)를 가열처리하거나(일본국 특개평 6-1002273호), 혹은 HCV 항원 단백질과 캐리어단백질의 융합단백질을 친수성 입자에 감작시켜서 이용하는 것(일본국 특개평 7-198723호) 등이 행해지고 있다.
또, 항원으로서 합성펩티드를 사용하는 것도 시도되고 있으나 합성펩티드를 사용하는 경우에는 일반적으로 검출감도가 낮아진다고 평가되고 있다.
따라서, 보다 고감도로 신속하게 다량의 검체를 측정할 수 있는 HCV 감염증 진단약 및 HCV 감염증을 일으키는 바이러스에 대한 항체의 검출방법이 요구되고 있다.
상기의 목적을 달성하기 위하여 예의 검토한 결과, 글루타르알데히드(glutaraldehyde)법을 이용하여 캐리어단백질과 각종 C형 간염바이러스의 코어항원, NS3항원, NS4항원 및 NS5항원을 화학결합한 복합항원을 담체입자에 감작시킴으로서 고감도화가 가능하게 되었다. 또, 이 복합항원을 사용하여 입자의 안정성에 있어서도 크게 개선할 수가 있게 되었다.
본 발명은 HCV항원과, HCV항원 및 캐리어단백질의 화학결합에 의해서 조제한 복합항원을 고상(固相)(solid phase)으로 감작시켜서 얻어지는 C형 간염바이러스 감염증 진단약을 제공한다.
캐리어단백질로서는 수용성단백질이면 특별한 제한은 없으나, 바람직하게는 분자량 10,000∼1,000,000, 보다 바람직하게는 30,000∼150,000이며, 구체적으로는 소혈청알부민(Bovine serum albumin)(BSA), 흰자알부민, 헤모시아닌(hemocyanin)등이 적절히 사용된다. 이밖에도, 수용성합성고분자, 예를 들면, 폴리비닐알코올(Polyvinyl alcohol), 덱스트란(dextran)등도 사용할 수 있다.
고상으로서는 담체입자, 마이크로타이터판(microtiter plate), 시험관등을 사용할 수 있다. 담체입자를 사용하는 것이 적합하며 담체입자로서는 통상적으로 입자응집법의 진단약으로 사용되는 공지의 입자를 사용할수 있다. 예를 들면 폴리스티렌 라텍스와 같은 소수성입자, 입자표면에 아미노기, 카르복실기 등의 친수기를 갖는 혼성중합 라텍스입자, 적혈구, 젤라틴 입자 등을 사용할 수 있는데 여기서 보다 적합하기로는 폴리스틸렌 라텍스가 사용된다.
본 발명의 진단약으로 사용하는 HCV항원 단백질은 공지의 HCV 구조영역 단백질이나 비구조단백질이다. 구조영역 단백질로서는 코어단백질, 비구조영역 단백질로서는 NS3단백질, NS4단백질 및 NS5단백질을 사용할 수 있다. 또한 이들 항원단백질의 아미노산 및 누클레오티드(nucleotide)배열에 대해서는 문헌(일본국 특표평 5-508219호)에 기재되어 있다. 항원 단백질의 유래에 대해서는 HCV항원 활성을 갖는 것이면 특별히 제한되지 않고, 천연에서 단리(isolation)한 것, 화학합성에 의한 것 및 유전자 재조합법으로 제조한 것을 사용할 수 있다. 항원 단백질로서는 이들 영역의 단백질 가운데 다양한 길이의 펩티드를 사용할 수 있으나, 바람직하게는 적어도 하나의 에피토프(epitope)를 함유하는 8개 이상의 아미노산으로 이루어진 펩티드를 사용한다. 더욱 바람직하게는, 분자량 1,000∼5,000의 합성펩티드를 사용한다. 펩티드는 당업계에서 공지의 방법, 예를 들면, 고상합성법, 프레그먼트(fragment) 축합법, 또는 고전적인 용액합성법 등을 사용하여 합성할 수가 있다. 적합하게는 문헌(Merrifield, J, Am. Chem. Soc, 85 ; 2149, 1963)에 기재된 고상펩티드 합성법에 의해서 제조될 수 있다. 본 발명에서는 코어, NS3, NS4, NS5 각각의 항원단백질로서 적어도 하나 이상의 다른 에피토프를 함유한 1종류 이상의 항원을 조합하여 이들을 직접 혹은 캐리어단백질과의 복합항원으로서 담체입자에 감작 (感作)할 수가 있다. 이하에서 설명되는 실시예에서는 코어항원으로서 일본국 특표평 5-508219호에 기재된 코어영역중의 아미노산 49∼68을 함유한 펩티드를 사용하고, NS4 펩티드로서 일본국 특표평 5-508219에 기재된 NS4 영역중의 아미노산 1706∼1725, 1718∼1737 및 1724∼1743을 포함한 펩티드를 사용하고, 또 NS5 펩티드로서 일본국 특표평 5-508219호에 기재된 NS5 영역중의 아미노산 2287∼2306, 2299∼2318 및 2311∼2330을 포함한 펩티드를 사용하며, 또, NS3항원으로서는 일본국 특표평 5-508219호에 기재된 NS3 영역 중의 아미노산 1192∼1457의 펩티드를 사용하였으나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 항원단백질의 각각을 캐리어단백질과 화학결합에 의해 결합시켜 복합항원을 조제한다. 항원단백질은 직접 담체입자에 감작시키는 것보다는 복합항원으로서 감작시키는 편이 검출감도가 좋다는 것을 알게 되었다. 다만, 본 발명에서 사용한 NS3항원과 같이 분자량이 10,000 이상의 것에 있어서는 현저한 차이가 관찰되지 않으며, 따라서 그와 같은 항원단백질을 직접 담체입자에 감작하여 다른 항원단백질을 복합항원으로서 감작시켜도 된다. 캐리어단백질과 항원단백질의 결합에는 공지의 방법을 사용할 수 있으며, 예를 들면 카르보디이미드(Carbodimide)법, 과요오드산법, 말레이미드(maleimide)법, 글루타르알데히드(glutaraldehyde)법 등을 사용할 수가 있다. 글루타르알데히드에 의한 가교결합을 행함으로써 반응성이 증대하기 때문에 글루타르알데히드법을 사용하는 것이 바람직하다. 또, 캐리어단백질과 항원단백질은 분자수의 비로 약 1:3∼1:20, 바람직하게는 약 1:4∼1:9, 더욱 바람직하게는 약 1:6∼1:8의 비율로 혼합하여 복합항원을 조제한다. 이와 같이 하여 조제한 복합항원을 공지의 방법으로 담체입자와 결합(감작)한다. 예를 들면, 물리적 흡착, 화학적 흡착에 의해서 행할 수가 있다. 상술한 바와 같이 NS3항원은 캐리어단백질과 복합항원을 형성하지 않고 직접 담체입자에 감작할 수도 있으나 이것도 마찬가지의 방법을 사용할 수가 있다. 감작은 완충작용이 있는 완충액 내에서 행하고, 예를 들면 인산완충액, 글리신(glycine)완충액, 트리스(tris)완충액, 초산(아세트산)완충액을 사용하며, 바람직하기는 pH3∼8, 더욱 바람직하기는 pH4∼5에서 행한다.
본 발명은, 또 상기의 C형 간염바이러스 감염증 진단약을 검체시료에 첨가하여 담체입자의 응집도를 플로우사이토미터(flowcytometer)로 측정하는 C형 간염바이러스 항체의 검출방법을 제공한다. 본 발명의 C형 간염바이러스 감염증 진단약은 검체 시료 중에 항HCV 항체가 존재하는 경우에는 이것과도 반응하여 응집을 일으킨다. 응집은 육안으로 혹은 탁도, 흡광도 등으로도 측정이 가능하지만, 플로우사이토미터의 원리를 이용한 전자동 면역응집측정장치(예를 들면, 일본국 도아이요덴 시사제의 PAMIA-30TM)을 사용하여 응집입자의 크기를 광학적으로 측정함으로써 신속하게, 고감도 및 높은 정밀도로 측정할 수가 있다. 즉, 시료를 시스플로우(sheath flow)시스템에 의해서 플로우셀(flow cell) 내부로 유도하여 한줄로 나란히 통과시킨다. 여기서 레이저광을 조사하여 생기는 산란광의 강도를 측정하는 것으로도 응집의 정도를 알 수 있다. 응집입자수(P;polymer)와 미응집입자수(M;Monomer)를 계수한다. 이 P와 M로부터 P/T(T+M)를 연산하고, 사전 결정된 커트오프(cutoff)치로부터 HCV 항체의 유무를 정성 판정하는 것이다. 이 방법을 사용하여 HCV항체를 보다 고감도로 검출할 수가 있다. 또, 입자지름을 적절한 것으로 하면, 전기저항법을 사용한 혈액분석장치나 입자크기 분석측정장치에 의해서 측정하는 것도 가능하다. 다만 검출기의 그물막힘(blinding)등을 고려할 때 광학적 방법으로 측정하는 것이 바람직하다.
(실시예)
다음에 본 발명의 실시예에 따라 상세히 설명하나 본 발명의 범위는 이에 한정되는 것이 아니다.
실시예 1: HCV 복합항원의 조제
HCV항원으로서 NS3항원은 일본국 특표평 5-508219호의 실시예 1의 기재에 근거하여 유전자 재조합법으로 제조 사용했다. 사용된 NS3 펩티드는 HCV 단백질의 아미오산 1192~1457 이다.
코어항원, NS4항원, NS5항원에 대하여는 특표평 5-508219호에 기재된 아미노산 배열중, 각각 49∼68, 1706∼1725, 2287∼2306을 포함하는 펩티드를 PERKIN ELMER사의 펩티드 신테사이저(synthesizer)모델 431A를 이용하여 합성하여 사용하였다.
BSA(시판상품, 분자량66,000)를 10mM PBS, pH7.0중에 0.1%(w/v)의 농도로 조제한 것 1용량에 코어항원(아미노산 49∼68의 펩티드)을 10mM PBS, pH7.0 중에 0.1%(w/v)의 농도로 조제한 것 7용량을 가하고, 최종적으로 10mM PBS, pH7.0을 가해서 9용량이 되도록 조제한다. 그 후, 1% 글루타르알데히드 수용액을 첨가하여 반응을 개시한다. 반응온도는 30℃로 하고 30분후에 20% 글리신수용액 1용량을 첨가하여 반응을 정지한다.
NS3, NS4, NS5항원에 대해서도 동일한 조작을 하고, 10mM PBS, pH6∼8의 완충액을 사용하여 1용량의 1%(w/v) BSA용액에 대하여 1∼8용량의 0.1%(w/v) HCV항원용액을 반응시켜서 HCV 복합항원을 조제하였다.
실시예 2: HCV항원 감작 라텍스의 제조
입자지름 0.78㎛의 폴리스틸렌 라텍스입자(일본, 세키스이카가쿠코교(주)사제)를 10mM PBS, pH4.0중에 5%(w/v)의 농도로 조제하고, 이 속에 실시예 1에서 조제한 NS3 복합항원, NS4 복합항원, NS5 복합항원을 라텍스 분산액 1㎖당 50㎍ 첨가하고 4℃에서 24시간 반응시켰다. 그 다음, 원심(12,000rpm, 10분)처리를 하여 1㎎/㎖ BSA를 함유한 0.1M PBS 완충제, pH7.0을 최초와 동일한 양으로 첨가하여 입자를 분산시켰다. 그리고 재차 원심처리를 하여 같은 완충액속으로 분산시켜서 HCV항원 감작 라텍스로 하였다.
실시예 3: 응집반응
검체시료(피검자 혈액) 10㎕ 에 실시예 2에서 조제한 HCV항원 감작 라텍스(5%) 10㎕을 첨가하고, 1㎎/㎖의 BSA를 함유한 0.1M 인산완충액 80㎕을 가하고, 45℃에서 15분간 반응시킨후 라텍스입자의 응집도를 측정하였다. 이 반응과 측정은 전자동 면역측정장치 PAMIA-30(일본, 도아이요덴시(주)제)을 사용하여 전방산란광을 측정하였다.
응집도는 전체입자수에 대한 응집한 입자수의 퍼센트(P/T%)로 표시된다.
측정결과를 다음의 표 1로 나타낸다. 표 1에서 명백한 바와 같이 HCV항체 양성검체에서 충분한 응집도가 얻어지고 있다. 또, HCV항체 음성검체에서는 라텍스는 응집하지 않고, HCV항체를 포함하는 검체시료에서는 응집이 확인되므로 HCV항원으로 감작한 라텍스입자가 HCV항체와 반응함으로써 응집이 생긴 것을 알 수 있다.
[표 1]
Figure pat00001
커트오프치 2.79%
실시예 4: 조기검출감도
HCV항체가 양성화 되어가는 과정에서 동일인으로부터 경시적으로 채혈한 몇개의 검체로 구성되는, 시판되는 HCV 세로컨버젼패널(Seroconversion Panel) PHV901, PHV902 및 PHV903 (수입판매원: 일본 교와메딕스, 제조원: BOSTON BIOMEDICA, INC)을 사용하여 HCV항체 양전(陽轉)의 조기검출감도를 시험하였다.
실시예 2에서 조제한 진단약을 사용하는 본 발명의 카운팅 면역분석(Counting immunoassaey)(CIA)를 다음의 방법을 사용하는 타사의 제품과 비교하였다.
A사: 적혈구를 사용하는 수동혈구응집법(PHA)
사용 HCV항원; 코어, NS3, NS4.
B사 : 효소면역검정법(EIA)
사용 HCV항원; 코어, NS3, NS4.
C사: 효소면역 솔벤트 검정법(ELISA)
사용 HCV항원; 코어, NS3, NS4.
얻어진 결과를 다음의 표 2, 표 3 및 표 4에 나타낸다 (표 중의 B사 및 C사의 데이터는 패널에 첨부한 데이터를 기재하였다.)
본 발명의 진단약 및 감염 바이러스 항체 검출방법을 사용하면 패널 PHV902 및 PHV903 (이들 패널의 피검자는 채혈 제1일째부터 PCR에 의한 항체검사는 양성이다)에 있어서 타사의 어떤 진단약보다 조기에 HCV감염을 검출할 수 있었다.
[표 2]
Figure pat00002
[표 3]
Figure pat00003
[표 4]
Figure pat00004
실시예 5: HCV항원을 직접감작한 진단약과의 비교
본 발명의 진단약과 동일한 HCV항원을 직접감작하여 조제한 진단약을 사용하여, HCV항체의 검출감도 시험을 하였다.
NS3항원(유전자 재조합법으로 얻은 것), 코어항원(합성법으로 얻은 펩티드), NS4항원(합성법으로 얻은 펩티드), 및 NS5항원(합성법으로 얻은 펩티드)는 각각 BSA와의 복합항원으로 한 후에 실시예 2의 방법에 의해서 감작하여 HCV 복합항원 감작 라텍스로 하였다.
대조로서, 동일 항원, 동일 감작조건을 사용하여 모두 직접감작으로 HCV항원직접감작 라텍스를 조제하였다.
이들 라텍스를 사용하여 실시예 3의 방법에 의해 HCV항체 양성의 검체시료 (AE) 및 HCV항체 음성의 검체(F∼J)의 응집도(P/T%)를 측정하였다. 커트오프치(복합항원 감작 라텍스로 1.95%: 항원 직접감작 라텍스로 1.01%)를 고려하여 각 검체의 HCV항체 양성 또는 음성을 판정하였다. 얻어진 결과를 다음의 표 5에 나타낸다.
[표 5]
Figure pat00005
HCV항체 양성 검체인 검체시료 A 및 E에 있어서, 항원으로 직접감작한 진단약으로는 HCV항체를 검출할 수 없었으나 본 발명에 의한 복합항원을 감작한 진단약으로는 검출이 가능하였다.
실시예 6: 장기보존 안정성시험
실시예 5의 HCV항원 감작 라텍스 5%(w/v), 0.1M PBS, pH7.0 현탁액을 냉장보존하여 시약의 보존안정성을 시험하였다. 얻어진 결과를 다음의 표 6에 나타낸다.
[표 6]
Figure pat00006
이상과 같은 결과에서 명백한 바와 같이, 복합항원 감작 라텍스는 13개월의 장기보존후에도 응집도가 안정되어 있었다. 한편 직접감작 라텍스에서는 HCV항체음성 풀혈청을 사용한 시험에서는 응집도가 장기보존과 함께 서서히 상승하고, HCV항체양성 풀혈청을 사용한 시험에서는 응집도가 서서히 저하하며, 또 커트오프치가 서서히 상승하는 것이 관찰되었다.
실시예 7: HCV항원 감작 라텍스의 제조(2)
HCV항원으로서 실시예 1과 동일한 것을 사용하여, NS3항원을 복합항원으로 하지 않고 직접감작한 것 이외는 실시예 2와 동일한 조작을 하여 HCV항원 감작 라텍스를 조제하였다.
실시예 8: HCV항원 감작 라텍스의 제조(3)
NS3항원은 실시예 1과 동일한 것을 사용하고, 코어항원으로서 상기의 공보 (특개평 5-508219호) 기재의 아미노산 49∼68의 펩티드, NS4항원으로서 동일한 아미노산 1706∼1725, 1718∼1737의 펩티드, NS5항원으로서 동일한 아미노산 2287∼2306, 2299∼2318의 펩티드를 사용하며, 실시예 1과 동일하게 1용량의 1%(w/v) BSA용액에 대하여 1∼8용량의 0.1%(w/v) HCV항원 용액을 반응시켜 HCV 복합항원을 조제하고, 실시예 2와 동일하게 HCV항원 감작 라텍스를 조제하였다.
실시예 9: HCV항원 감작 라텍스의 제조(4)
NS3항원은 실시예 1과 동일한 것을 사용하고, 코어항원으로서 상기 공보에 기재된 아미노산 49∼68의 펩티드, NS4항원으로서 동일한 아미노산 1706∼1725, 1718∼1737, 1724∼1743의 펩티드, NS5항원으로서, 동일한 아미노산 2287∼2306, 2299∼2318, 2311∼2330의 펩티드를 사용하여 실시예 1과 동일하게 1용량의 1%(w/v) BSA용액에 대하여 1∼8용량의 0.1%(w/v) HCV항원 용액을 반응시켜 HCV 복합항원을 조제하고, 실시예 2와 동일하게 HCV항원 감작 라텍스를 조제하였다.
본 발명의 C형 간염바이러스 감염증 진단약을 사용하면 고감도로 및 시판의 진단약보다 조기에, C형 간염바이러스의 감염을 검출할 수 있게 된다.
즉, HCV항체가 양성화 되어가는 과정에서 동일인에게서 경시적으로 채혈한 여러개의 검체로 구성되는 패널혈청 (예를 들면, HCV 세로컨버젼패널, 수입판매원: 일본교와메딕스, 제조원: BOSTON BIOMEDICA, INC)를 사용하여 시험을 한 결과, 본 발명의 C형 간염바이러스 감염증 진단약은 종래의 적혈구를 이용하는 수동혈구 응집법(PHA), 효소면역검정법(EIA) 및 효소면역솔벤트 검정법(ELISA)에 비해 보다 조기에, 즉 감염초기에 HCV의 감염을 검출할 수 있게 된다는 것이 명확해졌다.
또, 본 발명의 진단약과 동일한 항원을 사용하지만 캐리어단백질과 복합항원을 조제하지 않고 직접감작하게 하여 제조한 진단약을 비교하였을때, 본 발명의 진단약이 검출 감도가 뛰어나다는 것이 판명되었다.
또한, 본 발명의 진단약은 장기보존을 한 후에도 검출감도가 떨어지지 않고 안정된 진단약이라고 할수 있다.
본 발명의 진단법은 ELISA등 종래의 검출법과 비교하여 번잡한 세정공정을 필요로 하지 않고, 단순히 본 발명의 HCV감염증 진단약(바람직하게는 HCV항원을 감작한 라텍스입자)와 검체시료(바람직하게는 피검사자 혈액)와 혼합할 수 있는 정도만의 조작으로 실시할 수가 있다. 또, 본 발명의 검출법은 상기의 혼합조작과 측정조작 어느 것이나 전자동으로 하는 측정기에 의해서 측정할 수 있으며 다수의 검체를 측정하는데 가장 알맞다.

Claims (12)

  1. 복합항원(conjugated antigen)에 의해 감작(sensitized)된 고체상(solid phase)을 포함하는 C형 간염바이러스 감염증 진단약을 제조하는 방법으로서,
    (ⅰ) 캐리어단백질과 HCV항원을 단백질과 항원의 몰수에 기초하여 1:3-20의 비율로 혼합하여 단백질과 항원이 화학결합된 복합항원을 형성하는 단계; 및
    (ⅱ) 상기 복합항원을 고체상에 감작시켜서 진단약을 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 C형 간염바이러스 감염증 진단약의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 HCV항원을 고체상에 직접감작시키는 것을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 HCV항원이 코어항원, NS3항원, NS4항원 및 NS5항원으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    a. 코어항원과 캐리어단백질의 화학결합에 의해 제조된 복합항원,
    b. NS3항원, 또는 NS3항원 및 캐리어단백질의 화학결합에 의해 제조된 복합항원,
    c. NS4항원과 캐리어단백질의 화학결합에 의해 제조된 복합항원, 및
    d. NS5항원과 캐리어단백질의 화학결합에 의해 제조된 복합항원으로 구성된 군에서 선택된 3종 이상의 HCV항원을 고체상에 감작시키는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 HCV항원이 HCV항원 활성을 갖는 하나 이상의 다른 에피토프를 함유하는 1종 이상의 항원인 것을 특징으로 하는 제조방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 캐리어단백질이 BCA, 흰자알부민(ovalbumin) 및 헤모시아닌으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 고체상이 담체입자(carrier particle)로부터 형성되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 담체입자가 소수성 입자인 것을 특징으로 하는 제조방법.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 소수성 입자가 폴리스티렌 라텍스인 것을 특징으로 하는 제조방법.
  10. (ⅰ) 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따라 진단약을 제조하는 단계,
    (ⅱ) 진단약을 검체시료에 첨가하는 단계, 및
    (ⅲ) 담체입자의 응집도를 측정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 C형 간염바이러스 항체의 검출방법.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 응집도는 플로우사이토미터(flowcytometer)로 측정하는 것을 특징으로 하는 C형 간염바이러스 항체의 검출방법.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 플로우사이토미터에 의한 측정은 전방 산란광을 측정하여 실행되는 것을 특징으로 하는 C형 간염바이러스 항체의 검출방법.
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