JPH0196137A - 真性糖尿病の治療 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １型真性糖尿病は、膵臓のランゲルハンス島のβ細胞が
破壊した結果起こる患者数の多い疾患である。１型糖尿
病の一般的な治療は置換１ｉ１　（ｒｅ−ｐｌａｃｅｍ
ｅｎｔ　ｄｏｓｅｓ）のインシュリンを非経口投与する
ことからなる。糖尿病が長期に亘り合併症を併発するの
を避けるために、血中グルコース回を正常（直近くまで
戻すように糖尿病をコントロールすることが望ましい。

しかしながら、前記治療ではコントロールが難しく、低
血糖性昏睡及びまれにではあるが長期間に亘る脳障害や
死を引き起こす恐れのある低血糖症の併発を避けること
が難しい。

その原因は十分に解明されていないが、低血糖症がイン
シュリン治療により発生する頻度が高く且つ非常に重大
な副作用であることは周知である。

２型真性糖尿病は、１型真性糖尿病の約８〜１０倍の患
者が存在する疾患であり、西欧諸国では成人の最高的４
％が罹患していると推定されている。

この疾患の特徴は、 （１）インシュリン分泌が全くないわけではないが不足
しているため過血糖症を呈していること、及び通常 ■インシュリン作用に対する耐性度が異なることにある
。この２型糖尿病の場合、１型糖尿病とは異ってランゲ
ルハンス島のβ細胞は正常乃至はんの僅かに減少してい
るにすぎない。多くの場合、島アミロイドも検出される
（Ｃ１ａｒｋ　Ａ、、Ｃｏｏｐｅｒ　Ｇ。

Ｊ、　Ｓ、　ら、Ｌａｎｃｅｔ、　Ａｕｇｕｓｔ　２，
１９８７　）。

１９８７年４月２７日付出願の英国特許出願１１に１８
７０９８１１には、下記配列 を有するアミノ酸又はその活性サブ断片と同−或いは実
質的に同族の新規なペプチドが開示されている。Ｃｏｏ
ｐｅｒら、“Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｈ
ａｒａｃ−ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　Ｐｅｐｔ
ｉｄｅ　ｆｒｏｍ　Ａｍｙｌｏｉｄ−ＲｉｃｈＰａｎｃ
ｒｅａｓｅｓ　　ｏｆ　　Ｔｙｐｅ　　２　　Ｄｉａｂ
ｅｔｉｃ　　Ｐａｔｉｅｎｔｓ”　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ、　
　Ｖｏｌ、８４（１９８７）。

前記した配列をアミノ酸残基の一般的な３文字表記を用
いて書き換えると次のようになる。

ｔｙｓ　Ｃｙｓ　ＡＳｎ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　ｃ
ｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　　Ｌｅｕ　Ａ
ｌａ　Ａｓｎ　ｐｈｅＬ（！１１　Ｖａｔ　Ｈｉｓ　Ｓ
ｅｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ａｌ
ａ　　ｒｌｃ　Ｌｅｕ　５ｅｒ　Ｓａｒ　ＴｈｒＡｓｎ
　Ｖａｔ　Ｇｌｙ　Ｓｃｒ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒこ
の新規なペプチド（仮に糖尿病関連ペプチド（ＤＡＰ　
）と称されているが、ここではアミリンと呼称する）は
、２型糖尿病を患っているヒトのアミロイド含有膵臓か
ら単離され、特性付けられた。

アミリンは食欲抑制作用のような臨床的作用を有する他
、恐らく一般的な又は膵臓もしくは島血流に対して特有
の血管拡張作用を有していると記載されている。

多分０＾ｅと同一のペプチドはヒトインシュローマに由
来すると記載されており、高度に保存されたペプチドが
自発性糖尿病ネコの膵臓で検出された［　Ｐ、Ｗｅｓｔ
ｅｒｎ＋ａｒｋら、　ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　ＡＣａ
ｄ、　ＳＣｉ。

ＵＳＡ　　、　　Ｖｏｌ、８４．　　ｐ、３８３１〜３
８８５．　　Ｊｕｎｅ　　１９８７　　。

Ｍｅｄｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ］　。このペプチド
はインシュローマ又は島アミロイドポリペプチド（ＩＡ
ＰＰ）と称されているが、ヒト及びネコの島アミロイド
が本質的に類似した化学的性質を有していることはほぼ
間違いないと言われている。ペルオキシダーゼを用いる
免疫組織化学方法により、ＩＡＰＰが島β細胞から局所
的にＴ１離されることが示唆されている。

島におけるＩＡＰＰの機能は未知であると言われている
が、その保存（ＣＯｎＳｅｒＶａｔｉＯｎ）及びＣＧＩ
ｔＰと部分的に同一であることから重要な調節作用があ
ると強く教示される。

アミリンは３７種のアミノ酸残塁を含んでおり、ヒトＣ
ＧＲＰ−２と４６％同一であるカルシトニン遺伝子ｇ！
ｌｉペプチド（ＣＧＲＰ）と構造的に類似している。

１）ＤＡＰ　、　２）ヒトＣＧＲＰ−２、３）ヒトＣＧ
ＲＰ−１及び４）ラットＣＧＲＰ−１の主要構造を比較
したものが下記式である。ボックスはペプチド間のアミ
ノ酸が同一であることを示す。破線のボックスは置換さ
れた相同域を示す。

ＣＧＲＰが、ラットに投与したとき血圧及び血液カテコ
ールアミンレベルに顕著な作用を及ぼすことは公知であ
る。

１９８７年８月２日付ｔａｎｃｅｔに発表されたΔ、　
Ｃ１ａｒｋ。

Ｇ、　Ｊ、　Ｓ、　Ｃｏｏｐｅｒらの記事に、２２個の
アミロイド含有２型糖尿病患者の島アミロイドが抗−Ｃ
ＧＲＰ血清と免疫反応を示すことが報告されている。こ
のことからアミリンにより抗血清の予吸収が抑制され、
アミリンは島アミロイドの主要蛋白成分であることが示
唆され、Ｃｏｏｐｅｒらはアミリンが島アミロイドの主
要成分であることを確認した［１掲文献（１９８７）参
照］。更に、ＣＧＲＰ／アミリン免疫反応性が糖尿病及
び非糖尿病患者の島細胞にみられ、予備研究からβ細胞
内での存在も確認された［　ｃｏｏｐｅｒら、Ｌａｎｃ
ｅｔ、　１９８７．２：９６４　］　。こうした同定及
びインシュローマに類似ペプチドが発見されたことから
、アミリンがインシュリンと共分泌され得ることが示唆
される。

本発明は、アミリンもしくはアミリン−Ｎｂ２もしくは
ＣＧＲＰｌ又はアミリンもしくはアミリン−ＮＨ２もし
くはＣＧＲＰの官能性ペプチド断片、又はアミリンもし
くはアミリン−Ｎ［１２もしくはＣＧＩｔＰもしくは断
片の保存変種が真性糖尿病又は低血糖症の治療に有用で
あるという思想に基くものである。

この思想は予期せぬものであった。アミリン及び恐ら＜
　ＣＧＲＰが真性糖尿病に多少関連していることは公知
であるが、アミリンもしくはＣＧＲＰが前記病態の治療
に有用であることは従来示唆されていなかったからであ
る。本発明の根底をなす研究はアミリン及びＣＧＲＰを
対象としてなされたが、ＣＧＲＰが通常アミリンと類似
の措成及び性質を有しており、同一の驚くべき治療効果
が期待できることから、本発明はＣＧＲＰにも及ぶ。

アミリンはカルボキシル末端の形態（アミリン）であっ
ても、カルボキシル末端がアミド化された形態（アミリ
ン−ＮＨ２）であってもよい。アミド化された形態の＠
造は次式の通りである：Ｒ−ＮＨ−（Ｃ６Ｈ４０旧−Ｃ
ＯＮＨ２上記式中、Ｒはアミリンペプチド乃至カルボキ
シル末端残基チロシンに結合したペプチドの残塁である
。−船釣に知られているＣＧＲＰの形態には、生物学的
活性を有するＣ−末端アミドグループが包含される。

アミリンもしくはアミリン−ＮＨ１２もしくはＣＧＲＰ
の官能性ペプチド断片（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｐｅｐ
ｔｉｄｅｆｒａｇｍｅｎｔ）とは、ｉｎ　ｖｉｖｏで完
全なアミリンもしくはアミリン−ＮＨ２もしくはＣＧＲ
Ｐペプチドの治療官能体（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｆ
ｕｎｃｔｉｏｎ）を予形成する、その長に少なくとも５
個のアミノ酸残基を有するペプチド断片を意味する。保
存変種（Ｃ０ｎ５ｅｒＶａｔ　１ｖｅｖａｒｉａｎｔ　
）とは、完全ではないが実質的にアミリンもしくはアミ
リン−ＮＨ２もしくはＣＧＩｔＰ又はその断片と同族で
はあるが、機能的に均等であるペプチドを意味する（Ｈ
，Ｏ，Ｄａｙｈｏｆｆ、　Ａ　Ｍｏｄｅｌ　ｏｆＥｖｏ
ｌｕｔｉｏｎａｒｙ　　Ｃｈａｎｇｅ　　ｉｎ　Ｐｒｏ
ｔｅｉｎｓ、　　“Ａｔ１ａｓ　ｏｆＰｒｏｔｅｉｎ　
５ｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ”、　
　Ｖｏｌ、５゜Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ　　３．Ｎａｔｉ
ｏｎａｌ　　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　　Ｒｅ５ｅａｒ
ｃｈＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ、　　１９７８．Ｄ、３４５
〜３５２）。

本発明の好ましい態様によれば、真性糖尿病又は低血糖
症治療用組成物は、インシュリンとアミリンもしくはア
ミリン−ＮＨ２もしくはＣＧＩｔＰ、又はアミリンもし
くはアミリン−ＮＨ２もしくはＣＧＲＰの官能性ペプチ
ド断片、又はアミリンもしくはアミリン−ＮＨｌ□もし
くはＣＧＲＰもしくは断片の保存変種とを含む。本明細
書において、インシュリンには真性糖尿病の治療に通常
使用されているような天然及び合成インシュリン、イン
シュリンの官能性ペプチド断片及びインシュリンもしく
はその断片の保存変種も包含される。。

本発明の薬剤（ｐｒｏｄｕｃｔ）は非経口投与に適した
溶液の形態で提供されるのが好ましい。多くの場合、イ
ンシュリンとアミリンもしくはアミリン−ＮＨ２もしく
はＣＧＲＰ　（又は断片又は変ＭＪ＞を−緒に投与する
ために単一溶液の形態で提供されるのが好ましい。イン
シュリンとアミリンもしくはアミリン−ＮＨ２もしくは
ＣＧＲＰ　（又は断片又は変種）を別々に投与するのが
有利な場合もある。適当な投与方法は医者が各患者につ
いて個別に決定するのが最良である。通常インシュリン
とアミリンもしくはアミリン−ＮＨ２もしくはＣＧＲＰ
　（又は断片又は変種）のモル比が１００：１〜０．１
：１となるように処方するのが好ましい。予備研究の結
果、インシュリン免疫反応性と同様にアミリン免疫反応
性及びアミリンが１型糖尿病患者のランゲルハンス島に
存在しないことが判明した。従って、１型糖尿病症候群
は１種のホルモン（即ち、前記に教示されている如きイ
ンシュリン）の不足に因るのではなく２種のホルモン（
インシュリンとアミリンもしくはアミリン−ＮＨ２もし
くはＣＧＲＰ）の不足に因り発症すると考えられる。既
に指摘されている如く糖尿病におけるインシュリン治療
に関する最大の問題は低血糖症である。インシュリンと
アミリンもしくはアミリン−ＮＨ３もしくはＣＧｒｔＰ
とを併用投与することによりこの副作用を避けることが
できる。

従って、本発明によれば、 一低血糖症が発症する恐れを少なくして糖尿病をより十
分にコントロールできる。１型真性糖尿病及び２型真性
糖尿病く２次的な島細胞不全の状態）の治療に利用され
る。

一１型真性糖尿病く又は２型真性糖尿病）のインシュリ
ン治療に伴う再発性の低血糖症の治療にアミリンもしく
はアミリン−ＮＨ２もしくはＣＧＲＰが使用される。

一不安定型糖尿病（低血糖症を発生する頻度の高い１型
糖尿病）の治療に使用される。

−インシュリン分泌腫瘍により生ずる疾病例えばインシ
ュローマを併発する恐れのある治療が難しい低血糖症の
治療に使用される。

本発明におけるアミリン（もしくはＣＧＲＰ）の作用モ
ードは次のように推定されている。

１、　アミリンもしくはアミリン−ＮＨ２はランゲルハ
ンス島、多分インシュリンを生成する細胞でもあるβ細
胞で生成される。１型糖尿病はランゲルハンス島のβＩ
Ｉｌ胞の破壊により発症する。これらの細胞がアミリン
もしくはアミリン−ＮＨ２を含んでいることから、１型
糖尿病はインシュリン及びアミリンもしくはアミリン−
ＮＨｌ□の不足に関連している可能性が高い。前記した
病態のときにはアミリンもしくはアミリン−８１１□は
ランゲルハンス島に存在しない。

２、　アミリン及びＣＧＲＰは、多数のモデル系におい
て島β細胞からのグルコース誘発インシュリン分泌速度
を調節することが公知である（Ａｈｒｅｎ　Ｂ　。

Ｈａｒｔｅｎｓｓｏｎ　Ｈ，Ｎｏｂｉｎ　Ａ、、”Ｅｆ
ｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｖａｎｅ−ｒ
ｅｌａｔｅｄ　ｐｅｐｔｉｄｅ（ＣＧＲＰ）　ｏｒ　１
ｓｌｅｔ　ｈｏｒｍｏｎｅｓｅｃｒｅｔｉｏｎ　ｉｎ　
ｔｈｅ　ｐｉｇ−旧ａｂｅｔｏｌｏｇｉａ　１９８７　
、３０：３５４〜３５９）。

３、　単離されたラットのヒラメ筋において、アミリン
は基底モード及びインシュリン刺激モードのグリコーゲ
ン合成率を減する（後記実施例参照）。

２及び３を総合的に考慮すると、アミリン（もしくはＣ
ＧＲＰ　）はインシュリン誘発のグリコーゲンとしての
グルコースの貯蔵に対して強力な調節作用を発揮する。

この作用メカニズムによってインシュリン耐性が２型糖
尿病で生ずることから、アミリンもしくはアミリン−Ｎ
Ｈ２　　（もしくはＣＧＲＰ　）の過剰分泌が前記した
病態でみられるインシュリン耐性の発生要因であろう。

上記した如きアミリン（もしくはＣＧＲＰ　）の作用は
、所与のグルコース刺激に関連するインシュリン遊離を
抑制し且つ（１型糖尿病の場合にはより重要である）グ
リコーゲンとしてのグルコース貯蔵率を減することによ
りインシュリンの低血糖化作用を調節し抑制する。従っ
て、アミリン（もしくはＣＧＲＰ）は、“インシュリン
耐性″を誘発すると共にインシュリンの低血糖化作用を
抑制すると考えられる。

真性糖尿病におけるアミリン製剤の効果は、アミリンが
循環系に入り得るかに依存する。このために、可溶性の
アミリン製剤が所望される。成る種の方法がアミロイド
の形態で存在するアミリンを可溶化”するために使用さ
れ得、これらの方法は他のソース由来のアミリンを可溶
化するためにも使用されるであろうと考えられている。

Ｃｏｏｐｅｒら、ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　ＡＣａｄ、
　ＳＣｉ、　ＵＳＡ、　８４．８１３２０〜８６２３８
６２０〜８６２３（１９８７）。前記した方法には、（
１）グアニジウム溶液、特に０．２Ｍリン酸−水素ナト
リウム／リン酸二水素ナトリウム中で緩衝化されたｐＨ
７，５のグアニジウム塩酸塩にアミリンを溶解させる方
法、 ■トリフルオロ酢酸／アセトニトリル溶液、特に１．０
％トリフルオロ酢酸／６７％アセトニトリル溶液にアミ
リンを溶解させる方法、 （３）ギ酸溶液、特に７０％ギ酸溶液にアミリンを溶解
させる方法、及び 〈４）超音波を用いてアミリンを溶解させる方法、が包
含される。

実験の結果、凍結乾燥すると、多分アミリンの物理的状
態が変化するためにアミリンがより可溶性になることも
指摘されている。

化学的に合成したアミリンの活性と天然ソース由来のア
ミリンの活性を比較した結果、ソースが異なると活性に
定伍的な差異が生ずることが判明した。この活性の差異
は、化学合成中に十分な生物学的活性を示すに必要な天
然コンフォメーションに分子が完全に再構成されないた
めに生ずると予測される。この一つの要因として、化学
的に合成した物質ではジスルフィド結合が完全に再構成
されないからであろう二従って、各仔ソースのアミリン
、即ち天然から抽出したアミリン及び化学的に合成した
アミリンの活性が分子の天然の第二及び第三構造（ｎａ
ｔｕｒａｌ　ｓｅ、ｃｏｎｄａｒｙ　ａｎｄ　ｔｅｒｔ
ｉａｒｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）の再椛成度の違いにより
異なるのであろうことを観察することは有意義である。

ｐＨ８の希釈水溶液中で分子を再構成すると生物学的活
性が生じた。合成物質はｐｔ１８の水中では溶解度が低
いが、合成方法により得られた物質を変性剤水溶液、例
えばグアニジウム又は尿素溶液、特に６．０Ｍ塩化グア
ニジウム又は８，０Ｍ尿素溶液中、特定のｐＨ１特に約
７．５〜９．０の弱アルカリ性ｐＨで再編成（ｒｅｆｏ
ｌｄｉｎａ）　　すると合成アミリンをうまく再構成す
ることができる。或いは、後続の再構成用溶液としてジ
メチルホルムアミドのような変性剤の非水溶液が効果的
である。前記した条件下で温和な酸化により、例えばフ
ェリシアン化カリウム溶液を使用するとか又は空気中の
酸素に露呈させるとかしてジスルフィド結合を再構成す
ると、最適なジスルフィド結合が再構成され得る。

治療の目的には、アミリン製剤の作用時間がインシュリ
ンと同様に異なることが有利である（Ｌａｒｎｅｒ、　
Ｊ、、　　”Ｉｎ５ｕｌｉｎ　ａｎｄ　０ｒａｌ　Ｈｙ
ｐｏａｌｙｃｅｍ−ｉＣＤｒｕｇｓ；　ｃ＋ｕｃａｇｏ
ｎ”（Ｇｌｉｍａｎ　　ら編、Ｔｈｅ　Ｐｈａｒ−ｍａ
ｃｏｌｏｇｉｃ　Ｂａ５ｉｓ　ｏｆ　Ｔｈｅｒａｐｅｕ
ｔｉｃｓ　　、第７版。

ＨａｃＨｉｌｌａｎ　１９８５．　ｐ、１５０１〜１５
０２）を参照されたい］。Ｌ記した目的のために、イン
シュリンに使用したと同様の方法がアミリンの治療製剤
を調製するために使用される。真性糖尿病、低血糖症及
び他の病態を治療するために、前記した製剤を単独で使
用しても適当な組合せのインシュリンと併用してもよい
。上記した方法及び製剤には、以下のものが包含される
。

（１）　ＩＩ　ａ　ｇ　ａ　ｄ　ｏ　ｒ　ｎらの方法［
”Ｐｒｏｔａｍｉｎｅ　Ｉｎ５ｕｌｉｎａｔｅ”。

ＪＡＮＡ　１０６：１７７〜１８Ｇ　（１９３６）］に
従って、アミリンを亜鉛及びプロタミンと反応させて調
製したアミリン製剤。こうして得られたアミリン製剤の
作用開始及び時間は、非複合化（ｎｏｎ−ｃｏｍｐｌｅ
ｘｅｄ）　７ミリンと比べて遅い： ■上記の如く調製したプロタミン−アミリンを非経口投
与に適した水性緩衝剤中に懸濁させた製剤：■亜鉛塩、
特に塩化亜鉛の存在下、適当な緩衝媒体中、特に中性ｐ
Ｈの媒体中でアミリンを結晶化させて製造した結晶化ア
ミリン（１掲したＬａｒｎｅｒの文献参照）； （４）非経口投与に適した、上記の如くして製造した結
晶化亜鉛アミリンを水性緩衝剤に懸濁させた懸濁液； ■結晶質アミリンの変性プロタミン亜鉛懸濁液。

この場合アミリン、亜鉛及びプロタミンの濃度を、作用
開始及び時間が可溶性アミリンとプロタミン形態のアミ
リンとの間となるように調整してもよい： ■非経口投与に適した、水性緩衝剤中で処方した上記■
の物質； ■非経口投与に適した、ｐｌ＋７．２〜７．５の塩化ナ
トリウム／酢酸ナトリウム溶液に再懸潤させた結晶質ア
ミリン； ■非経口投与に適した、高ｐＨで沈澱させた非晶質イン
シュリン；及び ■非経口投与に適した、結晶質及び非晶質アミリンの混
合物。

前記した各製剤は皮下による非経口投与に適している。

アミリン製剤は、ｐＨが中性のときにより安定である。

アミリンの中性製剤を、他の中性アミリン製剤又は適当
なインシュリン製剤と混合して臨床範回を拡げることも
可能である（１掲したｔａｒｎｅｒの文献参照）。

各秤ソース由来のアミリンをヒトにおける治療に適した
レベルに精製するために、各種方法が使用され得る。ア
ミリンは、濃縮、ゲル濾過、クロマトグラフィー及び逆
相クロマトグラフィー、特にＨＰＬＣ等の濃縮方法を組
合せることによりヒト膵臓から非常に高濃度で単離され
得る。例えば、大規模にアミリンを精製する場合には、
ＩＩＰＬＣ以外のクロマトグラフィー例えば迅速プロテ
ィン液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）が有用であり
、適当である。他のクロマトグラフィー例えばイオン交
換。

分子篩又は疎水性相互作用クロマトグラフィー（ｈｙｄ
ｒｏｐｈｏｂｉｃ　１ｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｃｈｒｏ
ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を使用することも可能である。

島細胞組織もしくは全膵臓組織の移植又は島細胞インブ
ラントによる１型真性糖尿病の治療も非常に重要な治療
となるであろう。前記した治療の効果の一部はアミリン
を産生及び分泌する能力が置換される結果生ずると考え
られるので、治療期間中アミリン量をモニタリングする
ことが必要である。同様に、低血糖症、１型糖尿病及び
各種アミリン欠乏状態の治療効果を調べるために、血液
、血清又は血漿中のアミリン量をモニターすることも必
要であろう。

実施例 上記した３、即ちアミリンが基底モード及びインシュリ
ン刺激モードにおいてグリコーゲン合成率を減すること
を立証するために本実験を行った９゜−挽断食後ラット
を層殺し、そのヒラメ筋を抽出し、生理学的ｐＨの緩衝
液中でインキュベートした。　ｃ−ａｉグルコース及び
冷（非標ｉ＞グルコースを添加し、グルコースがグリコ
ーゲンに合体される率をグリコーゲンを抽出し最高６時
間間隔で測定した。実験は、インシュリン１．１０゜１
００及び１０００μｕ／ａｊの存在下で行った。実験の
半分は１２０ナノモル／１−アミリンの存在下で行った
。

結果を添附図面に示す。因はインシュリン濃度に対する
グリコーゲン合成率を示すグラフである。

０はアミリンの非存在下で行った実験結果を表わし、Ｏ
は１５μモル／ｊ−アミリンの存在下で行った実験結果
を表わす。インシュリン１及び１００μｕ／ｊ＋１２に
おける８値は１１回の実験結果の平均値であり、インシ
ュリン１０及び１０００μｕ／ｄにおける８値は５回の
実験結果の平均値である。

インシュリンが生理学的濃度（１〜１００μｕ／ｄ　）
のときには、グリコーゲン合成がアミリンの存在下で緩
慢になる。Ｈａｎｎ　Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕテストにより
、１及び１００μＵ／−において統計的に有為な差が認
められた（　ｐ　＜　０．０５）。

アミリンによるグリコーゲン合成抑制はインシュリン濃
度が低いとき、多分ゼロのときにも持続すると考えられ
る。アミリンはインシュリンの作用とは異なる作用を有
しており、その作用はインシュリン作用の直接拮抗作用
により調節されないと考えられる。このことは、アミリ
ンが赤血球細胞のリセブタからのインシュリンを置換す
ることができないことから裏付けられる。

【図面の簡単な説明】

添附図面はインシュリン濃度に対するグリコーゲン合成
率を示すグラフである。 図面の浄書（内容に変更なし） １　　　　　　　　１０　　　　　　　７００　　ノ０
Ｃｏｎｃａｏｎ　　ｏｆ　　１ｒｓｕｌｉｎ（ｐＵ／ｍ
ｌ）手続補正書 昭和６３年１０月２５６ １、事件の表示　　昭和６３年特許Ｈ第２１２３３２号
２、発明の名称　　真性糖尿病の治療 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 名　称　　　アミリン・コーポレイション５、補正命令
の日付　　　自　発 ６、補正により増加する請求項の数 ７、補正の対象　　願書中、出願人の代表者の欄、図面
及び委任状

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）真性糖尿病又は低血糖症の治療に使用される、ア
   ミリンもしくはアミリン−ＮＨ＿２もしくはＣＧＲＰ、
   又はアミリンもしくはアミリン−ＮＨ＿２もしくはＣＧ
   ＲＰの官能性ペプチド断片、又はアミリンもしくはアミ
   リン−ＮＨ＿２もしくはＣＧＲＰもしくは断片の保存変
   種。 （２）インシュリンとアミリンもしくはアミリン−ＮＨ
   ＿２もしくはＣＧＲＰ、又はアミリンもしくはアミリン
   −ＮＨ＿２もしくはＣＧＲＰの官能性ペプチド断片、又
   はアミリンもしくはアミリン−ＮＨ＿２もしくはＣＧＲ
   Ｐもしくは断片の保存変種とを含む真性糖尿病又は低血
   糖症治療用組成物。 （３）インシュリン対アミリンもしくはアミリン−ＮＨ
   ＿２もしくはＣＧＲＰ（又は断片又は変種）のモル比が
   １００：１〜０．１：１である請求項２に記載の組成物
   。 （４）非経口投与に適した溶液の形態にある請求項１〜
   ３のいずれかに記載の薬剤。 （５）アミリン、アミリン−ＮＨ＿２、ＣＧＲＰ、その
   官能性ペプチド断片及びアミリンもしくはアミリン−Ｎ
   Ｈ＿２もしくはＣＧＲＰもしくは断片の保存変種から選
   択された活性成分を非経口投与に適した溶液の形態とす
   る真性糖尿病又は低血糖症治療用薬剤の製法。 （６）活性成分であるインシュリンとアミリン、アミリ
   ン−ＮＨ＿２、ＣＧＲＰ、その官能性ペプチド断片又は
   アミリンもしくはアミリン−ＮＨ＿２もしくはＣＧＲＰ
   もしくは断片の保存変種を非経口投与に適した溶液の形
   態とする真性糖尿病又は低血糖症治療用組成物の製法。 （７）アミリンもしくはアミリン−ＮＨ＿２もしくはＣ
   ＧＲＰ、又はアミリンもしくはアミリン−ＮＨ＿２もし
   くはＣＧＲＰの官能性ペプチド断片、又はアミリンもし
   くはアミリン−ＮＨ＿２もしくはＣＧＲＰもしくは断片
   の保存変種を患者に投与することからなる真性糖尿病又
   は低血糖症を患つている哺乳類患者の治療方法。 （８）インシュリンをも患者に投与する請求項７に記載
   の方法。 （９）患者にインシュリン及びアミリンもしくはアミリ
   ン−ＮＨ＿２もしくはＣＧＲＰ（又は断片又は変種）を
   １００：１〜０．１：１のモル比で投与する請求項８に
   記載の方法。 （１０）インシュリン及びアミリンもしくはアミリン−
   ＮＨ＿２もしくはＣＧＲＰ（又は断片又は変種）からな
   る組成物を非経口投与する請求項８又は９に記載の方法
   。 （１１）真性糖尿病又は低血糖症の治療に有用なアミリ
   ンもしくはアミリン−アミド、又はアミリンもしくはア
   ミリン−アミドの活性サブ断片からなる可溶性製剤。 （１２）ギ酸処理により可溶化された請求項１１に記載
   の製剤。 （１３）ギ酸が７０％ギ酸である請求項１２に記載の製
   剤。 （１４）グアニジウム塩酸塩処理により可溶化された請
   求項１１に記載の製剤。 （１５）グアニジウム塩酸塩が、リン酸一水素又はリン
   酸二水素ナトリウムを含有する緩衝剤中の６．０Ｍグア
   ニジウム塩酸塩である請求項１４に記載の製剤。 （１６）緩衝化されたグアニジウム塩酸塩の最終濃度が
   ６．０Ｍである請求項１５に記載の製剤。 （１７）超音波により可溶化された請求項１１に記載の
   製剤。 （１８）ナトリウム又はアンモニウム塩、特に重炭酸若
   しくは炭酸アンモニウム又は重炭酸若しくは炭酸ナトリ
   ウムへの溶解により可溶化された請求項１１に記載の製
   剤。 （１９）凍結乾燥されたアミリンもしくはアミリン−ア
   ミド、又はアミリンもしくはアミリン−アミドの活性サ
   ブ断片からなる製剤。 （２０）トリフルオロ酢酸及び／又はアセトニトリル処
   理により可溶化された請求項１１に記載の製剤。 （２１）トリフルオロ酢酸が約０．１〜１．０％トリフ
   ルオロ酢酸である請求項２０に記載の製剤。 （２２）アミリンもしくはアミリン−アミド、又はアミ
   リンもしくはアミリン−アミドの活性サブ断片からなる
   徐放性製剤。 （２３）更にインシュリンを含む請求項２２に記載の製
   剤。 （２４）プロタミンを用いて処方された請求項２２又は
   ２３に記載の製剤。 （２５）亜鉛塩を用いて処方された請求項２２又は２３
   に記載の製剤。 （２６）亜鉛塩が塩化亜鉛である請求項２５に記載の製
   剤。 （２７）プロタミン及び亜鉛塩を用いて処方された請求
   項２２又は２３に記載の製剤。 （２８）亜鉛塩が塩化亜鉛である請求項２７に記載の製
   剤。 （２９）結晶化されたアミリンもしくはアミリン−アミ
   ド、又はアミリンもしくはアミリン−アミドの活性サブ
   断片からなる製剤。 （３０）更に非経口投与に適した緩衝剤及び亜鉛塩を含
   む請求項２９に記載の製剤。 （３１）亜鉛塩が塩化亜鉛である請求項３０に記載の製
   剤。 （３２）非経口投与に適した緩衝剤中で亜鉛塩を用いて
   処方されたアミリンもしくはアミリン−アミド、又はア
   ミリンもしくはアミリン−アミドの活性サブ断片からな
   る懸濁液。（３３）亜鉛塩が塩化亜鉛である請求項３２
   に記載の懸濁液。 （３４）結晶が酢酸ナトリウム／塩化ナトリウム溶液中
   に再懸濁されている、アミリン及び２価の亜鉛カチオン
   を含む結晶化製剤。 （３５）溶液のｐＨが約７．２〜７．５である請求項３
   ４に記載の製剤。 （３６）治療中の患者の血液、血清又は血漿中のアミリ
   ン量を測定することからなる真性糖尿病又は低血糖症の
   治療をモニターする方法。 （３７）治療が島細胞移植である請求項３６に記載の方
   法。 （３８）治療が膵臓移植である請求項３６に記載の方法
   。 （３９）治療が膵臓組織の移植である請求項３６に記載
   の方法。 （４０）治療がアミリン治療であるかもしくはアミリン
   治療を含む請求項３６に記載の方法。 （４１）ジスルフィド結合が完全である請求項１１、１
   ９、２２、２３、２９又は３２に記載の製剤。 （４２）ジスルフィド結合が完全でない請求項１１、１
   ９、２２、２３、２９又は３２に記載の製剤。 （４３）アミリン、アミリン−アミド又はそのサブ断片
   を適当な変性剤中に溶解し、適当な酸化剤を用いて酸化
   することからなるアミリン、アミリン−アミド又はその
   サブ断片の製造方法。 （４４）酸化剤がフェリシアン化カリウムである請求項
   ４３に記載の方法。 （４５）変性剤が塩化グアニジウム又は尿素である請求
   項４３に記載の方法。