JP6014449B2 - レーザー走査顕微鏡装置 - Google Patents
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Description
前記各レーザー光を相互に異なる2つの周波数の光にそれぞれ変調し、かつ2つの周波数を有した光を相互に異なる方向に出射する光変調器と、
光変調器からの光を1次元走査もしくは2次元走査する走査光学素子と、
走査光学素子からの光の一部を光路から分離するビームスプリッターと、
前記ビームスプリッターで分離された各々の光を受光し、光電変換して各々のビート信号を送り出す第1の受光素子群と、
瞳位置を有し、前記合成光学系からの光を対象物に出射する対物レンズと、
前記光変調器で相互に異なる方向に出射された各々の光を対象物上で近接させる瞳伝達レンズ系と、
対象物からの反射光あるいは透過光を受光し、各々の光を光電変換して各々のビート信号を送り出す第2の受光素子群と、
二つの受光素子群の対応するいずれかの波長に該当する受光素子からのビート信号に基づいて得られた位相同士の位相差を検出する位相比較器と、
前記位相比較器の位相情報を取得して得たデータに基づき対象物の情報を得るデータ処理部と、
を含むことを特徴とするレーザー走査顕微鏡装置とされるものである。
また、本発明に係わるビート信号は、前記受光素子の2分割以上された受光素子のすべての受光素子の和信号、または、2分割以上された分割素子の対応する位置にある受光素子同士の差信号より取得することが好適である。
合成光学系から出射された相互に異なる波長の少なくとも2つのレーザー光を相互に異なる周波数の2つの光に変調させつつ相互に異なる方向に光変調器が出射する。つまり、周波数fcと周波数fmの電気信号で光変調器である例えば音響光学素子を駆動すると、周波数fcをキャリアとするAM変調により、周波数fc+fmと周波数fc-fmを有する2つのビームが発生することから、少なくとも計4つのビームが存在するようになる。
λ=λ1λ2/|λ1−λ2|
図1は、本実施例に係るレーザー走査顕微鏡装置の構成を示すブロック図である。まず、レーザー光がそれぞれ出射されるレーザー光源11及びレーザー光源12を含む合成光学系1について述べる。合成光学系1内のレーザー光源11及びレーザー光源12は、それぞれHe-Ne等のガスレーザー、半導体レーザー、もしくは固体レーザーであり、コヒーレント光をそれぞれ発生する。
瞳伝達レンズ系5に入射した光は、拡大率分だけお互いの角度差を減じることができる。音響光学素子3とビームスプリッター7との間に配置されている瞳伝達レンズ系5は、音響光学素子3の出射面位置を次の2次元走査デバイス6の図示しない走査素子面に共役にするための光学系であり、また、拡大することにより、±1次回折光の出射角度差を小さくしている。例えば、拡大率をm倍にすれば、角度のタンジェントの比として、1/mにすることができる。従って、音響光学素子3の変調周波数fmを高くしても、拡大率mを調整することで、2つのレーザー光であるビームを近接させることができる。
対物レンズ17で絞られた光は、図2に示すように近接した2つのビームLA、LBとなり、対象物Sに送られる。なお、ビームLAの複素振幅EaおよびビームLBの複素振幅Ebは、下記式のようになる。
Ea=Aexpj(2π(fo+fc+fm)t)
Eb=Bexpj(2π(fo+fc-fm)t+δ)
この複素振幅Ebの式のδは、ビームLAを基準としたビームLBの高さ方向の位相差を表わし、foは光の周波数を表す。なお、前述したようにこの2つのビームの間隔は、音響光学素子3に加えた変調周波数fmによって決定されるので、走査速度とは無関係である。
I=(Ea+Eb)(Ea+Eb)*=A2+B2+2ABcos(2π*2fmt+δ)
これに伴い、図1に示す位相比較器である信号比較器15を用いて、周波数2fmのヘテロダイン検波の位相比較を行うことにより、位相差δを測定することができる。このようにして、位相情報を取得する。
1つのレーザー光による一波長を用いた一連の流れを述べてきたが、本実施例では、合成光学系1にて合成された2種類の波長のレーザー光を用いている。このため、2つの波長を用いた場合の光学系と効果を以下に具体的に述べる。
θ1=2πdn/λ1
θ2=2πdn/λ2
この結果として、θ1とθ2を測定すれば、下記の波長λと等価な波長を実質的に与えたことになる。
λ=λ1λ2/|λ1−λ2|
すなわち、523nmと532nmの場合には、30915nmの波長に相当する。従って、対象物Sの位相差を±πまで深さ、屈折率分布測定等へ適用できるとすれば、深さは±15000nm程度の測定が可能となる。
θ1=2π*m+Θ1
θ2=2π*m+Θ2
このことから、θ1−θ2は以下のように求まる。
θ1−θ2=2πdn(1/λ1−1/λ2)
この式より、dを算出し、mを決定し、θ1あるいはθ2のそれぞれの位相からdを算出しなおしても良い。
すなわち、図1において、分離光学素子80及び、受光素子81または受光素子83のどちらか一つを省き、さらに分離光学素子90及び、受光素子91または受光素子93のどちらか一つを省くことにする。このようにして、たとえば1つの波長で走査範囲全域を走査した後、波長を切り替えて他の波長で走査範囲全域を走査する。これは、ビデオレートの走査の場合、フレームごとに切り替えることに相当する。この結果として得られた真の位相θ1、θ2を基にして、上記した方法によって面外の測定レンジの拡大を行うことができる。
以上のように、2つの波長を同時に照射しなければ、上記と実質上同様の効果をもたらすことができることになる。
さて、上記のように音響光学素子3にキャリア信号fcと変調信号fmの掛け算信号(DSB変調)を与えると、実質上、回折光は2つの僅かに分離したfc±fmの周波数を持った光となる。対物レンズ17で収束されるとΔxだけ分離した2つのビームとなり、各ビームプロファイルをu(x)とする。この場合、対物レンズ17から離れた場所では、表面プロファイルとビームプロファイルの積のフーリエ変換となる。
E=∫(Aejθ(x) u(x)ejkxdx・ej(ωc-ωm)t+Aejθ(x+Δx) u(x)ejkxdx・ej(ωc+ωm)t)
I(k)=A2∫ej(θ(x)-θ(x'+Δx') u(x) u(x’) ejk(x-x')dxdx’e-j2ωmt
+A2∫e-j(θ(x)-θ(x'+Δx') u(x) u(x’) ejk(x-x')dxdx’ej2ωmt・・・・・(1)式
ここでまず、2つの受光素子の和信号がどのようになるかを考える。対象物Sから離れた位置では、フーリエ変換面であると考えられるので、受光素子で受光できる最大空間周波数をKmaxとすると、和信号では強度Iが下記式から求められる。
I=∫I(k)dk(積分範囲は-KmaxからKmax)
=A2∫cos(θ(x)−θ(x’+Δx’)−2ωmt) u(x) u(x’)sin(Kmax(x-x’))/(x-x’)dxdx’
sin(Kmax(x-x’))/(x-x’)=Kδ(x-x’)となるので、以下の(2)式のようになる。
I=A2∫cos(θ(x) −θ(x+Δx) −2ωmt) u(x)2dx・・・・・(2)式
(2)式を変形すると下記の式を得る。
Iq=A2∫cos(θ(x)−θ(x+Δx) u(x)2dx)・cos(2ωmt)
Ii=A2∫sin(θ(x)−θ(x+Δx) u(x)2dx)・sin(2ωmt)
Θ=tan-1(∫sin(θ(x)−θ(x+Δx)) u(x)2dx/∫cos(θ(x)−θ(x+Δx)) u(x)2dx)・・・・・(3)式
I=∫I(k)dk(積分範囲は0からKmax)−∫I(k)dk(積分範囲は−Kmaxから0)
=A2∫sin(θ(x)−θ(x’+Δx’)−2ωmt) u(x) u(x’)( cos(Kmax(x-x’)-1)/(x-x’)dxdx’
(cos(Kmax(x-x’)-1)/(x-x’)=δ’(x-x’)+1/x(δ(x)-1)となるので、下記(4)式のようになる。
I=A2∫d/dx(sin(θ(x)―θ(x+Δx)―2ωmt) )u(x)2dx・・・・・(4)式
さらに、この(4)式を変形すると、下記のようになる。
Iq=A2∫d/dx(sin(θ(x)−θ(x+Δx)) u(x)2dx・cos(2ωmt)
Ii=−A2∫d/dx(cos(θ(x)−θ(x+Δx)) u(x)2dx・sin(2ωmt)
Θ=tan-1(−∫d/dx(cos(θ(x)−θ(x+Δx)) u(x)2dx/∫d/dx(sin(θ(x)−θ(x+Δx))u(x)2dx)・・・・・(5)式
まず、(3)式では、ビームの中心距離Δxだけ離れた2点の位相差をu(x)の重み関数で、平滑化した結果として得られる位相差を示しているので、ビーム内の平均的な位相差を示している。これは、微分干渉顕微鏡と等価な処理である。
実施例1の分離光学素子80及び受光素子81、83を取り払い、対象物Sがない状態、あるいは対象物Sがあってもかなりデフォーカスした状態で、2波長のレーザー光を同時に照射しつつ2次元走査デバイス6により、これらレーザー光を走査する。
図4は、この透過型のレーザー走査顕微鏡装置に係る光学系のブロック図を示している。主要な光学系は実施例1と同じなので説明を割愛するが、図4に示す本実施例では、対物レンズ17で集光された光は透過することになるので、対象物Sを挟んで対物レンズ17と対向して、図示しない光電変換部を有した受光素子91、93が配置されることが特徴である。そして、これら受光素子91、93は、光軸Lを中心として音響光学素子3によりビームが分離された方向に沿ってそれぞれ設置された、少なくとも2つ以上の分割受光素子91A、91B、93A、93Bから成る。
本実施例の場合、2次元走査で位相情報を取得することができるが、特に、マイクロ流路に細胞等を流す場合のモニターや細胞形状の判断を行った後に細胞を種わけする等の応用に対して、絶大な効果をもたらす。
図5は、本実施例で適用される空間変調器を示した概念図である。この図5(A)に示すような空間変調器53を構成する磁性ガーネット膜53Aをピクセルごとに電圧または電流により駆動できるように、電極(図示せず)を付して、この空間変調器53を図1における音響光学素子3の位置に配置する。そして、磁性ガーネット膜53Aの各ピクセルに電圧、電流を印加することで、磁気光学効果によって各ピクセルの偏光面が回転するが、この偏光面の回転の程度は、印加する電圧、電流の大きさにより決定される。このような構造の空間変調器53として、ピクセル数が128×128であり、15nsの応答速度を有しているものがある。
Acos{2π/d(x−vt)}=A/2(expj{2π/d(x−vt)}+expj{−2π/d(x−vt)})
このため、±1次回折光がfm=±2πv/dの変調周波数を有することになる。尚、強度の場合には、0次の直流成分が生じるが、DC成分なので、ビート信号に影響はない。
2 コリメーターレンズ
3 音響光学素子
4 AODドライバー
5 瞳伝達レンズ系
6 2次元走査デバイス
7 ビームスプリッター
10 瞳伝達レンズ系
11 レーザー光源
12 レーザー光源
13 合成プリズム
14 スイッチャー
15 信号比較器
16 データ処理部
17 対物レンズ
53 空間変調器
53A 磁性ガーネット膜
80 分離光学素子
90 分離光学素子
81,83,91,93 受光素子
S 対象物
Claims (10)
- 相互に異なる波長の少なくとも2つのレーザー光を合成しつつ出射する合成光学系と、
前記各レーザー光を相互に異なる2つの周波数の光にそれぞれ変調し、かつ2つの周波数を有した光を相互に異なる方向に出射する光変調器と、
光変調器からの光を1次元走査もしくは2次元走査する走査光学素子と、
走査光学素子からの光の一部を光路から分離するビームスプリッターと、
前記ビームスプリッターで分離された各々の光を受光し、光電変換して各々のビート信号を送り出す第1の受光素子群と、
瞳位置を有し、前記合成光学系からの光を対象物に出射する対物レンズと、
前記光変調器で相互に異なる方向に出射された各々の光を対象物上で近接させる瞳伝達レンズ系と、
対象物からの反射光あるいは透過光を受光し、各々の光を光電変換して各々のビート信号を送り出す第2の受光素子群と、
二つの受光素子群の対応するいずれかの波長に該当する受光素子からのビート信号に基づいて得られた位相同士の位相差を検出する位相比較器と、
前記位相比較器の位相情報を取得して得たデータに基づき対象物の情報を得るデータ処理部と、
を含むことを特徴とするレーザー走査顕微鏡装置。 - 対象物からの少なくとも2波長の反射光を別々の光路に分離する分離光学素子を有し、
対象物からの反射光を前記ビームスプリッターで反射し、該分離光学素子が分離した各々の光を第2の受光素子群が受光することを特徴とする請求項1記載のレーザー走査顕微鏡装置。 - 対象物からの少なくとも2波長の透過光を別々の光路に分離する分離光学素子を有し、
該分離光学素子が分離した各々の透過光を第2の受光素子群が受光することを特徴とする請求項1記載のレーザー走査顕微鏡装置。 - 前記位相比較器が、二つの受光素子群の対応するいずれかの波長に該当する受光素子それぞれの2つの周波数差に相当するビート信号の位相と、前記対象物がないかあるいは前記対象物があっても影響がないほど前記対物レンズをデフォーカスした状態での位相と、の位相差を検出することを特徴とする請求項1から3のいずれかに記載のレーザー走査顕微鏡装置。
- 前記二つの受光素子群を1つの受光素子群で構成し、少なくとも2波長のレーザー光を出射する合成光学系から相互に異なるタイミングで2波長のレーザー光を出射し、波長ごとの位相情報によりデータを処理することを特徴とする請求項1から3のいずれかに記載のレーザー走査顕微鏡装置。
- 前記光変調器は、前記合成光学系から出射されたレーザー光を入射させる音響光学素子と該音響光学素子にキャリア交流信号(fc)と正弦波信号(fm)を印加する信号発生器とを含むことを特徴とする請求項1から5のいずれかに記載のレーザー走査顕微鏡装置。
- 前記光変調器は、前記合成光学系から出射されたレーザー光を入射させる空間変調器と該空間変調器に振幅または位相情報として正弦波状の格子縞を書き込み、前記格子縞をキャリア交流信号(fc)と正弦波信号(fm)を印加する信号発生器に基づき一定方向に移動させることを特徴とする請求項1から5のいずれかに記載のレーザー走査顕微鏡装置。
- 前記走査光学素子は、ガルバノミラー、レゾナントミラーの1次元走査素子、2つの1次元走査デバイスと瞳伝達レンズ系よりなる2次元走査光学系、あるいは、1次元または2次元のマイクロミラーデバイスとされることを特徴とする請求項1から7のいずれかに記載のレーザー走査顕微鏡装置。
- 前記受光素子群を構成する受光素子は、前記光変調器で異なる方向に出射された光の分離方向に垂直な方向に少なくとも2分割された分割受光素子とされることを特徴とする請求項1から8のいずれかに記載のレーザー走査顕微鏡装置。
- 前記ビート信号は、前記受光素子の2分割以上された受光素子のすべての受光素子の和信号、または2分割以上された分割素子の対応する位置にある受光素子同士の差信号より取得することを特徴とする請求項1から9のいずれかに記載のレーザー走査顕微鏡装置。
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