JP2003523403A - Ｉｌ−１８阻害剤の用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、肝傷害の治療および／または予防用医薬の製造における、ＩＬ−１８阻害剤の用途に関する。本発明はさらに、関節炎、とくに慢性関節リウマチの治療および／または予防用医薬の製造における、ＩＬ−１８阻害剤の用途に関する。これに加えて、本発明はさらに、炎症性腸疾患、とくにクローン病および潰瘍性結腸炎の治療および／または予防用医薬の製造における、ＩＬ−１８阻害剤の用途に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 ［技術分野］ 本発明は、さまざまな病的な状況におけるＩＬ−１８阻害剤の治療適用に関す
る。さらに詳しくは、本発明は関節炎の治療および／または予防、肝疾患の治療
および／または予防、ならびに炎症性の腸疾患（ＩＢＤ）の治療および／または
予防に関する。

【０００２】 ［発明の背景］ １９８９年に、マウスの脾臓細胞から得られるインターフェロン−γ（ＩＦＮ
−γ）を誘導する、エンドトキシン誘導血清の活性が記載された（Micallef et
al., 1996）。この血清の活性はＩＦＮ−γの直接的な誘導物質として作用する
のではなく、むしろＩＬ−２またはマイトジェンといっしょに共刺激剤として作
用する。ポスト−エンドトキシンマウス血清から活性を精製しようと試みたとこ
ろ、おそらく均質の５０〜５５ｋＤａのタンパク質であることが示された。ほか
のサイトカインがＩＦＮ−γ産生に対して共刺激剤として働くことができるため
、ＩＬ−１、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６またはＴＮＦに対する中和抗体で血
清活性の中和を試みたが失敗に終わったことで、該タンパク質は異なる因子であ
ると示唆された。１９９５年に同科学者らによって、ＩＦＮ−γ産生に対するエ
ンドトキシンによって誘導される共刺激剤は、Ｐ．アクネス（P. acnes）によっ
てあらかじめ調整されたマウス由来の肝臓の抽出物内に存在することが証明され
た（Novick et al., 1992）。このモデルにおいて肝臓のマクロファージ数（ク
ッパー細胞）は増加し、バクテリアのリポ多糖（ＬＰＳ）の低い投与量（あらか
じめ調整されていないマウスでは致死ではない）が、これらマウスにおいては致
死量であった。ＩＦＮ−γ誘導因子（ＩＧＩＦ）と名づけられ最近インターロイ
キン−１８（ＩＬ−１８）と呼ばれるその因子が、Ｐ．アクネス処理されたマウ
スの肝臓１２００グラムから均質物に精製された。精製されたＩＬ−１８のアミ
ノ酸配列に基づき得られた変性オリゴヌクレオチドは、マウスＩＬ−１８ｃＤＮ
Ａをクローン化するのために使用された（Novick et al., 1992）。ＩＬ−１８
は１８〜１９ｋＤａの１５７アミノ酸からなるタンパク質で、データベースに掲
載されるどのペプチドとも明らかに類似性がなかった。ＩＬ−１８およびインタ
ーロイキン−１２（ＩＬ−１２）のメッセンジャーＲＮＡは、クッパー細胞およ
び活性化マクロファージにおいて容易に検出された。組換えＩＬ−１８は、おそ
らく別の経路を介し、ＩＬ−１２よりもより強力にＩＦＮ−γを誘導するようで
ある（Novick et al., 1992）。エンドトキシンによって誘導される血清活性と
同様に、ＩＬ−１８は単独ではＩＦＮ−γを誘導しないが、主にマイトジェンま
たはＩＬ−２との共刺激剤として機能する。ＩＬ−１８は、おそらくＩＬ−２に
依存した経路を介してＴ細胞の増殖を促進し、インビトロにおいてＴｈ１サイト
カイン産生を促進し、そして増強されたＩＦＮ−γ産生に関してはＩＬ−１２を
組み合わせた場合に相乗作用を示す（Maliszewski et al., 1990）。

【０００３】 マウスＩＬ−１８の中和抗体は、あらかじめＰ．アクネスで調整されたマウス
の低い投与量のＬＰＳによる致死を予防することが示された。このほかにも、あ
らかじめ調整されたマウスにおけるＬＰＳ致死性のメディエーターとしてのＩＦ
Ｎ−γの重要性について報告された。たとえば、抗ＩＦＮ−γ中和抗体は、シュ
ワルツマン様ショック（Shwartzman-like shock）からマウスを保護する（Fantu
zzi et al., 1998）、そしてガラクトサミン処理されたＩＦＮ−γ受容体欠損マ
ウスは、ＬＰＳによって誘導される死に対して耐性である（Byrn, 1990）。した
がって、マウスＩＬ−１８の中和抗体が、Ｐ．アクネスであらかじめ調整された
マウスを致死のＬＰＳから保護することは予想されていなかった（Novick et al
., 1992）。抗マウスＩＬ−１８処理もまた、深刻な肝臓細胞毒性から生存マウ
スを保護する。

【０００４】 マウスのフォームがクローニングされた後、ＩＬ−１８に対するヒトｃＤＮＡ
配列が１９９６年に報告された（Okamura et al., 1995）。組換えヒトＩＬ−１
８は天然のＩＬ−１８活性を示す（Okamura et al., 1995）。ヒト組換えＩＬ−
１８は、ヒトＴ細胞における直接的なＩＦＮ−γ誘導活性はないが、ＩＦＮ−γ
およびほかのＴ−ヘルパー細胞１（Ｔｈ１）サイトカイン産生のための共刺激剤
として作用する（Okamura et al., 1995）。今まで、ＩＬ−１８は、主にＴｈ１
サイトカイン産生のための共刺激剤として（ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２および顆粒細
胞マクロファージコロニー刺激因子）（Izaki, 1978）、およびマウスナチュラ
ルキラー細胞クローンのＦＡＳリガンドに仲介される細胞毒性のための共刺激剤
として（Novick et al., 1992）考えられている。

【０００５】 影響を受けた組織からＩＬ−１８をクローニングし、ＩＬ−１８遺伝子発現を
研究することによって、自己免疫疾患とこのサイトカインとの詳細な関連性が見
出された。肥満でない糖尿病（non-obese diabetic）（ＮＯＤ）のマウスは、シ
クロホフスァミドの単独注射によって促進および同時進行され得る、自己免疫イ
ンスリン炎および糖尿病に自然に進行する。ＩＬ−１８ｍＲＮＡは、初期段階の
インスリン炎のＮＯＤマウスのすい臓における逆転写ＰＣＲによって明らかにさ
れた。ＩＬ−１８のｍＲＮＡのレベルは、シクロホフスァミドの処理後、ＩＦＮ
−γのｍＲＮＡの増加に先だって急激に増加し、糖尿病を発症した。興味深いこ
とに、それらの動力学はＩＬ−１２−ｐ４０のｍＲＮＡの動力学と似ており、個
々のｍＲＮＡレベルは密接に相関する。すい臓ＲＮＡ由来のＩＬ−１８ｃＤＮＡ
のクローニングついで配列決定により、クッパー細胞およびインビボにおける活
性化前のマクロファージからクローニングされたＩＬ−１８配列との同一性が明
らかになった。また、ＮＯＤマウスのマクロファージは、シクロホフスァミドに
応答してＩＬ−１８遺伝子を発現したが、並行して処理されたＢａｌｂ／ｃマウ
ス由来のマクロファージでは応答しなかった。したがって、ＩＬ−１８発現は、
自己免疫ＮＯＤマウスにおいて異常に調節され、糖尿病発症に密接に関連してい
る（Novick et al., 1992）。

【０００６】 ＩＬ−１８は、Ｔｈ１細胞におけるＦａｓリガンドの機能的活性を増大させる
ことによる免疫調節または炎症性において潜在的な役割を担っている（Conti et
al., 1997）。ＩＬ−１８はまた、副腎皮質において発現され、したがって、ス
トレスのある経験につづく免疫系を調節する際に重要役割を担う分泌型の神経−
免疫調節剤であり得る（Chater, 1986）。

【０００７】 インビボにおいて、ＩＬ−１８は、ＩＬ−１８前駆体の切断によって形成され
、その内因性の活性はＰ．アクネスおよびＬＰＳに仲介される致死性におけるＩ
ＦＮ−γ産生を説明するように思われる。成熟ＩＬ−１８は、ＩＬ−１β変換酵
素（１Ｌ−１ベータ−変換酵素、ＩＣＥ、カスパーゼ−１）によって、その前駆
体から産生される。

【０００８】 ＩＬ−１８受容体は、リガンドの結合において共作用する、少なくとも２つの
成分からなる。ＩＬ−１８に対する高親和性および低親和性の結合部位がマウス
ＩＬ−１２に刺激されるＴ細胞において見出され（Yoshimoto et al., 1998）、
多鎖受容体複合体（multiple chain receptor complex）であることが示唆され
る。２つの受容体サブユニットはこれまでに同定され、どちらもＩＬ−１受容体
ファミリーに属している（Parnet et al., 1996）。ＩＬ−１８のシグナルトラ
ンスダクションはＮＦ−κＢの活性化を含む（DiDonato et al., 1997）。

【０００９】 いくつかの既知のサイトカイン結合タンパク質は、可溶性のサイトカイン受容
体であり、それらのそれぞれの細胞表面サイトカイン受容体の細胞外リガンド結
合ドメインに相当する。それらは、細胞表面受容体に共通したｍＲＮＡ前駆体の
選択的スプライシング、または細胞表面受容体のタンパク質分解性切断のどちら
かによって得られる。今までに、このような可溶性受容体は記載されており、と
くに、ＩＬ−６およびＩＦＮ−γの可溶性受容体（Nakamura et al., 1989）、
ＴＮＦの可溶性受容体（Dao et al., 1996; Engelmann et al., 1989）、ＩＬ−
１およびＩＬ−４の可溶性受容体（John, 1986）、ＩＦＮ−α／βの可溶性受容
体（Mizushima and Nagata, 1990）などを含む。オステオプロテグリン（Osteop
rotegrin）（ＯＰＧ、破骨細胞阻害因子−ＯＣＩＦとしても知られる）と呼ばれ
ＴＮＦＲ／Ｆａｓファミリーのメンバーである１つのサイトカイン結合タンパク
質は、分泌タンパク質としてのみ存在する可溶性受容体の最初の例であると思わ
れる（Anderson, 1997; Bollon, 1980）。

【００１０】 最近、ＩＬ−１８に高い親和性を有する可溶性タンパク質がヒトの尿から単離
され、ヒトおよびマウスのｃＤＮＡが記載された（Novick et al., 1999; 国際
公開第９９／０９０６３号パンフレット）。そのタンパク質はＩＬ−１８結合タ
ンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）と呼ばれている。

【００１１】 ＩＬ−１８ＢＰは、既知のＩＬ−１８受容体の１つの細胞外ドメインではない
が、分泌され、通常循環しているタンパク質である。ＩＬ−１８ＢＰは、分泌タ
ンパク質の新しいファミリーに属する。さらに、そのファミリーは、ＩＬ−１８
ＢＰに高い相同性を有し、ポックスウイルスにコードされるいくつかのタンパク
質を含む（Novick et al., 1999）。ＩＬ−１８ＢＰは脾臓において構成的に発
現され、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、ＩＬ−１の２型受容体にわ
ずかな相同性を有する。ＩＬ−１８ＢＰの遺伝子はヒト染色体の１１ｑ１３に位
置し、８．３ｋｂのゲノム配列中において膜貫通ドメインをコードするエクソン
は見つかっていない（Novick et al., 1999）。

【００１２】 ヒトにおいて４つ、マウスにおいて２つのＩＬ−１８ＢＰのアイソフォームは
、ｍＲＮＡスプライシングによって得られ、さまざまなｃＤＮＡライブラリーに
おいて見出されており、そして発現され、精製され、ついて結合およびＩＬ−１
８の生物学的活性の中和に対して評価されてきた（Kim et al., 2000）。ヒトＩ
Ｌ−１８ＢＰのアイソフォームａ（ＩＬ−１８ＢＰａ）は、急速な吸着速度、遅
い離脱速度、および３９９ｐＭの解離定数（Ｋ（ｄ））を有し、最も高いＩＬ−
１８への親和性を示した。ＩＬ−１８ＢＰｃは、２９のＣ末端アミノ酸を除くＩ
Ｌ−１８ＢＰａのＩｇドメインを有し；ＩＬ−１８ＢＰｃのＫ（ｄ）は、１０倍
低い（２．９４ｎＭ）。それにもかかわらず、ＩＬ−１８ＢＰａおよびＩＬ−１
８ＢＰｃは、２つのモル過剰により、９５％を超えるＩＬ−１８を中和する。Ｉ
Ｌ−１８ＢＰｂおよびＩＬ−１８ＢＰｄアイソフォームは、完全なＩｇドメイン
を欠き、ＩＬ−１８に対する結合能力または中和能力を欠く。マウスのＩＬ−１
８ＢＰｃおよびＩＬ−１８ＢＰｄのアイソフォームは同一のＩｇドメインを有し
、また、２つのモル過剰により、９５％を超えるマウスＩＬ−１８を中和する。
しかしながら、ヒトＩＬ−１８ＢＰａとの共通したＣ末端モチーフを有するマウ
スＩＬ−１８ＢＰｄはまた、ヒトＩＬ−１８を中和する。分子モデルは、ＩＬ−
１８ＢＰのＩｇドメインにおいて、多数の混合された静電気性および疎水性の結
合部位を同定し、そのリガンドとの結合に対する高い親和性を説明した（Kim et
al., 2000）。

【００１３】 最近、インターロイキン１８は、エンドトキシンショック、肝炎および自己免
疫糖尿病を含む慢性炎症疾患における発病の進行に関連することが示唆された（
Kahiwamura and Okamura, 1998）。実験から得られた、肝傷害の発症においてＩ
Ｌ−１８が役を果たす可能性の指摘は、ツジらによって公開され（Tsuji et al.
, 1999）、マウスモデルのリポ多糖で誘導される急性肝傷害においてＩＬ−１８
レベルが上昇することが示された。しかしながら、肝傷害の発症において、多機
能な因子であるＩＬ−１８のメカニズムは、今までに明らかにされていない。

【００１４】 肝臓の損傷または傷害は、さまざまな原因を有する。それは、たとえばウイル
スまたは細菌の感染、アルコール乱用、免疫疾患あるいはガンが原因となり得る
。

【００１５】 たとえばＢ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルスによるウイルス性肝炎は
、世界中の多くの人々をさいなます、対処が不充分な疾患である。既知の肝炎ウ
イルスの数は絶えず増加している。Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルスのほかに、ウイ
ルスが関連する肝炎を引き起こす少なくとも４つのほかのウイルスが今までに発
見されており、それらはＡ型、Ｄ型、Ｅ型およびＧ型肝炎ウイルスと呼ばれてい
る。

【００１６】 アルコール性肝疾患は、慢性のアルコール消費に関連したもう１つの広範に存
在する疾患である。免疫肝炎は充分に対処されていない稀な自己免疫疾患である
。肝傷害にはまた、胆管の損傷も含まれる。原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）は、
肝臓内の胆管の破壊によって特徴付けられる自己免疫性肝疾患である。

【００１７】 アルコール性肝炎、肝硬変、ウイルス性肝炎および原発性胆汁性肝硬変などの
、疾患による肝臓の損傷がＴヘルパー細胞１（Ｔｈ１）応答に関連することを、
いくつかの研究が証明した。１つの研究において、新しい肝傷害モデルは、オボ
アルブミン含有リポソームの標的を肝臓にすることにより、続くオボアルブミン
特異的Ｔｈ１細胞の選択的な移動によって、マウスで確立されたオボアルブミン
含有リポソームとＴｈ１細胞の移動との組み合わせによるマウスの処理によって
、血清ＩＦＮ−γレベルの上昇と並行して血清トランスアミナーゼ活性の増加が
引き起こされる。きわめて対照的に、オボアルブミン特異的Ｔｈ２細胞の移動に
よって血清ＩＬ−４レベルの上昇が起こるが、肝傷害は誘導されない。肝傷害は
、抗ＩＦＮ−γ抗体および抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α抗体によって妨害され
た。これらの調査結果は、Ｔｈ１細胞が急性肝傷害における主要なエフェクター
細胞であることを示す（Nishimura and Ohta, 1999）。ほかの一連の研究におい
て、ＩＦＮ−γを過剰に発現するマウスは、何の病原体またはほかの刺激もなし
に、自然に肝炎を示すことが明らかになった（Okamoto et al., 1998）。

【００１８】 ほかの研究は、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）におけるＴｈ１応答の関わりを
示した。ＰＢＣは肝臓内胆管の破壊によって特徴づけられる自己免疫性肝疾患で
ある。一般に、とくにＴ細胞を含む細胞の免疫メカニズムによって、この胆管の
損傷が引き起こされると思われている。Ｔｈ１応答およびＴｈ２応答の相関強度
は、さまざまな自己免疫疾患の疾病生理学（pathophysiology）において重要な
因子であることが最近提唱されている。本研究では、２つのＴ細胞のサブセット
に特異的なサイトカインの検出、すなわちＴｈ１細胞に対するＩＮＦ−γおよび
Ｔｈ２細胞に対するＩＬ−４の検出によって、ＰＢＣにおけるサブセットのバラ
ンスを評価した。ＰＢＣ患者１８人および慢性活動性Ｃ型肝炎、肝臓外胆汁閉塞
を含むコントロール疾患患者３５人ならびに正常な肝臓から得られた肝臓切片に
おいて、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−４メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）陽性細胞
が、非放射性インサイチュハイブリダイゼーションおよび免疫組織化学を用いて
数えられた。ＩＦＮ−γおよびＩＬ−４のｍＲＮＡを発現する単核細胞は、ＰＢ
Ｃの肝臓における炎症性の門脈管に密集したが、肝臓外胆汁閉塞、アルコール性
線維症（alcoholic fibrosis）または正常の肝臓切片では稀にしか存在しなかっ
た。コントロールの肝臓と比較して、ＰＢＣの肝臓におけるＩＦＮ−γおよびＩ
Ｌ−４のｍＲＮＡ陽性細胞が顕著に多数検出された（Ｐ＜０．０１）。さらに、
ＰＢＣの肝臓において、ＩＦＮ−γのｍＲＮＡ発現はＩＬ−４発現と比較してよ
り共通して検出され、ＩＦＮ−γのｍＲＮＡ発現レベルは、門脈の炎症活性の程
度とより密接に相関した。ＩＦＮ−γのｍＲＮＡ陽性細胞は、リンパの密集によ
って覆われた損傷のある胆管のいたるところで主に検出された。そのデータは、
Ｔｈ１細胞がＰＢＣのリンパの浸潤において、より重要なＴ細胞サブセットであ
ることを示す（Harada et al., 1997）。

【００１９】 ウイルス性抗原認識におけるサイトカインのパターンはまた、ウイルス感染の
解消およびウイルス排除において大きな影響を及ぼすものと思われる。ある研究
において、Ｔｈ２型応答に対するサイトカインの不均衡性は慢性Ｂ型肝炎におけ
る役割を担うのかどうかが調べられた。慢性Ｂ型肝炎に関連する抹消血単核細胞
のサイトカインの特徴は、ＲＴ−ＰＣＲによって解析された。Ｂ型肝炎表面抗原
（ＨｂｓＡｇ）刺激を受けて、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−１
０の発現は、それぞれ４１％、８％、４１％および５０％の患者において検出さ
れた。それらのサイトカインの中でも、Ｔｈ１のサイトカインＩＦＮ−γの発現
は、肝傷害の典型的なマーカーに相当する高レベルの血清ＡＳＴ／ＡＬＴ（アス
パラギン酸アミノトランスフェラーゼ／アラニンアミノトランスフェラーゼ）に
関連していた。Ｔｈ２型サイトカインは、肝細胞に対して保護効果を発揮するこ
とは示されていない。つまり、ＨＢｓＡｇ反応細胞によるＴｈ１サイトカイン、
ＩＦＮ−γの産生は、慢性Ｂ型肝炎における肝細胞損傷に関連していた（Lee et
al., 1999）。高レベルのＦＡＳリガンドおよびその受容体（ＣＤ９５）は、Ｂ
型肝炎の患者の肝臓において報告されている（Luo et al., 1997）。ＦＡＳリガ
ンドは、肝細胞アポトーシスを導く主な細胞毒性薬剤の１つであると考えられる
。

【００２０】 ほかの研究により、Ｃ型肝炎ウイルス／ＲＮＡ（ＨＣＶ／ＲＮＡ）陽性の何の
処置も受けていない３０人の慢性肝炎患者において、肝傷害の増加に関連する因
子が同定された。壊死炎症性および構造上の損傷は、イスハック採点（Ishak's
score）を用いて評価された。活性化肝星状細胞（ＨＳＣ）は、α−平滑筋アク
チン（αＳＭＡ）に対する免疫組織化学により視覚化され、モルフォメトリー（
morphometry）により定量化された。血漿ＨＣＶ／ＲＮＡは競合的ＲＴ−ＰＣＲ
法を用いて評価された。肝傷害の進行に関する免疫応答のタイプを研究するため
に、ＩＦＮ−γ陽性細胞（Ｔｈ１様応答の発現など）は、免疫組織化学的に評価
され、モルフォメトリーにより定量化された。ＨＳＣは主に小葉の壊死炎症の領
域近くまたは線維症の中隔の内壁に近い部分で検出されることが明らかになった
。αＳＭＡ陽性およびシリウスレッド陽性実質（Sirius Red-positive parenchy
ma）は、壊死炎症性および構造上の採点に顕著な相関関係があった。ＩＦＮ−γ
陽性細胞は炎症性浸潤に関連する門脈周囲の部分で検出され、構造上の損傷に顕
著に相関関係があった。したがって、ＨＳＣ活性化および肝傷害の進行は、Ｔｈ
１様応答に関連していることが考えられた（Baroni et al., 1999）。Ｂ型肝炎
の場合と同様に、ＦＡＳリガンドおよびその受容体は、Ｃ型肝炎の患者の肝臓お
よび血清において見出された（Hiramatsu et al., 1994; Okazaki et al., 1996
; Lio et al., 1998）。

【００２１】 Ｔｈ１サイトカインおよびほかのＴｈ１標識は、アルコール性肝炎および肝硬
変に関連していることが明らかにされた。炎症性刺激および脂質の酸化（lipid
peroxidation）は、核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）を活性化させ、前炎症性の（proi
nflammatory）サイトカインおよびケモカインをアップレギュレーションさせる
。ある研究において、病的な肝傷害、内毒血症、脂質の酸化およびＮＦ−κＢ活
性化ならびに前炎症性サイトカインと抗炎症性サイトカインとの不均衡性のあい
だの関係について評価された。ラット（各群５匹）は、エタノールと、ヤシ油、
トウモロコシ油または魚油といった飽和脂肪を含有する制限食を胃内注入によっ
て与えられた。コントロールラットにおいては、エタノールの代わりに等カロリ
ーのデキストロースとした。脂質の酸化、ＮＦ−κＢならびに前炎症性サイトカ
イン（ＴＮＦα、ＩＬ−１ベータ、ＩＮＦ−γおよびＩＬ−１２）、Ｃ−Ｃケモ
カイン（活性を調節され、正常Ｔ細胞で発現および分泌される［ＲＡＮＴＥＳ］
、単球走化性タンパク質［ＭＣＰ］−１、マクロファージ炎症性タンパク質［Ｍ
ＩＰ］−１−α）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン（サイトカインによって誘導される好
中球化学性誘引物質［ＣＩＮＣ］、ＭＩＰ−２、ＩＰ−１０および上皮好中球活
性化タンパク質［ＥＮＡ］−７８）、および抗炎症性サイトカイン（ＩＬ−１０
、ＩＬ−４およびＩＬ−１３）のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）レベルにつ
いて、病的解析が行なわれ、エンドトキシンの測定が行なわれた。ＮＦ−κＢの
活性化ならびに前炎症性サイトカインＣ−ＣおよびＣ−Ｘ−Ｃケモカインの上昇
した発現は、壊死炎症性の傷害を示すラットにおいて見られた（魚油−エタノー
ルおよびトウモロコシ油−エタノール）。それらの群はまた、エンドトキシンお
よび脂質の酸化において最も高いレベルを有した。ＩＬ−１０およびＩＬ−４の
ｍＲＮＡのレベルは炎症性肝傷害を示す群においてより低かった。したがって、
ＮＦ−κＢの活性化は前炎症誘発刺激が存在すると起こり、Ｔｈ１前炎症性サイ
トカインおよびケモカインの発現増加を生じる（Naji et al., 1999）。ＦＡＳ
リガンドおよびその受容体はまた、アルコール性肝傷害において増加したため、
Ｔｈ１サイトカインがアルコール性肝炎において誘導される自己免疫作用に関連
することが再び示唆された（Galle et al., 1995; Taieb et al., 1998; Fiore
et al., 1999）。

【００２２】 ＴＮＦ−αはまた、アルコールが関連した肝臓の壊死炎症の発病における通常
の経路として明らかにされた。肝臓および血清のＴＮＦの上昇したレベルは、ア
ルコール性肝疾患の動物モデルおよびヒトアルコール性肝疾患において証拠が提
供された。この異常調節されたＴＮＦ代謝は、多くの代謝の合併症およびアルコ
ール性肝疾患からなる肝傷害で役割を担うことが仮定される（Grove et al., 19
97; McClain and Cohen, 1989）。たとえば、ある研究において、アルコール性
肝炎の患者が（平均、２６．３ｎｇ／Ｌ；９５％Ｃｌ、２１．７から３０．９）
、正常な被験者（６．４ｎｇ／Ｌ；Ｃｌ，５．４から７．４）よりも高いＴＮＦ
−αレベルを有することが明らかにされた。後に死亡した患者（３４．７ｎｇ／
Ｌ；Ｃｌ、２７．８から４１．６）は、生存者（１６．６ｎｇ／Ｌ；Ｃｌ、１４
．０から１９．２）よりも高いＴＮＦ−αレベルを有していた。アルコール性肝
炎の患者において、ＴＮＦ−αレベルは血清ビリルビン（ｒ＝０．７４、Ｐ＝０
．０００９）および血清クレアチニン（ｒ＝０．８１；Ｐ＝０．０００３）に正
の相関関係を有していた。アルコール性肝炎の患者は、非活動性アルコール性肝
硬変の患者（１１．１ｎｇ／Ｌ；Ｃｌ，８．９から１３．３）、および肝疾患で
はない重症アルコール中毒患者（６．４ｎｇ／Ｌ；Ｃｌ，５．０から７．８）よ
りも、高いＴＮＦ−αレベルを有していた。腎臓機能が異常な患者は、アルコー
ル性肝炎の患者よりも低いＴＮＦ−αレベルを有していた（１４．１ｎｇ／Ｌ；
Ｃｌ，５．４から２２．８）。したがって、アルコール性肝炎におけるＴＮＦ−
αの上昇は、深刻な状態において最も顕著であると考えられ、ＴＮＦ−αは病原
体として作用することが示唆された（Bird et al., 1990）。

【００２３】 ＴＮＦはエンドトキシンの多くの生物学的な作用を仲介する。最近の研究によ
り、ＴＮＦ投与により肝傷害が引きおこされること、および、ＴＮＦが肝臓毒素
ガラクトサミンの致死性を仲介することが明らかにされた。最も有力なＴＮＦ誘
導物質は、エンドトキシンである。アルコール性肝疾患の患者はしばしば内毒血
症を有しており、また多くのアルコール性肝炎の臨床的な徴候はＴＮＦの生物学
的な作用であることが知られているため、ＴＮＦの活性がアルコール性肝炎の患
者において評価された。主なＴＮＦ産生源である抹消血単球からの基礎的および
リポ多糖により刺激されるＴＮＦ放出は、アルコール性肝炎の１６人の患者およ
び健康な１６人のボランティアにおいて測定された。アルコール性肝炎の患者１
６人のうち８人、および健康なボランティア１６人のうち２人が、検出可能な自
然発生的なＴＮＦ活性を有した（ｐは０．０５以下）。リポ多糖での刺激後、ア
ルコール性肝炎の患者由来の平均的な単球ＴＮＦ放出は、健康なコントロールの
単球ＴＮＦ放出に比べて２倍以上顕著に増加した（１ｍｌ当たり２５．３＋／−
３．７対１０．９＋／−２．４ユニット、ｐは０．００５以下）。したがって、
アルコール性肝炎の患者由来の単球は、健康なボランティア由来の単球と比較し
て、自然発生的にもリポ多糖刺激によってもＴＮＦ放出を顕著に上昇させること
が考察された（McClain and Cohen, 1989）。

【００２４】 リポ多糖（ＬＰＳ）結合タンパク質（ＬＢＰ）およびＣＤ１４は、エンドトキ
シンによる細胞の活性化において鍵となる仲介の役割を担う。消化管由来のＬＰ
Ｓは、アルコール性肝疾患において病的な肝傷害を促進させる働きがあると仮定
されている。エタノールを含有する油を４週間胃内に与えられたラットにおいて
、そのマウスのクッパー細胞および肝細胞それぞれでのＣＤ１４およびＬＢＰの
レベルが上昇したことが証明された。また、ＣＤ１４のｍＲＮＡの発現について
も、無髄の細胞において上昇した。促進されたＬＢＰおよびＣＤ１４の発現は、
ＬＰＳに誘導されるさまざまな前炎症性サイトカインの発現を急激に上昇させ、
アルコール性肝傷害における病的な肝傷害の存在と相関関係を有する（Su et al
., 1998; Lukkari et al., 1999）。

【００２５】 関節炎は、関節の炎症からなる疾患である。その関節は、腫脹、コリ、圧通、
赤みまたは熱っぽさ（warmth）を示す。その前兆は、体重減少、発熱または虚弱
によって表れる。それらの徴候が２週間以上続くとき、炎症性関節炎たとえば慢
性関節リウマチがその原因であり得る。関節の炎症はまた、感染によっても引き
起こされ、それは敗血性関節炎（septic arthritis）を誘発する。関節炎の最も
一般的なタイプは、進行性の関節疾患（骨関節炎）である。

【００２６】 関節炎および関連する病気に対して一般的に処方される医薬は、非ステロイド
性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）である。ＮＳＡＩＤｓはアスピリンおよびアスピリ
ン様薬剤を含む。それらは、関節通、関節のコリおよび腫脹を引き起こす炎症を
押さえる。しかしながら、ＮＳＡＩＤｓは、胃の出血を含む多くの副作用を有す
る非特異的な薬剤である（フレデリック マトソン（Frederick Matsen）（会長
）、関節炎に関するワシントン大学の整形外科学科のホームページ、www.orthop
.washington.edu）。ＮＳＡＩＤｓに加えて、Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標）、
シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ−２）阻害剤は、成人の骨関節炎および慢性関節
リウマチの徴候および前兆を緩和させるために使用される。それは家族性腺腫様
ポリポーシスの患者の治療用にも指示されている。

【００２７】 国際公開第０１／００２２９号パンフレットには、炎症の治療のための腫瘍壊
死因子（ＴＮＦ）アンタゴニストとＣＯＸ−２阻害剤との組み合わせが記載され
ている。

【００２８】 ＴＮＦアンタゴニストはまた、関節炎の治療のためにも使用される。ＴＮＦア
ンタゴニストは、たとえば国際公開第９１０３５５３号パンフレットに記載され
ている。

【００２９】 最近の研究は、インターロイキンＩＬ−１８が関節の代謝において前炎症性の
役割を果たすことを示す。オリーら（Olee et al）（1999）は、ＩＬ−１８が関
節の軟骨細胞によって産生され、炎症前応答および分解代謝の応答を誘導するこ
とを示した。ＩＬ−１８のｍＲＮＡは、軟骨細胞のＩＬ−１βによって誘導され
る。軟骨細胞は、ＩＬ−１８前駆体を産生し、ＩＬ−１刺激に応答して成熟した
形のＩＬ−１８を分泌した。軟骨細胞におけるＩＬ−１８の効果についての研究
によって、さらに、ＩＬ−１８がＴＮＦ−βによって誘導された増殖を阻害し、
酸化窒素産生を促進させることが示された。ＩＬ−１８は、正常なヒトにおける
関節の軟骨細胞において、誘導性の酸化窒素合成、誘導性のシクロオキシゲナー
ゼ、ＩＬ−６およびストロメライシンを含むいくつかの遺伝子の発現を刺激した
。遺伝子発現は、対応するタンパク質の合成に関連していた。ＩＬ−１８による
正常なヒトの関節軟骨の処理は、グリコサミノグリカンの放出を上昇させた。こ
れらの調査結果は、軟骨細胞応答を調節し、かつ軟骨の分解に関与するサイトカ
インとしてＩＬ−１８を認定した。

【００３０】 ヒトの骨関節炎組織におけるインターロイキン−１β−変換酵素（ＩＣＥ）／
カスパーゼ−１の局在ならびにインターロイキン−１ベータおよびインターロイ
キン−１８の成熟におけるその役割は、サハら（Saha et al）によって明らかに
された（1999）。サハらは、正常および骨関節炎（ＯＡ）のヒト軟骨および滑膜
におけるカスパーゼ−１の発現および産生について研究し、軟骨細胞のアポトー
シスだけでなく、ＩＣＥ、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）およびＩＬ−
１８の局所解剖的な分布との関係について調べた。この研究において行なわれた
実験によって、ＩＣＥはヒトの滑膜および軟骨のどちらでも発現され合成される
ことが、正常組織よりもＯＡ組織において研著に多類の染色陽性細胞により明ら
かにされた。ＩＣＥ産生は優先的に関節の軟骨の表面および中間より上部の層に
位置していた。ＯＡの軟骨移植片および軟骨細胞における成熟ＩＬ−１ベータの
産生は、ＩＬ−１８陽性細胞の数をも著しく減少させる、特異的なＩＣＥ阻害剤
による処理によって完全に妨害される。活性ＩＬ−１ベータとＩＣＥとの関係は
、ＩＣＥが前炎症性サイトカインを活性化することによってＯＡの進行を促進さ
せること、およびＩＬ−１８が軟骨の病状に役割を担うことが示唆される。

【００３１】 グラシーら（Gracie et al）（１９９９）は、慢性関節リウマチにおけるＩＬ
−１８の前炎症性作用を示唆した。グラシーらは、骨関節炎コントロールに比べ
て顕著に高いレベルで、慢性関節リウマチの滑膜組織内においてＩＬ−１８のｍ
ＲＮＡおよびタンパク質を検出した。また、インビトロにおいて、ＩＬ−１２ま
たはＩＬ−１５と、ＩＬ−１８との組み合わせによって、滑膜組織によるＩＦＮ
−γ産生が誘導されることが明らかにされた。さらに、コラーゲン／不完全フロ
イントアジュバントで免疫されたマウスにＩＬ−１８を投与することによって、
侵食性の進行、炎症性関節炎が促進されたことから、ＩＬ−１８はインビボにお
いて前炎症性であることが示唆される。

【００３２】 しかしながら、今まで、化学化合物のほかに、可溶性受容体またはモノクロー
ナル抗体を用いたＴＮＦαおよびＩＬ−１βの妨害のみが、マウスのコラーゲン
誘導性関節炎（ＣＩＡ、慢性関節リウマチのためのマウスモデル）を押さえるこ
とを明らかにされていたため（Williams et al., 1994）、慢性関節リウマチに
対する治療として考えられていた。

【００３３】 「慢性または特発性の炎症性腸疾患」という用語は、少なくとも２つの症状、
クローン病および潰瘍性結腸炎を含む。どちらも胃腸の管の疾患であり、クロー
ン病は最も一般的には小腸を冒す。また、結腸をも含む場合、潰瘍性結腸炎から
の鑑別診断（以下参照）は、問題となり得る。

【００３４】 クローン病における慢性的な炎症および潰瘍化は、急性虫垂炎によく似た小腸
閉塞または腹痛のどちらかでたいてい始まり、そのほかの呈示はその合併症に関
連している可能性がある。その疾患の進行は慢性的であり、治療しているにもか
かわらず、悪化と軽減があり得る。始まりはたいてい成人期初期であり、全体の
約半分の場合が年齢２０から３０歳のあいだに始まり、９０％が１０から４０歳
のあいだである。

【００３５】 顕微鏡検査によって、総体的な徴候が示される。炎症の関与は断続的であって
、集中的または斑点状である。リンパ球および血漿細胞の堆積は、おもに粘膜お
よび粘膜下層で見られるが、たいてい全ての層に影響する（経壁の炎症）。クロ
ーン病の典型的な顕微鏡検査による特徴は、カフのリンパ球によって囲まれた顆
粒細胞の存在である。特発性の炎症性腸疾患の出現頻度は、かなり地理的に多様
性が見られる。それらの疾患は、北ヨーロッパおよび米国の方が、南ヨーロッパ
、アフリカ、南アメリカおよびアジアよりも出現率がより高いが、進行する都市
化および繁栄は南ヨーロッパおよび日本の一部で高い出現率を導いている（一般
的および系統的な病理学、チャーチル リビングストン（Churchill Livingston
e）、第３版、2000年、JCE Underwood、Ed）。

【００３６】 クローン病において、まず、発症から３年のあいだに疾患が継続的な緩解とな
る患者、２つめに３年以上疾患が持続する患者からなる、臨床的に主に２つの群
がある。

【００３７】 因果関係が何であっても、炎症性サイトカイン、とくにインターロイキン（Ｉ
Ｌ）１、２、６および８、インターフェロン（ＩＦＮ）−γならびに腫瘍壊死因
子（ＴＮＦ）αの産生が上昇したクローン病において、持続性ならびに不適当な
Ｔ細胞およびマクロファージの活性化の証拠がある。クローン病は、腺維症に伴
って持続的な（慢性の）炎症によって特徴付けられている。繊維芽細胞の増殖お
よびコラーゲンの堆積の進行は、抗炎症作用、すなわち繊維芽細胞の供給、マト
リックスの合成および炎症細胞のダウンレギュレーションを有するトランスフォ
ーミング増殖因子βによって仲介されるが、多くのほかのメディエーターが関与
しているようである。

【００３８】 潰瘍性結腸炎は、大腸に特有でない炎症性の疾患で、たいてい直腸で始まって
、さまざまな程度で近辺に広がる。クローン病とは異なり、潰瘍性結腸炎は大腸
に限られる。

【００３９】 潰瘍性結腸炎は変化した自己免疫反応の結果であるが、粘膜傷害もまた不適当
なＴ細胞の活性化ならびにマクロファージおよび好中球由来のサイトカイン、プ
ロテアーゼおよび反応性酸素代謝物によって受けた間接的な損傷により生じるこ
とを示す増大する証拠がある。結腸上皮に対する後者の損傷のメカニズムは、「
ただの通りすがりの（innocent bystander）」損傷と呼ばれる。自己免疫に対す
る証拠は、結腸上皮細胞および内皮細胞に対して向けられた自己反応性のＴリン
パ球および自己抗体ならびに抗好中球細胞質自己抗体（ＡＮＣＡ）の存在である
。しかしながら、潰瘍性結腸炎は、粘膜傷害が自己抗原に対する免疫的学反応の
直接的な結果である自己免疫疾患として考えるべきではない（前述の一般的およ
び系統的な病理学）。

【００４０】 クローン病の治療に関して、ほとんどの人々はまず、炎症の制御を助ける物質
メラサミンを含有する薬剤で治療される。その効果が得られない人またはそれに
対して耐性のない人は、一般的に５−ＡＳＡ剤として知られるほかのメサラミン
含有薬剤を与えられる。メサラミン調合剤の可能性のある副作用は、吐き気、嘔
吐、胸やけ、下痢および頭痛を含む。

【００４１】 なかには、炎症を制御するためにコルチコステロイド類が処方される患者がい
る。それらの薬剤は、活動性クローン病に対して最も効果があるが、感染に対す
るより強い感受性を含む深刻な副作用を引き起こし得る。

【００４２】 免疫系を抑制する薬剤はまた、クローン病を治療するために使用される。６−
メルカプトプリンおよび関連する薬剤アザチオプリンが、最も一般的に処方され
る。免疫抑制剤は炎症に貢献する免疫反応を妨害することによって働く。これら
の薬剤は、吐き気、嘔吐および下痢のような副作用を引き起こし、感染に対する
ヒトの抵抗力を低下させ得る。患者がコルチコステロイド類および免疫抑制剤の
組み合わせで治療される場合、コルチコステロイド類の投与量は、結局は低下さ
れ得る。いくつかの研究において、免疫抑制剤がコルチコステロイド類の有効性
を増強させることが示唆されている。

【００４３】 米国食品医薬品局（The U.S. Food and Drug Administration）は、標準的な
治療（メサラミン物質、コルチコステロイド類、免疫抑制剤）が効かない中程度
から重度までのクローン病の治療のため、および切開、排出フィステルからなる
治療のために、インフリキシマブ（infliximab）という薬剤を是認している。ク
ローン病において特別に初期治療として認められているインフリキシマブは、抗
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）モノクローナル抗体である。抗ＴＮＦは、ＴＮＦが腸に
到達する前に血流からＴＮＦを除去することによって、炎症を予防する。

【００４４】 抗生物質は、狭窄病、フィステルまたは以前の手術によって引き起こされた、
小腸における細菌の過剰増殖の治療に使用される。この一般的な問題は、医師が
以下の抗生物質、アンピシリン、スルホンアミド、セファロスポリン、テトラサ
イクリンまたはメトロニダゾルの１つ以上処方することである。

【００４５】 炎症が静まると、下痢および急激な腹痛はしばしば和らぐが、付加的な薬物治
療もまた必要であり得る。ジフェノキシラート、ロペラミドおよびコデインを含
む抗下痢剤のいくつかが使用され得る。下痢のために脱水状態の患者は、通常、
流体および電解質で治療される。

【００４６】 副作用が減少した、または理想的には副作用がほとんどない、炎症性腸疾患、
とくにクローン病および潰瘍性結腸炎の治療ならびに／または予防に効果的な治
療が依然として必要とされている。

【００４７】 組織学的および免疫学的観察のどちらも、細胞が仲介した免疫性およびＴ細胞
の活性化がＣＤの鍵となる特徴であることを示す。ヒトおよび実験モデルによる
研究から、ＣＤにおいて局所的な免疫応答は主にタイプはＴｈ１である傾向にあ
ること（Desreumaux et al., 1997）、およびＩＦＮ−γ、ＩＬ−１βおよびＴ
ＮＦ−αなどの局所的に放出されるサイトカインが炎症応答を促進し広げること
に寄与すること（Reimund et al., 1996）が示唆される。

【００４８】 サイトカインＩＬ−１８はサイトカインＩＬ−１２と共同して、ＩＦＮ−γの
分泌を刺激し、ナチュラルキラー細胞の細胞毒性を促進し、ＴＨ１細胞の分化を
刺激することによって、Ｔｈ１が仲介する免疫応答において重要な役割を担う（
Uschito et al., 1996）。

【００４９】 ＩＬ−１８はＩＬ−１２、ＩＬ−１２、抗原、マイトジェンおよびほかに可能
性のある因子と共に働き、ＩＦＮ−γの産生を誘導する。ＩＬ−１８はまた、Ｇ
Ｍ−ＣＳＦおよびＩＬ−２の産生を増強し、抗ＣＤ３に誘導されるＴ細胞の増殖
を強化し、そしてＦａｓが仲介するナチュラルキラー細胞の殺傷性を上昇させる
。成熟ＩＬ−１８は、その前駆体からＩＬ−１β変換酵素（ＩＣＥ、カスパーゼ
１）によって産生される。ＩＬ−１８受容体は、リガンドの結合に共に働く、少
なくとも２つの成分からなる。ＩＬ−１８における高親和性および低親和性の結
合部位が、マウスＩＬ−１２で刺激されたＴ細胞において見出され（Okamoto et
al., 1998）、多鎖受容体複合体であることが示唆された。２つの受容体サブユ
ニットは、これまで同定されておらず、どちらもＩＬ−１受容体ファミリーに属
する（Okamoto et al., 1999）。ＩＬ−１８のシグナルトランスダクションは、
ＮＦ−κＢの活性化に関わる（Matsumoto et al., 1997）。

【００５０】 最近、ＩＬ−１８は炎症性腸疾患において何らかの影響を及ぼすことが示唆さ
れている（Pizarro et al., 1999; Monteleone et al., 1999）。

【００５１】 ピザローら（Pizarro et al）（１９９９年）は、結腸の標本においてＩＬ−
１８の発現および局在を特徴づけ、クローン病の患者から粘膜細胞の群を単離し
た。半定量的ＲＴ−ＰＣＲプロトコルを使用することにより、潰瘍性結腸炎およ
び炎症を起こしていないコントロールの患者に比べて、ＣＤから新たに単離され
た腸の上皮細胞および粘膜固有層の単核細胞においてＩＬ−１８のｍＲＮＡ転写
産物が増加していることが明らかになった。ＩＬ−１８のｍＲＮＡ転写産物は、
粘膜固有層の単核細胞よりも腸の上皮細胞においてより豊富であった。外科的に
切除された結腸組織の免疫組織化学的解析は、腸の上皮細胞と同様、粘膜固有層
の単核細胞（とくに、マクロファージおよび樹状細胞）のどちらともにＩＬ−１
８を局在化した。ウエスタンブロット解析によって、組換えおよび成熟ヒトＩＬ
−１８タンパク質と一致する１８．３ｋＤａのバンドがＣＤおよびＵＣの腸粘膜
バイオプシーにおいて主に見られ、不活性なＩＬ−１８前駆体と一致する２４ｋ
Ｄａの第二のバンドが、ＣＤおよびＵＣのバイオプシーから非炎症領域において
検出され、非炎症コントロールにおいては単一の形が見られることが明らかにな
った。

【００５２】 モンテレオンら（Monteleone et al）（１９９９）は、それらの調査結果を確
証した。１２人のクローン病患者および９人の潰瘍性結腸炎患者、ならびに炎症
性腸疾患でないコントロール由来の、全粘膜腸組織および粘膜固有層の単核細胞
について、半定量的ＲＴ−ＰＣＲおよびウエスタンブロット解析によってＩＬ−
１８に関するテストを行なった。ＩＬ−１８の転写産物は、テストされた全ての
試料で見られた。しかしながら、潰瘍性結腸炎およびコントロールに比べて、ク
ローン病の粘膜および粘膜固有層の単核細胞のどちらの試料においても、増加し
たＩＬ−１８のｍＲＮＡの蓄積が検出された。クローン病において、ＩＬ−１８
の転写産物は、関連している部分から採取された粘膜試料においてより豊富であ
った。成熟ＩＬ−１８と一致する１８ｋＤａのバンドは主にクローン病の粘膜試
料において見られた。ＩＢＤでないコントロール由来の粘膜試料において、ＩＬ
−１８は２４ｋＤａのポリペプチドとして存在していた。一貫して、活性ＩＬ−
１ベータ変換酵素（ＩＣＥ）サブユニット（ｐ２０）は、ＣＤかＵＣ由来の試料
のどちらかで発現しているが、ＩＢＤでないコントロール由来の結腸の粘膜にお
いて、ＩＣＥは前駆体（ｐ４５）としてのみ合成されていた。

【００５３】 デイヤー（Dayer）（１９９９）は、ＩＬ−１８のさまざまで部分的に矛盾し
ている機能について再検討を行なった。要約すると、ＩＬ−１８は炎症性を増強
および低減させるどちらの機能も有する多面作用のインターロイキンである。一
方では、ＩＬ−１８はＴＮＦαのように前炎症性サイトカインの産生を増強する
ことによって、炎症を促進する。逆に、ＩＬ−１８はカスパーゼ−１の阻害剤で
あるＮＯの産生を誘導することで、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８の成熟化を妨害
し、炎症性を減じさせているのかもしれない。このＩＬ−１８の不明瞭な役割は
、炎症性疾患におけるＩＬ−１８阻害剤の有効性を深刻に問うものである。さら
に、炎症の調節における無限に多様なさまざまなサイトカインおよびケモカイン
との相互作用のため、たった１つの役者だけを妨害することによる炎症性疾患の
治療および予防における有効な効果は予想できない。

【００５４】 ［発明の要約］ 本発明は、ＩＬ−１８の阻害剤がさまざまな疾患および障害の治療および／ま
たは予防に効果的であるという調査結果に基づく。

【００５５】 本発明の第一の目的は、肝傷害の治療および／または予防における新しい方法
を提供することである。したがって、本発明は急性または慢性の肝傷害の治療お
よび／または予防用医薬の製造におけるＩＬ−１８阻害剤の用途に関する。さら
に詳細には、本発明はアルコール性肝炎、ウイルス性肝炎、免疫性肝炎（immune
hepatitis）、劇症肝炎、肝硬変および原発性胆汁性肝硬変の治療および／また
は予防に関する。

【００５６】 本発明の第二の目的は、関節炎の治療および／または予防における新しい方法
を提供することである。したがって、本発明は関節炎の治療および／または予防
用医薬の製造におけるＩＬ−１８阻害剤の用途に関する。ＩＬ−１８阻害剤の有
効な効果は、疾患の進行の予防だけでなく、疾患の重症度を減じさせることを含
む。この調査結果は、前記要約した技術内容からは予想できず、関節炎に関係す
る１つの特異的な因子、すなわちインターロイキンＩＬ−１８の妨害が、関節炎
の緩和または病気にかかった関節炎の関節の治癒までも導くことは結論付けられ
ていなかった。

【００５７】 関節炎のマウスモデルにおいて、ＩＬ−１８阻害剤の投与は顕著に軟骨の侵食
を減じることも明らかになっている。このように、本発明はさらに、軟骨破壊の
治療および／または予防用医薬の製造においてＩＬ−１８阻害剤の用途に関する
。

【００５８】 本発明の第三の目的は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、とくにクローン病および潰
瘍性結腸炎の治療および／または予防における新しい方法を提供することである
。したがって本発明はまた、ＩＢＤの治療および／または予防用医薬の製造にお
けるＩＬ−１８阻害剤の用途にも関する。本発明により今では、クローン病患者
由来のバイオプシーの粘膜の炎症領域において、ＩＬ−１８のｍＲＮＡおよびタ
ンパク質の濃度が上昇することが明らかにされた。さらに、炎症性腸疾患のマウ
スモデルにおいて、２つの異なるＩＬ−１８阻害剤が動物を疾患から保護するこ
とが明らかにされた。

【００５９】 また、ＩＬ−１８阻害剤および／またはインターフェロンおよび／またはＴＮ
Ｆアンタゴニストおよび／またはＣＯＸ−２阻害剤の組み合わせの用途も、本発
明によって考えられる。病気にかかった組織または細胞にＩＬ−１８阻害剤を送
達するための遺伝子治療的なアプローチを適用するために、本発明のさらなる局
面は、その病気にかかった状態の治療および／または予防用の、ＩＬ−１８阻害
剤をコードする配列を含む発現ベクターの用途に関する。本発明はさらに、ＩＬ
−１８阻害剤の内因性遺伝子の活性化の用途、ならびに肝傷害、関節炎およびＩ
ＢＤの予防および／または治療用のＩＬ−１８阻害剤を発現する遺伝的に作製さ
れた細胞の用途に関する。

【００６０】 ［発明の詳細な説明］ 本発明は、さまざまな疾患および異常におけるＩＬ−１８の阻害剤の有効な効
果の調査結果に基づく。

【００６１】 本発明において用語「ＩＬ−１８の阻害剤」は、ＩＬ−１８の産生および／ま
たは作用を減じさせ、縮小させ、または部分的、実質的もしくは完全に予防また
は妨害するというような方法で、ＩＬ−１８産生および／または作用を調節する
あらゆる分子を意味する。用語「ＩＬ−１８阻害剤」は、ＩＬ−１８作用の阻害
剤だけでなくＩＬ−１８産生の阻害剤をも含むことを意味する。

【００６２】 産生の阻害剤は、ＩＬ−１８の合成、プロセシングまたは成熟化に負の影響を
及ぼすあらゆる分子であり得る。本発明によると、阻害剤は、たとえばインター
ロイキンＩＬ−１８の遺伝子発現のサプレッサー、ＩＬ−１８ｍＲＮＡの転写を
減少させるもしくは妨げるまたはｍＲＮＡの分解を導くアンチセンスｍＲＮＡ、
正しい折りたたみを損なわせる、または部分的もしく実質的にＩＬ−１８の分泌
を妨げるタンパク質、ＩＬ−１８が合成された場合にＩＬ−１８を分解するプロ
テアーゼ、カスパーゼ１の阻害剤などの、成熟ＩＬ−１８を産生するためにＩＬ
−１８前駆体を切断するプロテアーゼの阻害剤であり得る。

【００６３】 ＩＬ−１８の作用の阻害剤は、たとえばＩＬ−１８アンタゴニストであり得る
。アンタゴニストは、ＩＬ−１８のリガンド（たとえばＩＬ−１８の受容体など
）にＩＬ−１８が結合するための能力を有するＩＬ−１８またはＩＬ−１８結合
部位を部分的または実質的に中和するのに充分な親和性および特異性により、Ｉ
Ｌ−１８分子そのものと結合またはＩＬ−１８分子そのものを隔離することがで
きる。アンタゴニストは、また、ＩＬ−１８／受容体の結合した細胞内で活性化
されるＩＬ−１８シグナル伝達経路をも阻害し得る。

【００６４】 ＩＬ−１８作用の阻害剤は、また、可溶性ＩＬ−１８受容体またはその受容体
に似た分子、またはＩＬ−１８受容体を妨害する薬剤、またはポリクローナルも
しくはモノクローナル抗体などのＩＬ−１８抗体、またはＩＬ−１８とその標的
との結合を妨げる分子であってもよく、このようにＩＬ−１８によって仲介され
る細胞内または細胞外の反応の誘発を減じさせるかまたは妨げる。

【００６５】 本発明の第一の局面によると、ＩＬ−１８の阻害剤は、肝傷害の治療および／
または予防用医薬の製造において使用される。好ましくは、本発明は、急性およ
び慢性の肝傷害、よりとくにアルコール性肝炎、ウイルス性肝炎、免疫性肝炎、
劇症肝炎、肝硬変および原発性胆汁性肝硬変の治療および／または予防用医薬の
製造におけるＩＬ−１８阻害剤の用途に関する。

【００６６】 本明細書中で使用される肝傷害または肝疾患という用語は、さまざまな病的症
状を含む。本発明において観察されたいくつかの症状は、前記「本発明の技術分
野」において詳細に述べている。さらに、本発明によって治療および／または予
防され得る肝疾患は、たとえば発熱性の肝膿瘍（pyrogenic liver absess）を含
む。それはまた最近性肝臓とも呼ばれ、それは肝臓内の膿を産生する場である。
肝膿瘍の原因は多様である。肝膿瘍は、盲腸炎、憩室炎または手術された腸など
の腹部における感染；血液における感染；胆汁の（肝臓が分泌する）管からの感
染；または傷ついた肝臓が感染したときのトラウマから、進行し得る。肝膿瘍を
引き起こす最も一般的な生物は、大腸菌、プロテウス バルガリス（Proteus vu
lgaris）およびエンテロバクター アエロゲネス（Enterobacter aerogenes）で
ある。出願頻度は、１００００人に１人である。

【００６７】 アルコール性肝疾患は、本発明したがいＩＬ−１８阻害剤を用いて治療および
／または予防され得る。アルコール性肝疾患はアルコールの乱用によって引き起
こされる急性および慢性の肝臓の炎症を含む。アルコール性肝炎は、通常、何年
もの過度の飲酒の後起こる。アルコールの飲用期間が長ければ長いほど、また、
アルコールの消費が多くなるほど、肝疾患が発症する確率は高くなる。栄養失調
は、アルコール、食欲減退および吸取不良（腸管からの栄養物の不充分な吸収）
に由来するカロリーを欠いた結果として発症する。栄養失調は肝臓疾患に関与す
る。エタノールの肝臓に対する毒性、アルコールによって誘導される肝臓疾患に
対する個人的な感受性および遺伝的な因子もまた、アルコール性肝疾患の発症に
関与する。

【００６８】 本発明によると、肝硬変はＩＬ−１８阻害剤を用いて治療および／または予防
され得る。硬変は、肝臓組織への損傷、肝臓の傷（腺維症；小結節の再生）、肝
機能の進行性の減退、腹腔内の過剰の体液（腹水症）、出血異常（凝固障害）、
血管内の増圧（門脈圧亢進症）および脳機能異常（肝性脳症）を引き起こす慢性
の肝疾患である。損傷し傷ついた肝臓は、血液から老廃物（毒素）を充分に取り
除くことができず、傷ついた組織の形成は、肝臓へ向かう腸と脾臓とのあいだの
血管内の増圧（門脈圧亢進症）を導く。アルコールの飲みすぎは、硬変を導く原
因である。ほかの原因は、感染（肝炎など）、胆汁排水系の疾患および欠陥（胆
汁の狭窄または閉塞など）、嚢胞性腺維症ならびに増加した鉄および銅の吸収を
ふくむ。

【００６９】 硬変のタイプは、疾患の原因に依存している。硬変の合併症は深刻であり得る
。米国では、硬変は９番目の主要な死亡原因である。神経学的問題（肝性脳症な
ど）が発症しうる。腹腔における増大した体液の貯蔵（腹水症）は、体のタンパ
ク質の減少、ナトリウムの増加、および肝臓の血管内の増圧（門脈圧亢進症）に
よって引き起こされる。門脈圧亢進症は、食道（食道静脈瘤）の血管の血圧、サ
イズおよび充満さの増大を引き起こす。出血および凝固を伴う問題が起こり得る
。その血管内の増圧およびその血液凝固を伴う問題は、深刻で生命を脅かす出血
の可能性を増大させ得る。

【００７０】 さらに、本発明における「肝傷害」という用語に含まれることを意図される異
常は、自己免疫性肝炎である。自己免疫肝炎は免疫系との相互関係により生じる
肝臓の炎症である。自己免疫性肝炎は、慢性活動性肝炎のタイプである。細胞の
免疫応答は、慢性活動性肝炎の原因になり得る。さまざまな循環自己抗体は、慢
性活動性肝炎の患者の血液から見出された。ほかの自己免疫疾患は、慢性活動性
肝炎に関連し得るし、または慢性活動性肝炎患者の親族に起こり得る。これらの
疾患は、甲状腺炎、真性糖尿病、潰瘍性結腸炎、クーンズ陽性溶血性貧血（Coom
bs-positive hemolytic anemia）、増殖性糸球体腎炎およびシェーグレン症候群
である。危険因子は、それらの疾患を含み得るし、または危険因子は慢性活動性
肝炎に関連し得る。出現頻度は１００００人に４人である。

【００７１】 さらに、胆道閉鎖は「肝傷害」という用語の範囲内の疾患である。胆道閉鎖は
、通常、産まれる前に（子宮内で）胆道が発達しないことによって引き起こされ
る胆管の閉塞である。胆道閉鎖は、肝内または肝外の胆管の異常および不充分な
発達によって引き起こされる。胆菅系の目的は、肝臓からの老廃物の除去、およ
び脂肪消化に必要な胆汁酸塩の小腸への運搬である。この病気において、肝臓か
ら胆嚢へ流れる胆汁は遮断される。これは、治療しなければ最終的に死に至る、
肝臓への損傷および肝硬変を誘導する。

【００７２】 本発明によると、ＩＬ−１８阻害剤は、慢性悪性肝炎（chronic aggressive h
epatitice）とも呼ばれる慢性活動性肝炎の治療および／または予防用医薬の製
造においても使用され得る。慢性活動性肝炎は肝臓細胞に損傷を与える継続的な
肝臓の炎症である。慢性活動性肝炎の原因は、ウイルスの感染、薬物反応／摂取
、代謝異常または自己免疫疾患を含む。明らかな原因はないかもしれない。この
疾患は、肝傷害、硬変および死を導き得る肝臓細胞の壊死または死滅、活動性の
炎症および腺維症によって特徴付けられる。出現頻度は１００００人に１人であ
る。危険因子は、自己免疫疾患、以前に感染したＣ型肝炎、あるいは６ヵ月以上
のＡ型肝炎またはＢ型肝炎の抗原陽性である。

【００７３】 慢性持続性肝炎（chronic persistent hepatitis）は軽く、肝臓の炎症に進行
しない状態であり、これもまた本発明によると「肝傷害」という用語に含まれる
疾患である。

【００７４】 本発明によると、ＩＬ−１８阻害剤は、また原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）の
治療および／または予防用医薬の製造においても使用される。ＰＢＣは、肝細胞
を損傷させる肝臓内の胆汁の流出の遮断によって起こる炎症症状である。肝臓内
の胆管は、未知の原因により炎症を起こす。その疾患は、最も頻繁に中年女性に
影響を及ぼす。前兆の始まりはなだらかであり、最初の前兆としては皮膚のかゆ
みである。肝臓内の胆管の炎症は起こる。そのうち、肝硬変に進行する。その疾
患は、自己免疫疾患に関係し得る。出現頻度は１０００００人に８人である。本
明細書中で考えられるＩＬ−１８阻害剤は、また、たとえば大量のパラセタモー
ルによって引き起こされる急性肝臓中毒症の治療にも使用され得る。このような
急性肝臓中毒症は、偶発的または故意のパラセタモールの過剰な服用量によるも
のであり得る。

【００７５】 以下の実施例に示されるように、本発明の発明者らは驚くべきことに、ＩＬ−
１８阻害剤が劇症肝炎（急性肝炎）の予防および治療においてとくに有効である
ことを見出した。したがって、本発明は、好ましくは劇症肝炎の予防および／ま
たは治療に関する。

【００７６】 本発明の第二の局面によると、ＩＬ−１８阻害剤は、関節炎の治療および／ま
たは予防用医薬の製造において使用される。

【００７７】 本明細書中で使用される「関節炎」という用語は、たとえば、関節炎に関する
ワシントン大学の整形外科学科のホームページ（www.orthop.washington.edu）
に定義されているように、全てのさまざまなタイプの関節炎ならびに関節炎の症
状、急性および慢性関節炎を含む。関節炎の症状の例としては、強直性脊椎炎、
腰痛（back pain）、手根堆積症候群（carpal deposition syndrome）、エーレ
ルス−ダンロー症候群、痛風、若年性関節炎、紅斑性狼瘡、筋炎、骨形成不全、
骨粗しょう症、多発関節炎、多発筋炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、強皮症
、腸疾患を伴う関節炎、ベーチェット病、小児関節炎（children's arthritis）
、変形性関節症、腺維筋痛症（fibromyalgia）、感染性関節炎（infectious art
hritis）、ライム病、マルファン症候群、変形性関節症、骨壊死、パジェット病
、リウマチ性多発筋痛症（Polymyalgia rheumatica）、偽痛風、反射性交感神経
性ジストロフィー、慢性関節リウマチ、リウマチ、シェーグレン症候群、家族性
腺腫性ポリポーシス（familial adenomatous polyposis）などがある。

【００７８】 好ましくは、本発明によると、ＩＬ−１８阻害剤は、炎症性関節炎の治療およ
び／または予防に対して提供される。炎症性関節炎は、その疾患の持続性、継続
性または再発性の推移に基づいて慢性関節炎として分類される。

【００７９】 本発明の好ましい実施態様における炎症性関節炎は、慢性関節リウマチ（ＲＡ
）である。ＲＡは関節のライニング（lining）（滑膜、１つの上皮の細胞層）お
よび／または内臓において炎症を引き起こす。この疾患は、何年も持続する傾向
にあり、通常、体全体の多くのさまざまな関節に影響を及ぼし、ついには軟骨、
骨、腱および靭帯に損傷を与え得る。ＲＡによって影響され得る関節は、たとえ
ば首、肩、ひじ、臀部、手首、手、膝、くるぶしおよび足の関節である。多くの
場合、ＲＡによって対称的な形式で炎症がおこる。

【００８０】 ＲＡは、米国では人口の約１％で広く行き渡っており、全ての民族および年齢
の間で分布している。それは、全世界で起こっており、ＲＡを有する患者におい
て、女性は３対１で男性より数が勝っている。

【００８１】 以下の実施例に示されるように、ＩＬ−１８阻害剤は、軟骨侵食において非常
に有効で有益な効果を示すことが証明された。したがって、本発明はさらに、軟
骨破壊の治療および／または予防用医薬の製造におけるＩＬ−１８阻害剤の用途
、すなわち軟骨保護剤としてのＩＬ−１８の用途に関する。ＩＬ−１８阻害剤は
、軟骨の破壊または侵食が起こっているあらゆる症状において使用され得る。軟
骨破壊は、関節軟骨の構造的に無傷の状態における進行性の減退である。それは
、たとえば慢性関節リウマチ、若年性慢性関節リウマチまたは骨壊死などの関節
軟骨に影響を及ぼす症状において起こるが、たとえば感染性滑膜炎（infectious
synovitis）においても起こる。

【００８２】 本発明の第３の局面は、炎症性腸疾患の治療および／または予防用医薬の製造
におけるＩＬ−１８阻害剤の用途に関する。それは、ＩＬ−１８阻害剤がＣＤ患
者の炎症粘膜においてアップレギュレーションされたという調査結果に基づく。
さらにそれは、さまざまなＩＬ−１８阻害剤の投与は結腸炎のマウスモデルにお
いて保護効果を有するという調査結果に基づく。

【００８３】 ＣＤ患者に由来の疾患粘膜におけるＩＬ−１８のアップレギュレーションは、
技術分野において既に開示されている（Monteleone, et al. 1999; Pizarro, et
al. 1999）。

【００８４】 本発明によって腸粘膜の炎症領域において大量のＩＬ−１８ＢＰの存在が証明
されたのち、さらに驚くべきことに、ＩＬ−１８ＢＰを全身に投与したところ、
動物モデルにおける結腸炎の発症および症状に対して有効な効果を示すことが見
出された。ＩＬ−１８ＢＰは既にＣＤ患者の腸において内因的にアップレギュレ
ーションされているが、以下の実施例において説明されるように、体内で産生す
ることができるＩＬ−１８ＢＰの量は疾患と戦えるほど充分であるとは思えない
。

【００８５】 本発明において炎症性腸疾患とは、好ましくは、クローン病または潰瘍性結腸
炎である。

【００８６】 本発明の好ましい実施態様において、ＩＬ−１８阻害剤は、カスパーゼ−１（
ＩＣＥ）、ＩＬ−１８に対する抗体、いずれかのＩＬ−１８受容体サブユニット
に対する抗体、ＩＬ−１８シグナル伝達経路の阻害剤、ＩＬ−１８と拮抗および
ＩＬ−１８受容体を妨害するＩＬ−１８のアンタゴニスト、ならびにＩＬ−１８
結合タンパク質、アイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質、機能的な誘導体
、活性断片または同じ活性を有する循環的に改変されたその誘導体から選択され
る。

【００８７】 「ＩＬ−１８結合タンパク質」という用語は、本明細書中では「ＩＬ１８ＢＰ
」と同義で使用される。それは国際公開第９９／０９０６３号パンフレットまた
は１９９９年にノービック（Novick）らによって定義されたＩＬ−１８結合タン
パク質からなり、２０００年にキム（Kim）らによって定義されたＩＬ−１８結
合タンパク質のスプライシング変性体および／またはアイソフォームを含む。と
くに、ＩＬ−１８ＢＰのヒトアイソフォームａおよびｃは、本発明によると有効
である。本発明においての有効なタンパク質は、グリコシル化または非グリコシ
ル化のものであってよく、尿などの天然源由来のものであってよく、または好ま
しくは組換え的に産生されてよい。組換え体の発現は、大腸菌のような原核生物
の発現系、または真核生物および好ましくは哺乳動物の発現系において行なわれ
得る。

【００８８】 本明細書中で使用されるように、「ムテイン」という用語は、天然のＩＬ−１
８ＢＰまたはウイルス性ＩＬ−１８ＢＰの１つまたはそれ以上のアミノ残基が異
なるアミノ残基に置換または欠失され、または、ＩＬ−１８ＢＰまたはウイルス
性ＩＬ−１８ＢＰの天然の配列に１つまたはそれ以上のアミノ残基が付加され、
野生型のＩＬ−１８ＢＰまたはウイルス性のＩＬ−１８ＢＰと比較して、得られ
た産物の活性があまり変化していない、ＩＬ−１８ＢＰのアナログまたはウイル
ス性ＩＬ−１８ＢＰのアナログを示す。それらムテインは、既知の合成および／
または位置指定突然変異誘発技術、またはこの場合に適した他の既知の技術によ
って製造される。

【００８９】 そのようなムテインは、好ましくは、ＩＬ−１８ＢＰと実質的に類似する活性
を有するほど、ＩＬ−１８ＢＰの配列に充分似た、またはウイルス性ＩＬ−１８
ＢＰに充分似たアミノ酸配列を有する。ＩＬ−１８ＢＰのある活性は、ＩＬ−１
８に結合する能力である。ムテインがＩＬ−１８との充分な結合能力を有するか
ぎり、アフィニティークロマトグラフィーの方法などによって、ＩＬ−１８の精
製において使用されることができ、ＩＬ−１８ＢＰと実質的に類似した活性を有
すると考えることができる。したがって、得られたムテインが、ＩＬ−１８ＢＰ
と実質的に同じ活性を有するかどうかは、たとえば、放射線免疫検定法またはＥ
ＬＩＳＡ法などラベルされたＩＬ−１８に適当にムテインが結合するかどうか決
定するための単純なサンドウィッチ競合アッセイにそのムテインを供することか
らなるルーチンの実験方法によって、決定されることができる。

【００９０】 本発明において使用されることができる、ＩＬ−１８ＢＰポリペプチドのムテ
インまたはウイルス性ＩＬ−１８ＢＰのムテイン、もしくはそれをコードする核
酸は、本明細書中に表現された教授および指導に基づいて、過度の実験をするこ
となく、当業者によって決まりきった手順で得られる置換ペプチドまたはポリペ
プチドと実質的に一致する配列の有限の一群を含む。

【００９１】 本発明におけるムテインの好ましい変更は、「保存的な」置換として知られる
ものである。ＩＬ−１８ＢＰポリペプチドまたはタンパク質またはウイルス性Ｉ
Ｌ−１８ＢＰｓの保存的なアミノ酸置換は、メンバー間における置換は分子の生
物学的機能を保存しているという、実質的に類似した物理化学的な特性を有する
群における同義アミノ酸を含み得る（Grantham, 1974）。とくに挿入または欠失
が、たとえば３０以下、好ましくは１０以下のわずかなアミノ酸に関するのみで
あり、たとえばシステイン残基など機能的構造に重要なアミノ酸の除去または入
れ替えをしない場合、アミノ酸の挿入および欠失もまた、その機能を変化させる
ことなく前記配列においてなされることは明らかである。このような欠失および
／または挿入によって産生されるタンパク質およびムテインは、本発明の範囲内
である。

【００９２】 好ましくは、同義アミノ酸群は表Ｉに表示されているものである。より好まし
くは、同義アミノ酸群は表ＩＩに表示されているものであり；最も好ましくは、
同義アミノ酸群は表ＩＩＩに表示されているものである。

【００９３】

【表１】

【００９４】

【表２】

【００９５】

【表３】

【００９６】 本発明において使用されるための、ＩＬ−１８ＢＰのポリペプチドもしくはタ
ンパク質のムテイン、またはウイルス性ＩＬ−１８ＢＰｓのムテインを得るため
に用いられ得る、タンパク質のアミノ酸置換の産生の例は、マーク（Mark）らに
よる米国特許第ＲＥ３３，６５３号明細書、米国特許第４，９５９，３１４号明
細書、同第４，５８８，５８５号明細書および同第４，７３７，４６２号明細書
；コース（Koths）らによる同第５，１１６，９４３号明細書、ナーメン（Namen
）らによる同第４，９６５，１９５号明細書、コング（Chong）らによる同第４
，８７９，１１１号明細書、リー（Lee）らによる同第５，０１７，６９１号明
細書などの周知の方法手順；および米国特許第４，９０４，５８４号明細書に示
されたリジンを置換されたタンパク質（Shaw et al）を含む。

【００９７】 「融合タンパク質」という用語は、たとえば体液内において長時間に延びた滞
在時間を有する他のタンパク質と融合された、ＩＬ−１８ＢＰまたはウイルス性
ＩＬ−１８ＢＰまたはそのムテインもしくは断片からなるポリペプチドのことを
指す。ＩＬ−１８ＢＰまたはウイルス性ＩＬ−１８ＢＰは、このようにたとえば
免疫グロブリンまたはその断片といった他のタンパク質、ポリペプチドなどと融
合され得る。

【００９８】 本明細書中で用いられる「機能的誘導体」は、本技術分野において周知の方法
で、残基もしくはＮ末またはＣ末基の側鎖として生じる官能基から調整され得る
ＩＬ−１８ＢＰｓまたはウイルス性ＩＬ−１８ＢＰの誘導体、ならびに、そのム
テインおよび融合タンパク質を含み、薬学的に許容し得るかぎり、すなわちＩＬ
−１８ＢＰまたはウイルス性ＩＬ−１８ＢＰｓの活性と実質的に類似しているタ
ンパク質の活性を破壊せず、それを含む組成物において毒性を与えないかぎり、
本発明に含まれる。

【００９９】 それらの誘導体は、たとえば、抗原部位を覆い、体液内でＩＬ−１８ＢＰまた
はウイルス性ＩＬ−１８ＢＰの滞在を延ばし得るポリエチレングリコール側鎖を
含み得る。他の誘導体は、カルボキシル基の脂肪族エステル、アンモニアまたは
第一もしくは第二アミンを用いた反応によるカルボキシル基のアミド、アシル部
分（たとえばアルカノイル基または炭素環式アロイル基）で形成されるアミノ酸
残基の遊離アミノ基のＮ−アシル誘導体、アシル部分で形成される遊離水酸基（
たとえばセリルまたはトレオニル残基）のＯ−アシル誘導体を含む。

【０１００】 ＩＬ−１８ＢＰまたはウイルス性ＩＬ−１８ＢＰ、ムテインおよび融合タンパ
ク質の「活性断片」がＩＬ−１８ＢＰと実質的に類似した活性を有する場合、本
発明では、該断片として、タンパク質分子のみまたは関連分子もしくはそれと結
合する残基（たとえば糖もしくはリン酸塩残基、またはタンパク質分子の集合体
または糖残基）を伴うタンパク質分子のポリペプチド鎖の断片または前駆体を含
む。

【０１０１】 本発明のさらに好ましい実施態様において、ＩＬ−１８阻害剤はＩＬ−１８抗
体である。抗ＩＬ−１８抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナル、キメラ
、ヒトに適応させた、または完全にヒトのものであり得る。組換え抗体およびそ
の断片は、インビボにおいてＩＬ−１８と結合する高い親和性および低毒性によ
って特徴付けられる。本発明において用いられる抗体は、病的な症状またはあら
ゆる徴候または病的な症状に関連する徴候群を極めて軽減または緩和するために
充分な期間、患者を治療することができる能力、および低毒性によって特徴付け
られる。

【０１０２】 中和抗体は、ＩＬ−１８で免疫されたウサギ、ヤギまたはマウスなどの動物に
よって容易に作製することができる。免疫されたマウスはとくに、ハイブリドー
マの製造するためのＢ細胞の供給源を提供するのに有効であり、その結果、ハイ
ブリドーマは大量の抗ＩＬ−１８モノクローナル抗体を産生するために培養され
る。

【０１０３】 キメラ抗体は、さまざまな動物種由来の２つまたはそれ以上の切片または一部
によって特徴づけられた免疫グロブリン分子である。一般的に、キメラ抗体の可
変領域は、マウスモノクローナル抗体のようなヒトではない哺乳動物の抗体由来
であり、免疫グロブリンの定常領域はヒトの免疫グロブリン分子由来である。好
ましくは、両方の領域およびその組み合わせは、決まりきった手順によって決定
されたように低い免疫原性を有する（Elliott et al., 1994）。ヒトに適応させ
た抗体は、マウスの定常領域をマウスの抗原結合領域は残したままヒトの対応物
で置き換えるという、遺伝子工学技術によって創出された免疫グロブリン分子で
ある。得られるマウス−ヒトキメラ抗体は、ヒトにおいて、好ましくは免疫原性
が減少し、薬物動態が改善される（Knight et al., 1993）。

【０１０４】 したがって、さらに好ましい実施態様において、ＩＬ−１８抗体はヒトに適応
させたＩＬ−１８抗体である。ヒトに適応させた抗ＩＬ−１８抗体の好ましい例
は、たとえば欧州特許出願第０９７４６００号明細書に記載されている。

【０１０５】 さらになお好ましい実施態様において、ＩＬ−１８抗体は、完全にヒト由来の
ものである。ヒトの抗体を産生する技術は、たとえば国際公開第００／７６３１
０号パンフレット、国際公開第９９／５３０４９号パンフレット、米国特許第６
，１６２，９６３号明細書またはオーストラリア特許第５３３６１００号明細書
に詳細に記載されている。完全なヒトの抗体は、好ましくは、全てまたは一部の
機能的なヒトのＩｇ座を含み、たとえば異種マウスといったトランスジェニック
動物によって産生される組換え抗体である。

【０１０６】 本発明の非常に好ましい実施態様において、ＩＬ−１８阻害剤は、ＩＬ−１８
ＢＰまたはアイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質、機能的な誘導体、その
活性断片または循環的に改変された誘導体である。それらアイソフォーム、ムテ
イン、融合タンパク質または機能的な誘導体は、とくにＩＬ−１８との結合する
というＩＬ−１８ＢＰの生物学的活性を残し、好ましくは、本質的には少なくと
もＩＬ−１８ＢＰと類似した活性を有する。理想的には、そのようなタンパク質
は、非修飾のＩＬ−１８ＢＰと比較して非常に増大した生物学的活性を有する。
好ましい活性断片は、ＩＬ−１８ＢＰの活性よりも優れた活性を有するか、もし
くはより優れた安定性またはより低い毒性もしくは免疫原性などのさらなる利点
を有し、または大量に産生することがより容易であるか、もしくは精製がより容
易である。

【０１０７】 ＩＬ−１８ＢＰおよびそのスプライシング変異体／アイソフォームの配列は、
２０００年のキムらによるものだけでなく、国際公開第９９／０９０６３号パン
フレットまたは１９９９年のノービックらによって提供される。

【０１０８】 ＩＬ−１８ＢＰの機能的誘導体は、安定性、半減期、生物学的利用能、人体に
よる寛容または免疫原性などのタンパク質の性質を改善するために、ポリマーと
結合されてもよい。これらの目標を達成するために、ＩＬ−１８ＢＰはたとえば
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と結合されてもよい。ペギレーション（PEGy
lation）は、たとえば国際公開第９２／１３０９５号パンフレットに記載されて
いる周知の方法によって行なわれる。

【０１０９】 したがって、本発明の好ましい実施態様において、ＩＬ−１８ＢＰはペギレー
ションされる。

【０１１０】 本発明のさらに好ましい実施態様において、ＩＬ−１８阻害剤は、免疫グロブ
リンの全てまたは一部に融合したＩＬ−１８結合タンパク質の全てまたは一部か
らなる融合タンパク質である。得られる融合タンパク質が、とくにＩＬ−１８へ
の結合といったＩＬ−１８ＢＰの生物学的活性を保持することは、当業者には理
解されるだろう。融合は、直接または、１から３アミノ酸残基の長さ、またはよ
り長いたとえば１３アミノ酸残基の長さの短いリンカーペプチドを介しなるもの
であってよい。該リンカーは、たとえば配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅ
ｔ）のトリペプチド、またはＩＬ−１８ＢＰ配列と免疫グロブリン配列との間に
導入されるＧｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３アミノ酸リンカー配列
であり得る。得られる融合タンパク質は、体液内での延びた滞在時間（半減期）
、増大した特異的な活性、上昇した発現レベルまたは融合タンパク質の精製が容
易になるなどの改善された性質を有する。

【０１１１】 好ましい実施態様において、ＩＬ−１８ＢＰはＩｇ分子の定常領域に融合され
る。好ましくは、それは、たとえばヒトのＩｇＧ１のＣＨ２およびＣＨ３ドメイ
ンのような重鎖領域に融合される。ＩＬ−１８ＢＰおよび免疫グロブリンの部分
からなる特異的な融合タンパク質の産生は、たとえば国際公開第９９／０９０６
３号パンフレットの実施例１１に記載されている。ＩｇＧ₂もしくはＩｇＧ₄、ま
たはたとえばＩｇＭもしくはＩｇＡのような他のＩｇクラスのアイソフォームな
ど、Ｉｇ分子の他のアイソフォームもまた、本発明における融合タンパク質の産
生に適する。融合タンパク質はまた、モノマーまたはマルチマー、ヘテロもしく
はホモのマルチマーであり得る。

【０１１２】 インターフェロンは、主に、ウイルス複製および細胞増殖に対する阻害効果の
ために知られている。たとえば、インターフェロン−γは、免疫および炎症反応
を促進するのに重要な役割を果たす。インターフェロンβ（ＩＦＮ−β、Ｉ型イ
ンターフェロン）は、抗炎症的な役割を果たすと言われている。トリアンタフィ
ロポーロら（Triantaphyllopoulos et al）（１９９９）によって公開された研
究は、疾患のマウスモデル、すなわちコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデルに
おいて明らかにされたように、ＩＦＮ−βが慢性関節リウマチの治療において有
効な効果を有することを示した。このＩＦＮ−βの有効な効果は、以下の実施例
において確証された。

【０１１３】 本発明は、また、関節炎、とくに慢性関節リウマチの治療用医薬の製造におけ
るＩＬ−１８阻害剤とインターフェロンとの組み合わせの用途に関する。

【０１１４】 インターフェロンは、また、タンパク質の安定性を改善するためにポリマーと
結合され得る。インターフェロンβとポリオールのポリエチレングリコール（Ｐ
ＥＧ）との結合は、たとえば国際公開第９９／５５３７７号パンフレットに記載
されている。

【０１１５】 本発明の他の好ましい実施態様において、インターフェロンはインターフェロ
ン−β（ＩＦＮ−β）であり、より好ましくはＩＦＮ−β１ａである。

【０１１６】 ＩＬ−１８産生および／または作用の阻害剤は、好ましくはインターフェロン
と同時に、連続してまたは別々に用いられる。

【０１１７】 なおさらなる本発明の実施態様において、ＩＬ−１８阻害剤はＴＮＦアンタゴ
ニストと組み合わせて用いられる。ＴＮＦアンタゴニストは、いくつかの方法で
その活性を発揮する。まず、アンタゴニストは、ＴＮＦエピトープまたはＴＮＦ
受容体結合能力を有するエピトープを部分的または実質的に中和するために充分
な親和性および特異性により、ＴＮＦ分子そのものに結合またはＴＮＦ分子その
ものを隔離することができる（以下「隔離アンタゴニスト」と呼ぶ）。隔離アン
タゴニストは、たとえば、ＴＮＦに対して誘導される抗体である。

【０１１８】 さらに、ＴＮＦアンタゴニストは、ＴＮＦ結合後、細胞表面の受容体によって
活性化されるＴＮＦシグナル伝達経路を阻害することができる（以下「シグナリ
ングアンタゴニスト」と呼ぶ）。アンタゴニストの両群は、関節炎とくに慢性関
節リウマチの治療に対して、ＩＬ−１８阻害剤と組み合わせて、単独または併用
のどちらでも有益である。

【０１１９】 ＴＮＦアンタゴニストは、また、たとえばＴＮＦによって増殖および免疫グロ
ブリン分泌を引き起こすヒトＢ細胞といった、インビトロでの感受性細胞株にお
ける本来のＴＮＦ活性に関する効果に対して、決まりきった手順で候補をスクリ
ーニングすることによって容易に同定、評価される。そのアッセイは、アッセイ
で用いられるＴＮＦのモル量をたとえば０．１から１００倍にした候補アンタゴ
ニストの希釈によるＴＮＦ処方およびＴＮＦなしまたはアンタゴニストのみのコ
ントロールを含む（Tucci et al., 1992）。

【０１２０】 隔離アンタゴニストは、本発明によって用いられる好ましいＴＮＦアンタゴニ
ストである。隔離アンタゴニストの間でも、高い親和性でＴＮＦに結合し、およ
び低い免疫原性を有するポリペプチドが好ましい。可溶性のＴＮＦ受容体分子お
よびＴＮＦに対する中和抗体は、とくに好ましい。たとえば、可溶性のＴＮＦ−
ＲＩおよびＴＮＦ−ＲＩＩは、本発明において有効である。その受容体の細胞外
ドメインまたは機能的な部分からなる切断型のそれらの受容体は、本発明による
と、よりとくに好ましいアンタゴニストである。切断型の可溶性のＩ型ＴＮＦ受
容体およびＩＩ型ＴＮＦ受容体は、たとえば欧州特許第９１４４３１号明細書に
記載されている。

【０１２１】 切断型のＴＮＦ受容体は、可溶性であり、尿および血清において３０ｋＤａお
よび４０ｋＤａのＴＮＦ阻害結合タンパク質として検出され、それぞれＴＢＰＩ
およびＴＢＰＩＩと呼ばれている（Engelmann et al., 1990）。同時的、連続的
または別々の、ＴＮＦアンタゴニストおよび／またはインターフェロンを伴うＩ
Ｌ−１８阻害剤の用途は、本発明によると好ましい。

【０１２２】 本発明によると、ＴＢＰＩおよびＴＢＰＩＩはＩＬ−１８阻害剤と組み合わせ
て使用されるための好ましいＴＮＦアンタゴニストである。受容体分子の誘導体
、断片、領域および生物学的活性部位は、本発明においても使用することができ
る受容体分子に機能的に似ている。受容体分子の生物学的に活性な相当物または
誘導体は、充分な大きさであって、かつ膜貫通ＴＮＦ受容体との相互作用が阻害
または妨害されるような親和性によりＴＮＦと結合できる、ポリペプチドまたは
受容体分子をコードする配列の一部をいう。

【０１２３】 さらに好ましい実施態様において、ヒトの可溶性ＴＮＦ−ＲＩ（ＴＢＰＩ）は
、本発明によって使用されるＴＮＦアンタゴニストである。天然および組換えの
可溶性ＴＮＦ受容体分子ならびにその産生の方法は、欧州特許第３０８３７８号
明細書、同第３９８３２７号明細書および同第４３３９００号明細書において記
載されている。

【０１２４】 ＩＬ−１８阻害剤は、ＴＮＦ阻害剤と共に、同時的、連続的または別々に使用
され得る。有効的には、ＩＬ−１８抗体または抗血清と、ＴＮＦ阻害活性を有す
るＴＮＦの可溶性受容体との組み合わせが用いられる。

【０１２５】 本発明のさらに好ましい実施態様において、医薬はさらにＣＯＸ阻害剤、好ま
しくはＣＯＸ−２阻害剤を含有する。ＣＯＸ阻害剤は、本技術分野において周知
である。特異的なＣＯＸ−２阻害剤は、国際公開第０１／００２２９号パンフレ
ットにおいて記載されている。

【０１２６】 本発明は、ＩＬ−１８阻害剤および／またはインターフェロンおよび／または
ＴＮＦアンタゴニストおよび／またはＣＯＸ−２阻害剤の組み合わせの用途に関
する。その組み合わせは、関節炎とくに慢性関節リウマチの治療および／または
予防、肝傷害の治療および／または予防、ならびに炎症性腸疾患とくにクローン
病および潰瘍性結腸炎の治療および／または予防に適している。その活性成分は
、同時的、連続的または別々に使用され得る。

【０１２７】 本発明の好ましい実施態様において、ＩＬ−１８阻害剤は、約０．０００１か
ら１０ｍｇ／体重ｋｇ、もたは約０．０１から５ｍｇ／体重ｋｇまたは約１から
２ｍｇ／体重ｋｇの量で使用される。さらになお好ましい実施態様において、Ｉ
Ｌ−１８阻害剤は、約０．１から１０００μｇ／体重ｋｇ、または約１から１０
０μｇ／体重ｋｇまたは約１０から５０μｇ／体重ｋｇの量で使用される。

【０１２８】 本発明は、さらに、関節炎の症状または関節炎、とくに慢性関節リウマチの予
防および／または治療用、肝傷害の治療用、および炎症性結腸炎の治療用の医薬
の製造における、ＩＬ−１８阻害剤をコードする配列からなる発現ベクターの用
途に関する。したがって、遺伝子治療的アプローチは、その疾患を治療および／
または予防に対して用いられる。有効的には、ＩＬ−１８阻害剤はその後インサ
イチュで発現され、その疾患によって冒された組織または細胞内で直接効率的に
ＩＬ−１８を妨害するであろう。

【０１２９】 関節炎を治療および／または予防するために、ＩＬ−１８産生および／または
作用の阻害剤の配列からなる遺伝子治療ベクターは、たとえば、遺伝子治療ベク
ターの全身投与に関する、ベクターの希釈、標的細胞または組織への到達および
標的化、および副作用などの問題を避けるために、病的な関節へ直接注入され得
る。

【０１３０】 通常はＩＬ−１８阻害剤が発現されていない細胞、または充分量ではない阻害
剤を発現している細胞において、ＩＬ−１８阻害剤の内因的な産生を誘導および
／または促進させるベクターの用途は、本発明においても観察された。そのベク
ターは、阻害剤またはＩＬ−１８を発現することが所望される細胞において機能
的な調節配列からなる。そのような調節配列は、たとえばプロモーターまたはエ
ンハンサーであり得る。その調節配列は、そののち相同組換えによってゲノムの
適当な座に導入されてもよく、調節配列と遺伝子とを結合させることにより遺伝
子発現が誘導または促進される。その技術は、通常「内性遺伝子活性化」（ＥＧ
Ａ）と呼ばれ、たとえば国際公開第９１／０９９５５号パンフレットに記載され
ている。

【０１３１】 同じ技術、すなわち、たとえばサイレンシング因子のような負の調節因子をＩ
Ｌ−１８の遺伝子座に導入することによって、ＩＬ−１８発現を停止させること
ができ、したがって、ＩＬ−１８発現のダウンレギュレーションまたは妨害を導
くことは、当業者によって理解されるだろう。そのようなＩＬ−１８発現のダウ
ンレギュレーションまたはサイレンシングが、疾患を予防および／または治療す
るためのＩＬ−１８阻害剤の用途として同じ効果を有することは、当業者に理解
されるだろう。

【０１３２】 本発明はさらに、肝傷害、関節炎または炎症性腸疾患の治療および／または予
防用医薬の製造における、ＩＬ−１８阻害剤を産生するための遺伝子的に改変さ
れた細胞の用途に関する。

【０１３３】 本発明はさらに、治療に有効量のＩＬ−１８阻害剤および治療に有効量のイン
ターフェロンからなる、炎症性関節炎、肝傷害または炎症性腸疾患の予防および
／または治療にとくに有効な、医薬組成物に関する。ＩＬ−１８阻害剤として、
その組成物はカスパーゼ−１阻害剤、ＩＬ−１８に対する抗体、あらゆるＩＬ−
１８受容体サブユニットに対する抗体、ＩＬ−１８シグナル伝達経路の阻害剤、
ＩＬ−１８と競合しＩＬ−１８受容体を妨害するＩＬ−１８のアンタゴニスト、
ならびにＩＬ−１８結合タンパク質、アイソフォーム、ムテイン、融合タンパク
質、機能的な誘導体、同じ活性を有するその活性断片または循環的に改変された
誘導体からなり得る。

【０１３４】 前記ＩＬ−１８ＢＰおよびそのアイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質、
機能的な誘導体、活性断片または循環的に改変された誘導体は、医薬組成物の好
ましい活性成分である。

【０１３５】 医薬組成物に含まれるインターフェロンは、好ましくはＩＦＮ−βである。

【０１３６】 なお他の好ましい実施態様において、医薬組成物は、治療に有効量のＩＬ−１
８阻害剤、任意にはインターフェロンおよびＴＮＦアンタゴニストを含有する。
ＴＮＦアンタゴニストは、ＴＮＦ活性を中和する抗体、または可溶性の切断型Ｔ
ＮＦ受容体の断片であり得、ＴＢＰＩおよびＴＰＢＩＩとも呼ばれる。本発明の
医薬組成物は、さらに１つまたはそれ以上のＣＯＸ阻害剤、好ましくはＣＯＸ−
２阻害剤を含有する。

【０１３７】 「薬学的に許容し得る」という定義は、活性成分の生物学的活性の効果を妨げ
ず、投与される宿主に対する毒性がないあらゆる担体を含むことを意味する。た
とえば、非経口投与において、活性タンパク質は、食塩水、デキストロース溶液
、血清アルブミンおよびリンガー溶液などのビヒクルで注射用の単位投与量に処
方されてもよい。

【０１３８】 本発明の医薬組成物の活性成分は、さまざまな方法で個体に投与されることが
できる。投与経路は、皮内、経皮的（たとえば、徐放性の処方で）、筋肉内、腹
腔内、静脈内、皮下、経口、硬膜外麻酔、局部および鼻腔内の経路を含む。その
他に、たとえば上皮または内皮組織を介した吸収作用、または活性剤をコードす
るＤＮＡ分子を（ベクターを介して）患者へ投与し、インビボでその活性剤を発
現および分泌させる遺伝子治療を、治療に有効な投与経路として用いることがで
きる。さらに、本発明におけるタンパク質は、薬学的に許容し得る界面活性剤、
賦形剤、担体、希釈剤、ビヒクルなどの他の生物学的活性剤の構成要素と共に投
与することができる。

【０１３９】 非経口（たとえば、静脈内、皮下、筋肉内）投与において、薬学的に許容し得
る非経口ビヒクル（たとえば、水、食塩水、デキストロース溶液）および等脹を
維持する添加物（たとえばマンニトール）または化学的安定性を維持する添加物
（たとえば防腐剤および緩衝液）に関連して、活性タンパク質は、溶液、懸濁液
、乳液または親水性の粉末として処方されることができる。その処方は、よく用
いられる技術によって滅菌される。

【０１４０】 本発明において活性タンパク質の生物学的利用能もまた、たとえばＰＣＴ特許
出願の国際公開第９２／１３０９５号パンフレットに記載されているように、分
子をポリエチレングリコールに結合するなど、ヒトの体内で分子の半減期を延ば
す接合方法を用いることによって改良されることができる。

【０１４１】 活性タンパク質の治療に有効な量は、アンタゴニストのタイプ、ＩＬ−１８に
対するアンタゴニストの親和性、アンタゴニストによって示された未解決の細胞
毒性の活性、投与経路、患者の臨床状態（内因性のＩＬ−１８活性を毒性がない
レベルに維持することの望ましさを含む）を含む、要素の相互関係であるだろう
。

【０１４２】 「治療に有効な量」とは、投与されると、ＩＬ−１８阻害剤が、ＩＬ−１８の
生物学的な活性を阻害する結果となるような量である。単回投与または複数回投
与として固体に投与される用量は、ＩＬ−１８阻害剤の薬学動態的性質、投与経
路、患者の症状および特徴（性別、年齢、体重、健康状態、大きさ）、徴候の程
度、同時進行中の治療、治療頻度および望ましい効果を含むさまざまな因子に依
存して変化するだろう。確立された投与量の範囲の調節および取扱いは、個体に
おいてＩＬ−１８の阻害を測定するインビトロおよびインビボでの方法と同様、
当業者の能力の範囲内で充分である。

【０１４３】 本発明において、ＩＬ−１８阻害剤は、約０．０００１から１０ｍｇ／体重ｋ
ｇまたは約０．０１から５ｍｇ／体重ｋｇ、もたは約０．０１から５ｍｇ／体重
ｋｇまたは約０．１から３ｍｇ／体重ｋｇまたは約１から２ｍｇ／体重ｋｇの量
で使用される。さらに好ましいＩＬ−１８阻害剤の量は、約０．１から１０００
μｇ／体重ｋｇまたは約１から１００μｇ／体重ｋｇまたは約１０から５０μｇ
／体重ｋｇの量である。

【０１４４】 本発明において好ましい投与経路は、皮下経路による投与である。筋肉内投与
は、本発明においてさらに好ましい。

【０１４５】 さらに好ましい実施態様において、ＩＬ−１８阻害剤は、毎日または１日おき
に投与される。

【０１４６】 毎日の投与は、望ましい結果を得るために有効な、間隔をあけた投与または持
続的な放出処方で通常与えられる。２回目または継続的な投与は、個体に最初ま
たはあらかじめ投与された用量と同じ、それ以下またはそれ以上の用量で行なわ
うことができる。２回目または継続的な投与は、病気の襲来中またはそれ以前に
投与されることができる。

【０１４７】 本発明において、ＩＬ−１８阻害剤は、治療に有効な量で、ほかの治療養生法
または薬剤（たとえば多様な薬剤養生法）とともに、とくにインターフェロンお
よび／またはＴＮＦアンタゴニストおよび／またはＣＯＸ阻害剤とともに、あら
かじめ、同時または連続的に、個体に予防的または治療的に投与されることがで
きる。他の治療薬と同時に投与される活性剤は、同じまたは異なる組成物におい
て投与されることができる。

【０１４８】 本発明はさらに、薬学的に許容し得る担体と共に、有効量のＩＬ−１８阻害剤
および／またはインターフェロンおよび／またはＴＮＦアンタゴニストおよび／
またはＣＯＸ阻害剤を混合することからなる医薬組成物の製造方法に関する。

【０１４９】 今や本発明を説明したが、実例として提供され本発明を制限しようとすること
を意図されていない以下の実施例を参考にすることによって、容易に理解される
だろう。

【０１５０】 ［実施例］ 第一部：肝傷害におけるＩＬ−１８インヒビターの用途に関する実施例１から８
実施例１：ＩＬ−１８ＢＰ−Ｈｉｓタグ（His tag）の産生 Ｈｉｓタグを含有する、精製された組換えヒトＩＬ１８ＢＰ（r-hIL-18BP-His
タグ）は、ＣＨＯ細胞で産生された。真核細胞での組換えタンパク質の産生は
、当業者にとって周知である。ＩＬ−１８ＢＰをコードするＤＮＡを運び、かつ
組換えＩＬ−１８ＢＰを産生するための真核細胞へのトランスフェクションに適
する適当なベクターを構築するために、周知の方法を利用することができる。細
胞における発現においては、ＩＬ−１８ＢＰをコードするＤＮＡ（たとえば（No
vick et al., 1999）参照）は切り出され、細胞へのトランスフェクションに適
する発現ベクターに挿入される。あるいはまた、そのようなＤＮＡは適当なセン
スおよびアンチセンスプライマーを用いたＰＣＲによって調製することができる
。得られたｃＤＮＡ構築物はついで、本分野における周知の技術により、適当に
構築された真核細胞の発現ベクターに挿入される（Manaitis, 1982）。その組換
えタンパク質は９５％以上の精度で精製され、そのリガンドに対する高い親和性
を有しインビトロおよびインビボにおいて生物学的に活性であることが明らかに
された。

【０１５１】 実施例２：マウスモデルにおける、内毒素誘導死に対するＩＬ１８ＢＰの保護効
果 マウスモデルは、リポ多糖（ＬＰＳ）の高い投与量に対して、ＩＬ−１８の阻
害剤であるＩＬ１８ＢＰがマウスを保護するかどうかをテストするために使用し
た。ＬＰＳは急性の肝傷害を誘導し、つづいてマウスは急死する。

【０１５２】 ４ｍｇ／ｋｇの組換え体である、Ｈｉｓタグを含むヒトＩＬ−１８ＢＰ（ｒｈ
ＩＬ１８ＢＰｈｉｓ）（そのタンパク質の組換え産物から得られた）は、Ｃ５７
ＢＬ／６マウスへ腹腔内（ｉ．ｐ．）注射された。１時間後、６０ｍｇ／ｋｇの
ＬＰＳが、注射された（致死量）。マウスの生存は、ＬＰＳのみ（ＩＬ１８ＢＰ
なし）を投与された動物群と比較された。

【０１５３】 ３日間で全ての動物が死んだコントロールマウスとは対照に、ｒｈＩＬ−１８
ＢＰ−ｈｉｓを注射されたマウス７匹中５匹が、ＬＰＳ注射から生き残った。

【０１５４】 血液試料は、ｒｈＩＬ−１８ＢＰ−ｈｉｓの量を増加せずに、または増加して
ＬＰＳ注入から５時間後に採取され、循環するＩＦＮ−γに対するＥＬＩＳＡに
よって解析された（図１）。０．４および４ｍｇ／ｋｇのｒｈＩＬ−１８ＢＰは
、血清ＩＦＮ−γを２分の１にした。低い投与量のｒｈＩＬ−１８ＢＰ（０．０
０４および０．４ｍｇ／ｋｇ）では、この阻害は失われた。

【０１５５】 実施例３：ＩＬ１８ＢＰは疾患のマウスモデルにおける肝傷害に対して保護効果
を有する 劇症肝炎のマウスモデルは、ＩＬ１８ＢＰの効果をテストするために使用した
。プロピオニバクテリウム アクネス（Propionibacterium acnes）（Ｐ．ａｃ
ｎｅｓ）およびリポ多糖（ＬＰＳ）を続けて投与されると、マウスは急性肝傷害
を発症する。

【０１５６】 Ｃ５７ＢＬ／６ Ｐ. ａｃｎｅｓ感受性マウスにＬＰＳを注射する前に、さま
ざまな時間（１時間、２０分、同時に）でｒｈＩＬ−１８ＢＰ−ｈｉｓ（４；０
．４；０．０４；０ｍｇ／ｋｇ）の増加させた投与量を用い、マウスに注射した
。ｒｈＩＬ−１８ＢＰ−ｈｉｓがＬＰＳと同じ時間にｉ．ｐ．投与されたとき、
生き残るマウスはなく、循環ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αのレベルは影響されな
い。驚くべきことに、ｒｈＩＬ−１８ＢＰ（４および０．４ｍｇ／ｋｇ）は 、図２に示したように、循環アラニンアミノトランスフェラーゼ（肝傷害のマー
カー）の７０％の減少を誘導した。

【０１５７】 これに加えて、マウスの生存について調べた（図３）：ｒｈＩＬ−１８ＢＰが
ＬＰＳの２０分前にｉ．ｐ．で与えられたとき、ＩＬ−１８ＢＰの最も高い２つ
の投与量（４および０．４ｍｇ／ｋｇ）は、ＩＬ−１８ＢＰの代わりにＮａＣｌ
を与えられたコントロールマウスと比較して１０時間まで死を遅らせた。

【０１５８】 血清ＩＦＮ−γレベルの測定の結果は、図４に示す。ｒｈＩＬ−１８ＢＰ（４
ｍｇ／ｋｇ）は、循環ＩＦＮ−γレベルの９０％および循環アラニンアミノトラ
ンスフェラーゼの８０％を阻害した（示すものはなし（not shown））。

【０１５９】 ｒｈＩＬ−１８ＢＰ−ｈｉｓがＬＰＳの１時間前に与えられたとき、生存曲線
および循環ＩＦＮ−γレベルは、ｒｈＩＬ−１８ＢＰ−ｈｉｓをＬＰＳの２０分
前に与えたときに観察されたものと類似しているが、循環アラニンアミノトラン
スフェラーゼのレベルは影響されなかった（示すものはなし）。

【０１６０】 これに加えて、マウスの肝組織は、トンネル顕微鏡検査によってだけでなく、
ヘマトキシリン−エオシン染色によって解析された。以前に深刻な肝炎を誘導さ
れたマウスの肝臓は、正常な肝組織と比較して深刻な壊死を示した。これとは対
照に、ＩＬ−１８ＢＰで処置されたマウスの肝組織は、未処置のマウスより壊死
の患部が顕著に少ないことを示した。

【０１６１】 実施例４：抗ＩＬ−１８抗体は致死的内毒血症から保護する ＩＬ−１８抗体によるＩＬ−１８の妨害が、致死量のバクテリアリポ多糖から
マウスを保護するかどうかを評価するために、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスはまず、
中和ウサギ抗マウスＩＬ−１８抗体（ポリクローナル）、またはコントロールと
して正常ウサギ血清（ＮＤＳ）を注射された。抗体処置から３０分後、大腸菌（
図５Ａ）またはＳ．チフィムリウム（S. thyphimurium）（図５Ｂ）のどちらか
由来のＬＰＳの致死量を注射した。実験は１０〜１２匹マウス／群を含み、２つ
の異なる場合において２回行なった。

【０１６２】 図５Ａに示されたように、抗−ＩＬ−１８抗血清でのマウスの処置は、４０ｍ
ｇ／ｋｇの大腸菌ＬＰＳによって誘導される死を予防した。正常ウサギ血清で処
置されたマウスの１０％の生存に対して、抗−ＩＬ−１８処置後１００％のマウ
スが生き残った（ｐ＜０．００５）。

【０１６３】 図５Ｂは、抗体で処置されたマウスは、Ｓ．チフィムリウムの致死効果から保
護されたことを示す（５０％対０％生存；ｐ＜０．０５）。

【０１６４】 実施例５：ＩＬ−１８およびＴＮＦ−αの妨害は、ＣｏｎＡ−およびＰＥＡ−誘
導肝毒性からマウスを保護する 肝毒性の２つの実験モデルは、肝傷害におけるＩＬ−１８およびＴＮＦ−αの
役割を評価するために使用した。コンカナバリンＡ（Ｃｏｎ Ａ）および緑膿菌
（ＰＥＡ）のマウスへの注射は、どちらも肝傷害を誘導し、Ｔ細胞媒介性肝炎の
モデルである。

【０１６５】 Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスは抗−ＩＬ−１８抗血清または可溶性ＴＮＦ−α受容
体すなわちＴＮＦｓＲｐ５５で前処理された。血清アラニンアミノトランスフェ
ラーゼ（ＡＬＴ）レベルは、肝傷害の指標として測定された（図６）。

【０１６６】 図６に示されたように、ＩＬ−１８抗血清および可溶性ＴＮＦ受容体はどちら
も、賦形剤のみのコントロールの注射（ピロゲンなしの食塩水）と比較して、Ｃ
ｏｎＡが誘導する血清ＡＬＴレベルを顕著に減少させた。可溶性ＴＮＦ受容体お
よびＩＬ−１８抗血清の共投与は、Ｃｏｎ−Ａ誘導肝傷害の完全な阻害を導いた
。

【０１６７】 図６Ｂに示されたように、ＰＥＡを注射したマウスにおいて、ＴＮＦ−α阻害
剤または抗−ＩＬ−１８抗体のどちらかの中和は、それぞれ血清ＡＬＴレベルを
９３％および８３％阻害するという結果になった。両方を組み合わせた妨害によ
り、９９％の保護となった。

【０１６８】 実施例６：ＩＬ−１８結合タンパク質の血漿レベルは、慢性肝疾患の患者で上昇
する ＩＬ−１８ＢＰ血漿レベルは、さまざまな病因の慢性肝疾患（ＣＬＤ）患者１
３３人、および健康なコントロール３１人において、ＩＬ−１８ＢＰモノクロー
ナル抗体を用いた特異的なＥＬＩＳＡによって測定された。

【０１６９】 ＩＬ−１８ＢＰの血漿レベルは、健康な被験者（４．９６±０．４３ｎｇ／ｍ
ｌ、ｐ＜０．００１）よりもＣＬＤ患者（１２．９１±０．８９ｎｇ／ｍｌ；平
均±ＳＥＭ）において顕著に高かった。肝硬変の患者は肝硬変でないＣＬＤの患
者よりも顕著に高いレベルを有した（１９．２３±１．２８ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝６
７、対６．４９±０．５１ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝６６、ｐ＜０．００１）。チャイル
ド−ピュー（Child-Pugh）分類が段階Ｂの患者は、段階Ａの患者よりもＩＬ−１
８ＢＰの高いレベルを有した（２２．４８±２．４４ｎｇ／ｍｌ対９．５７±１
．２５ｎｇ／ｍｌ、ｐ＜０．００１）。しかしながら、チャイルドＢおよびＣの
あいだでは、顕著な違いはなかった（２２．４８±２．４４ｎｇ／ｍｌ対２０．
６２±４．７５ｎｇ／ｍｌ、ｐ＝０．７）。ＩＬ−１８ＢＰの血漿レベルは、Ｇ
ＯＴ、ビリルビンおよび赤血球沈降速度とは正の相互関係がある。プロトロンビ
ン期間（prothrombin time）は負の相互関係が見られた。

【０１７０】 要するに、その結果は、ＩＬ−１８ＢＰ血漿レベルはＣＬＤにおいて上昇し、
かつ疾患の病因とは無関係な疾患の厳しさと相互関係があることを示す。炎症性
（proinflammatory）ＩＬ−１８の内因性アンタゴニストであるにもかかわらわ
ず、ＩＬ−１８ＢＰの増加したレベルは、ＣＬＤにおける圧倒的な炎症性メディ
エーターに対抗するのに充分でないと思われる。

【０１７１】 実施例７：ＩＬ−１８ＢＰによるアルコール性肝炎の阻害 ラットの４群（５匹／群）は、４週間、胃内注入によってエタノールとトウモ
ロコシ油を含む制限食とを与えた。コントロールラットにおいては、エタノール
を同量のカロリーのデキストロースに置き換えた。そのラットは、毎日マウスＩ
Ｌ−１８ＢＰ（１ｍｇ／ｋｇ）、または食塩水を注射された。病理解析が肝臓切
片に関して実施され、血清中の肝臓酵素、ＴＮＦ−α、ＦＡＳリガンド、および
ＩＮＦ−γの測定が行なわれた。炎症壊死性（necroinflammatory injury）傷害
ならびに肝臓の酵素、ＴＮＦ−α、ＦＡＳリガンドおよびＩＮＦ−γの発現は、
食塩水を注射されエタノールを与えられたラットで見られた。

【０１７２】 ＩＬ−１８ＢＰを注射されたラットは、炎症壊死性傷害から保護され、肝臓の
酵素、ＴＮＦ−α、ＦＡＳリガンドおよびＩＮＦ−γのレベルが顕著に減少した
（＞９０％）。

【０１７３】 実施例８：コンカナバリンＡ誘導肝炎のＩＬ−１８ＢＰによる阻害 Ｂａｌｂ／ｃマウスに毎日、Ｃｏｎ Ａ投与の２時間前に、マウスＩＬ−１８
ＢＰ（１ｍｇ／ｋｇ）を注射してまたは注射せずに、１２ｍｇ／ｋｇのコンカナ
バリンＡ（Ｃｏｎ Ａ）を注射した。肝臓の損傷は、肝臓の酵素、ＴＮＦ−α、
ＦＡＳリガンドおよびＩＮＦ−γの血清レベルを決定することで評価した。肝炎
の組織病理学はコンカナバリンＡのみで処置したマウスと比較した。

【０１７４】 Ｃｏｎ Ａで処置されたコントロールマウスと比較すると、ＩＬ−１８ＢＰで
の前処理により、組織病理学的検査において炎症の兆候がないとともに肝臓の酵
素および、ＴＮＦ−αの血清レベルを顕著に減少させた。

【０１７５】 第二部：関節炎におけるＩＬ−１８阻害剤の用途に関する、実施例９および１０
実施例９：ＩＬ−１８ＢＰ−Ｈｉｓタグの産生 以下の実施例１０において詳細に記載される実験のために、６残基のＨｉｓタ
グを含む組換えＩＬ−１８ＢＰ（ｒ−ｈＩＬ−１８ＢＰ−Ｈｉｓタグ）が、ＣＨ
Ｏ細胞で産生され、キム（kim）ら、２０００年に記載されたように精製された
。その組換えタンパク質は、９５％以上の精度で精製され、そのリガンドに対し
て親和性を有しインビトロおよびインビボにおいて生物学的に活性であることを
明らかにした。

【０１７６】 組換えタンパク質の精製を用意にするタグを用いる、または用いないほかの真
核生物の系におけるその組換えタンパク質の産生は、当業者に周知である。ＩＬ
−１８ＢＰをコードするＤＮＡを運び、かつ組換えＩＬ−１８ＢＰを産生するた
めの真核細胞のトランスフェクションに適する適当なベクターを構築するために
、周知の方法を利用することができる。細胞における発現においては、ＩＬ−１
８ＢＰをコードするＤＮＡ（たとえばNovick et al., 1999参照）はクローニン
グベクターから切り出され、細胞のトランスフェクションに適する発現ベクター
に挿入される。あるいはまた、そのようなＤＮＡは適当なセンスおよびアンチセ
ンスプライマーを用いたＰＣＲによって調製できる。得られたｃＤＮＡ構築物は
ついで、適当に構築された真核細胞の発現ベクターへ、本分野において既知の技
術により挿入される（Maniatis et al., 1982）。

【０１７７】 実施例１０：関節炎のマウスモデルにおける内因性ＩＬ−１８の妨害 方法 コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）の誘導 先に記載されているように（Plater-Zyberk et al., 1995）、ＣＩＡは、天然
の２型ウシコラーゲン（ＣＩＩ）で免疫することによってオスのＤＢＡ／１マウ
ス（８〜１２週齢）において誘導された。ＣＩＩ免疫後２５日から、マウスは疾
患の発症について毎日検査された。

【０１７８】 ｒｈＩＬ−１８ＢＰ−６ｈｉｓでの処置 ＣＩＩで免疫されたＤＢＡ／１マウスの処置は、疾患の臨床的な兆候が初めて
現れたときに始めた。６ヒスチジンのタグを含む組換え体、ヒトＩＬ−１８ＢＰ
（ｒｈ−ＩＬ−１８ＢＰ ６ｈｉｓ）は、コラーゲン処理されたマウスにおいて
内因性ＩＬ１８を中和するために使用した。ｒｈ−ＩＬ−１８ＢＰａ ６ｈｉｓ
は、７日間毎日、５つの異なる濃度１０、３、１、０．５、０．２５ｍｇ／ｋｇ
／注射で腹腔内（ｉ．ｐ．）注射された。その偽薬コントロールマウスには、賦
形剤のみ（０．９％ＮａＣｌ）を与えた。

【０１７９】 疾患の進行評価 臨床評価（臨床スコア） 初めて臨床兆候が現れてから、マウスは毎日、その処理が何か知らされていな
い調査員によって検査された。各肢は疾患の重傷度について採点された（スコア
０〜３．５、最大スコア＝１４／マウス）。浮腫（炎症）の進行は、最初に疾患
の兆候を示した肢において精密ノギス（プロクテスト（Proctest） ２Ｔ、クロ
エプリン ランゲンメステクニック社（Kroeplin Langenmesstechnik）製）を用
いて測定された。

【０１８０】 疾患の進行は、開始後８日間毎日評価され、その後全てのマウスは犠牲にされ
、肢が組織病理学的検査のために集められた。

【０１８１】 軟骨侵食および微視的な炎症の組織病理学的検査 その実験の終了時、すなわち開始から８日後、マウスは殺されて、始めに疾患
の兆候が進行した肢は切り離された。関節は固定され、石灰質を除去され、パラ
フィンに埋め込まれた。その関節の標準切片（５から７μｍ）が作製され、ヘマ
トキシリン／エオシン／サフラニン Ｏで染色された。各関節は、処置プロトコ
ルを知らない２人の調査員によって採点された（破壊されていない軟骨または骨
＝０；局部の軟骨侵食＝１〜２；より広範囲の侵食＝３；全体的な軟骨破壊およ
び骨侵食の存在＝４）。各マウスの最終的なスコアは、採点された関節全ての結
果の平均である。微視的な炎症または滑膜炎は、以下のように０から４で採点さ
れた：炎症なし＝０；少し厚くなったライニング層（lining layer）および／ま
たはやや下のライニング層（sublining layer）内における細胞の浸潤＝１〜２
：厚いライニング層および／やや下のライニング層内のより著しい細胞の浸潤＝
３；滑膜炎部分内の細胞の存在、および多くの炎症性の細胞で高度に浸潤された
滑膜＝４。

【０１８２】 抗コラーゲン抗体の測定 ウシ２型コラーゲンに対する抗体は、固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）を用
いて調べられた。ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの力価が測定された。つまり、プレ
ートは１０μｇのウシコラーゲンで覆われ、その後非特異的結合部位は、０．１
Ｍのエタノラミン（シグマ社（Sigma）製）で遮断される。血清を順に１：２希
釈したものを添加し、アイソタイプの特異的ヤギ抗マウスペルオキシダーゼ（サ
ザン バイオテクノロジー アソシエイト社（Southern Biotechnology Associat
es）製、バーミンガム、アラバマ州、アメリカ合衆国）および基質（５−アミノ
サリシル酸、シグマ社（Sigma）製）を用いてインキュベーションした。プレー
トは４９２ｎｍで読み込まれた。力価は最大値の半分を与える平均±ＳＤ希釈と
して表された。

【０１８３】 ＩＬ−６検定 ＩＬ−６のレベルは、市販用のＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄシステムズ社（R&D System
s）製、ミネアポリス、ミネソタ州、アメリカ合衆国）によって測定した。ＩＬ
−６の生物活性は、Ｂ９細胞を用いた増殖検定（proliferative assay）によっ
て検出された。つまり、ウェルあたり２００μｌの５％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ１６４
０培地内の５×１０³のＢ９細胞は、丸底のマイクロタイタープレートに置かれ
、基準としてヒト組換えＩＬ−６（Ｒ＆Ｄシステムズ社、ミネアポリス、ミネソ
タ州、アメリカ合衆国）を用いて３日間インキュベーションした。インキュベー
ションの最後に、０．５μＣｉの³［Ｈ］チミジン（ネン−ドュポン社（NEN-Dup
ont）製、ボストン、マサチューセッツ州、アメリカ合衆国（ＵＳＡ））が、各
ウェルに加えられた。３時間後、細胞は採取され、チミジンの取り込みが測定さ
れた。ＩＬ−６生物活性の検出限界は、１ｐｇ／ｍｌであった。

【０１８４】 統計解析 顕著な違いは、シグマスタッド統計解析プログラム（SigmaStat statistical
analysis program）およびグラフパッド プリズム プログラム（GraphPad Pri
sm program）を用いるマン ウイットニー テスト（Mann Whitney test）によ
って判断された。

【０１８５】 結果 実験モデルマウスＣＩＡ（コラーゲン誘導関節炎）は、関節炎治療剤としての
ＩＬ−１８ＢＰの効能を判断するために使用された。ＤＢＡ／１マウスへのコラ
ーゲンおよびフロイント不完全アジュバントの投与は、侵食による炎症性の関節
炎の進行を誘導し、ＩＬ−１８ＢＰの治療能力を探るための理想的な機会となる
。この目的のために、内因性ＩＬ−１８は、ＩＬ−１８ＢＰを用いて中和され、
さまざまな病原性パラメーターにおける効果が評価された。

【０１８６】 投与に関する研究を行なった。コラーゲン誘導関節炎ＤＢＡ／１マウスの３群
は、ｉ．ｐ．（腹腔内）に５投与量のＩＬ−１８ＢＰにより治療された（すなわ
ち疾患の発症後）。１０、３、１、０．５または０．２５ｍｇ／ｋｇの濃度のＩ
Ｌ−１８ＢＰは、初めて疾患の臨床的兆候が現れた時、投与された。生理食塩水
（塩化ナトリウム、ＮａＣｌ）の注入は、コントロールとして使用した。これに
加えて、１００００ＩＵのインターフェロンβ（ＩＦＮ−β）は、この関節炎の
実験モデルにおいてＩＦＮの影響を評価するためにｉ．ｐ．で投与された。疾患
の重傷度における効果は、先に述べたように、個々の肢を視覚的に採点すること
によって毎日調べられた。マウスは開始から８日後に犠牲にされた。

【０１８７】 以下の値を計測した。 ・視覚的な臨床的スコア（０〜３．５／肢）（図７ＡおよびＢ） ・後肢の場合、最初に疾患を現した肢の関節の膨張／浮腫（ｍｍで、ノギスで 計測された）（図８） ・疾患になった肢の数（図９） ・最初に疾患となった肢の侵食スコア（０〜４軟骨破壊、図１０） ・最初に関節炎を発症した肢の組織病理学的検査（図１１） ・抗２型コラーゲン抗体のレベル（図１２） ・ＩＬ−６のレベル（図１３）

【０１８８】 疾患の臨床的な重傷度 図７ＡおよびＢに示したように、その疾患の臨床的な深刻さは、ｒｈＩＬ−１
８ＢＰを１ｍｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０１）および０．５ｍｇ／ｍｌ（０．０１＜Ｐ
＜０．０５）で処置された群において顕著に減少した。少量のｒｈＩＬ−１８Ｂ
Ｐ（０．２５ｍｇ／ｋｇ）または大量の１０ｍｇ／ｋｇを与えられたマウスは、
偽薬群と類似した臨床的スコアを有した。その投与量が１ｍｇ／ｋｇのＩＬ−１
８ＢＰは、インターフェロンβ（図７Ａ中にＩＦＮｂと記載）とおよそ同じ効果
である。

【０１８９】 関節の炎症および肢の膨張（浮腫） 微視的炎症（膨張）は、疾患の発症後１日目から実験の最終日の８日目まで、
肢の浮腫を計測することによって研究された。その結果は、図８ＡおよびＢに示
す。ＩＬ−１８ＢＰの有効量は、１、３および１０ｍｇ／ｋｇである。少量の投
与では肢の膨張に有効な効果は得られなかった。図８Ａおよび８Ｂに示したよう
に、１００００ＩＵの濃度のインターフェロン−β（ＩＦＮｂ）は肢の膨張に有
効な効果を示した。

【０１９０】 微視的な滑膜炎は、組織病理学的切片における実験の最後に検出され、スコア
（「滑膜炎スコア」）として表された。炎症（膨張）および滑膜炎スコアの結果
は、表１に要約している。１および３ｍｇ／ｋｇの投与量のｒｈＩＬ−１８ＢＰ
を用いた処置では、膨張が減少する傾向にあったが、少量のＩＬ−１８ＢＰを投
与する処置は、炎症性の滑膜炎において限られた効果しかない（表１）。

【０１９１】

【表４】

【０１９２】 図９は、疾患によって冒された肢の数がＩＬ−１８ＢＰの投与後減少したこと
を示す。とくに、１および０．５ｍｇ／ｋｇの投与量でのＩＬ−１８ＢＰの治療
的注入は、疾患になる肢の数を減少させ、インビボでのＩＬ−１８の妨害によっ
てほかの肢への関節炎の広がりを停止させることを証明している。１および０．
５ｍｇ／ｋｇのＩＬ−１８ＢＰでの処置は、いくつかの関節炎の関節を正常に回
復することをさらに示す。

【０１９３】 関節の破壊からの保護 ｒｈＩＬ−１８ＢＰでのマウスの処置は、関節を破壊から保護する（図１０）
。半定量的採点システムは、１０および３ｍｇ／ｋｇで顕著である投与量に関す
る保護効果を骨の侵食が示すことを証明した（Ｐ＜０．０５、図１０）。１ｍｇ
／ｋｇのｒｈＩＬ−１８ＢＰを与えられたマウスは、ビヒクルのみを与えられた
マウスよりも少ない侵食を示した。０．５ｍｇ／ｋｇおよび０．２５ｍｇ／ｋｇ
の投与量では、保護は観察されなかった。興味深いことに、ＩＬ−１８ＢＰが３
および１０ｍｇ／ｋｇの投与量での関節保護における効果は、１００００ＩＵの
インターフェロンβ（ＩＦＮ−β）の有効な効果と同等またはさらにより顕著で
あった。

【０１９４】 図１１は、ＩＬ−１８ＢＰで処置された動物（Ｃ）由来の関節を比較した健康
な関節（Ａ）および疾患（Ｂ）の関節の微細構造を示す。実験の最後に、最初に
関節炎を発症した肢から切断をとった。

【０１９５】 関節炎のマウスからの関節は、炎症した滑膜において軟骨の減少および侵食な
らびに大量の炎症性細胞を伴う、深刻な破壊的な関節炎を示した。ｒｈＩＬ−１
８ＢＰで処置されたマウスからの関節では、滑膜部分に炎症性の細胞が存在して
いるのにもかかわらず、軟骨はほとんど正常であった。大量に軟骨が存在してい
るだけでなく、その軟骨はより滑らかな状態であった。 抗ＩＬ−１８処置は、抗２型コラーゲン抗体のレベルを調節する。

【０１９６】 ＣＩＡマウスは、血液循環においてＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ抗２型コラーゲ
ン抗体のレベルが上昇している。アイソタイプＩｇＧ１の抗体は、ＴＨ２が仲介
する疾患に関連し、一方、アイソタイプＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの抗体はＴ
Ｈ１を仲介する疾患に関連する。関節炎は通常、ＴＨ１が仲介した疾患と分類さ
れる。

【０１９７】 抗２型コラーゲン（ＣＩＩ）ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ抗体アイソタイプは、
ＩＬ−１８ＢＰで処置された動物の血清中で測定された（図１２）。ＩｇＧアイ
ソタイプであるＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの抗ＣＩＩのレベルは、臨床疾患の４
日後または８日後（Ｄ４、Ｄ８）でのＩＬ−１８ＢＰ処置によっては顕著には調
節されなかった。しかしながら、コラーゲン特異的ＩｇＧ１／ＩｇＧ２ａ比にお
いて、ｒｈＩＬ−１８ＢＰ処置の８日後に、１および３ｍｇ／ｋｇでそれぞれ、
２．６および３．４倍の減少が観察された。図１２は３ｍｇ／ｋｇでの実験が用
いられたことを示す。本質的に、１ｍｇ／ｋｇの量のＩＬ−１８ＢＰを用いるこ
とにより、同じ結果が得られた。抗ＣＩＩ抗体の減少したＩｇＧ１／ＩｇＧ２ａ
比は、アイソタイプＩｇＧ２ａの抗２型コラーゲン抗体の減少した濃度、および
アイソタイプＩｇＧ１の抗２型コラーゲン抗体の上昇した濃度を示し、このモデ
ルの関節炎では、ＴＨ２に仲介された疾患への変化が示唆された。

【０１９８】 ＩＬ−１８中和後のＩＬ−６レベルの減少 ＩＬ−１８封鎖の効果を洞察するために、ＩＬ−１８ＢＰ処理された動物の血
清中でＩＬ−６が計測された。図１３は、生物学的に活性なＩＬ−６レベルが、
計測された全ての投与量、すなわちインターフェロン−β（ＩＦＮｂ）とともに
１、３および１０ｍｇ／ｋｇでＩＬ−１８ＢＰ処置を受けた動物において、顕著
に減少していることを示す。３ｍｇ／ｋｇのｒｈＩＬ−１８ＢＰで処置された動
物の血清中で計測されたＩＬ−６の免疫活性レベルは、食塩水で処置された動物
と比較して顕著に減少した（Ｐ＜０．００２３）。１、３または１０ｍｇのＩＬ
−１８ＢＰまたは１００００ＩＵのＩＮＦ−βで処置された疾患動物のＩＬ−６
血清レベルは、健康な動物すなわち炎症性の疾患を有していない動物由来の正常
マウス血清（ＮＭＳ）と類似していた。

【０１９９】 これらの調査結果は、疾患の発症中ＩＬ−１８がＩＬ−６レベルを制御してい
ることを証明する。ＩＬ−６は炎症のマーカーであるため、これらの調査結果は
ＩＬ−１８ＢＰでの疾患マウスの処置がその動物内の炎症を減少させることを示
す。

【０２００】 前記略述した実験から、以下の推論が導かれる。 ・ＩＬ−１８ＢＰの投与は関節炎の臨床的重傷度を減少させる ・ＩＬ−１８ＢＰはその疾患のさらなる進行または広がりを阻害する ・ＩＬ−１８ＢＰの投与は、浮腫を減少させる ・ＩＬ−１８ＢＰの投与は、軟骨の破壊を減少させる ・ＩＬ−１８ＢＰ治療後、血清ＩＬ−６レベルは減少し、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２ ａ抗ＣＩＩ比は減少する。

【０２０１】 前記データは、疾患発症後のＩＬ−１８生物活性の中和が疾患を調節する抗リ
ューマチ治療に相当することを示す。その結果は明らかに、ＩＬ１８封鎖が関節
炎の臨床的進行を減らし、より重要なことには、軟骨および骨の破壊の進行を停
止させることを証明している。したがって、ＩＬ−１８ＢＰ、抗ＩＬ−１８抗体
による、またはＩＬ−１８を妨害するほかの薬剤によるＩＬ１８の封鎖は、新規
な疾患を調節する抗リューマチ治療に相当する。

【０２０２】 前述の記載の特異的な実施態様は、最新の知識、容易な修正を適用することに
より、および／またはさまざまな適用に対して適応させることによって、一般的
な概念から逸脱することなしにそのような特異的な実施態様を他者が行うことが
できるように本発明の全体的な特徴を示すものであって、したがって、そのよう
な適応および修正は、開示された実施態様に相当する意味および範囲内に含まれ
ることを意図する。ここに使用されている表現または専門用語は記載のためであ
って、制限するものではないことは理解されるだろう。

【０２０３】 第三部：炎症性の腸疾患に関する実施例１１および１２ 実施例１１：活動性クローン病における内皮細胞およびマクロファージによるＩ
Ｌ−１８ＢＰ発現 試料の収集 腸粘膜バイオプシーは、ＣＤまたはＵＣの患者から外科的切除により単離され
た。平均年齢が３７．８歳（２０〜７８歳の範囲）であり、疾患の継続年数が８
．３年（１〜２１年の範囲）の１４人のＣＤ患者（３人の男性および１１人の女
性）が含まれる。８人の患者は回腸に疾患があり、６人は結腸に疾患がある。１
２人の患者は、免疫抑制剤を処方されている。活動性ＣＤの診断は、組織病理学
的検査によって以下の基準、潰瘍の存在、炎症性細胞の増加数および経壁の炎症
に基づいて行なわれた。活動性ＣＤの７人の患者および非活動性疾患の７人の患
者が同定された。活動性および非活動性のＣＤ患者間で、年齢、疾患、部位、性
別、薬剤および疾患継続年数に顕著な違いは見られなかった。５人のＵＣ患者（
３人の男性および２人の女性）の平均年齢は、３７．６歳（３０〜４４歳の範囲
）であった。全ての患者において、疾患は結腸に位置し、全員が免疫抑制治療を
受けていた。平均疾患継続年数は４年（１〜９年の範囲）であった。コントロー
ル試料は、ＩＢＤに関しない疾患において切除を受けた５人の患者からえた（３
人の男性および２人の女性）。この群の平均年齢は５５．２歳（２４〜７６歳の
範囲）であった。全ての患者において、疾患は結腸に位置している。

【０２０４】 ヒトＩＬ−１８およびＩＬ−１８ｂｐにおける半定量的ＲＴ−ＰＣＲ 全ＲＮＡは、ＣＤ、ＵＣまたはコントロールの患者の凍結された腸粘膜から抽
出された。ＲＮＡ抽出は、トライゾル（ギブコ社（Gibco）製）を用いて、製品
の取扱い説明書にしたがって行なった。得られた試料は、吸光度２６０ｎｍで測
定することによって定量化した。もとのＲＮＡは１％のアガロースゲル電気泳動
法によって評価された。ｃＤＮＡは、プロメガ逆転写システムを用いて、製品の
取扱い説明書にしたがって、１μｇの全ＲＮＡから合成された。ＰＣＲ反応は、
１Ｕのアンプリタック（AmpliTaq）ＤＮＡポリメラーゼ（パーキンエルマー社（
Perkin Elmer）、ロシュ社（Roche）、アメリカ合衆国）、２．５ｍＭのｄＮＴ
Ｐｓ（アマシャム社（Amersham）製、アメリカ合衆国）、および５０ｐｍｏｌの
フォワードおよびリバースＰＣＲプライマーが存在する、全量５０μｌで行なっ
た。反応では、ＰＴＣ−２００ ペルタイターエフェクトサーマルサイクラー（
PTC-200 Peltier Effect Thermal Cycler）（エムジェーリサ−チ社（MJ Reasea
ch）製、アメリカ合衆国）を用いて以下の条件、変性１分間９４℃、アニーリン
グ１分間５５℃および伸長１分間７２℃でインキュベートした。バンドが飽和す
る前のＩＬ−１８ＢＰ、ＩＬ−１８およびβ−アクチンの最適なサイクル数が決
定された（それぞれ３１、２８および２５回）。ＰＣＲプライマーは、公表され
た配列（ＡＦ１１０７９９、Ｄ４９９５０、Ｘ００３５１）をもとに、以下のよ
うにデザインされた：ＩＬ−１８、リバース ５′−ＧＣＧＴＣＡＣＴＡＣＡＣ
ＴＣＡＧＣＴＡＡ−３′；フォワード ５′−ＧＣＣＴＡＧＡＧＧＴＡＴＧＧＣ
ＴＧＴＡＡ−３′；ＩＬ−１８ＢＰ、フォワード ５′−ＡＣＣＴＧＴＣＴＡＣ
ＣＴＧＧＡＧＴＧＡＡ−３′；リバース ５′−ＧＣＡＣＧＡＡＧＡＴＡＧＧＡ
ＡＧＴＣＴＧ−３′；β−アクチン、リバース ５′−ＧＧＡＧＧＡＧＣＡＡＴ
ＧＡＴＣＴＴＧＡＴＣＴＴＣ−３′；フォワード ５′−ＧＣＴＣＡＣＣＡＴＧ
ＧＡＴＧＡＴＧＡＴＡＴＣＧＣ−３′。試料に混在しているゲノムＤＮＡの増幅
を除外するために、ＰＣＲ反応はｃＤＮＡ鋳型の不在下で行なった。ＰＣＲ産物
（１０μｌ）は、１×ＴＡＥ緩衝液における１％のアガロースゲル電気泳動法に
よって解析された。ＰＣＲ産物のサイズは、ゲルの染色後１Ｋｂラダー（ギブコ
社製）との比較によって確認された。エチジウム−ブロマイドによって染色され
たバンドの相対的な定量は、コダック デジタル サイエンス解析ソフトウェア
（Kodak Digital Sciences analytical software）を用いてＵＶ照射下で行ない
、標的遺伝子（ｈＩＬ−１８ＢＰ、ｈＩＬ−１８）とハウスキーピング遺伝子（
ｈβ−アクチン）との比率として報告された。

【０２０５】 ｈＩＬ−１８ＢＰに対して誘導されるモノクローナル抗体の産生 ＢＡＬＢ／ｃマウスは、アジュバント（MPL+TDM エマルジョン、ＲＩＢＩイム
ノケム リサーチ社（RIBI Immunochem Research, Inc.）製）とともにＰＢＳに
おけるｒｈＩＬ−１８ＢＰ−６ｈｉｓ（チャイニーズハムスター卵巣細胞から精
製されたもの、インターファーム ラボラトリー社、ネセ ジオナ、イスラエル
）の５０μｇのアイソフォームを、０日、７日後および２８日後に、内項部（in
tranuckally）だけでなく四肢の皮下に注入された。３回目の免疫から４日後、
リンパ節を得、２．４？ｇ／ｍｌのコラゲナーゼ（コラゲナーゼＩＶ、ワシント
ン バイオケミカル社（Worthington Biochemical）製）および０．１％デオキ
シリボヌクレアーゼ（シグマ社製）によって消化した。単離された細胞は、つい
で、ＰＥＧ１０００（フルカ社（FLUKA）製）を用いてＳｐ２／０ミエローマ細
胞と融合した。その細胞は、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノペクチン、チミジ
ン）の存在下でＤＭＥＭ−Ｆ１２、１０％ＦＣＳ（ギブコ社製）で再び懸濁され
、９６穴プレートに５×１０^-4細胞／ｍｌの濃度で配分された。ハイブリドーマ
培養上清試料は、直接的なスクリーニング解析で、反応する抗体の存在に対して
スクリーニングした。この際、ＥＬＩＳＡプレートはヤギ抗マウスＦ（ａｂ′） ₂ 抗体（ジャクソン イムノ リサーチ社（Jackson Immuno Research）、ミラン
アナライティカ（Milan analytica）、スイス）でコートされ、ハイブリドー
マ培養上清を添加し、ｒｈＩＬ−１８（組換え大腸菌から精製されたもの、セロ
ノ ファーマシューティカル リサーチ インスティチュート社（Serono Pharm
aceutical Research Institute）、ジェネバ（Geneva））を含むまたは含まない
、ビオチン標識されたｒｈＩＬ−１８ＢＰ−６ｈｉｓ（記載されているようにＣ
ＯＳ細胞から精製されたもの（Novick et al. 1999））、および最後にＯ−フェ
ニレンジアミン（ＯＰＤ）（シグマ社製）を用いて開発されたストレプトアビジ
ン−ホースラデッシュ ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）（ジャクソン イムノ リ
サーチ社、ミラン アナライティカ、スイス）を加えた。中和されない抗体が選
択され、サブクローニングされた。本研究において、９５−Ｈ２０すなわちマウ
スＩｇＧ１モノクローナル抗体が使用された。

【０２０６】 ＩＬ−１８ｂｐ陽性細胞の位置における免疫組織化学的研究 組織試料は、−８０℃ですばやく凍結保存された。一連の凍結切片（１０μｌ
）が得られ、ポリ−L−リジンでコートされたスーパーフロスト／プラス（Super
frost／Plus）ガラススライド（ポリラボ社（Polylabo）製、プラン−レス−オ
ーテス（Plan-les-Ouates）、スイス）に乗せ、氷冷したアセトンで固定した。
ヒトＩＬ−１８ＢＰタンパク質の位置は、Ｍａｂ ９５−Ｈ２０を用いて免疫組
織化学によって解析された。ＰＢＳによる単時間での水分補給後、２％のウシ胎
仔血清（ＦＣＳ）（カンセラ社（cansera）製、オンタリオ、カナダ）、１％の
ヒト血清（ＡＢ⁺血清、トランスフュージョン センター社（Transfusion Cente
r）製、アンネマッセ（Annemasse）、フランス）および０．５％のウシ血清アル
ブミン（ＢＳＡ）（シグマ社製、セントルイス、ミズーリ州、アメリカ合衆国）
で補充されたＰＢＳで３０分間プレインキュベーションされた。内因性ペルオキ
シダーゼ活性は、ＰＢＳ、２％ＦＣＳ、１％ヒト血清、０．５％ＢＳＡおよび１
％過酸化水素（Ｈ₂Ｏ₂）（フルカ社製、スイス）溶液に１時間そのスライドを置
くことによってブロッキングされた。ＰＢＳですすいだのち、切片をＭａｂ９５
−Ｈ２０の希釈されない培養上清で一晩インキュベーションした。ＰＢＳにより
さらに洗ったのち、０．５％ＢＳＡを含むＰＢＳにおいてビオチン標識されたヤ
ギ抗マウス抗体（ジャクソン イムノ リサーチ社、ミラン アナライティカ、
スイス）（５？ｇ／ｍｌ）とともに、切片を１時間インキュベーションした。染
色の感度は、アビジンＤＨ／ビオチン標識されたＨＲＰ複合体（ベクタステイン
エライト ＡＢＣキット（Vectastain Elite ABC kit）、ベクターラボラタリ
ー社（Vector laboratories）製、カルフォルニア州、アメリカ合衆国）で３０
分インキュベーションすることによって増大された。スライドはそれからＰＢＳ
で洗われ、ｐＨ５のアセトン緩衝液における３０％のＨ₂Ｏ₂、３,３−アミノ−
９−エチル カルバゾール（ＡＥＣ）（シグマ社製）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルム
アミド（メルク社（Merck）製）の溶液を用いて進めた。ヘマトキシン（シグマ
社製）を用いた対比染色したのち、切片をグリセロールでカバーし、そしてカバ
ースリップを適用した。マウスＩｇＧ１抗体（ＲアンドＤシステム社（R and D
system）製）が、アイソタイプのコントロールとして用いられた。

【０２０７】 ヒトＩＬ−１８ＢＰの細胞内位置を同定するために、二色免疫組織化学的研究
が腸粘膜の切片上で行なわれた。ＰＢＳで水分補給されてから１０分後、切片は
２％ＦＣＳ、１％ヒト血清および０．５％のＢＳＡで補充されたＰＢＳで３０分
間プレインキュベーションされた。内皮細胞との共局在性（colocalization）に
対しては、切片は、ＰＢＳ／０．５％ＢＳＡにおいてＦＩＴＣ−複合マウス抗ヒ
トＣＤ３１（１：５０）（ファーミンゲン社（Pharmingen）製、カルフォルニア
州、アメリカ合衆国）を混合したビオチン標識されたＭａｂ ９５−Ｈ２０（２
０μｇ／ｍｌ）で一晩インキュベーションされた。マクロファージとの共局在性
に対しては、切片は、ＦＩＴＣ−複合抗ヒトＣＤ６８（１：２５）（ダコ社（Da
ko）製、デンマーク（Denmark））を混合したビオチン標識されたＭａｂ ９５
−Ｈ２０（２０μｇ／ｍｌ）で一晩インキュベーションされた。ＰＢＳでの洗い
ののち、ストレプトアビジン テキサス−レッド（サザン バイオテクノロジー
アソシエイト社（Southern Biotechnology Associates）製、アラバマ州、ア
メリカ合衆国）が添加して１時間おいた。スライドは再びムビオール（moviol）
で洗われ、切片をムビオールでコートし、カバースリップを適用した。ストレプ
トアビジン テキサス−レッドにおいて、ビオチン標識されたマウスＩｇＧ１抗
体（ファーミンゲン社製）は、アイソタイプのコントロールとして使用された。

【０２０８】 細胞培養 ヒト臍帯静脈血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ）（クロネチクス社（Clonetics）
製、サンディエゴ、カルフォルニア州）は、ヒト組換え上皮増殖因子（ｈＥＧＦ
）（１０ｎｇ／ｍｌ）、ヒドロコルチゾン（１？ｇ／ｍｌ）、ゲンタマイシンお
よびアンフォテリシンＢ（５０？？ｇ／ｍｌ）、ウシ脳抽出物（ＢＢＥ）（３ｍ
ｇ／ｍｌ）および２％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（クロネチクス社製、サンディエ
ゴ、カルフォルニア州）で補充された内皮細胞増殖培地（ＥＧＭ）を用いて、そ
の製品の取扱い説明書にしたがって培養された。組織培養皿はヒトフィブロネク
チン（１０？ｇ／ｃｍ²）（ベーリンガー社（Boehringer）製、マンハイム）で
プレコートされた。細胞は加湿した５％ＣＯ₂インキュベーターでインキュベー
ションされ、実験は継代培養３のＨＵＶＥＣｓを用いて行なわれた。ＨＵＶＥＣ
ｓは、ヒトＩＬ−１β（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＴＮＦα（１０ｎｇ／ｍｌ）および
ＩＦＮγ（２０ｎｇ／ｍｌ）（ＲアンドＤシステム社製、ドイツ）で２４時間処
理された。培養期間の最後に、細胞は収集されてＲＮＡが単離され、ＩＬ−１８
ＢＰおよびＩＬ−１８ｍＲＮＡ転写解析のためにＲＴ−ＰＣＲに供された。上清
は収集され、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−１８ＢＰおよびＩＬ−１８タンパク質発
現について解析された。

【０２０９】 ヒト単球細胞株ＴＨＰ−１は、１０％の熱不活化ＦＣＳ、Ｌ−グルタミン（２
ｍＭ）、ペニシリン−ストレプトマイシン（１０Ｕ／ｍｌ）（ギブコＢＲＬ社（
Gibco BRL）、ライフテクノロジーズ（Life Technologies））およびβ−メルカ
プトエタノール（５０？Ｍ）（フルカ社製）で補充されたＲＰＭＩ培地による懸
濁培養で維持された。それらを加湿した５％ＣＯ₂インキュベーターでインキュ
ベーションし、１：１０で５日毎に継代培養した。実験から３日前に、ヒト単球
細胞は、ビタミンＤ３（８０ｎＭ）（バイオモル リサーチ ラボラトリーズ社
（Biomol Research Laboratories）製、アメリカ合衆国）を用いて、０．４×１
０⁶細胞個／ｍｌの濃度で分化させ、付着させたままにした。分化してから、Ｌ
ＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）（カルバイオケム社（Calbiochem）製）、ヒトＩＬ−
１β（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＴＮＦα（１０ｎｇ／ｍｌ）およびＩＮＦγ（２０ｎ
ｇ／ｍｌ）が細胞培養物に添加された。４８時間で、上清は収集されＥＬＩＳＡ
によってＩＬ−１８ＢＰおよびＩＬ−１８タンパク質発現について解析された。

【０２１０】 ヒトＩＬ−１８ｂｐおよびＩＬ−１８産生の測定 サイトカイン（ＩＬ−１β、ＴＮＦα、ＩＦＮγ）の混合物で２４時間刺激を
与えなかったＨＵＶＥＣｓおよび与えたＨＵＶＥＣｓから得られた細胞を含まな
い上清において、ならびに（ＬＰＳ、ＩＬ−１β、ＴＮＦα、ＩＦＮγ）の混合
物で４８時間刺激を与えなかったＴＨＰ−１および与えたＴＨＰ−１細胞株から
得られた細胞を含まない上清において、ＩＬ−１８ＢＰの存在がＥＬＩＳＡによ
って評価された。この際、プレートはｒｈＩＬ−１８ＢＰ（アイソフォーム ａ
）に対して誘導される捕捉Ｍａｂ（クローン６５７．２７が０．５μｇ／１００
？ｌ／穴、インターファーム ラボラトリーズ社製、ネス ジオナ、イスラエル
））で一晩コートした。可溶性ｈＩＬ−１８ＢＰは、ついでｒｈＩＬ−１８ＢＰ
−６ｈｉｓ（チャイニーズハムスター卵巣細胞から精製されたもの、インターフ
ァーム ラボラトリーズ社製、ネス ジオナ、イスラエル）に対して誘導される
ウサギポリクローナル抗体（１／１００００希釈）を用いて検出され、次に、ア
フィニティー精製されたヤギ抗ウサギＩｇＧ（１／２００００希釈）（ジャクソ
ン イムノ リサーチ社、ミラン アナライティカ、スイス）とペルオキシダー
ゼを用いてインキュベーションすることによって検出された。捕捉Ｍａｂ同様ウ
サギポリクローナル抗体は、ＩＬ−１８ＢＰ特異性を確認するためにウエスタン
ブロットによって検査された。組換えｈＩＬ−１８ＢＰ−６ｈｉｓは、基準とし
て使用された。ＥＬＩＳＡの感度は１００ｐｇ／ｍｌであった。並行して、ＩＬ
−１８のレベルはヒトＩＬ−１８ＥＬＩＳＡキット（ＭＢＬ、イムノテク社（Im
munotech）製）を用いて定量化した。ＥＬＩＳＡの感度は１２．５ｐｇ／ｍｌで
あった。

【０２１１】 ＣＨＯ細胞におけるｈＩＬ−１８ＢＰａ−Ｈｉｓ６の発現 組換えヒトＩＬ−１８ＢＰ（ｈＩＬ−１８ＢＰａ Ｈｉｓ６−ｔａｇ）は、チ
ャイニーズハムスター卵巣細胞（インターファーム ラボラトリーズ社、ネス
ジオナ、イスラエル）から精製された。

【０２１２】 結果 腸バイオプシーにおけるＩＬ−１８ＢＰ ｍＲＮＡ転写産物の発現 ＩＬ−１８ＢＰ ｍＲＮＡ発現に対する解析は、活動性ＣＤ、非活動性ＣＤ、
またはＵＣのいずれかの患者から得た結腸外科用試料からの組織ホモジネート、
および非炎症腸組織からの組織ホモジネートのＲＴ−ＰＣＲによって行われた（
図１４）。ＩＬ−１８ＢＰおよびアクチンの転写産物は、テストされた全ての腸
のホモジネートについて検出された。同様に、ＩＬ−１８の転写産物は、ＣＤ、
ＵＣまたはＩＢＤでないコントロールのいずれかから得られた全ての組織ホモジ
ネートで見られた（図１４Ａ）。コントロールのアクチンに対するＩＬ−１８Ｂ
ＰまたはＩＬ−１８のｍＲＮＡレベルの比は、非活動性のＣＤ、ＵＣおよびＩＢ
Ｄでないコントロールの患者のバイオプシーと比較して、活動性ＣＤの患者から
得られたバイオプシーにおけるＩＬ−１８ＢＰおよびＩＬ−１８の双方の転写産
物の量において、統計学的に顕著に増加すること（以下に説明する）が証明され
た（図１４ＢおよびＣ）。それらのデータは、活動性ＣＤの粘膜組織においてＩ
Ｌ−１８ＢＰはアップレギュレーションされることを示し、ＩＬ−１８ＢＰの発
現レベルは、非活動性ＣＤ、ＵＣおよびＩＢＤでないコントロールと活動性ＣＤ
とでは明らかに区別されるという最初の証拠を提供する。

【０２１３】 腸のバイオプシーにおけるＩＬ−１８ＢＰのｍＲＮＡ転写産物の発現に対する統
計学的解析 分散解析が行なわれ、利用できる全てのデータとともに集められた。出力によ
り、活動性ＣＤ群における１人の患者の結果に関して明らかに統計的部外者であ
ると示された（ＩＬ１８に対する非常に高いＯＤ比、すなわち１６２５２、およ
びＩＬ１８ＢＰに対して非常に低いＯＤ比、すなわち１０５８）。この単一で非
常に変則的な一組の測定は、ＡＮＯＶＡモデルを立証させるものではない（残り
の常態に対するシャピロ−ウィルクス（Shapiro−Wilks）のテストのＰ値）。し
たがって、統計的解析において、この一組の測定は採用しないことに決定した。

【０２１４】 ＡＮＯＶＡモデルは、因子群（コントロール、活動性ＣＤ、非活動性ＣＤおよ
びＵＣ）、タンパク質（ＩＬ−１８またはＩＬ−１８ＢＰ）、および患者数（２
３人）を考慮して使用された。群のあいだで顕著な違いがあった（Ｐ値＜０．０
００１）。興味深いことに、ＩＬ−１８とＩＬ−１８ＢＰとの間のＯＤ比の違い
が顕著でないことにも気がついた（Ｐ値＝０．３６９）。さらに、ＩＬ−１８発
現とＩＬ−１８ＢＰ発現との相互関係についても行なった。ＩＬ−１８とＩＬ−
１８ＢＰとのあいだの相互関係の係数は、０．６７に等しく、このことは、ＩＬ
−１８およびＩＬ−１８ＢＰにおいて測定されたＯＤ比のあいだの強いつながり
を示唆する。その群の影響に関する結果に加え、異なる群を比較するためにシェ
フェの方法が用いられた。活動性ＣＤに対するＯＤ比は、ＩＬ−１８ＢＰおよび
ＩＬ−１８の両方の発現に対して、コントロール（＋３２８０）、ＵＣ（＋２５
９０）ならびに、とくに非活動性ＣＤ（＋４５８０）に対するＯＤ比よりも顕著
に値が大きいということが結論付けられた。

【０２１５】 腸組織におけるＩＬ−１８ＢＰの免疫組織化学的位置 インサイチュでのＩＬ−１８ＢＰの細胞内での発現を評価するために、抗ｈＩ
Ｌ−１８ＢＰ特異的モノクローナル抗体を用いた免疫組織化学を、活動性ＣＤの
患者およびＩＢＤでないコントロールから得られた腸組織から調製された凍結切
片において行なった。ＩＬ−１８ＢＰ陽性細胞は、粘膜固有層、粘膜下組織およ
び筋層内において検出された（示されていない）。陽性に染色された単核細胞が
、豊富な細胞質、小胞の網状の核を有する粘膜固有層および粘膜下組織に存在し
、それは構造的に組織マクロファージと一致した。筋層においては、陽性に染色
された細胞は豊富な細胞質を有し、しばらく開いた中央の管腔であったため、毛
細血管が陽性に染色されたものと示唆され、構造的には内皮細胞と一致した。大
きな血管もまた、抗ｈＩＬ−１８ＢＰモノクローナル抗体によって特異的に染色
された。ＲＴ−ＰＣＲ解析によって観察されたＩＬ−１８ＢＰの増加した発現と
相互関係のあるＩＢＤでないコントロールから得られた試料と比較したとき、陽
性に染色された細胞の顕著な増加が、活動性ＣＤの患者から得られた試料におい
て観察された。近接した切片は、対応するマウスのアイソタイプコントロールで
インキュベーションした。

【０２１６】 粘膜バイオプシーにおけるｉｌ−１８ｂｐ産生細胞の存在の同定 炎症した腸組織に存在するＩＬ−１８ＢＰ陽性細胞は、マクロファージの特異
的なマーカー（抗ＣＤ６８）、および内皮細胞（抗ＣＤ３１）を用いて同定され
た（示されていない）。ＣＤ６８陽性細胞（緑）およびＩＬ−１８ＢＰ陽性細胞
（赤）は、活動性ＣＤからの腸組織の粘膜固有層および粘膜下組織内で検出され
た（示されていない）。マクロファージおよび内皮細胞もまたＩＬ−１８ＢＰに
対して陽性であることを確かめるために、両方の色、抗ＣＤ６８または抗ＣＤ３
１からの緑および抗ＩＬ−１８ＢＰからの赤について解析され、それとともに抗
ＩＬ−１８ＢＰ抗体と結合する全ての細胞がＣＤ６８陽性またはＣＤ３１陽性の
どちらかであることを証明した（橙色〜黄色の色）。その二重免疫染色によって
、マクロファージおよび内皮細胞は、ＣＤの患者から得られた炎症組織内で染色
されるＩＬ−１８ＢＰの主な産生源であることが証明された。

【０２１７】 内皮細胞によるｉｌ−１８ｂｐのｍＲＮＡおよびタンパク質の発現 ヒト内皮細胞のＩＬ−１８ＢＰの産生能力を調べることとともに、トータルバ
イオプシーにおける免疫染色およびＲＴ−ＰＣＲによって明らかにされた結果を
確かめるために、さらに、ヒト臍帯静脈血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ）において
ＲＴ−ＰＣＲを行なった（図１５Ａ）。内皮細胞は、サイトカインの混合物（ｈ
ＩＬ−１β、ｈＴＮＦα、ｈＩＦＮγ）で処理され、２４時間後ＲＮＡ抽出およ
びＰＣＲ解析のために収集された。コントロールのアクチンのｍＲＮＡレベルに
対するＩＬ−１８ＢＰの比により、２４時間後刺激されなかった細胞と比較して
、処理された細胞における、ＩＬ−１８ＢＰの転写産物の量が増加していること
を証明した。さらに、ＩＬ−１８ＢＰのｍＲＮＡは、内皮細胞において構成的に
発現されているように思われる。そのＩＬ−１８ＢＰのｍＲＮＡレベルもまた解
析され、処理された細胞においてわずかな増加が証明された。しかしながら、Ｉ
Ｌ−１８ＢＰのｍＲＮＡは、刺激されていない内皮細胞においては発現されてい
なかった。

【０２１８】 刺激されていない細胞（培地）および２４時間処理されたＨＵＶＥＣｓの培養
上清を用いたＥＬＩＳＡによって、ＩＬ−１８ＢＰは両培地に存在し、刺激され
た細胞で２４時間の刺激ののちに３０倍に増加することが示された（図１５Ｂ）
。

【０２１９】 単球細胞株（ＴＨＰ−１）によるＩＬ−１８ｂｐタンパク質の発現 ＩＬ−１８およびＩＬ−１８ＢＰの発現は、刺激されていないおよび刺激され
た分化したＴＨＰ−１細胞の培養上清において、ＥＬＩＳＡによって解析された
（図１５Ｃ）。この実験により、ＬＰＳ、ｈＩＬ−１β、ｈＴＮＦα、ｈＩＦＮ
γでの４８時間の刺激の後、ＩＬ−１８ＢＰ発現の増加が示された。並行して、
ＩＬ−１８の分泌は、刺激後増加した（図１５Ｃ）。

【０２２０】 要約 本研究において、ＩＬ−１８ＢＰの発現、ならびにクローン病および潰瘍性結
腸炎の患者から得られた粘膜組織内での位置が特徴づけられた。半定量的ＲＴ−
ＰＣＲプロトコルの使用により、潰瘍性結腸炎および炎症でないコントロールの
患者と比較して、活動性クローン病患者の粘膜バイオプシーにおいて、ＩＬ−１
８ＢＰのｍＲＮＡ転写産物が増加していることが明らかになった。粘膜バイオプ
シーの免疫組織化学的解析により、ＩＬ−１８ＢＰタンパク質は、内皮細胞内お
よびクローン病の粘膜に浸潤するマクロファージに位置していた。内皮細胞およ
び活性化マクロファージによるＩＬ−１８ＢＰ発現は、まず、インビトロにおい
て刺激されたヒト臍帯静脈血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ）およびＴＨＰ−１単球
細胞株で確認された。刺激の後、それらの細胞は生物活性のあるＩＬ−１８ＢＰ
を分泌した。

【０２２１】 実施例１２：ＩＬ−１８阻害剤での処置は、実験的な結腸炎を改善する 材料と方法 マウスおよび結腸炎の誘導 オランダのアムステルダム大学の動物研究倫理委員会は、全ての実験を承認し
ている。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、ハーラン スプラーク ダウリー社（Harlan S
prague Dawley Inc）から得た（ホルスト（Horst）、オランダ）。マウスは標準
状態で飼い、飲み水と食べ物を与えた（ＡＭ−ＩＩ、１０ｍｍ、ホープ ファー
ムズ社（Hope Farms）製、ウーエルデン（Woerden）、オランダ）。

【０２２２】 実験は、８および１０週齢のメスのＢＡＬＢ／ｃマウスで行なった。結腸炎は
、４０％エタノール（メルク社、ダームスタッド（Darmstadt）、ドイツ）に溶
かした２ｍｇの２，４，６−トリニトロベンゼン硫酸（ＴＮＢＳ）（シグマ ケ
ミカル社（Sigma Chemical Co）、セントルイス、ミズーリ州、アメリカ合衆国
）を、肛門から３センチメートルの位置に定められたビニルカテーテルを用いて
、２回直腸投与することによって誘導された（１群につきマウス１０匹）。点滴
中に、マウスはイソフルラン（１−クロロ−２，２，２−トリフルオロエチルイ
ソフルラン−ジフルオロメチル−エーテル、アボット ラボラトリーズ社（Abbo
tt Laboratories Ltd.）製、クイーンボロウ（Queenborough）、ケント州、ＵＫ
）を用いて麻酔され、点滴の後、６０秒間垂直に保たれた。コントロールマウス
も、同様の手順を受けたが、生理食塩水が点滴された。全てのマウスが、最初の
ＴＮＢＳ投与から９日後犠牲された（すなわち２回目のＴＮＢＳの挑戦から４８
時間後）。

【０２２３】 マウスは、ヒトＩＬ−１８ＢＰを含有する５００μｌの０．９％の食塩水を腹
腔内投与することによりに処置された。

【０２２４】 ＨＩＬ−１８ＢＰは、ＣＨＯ発現系において産生される６つのヒスチジンのタ
グをつけたヒト組換えタンパク質である。ｈＩＬ−１８ＢＰは、ＫＧ−１細胞株
においてＩＦＮγ産生を阻害したり、マウス脾臓細胞によるＩＦＮγ産生を減少
させるなど、生物学的に活性である（Kim et al., 2000）。

【０２２５】 炎症の評価 体重は毎日記録された。脾臓、尾のリンパ節および結腸は、犠牲して収集され
た。結腸は、正中切開により取り出され、縦に開かれた。糞便成分を取り除いた
後、抹消の６ｃｍの湿ったままの重量が記録され、疾患に関連した腸壁の厚くな
った部分の指標として用いた。次に、結腸を縦に２つに裂き、その一方を組織学
的評価のために使用した。

【０２２６】 組織学的評価 縦に裂かれた結腸は巻かれて、４％のホルマリンで固定し、組織学ではルーチ
ンの方法でパラフィンに埋め込まれた。マウスへの処置配分量を知らない２人の
調査員によって、以下の特性、１）関連領域の割合、２）小胞の集合体の増殖、
３）浮腫、４）浸潤／潰瘍、５）陰窩破壊（crypt loss）および６）単核および
多形核細胞の浸潤、について採点された。関連領域の割合および陰窩破壊は、以
下の０から４の範囲の段階で採点された。０、通常；１、１０％未満；２、１０
％；３、１０から５０％；４、５０％以上。浸潤は、上皮が無傷であるならば０
と定義し、１は粘膜固有層の関与、２は粘膜下組織への潰瘍の関与、および３は
潰瘍が経壁であるときとした。そのほかの特性の重傷度については、以下の０か
ら３の段階：０、なし；１、わずか；２、中程度；３、重症で採点された。この
得点の範囲は０から最大２６ポイントであった。

【０２２７】 結腸ホモジネート 結腸は収集され、ホモジネートは、９容量のグリーンバーガー（Greenburger
）溶解緩衝液（３００ｍＭ ＮａＣｌ、１５ｍＭ Ｔｒｉｓ、２ｍＭ ＭｇＣｌ
、２ｍＭ Ｔｒｉｔｏｎ（Ｘ−１００）、ペプスタチンＡ、ロイペプチン、アプ
ロチニン（全て２０ｎｇ／ｍｌ）、ｐＨ７．４）において、組織ホノジナイザー
を用いて作製された。組織は３０分間氷上で溶かし、次いで２回の遠心分離を行
なった（１０分間、１４０００ｇ）。ホモジネートは、使用するまで−２０℃で
保存された。

【０２２８】 細胞培養およびサイトカインに対するＥＬＩＳＡ 脾臓および尾のリンパ節細胞の懸濁を調製するために、フィルター セル ス
トレイナー（filter cell strainers）（ベクトン／ディッキンソン ラブウェ
ア社（Becton/Dickinson labware）製、ニュージャージー州、アメリカ合衆国）
が使用された。細胞は１０％ＦＣＳおよびシプロキシン（ciproxin）（１０μｇ
／ｍｌ）（シグマ ケミカル社製、セントルイス、ミズーリ州、アメリカ合衆国
）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（バイオウィットカー−ベーリンガー社（Bi
oWhittaker-Boehringer）製、ベルバイアーズ（Verviers）、ベルギー）に懸濁
された。脾臓細胞は、滅菌フィコール（ファルマシア社製、ウプサラ（Uppsala
）、スウェーデン）で遠心分離し、単核細胞はＲＰＭＩへ移され、細胞懸濁液は
数えられる。１匹のマウスあたり全部で１×１０⁵細胞個が、抗生物質および１
０％のウシ胎仔血清を含有する２００μｌのＲＰＭＩ（バイオウィットカー ヨ
ーロッパ社（BioWhittaker Europe）製、カンブレックス カンパニー（A Cambr
ex Company）、ベルバイアー（Verviers）、ベルギー）で、３組の穴においてイ
ンキュベーションされた。細胞は、抗ＣＤ３抗体（１：３０濃度；１４５．２Ｃ
１１クローン）および可溶性の抗ＣＤ２８抗体（１：１０００濃度；ファーミン
ゲン社製）でプレコートすることによって刺激された。４８時間後上清は取り除
かれ、ＩＦＮ−γ（ファーミンゲン社製）およびＴＦＮ−α（Ｒ＆Ｄシステムズ
社、アビンドン（Abingdon）、イギリス王国）の濃度はＥＬＩＳＡ分析によって
測定された。

【０２２９】 流動細胞計測法 単離された脾臓細胞は、Ｆａｃｓ緩衝液（０．５％のＢＳＡ、０．３ｍｍｏｌ
／ＬのＥＤＴＡおよび０．０１％のアジ化ナトリウムを含有するＰＢＳ）で洗わ
れ、残りの手順のあいだは、氷上で維持した。各ウェル（９６穴Ｖ形マイクロプ
レート、グレイナーＢ．Ｖ．、レイバー テクニック社（Greiner B. V. labor
techniek）、アルフェン アアン デ リジン（Alphen aan de Rijn）、オラン
ダ）の２×１０⁵細胞は、以下の抗体（ｍＡｂｓ）、Ｃｙクロム複合ラット抗マ
ウスＣＤ４（クローンＲＭ４−５）、Ｆｉｔｃ複合ラット抗マウスＣＤ６９およ
びＦｉｔｃ複合ラット抗マウスＣＤ２５（ファーミンゲン社製、サンディエゴ、
カルフォルニア州）でインキュベートされた。リンパ球は、Ｆａｃｓｃａｎソフ
トウエアを結合したＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（ベクトン ディッキ
ソン社製、マウンテイン ビュー（Mountain View）、アメリカ合衆国）を用い
ることにより前方および側面散布によりゲートでコントロールされ、５０００細
胞が数えられた。結果は、使用されたｍＡｂｓに対して陽性のゲートされた細胞
の割合として表された。

【０２３０】 統計的解析 値は処理された各群の平均およびＳＥＭとして与えられた。群間の相違はノン
パラメトリック マン−ウィズニーＵ検定（non-parametric Mann-Withney U te
st）を用いて解析された。順を追った体重の変化は、分散の一方向的解析によっ
て解析された。Ｐ＜０．０５は、顕著であると考えられる。ＳＰＳＳ統計ソフト
ウエア（ＳＰＳＳ社（SPSS Inc.）、シカゴ、アメリカ合衆国）は、全ての解析
において使用された。

【０２３１】 結果 ＩＬ−１８ＢＰは結腸炎のマウスモデルにおける体重の減少に対して保護する
。

【０２３２】 実験的な結腸炎におけるＩＬ−１８の役割、およびとくにＩＬ−１８結合タン
パク質（ＩＬ−１８ＢＰ）の保護効果について調べるために、ＴＮＢＳ結腸炎を
ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて誘導した。このモデルは、４０％エタノールに含有
されるトリニトロベンゼン硫酸（ＴＮＢＳ）の局所的な暴露からなる。ハプテン
（トリニトロフェニル）に緩和される自己抗原のために、遅延タイプの過度の過
敏症を誘導し、その反応は前炎症性サイトカイン産生を促すＴｈ１型である。

【０２３３】 マウスは、ヒトＩＬ−１８ＢＰまたはコントロールを毎日のペースで腹腔内に
処理された。

【０２３４】 ｈＩＬ−１８ＢＰの１２．５μｇから５０μｇの範囲内の毎日の腹腔内投与量
は、疾患の深刻さに影響しなかった（示すデータなし）。しかしながら、毎日腹
腔内に投与された２００μｇのｈＩＬ−１８ＢＰの投与量は、疾患の誘導に関連
して体重の減少を低減ざせるのに有効であった。

【０２３５】 予想通り、ＴＢＳの直腸内点滴は、下痢および体重減少の結果となった。図１
６に示したように、処理群のどちらの動物も、３日後に標準体重の１５％を減少
した。しかしながら、コントロールマウスとは対照的に、実験開始日から４日後
のＴＮＢＳ点滴から、ｈＩＬ−１８ＢＰ処理された動物は急速に最初の体重減少
から回復し、８日後には標準体重に戻った。コントロールマウスにおいては、８
日後のＴＮＢＳの２回目の投与により再び顕著に体重が減少したことから、ｈＩ
Ｌ−１８ＢＰの投与によって体重減少は充分に保護されている。食塩水処理され
たマウスにおけるｈＩＬ−１８ＢＰの投与は、何の影響もなかった（示すデータ
なし）。したがって、ｈＩＬ−１８ＢＰの投与は、ＴＮＢＳにより誘導された結
腸炎に関連する体重減少を顕著に減じさせる（Ｐ＜０．０５）。

【０２３６】 炎症性特性の効果 １０日後にマウスは犠牲にされ、結腸の後ろの６センチメートルの重さが決定
された（図１７Ａ）。ＴＮＢＳ結腸炎において、結腸の重量は食塩水処理された
マウスと比較して増加した。この重さの増加は、ｈＩＬ−１８ＢＰ処理されたマ
ウスにおいて顕著に減少した（食塩水処理されたマウスにおける２６８ｍｇ±２
７．３と比較して、１８１．６ｍｇ±１１．４（Ｐ＜０．０５））。ＴＮＢＳ結
腸炎は大量の細胞が尾のリンパ節へ移動することに関連していることが既に報告
されている（Camoglio et al, 2000）。食塩水処理されたＴＮＢＳマウスの尾の
リンパ節への細胞の数と比較して、ＩＬ−１８ＢＰ処理は尾のリンパ節に侵入す
る細胞の数を減少させる（図１７Ｂ）。

【０２３７】 早期のＴリンパ球活性化のマーカーであるＣＤ６９発現における変化は、Ｆａ
ｃｓｃａｎ解析によって決定された（図１７Ｃ）。ＣＤ６９を発現するＣＤ４⁺
脾臓細胞の割合は、ＴＮＢＳ処理されたマウスにおいて１１．４％であったが、
ｈＩＬ−１８ＢＰ処理されたＴＮＢＳマウスのＣＤ４⁺／ＣＤ６９⁺の割合は７．
３％であった（Ｐ＜０．０５）。

【０２３８】 脾臓、尾のリンパ節細胞のサイトカイン産生および結腸ホモジネート Ｔ細胞受容体の活性化に続く生合成である、Ｔリンパ球の炎症性サイトカイン
前駆体の産生能力におけるｈＩＬ−１８ＢＰの効果を調べるために、尾のリンパ
節および脾臓から細胞を単離し、その細胞を４８時間抗ＣＤ３／ＣＤ２８抗体で
刺激した。その上清において、ＩＦＮγおよびＴＮＦα産生について測定された
（図１８）。ｈＩＬ−１８ＢＰマウスおよびコントロール処理されたマウスのサ
イトカイン産生のあいだで顕著な違いは見られなかった。したがって、ｈＩＬ−
１８ＢＰによるＩＬ−１８の中和は、Ｔ細胞受容体の活性化に反応するＴリンパ
球の能力の総合的な減少を引き起こさなかった。

【０２３９】 結腸ホモジネートは、それらのサイトカインレベルに対して解析され、それに
よって局所的なサイトカインの産生を測定された（図１９）。ＴＮＢＳマウスお
よびｈＩＬ−１８ＢＰで処理されたＴＮＢＳマウスの結腸ホモジネートにおいて
、ＩＦＮγレベルに違いは検出されなかった（それぞれ１３４ｐｇ／ｍｌ±７．
８および１３９ｐｇ／ｍｌ±２３）。しかしながら、結腸ホモジネートにおいて
、ＴＮＦαレベルは、ｈＩＬ−１８ＢＰで処理されたＴＮＢＳマウスの１１０ｐ
ｇ／ｍｌ±３から、ＴＮＢＳ処理されたマウスの５９ｐｇ／ｍｌ±２．７まで顕
著に減少した。

【０２４０】 組織学的結果 炎症性特性の減少を仲介するｈＩＬ−１８ＢＰが組織学的採点にも影響するの
かどうか調べるために、パラフィン切片において組織病理学を行なった。組織学
的な炎症性の全採点は、おもに粘膜に浸潤しているリンパ球の数の減少の結果と
して、コントロール処理されたマウスと比較してｈＩＬ＝１８ＢＰ処理されたマ
ウスにおいて顕著に減少した（ｈＩＬ−１８ＢＰ処理されたマウスにおける９．
８±１．３に比較して、処理されていないマウスにおいて１５．９±１．１）。
ＩＬ−１８ＢＰ処理されたマウスにおいて粘膜の潰瘍が完全に存在しなかったこ
とが顕著な結果であった（Ｐ＜０．０５）。結果は以下の表２に要約した。ＩＬ
−１８ＢＰ処理されたマウスにおける潰瘍の完全な予防が、とくに顕著であった
。

【０２４１】

【表５】

【０２４２】 抗ｍＩＬ−１８ポリクローナル抗体は、デキストラン硫酸ナトリウムによって
誘導された結腸炎のマウスモデルにおける疾患から保護した。

【０２４３】 このデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）のモデルにおいて、イド（id）は
開始日０日からその動物が犠牲にされるまで、飲み水内において与えた。抗ＩＬ
−１８ＢＰポリクローナル抗体は、０日、４日および８日にｉ．ｐ．で投与され
た。その投与量は、ウサギ血清の２００および４００？ｌであった。最も高い投
与量（４００μｌ）は、体重の減少、臨床スコア、直腸の出血および結腸の短縮
化を顕著に減じさせた（示すものはなし）。ウサギ抗ｍＩＬ−１８処理は疾患の
始まりを遅れさせ、進行を予防した（示すものはなし）。

【０２４４】 要約 前記実施例１２は、ｈＩＬ−１８ＢＰまたはＩＬ−１８に対するポリクローナ
ル抗血清の投与によるＩＬ−１８の中和は、マウスにおける実験的に誘導した結
腸炎の深刻さを効果的に減じさせる。

【０２４５】 毎日ｈＩＬ−１８ＢＰを腹腔内処置されたマウスは、コントロール処理された
マウスと比較して最初の体重減少から急速に回復した。尾のリンパ節において、
結腸重量および細胞の流入によって測定された結腸の炎症のほかの特性は、ｈＩ
Ｌ−１８ＢＰ処理されたマウスにおいて減じられた。処理されたマウスの組織病
理学は、その組織の破壊（潰瘍）の重傷度の低減、およびかなり減少した浸潤細
胞の量によって特徴付けられた。ｈＩＬ−１８ＢＰの効果はまた全身においてで
あり、脾臓細胞によるＣＤ６９の発現の減少によって証明された。

【０２４６】 結腸ホモジネートにおいて測定されたＴＮＦαの局所的な産生は、ｈＩＬ−１
８ＢＰで処理されたＴＮＢＳマウスにおいて顕著に減少した。このことは、ＴＮ
Ｆαが疾患の進行において重要な役割を担うことを示す。ＩＦＮγレベルは、Ｔ
ＮＢＳマウスとｈＩＬ−１８ＢＰで処理されたＴＮＢＳマウスとは同様であり、
これは過剰なＩＦＮγによって誘導される刺激によって説明され得る。

【０２４７】 結論として、前記データから、炎症性腸疾患の処置においてＩＬ−１８の阻害
剤としての有効な効果が証明される。

【０２４８】

【参考文献】

1. Afford, S.C., et al., Distinct patterns of chemokine expression are a
ssociated with leukocyte recruitment in alcoholic hepatitis and alcoholi
c cirrhosis. J Pathol, 1998. 186(1): p. 82-9. 2. Anderson, D.M., et al., A homologue of the TNF receptor and its ligan
d enhance T-cell growth and dendritic-cell function. Nature, 1997. 390(6
656): P. 175-179. 3. Baroni, G.S., et al., Hepatic stellate cell activation and liver fibr
osis are associated with necroinflammatory injury and Th1-like response
in chronic hepatitis C. Liver, 1999. 19(3): P. 212-9. 4. Bird, G.L., et al., Increased plasma tumor necrosis factor in severe
alcoholic hepatitis. Ann Intern Med, 1990. 112(12): P.917-20. 5. Bollon, D.P., et al. (1980) J. Clin. Hematol. Oncol. 10:39-48. 6. Botstein, D., et al. (1982) Miami Wint. Symp. 19:265-274. 7. Broach, J.R., in "The Molecular Biology of the Yeast Saccharomyces: L
ife Cycle and Inheritance", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring H
arbor, NY, pp. 445-470(1981). 8. Broach, J.R., (1982) Cell 28:203-204. 9. Byrn R.A. et al., 1990, Nature (London) 344:667-670. 10. Camoglio L, te Velde AA, de Boer A, ten Kate FJ, Kopf M, van Devente
r SJ. Hapten-induced colitis associated with maintained Th1 and inflamma
tory responses in IFN-gamma receptor-deficient mice. Eur J Immunol 2000;
30:1486-95. 11. Car, B. D., V. M. Eng, B. Schnyder, L. Ozmen, S. Huang, P. Gallay, D
. Heumann, M. Aguet, and B. Ryffel. 1994. Interferon gamma receptor defi
cient mice are resistant to endotoxic shock. J. Exp. Med. 179:1437-44 is
sn: 0022-1007. 12. Chater, K. F. et al., in "Sixth International Symposium on Actinomyc
etales Biology", Akademiai Kaido, Budapest, Hungary (1986), pp. 45-54). 13. Conti, B., J. W. Jahng, C. Tinti, J. H. Son, and T. H. Joh. 1997. In
duction of interferon-gamma inducing factor in the adrenal cortex. J. Bi
ol. Chem. 272:2035-2037. 14. Dao, T., K. Ohashi, T. Kayano, M. Kurimoto, and H. Okamura. 1996. In
terferon-gamma-inducing factor, a novel cytokine, enhances Fas ligand-me
diated cytotoxicity of murine T helper 1 cells. Cell-Immunol. 173:230-5
issn: 0008-8749. 15. Dayer, J-M (1999). J. Cin. Inv. 104, 1337-1339. 16. Desreumaux P, Brandt E, Gambiez L, Emilie D, Geboes K, Klein O, Ecto
rs N, Cortot A, Capron M, Colombel JF. Distinct cytokine patterns in ear
ly and chronic ileal lesions of Crohn's disease. Gastroenterology 1997;1
13:118-126. 17. DiDonato, J A, Hayakawa, M, Rothwarf, D M, Zandi, E and Karin, M. (1
997), Nature 388, 16514-16517. 18. Elliott, M.J., Maini, R.N., Feldmann, M., Long-Fox, A., Charles, P.,
Bijl, H., and Woody, J.N., 1994, Lancet 344, 1125-1127. 19. Engelmann, H., D. Aderka, M. Rubinstein, D. Rotman, and D. Wallach.
1989. A tumor necrosis factor-binding protein purified to homogeneity fr
om human urine protects cells from tumor necrosis factor toxicity. J. Bi
ol. Chem. 264:11974-11980. 20. Engelmann, H., D. Novick, and D. Wallach. 1990. Two tumor necrosis f
actor-binding proteins purified from human urine. Evidence for immunolog
ical cross-reactivity with cell surface tumor necrosis factor receptors.
J. Biol. Chem. 265:1531-1536. 21. Fantuzzi, G., et al., IL-18 regulation of IFN-g production and cell
proliferation as revealed in interleukin-1b converting enzyme-deficient
mice. Blood, 1998. 91: p. 2118-2125. 22. Fiore, G., et al., Liver tissue expression of CD80 and CD95 antigens
in chronic hepatitis C: relationship with biological and histological d
isease activities. Microbios, 1999. 97(386): p. 29-38 23. Galle, P.R., et al., Involvement of the CD95 (APO-1/Fas) receptor an
d ligand in liver damage. J Exp Med, 1995. 182(5): P.1223-30. 24. Gracie, A J, Forsey, R J, Chan, W L, Gilmour, A, Leung, B P, Greer,
A R, Kennedy, K, Carter, R, Wei, X-Q, Xu, D., Field, M, Foulis, A, Liew,
F Y, and Mclnnes, I B.(1999). J. Clin. Inv. 104: 1393-1401 25. Grantham (1974), Science, 185. 862-864. 26. Grove, J., et al., Association of a tumor necrosis factor promoter p
olymorphism with susceptibility to alcoholic steatohepatitis [see commen
ts]. Hepatology, 1997. 26(1): P. 143-6. 27. Gryczan, T., "The Molecular Biology of the Bacilli", Academic Press,
NY (1982), pp. 307-329). 28. Gutkind, J.S., et al., A novel c-fgr exon utilized in Epstein-Barr v
irus-infected B lymphcytes but not in mormal monocytes. Molec. Cell. Bio
l., 1991. 11: p. 1500-1507. 29. Harada, K., et al., In situ nucleic acid hybridization of cytokines
in primary biliary cirrhosis: predominance of the Th1 subset. Hepatology
, 1997. 25(4): p. 791-6. 30. Heremans, H., J. Van Damme, C. Dillen, R. Dijkmans, and A. Billiau.
1990. Interferon gamma, a mediator of lethal lipopolysaccharide-induced
Shwartzman-like shock reactions in mice. J. Exp. Med. 171:1853-69 issn:
0022-1007. 31. Hill, D.B., et al., Increased plasma interleukin-6 concentrations in
alcoholic hepatitis. J Lab Clin Med, 1992. 119(5) : p. 547-52. 32. Hill, D.B., L.S. Marsano, and C.J. McClain, Increased plasma interle
ukin-8 concentrations in alcoholic hepatitis. Hepatology, 1993. 18: p. 5
76-580. 33. Hiramatsu, N., et al., Immunohistochemical detection of Fas antigen
in liver tissue of patients with chronic hepatitis C. Hepatology, 1994.
19(6): p. 1354-9. 34. Huang, Y.S., et al., Serum levels of interleukin-8 in alcoholic live
r disease: relationship with disease stage, biochemical parameters and s
urvival. J Hepatol, 1996. 24(4): p. 377-84. 35. Iio, S., et al., Serum levels of soluble Fas antigen in chronic hepa
titis C patients. J hepatol, 1998. 29(4): p. 517-23. 36. Izaki, K. (1978) Jpn. J. Bacteriol. 33:729-742). 37. John, J. F., et al.(1986)Rev. Infect. Dis. 8:693-704). 38. Kahiwamura, S., Okamura, H. (1998), Nippon. Rinsho. 56, pp. 1798-180
6. 39. Kendall, K. J. et al. (1987) J. Bacteriol. 169: 4177-4183). 40. Kim SH, Eisenstein M, Reznikov L, Fantuzzi G, Novick D, Rubinstein M
, Dinarello CA. Structural requirements of six naturally occurring isofo
rms of the IL-18 binding protein to inhibit IL-18. Proc Natl Acad Sci U
S A 2000;97:1190-1195. 41. Knight DM, Trinh H, Le J, Siegel S, Shealy D, McDonough M, Scallon B
, Moore MA, Vilcek J, Daddona P, et al. Construction and initial charact
erization of a mouse-human chimeric anti-TNF antibody.Mol Immunol 1993 N
ov 30: 16 1443-53 42. Kohno, K., J. Kataoka, T. Ohtsuki, Y. Suemoto, I. Okamoto, M. Usui,
M. Ikeda, and M. Kurimoto. 1997. IFN-gamma-inducing factor (IGIF) is a
costimulatory factor on the activation of Th1 but not Th2 cells and exer
ts its effect independently of IL-12. J. Immunol. 158:1541-1550. 43. Lee, M., et al., Expression of Th1 and Th2 type cytokines responding
to HBsAg and HBxAg in chronic hepatitis B patients. J Korean Med Sci, 1
999. 14(2): p. 175-81. 44. Lukkari, T.A., et al., Short-term ethanol exposure increases the exp
ression of Kupffer cell CD14 receptor and lipopolysaccharide binding pro
tein in rat liver. Alcohol Alcohol, 1999. 34(3): p. 311-9. 45. Luo, K.X., et al., In situ investigation of Fas/FasL expression in c
hronic hepatitis B infection and related liver diseases. J Viral Hepat,
1997. 4(5): P. 303-7. 46. Maliszewski, C. R., T. A. Sato, T. Vanden Bos, S. Waugh, S. K. Dower
, J. Slack, M. P. Beckmann, and K. H. Grabstein. 1990. Cytokine receptor
s and B cell functions. I. Recombinant soluble receptors specifically in
hibit IL-1- and IL-4- induced B cell activities in vitro. J. Immunol. 14
4:3028-3033. 47. Maniatis, T., in "Cell Biology: A Comprehensive Treatise, Vol. 3; Ge
ne Expression", Academic Press, NY, pp. 563-608(1980). 48. Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring
Harbor Laboratory, New York, 1982. 49. Martinez, F., et al., Ethanol and cytokine secretion. Alcohol, 1992.
9(6): p. 455-8. 50. McClain, C.J., et al., Tumor necrosis factor and alcoholic liver dis
ease. Alcohol Clin Exp Res, 1998. 22(5 Suppl): p. 248S-252S. 51. McClain, C.J. and D.A. Cohen, Increased tumor necrosis factor produc
tion by monocytes in alcoholic hepatitis. Hepatology, 1989. 9(3): p. 349
-51. 52. Micallef, M. J., T. Ohtsuki, K. Kohno, F. Tanabe, S. Ushio, M. Namba
, T. Tanimoto, K. Torigoe, M. Fujii, M. Ikeda, S. Fukuda, and M. Kurimot
o. 1996. Interferon-gamma-inducing factor enhances T helper 1 cytokine p
roduction by stimulated human T cells: synergism with interleukin-12 for
interferon-gamma production. Eur-J-Immunol 26: 1647-51 issn: 0014-2980. 53. Mizushima, S. and Nagata, S. (1990) pEF-BOS, a powerful mammalian ex
pression vector. Nucleic Acid Res. 18:5322-5328. 54. Monteleone G, Trapasso F, Parrello T, Biancone L, Stella A, Iuliano
R, Luzza F, Fusco A, Pallone F. Bioactive IL-18 expression is up-regulat
ed in Crohn's disease. J Immunol 1999;163:143-147. 55. Muhl H, Kampfer H, Bosmann M, Frank S, Radeke H, Pfeilschifter J. In
terferon-gamma mediates gene expression of IL-18 binding protein in nonl
eukocytic cells. Biochem Biophys Res Commun 2000;267:960-963. 56. Nakamura, K., H. Okamura, M. Wada, K. Nagata, and T. Tamura. 1989. E
ndotoxin-induced serum factor that stimulates gamma interferon productio
n. Infect-Immun 57:590-5 issn: 0019-9567. 57. Nanji, A.A., et al., Activation of nuclear factor κ B and cytokine
imbalance in experimental alcoholic liver disease in the rat. Hepatology
, 1999. 30(4): p. 934-43. 58. Nishimura, T. and A. Ohta, A critical role for antigen-specific Th1
cells in acute liver injury in mice. J. Immunol, 1999. 162: p. 6503-6509
. 59. Novick, D., B. Cohen, and M. Rubinstein. 1994. The Human Interferon
alpha/beta Receptor - Characterization and Molecular Cloning. Cell 77:39
1-400. 60. Novick, D., B. Cohen, and M. Rubinstein. 1992. Soluble Interferon-al
pha Receptor Molecules Are Present in Body Fluids. FEBS Lett 314:445-448
. 61. Novick, D., H. Engelmann, D. Wallach, and M. Rubinstein. 1989. Solub
le cytokine receptors are present in normal human urine. J. Exp. Med. 17
0:1409-1414. 62. Novick, D, Kim, S-H, Fantuzzi, G, Reznikov, L, Dinarello, C, and Rub
instein, M (1999). Immunity 10, 127-136. 63. Ohlinger W., et al., Immunohistochemical detection of tumor necrosis
factor-α, other cytokines and adhesion molecules in human livers with
alcoholic hepatitis. Virchows Arch A Pathol Anat Histopathol, 1993. 423(
3): P. 169-76. 64. Okamura, H., H. Tsutsui, T. Komatsu, M, Yutsudo, A. Hakura, T. Tanim
oto, K. Torigoe, T. Okura, Y. Nukada, K. Hattori, K. Akita, M. Namba, F.
Tanabe, K. Konishi, S. Fukuda, and M. Kurimoto. 1995. Cloning of a new
cytokine that induces IFN-gamma production by T cells. Nature 378:88-91. 65. Okamoto, T., et al., Induction of Fas ligand and Fas antigen mRNA ex
pressions in interferon-γ transgenic mouse liver. Jpn J Pharmacol, 1998
. 78(2): p. 233-5. 66. Okazaki, M., et al., Hepatic Fas antigen expression before and after
interferon therapy in patients with chronic hepatitis C. Dig Dis Sci, 1
996. 41(12): p. 2453-8. 67. Okamoto, T., K. Yamamura, and O. Hino, The mouse interferon-γ trans
gene chronic hepatitis model (Review). Int J Mol Med, 1999. 3(5): p. 517
-20. 68. Olee T, Hashimoto S, Quach J, Lotz M. (1999). J Immunol 162:2 1096-1
00 69. Parnet, P, Garka, K E, Bonnert, T P, Dower, S K, and Sims, J E. (199
6), J. Biol. Chem. 271, 3967-3970. 70. Plater-Zyberk C, Bonnefoy JY. Marked amelioration of established col
lagen-induced arthritis by treatment with antibodies to CD23 in vivo. Na
t Med 1995;1:781-785. 71. Pizarro TT, Michie MH, Bentz M, Woraratanadharm J, Smith MF, Jr., Fo
ley E, Moskaluk CA, Bickston SJ, Cominelli F. IL-18, a novel immunoregul
atory cytokine, is up-regulated in Crohn's disease: expression and local
ization in intestinal mucosal cells. J Immunol 1999;162:6829-6835. 72. Reimund JM, Wittersheim C, Dumont S, Muller CD, Baumann R, Poindron
P, Duclos B. Mucosal inflammatory cytokine production by intestinal biop
sies in patients with ulcerative colitis and Crohn's disease. J Clin Imm
unol 1996;16:144-150. 73. Rothe, H., N. A. Jenkins, N. G. Copeland, and H. Kolb. 1997 Active s
tage of autoimmune diabetes is associated with the expression of a novel
cytokine, IGIF, which is located near Idd2. J-Clin-Inves.t 99:469-74 iss
n: 0021-9738. 74. Saha N, Moldovan F, Tardif G, Pelletier JP, Cloutier JM, Martel-Pell
etier J.(1999). Arthritis Rheum 42:8 1577-87. 75. Sambrook, J., E.F. Fritsch, and M. T., Molecular Cloning: A laborato
ry manual. 2nd ed. ed. 1989, Cold Spring Harbor, New York: Cold Spring H
arbor Laboratory. 76. Simonet, W.S., et al., Osteoprotegerin: a novel secreted protein inv
olved in the regulation of bone density. Cell, 1997. 89(2): p. 309-319. 77. Sheron, N., et al., Elevated plasma interleukin-6 and increased seve
rity and mortality in alcoholic hepatitis. Clin Exp Immunol, 1991. 84(3)
: p. 449-53. 78. Sompayrac, L. H. and K.L. Danna, Efficient infection of monkey cells
with DNA of simian virus 40. Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 1981. 78: p.
7575-7578. 79. Sparks, C.A., et al., Assignment of the nuclear mitotic apparatus pr
otein NuMA gene to human chromosome 11q13. Genomics, 1993. 17: p. 222-22
4. 80. Su, G.L., et al., CD14 and lipopolysaccharide binding protein expres
sion in a rat model of alcoholic liver disease. Am J Pathol, 1998. 152(3
): p. 841-9. 81. Taieb, J., et al., Raised plasma soluble Fas and Fas-ligand in alcoh
olic liver disease [letter]. Lancet, 1998. 351(9120): p. 1930-1. 82. Triantaphyllopoulos, K A, Williams, R, Tailor, H, and Chernakovsky,
Y (1999). Arthritis and Rheumatism 42, 90-99. 83. Tsutsui, H., K. Nakanishi, K. Matsui, K. Higashino, H. Okamura, Y. M
iyazawa, and K. Kaneda. 1996. IFN-gamma-inducing factor up-regulates Fas
ligand-mediated cytotoxic activity of murine natural killer cell clones
. J. Immunol. 157:3967-73 issn: 0022-1767. 84. Tsuij, H., Mukaida, N., Harada A., Kaneko, S., Matsushita, E., Nakan
uma, Y., Tsutsui, H., Okamura, H., Nakanishi, K., Tagawa,m Y, Iwakura, Y
., Kobayashi, K., and Matsuschima, K.(1999), J. Immunol. 162, pp. 1049-1
055. 85. Tucci, A., James, H., Chicheportiche, R., Bonnefoy, J.Y., Dayer, J.M
., and Zubler, R.H., 1992, J.Immunol. 148, 2778-2784. 86. Ushio, S., M. Namba, T. Okura, K. Hattori, Y. Nukada, K. Akita, F. T
anabe, K. Konishi, M. Micallef, M. Fujii, K. Torigoe, T. Tanimoto, S. Fu
kuda, M. Ikeda, H. Okamura, and M. Kurimoto. 1996. Cloning of the cDNA f
or human INF-gamma-inducing factor, expression in Escherichia coli, and
studies on the biologic activities of the protein. J. Immunol. 156:4274-
4279.34. Okayama, H. and Berg, P. (1983) A cDNA cloning vector that perm
its expression of cDNA inserts in mammalian cells. Mol. Cell. Biol. 3:28
0-289. 87. Williams RO, Mason LJ, Feldmann M, Maini RN. Synergy between anti-CD
4 and anti-tumor necrosis factor in the amelioration of established coll
agen-induced arthritis. Proc Natl Acad Sci U S A 1994 Mar 29 91:7 2762-6
. 88. Yasuda, H., et al., Identity of osteoclastogenesis inhibitory factor
(OCIF) and osteoprotegerin (OPG): a mechanism by which OPG/OCIF inhibit
s osteoclastogenesis in vitro. Endocrinology, 1998. 139: p. 1329-1337. 89. Yoshimoto T. Takeda, K, Tanaka, T, Ohkusu, K, Kashiwamura, S, Okamur
a, H, Akira, S and Nakanishi, K (1998), J. Immunol. 161, 3400-3407.

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、ＬＰＳの注射１時間前にマウスにさまざまな量の組換えＩＬ１８ＢＰ
（０；０．０４；０．４；４ｍｇ／ｋｇ）をマウスへ注射した後のＩＦＮ−γの
血清レベル（ｐｇ／ｍｌ）を表すヒストグラムを示す。血液試料はＬＰＳ注射か
ら５時間後に採取され、循環ＩＦＮ−γに対するＥＬＩＳＡによって解析された
。

【図２】 図２は、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の血清レベルを表すヒ
ストグラムを示す。Ｐ．アクネスに感染させたマウスにＬＰＳを注射する前に、
組換えヒトＩＬ１８ＢＰの増加する投与量（０；０．０４；０．４；４ｍｇ／ｋ
ｇ）をマウスに注射した。血液試料は、ＬＰＳ注射から５時間後に採取され、Ａ
ＬＴの血清レベルが測定された。ＳＦ＝シグマ−フランケル：ＡＳＴ／ＡＬＴの
１ＳＦユニットは、ｐＨ７．５で２５℃のとき、１分間あたり４．８２×１０^-4 μｍｏｌグルタミン酸塩を形成する。

【図３】 図３は、ＬＰＳ注射後のマウスの生存時間を示す。Ｐ．アクネスに感染させた
マウスにＬＰＳを注射する２０分前に、組換えヒトＩＬ１８ＢＰをさまざまな投
与量（０；０．０４；０．００４；４ｍｇ／ｋｇ）で注射した。三角形：４ｍｇ
／ｋｇ；小さいひし形：０．４；大きいひし形：０．０４；丸形：ＩＬ１８ＢＰ
なし（ＬＰＳのみ）。

【図４】 図４は、Ｐ．アクネスに感染させたマウスにＬＰＳを注射する２０分前にさま
ざまな投与量のＩＬ１８ＢＰ（０；０．４；４ｍｇ／ｋｇ）を投与し、その注射
から５時間後に測定されたＩＦＮ−γの血清レベルを表すヒストグラムを示す。

【図５】 図５は、大腸菌（図５Ａ）またはＳ．チフィムリウム（図５Ｂ）由来の４０ｍ
ｇ／ｍｌ（致死投与量）のＬＰＳを注射する３０分前に、ポリクローナルＩＬ−
１８抗血清または正常なウサギ血清（ＮＤＳ＝コントロール）のどちらかを注射
したマウスの生存を示す。三角形：マウスはＩＬ−１８抗血清を注射された；丸
形：マウスはＮＤＳで注射された。ｘ軸において、ＬＰＳテスト後の日数が表さ
れる。^★ｐ＜０．０５。

【図６】 図６は、以下の方法で処置された各群５匹のマウスにおける平均＋ＳＥＭを表
すヒストグラムを示す。マウスは、抗ＩＬ−１８抗血清、可溶性ＴＮＦ−α受容
体（ＴＮＦｓＲｐ５５）または賦形剤（食塩水）のいずれかを腹腔内（ｉ．ｐ．
）注射され、すぐにコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ；図６Ａ）またはＰＥＡ（緑膿
菌、図６Ｂ）を静脈内（ｉ．ｖ．）投与された。^★★ｐ＜０．０１；^★★★ｐ＜
０．００１およびＣｏｎＡまたはＰＥＡのみ；＃ｐ＜０．０１およびＴＮＦｓＲ
Ｐ５５または抗ＩＬ−１８階乗のＡＮＯＶＡのどちらか。

【図７】 図７は、関節炎のマウスモデルの臨床スコアにおけるＩＬ−１８ＢＰの効果を
示す。図７Ａは、さまざまな量のＩＬ−１８ＢＰまたはＩＦＮ−βまたは賦形剤
（ＮａＣｌ）をマウスに毎日ｉ．ｐ．（腹腔内）投与した後測定された臨床スコ
アを表すグラフを示す。記号：塗りつぶしの三角形：１００００ＩＵ ＩＦＮ−
β；白抜きの三角形：１０ｍｇ／ｋｇ ＩＬ−１８ＢＰ、逆三角形：３ｍｇ／ｋ
ｇ ＩＬ−１８ＢＰ、ひし形：１ｍｇ／ｋｇ ＩＬ−１８ＢＰ；丸形：０．５ｍ
ｇ／ｋｇ ＩＬ−１８ＢＰ；白抜きの四角形：０．２５ｍｇ／ｋｇ ＩＬ−１８
ＢＰ、および塗りつぶしの四角形：ＮａＣｌ。ｘ軸において処置日数が表され、
ｙ軸において臨床スコア（平均値）が表される。統計はマンウイットニーテスト
によって計算された。図７Ｂは図７Ａのグラフから推論されるＡＵＣ（曲線下の
面積）を表すヒストグラムを示す。ｎ＝動物の数。

【図８】 図８は、肢の膨張におけるＩＬ−１８ＢＰの効果を示す。図８Ａは、さまざま
な量のＩＬ−１８ＢＰで処置された個々の動物の病気にかかった後肢の肢の太さ
（膨張）を計測することによって得られた結果を表すグラフを示す。ｙ軸は処置
の開始からのミリメートルでの肢の太さの変化を示す。記号は図７と同じである
。図８Ｂは図８Ａから推論されるＡＵＣを表すヒストグラムを示す。ｎ＝動物の
数。

【図９】 図９は、ほかの肢に疾患が広がっていく急性関節炎のときの病気にかかった後
肢の数の解析を示す。記号：塗りつぶしの四角形：ＮａＣｌ（コントロール）、
三角形：１０ｍｇ／ｋｇ ＩＬ−１８ＢＰ、逆三角形：３ｍｇ／ｋｇ ＩＬ−１
８ＢＰ、ひし形：１ｍｇ／ｋｇ ＩＬ−１８ＢＰ；丸形：０．５ｍｇ／ｋｇ Ｉ
Ｌ−１８ＢＰおよび白抜きの四角形：０．２５ｍｇ／ｋｇ ＩＬ−１８ＢＰ。

【図１０】 図１０は、病気にかかった関節の軟骨の侵食スコアを表すヒストグラムを示す
。

【図１１】 図１１は、マウスの関節の組織病理学を示す。実験の最後に、最初に関節炎が
発症した肢を切断し、固定し実施例１０に記載したように処理した。図１１Ａ：
正常なマウスの関節；図１１Ｂ：関節炎のマウス由来の関節；図１１Ｃ：ｒｈＩ
Ｌ−１８ＢＰで処置されたマウス由来の関節。

【図１２】 図１２は、それぞれ３ｍｇ／ｋｇのＩＬ−１８ＢＰまたは食塩水（賦形剤）で
処理されたマウスの、アイソタイプＩｇＧ１（白抜きの支柱）またはＩｇＧ２ａ
（線影がついた支柱）の抗２型コラーゲン抗体のレベルを表すヒストグラムを示
す。測定は、疾患の４日後（Ｄ４）または８日後（Ｄ８）に行なった。

【図１３】 図１３は、１、３または１０ｍｇ／ｋｇのＩＬ−１８ＢＰ、１００００ＩＵの
インターフェロンβ（ＩＦＮ−ｂ）、正常マウス血清（ＮＭＳ）または食塩水（
ＮａＣｌ）でそれぞれ処置された動物のＩＬ−６レベルをｐｇ／ｍｌで表すヒス
トグラムを示す。

【図１４】 図１４は、活動性クローン病、潰瘍性結腸炎を患った患者または正常で健康な
個体由来の腸バイオプシーにおける、ｈＩＬ−１８ＢＰおよびＩＬ−１８のｍＲ
ＮＡ転写産物の発現を示す。ＩＬ−１８ＢＰ、ＩＬ−１８およびハウスキーピン
グ遺伝子（β−アクチン）に対して、対応するＲＴ−ＰＣＲ産物は表される（図
１４Ａ）。エチジウムブロマイド染色されたバンドの比較的な定量化は、コダッ
クデジタルイメージングソフトウェアを用いて行なわれ、標的遺伝子とβ−アク
チンとの比として報告される。その標的遺伝子は図１４ＢにおいてＩＬ−１８、
図１４ＣにおいてＩＬ−１８ＢＰである。

【図１５】 図１５は、ＨＵＶＥＣｓ（ヒト臍帯静脈血管内皮細胞）によるｈＩＬ−１８Ｂ
ＰのｍＲＮＡの転写産物およびタンパク質の発現、ならびにＴＨＰ１（ヒト単球
細胞株）によるタンパク質の発現を示す。ＲＮＡは処置されていない内皮細胞（
培地）および、ＩＬ−１β、ＴＮＦα、ＩＦＮγで刺激された内皮細胞から単離
された。陽性コントロール：クローン病の患者からの結腸、陰性コントロール：
ｃＤＮＡなし。ＩＬ−１８ＢＰおよびＩＬ−１８の発現は、半定量ＲＴ−ＰＣＲ
によって解析された（図１５Ａ）。処置されていない（培地）培養上清およびＩ
Ｌ−１β、ＴＮＦα、ＩＦＮγで２４時間活性化したＨＵＶＥＣｓ（図１５Ｂ）
またはＴＨＰ１（図１５Ｃ）細胞の培養上清は、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−１８
ＢＰおよびＩＬ−１８のタンパク質産生について解析された。

【図１６】 図１６は、食塩水（ＮａＣｌ）またはＩＬ−１８ＢＰ（８ｍｇ／ｋｇ）のどち
らかの腹腔内（ｉｐ）投与後、ＩＢＤのマウスモデルにおいて１日から１０日の
あいだの体重の発達を示す。重さの変化は、第１日からの体重の変化の割合とし
て表される。２つの群の平均値およびＳＥＭは、各群８匹のマウスで示される。

【図１７】 図１７は、ＩＬ−１８ＢＰ処理されたＩＢＤマウスおよび処理されていないＩ
ＢＤマウス由来の結腸、尾のリンパ節および脾臓の解析の結果を示す。図１７Ａ
は、結腸の最後６センチメートルの重さをｍｇで表す。図１７Ｂは、尾のリンパ
節に存在する細胞全ての数を示す。図１７Ｃは脾臓においてＣＤ４⁺／ＣＤ６９⁺ について陽性染色される細胞の割合を表す。データは平均値とＳＥＭを表す。^★ は顕著な違いを示す。

【図１８】 図１８は、上清に存在するＣＤ３／ＣＤ２８による刺激後の、尾のリンパ節細
胞（図１８５ＡおよびＣ）および脾臓細胞（図１８ＢおよびＤ）によって４８時
間後産生されたＩＦＮγ（図１８ＡおよびＢ）およびＴＮＦα（図１８Ｃおよび
Ｄ）の量を示す。平均およびＳＥＭが示される。

【図１９】 結腸ホモジネート内のＴＮＦα（図１９Ａ）およびＩＦＮγ（図１９Ｂ）の内
容量を示す。データは結腸の重さに対して補正されている。平均値およびＳＥＭ
を示す。^★は顕著な違いを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｐ 1/16 Ａ６１Ｐ 1/04 19/02 1/16 19/08 19/02 25/32 19/08 29/00 25/32 １０１ 29/00 31/12 １０１ 37/00 31/12 43/00 １１１ 37/00 １２１ 43/00 １１１ Ａ６１Ｋ 37/66 Ｇ １２１ 37/02 Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (31)優先権主張番号 ００１２１６５１．４ (32)優先日 平成12年10月４日(2000．10．4) (33)優先権主張国 欧州特許庁（ＥＰ） (31)優先権主張番号 ００１２５６３３．８ (32)優先日 平成12年11月23日(2000．11．23) (33)優先権主張国 欧州特許庁（ＥＰ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (71)出願人 イエダ リサーチ アンド デベロップメ ント カンパニー リミテッド ＹＥＤＡ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＡＮＤ Ｄ ＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ ＣＯＭＰＡＮＹ ＬＩＭＩＴＥＤ イスラエル国、レホボト、ピーオー ボッ クス 95 （番地なし) (72)発明者 チバツコ、ヨランデ スイス連邦、セアシュ−1232 コンフィグ ノン、シュメン デュ ヴュイローネ（番 地なし) (72)発明者 ディナレロ、チャールズ アメリカ合衆国、80302 コロラド州、ボ ールダー、フィフティーンス ストリート 333 (72)発明者 プラテル−チベルク、クリスティーネ スイス連邦、セアシュ−1227 ジュネー ヴ、ケ デュ シュヴァル−ブラン、16 (72)発明者 ファン デーフェンテル、サンタール オランダ王国、エンエル−2012 セーハー ハールレム、クレイネ ホウトウェッヒ ６ (72)発明者 ルビンステイン、メナケム イスラエル国、54042 ギバット シュミ ュエル、ハトマー ストリート 16 (72)発明者 ノビック、ダニエラ イスラエル国、76302 レホボト、ハナシ ハリション 40 (72)発明者 キム、ソーヒュン アメリカ合衆国、80224 コロラド州、デ ンバー、サウス オネイダ ストリート 860、アパート シー−112（番地なし) Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA80 CA04 DA02 GA11 4C084 AA02 AA13 AA17 AA19 AA22 AA23 AA24 BA44 CA53 DA12 DA21 DA23 DA25 DA58 DA59 MA02 MA66 NA14 ZA66 ZA75 ZA96 ZB07 ZB08 ZB11 ZB15 ZB33 ZC20 ZC39 ZC42 ZC75 4C085 AA13 AA14 BB17 BB36 CC02 CC21 CC31 DD62 EE01 EE03 GG01 GG03 GG04

Claims (52)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 肝傷害の治療および／または予防用医薬の製造におけるＩＬ
   −１８阻害剤の用途。
2. 【請求項２】 前記肝傷害が急性である請求項１記載の用途。
3. 【請求項３】 前記肝傷害が慢性である請求項１記載の用途。
4. 【請求項４】 前記肝傷害がアルコール性肝炎、ウイルス性肝炎、免疫性肝
   炎、劇症肝炎、肝硬変、原発性胆汁性肝硬変である請求項１、２または３記載の
   用途。
5. 【請求項５】 前記肝傷害が劇症肝炎である請求項４記載の用途。
6. 【請求項６】 関節炎の治療および／または予防用医薬の製造におけるＩＬ
   −１８阻害剤の用途。
7. 【請求項７】 前記関節炎が炎症性関節炎である請求項６記載の用途。
8. 【請求項８】 前記炎症性関節炎が慢性関節リウマチである請求項７記載の
   用途。
9. 【請求項９】 軟骨破壊の治療および／または予防用医薬の製造におけるＩ
   Ｌ−１８阻害剤の用途。
10. 【請求項１０】 炎症性腸疾患の治療および／または予防用医薬の製造にお
    けるＩＬ−１８阻害剤の用途。
11. 【請求項１１】 前記前記炎症性腸疾患がクローン病である請求項１０記載
    の用途。
12. 【請求項１２】 前記炎症性腸疾患が潰瘍性結腸炎である請求項１０記載の
    用途。
13. 【請求項１３】 前記ＩＬ−１８阻害剤が、カスパーゼ−１（ＩＣＥ）阻害
    剤、ＩＬ−１８に対する抗体、いずれかのＩＬ−１８受容体サブユニットに対す
    る抗体、ＩＬ−１８シグナル伝達経路の阻害剤、ＩＬ−１８と競合しＩＬ−１８
    受容体を妨害するＩＬ−１８のアンタゴニスト、ならびにＩＬ−１８結合タンパ
    ク質、アイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質、機能的な誘導体、本質的に
    ＩＬ−１８結合タンパク質と同じ活性を有するその活性断片もしくは循環的に改
    変された誘導体から選択される、請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、
    １０、１１または１２記載の用途。
14. 【請求項１４】 前記ＩＬ−１８阻害剤がＩＬ−１８抗体である請求項１３
    記載の用途。
15. 【請求項１５】 前記ＩＬ−１８抗体がヒトに適応させたＩＬ−１８抗体で
    ある請求項１４記載の用途。
16. 【請求項１６】 前記ＩＬ−１８抗体がヒトＩＬ−１８抗体である請求項１
    ５記載の用途。
17. 【請求項１７】 前記ＩＬ−１８阻害剤が、ＩＬ−１８結合タンパク質また
    はアイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質、機能的な誘導体、その活性断片
    もしくは循環的に改変された誘導体である請求項１３記載の用途。
18. 【請求項１８】 前記ＩＬ−１８結合タンパク質がペギレーションされてい
    る請求項１７記載の用途。
19. 【請求項１９】 前記ＩＬ−１８阻害剤が、免疫グロブリンの全てまたは一
    部と融合されたＩＬ−１８結合タンパク質の全てまたは一部とを含む融合タンパ
    ク質であって、ＩＬ−１８と結合する融合タンパク質である、請求項１７記載の
    用途。
20. 【請求項２０】 前記融合タンパク質が免疫グロブリンの定常領域の全てま
    たは一部を含む請求項１９記載の用途。
21. 【請求項２１】 前記免疫グロブリンがＩｇＧ１またはＩｇＧ２アイソタイ
    プである請求項２０記載の用途。
22. 【請求項２２】 前記医薬がさらにインターフェロンを含有する請求項１、
    ２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６
    、１７、１８、１９、２０または２１記載の用途。
23. 【請求項２３】 前記インターフェロンがインターフェロン−βである請求
    項２２記載の用途。
24. 【請求項２４】 前記ＩＬ−１８阻害剤がインターフェロンと同時に、連続
    的にまたは別々に用いられる請求項２２または２３記載の用途。
25. 【請求項２５】 前記医薬がさらに腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）アンタゴニスト
    を含有する請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１
    ３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４
    記載の用途。
26. 【請求項２６】 前記ＴＮＦアンタゴニストがＴＢＰＩおよび／またはＴＢ
    ＰＩＩである請求項２５記載の用途。
27. 【請求項２７】 前記ＩＬ−１８阻害剤および／または前記インターフェロ
    ンが、ＴＮＦアンタゴニストと同時に、連続的にまたは別々に用いられる、請求
    項２５または２６記載の用途。
28. 【請求項２８】 前記医薬がさらにＣＯＸ阻害剤を含有する請求項１、２、
    ３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１
    ７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６または２７記載の
    用途。
29. 【請求項２９】 前記ＣＯＸ阻害剤がＣＯＸ−２阻害剤である請求項２８記
    載の用途。
30. 【請求項３０】 前記ＩＬ−１８阻害剤が、約０．０００１から１０ｍｇ／
    体重ｋｇ、または約０．０１から５ｍｇ／体重ｋｇ、または約０．１から３ｍｇ
    ／体重ｋｇ、または約１から２ｍｇ／体重ｋｇの量で使用される、請求項１、２
    、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、
    １７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８ま
    たは２９記載の用途。
31. 【請求項３１】 前記ＩＬ−１８阻害剤が、約０．１から１０００μｇ／体
    重ｋｇ、または約１から１００μｇ／体重ｋｇ、または約１０から５０μｇ／体
    重ｋｇの量で使用される、請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、
    １１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、
    ２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０記載の用途。
32. 【請求項３２】 前記ＩＬ−１８阻害剤が皮下に投与される、請求項１、２
    、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、
    １７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、
    ２９、３０または３１記載の用途。
33. 【請求項３３】 前記ＩＬ−１８阻害剤が筋肉内に投与される、請求項１、
    ２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６
    、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８
    、２９、３０、３１または３２記載の用途。
34. 【請求項３４】 前記ＩＬ−１８阻害剤が毎日投与される、請求項１、２、
    ３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１
    ７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２
    ９、３０、３１、３２または３３記載の用途。
35. 【請求項３５】 前記ＩＬ−１８阻害剤が１日おきに投与される、請求項１
    、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１
    ６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２
    ８、２９、３０、３１、３２、３３または３４記載の用途。
36. 【請求項３６】 肝傷害の治療および／または予防用医薬の製造における、
    ＩＬ−１８阻害剤をコードする配列からなる発現ベクターの用途。
37. 【請求項３７】 関節炎の治療および／または予防用医薬の製造における、
    ＩＬ−１８阻害剤をコードする配列からなる発現ベクターの用途。
38. 【請求項３８】 炎症性腸疾患関節炎の治療および／または予防用医薬の製
    造における、ＩＬ−１８阻害剤をコードする配列からなる発現ベクターの用途。
39. 【請求項３９】 遺伝子治療における請求項３６、３７または３８記載の用
    途。
40. 【請求項４０】 肝傷害の治療および／または予防用医薬の製造において、
    細胞内でＩＬ−１８阻害剤の内因的な産生を誘導および／または増強するための
    ベクターの用途。
41. 【請求項４１】 関節炎の治療および／または予防用医薬の製造において、
    細胞内でＩＬ−１８阻害剤の内因的な産生を誘導および／または増強するための
    ベクターの用途。
42. 【請求項４２】 炎症性腸疾患の治療および／または予防用医薬の製造にお
    いて、細胞内でＩＬ−１８阻害剤の内因的な産生を誘導および／または増強する
    ためのベクターの用途。
43. 【請求項４３】 肝傷害の治療および／または予防用医薬の製造において、
    ＩＬ−１８阻害剤を産生するように遺伝的に改変された細胞の用途。
44. 【請求項４４】 関節炎の治療および／または予防用医薬の製造において、
    ＩＬ−１８阻害剤を産生するように遺伝的に改変された細胞の用途。
45. 【請求項４５】 炎症性腸疾患の治療および／または予防用医薬の製造にお
    いて、ＩＬ−１８阻害剤を産生するように遺伝的に改変された細胞の用途。
46. 【請求項４６】 治療に有効量のＩＬ−１８阻害剤および治療に有効量のイ
    ンターフェロンからなる医薬組成物。
47. 【請求項４７】 治療に有効量のＩＬ−１８阻害剤および治療に有効量のＴ
    ＮＦアンタゴニストからなる医薬組成物。
48. 【請求項４８】 治療に有効量のＩＬ−１８阻害剤および治療に有効量のＣ
    ＯＸ−２阻害剤からなる医薬組成物。
49. 【請求項４９】 治療に有効量のインターフェロン、ＴＮＦアンタゴニスト
    またはＣＯＸ−２阻害剤のうちのいずれかまたは全てを組み合わせた、治療に有
    効量のＩＬ−１８阻害剤からなる医薬組成物。
50. 【請求項５０】 有効な阻害量のＩＬ−１８阻害剤を、治療および／または
    予防が必要な宿主へ投与することからなる、肝傷害の治療および／または予防方
    法。
51. 【請求項５１】 有効な阻害量のＩＬ−１８阻害剤を、治療および／または
    予防が必要な宿主へ投与することからなる、関節炎の治療および／または予防方
    法。
52. 【請求項５２】 有効な阻害量のＩＬ−１８阻害剤を、治療および／または
    予防が必要な宿主へ投与することからなる、炎症性腸疾患の治療および／または
    予防方法。