ES2212568T3 - Nuevo granulo mejorado que contiene una enzima. - Google Patents

Abstract

Gránulo que contiene una enzima comprendiendo: (a) un núcleo que contiene una enzima, y (b) una capa o revestimiento protector sustancialmente continuo que encapsula el núcleo, comprendiendo al menos un 75% p/p de un compuesto que tiene (i) una solubilidad de al menos 0.1 gramos en 100 g de agua a 20°C, (ii) un peso molecular por debajo de 500 gramos por mol, un pH por debajo de 11 al ser medido como una solución acuosa del compuesto al 10% p/p y (iii) una humedad constante a 20°C superior al 81%.

Description

Nuevo gránulo mejorado que contiene una enzima.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un gránulo que contiene una enzima que evita la desactivación de la enzima cuando los gránulos están almacenados, es decir, que mejora la estabilidad de almacenamiento de la enzima. La invención se refiere además a un proceso para producir este tipo de gránulo y al uso del gránulo en diferentes aplicaciones industriales, como la incorporación del gránulo en una composición de detergente.

Antecedentes de la invención

El uso industrial de enzimas, sobre todo de enzimas de origen microbiano, se ha convertido en algo cada vez más habitual. Las enzimas se emplean en numerosas industrias, incluyendo por ejemplo, la industria del procesamiento del almidón y la industria de los detergentes.

Es ampliamente conocido el hecho de que las enzimas, durante el almacenamiento, están expuestas a la degradación o desactivación por componentes (como el oxígeno o componentes blanqueadores) de la matriz circundante (como un detergente), los cuales pueden oxidar o desactivar de cualquier otra manera la enzima. También es ampliamente conocido que se desea una formación baja de polvo de gránulos conteniendo la enzima.

Desde la introducción de las enzimas en la industria de los detergentes se ha dedicado mucho esfuerzo en perfeccionar la formulación de productos enzimáticos mediante la aplicación de un granulado y un revestimiento a la enzima, con el fin de proteger la enzima de la degradación, así como para controlar la formación de polvo enzimático.

Muchos granulados están compuestos por una partícula central sobre la que se añade una capa que contiene una enzima. El núcleo también puede contener una enzima en sí mismo. Con el fin de aplicar las propiedades deseadas de esta construcción, p. ej. color, formación de polvo, nivel de solubilidad, tamaño, estabilidad de la enzima, resistencia física etc., normalmente a la construcción enzima / núcleo, se le añaden capas adicionales de revestimiento que le aportan este tipo de propiedades.

Algunas capas de revestimiento descritas en la técnica son composiciones multicomponente complejas, como en:

WO 90/09440, que expone un granulado que contiene enzima 1) un revestimiento (o cáscara) que comprende un aglutinante (p. ej. caolín), un relleno (p. ej. sales inorgánicas), agentes de granulación (p. ej. fibras celulósicas que confieren resistencia física), y una enzima, y 2) un segundo revestimiento supresor del polvo (mono, di o triglicérido).

DE 4322229, que expone un gránulo que contiene una enzima comprendiendo un revestimiento que incluye un pigmento inorgánico, un alcohol, un emulgente, un pigmento dispersador y agua.

JP 61162185, que expone un proceso para la producción de un gránulo que contiene una enzima comprendiendo un revestimiento del núcleo con una solución que contiene enzima(s), sulfato de sodio y opcionalmente aglutinantes y agentes de revestimiento.

Otras capas de revestimiento aplican polímeros o incluso partículas microscópicas para lograr propiedades mejoradas en el granulado, como en:

WO 97/23606, que expone un gránulo que contiene una enzima comprendiendo un revestimiento externo de polivinilpirrolidona, PVA o PEG.

WO 96/38527, que expone una sustancia granulada que contiene una enzima comprendiendo un revestimiento que incluye partículas insolubles en agua y un aglutinante.

US 5,324,649, que expone un gránulo que contiene una enzima comprendiendo un revestimiento externo de alcohol polivinílico o un copolímero.

WO 93/07263, que expone un gránulo que contiene una enzima comprendiendo un revestimiento externo de (co)polímero de vinilo.

WO 92/12645, que expone un granulado T que contiene una enzima revestido con grasa o cera con un alto punto fusión.

WO 89/08694, que expone un granulado que contiene una enzima con un revestimiento que incluye un mono o diglicérido de un ácido graso.

DD 263790, que expone una gránulo que contiene proteasa con un revestimiento de leche desnatada y/o maltodextrina.

WO 87/07292, que expone un granulado que contiene una enzima con un revestimiento que contiene un copolímero de ácido acrílico, y/o un relleno y/o un plastificante.

EP 193829 y US 4,689,297, que exponen un proceso para la producción de una partícula que contiene una enzima incluyendo el revestimiento de la partícula con un agente de revestimiento macromolecular soluble en agua o dispersible en agua que forma una película.

JP 58179492, que expone una partícula que soporta una enzima con un revestimiento de celulosa modificada.

WO 89/08695, que expone partículas que contienen enzimas con un revestimiento que contiene arcilla.

Además, otras descripciones de la técnica precedente aplican líquidos no acuosos como revestimientos para lograr propiedades mejoradas en el granulado, como en:

WO 96/16151, que expone un gránulo que contiene una enzima con un revestimiento de un líquido no acuoso.

Algunas descripciones de la técnica precedente mencionan el uso de agentes en las capas de revestimiento que proporcionan funciones especiales en la disolución de los granulados, como en:

DE 4344215, que expone un gránulo que contiene una enzima con un revestimiento que contiene un inhibidor inorgánico de la corrosión Ag.

EP 206417, que expone un gránulo que contiene una enzima con un revestimiento que contiene una sal alcalina tampón con un pH de 7-11. La sal tampón puede constituir el 50-100% del revestimiento.

WO 93/07263, expone un gránulo que contiene una enzima comprendiendo una capa depuradora, preferiblemente sulfato de amonio.

EP-415652-A2, así como US 5,093,021, describen gránulos enzimáticos revestidos con silicatos de metal alcalino insolubles y altamente alcalinos, opcionalmente en combinación con carbonatos de metal alcalinos.

El uso de compuestos de bajo peso molecular solubles en agua en los revestimientos en cantidades moderadas se ha descrito en la técnica de la formulación de composiciones enzimáticas estables, normalmente como materiales de relleno.

No obstante, no se ha constatado que la cantidad y la higroscopicidad de este tipo de compuestos tenga un impacto importante sobre la estabilidad de la enzima en un gránulo enzimático revestido con este tipo de compuestos.

Resumen de la invención

En nuestra investigación sobre formulaciones enzimáticas con una estabilidad de la enzima mejorada, se ha descubierto sorprendentemente que un gránulo con contenido en una enzima revestido o encapsulado por una capa continua de un material simple, de bajo coste y predominantemente soluble en agua, con una alta humedad constante, aumenta significativamente la estabilidad de almacenamiento de la enzima, especialmente en condiciones de humedad alta.

La presente invención proporciona por tanto, en un primer aspecto, un gránulo que contiene una enzima comprendiendo:

a)

un núcleo que contiene una enzima y

b)

una capa o revestimiento protector sustancialmente continuo que encapsula el núcleo, incluyendo al menos un 75% de un compuesto soluble en agua, con un peso molecular por debajo de 500 gramos por mol, un pH por debajo de 11 y una humedad constante a 20°C superior al 81%.

De acuerdo con este primer aspecto, un segundo aspecto de la invención consiste en un método para producir dicho gránulo que contiene una enzima comprendiendo el revestimiento de dicho núcleo que contiene una enzima con dicho material de revestimiento.

De acuerdo con los aspectos precedentes, otros aspectos de la invención se refieren a las aplicaciones de los gránulos que contienen enzimas, p. ej. la incorporación del gránulo en un detergente o en una composición alimenticia para animales o en una composición de panadería, y en métodos de limpieza, incluyendo el poner en contacto un objeto con una solución acuosa del gránulo que contiene una enzima.

Descripción del dibujo

La figura 1 muestra una sección transversal de un ejemplo de un gránulo según la invención en el que se ilustran las diferentes capas del gránulo.

Descripción detallada de la invención Definiciones

El término "% HR" se utiliza a lo largo del texto y, en el contexto de la invención, el término debe ser entendido como la humedad relativa del aire. Un 100% HR es aire saturado con humedad de agua a una temperatura fija y por tanto % HR refleja el porcentaje de saturación de humedad del aire.

El término "humedad constante" (en el contexto de la invención abreviado a veces como HC) de un compuesto o sustancia debe ser entendido como la % HR del aire atmosférico en equilibrio con una solución acuosa saturada de dicho compuesto en contacto con la fase sólida de dicho compuesto, todo recluido dentro de un espacio cerrado a una temperatura determinada. Esta definición está sacada de "Handbook of chemistry and physics" CRC Press, Inc., Cleveland, EEUU, edición 58, p E46, 1977-1978. En consecuencia, HC_{20^{o}C} = 50% para un compuesto significa que el aire con una humedad del 50% estará en equilibrio con una solución acuosa saturada del compuesto a 20°C. En consecuencia, el término humedad constante es una medida de las propiedades higroscópicas de un compuesto.

El término "pH" de un compuesto en el contexto de la invención debe ser entendido como el pH de una solución acuosa al 10% p/p de dicho compuesto.

El término "compuesto soluble en agua" en el contexto de la invención debe ser entendido como un compuesto para el cual al menos 0.1 gramos del compuesto pueden ser disueltos en 100 g de agua a 20°C , preferiblemente al menos 0.5 g por 100 g agua, p. ej. al menos 1 g por 100 g agua.

El revestimiento protector

Sin estar totalmente sujetos a esta teoría, creemos que un revestimiento con un alto valor de humedad constante tiene al menos una propiedad funcional importante: el revestimiento evita que la humedad entre en el material del núcleo que contiene la enzima. El revestimiento es, por tanto, una barrera entre la matriz potencialmente nociva que rodea los gránulos que contienen la enzima (p. ej. un detergente y/o el aire). Para que la humedad y/o los componentes nocivos que conlleva la humedad alcancen la enzima en el interior de un gránulo, la humedad debe pasar a través del revestimiento (es decir, la humedad debe ser absorbida desde fuera y liberada en la superficie interior del revestimiento) antes de entrar en contacto con la enzima y desactivarla. Los revestimientos con una humedad constante (HC) alta proporcionan, por consiguiente, una mejor protección de la enzima que los revestimientos con una humedad constante inferior, es decir, que el revestimiento de humedad constante alta evitará que la humedad entre en el gránulo en condiciones más amplias de humedad (% HR) de la matriz circundante. Creemos que si, por ejemplo, el % HR es más alto que la HC delmaterial de revestimiento, el revestimiento absorberá la humedad de la matriz circundante y permitirá que la humedad sea transportada hacia el interior del gránulo.

Para los revestimientos que permiten la absorción de humedad de la matriz circundante, se cree que el nivel de absorción de humedad y por tanto los efectos perjudiciales sobre la enzima, aumentan aún más si el material del núcleo también absorbe rápidamente la humedad entrante, lo que sucede en muchos materiales del núcleo conocidos. Por tanto el proceso de absorción de la humedad puede acelerarse por la hinchazón o expansión de los materiales del núcleo, formándose grietas, agujeros o roturas en el revestimiento, y permitiendo así que la humedad acceda a la enzima del núcleo de forma aún más fácil. La elección de un revestimiento con un valor de humedad constante más alto que el % HR esperado del aire circundante reduce eficazmente este proceso.

Además, se cree que un revestimiento con un alto valor de humedad constante evita la entrada de microorganismos, reduciendo así la posibilidad de crecimiento microbiano dentro del gránulo.

Tal como se menciona arriba, un revestimiento adecuado según la invención consta de al menos un 75% p/p de un compuesto soluble en agua, con un peso molecular por debajo de 500 gramos por mol, un pH por debajo de 11 y una humedad constante superior al 81% p/p. Los compuestos solubles en agua con un peso molecular por debajo de 500 g/mol son normalmente mucho más baratos y más fáciles de manejar con respecto a los procesos de revestimiento que las sustancias de alto peso molecular, como los polímeros. Los compuestos solubles en agua preferidos deberían tener un peso molar en un margen de 30-500 g/mol, preferiblemente 75-400, p. ej. 100-300 g/mol.

Además, un compuesto soluble en agua beneficia la liberación y/o disolución de la enzima cuando se introduce el gránulo en un medio acuoso (p. ej. una solución de limpieza o de lavado) mucho más que las sales insolubles como el carbonato cálcico y los minerales o compuestos inorgánicos como el caolín y/o el titandióxido. En consecuencia, un compuesto soluble en agua preferido es una sal inorgánica, p. ej. sales de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloruro o carbonato o sales de ácidos orgánicos simples (menos de 10 átomos de carbono p. ej. 6 o menos átomos de carbono) como citrato, malonato o acetato. Los cationes preferidos en estas sales son los iones de metal alcalinos o alcalinotérreos, aunque también puede usarse el ion de amonio o los iones metálicos de la primera serie de transición, p. ej. zinc. Se prefieren especialmente las sales metálicas alcalinas o alcalinotérreas de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloruro o carbonato, o las sales de ácidos orgánicos simples como citrato, malonato o acetato.

Una solubilidad adecuada se consideraría con al menos 0.1 gramos de sal en 100 g de agua a 20°C, preferiblemente al menos 0.5 g por 100 g de agua, p. ej. al menos 1 g por 100 g de agua. En una forma de realización preferida de la invención, la solubilidad del compuesto soluble en agua es de como mínimo 10 gramos, o al menos 20 gramos, de compuesto por 100 g de agua a 20ºC. Una alta solubilidad es muy ventajosa puesto que beneficia el proceso de revestimiento al reducir la cantidad de agua que es necesaria evaporar una vez depositado el revestimiento sobre el núcleo. También es importante que el compuesto se disuelva en una fase acuosa antes del revestimiento, porque si un núcleo es revestido aplicando el compuesto soluble en agua en forma seca, como un polvo granulado o como una pasta, sobre el núcleo, estas partículas formarán canales o aberturas en el revestimiento que permitirían el acceso de la humedad al núcleo.

El compuesto soluble en agua también debería tener un pH moderado en la solución acuosa, puesto que valores de pH extremos de la solución de revestimiento pueden corroer el equipamiento, así como ser potencialmente peligrosos para trabajar con ellos. En consecuencia, el compuesto soluble en agua puede ser un compuesto ligeramente alcalino o ligeramente ácido. Por tanto, el pH del compuesto soluble en agua estaría por debajo de 11, preferiblemente por debajo de 10, p. ej. por debajo de 9, por debajo de 8 o incluso por debajo de 7, determinado como una solución acuosa al 10% p/p del compuesto soluble en agua. Algunas sales solubles, como el carbonato sódico, tienen un pH muy alto (por encima de 11) y pueden no ser adecuadas como material de revestimiento en el contexto de esta invención. También las sales de bicarbonato pueden resultar inadecuadas, puesto que éstas, aunque tienen un pH inferior, tienden a formar gas de dióxido de carbono en solución, lo que podría interferir en el proceso de revestimiento.

Ejemplos específicos de compuestos solubles en agua adecuados para la invención son Na_{2}HPO_{4} (CH_{20^{o}C}=95%), Na_{3}PO_{4} (CH_{25^{o}C}=92%), (NH_{4})H_{2}PO_{4} (CH_{20^{o}C}=93.1 %), KH_{2}PO_{4} (CH_{20^{o}C}=92%), Na_{2}SO_{4}(CH_{20^{o}C}=93), K_{2}SO_{4} (CH_{25^{o}C} =99%), KHSO_{4} (CH_{20^{o}C}=86%), ZnSO_{4} (CH_{20^{o}C}=90%) y citrato de sodio (CH_{25^{o}C}=86%). El sulfato de sodio y el citrato de sodio son los compuestos solubles en agua más preferidos, puesto que son productos químicos económicos.

El revestimiento consta, como se ha dicho, de al menos un 75% p/p del compuesto soluble en agua, pudiendo ser preferiblemente al menos un 80% p/p, al menos un 85% p/p, p. ej. al menos un 90% p/p o al menos un 95% p/p. El revestimiento puede incluso consistir esencialmente en el compuesto soluble en agua. Con el debido respeto de mantener un valor de humedad constante adecuado deseado para el material del revestimiento total, pueden estar presentes cantidades menores de otros compuestos posibles en el revestimiento, tales como materiales de revestimiento convencionales. Ejemplos de estos se describen, entre otros, en el párrafo "revestimientos adicionales" que aparece más abajo. Otros ejemplos de materiales de revestimiento convencionales pueden encontrarse en referencias como US 4,106,991, EP 170360, EP 304332, EP 304331, EP 458849, EP 458845, WO 97/39116, WO 92/12645A, WO 89/08695, WO 89/08694, WO 87/07292, WO 91/06638, WO 92/13030, WO 93/07260, WO 93/07263, WO 96/38527, WO 96/16151, WO 97/23606, US 5,324,649, US 4,689,297, EP 206417, EP 193829, DE 4344215, DE 4322229A, DD 263790, JP 61162185 A y/o JP 58179492

En una forma de realización particular, el revestimiento puede comprender cantidades menores de un agente protector capaz de reaccionar con un componente capaz de desactivar (siendo hostil) la enzima que entra en el gránulo desde la matriz circundante, es decir, antes de que el componente entre en contacto y desactive la enzima. El agente protector puede por tanto p. ej. ser capaz de neutralizar, reducir o, por el contrario, reaccionar con el componente hostil haciéndolo inocuo a la enzima. Componentes típicos capaces de desactivar la enzima son los oxidantes, tales como perboratos, percarbonatos, perácidos orgánicos y similares.

Los agentes protectores pueden incluirse en diferentes categorías: materiales alcalinos o neutrales, agentes reductores, antioxidantes y/o sales de iones metálicos de la primera serie de transición. Cada uno de ellos puede ser usado junto con otros agentes protectores de la misma categoría o de categorías diferentes. Ejemplos de agentes protectores alcalinos son los silicatos de metal alcalinos, -carbonatos o bicarbonatos, que proporcionan un efecto de desoxidación química neutralizando activamente p. ej. los oxidantes. Ejemplos de agentes protectores reductores son las sales de sulfito, tiosulfito o tiosulfato, mientras que ejemplos de antioxidantes son la metionina, el hidroxitolueno butilado (BHT) o el hidroxianisol butilado (BHA). Muchos agentes preferidos son las sales de tiosulfatos, p. ej. el tiosulfato de sodio. Las cantidades de agente protector en el revestimiento pueden ser del 1-40% p/p del revestimiento, preferiblemente del 5-30%, p. ej. del 10-20%.

Según el concepto de la invención, el revestimiento no contiene ninguna enzima, puesto que el propósito del revestimiento es proteger la enzima encapsulada por el revestimiento.

El efecto protector del revestimiento depende del espesor del revestimiento y la cantidad de revestimiento en relación al resto del gránulo que contiene enzima. Un mayor espesor del revestimiento proporciona una mejor protección de la enzima, pero al mismo tiempo ocasiona unos costes de producción mayores, así como un riesgo de propiedades del gránulo más pobres con respecto al nivel de solubilidad de la enzima al introducir el gránulo que contiene la enzima en un medio acuoso. Para una protección eficaz, el espesor del revestimiento también debe ser ajustado al tamaño del núcleo, p. ej. para obtener un tamaño deseado del gránulo acabado. Dependiendo del tamaño del material del núcleo, el revestimiento puede ser aplicado en un 1-75% p/p del peso del gránulo revestido para obtener un tamaño deseado del gránulo revestido. Para un material del núcleo pequeño, el revestimiento puede ser aplicado en un 50-75% p/p o un 15-50% del gránulo revestido. Normalmente, sin embargo, los revestimientos que constituyen un 2-20% p/p, preferiblemente un 3-10% p/p, p. ej. un 6% del gránulo revestido son los preferidos.

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El revestimiento debería encapsular el núcleo que contiene la enzima formando una capa sustancialmente continua. La capa o revestimiento es preferiblemente homogénea en espesor y, con "sustancialmente continua" nos referimos a que la superficie del núcleo tendría pocas o ninguna zona no revestidas.

El núcleo

El núcleo contiene la enzima(s). Además de la enzima(s), el núcleo puede estar formado de cualquier manera o con cualquier material que proporcione las propiedades funcionales deseadas al material del núcleo, p. ej. el núcleo puede constar de materiales que permitan liberar rápidamente la enzima(s) al introducirlo en un medio acuoso.

En una forma de realización preferida, el núcleo está formado por un soporte granulado (I) con la enzima absorbida y/o una capa que contiene la enzima (II) aplicada sobre la superficie del soporte, opcionalmente incluyendo un agente reductor de protección de la enzima. Puede haber incluso un revestimiento adicional dentro del material del núcleo que proporcione las propiedades funcionales deseadas para el material del núcleo. Otro núcleo preferido es el denominado granulado T, en el que la enzima y el material del granulado se mezclan para formar gránulos que incorporan la enzima distribuida por todo el núcleo, tal como se describe en US 4,106,991 p. ej. en el Ejemplo 1. Cualquier método y material no enzimático convencional puede ser usado para preparar el núcleo.

Ejemplos de núcleos y materiales convencionales conocidos son, entre otros, los descritos en US 4,106,991 (en particular), EP 170360, EP 304332, EP 304331, EP 458849, EP 458845, WO 97/39116, WO 92/12645, WO 89/08695, WO 89/08694, WO 87/07292, WO 91/06638, WO 92/13030, WO 93/07260, WO 93/07263, WO 96/38527, WO 96/16151, WO 97/23606, US 5,324,649, US 4,689,297, EP 206417, EP 193829, DE 4344215, DE 4322229 A, DD 263790, JP 61162185 A, JP 58179492.

Como forma de realización particularmente preferida de la invención, el núcleo puede ser preparado aplicando una capa de enzima sobre un soporte "placebo" (soporte sin enzima) según la metodología descrita en US 4,106,991. Opcionalmente puede absorberse más enzima en la superficie del soporte.

En una forma de realización particular de la invención, el núcleo que contiene la enzima también puede comprender un agente protector, como el descrito para el revestimiento, véase arriba, preferiblemente mezclado con la enzima en cantidades adecuadas como 0.1- 1% p/p del gránulo revestido, preferiblemente 0.1-0.5% p/p, p. ej. 0.33% p/p.

Como se describe arriba, el núcleo puede absorber a través del revestimiento la humedad del ambiente circundante, un proceso que puede causar que el núcleo se hinche, ocasionando la formación de grietas en el revestimiento y una mayor absorbencia de humedad. El núcleo puede incluso, con una humedad relativa alta, disolverse y hacerse fluido.

En consecuencia, con el objetivo de proporcionar una mayor estabilidad a la enzima, el núcleo preferiblemente no debería ser un núcleo absorbente, es decir sólo debería ser capaz de absorber menos humedad que el 20% p/p de su propio peso en seco, preferiblemente menos del 10% p/p, p. ej. menos del 8% p/p o menos del 5% p/p, medido con un 75% HR a 20°C.

Enzimas

La enzima en el contexto de la presente invención puede ser cualquier enzima o combinación de enzimas diferentes, que se beneficia por estar granulada y así está protegida contra un ambiente hostil con el objetivo de ser aplicable para un uso específico. En consecuencia, cuando se hace referencia a "una enzima", en general, se entenderá que incluye combinaciones de una o más enzimas.

Debe entenderse que las variantes de enzimas (producidas, por ejemplo, por técnicas recombinantes) están incluidas dentro del significado del término "enzima". Ejemplos de este tipo de variantes de enzimas se describen, p. ej., en EP 251,446 (Genencor), WO 91/00345 (Novo Nordisk A/S), EP 525,610 (Solvay) y WO 94/02618 (Gist-Brocades NV).

La clasificación de las enzimas empleada en la presente descripción junto con las reivindicaciones está sacada de las Recommendations (1992) of the Nomenclature Commitee of the lnternational Union of Biochemistry and Molecualr Biology, Academic Press, Inc., 1992.

En consecuencia, los tipos de enzimas que pueden ser incorporadas apropiadamente en los gránulos de la invención incluyen: oxidoreductasas (EC 1.-.-.-), transferasas (EC 2.-.-.-), hidrolasas (EC 3.-.-.-), liasas (EC 4.-.-.-), isomerasas (EC 5.-.-.-) y ligasas (EC 6.-.-.-).

Las oxidoreductasas preferidas en el contexto de la invención son: peroxidasas (EC 1.11.1), lacasas (EC 1.10.3.2) y glucosa oxidasas (EC 1.1.3.4), mientras que las transferasas preferidas son las transferasas de cualquiera de las siguientes subclases:

a)

transferasas que transfieren grupos de un carbono (EC 2.1);

b)

transferasas que transfieren residuos de aldehído o de cetona (EC 2.2); aciltransferasas (EC 2.3);

c)

glicosiltransferasas (EC 2.4);

d)

transferasas que transfieren grupos alquilo o arilo, además de grupos metilo (EC 2.5); y

e)

transferasas que transfieren grupos de nitrógeno (EC 2.6).

Un tipo de transferasa más preferido en el contexto de la invención es una transglutaminasa (proteina-glutamina \gamma-glutamiltransferasa; EC 2.3.2.13).

Otros ejemplos de transglutaminasas adecuadas se describen en WO 96/06931 (Novo Nordisk A/S).

Hidrolasas preferidas en el contexto de la invención son: hidrolasas de éster carboxílico (EC 3.1.1.-), como lipasas (EC 3.1.1.3); fitasas (EC 3.1.3.-), p.ej. 3-fitasas (EC 3.1.3.8) y 6-fitasas (EC 3.1.3.26); glicosidasas (EC 3.2, que entran en el grupo denominado aquí como "carbohidrasas"), tales como (\alpha-amilasas (EC 3.2.1.1); peptidasas (EC 3.4, también conocidas como proteasas); y otras hidrolasas de carbonilo].

En el presente contexto, el término "carbohidrasa" se utiliza para indicar no sólo enzimas capaces de romper las cadenas de los carbohidratos (p. ej. almidones) de estructuras de anillos de especialmente cinco y seis miembros (es decir, glicosidasas, EC 3.2), sino también enzimas capaces de isomerizar carbohidratos, p. ej. estructuras de anillos desde seis miembros, como D-glucosa, hasta estructuras de anillos de cinco miembros, como D-fructosa.

Algunas carbohidrasas relevantes incluyen las siguientes (números EC en paréntesis):

\alpha-amilasas (3.2.1.1), \beta-amilasas (3.2.1.2), glucan 1,4-a-glucosidasas (3.2.1.3), celulasas (3.2.1.4), endo-1,3(4)-\beta-glucanasas (3.2.1.6), endo-1,4-\beta-xilanasas (3.2.1.8), dextranasas (3.2.1.11), quitinasas (3.2.1.14), poligalacturonasas (3.2.1.15), lisozimas (3.2.1.17), \beta-glucosidasas (3.2.1.21), \alpha-galactosidasas (3.2.1.22), \beta-galactosidasas (3.2.1.23), amilo-1,6-glucosidasas (3.2.1.33), xilan 1,4-\beta-xilosidasas (3.2.1.37), glucan endo-1,3-\beta-D-glucosidasas (3.2.1.39), \alpha-dextrin endo-1,6-\alpha-glucosidasas (3.2.1.41), sucrosa \alpha-glucosidasas (3.2.1.48), glucan endo-1,3-\alpha-glucosidasas (3.2.1.
59), glucan 1,4-\beta-glucosidasas (3.2.1.74), glucan endo-1,6-\beta-glucosidasas (3.2.1.75), arabinan endo-1,5-\alpha-L-arabinosidasas (3.2.1.99), lactasas (3.2.1.108), quitosanasas (3.2.1.132) e xilosa isomerasas (5.3.1.5).

Ejemplos de oxidorreductasas comercialmente disponibles (EC 1.-.-.-) incluyen Gluzyme^{TM} (enzima disponible por Novo Nordisk A/S). Otras oxidorreductasas están disponibles por otros proveedores.

Ejemplos de proteasas comercialmente disponibles (peptidasas) incluyen Esperase^{TM}, Alcalase^{TM}, Neutrase^{TM}, Durazym^{TM}, Savinase^{TM}, Kannase^{TM}, Pyrase^{TM}, Pancreatic Trypsin Novo (PTN), Bio-Feed^{TM} Pro y Clear-Lens^{TM} Pro (todas disponibles por Novo Nordisk A/S, Bagsvaerd, Dinamarca).

Otras proteasas comercialmente disponibles incluyen Maxatase^{TM}, Maxacal^{TM}, Maxapem^{TM}, Opticlean^{TM} y Pura-
fect^{TM} (disponibles por Genencor Internacional Inc. o Gist-Brocades).

Ejemplos de lipasas comercialmente disponibles incluyen Lipolase^{TM}, Lipolase^{TM} Ultra, LipoPrime, Lipozyme^{TM}, Palatase^{TM}, Novozym^{TM} 435 y Lecitase^{TM} (todas disponibles por Novo Nordisk A/S).

Otras lipasas comercialmente disponibles incluyen Lumafast^{TM} (lipasa Pseudomonas mendocina de Genencor Internacional Inc.); Lipomax^{TM} (lipasa Ps. pseudoalcaligenes de Gist-brocades/Genencor Int. Inc.; y lipasa Bacillus sp. de enzimas Solvay. Otras lipasas están disponibles por otros proveedores.

Ejemplos de carbohidrasas comercialmente disponibles incluyen: Alpha-Gal^{TM}, Bio-Feed^{TM} Alpha, Bio-Feed^{TM} Beta, Bio-Feed^{TM} Plus, Bio-Feed^{TM} Plus, Novozyme^{TM} 188, Celluclast^{TM}, Cellusoft^{TM}, Ceremyl^{TM}, Citrozym^{TM}, Deni-
max^{TM}, Dezyme^{TM}, Dextrozyme^{TM}, Finizym^{TM}, Fungamyl^{TM}, Gamanase^{TM}, Glucanex^{TM}, Lactozym^{TM}, Maltogenase^{TM}, Pentopan^{TM}, Pectinex^{TM}, Promozyme^{TM}, Pulpzyme^{TM}, Novamyl^{TM}, Termamyl^{TM}, AMG^{TM} (Amiloglucosidasa Novo), Maltogenase^{TM}, Sweetzyme^{TM} y Aquazym^{TM} (todas disponibles por Novo Nordisk A/S). Otras carbohidrasas están disponibles por otros proveedores.

La cantidad de enzima que debe ser incorporada en un gránulo de la invención depende del uso pretendido para el granulado. Para muchas aplicaciones, el contenido de enzima será lo más alto posible o practicable.

El contenido de enzima (calculado como proteína de enzima pura) en un gránulo de la invención normalmente estará en el margen de aproximadamente el 0.5% al 20% en peso del núcleo.

Cuando, por ejemplo, una proteasa (o peptidasa) es incorporada en los gránulos según la invención, la actividad enzimática (actividad proteolítica) de los gránulos acabados normalmente estará en el margen de 1-50 KiloNovoProteaseUnits por gramo. Asimismo, en el caso de, por ejemplo, las \alpha-amilasas, una actividad de 10-500 KiloNovoUnits por gramo será lo habitual, mientras que para las lipasas, una actividad en el margen de 50-400 KiloLipolaseUnits por gramo será normalmente lo adecuado. Todas las unidades son conocidas en la técnica.

Revestimientos adicionales

Los gránulos de la presente invención pueden comprender una, dos o más capas de revestimiento adicionales en la superficie interior o exterior del revestimiento protector según la invención.

Las capas de revestimiento adicionales pueden desempeñar varias funciones en el gránulo, dependiendo del uso pretendido para el gránulo. Así, por ejemplo, un revestimiento adicional puede conseguir uno o más de los siguientes efectos:

(i)

reducción adicional de la tendencia a la formación de polvo de un gránulo sin el revestimiento adicional según la invención;

(ii)

protección adicional de la enzima(s) en el gránulo contra la oxidación de las sustancias/sistemas de blanqueo (p. ej. perboratos, percarbonatos, perácidos orgánicos y similares);

(iii)

disolución a un nivel deseado durante la introducción del gránulo en un medio líquido (como un medio acuoso);

(iv)

proporcionar una mejor resistencia física al gránulo.

Se puede aplicar cualquier revestimiento adicional convencional con las propiedades deseadas; algunos ejemplos de materiales de revestimiento y métodos de revestimiento convencionales, entre otros, se describen en US 4,106,991, EP 170360, EP 304332, EP 304331, EP 458849, EP 458845, WO 97/39116, WO 92/12645, WO 89/08695, WO 89/08694, WO 87/07292, WO 91/06638, WO 92/13030, WO 93/07260, WO 93/07263, WO 96/38527, WO 96/16151, WO 97/23606, US 5,324,649, US 4,689,297, EP 206417, EP 193829, DE 4344215, DE 4322229 A, DD 263790, JP 61162185 A, JP 58179492.

En formas de realización apropiadas de los gránulos según la presente invención, la capa de revestimiento adicional puede estar compuesta según se describe en US 4,106,991 [p. ej. con un material ceroso como el polietilenoglicol (PEG), opcionalmente seguido de pulverización con un blanqueador como dióxido de titanio].

Otras capas de revestimiento pueden comprender adicionalmente una o más de lo siguiente: anti-oxidantes, depuradores de cloro, plastificantes, pigmentos, lubricantes (tales como agentes tensioactivos o agentes antiestáticos), enzimas adicionales y fragancias.

Los plastificantes útiles para las capas de revestimiento en el contexto de la presente invención incluyen, por ejemplo: polioles como azúcares, polialcoholes, o glicoles de politileno (PEGs) con un peso molecular inferior a 1000; urea, ésteres de ftalato, como dibutil o dimetil ftalato; y agua.

Los pigmentos adecuados incluyen, sin descartar otros, blanqueadores finamente divididos, como dióxido de titanio o caolín, pigmentos coloreados, colorantes solubles en agua, así como combinaciones de uno o más pigmentos y colorantes solubles en agua.

Tal como se usa en el presente contexto, el término "lubricante" se refiere a cualquier agente que reduce la fricción de la superficie, lubrica la superficie del gránulo, disminuye la tendencia a aumentar la electricidad estática, y/o reduce la friabilidad de los gránulos. Los lubricantes también pueden desempeñar un papel relacionado con la mejora del proceso de revestimiento, reduciendo la adherencia de los aglutinantes en el revestimiento. Por tanto, los lubricantes pueden servir como agentes anti-aglomerantes y agentes humectantes.

Ejemplos de lubricantes adecuados son los glicoles de politileno (PEGs) y los alcoholes grasos etoxilados.

En una forma de realización especialmente preferida de la invención, sólo se aplica un lubricante como revestimiento adicional. La composición de 1) un núcleo que contiene una enzima, 2) un revestimiento y 3) y un revestimiento adicional lubricante ha mostrado particularmente buenas propiedades con respecto a la estabilidad de la enzima.

Métodos de revestimiento

La invención también se refiere a un método para la fabricación/producción del gránulo que contiene una enzima descrito en el presente documento. Se pueden emplear métodos de revestimiento convencionales para aplicar el revestimiento según la invención, tal como se describe en las referencias establecidas en la sección precedente (arriba).

Un método para la producción del gránulo que contiene una enzima puede comprender los pasos siguientes:

a) mezcla de un material del núcleo que contiene una enzima con un medio líquido que comprende el compuesto soluble en agua de la invención y,

b) eliminación de los componentes volátiles del medio líquido de la mezcla, de manera que los componentes no volátiles del medio líquido se depositan en forma de una capa de revestimiento sólida sobre el material del núcleo.

En una forma de realización preferida de la invención, el gránulo que contiene una enzima es producido por un proceso en un lecho fluidizado que incluye:

a) fluidización del material del núcleo que contiene una enzima en un aparato de lecho fluidizado,

b) introducción de un medio líquido que incluye el compuesto soluble en agua de la invención, mediante la atomización del medio líquido en el lecho fluidizado, de manera que los componentes no volátiles del medio líquido se depositan en forma de una capa de revestimiento sólida sobre el material del núcleo y,

c) eliminación de los componentes volátiles del medio líquido del material del núcleo revestido.

En otra forma de realización preferida de la invención, el material del núcleo se prepara según un método que incluye:

a) preparación de un material de soporte granulado,

b) introducción de un medio líquido que incluye una enzima, mediante la atomización del medio líquido en el lecho fluidizado, de manera que los componentes no volátiles que incluyen la enzima del medio líquido se depositan sobre el soporte en forma de una capa que contiene la enzima, y

c) eliminación de los componentes volátiles del medio líquido del material del núcleo.

El material de soporte granulado puede comprender, según una forma de realización preferida, un aglutinante (como Glucidex^{TM} 21D, de Roquette Freres), un material fibroso (como fibras de celulosa) y un relleno (como sulfato de sodio finamente molido y/o caolín). El soporte granulado también puede ser preparado/granulado y secado como se describe en el ejemplo 1 de US 4,106,991. Después de la granulación, el soporte granulado seco puede idóneamente ser tamizado y fraccionado de tamaño para obtener un tamaño del soporte uniforme. Los tamaños del soporte preferidos, medidos como el diámetro del soporte, son entre 0.1-2 mm, p. ej. 0.3 - 1.0 mm.

Como otra forma de realización preferida, la enzima puede ser absorbida adicionalmente sobre el soporte granulado antes de aplicar la capa de enzima (II). Esta absorción puede conseguirse mediante:

a) la absorción de la enzima(s) en la superficie del soporte, poniendo en contacto el soporte granulado con un líquido que incluye la enzima en un mezclador,

b) mezcla de la composición mediante palas de mezclado, y

c) secado del soporte que lleva la enzima fluidizándolo en un aparato de lecho fluidizado,

Los equipos de mezclado convencionales pueden ser usados satisfactoriamente para mezclar el soporte granulado con el medio líquido que contiene la enzima. El equipo de mezclado puede ser un mezclador discontinuo o un mezclador continuo, como un mezclador de convección [ver, p. ej., Harnby et al., Mixing in the Process Industries, pp. 39-53 (ISBN 0-408-11574-2)]. También pueden emplearse equipos de mezclado no convectivos, p. ej. mezcladores de tambores giratorios, o los denominados platos de granulación.

El secado del soporte granulado que lleva la enzima, la aplicación de la capa que contiene la enzima (II), del revestimiento (III) y de cualquier otro revestimiento adicional pueden ser realizados en cualquier tipo de equipamiento de fluidización (como un aparato de secado de lecho fluidizado u otra forma de equipamiento de fluidización, como un fluidizador tipo Hüttlin). Para una descripción adecuada de un equipamiento de secado de lecho fluidizado, ver p. ej., Mixing in the Process Industries, pp. 54-77 (ISBN 0-408-11574-2).

Aplicaciones del gránulo que contiene una enzima

El gránulo que contiene una enzima según la invención es útil siempre que las enzimas puedan ser almacenadas solas, o bien puedan ser incorporadas en otro producto seco, y sea necesaria una estabilidad de la enzima mejorada para permitir unas buenas propiedades de almacenamiento (vida en almacenamiento mejorada) del gránulo. Especialmente en condiciones relativamente húmedas, es decir, bajo una atmósfera con un % HR superior al 55% RH, preferiblemente más de un 60% RH, p. ej. más de un 70% RH. La invención es útil especialmente para condiciones con más de un 75% RH, más de un 85% HR o más de un 95% RH.

El gránulo es también particularmente útil para productos secos que incluyen compuestos oxidantes, como peróxidos o superóxidos, p. ej. blanqueadores (p. ej. perboratos o percarbonatos) u otros componentes reactivos que en caso de contacto con la enzima pueden desactivar la enzima.

Por consiguiente, la invención prevé una composición de detergente que incluye el gránulo de la invención. El gránulo que contiene una enzima es también útil para limpiar un objeto (p. ej. un textil de algodón u otros tejidos naturales o sintéticos) poniendo en contacto el objeto con una solución acuosa del gránulo que contiene la enzima.

Finalmente, el gránulo que contiene la enzima es útil en productos como comida/forraje para animales o harina para panadería.

Descripción del detergente

Una composición de detergente según la invención comprende el gránulo que contiene una enzima de la invención y un agente tensioactivo. Además, puede comprender opcionalmente un constructor, otra enzima, un supresor de espuma, un agente suavizante, un agente para inhibir la transferencia del color y otros componentes usados convencionalmente en los detergentes, tales como agentes de suspensión de la suciedad, agentes de eliminación de la suciedad, blanqueadores ópticos, abrasivos, bactericidas, inhibidores de la decoloración, agentes colorantes, y/o perfumes encapsulados o no encapsulados.

La composición de detergente según la invención puede ser en forma de barra o gránulo. El pH (medido en solución acuosa en la concentración de uso) usualmente será neutral o alcalino, p. ej. en el margen de 7-11.

Una enzima contenida en el gránulo de la invención incorporado en la composición de detergente, normalmente está incorporada en la composición de detergente en un nivel del 0.00001% al 2% de proteína enzimática por peso de la composición, preferiblemente en un nivel del 0.0001% al 1% de proteína enzimática por peso de la composición, más preferiblemente en un nivel del 0.001% al 0.5% de proteína enzimática por peso de la composición, incluso más preferiblemente en un nivel del 0.01% al 0.2% de proteína enzimática por peso de la composición.

Sistema tensioactivo

El sistema tensioactivo puede comprender agentes tensioactivos no iónicos, aniónicos, catiónicos, anfolíticos y/o bipolares. El sistema tensioactivo consiste preferiblemente en un agente tensioactivo aniónico o una combinación de agentes tensioactivos aniónicos y no iónicos, p. ej. un 50-100% de agente tensioactivo aniónico y un 0-50% no iónico. Las composiciones de detergentes de lavado también pueden contener agentes tensioactivos catiónicos, anfolíticos, de ion bipolar y semi-polar, así como agentes tensioactivos no fónicos y/o aniónicos aparte de los ya descritos en la presente.

El agente tensioactivo está normalmente presente en un nivel del 0.1% al 60% en peso. A continuación se describen algunos ejemplos de agentes tensioactivos:

a) Agente tensioactivo no iónico:

El agente tensioactivo puede comprender condensados de óxido de polialquileno (p. ej. óxido de polietileno) de alquil fenoles. El grupo alquilo puede contener de aproximadamente 6 a aproximadamente 14 átomos de carbono, de cadena recta o ramificada. El óxido de etileno puede estar presente en una cantidad de aproximadamente 2 a aproximadamente 25 moles por mol de alquil fenol.

El agente tensioactivo puede también comprender productos de condensación de alcoholes alifáticos primarios y secundarios con aproximadamente de 1 a aproximadamente 25 moles de óxido de etileno. La cadena de alquilo del alcohol alifático puede ser recta o ramificada, y generalmente contiene de aproximadamente 8 a aproximadamente 22 átomos de carbono.

Además, el agente tensioactivo no iónico puede comprender condensados de óxido de polietileno de alquil fenoles, productos de condensación de alcoholes alifáticos primarios y secundarios con aproximadamente de 1 a aproximadamente 25 moles de óxido de etileno, alquilpolisacáridos, y mezclas de los mismos. Se prefieren especialmente los etoxilatos de alquil fenol C8-C14, que tienen de 3 a 15 grupos etoxi, y los etoxilatos de alcohol C8-C18 (preferiblemente una media de C10), que tienen de 2 a 10 grupos etoxi, y mezclas derivadas.

b) Agentes tensioactivos aniónicos:

Los agentes tensioactivos aniónicos adecuados incluyen los agentes tensioactivos de sulfato de alquilo que son sales hidrosolubles o ácidos de la fórmula ROSO3M, donde R preferiblemente es un hidrocarbilo C10-C24, preferiblemente un alquilo o un hidroxialquilo con un componente de alquilo C10-C20, más preferiblemente un alquilo o un hidroxialquilo C12-C18, y M es H o un catión, p. ej., un catión de metal alcalino (p. ej. sodio, potasio, litio), o amonio o amonio sustituido.

Otros agentes tensioactivos aniónicos incluyen sales (incluyendo, por ejemplo, sodio, potasio, amonio, y sales amónicas sustituidas, como sales de mono- di- y trietanolamina) de jabón, alcanosulfonatos C8-C22 primarios o secundarios, olefinsulfonatos C8-C24, ácidos policarboxílicos sulfonatados preparados por sulfonación del producto pirolizado de citratos de metal alcalinotérreos.

Los sulfonatos de alquilbenceno son adecuados, especialmente sulfonatos de alquilbenceno lineal (cadena recta) (LAS) donde el grupo alquilo preferiblemente contiene de 10 a 18 átomos de carbono.

\newpage

Las composiciones de detergente de lavado normalmente comprenden de aproximadamente un 1% a aproximadamente un 40%, preferiblemente de aproximadamente un 3% a aproximadamente un 20% en peso de este tipo de agentes tensioactivos aniónicos.

Sistema de constructores

Las composiciones según la presente invención pueden comprender además un sistema de constructores. El uso de cualquier sistema de constructores convencional es adecuado en la presente, incluyendo materiales de aluminosilicato, silicatos, policarboxilatos y ácidos grasos, materiales como tetraacetato de etilenodiamina (EDTA), secuestrantes de metales iónicos como los aminopolifosfonatos. También pueden usarse constructores de fosfato.

Algunos constructores adecuados pueden ser un material de intercambio fónico inorgánico, habitualmente un material de aluminosilicato hidratado inorgánico, en particular una zeolita sintética hidratada, tal como una zeolita hidratada A, X, B, HS o MAP.

Normalmente las sales constructoras de la detergencia se incluyen en cantidades del 5% al 80% en peso de la composición. Se prefieren niveles de los constructores para detergentes líquidos del 5% al 30%.

Agentes blanqueadores

La composición de detergente también puede comprender blanqueadores, p. ej. un blanqueador de oxígeno o un blanqueador de. halógeno. El blanqueador de oxígeno puede ser un agente liberador de peróxido de hidrógeno, como un perborato (p. ej. PB1 o PB4) o un percarbonato, o puede p. ej. ser un ácido percarboxílico. El tamaño de partícula de un blanqueador puede ser de 400-800 micras. Cuando están presentes, los compuestos blanqueadores de oxígeno normalmente están presentes en niveles de aproximadamente el 1% a aproximadamente el 25%.

El agente liberador de peróxido de hidrógeno puede ser usado en combinación con activadores de blanqueo, como tetra-acetiletilenodiamina (TAED), nona noiloxibenzeno-sulfonato (NOBS), 3,5-trimetil- hexsanoloxibenzeno-sulfonato (ISONOBS) o pentaacetilglucosa (PAG).

El blanqueador de halógeno puede ser, p. ej. un blanqueador de hipohalita, por ejemplo, ácido tricloro-isocianúrico y la sal de sodio y de potasio de los dicloroisocianuratos y las alcano sulfonamidas de N-cloro y N-bromo. Este tipo de materiales normalmente se añaden en un 0.5-10% en peso del producto acabado, preferiblemente un 1-5% en peso.

Las composiciones detergentes granuladas según la presente invención también pueden tener "forma compacta", es decir, pueden tener una densidad relativamente más alta que los detergentes granulados convencionales, es decir, de 550 a 950 g/l.

Las composiciones de la invención pueden por ejemplo ser formuladas como composiciones de detergente de lavado a mano y a máquina incluyendo composiciones de aditivos de lavado y composiciones adecuadas para el uso en el pretratamiento de tejidos coloreados, composiciones de aclarado con suavizante añadido, y composiciones para el uso general en la casa en operaciones de limpieza de superficies duras y operaciones de lavado de la vajilla.

Más específicamente, los gránulos que contienen la enzima de la invención pueden ser incorporados en las composiciones detergentes descritas en WO 97/04079, WO 97/07202, WO 97/41212, y PCT/DK 97/00345.

Materiales y métodos Preparación del material de soporte

Se prepararon porciones de material de soporte pulverizando 3.0 kg de celulosa fibrosa (Arbocel^{TM} FTC200), 3.0 kg de caolín (Speswhite^{TM}, Arcilla china) y 20.5 kg de sulfato de sodio finamente molido, con 9.5 kg de una solución acuosa de aglutinante de carbohidratos al 21% p/p (Glucidex 21D, de Roquette Freres). Esta mezcla fue granulada y secada como se describe en el ejemplo 1 en US 4,106,991. El material de soporte granulado seco fue tamizado, y la fracción entre 0.3 y 1.0 mm fue separada y usada para el tratamiento posterior.

Absorción de la enzima en el material de soporte

El material de soporte granulado y destilado fue transferido a un mezclador Lödiger equipado con un cabezal picador múltiple, y pulverizado con una solución líquida de concentrado enzimático Savinase^{TM} de aproximadamente 33 KNPU/g, que contiene un 0.4% p/p g de un agente tensioactivo no iónico (Softanol 50). La solución que contiene la enzima fue pulverizada sobre el soporte en una dosis de 0.15 kg de solución por kg de material de soporte. El agente tensioactivo no fónico fue añadido al concentrado enzimático para mejorar la absorción de la enzima sobre el soporte.

El concentrado de Savinase^{TM} fue aplicado usando una boquilla de presión sumergida en el soporte y pulverizándolo directamente en el picador. El soporte y el concentrado Savinase^{TM} se mezclaron mediante palas de mezcla, y las palas de mezcla y el picador fueron accionados de forma continua durante la pulverización.

El producto resultante fue transferido a un aparato de secado de lecho fluidizado Glatt WSG 15 (Glatt, Alemania) a una temperatura de 62°C en la entrada de aire, y secado durante 30 minutos, o hasta que la temperatura del producto superó los 50°C, y entonces tamizado sobre un filtro de malla de 1.2mm, dejando sólo un 0.8% p/p de partículas residuales más grandes en el tamiz.

Medición de la estabilidad de la enzima

Para cada tipo de muestras de gránulos que contienen una enzima, se mezclan los gránulos con un detergente comercial. Una o de estas muestras son inmediatamente selladas en jarras de cristal y almacenadas a menos de -18°C. Estas muestras son muestras de referencia y la enzima aquí es por definición estable al 100%. Otras muestras se colocan en armarios climatizados y se almacenan durante un período de tiempo en jarras de cristal abiertas a diferentes temperaturas y humedades (% HR). Cuando se completa un período de almacenamiento, las muestras son sacadas de las condiciones "de clima estático", y las jarras de cristal son inmediatamente selladas y enfriadas por debajo de -18°C parar detener cualquier desactivación en progresión de la enzima. Cuando todas las muestras han sido almacenadas durante el período de tiempo predeterminado, todas las muestras, incluyendo las muestras de referencia, son analizadas ese día en un ensayo de actividad enzimática apropiado, y los resultados de prueba de las muestras son calculados como el tanto por ciento de los resultados de la prueba de la muestra de referencia.

Ensayo enzimático

El ensayo enzimático usado en la presente es un ensayo de actividad proteasa, y la unidad para la actividad proteasa es en la presente Kilo Novo Protease Units por gramo de muestra (KNPU/g). La actividad se determina en relación a una enzima estándar (Savinase^{TM}) de actividad conocida. El estándar enzimático se estandariza midiendo, para una cantidad de enzima dada, el ritmo de formación (\mumol/minuto) de grupos amino libres liberados de la digestión de la di-metil-caseína (DMC) en solución por la enzima. El ritmo de formación es controlado registrando el desarrollo lineal de absorbancia a 420 nm de la reacción simultánea entre los grupos amino libres formados y el ácido 2,4,6-tri-nitro-benzeno-sulfónico (TNBS) añadido. La digestión de la DMC y la reacción de color se realizan a 50°C con un tampón de ácido bórico con un pH 8.3, con unos 9 minutos de tiempo de reacción seguido de un tiempo de medición de 3 minutos. Un desplegable AF 220/1 está disponible contra pedido a Novo Nordisk A/S, Dinamarca, dicho desplegable estando incluido por la presente como referencia.

Para las muestras de detergentes que contienen una enzima y el estándar enzimático estandarizado, se utilizó un ensayo modificado en el que la reacción se efectuó a 40°C con un tampón de ácido bórico con un pH 8.3 conteniendo 3.1 g/l de ácido bórico (Merck), 11.18 g/l de cloruro de potasio (Merck), 1.5 ml/L de BriJ 35 al 15% (Merck) y 20 g/l de un depurador blanqueador de sulfito de sodio.

Para medir la actividad endolasa (una celulasa), se puede usar cualquier método convencional de reducción de la viscosidad de la endo celulasa (como el método descrito en B1087a-GB disponible contra pedido a Novo Nordisk A/S, Dinamarca). La endolasa digiere la CMC (carboxi-metil-celulosa) en solución, reduciendo de ese modo la viscosidad de la solución, y la reducción de la viscosidad está relacionada con la actividad endolasa.

Para medir la actividad alfa-amilasa (p. ej. Natalase®), se puede usar cualquier ensayo convencional de la alfa-amilasa (como el método descrito en AF318/1-GB disponible contra pedido a Novo Nordisk A/S, Dinamarca). Las alfa-amilasas disocian los enlaces alfa 1-6 entre unidades de glucosa adyacentes. Usando p. ej. un sustrato 2-cloro-4-nitrofenil-b-D-maltoheptaósido y enzimas alfa y beta-glucosidasa, el substrato puede ser completamente digerido en monosacáridos y 2-clor-4-nitrofenol, los cuales forman un color detectable. Los equipos para realizar estos ensayos están comercialmente disponibles.

Medición de los valores de humedad constante para los compuestos de revestimiento

La humedad constante de los materiales de revestimiento del compuesto soluble en agua se midió preparando una solución acuosa saturada con exceso de fase sólida del compuesto en un vaso de precipitado abierto. Una vez alcanzado el equilibrio, cuando ya no se disuelve más compuesto en la fase líquida y las partículas sólidas del compuesto son todavía visibles, el vaso de precipitado es colocado en un dispositivo de medición de la humedad sellado y termostatizado (p. ej. un aparato Novasina), que mide el % HR a la temperatura elegida de la atmósfera sobre la solución saturada.

Ejemplos

La invención descrita en la presente está ilustrada por los ejemplos no limitativos dados a continuación.

Ejemplo 1

Una muestra del soporte granulado seco que lleva la enzima fue transferida a un aparato de lecho fluidizado Glatt WSG5 convencional. Usando una técnica convencional de revestimiento por pulverización superior, con una temperatura de entrada del aire de 70°C, una temperatura de salida del aire de 42°C y con volumen de aire de 600 m^{3}/h, se llevaron a cabo los siguientes pasos secuencialmente:

a) aplicación de una capa con contenido en una enzima sobre el soporte, pulverizando una solución acuosa que contiene la enzima Savinase^{TM}, el copolímero PVP/VA (Luviscol VA64) y dióxido de titanio (TiO_{2}) sobre el soporte a una velocidad de pulverización de la solución enzimática de 100g/min. Se aplicaron aproximadamente 210 g de Savinase^{TM} concentrada (30 KNPU/g), 2.34 g de copolímero PVP/VA (Luviscol VA64) y 2.5 g de dióxido de titanio (TiO_{2}) por kg de soporte,

b) aplicación de una capa de revestimiento de 80 g de citrato de sodio por kg de soporte, pulverizando un 37% p/p de solución acuosa de citrato de sodio sobre el producto de a), a una velocidad de pulverización de la solución de revestimiento de 100 g/min,

c) aplicación de una capa de revestimiento adicional de 50 g de dióxido de titanio (Kronos 2044), 50 g de caolín (ECC Supreme), 55 g de Glascol LS27 (46% en suspensión de Allied Colloids Ltd. GB), 30 g de PEG 4000 y 1.67 g de Softanol 50, por kg de soporte, pulverizando una solución acuosa de estos componentes sobre el producto de b), a una velocidad de pulverización de la solución de revestimiento de 100 g/min., y

d) aplicación de un revestimiento final pulverizando una solución de 7.5 g de PEG 4000 por kg de soporte sobre el producto de c), a una velocidad de pulverización de la solución de revestimiento de 100 g/min.

El gránulo acabado que contiene la enzima fue secado durante 5 minutos y enfriado después a 30°C, donde posteriormente fue eliminado del lecho fluidizado y tamizado entre 300 y 1200 \mum

Como referencia se prepararon dos tipos de gránulos diferentes. El primer tipo de gránulo fue preparado repitiendo los pasos a)-d), con la excepción de que el revestimiento descrito en b) fue reemplazado por 80 g de sulfato de amonio por kg de capa de revestimiento del soporte, pulverizando una solución acuosa al 37% p/p de sulfato de amonio sobre el producto de a), a una velocidad de pulverización de la solución de revestimiento de 100 g/min. El segundo tipo de gránulo fue también preparado, repitiendo los pasos a)-d), pero con la excepción de que el revestimiento descrito en b) fue reemplazado por 80 g de formiato de sodio por kg de capa de revestimiento del soporte, pulverizando una solución acuosa al 37% p/p de formiato de sodio sobre el producto de a), a una velocidad de pulverización de la solución de revestimiento de 100 g/min.

Ejemplo 2

La estabilidad de almacenamiento de los granulados que contienen la enzima del Ejemplo 1 fue evaluada en un detergente en polvo (A) conteniendo blanqueador de perborato y TAED y un detergente en polvo (B) conteniendo blanqueador de percarbonato. Se mezclaron 100 mg de muestras de los granulados que contienen la enzima y se mezclaron 10.0 g de las muestras de los detergentes para constituir las muestras de prueba. Las muestras fueron incubadas en jarras abiertas en condiciones con el aire a 35°C y 55% HR en un armario con control de humedad y termostatizado. Se tomaron muestras idénticas del armario después de 2 y 4 semanas, y se analizaron por la actividad enzimática (Savinase^{TM}) junto con muestras de referencia idénticas, almacenadas en jarras selladas por debajo de

\hbox{-18°C}

. Los resultados se dan en la tabla 1, donde las actividades enzimáticas de las muestras se dan como un porcentaje de las muestras de referencia correspondientes. TABLA 1

1

Humedades constantes a 25°C: Sulfato de amonio = 79; formiato de sodio = 56 y citrato de sodio = 86. Los resultados muestran que el revestimiento con la mayor humedad constante proporciona la mejor estabilidad de almacenamiento para la enzima.

Ejemplo 3

La higroscopicidad de las muestras del Ejemplo 1 fue evaluada incluyendo una muestra de referencia idéntica a los granulados de los Ejemplos 1 a 3, excepto porque no contenía ningún revestimiento de sal de sulfato de amonio, citrato de sodio o formiato de sodio. Todas las muestras fueron incubadas durante 1 semana en jarras abiertas con 3 condiciones diferentes: 55% HR y 35°C, 60% HR y 30°C y 74% HR y 37°C. Posteriormente, la absorción del agua de las muestras fue determinada pesando las muestras antes y después de la incubación. Además, después de la incubación, las muestras fueron examinadas bajo un microscopio.

Los resultados se dan en la tabla 2, que muestra la absorción de agua de las muestras con diferentes humedades. Estos resultados muestran claramente la gran diferencia en la cantidad de agua absorbida en gránulos idénticos con revestimientos diferentes, indicando que el citrato de sodio tiene las propiedades de absorción de agua más bajas (el máximo valor de humedad constante). Para la comparación se incluye una muestra de un granulado con un material del núcleo diferente y un revestimiento de sulfato de amonio (Purafect G). Este resultado muestra que si el revestimiento permite que pase la humedad, el núcleo puede absorber cantidades enormes de agua.

La Tabla 2 enumera también los resultados del examen microscópico, indicando que el revestimiento de algunas muestras resultó dañado (apareciendo grietas), cosa que se observó más claramente cuando la absorción de agua por el revestimiento (absorción de la muestra menos absorción de la referencia) alcanzó un nivel de aproximadamente el 50% en peso de la capa de sal (lo que constituye un 6% de la fórmula total).

TABLA 2

2

Humedades constantes a 25°C: Sulfato de amonio = 79; formiato de sodio = 56 y citrato de sodio = 86.

Ejemplo 4

Se produjo un gránulo que contiene una enzima revestido con citrato de sodio como en el Ejemplo 1, con la excepción de que el pH del citrato de sodio fue ajustado a 7.5 añadiendo ácido cítrico a la solución de revestimiento antes del proceso de revestimiento.

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Ejemplo 5

Se produjo un gránulo que contiene una enzima como en el ejemplo 4 con la excepción de que el revestimiento de citrato de sodio puro fue reemplazado por una mezcla de citrato de sodio y tiosulfato de sodio en una proporción en peso de 9:1. Así, se aplicó un revestimiento consistente en 72 g de citrato de sodio y 8 g de tiosulfato por kg de soporte.

Ejemplo 6

Se produjo un gránulo que contiene una enzima como en el Ejemplo 4 con la excepción de que el revestimiento de citrato de sodio puro fue reemplazado por una mezcla de citrato de sodio y tiosulfato de sodio en una proporción en peso de 4:1. Así, se aplicó un revestimiento consistente en 64 g de citrato de sodio y 16 g de tiosulfato por kg de soporte.

Ejemplo 7

La estabilidad de almacenamiento de los gránulos que contienen la enzima de los Ejemplos 4-6, así como el gránulo de referencia de sulfato de amonio del Ejemplo 1, fue evaluada en un detergente en polvo (A) que contiene un blanqueador de perborato y TAED y un detergente en polvo (B) que contiene un blanqueador de percarbonato. Se mezclaron 100 mg de las muestras de los granulados que contienen la enzima (Purafect 50 mg) y 10.0 g de las muestras de los detergentes para constituir las muestras de prueba. Las muestras fueron incubadas en jarras abiertas en condiciones con el aire a 35°C y 55% HR en un armario con control de la humedad y termostatizado. Se tomaron muestras idénticas del armario después de 2 y 4 semanas y se analizaron por la actividad enzimática (Savinase^{TM}) junto con muestras de referencia idénticas, que han sido almacenadas en jarras selladas por debajo de -18°C.

Los resultados se dan en la tabla 3, donde las actividades enzimáticas de las muestras se dan como un porcentaje de las muestras de referencia correspondientes.

TABLA 3

3

Humedades constantes a 25°C: Sulfato de amonio = 79 y citrato de sodio = 86.

Ejemplo 8

Se produjo un gránulo conteniendo una enzima como en el Ejemplo 1, con la excepción de que i) la solución enzimática usada para la absorción de la enzima sobre el soporte y para aplicar la capa de enzima contenía tiosulfato de sodio en una cantidad correspondiente al 0.33% p/p del granulado revestido final, y ii) el revestimiento de citrato de sodio fue reemplazado por 80 g por kg de revestimiento del soporte de sulfato de sodio, aplicando una solución de sulfato de sodio acuosa al 28.6% p/p a 45°C.

Además se preparó un gránulo de referencia idéntico al primer gránulo de este ejemplo, con la excepción de que el revestimiento de sulfato de sodio fue reemplazado por 80 g por kg de revestimiento del soporte de sulfato de amonio.

Ejemplo 9

La estabilidad de almacenamiento de los gránulos que contienen la enzima del Ejemplo 8 fue evaluada junto con un producto comercial en un detergente en polvo (A) que contiene un blanqueador de perborato de sodio y TAED, un detergente en polvo (B) que contiene un blanqueador de percarbonato de sodio y un detergente en polvo (C) sin blanqueador. Se mezclaron 100 mg de muestras (50 mg de Purafect G) de los granulados que contienen la enzima y 10.0 g de muestras de los detergentes para constituir las muestras de prueba. Las muestras que contienen blanqueador fueron incubadas en jarras abiertas en condiciones con el aire a 35°C y 55% HR, mientras que las muestras sin blanqueador fueron incubadas en jarras abiertas en condiciones con el aire a 37°C y a 70% HR. Todas las muestras fueron incubadas en armarios con control de humedad y termostatizados. Se tomaron muestras idénticas del armario después de 2 y 4 semanas y se analizaron por la actividad enzimática (Savinase^{TM}) junto con muestras de referencia idénticas, que han sido almacenadas en jarras selladas por debajo de -18°C.

Los resultados se dan en la tabla 4, donde las actividades enzimáticas de las muestras se dan como un porcentaje de las muestras de referencia correspondientes.

TABLA 4

4

Humedades constantes a 25°C: Sulfato de amonio = 79; sulfato de sodio= 93.

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Los resultados muestran que los materiales de revestimiento con humedad constante más alta proporcionan una mejor estabilidad.

Ejemplo 10

Se produjo un gránulo conteniendo una enzima revestido con sulfato de sodio como en el Ejemplo 8, con la excepción de que se empleó una solución concentrada diferente ultra filtrada de Savinase^{TM} (aprox. 41 KNPU/g ) durante todo el proceso.

Ejemplo 11

Se produjo una muestra de un soporte granulado seco con una enzima como se describe arriba, con la excepción de que a la solución enzimática usada para absorber la enzima sobre el soporte se le añadieron 5.33 g de tiosulfato de sodio por kg de soporte seco acabado. El soporte con la enzima y el tiosulfato fue transferido a un aparato de lecho fluidizado convencional Glatt WSG5. Usando una técnica convencional de revestimiento por pulverización superior a una temperatura de entrada del aire de 70°C, una temperatura de salida del aire de 42°C y con un volumen de aire de 600 m^{3}/h, se llevaron a cabo los pasos siguientes secuencialmente:

a) aplicación de una capa con contenido en una enzima sobre el soporte, pulverizando una solución acuosa que contiene la enzima con Savinase^{TM}, copolímero PVP/VA (Luviscol VA64), dióxido de titanio (TiO_{2}) y tiosulfato de sodio sobre el soporte a una velocidad de pulverización de 100 g/min. Se aplicaron aproximadamente 87 g de concentrado de Savinase^{TM} (41 KNPU/g), 2.67 g de copolímero PVP/VA (Luviscol VA64), 1.67 g de dióxido de titanio (TiO_{2}) y 1.67 g tiosulfato de sodio por kg de soporte,

b) aplicación de 267 g de sulfato de sodio por kg de capa de revestimiento del soporte de sulfato de sodio, pulverizando una solución acuosa de sulfato del sodio al 28.5% p/p a aproximadamente 45°C sobre el producto de a), a una velocidad de pulverización de la solución de revestimiento de 100 g/min.,

c) aplicación de un revestimiento lubricante final pulverizando una solución de 7.33 g de PEG 4000 por kg de soporte sobre el producto de c) a una velocidad de pulverización de 100 g/min.

El granulado conteniendo la enzima completado fue secado durante 5 minutos y entonces enfriado a 30°C, donde después fue eliminado del lecho fluidizado y tamizado entre 300 y 1200 \mum.

Ejemplo 12

La estabilidad de almacenamiento de los granulados que contienen enzima de los Ejemplos 13 y 14 fue evaluada junto con dos productos comerciales en un detergente en polvo (A) que contiene un blanqueador de perborato y TAED, un detergente en polvo (B) que contiene un blanqueador de percarbonato y un detergente en polvo (C) sin blanqueador. Se mezclaron 150 mg de las muestras de los granulados que contienen enzima (75 mg de Purafect E y G) y 10.0 g de las muestras de los detergentes para constituir las muestras de prueba. Las muestras que contienen blanqueador fueron incubadas en jarras abiertas en condiciones con el aire a 35°C y 55% HR, mientras que las muestras sin blanqueador fueron incubadas en jarras abiertas en condiciones con el aire a 37°C y 70% HR. Todas las muestras fueron incubadas en armarios con control de humedad y termostatizados. Se tomaron muestras idénticas del armario después de 2 y 4 semanas y se analizaron por la actividad enzimática (Savinase^{TM}) junto con muestras de referencia idénticas, que habían sido almacenadas en jarras selladas por debajo de -18°C. Los resultados se dan en la tabla 5, donde las actividades enzimáticas de las muestras se dan como un porcentaje de las muestras de referencia correspondientes.

TABLA 5

5

Los resultados dados en la tabla 5 muestran que la aplicación de un revestimiento espeso con una alta humedad constante conduce a una estabilidad superior, incluso aunque sólo se aplique un lubricante como revestimiento adicional.

Ejemplo 13

Se produjeron 20 kg de un granulado conteniendo Savinase® no revestido (enzima proteasa) (tipo TX) como se describe en US 4,106,991, Ejemplo 1 con las excepciones siguientes:

1) se usó sulfato de sodio en lugar de cloruro de sodio como material de relleno,

2) el concentrado enzimático fue una suspensión acuosa de enzima cristalina conteniendo también un aglutinante (Glucidex) y metionina 0.4% p/p como antioxidante.

El gránulo de enzima no revestido fue transferido a un mezclador Lödige de 50 litros y pulverizado con 2.0 kg de una solución/suspensión consistente en un 25% de sulfato de sodio, un 12% de dextrina, un 7% de TiO_{2} y un 56% de agua. La masa granulada fue tratada durante la pulverización con el picador, como se describe en US 4,106,991. El granulado tratado con el mezclador fue posteriormente transferido a un Glatt WSG5 de lecho fluidizado y secado. Se revistieron 15 kg del granulado seco en tres pasos sucesivos con los parámetros que se describen en el Ejemplo 1.

a) el granulado que contiene enzima fue revestido en un primer paso con 11.0 kg de una solución/suspensión consistente en un 27.1% de sulfato de sodio, un 3.9% de TiO_{2}, un 1.0% de dextrina y agua hasta el 100%. La solución salina se mantuvo durante la pulverización a 45-50°C para evitar la cristalización del sulfato de sodio. El revestimiento del gránulo que contiene una enzima con un revestimiento que contiene un 85% p/p de sulfato de sodio.

b) un revestimiento adicional fue aplicado en forma de una película supresora de polvo, pulverizando 3.5 kg de una solución consistente en un 6.3% de metilhidroxipropil celulosa (Aqualon 8MP5C), un 6.3% de PEG 4000 y agua hasta el 100%.

c) el granulado fue pulverizado en un paso final con 0.46 kg de una solución de un 24% de PEG 4000/water.

Ejemplo 14

Un granulado de base comparativa fue preparado como se describe en el Ejemplo 13, sin el tratamiento en el mezclador y sin revestimientos de lecho fluidizado, y fue revestido de forma convencional como se describe en US 106,991, Ejemplo 22, aplicando una solución del 7% de PEG 4000 y el 12.5% de una mezcla 1:1 TiO_{2}/caolín.

Ejemplo 15

La estabilidad de almacenamiento de los granulados de los Ejemplos 13 y 14 fue evaluada en un detergente que contiene perborato (A) y que contiene percarbonato (B), como se describe en el Ejemplo 4.

TABLA 6

7

Ejemplo 16

Se transfirieron 15 kg de una enzima Savinase absorbida en un soporte granulado seco a un aparato de lecho fluidizado convencional Glatt WSG.

Usando una técnica de revestimiento convencional por pulverización superior a una temperatura de entrada de aire de 70°C y una salida de aire de 42°C y con un volumen de aire de 600 m^{3}/h, se llevaron a cabo los pasos siguientes secuencialmente:

a) una capa con contenido en una enzima fue aplicada sobre el soporte, pulverizando el soporte granulado con una solución que contiene la enzima consistente en 2.07 kg de un líquido de Savinase concentrada (82% de sustancia seca, 24 KNPU/g), 50 g de Glucidex 21D y 54 g de TiO_{2} y a una velocidad de pulverizado de 100 g/min.

b) la capa de sal fue aplicada en un segundo paso pulverizando 14.7 kg de una solución consistente en un 27% de sulfato de sodio, un 3.9% de TiO_{2}, un 1,0% de Glucidex 21D y agua hasta el 100%. La temperatura de la solución fue mantenida a 45-50°C para evitar la cristalización de la sal.

c) el granulado revestido con la sal fue revestido en un siguiente paso con una película supresora de polvo, pulverizando 3.4 kg de una solución consistente en un 6.3% de metilhidroxipropil celulosa, un 6.3% PEG 4000 y agua hasta el 100%.

d) el granulado fue pulverizado en un paso final con 0.46 kg de una solución del 24% de PEG 4000/water.

A todo el concentrado enzimático usado para esta preparación se le añadió tiosulfato de sodio hasta una concentración correspondiente a un 0.3% p/p del granulado final.

Ejemplo 17

Este ejemplo fue preparado como en el Ejemplo 16, con la excepción de que la solución para el revestimiento (b) fue reducida a 11,0 kg.

Ejemplo 18

Este ejemplo fue preparado como en el Ejemplo 16, con la excepción de que la solución para el revestimiento (b) fue reducida a 7.35 kg.

Ejemplo 19

Este ejemplo fue producido según el Ejemplo 16, paso (a), es decir, sin el revestimiento de sal y la película supresora de polvo.

Ejemplo 20

La estabilidad de almacenamiento de los granulados de los Ejemplos 16-19 fue evaluada y comparada con las referencias en tres detergentes, como se describen en el ejemplo 9.

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(Tabla pasa a la página siguiente)

TABLA 7

8

9

Ejemplo 21

Se produjo un granulado conteniendo endolasa (enzima celulasa) como se describe en US 4,106,99, Ejemplo 1, con las excepciones siguientes:

a) el relleno era sulfato de sodio,

b) el concentrado enzimático líquido fue usado como líquido de granulación,

c) al granulado se añadió además un 10% p/p de un aglutinante de carbohidratos y un 0.5% p/p de tiosulfato de sodio.

El granulado fue revestido de forma convencional como se describe en US 106,991, Ejemplo 22, aplicando una solución de 7.2% p/p de PEG 4000 y 13,0% p/p de una mezcla al 1:1 de TiO_{2} y caolín.

Ejemplo 22

Se produjo un granulado conteniendo Endolase (enzima celulasa) como se describe en el Ejemplo 21. Este granulado de base fue revestido según los pasos (b)-(d) del Ejemplo 16, con la excepción de que se aplicaron 10.6 kg de solución salina en el paso (b).

Ejemplo 23

La estabilidad de almacenamiento de los granulados de los Ejemplos 21 y 22 fue evaluada en un detergente que contiene perborato de sodio (A) en las condiciones descritas en el Ejemplo 9.

TABLA 8

11

Ejemplo 24

Se produjo un granulado conteniendo Natalase® (una enzima amilasa) como se describe en US 4,106,991, Ejemplo 1, con las excepciones siguientes:

1) se usó sulfato de sodio en lugar de cloruro de sodio como material de relleno,

2) el concentrado enzimático fue una suspensión acuosa de enzima cristalina que fue también usada como líquido de granulación conteniendo también un aglutinante (Glucidex),

3) al granulado se le añadió además un 0.4% p/p de tiosulfato de sodio (calculado como un % del granulado no revestido).

El granulado fue revestido de modo convencional como se describe en US 106,991, Ejemplo 22, aplicando una solución del 7% de PEG 4000 y del 12.5% de una mezcla 1:1 de TiO_{2} y caolín.

Ejemplo 25

Se produjo un granulado que contiene Natalase® como se describe en el Ejemplo 24. Se transfirieron 1300 g del granulado de base conteniendo Natalase a un lecho fluidizado UniGlatt, donde fue revestido con un revestimiento de sal pulverizándola con una solución salina a 50°C consistente en:

234 g de sulfato de sodio

9 g de Glucidex 21D

25 g de TiO_{2}

585 g de agua

Las condiciones de pulverización fueron a una temperatura de entrada del aire de 70°C y a una temperatura de salida del aire de 42°C. El granulado fue, después de acabar la pulverización, secado en el lecho fluidizado durante 5 minutos.

Ejemplo 26

La estabilidad de almacenamiento de los granulados de los Ejemplos 24 y 25 fue evaluada en el detergente que contiene percarbonato (B) en las condiciones que se describe en el Ejemplo 9.

TABLA 9

12

Ejemplo 27

Se produjo un granulado que contiene Savinase® no revestido (granulado A) como se describe en US 4,106,991, Ejemplo 1, con las excepciones siguientes:

1) se usó sulfato de sodio en lugar de cloruro de sodio como material de relleno,

2) el concentrado enzimático fue una suspensión acuosa de enzima cristalina que contiene también un aglutinante de carbohidratos (Glucidex) y metionina como antioxidante.

Los gránulos no revestidos fueron revestidos con una capa de sal usando un lecho fluidizado según el procedimiento siguiente:

a) se fluidificaron 15 kg de los gránulos no revestidos en un lecho fluidizado Glatt WSG-5 usando 550 m^{3} de aire por hora. La temperatura de entrada del aire fue de 70°C.

b) se preparó una solución salina de 2.0 kg de Na_{2}SO_{4} disuelta en 5.0 kg de agua a 50°C. Se pulverizaron 2.1 kg de esta solución sobre los gránulos fluidificados a una velocidad de 100 gramos de solución por minuto. Durante la pulverización del líquido, la temperatura del producto fue aproximadamente de 42°C. Una vez añadida la solución se permitió la evaporación del agua de los gránulos revestidos (hasta que la temperatura del producto aumentó rápidamente en el lecho fluidizado). Se tomó una muestra de 2.0 kg (granulado A1) de los gránulos revestidos y el proceso de revestimiento se repitió para añadir otro revestimiento a los gránulos que quedaban en el lecho fluidizado, pulverizando los gránulos restantes con 1.75 kg de una solución salina adicional. Se tomó una muestra de 2.0 kg de los gránulos revestidos adicionalmente (granulado A2) y el proceso de revestimiento fue repetido una vez más para añadir otro revestimiento a los gránulos todavía restantes en el lecho fluidizado, pulverizando los gránulos restantes con los restantes 3.15 kg de la solución salina (granulado A3).

Ejemplo 28

La estabilidad de la enzima en los gránulos fue evaluada en un detergente en polvo modelo que contiene perborato de sodio, a 35°C y 55% de humedad relativa, en cajas abiertas según el Ejemplo 9.

TABLA 10 Actividad residual Savinase en %

13

El % de sal fue calculado como % p/p de sal de los gránulos no revestidos, con la condición de que todo el agua se hubiese evaporado. A partir del Ejemplo 10 se determinó que la estabilidad de la enzima en los gránulos de Savinase® estaba significativamente mejorada por el revestimiento de sal, y que al aumentar la cantidad de sal mejora la estabilidad.

Claims (23)

1. Gránulo que contiene una enzima comprendiendo:

(a) un núcleo que contiene una enzima, y

(b) una capa o revestimiento protector sustancialmente continuo que encapsula el núcleo, comprendiendo al menos un 75% p/p de un compuesto que tiene (i) una solubilidad de al menos 0.1 gramos en 100 g de agua a 20°C, (ii) un peso molecular por debajo de 500 gramos por mol, un pH por debajo de 11 al ser medido como una solución acuosa del compuesto al 10% p/p y (iii) una humedad constante a 20°C superior al 81%.

2. Gránulo según la reivindicación 1, en el que dicho compuesto soluble en agua tiene un peso molecular entre 30-500 g/mol.

3. Gránulo según la reivindicación 2, en el que dicho compuesto soluble en agua tiene un peso molecular entre 75-400 g/mol.

4. Gránulo según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicho compuesto soluble en agua tiene una solubilidad de al menos 10 gramos por 100 de agua.

5. Gránulo según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicho compuesto soluble en agua tiene una humedad constante a 20°C superior al 90%.

6. Gránulo según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicho núcleo es un núcleo no absorbente.

7. Gránulo según la reivindicación 1, en el que dicha sal es seleccionada del grupo consistente en sal de iones metálicos alcalinos o alcalinotérreos de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloruro, carbonato y ácidos orgánicos simples.

8. Gránulo según la reivindicación 1, en el que dicha sal es seleccionada del grupo consistente en Na_{2}HPO_{4}, Na_{3}PO_{4}, (NH_{4})H_{2}PO_{4}, KH_{2}PO_{4}, Na_{2}SO_{4}, K_{2}SO_{4}, KHSO_{4}, ZnSO_{4} y citrato de sodio.

9. Gránulo según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicho revestimiento consta además de uno o más agentes protectores capaces de desactivar los componentes hostiles a la enzima que entran en el gránulo desde una matriz circundante.

10. Gránulo según la reivindicación 9, en el que dicho componente hostil es un componente blanqueador de detergentes.

11. Gránulo según la reivindicación 10, en el que dicho agente protector es seleccionado del grupo consistente en agentes reductores, antioxidantes y sales de metales de transición.

12. Gránulo según la reivindicación 11, en el que dicho agente reductor es una sal de tiosulfato.

13. Gránulo según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicho revestimiento constituye un 1-75% p/p del gránulo revestido.

14. Gránulo según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicho núcleo que contiene la enzima consta de un soporte granulado y una capa que contiene la enzima.

15. Gránulo según la reivindicación 14, en el que enzima adicional es absorbida en el soporte.

16. Gránulo según la reivindicación 15, en el que dicha capa que contiene una enzima y/o enzimas absorbidas consta de un agente reductor protector.

17. Gránulo según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dichas enzimas están seleccionadas del grupo consistente en oxidoreductasas (EC 1.-.-.-), transferasas (EC 2.-.-.-), hidrolasas (EC 3.-.-.-), liasas (EC 4.-.-.-), isomerasas (EC 5.-.-.-) y ligasas (EC 6.-.-.-).

18. Gránulo según cualquiera de las reivindicaciones precedentes que además incluye un revestimiento adicional.

19. Gránulo según la reivindicación 18, donde dicho revestimiento adicional es un lubricante.

20. Método para producir el gránulo de las reivindicaciones 1-19 comprendiendo:

a) mezcla del material del núcleo que contiene una enzima con un medio líquido que incluye dicho compuesto soluble en agua y,

b) eliminación de los componentes volátiles del medio líquido de la mezcla, de manera que los componentes no volátiles del medio líquido se depositan como una capa de revestimiento sólida sobre el material del núcleo.

21. Método según la reivindicación 20, según el cual el gránulo se obtiene por un proceso de lecho fluidizado que comprende:

a) fluidización de un material del núcleo conteniendo una enzima en un aparato de lecho fluidizado,

b) introducción de un medio líquido que incluye el compuesto soluble en agua de la invención, mediante la atomización en el lecho fluidizado, de manera que los componentes no volátiles del medio líquido se depositan como una capa de revestimiento sólida sobre el material del núcleo y,

c) eliminación de los componentes volátiles del medio líquido del material del núcleo revestido.

22. Composición de detergente que incluye la composición granulada que contiene la enzima de cualquiera de las reivindicaciones 1-19.

23. Método de limpieza que incluye la puesta en contacto de un objeto con una solución acuosa que incluye la composición granulada de cualquiera de las reivindicaciones 1-19.