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CN116199777A - 抗hNKG2D抗体及其应用 - Google Patents

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CN116199777A CN202111453935.1A CN202111453935A CN116199777A CN 116199777 A CN116199777 A CN 116199777A CN 202111453935 A CN202111453935 A CN 202111453935A CN 116199777 A CN116199777 A CN 116199777A
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Abstract

本发明涉及抗体领域，特别涉及抗hNKG2D抗体及其应用。本发明提供了人NKG2D(hNKG2D)抗体及其用途。本发明还提供了抗hNKG2D抗体的鼠源和人鼠嵌合抗体形式。这些抗体对hNKG2D蛋白具有高亲和性，可用于预防或治疗诸如癌症、炎症或自身免疫性疾病。

Description

抗hNKG2D抗体及其应用
技术领域
本发明涉及抗体领域，特别涉及抗hNKG2D抗体及其应用。
背景技术
自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)是机体重要的免疫细胞，不仅与肿瘤、病毒感染和免疫调节有关，而且参与机体超敏反应和自身免疫性疾病的发生发展过程。NK细胞与细胞毒性T细胞功能类似，对病毒感染的细胞、肿瘤细胞有着极快的响应速率。不同之处在于不需要肿瘤特异性抗原递呈，因此NK细胞具有更广谱的抗癌功效。
NK细胞杀伤靶细胞主要通过以下三种机制：1.释放穿孔素/颗粒酶或死亡受体介导杀死肿瘤细胞；2.分泌细胞因子和趋化因子调节免疫系统，协调T细胞杀伤肿瘤细胞；3.NK细胞表面的CD16分子结合抗体的Fc段，介导抗体依赖细胞介导的细胞毒性(Antibody-dependent cellular cytotoxicity,ADCC)作用，识别并杀伤被抗体结合的肿瘤细胞。
NK细胞的活性受细胞表面的激活型和抑制型受体协调调节，抑制型受体有杀伤细胞免疫球蛋白类似受体、c型凝集素受体(NKG2A/CD94)、白细胞免疫球蛋白类似受体和免疫检查点受体(PD-1、TIM-3、LAG-3、TIGIT)等，识别并结合主要组织相容性复合体(majorhistocompatibility complex，MHC)分子。当肿瘤细胞MHC-1分子表达下调后，造成肿瘤细胞免疫逃逸的同时，NK细胞的抑制性受体通路活性下降，负反馈下调，NK细胞活化，进而杀伤那些不表达MHC-I的肿瘤细胞。
NK细胞表面激活型的受体包括：自然细胞毒性引发受体、SLAM家族受体、c型凝集素(NKG2D)、CD16(FcγRIII)。NKG2D分子由Klrk1(killer cell lectin-like receptorsubfamily member 1)基因编码，在NK细胞、NKT细胞、部分CD8+和CD4+T细胞膜表面均有表达。因其胞内区比较短，需要伴侣分子DAP10协同信号传递，当NKG2D与配体结合后，下游的PI3K(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)和/或GRB2(growth factor receptor-boundprotein 2,GRB2)信号通路活化，导致NK细胞活化、增殖、分泌细胞因子，活化免疫系统。NKG2D配体有MHC I类相关分子家族(MICA/B)和人巨细胞病毒蛋白UL16的结合蛋白(ULBP1-6)家族等，上述配体在病毒/细菌感染、恶性转化的细胞上表达，研究表明在炎症部位或自身免疫患者的组织中也有上述配体异常表达，如类风湿性关节炎、糖尿病、乳糜泻、克罗恩病、动脉粥样硬化、脱发和哮喘(Guerra et al.Clin Immunol 2013；149:432-9)。
肿瘤细胞产生的NKG2D的可溶性配体，可以使NKG2D分子内化，降低NK细胞介导的肿瘤细胞裂解，导致肿瘤免疫逃逸。因此NKG2D分子成为肿瘤免疫治疗新靶标之一。目前针对NKG2D的药物研发尚处于临床研究阶段，有研究发现抗NKG2D抗体可以增强NK细胞的细胞毒性和细胞因子分泌；另有文章报道，针对NKG2D配体MICA/MICB的抗体，可以阻断配体从细胞膜脱落，稳定膜型配体的数量，从而达到增强NK细胞的活性，增强肿瘤杀伤活性。上述研究表明，靶向NKG2D的抗体，可以发挥调控NK细胞活性的作用，提示NKG2D可以成为治疗肿瘤、炎症或自身免疫疾病的靶标。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了抗hNKG2D抗体及其应用。该抗体对hNKG2D蛋白具有高亲和性，可用于预防或治疗诸如癌症、炎症或自身免疫性疾病。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了特异性结合hNKG2D的抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2或HCDR3中的任意一项或多项；
(I).所述HCDR1序列包含如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的氨基酸序列；和/或
所述HCDR2序列包含如SEQ ID No.3或SEQ ID No.4所示的氨基酸序列；和/或
所述HCDR3序列包含如SEQ ID No.5或SEQ ID No.6所示的氨基酸序列；
或
(II).如(I)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(I)所述氨基酸序列功能相同的氨基酸序列；
或
(III).与(I)或(II)所述氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。
在本发明的一些具体实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2或LCDR3中的任意一项或多项，
(I).所述LCDR1序列包含如SEQ ID No.7或SEQ ID No.8所示的氨基酸序列；和/或
所述LCDR2序列包含如SEQ ID No.9或SEQ ID No.10所示的氨基酸序列；和/或
所述LCDR3序列包含如SEQ ID No.11或SEQ ID No.12所示的氨基酸序列；
或
(II).如(I)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(I)所述氨基酸序列功能相同的氨基酸序列；
或
(III).与(I)或(II)所述氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。
在本发明的一些具体实施方案中，所述抗原结合部分选自：Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段或单域抗体。
在本发明的一些具体实施方案中，所述抗体为鼠源抗体；
(I).所述鼠源抗体的重链可变区包含如SEQ ID No.13或SEQ ID No.14所示的氨基酸序列，且所述鼠源抗体的轻链可变区包含如SEQ ID No.15或SEQ ID No.16所示的氨基酸序列；
或
(II).与(I)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(I)所述氨基酸序列功能相同的氨基酸序列；
或
(III).与(I)或(II)所述氨基酸序列95％以上同一性的氨基酸序列。
在本发明的一些具体实施方案中，所述抗体为嵌合抗体；
(I).所述鼠源抗体的重链可变区包含如SEQ ID No.13或SEQ ID No.14所示的氨基酸序列，且所述鼠源抗体的轻链可变区包含如SEQ ID No.15或SEQ ID No.16所示的氨基酸序列；
或
(II).与(I)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(I)所述氨基酸序列功能相同的氨基酸序列；
或
(III).与(I)或(II)所述氨基酸序列95％以上同一性的氨基酸序列。
在本发明的一些具体实施方案中，所述取代、缺失或添加一个氨基酸中的多个为2个、3个、4个或5个。
本发明还提供了编码所述抗体或其抗原结合部分的核酸分子。
在本发明的一些具体实施方案中，所述核酸分子为鼠源抗体的核酸序列，包含但不限于如下：
(Ⅰ).编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID No.17或SEQ ID No.18所示；和/或
编码所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID No.19或SEQ ID No.20所示；
或
(Ⅱ).如(Ⅰ)所示的核苷酸序列的互补序列；或
(Ⅲ).与(Ⅰ)或(Ⅱ)的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(Ⅰ)或(Ⅱ)的核苷酸序列不同的序列；或
(IV).与(Ⅰ)或(Ⅱ)或(Ⅲ)所述序列至少有80％同一性的序列。
此外，本发明还提供了表达载体，包括所述的核酸分子。
本发明还提供了转化或转染所述表达载体的宿主细胞。
本发明还提供了所述抗体或其抗原结合部分的制备方法，包括：培养所述宿主细胞，诱导抗体的表达。
此外，本发明还提供了结合物，包含经化学标记或生物标记的所述抗体或其抗原结合部分。
基于上述研究，本发明还提供了所述抗体或其抗原结合部分或所述结合物与固体介质或半固体介质偶联制得的偶联物。
更重要的是，本发明还提供了药物组合物，包含所述抗体或其抗原结合部分。
在本发明的一些具体实施方案中，所述药物组合物还包含一种或多种活性成分，所述活性成分包括但不限于治疗肿瘤的药剂。
基于上述研究，本发明还提供了所述抗体或其抗原结合部分、所述核酸分子、所述表达载体、所述宿主细胞、所述结合物、所述偶联物和/或所述药物组合物在制备用于预防和/或治疗疾病的药物中的用途；
所述疾病包括肿瘤、炎症或自身免疫性疾病；
所述肿瘤选自以下中的一种或多种：膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、输卵管癌、胆囊癌、胃肠癌、头颈癌、血液癌、喉癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、间皮瘤、卵巢癌、原发性腹膜癌、唾液腺癌、肉瘤、胃癌、甲状腺癌、胰腺癌和前列腺癌；
所述炎症或自身免疫性疾病选自以下中的一种或多种：多发性硬化症、类风湿性关节炎、I型糖尿病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、重症肌无力、系统性红斑狼疮、硬皮病、强直性脊柱炎、移植物抗宿主病、器官移植、干燥综合征或自身免疫性肝炎。
更重要的是，本发明提供了药物，包括所述抗体或其抗原结合部分、所述结合物、所述偶联物和/或所述药物组合物以及药学上可接受的辅料。
本发明还提供了疾病的预防和/或治疗方法，给予所述药物；
所述疾病包括肿瘤、炎症或自身免疫性疾病；
所述肿瘤选自以下中的一种或多种：膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、输卵管癌、胆囊癌、胃肠癌、头颈癌、血液癌、喉癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、间皮瘤、卵巢癌、原发性腹膜癌、唾液腺癌、肉瘤、胃癌、甲状腺癌、胰腺癌和前列腺癌；
所述炎症或自身免疫性疾病选自以下中的一种或多种：多发性硬化症、类风湿性关节炎、I型糖尿病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、重症肌无力、系统性红斑狼疮、硬皮病、强直性脊柱炎、移植物抗宿主病、器官移植、干燥综合征或自身免疫性肝炎。
本发明还提供了所述抗体或其抗原结合部分、所述结合物和/或所述偶联物在制备检测hNKG2D的产品中的应用；所述产品包括检测试剂、检测试剂盒、检测芯片或检测装置。
更重要的是，本发明还提供了检测试剂、检测试剂盒、检测芯片或检测装置，包括所述抗体或其抗原结合部分、所述结合物和/或所述偶联物以及检测中可接受的助剂。
本发明还提供了疾病的诊断方法，以所述检测试剂、检测试剂盒、检测芯片或检测装置检测hNKG2D表达，根据hNKG2D的表达量判断是否患有疾病；
所述疾病包括肿瘤、炎症或自身免疫性疾病；
所述肿瘤选自以下中的一种或多种：膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、输卵管癌、胆囊癌、胃肠癌、头颈癌、血液癌、喉癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、间皮瘤、卵巢癌、原发性腹膜癌、唾液腺癌、肉瘤、胃癌、甲状腺癌、胰腺癌和前列腺癌；
所述炎症或自身免疫性疾病选自以下中的一种或多种：多发性硬化症、类风湿性关节炎、I型糖尿病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、重症肌无力、系统性红斑狼疮、硬皮病、强直性脊柱炎、移植物抗宿主病、器官移植、干燥综合征或自身免疫性肝炎。
本发明提供的抗体对hNKG2D蛋白具有高亲和性，可用于预防或治疗诸如癌症、炎症或自身免疫性疾病。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示本申请鼠源抗hNKG2D抗体(杂交瘤4A3和7C5分泌的抗体)与表达hNKG2D的HEK293细胞293T-hNKG2D的结合；
图2示4A3和7C5杂交瘤分泌的抗hNKG2D单克隆抗体与hNKG2D配体hMICA竞争结合；
图3示本申请嵌合抗hNKG2D抗体与过表达hNKG2D的HEK293细胞293T-hNKG2D的结合。
具体实施方式
本发明公开了抗hNKG2D抗体及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
定义
如本文所用的，术语抗体的“抗原结合部分”是指负责结合抗原的完整抗体分子的一部分或区段。抗原结合部分可以包含重链可变区(VH)、轻链可变区(VL)或上述两者。抗体的抗原结合部分可使用任何适合的标准技术从完整抗体分子制备，所述标准技术包括蛋白水解消化或重组遗传工程化技术等。抗原结合部分的非限制性实例包括：Fab片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、单链Fv(scFv)分子、单域抗体、dAb片段及由模拟抗体高变区的氨基酸残基组成的最小识别单元(例如分离的CDR)。术语“抗原结合部分”也包括其它工程化的分子，如双抗体、三抗体、四抗体及微型抗体等。例如，本文中所述Fd片段指由VH与CH1结构域组成的抗体片段；Fv片段由抗体的单臂中VL与VH结构域组成；dAb片段(Ward等人，Nature1989；341：544-546)由VH结构域组成。
本领域技术人员公知，互补决定区(CDR，通常有CDR1、CDR2及CDR3)是可变区中对抗体的亲和力和特异性影响最大的区域。VH或VL的CDR序列有两种常见的定义方式，即Kabat定义和Chothia定义，例如参见Kabat等人,“Sequences of Proteins ofImmunological Interest”，National Institutes of Health,Bethesda，MD.(1991)；Al-Lazikani等人，J Mol Biol 273:927-948(1997)；以及Martin等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:9268-9272(1989)。对于给定抗体的可变区序列，可以根据Kabat定义或者Chothia定义来确定VH和VL序列中CDR区序列。在本申请的实施方案中，利用Kabat定义CDR序列。在本文中，重链可变区的CDR1、CDR2及CDR3分别简称为HCDR1、HCDR2及HCDR3；轻链可变区的CDR1、CDR2及CDR3分别简称为LCDR1、LCDR2及LCDR3。
对于给定抗体的可变区序列，可以通过多种方式分析可变区序列中CDR区序列，例如可以利用在线软件Abysis确定(http://www.abysis.org/)。
如本文所用的，术语“特异性结合”，是指两个分子之间的非随机结合反应，例如抗体至抗原表位的结合，例如抗体以比其对非特异性抗原的亲和性大至少两倍的亲和性结合于特异性抗原的能力。然而应了解，抗体能够特异性结合两种或更多种与其序列相关的抗原。例如，本申请的抗体可特异性结合hNKG2D。
如本文所用的，术语“KD”欲指平衡解离常数，其系自kd对ka的比率(亦即kd/ka)获得且以摩尔浓度(M)表示。可使用业内充分确立的方法测定抗体的KD值。测定抗体的KD的优选方法系通过使用表面等离子共振，优选使用生物传感器系统(例如SPR系统)或流式细胞术及Scatchard分析。
如本文所用的，术语对IgG抗体的“高亲和力”系指抗体对于靶抗原具有10-8M或更小，优选10-9M或更小，且更优选10-10M或更小的KD。然而，对于其他抗体同型，“高亲和力”结合可能是变化的。举例而言，对于IgM同型的“高亲和力”结合系指抗体具有10-7M或更小，优选10-8M或更小的KD。
如本文所用的，术语染色指数，是在流式细胞术中应用到的，其计算公式为：染色指数＝(样品的中位荧光强度-阴性对照的中位荧光强度)/(2×阴性对照的标准差)。
如本文所用的，术语“癌症”指以体内异常细胞不受控生长为特点的一大类疾病。失调的细胞分裂可形成侵袭相邻组织且可经由淋巴系统或血流转移至身体的远处部分的恶性肿瘤或细胞。
本发明人筛选得到了两株杂交瘤细胞，其上清中的抗体能够与表达hNKG2D细胞结合，本申请提供了两种能特异性结合hNKG2D的新型抗hNKG2D抗体或其抗原结合部分。
本发明人还通过基因工程手段从鼠源抗hNKG2D抗体制备了嵌合抗体的形式，这些抗体能够与细胞表面表达的hNKG2D特异性结合，从而有效地诱导hNKG2D介导的免疫应答，并起到预防或治疗诸如肿瘤、炎症性疾病或自身免疫性疾病等疾病的作用。
在第一方面，本申请提供了特异性结合hNKG2D的抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3序列中的任意一项或多项，其中所述HCDR1序列为GYSFTSYW(SEQ ID NO:1)或GFTFSDYY(SEQ ID NO:2)；所述HCDR2序列包含氨基酸序列IHPSDSET(SEQ ID NO:3)或ISDGGRYT(SEQ ID NO:4)；和/或所述HCDR3序列包含氨基酸序列ARHYYGYVDFMDY(SEQ ID NO:5)或ARDGRLHDGYYGRFSY(SEQ ID NO:6)。
在优选的实施方案中，本文所述的抗体或其抗原结合部分的重链可变区包含SEQID NO:1或SEQ ID NO:2所示的HCDR1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示的HCDR2和SEQ IDNO:5或SEQ ID NO:6所示的HCDR3序列。
在一些实施方案中，本文所述的抗体或其抗原结合部分还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和LCDR3序列中的任意一项或多项，其中所述LCDR1序列为QEISGY(SEQ ID NO:7)或SSVSY(SEQ ID NO:8)；所述LCDR2序列为AAS(SEQ ID NO:9)或DTS(SEQ ID NO:10)；所述LCDR3序列为LQYVAYPWT(SEQ ID NO:11)或QQWISYPPT(SEQ ID NO:12)。
在优选的实施方案中，本文所述的抗体或其抗原结合部分的轻链可变区包含SEQID NO:7-8所示的LCDR1、SEQ ID NO:9-10所示的LCDR2和SEQ ID NO:11-12所示的LCDR3序列。
在优选的实施方案中，本文所述的抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1-2所示的HCDR1、SEQ ID NO:3-4所示的HCDR2和SEQ ID NO:5-6所示的HCDR3序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:7-8所示的LCDR1、SEQ ID NO:9-10所示的LCDR2和SEQ ID NO:11-12所示的LCDR3序列。
在一些更具体的实施方案中，本文公开的抗体可以为抗hNKG2D单克隆抗体。抗hNKG2D抗体类型与亚型可由本领域已知的任何方式确定。
在一些实施方案中，本文所述的抗体为鼠源抗体，优选地，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:13-14所示，和/或所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:15-16所示。
在优选的实施方案中，本文所述的鼠源抗体包含SEQ ID NO:13-14所示的重链可变区和SEQ ID NO:15-16所示的轻链可变区。
在一些实施方案中，本文所述的抗体为嵌合抗体。本文所述的嵌合抗体包含鼠源抗体的可变区(包括重链可变区VH和/或轻链可变区VL)和人抗体的恒定区。
在优选的实施方案中，本文所述的嵌合抗体包含鼠源抗体的可变区(包括重链可变区和轻链可变区)和人抗体的恒定区。
优选地，所述嵌合抗体包含SEQ ID NO:13-14所示的重链可变区和人源抗体重链恒定区IgG1，和/或SEQ ID NO:15-16所示的轻链可变区和人抗体轻(Kappa)链恒定区。
在优选的实施方案中，本文所述嵌合抗体包含SEQ ID NO:13-14所示的重链可变区和人抗体重链恒定区IgG1，和/或SEQ ID NO:15-16所示的轻链可变区和人抗体轻(Kappa)链恒定区。
本文所述的抗体还可以包含鼠或人抗体恒定区。鼠抗体恒定区包括鼠IgG1、IgG2a、IgG2b或IgG3的重链恒定区以及κ或λ型轻链恒定区等。人抗体恒定区包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区以及κ或λ型轻链恒定区等。
在一些实施方案中，本文所述的hNKG2D为灵长类NKG2D。优选地，本文所述的灵长类NKG2D选自hNKG2D或猴NKG2D。
在一些实施方案中，本文所述的抗原结合部分选自：Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段或单域抗体。
在第二方面，本申请提供了药物组合物，其包含第一方面所述的抗体或其抗原结合部分以及药学上可接受的载体。
药学上可接受的载体和稀释剂包括盐水、水性缓冲溶液、溶剂和/或分散介质。这种载体和稀释剂的使用是本领域熟知的。可用作药学上可接受的载体的材料的一些非限制性实例包括：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素和乙酸纤维素；(4)粉末状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)润滑剂，例如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠和滑石；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇(PEG)；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙基酒精；(20)pH缓冲溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酸酐；(22)填充剂，例如多肽和氨基酸；(23)血清组分，例如血清白蛋白、HDL和LDL；(22)C2-C12醇类，例如乙醇；以及(23)药物制剂中所用的其他无毒的相容物质。湿润剂、着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于药物制剂中。
在一些实施方案中，本文所述的药物组合物还包含一种或多种其他活性成分，例如用于治疗hNKG2D相关疾病如肿瘤、炎症性疾病或自身免疫性疾病等疾病的作用
在第三方面，本申请提供了核酸分子，其编码第一方面所述的抗体或其抗原结合部分。
在优选的实施方案中，本文所述的核酸可以是适合在宿主细胞中表达的密码子优化的核酸，编码重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID No.17或18所示；编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID No.19或20所示。例如根据密码子的简并性，其仍然编码同样的蛋白质。根据所用宿主细胞进行密码子优化的方法是本领域技术人员公知的。
在第四方面，本申请提供了表达载体，其包含第三方面所述的核酸分子。
可以使用任何合适的表达载体。例如，原核克隆载体包括来自大肠杆菌的质粒，如colEl、pCRl、pBR322、pMB9、pUC、pKSM和RP4。原核载体还包括噬菌体DNA如M13和其它丝状单链DNA噬菌体的衍生物。可用于酵母的载体的实例是2μg质粒。用于在哺乳动物细胞中表达的合适载体包括以下众所周知的衍生物：SV-40、腺病毒、逆转录病毒衍生的DNA序列以及衍生自功能性哺乳动物载体(如上述那些)和功能性质粒和噬菌体DNA的组合的穿梭载体。
另外的真核表达载体为本领域已知的(例如，P J.Southern&P.Berg,J.Mol.Appl.Genet,1:327-341(1982)；Subramani等人,Mol.Cell.Biol,1:854-864(1981)；Kaufinann&Sharp,"Amplification And Expression of Sequences Cotransfected witha Modular Dihydrofolate Reductase Complementary DNA Gene,"J.Mol.Biol,159:601-621(1982)；Kaufhiann&Sharp,Mol.Cell.Biol,159:601-664(1982)；Scahill等人,"Expression And Characterization Of The Product Of A Human Immune InterferonDNA Gene In Chinese Hamster Ovary Cells,"Proc.Nat'lAcad.Sci USA,80:4654-4659(1983)；Urlaub&Chasin,Proc.Nat'l Acad.Sci USA,77:4216-4220,(1980)，将其全部通过引用并入本文)。
可用于本申请的表达载体含有至少一个表达控制序列，其与待表达的DNA序列或片段可操作连接。将控制序列插入载体中以控制和调节克隆的DNA序列的表达。有用的表达控制序列的实例是lac系统，trp系统，tac系统，trc系统，噬菌体λ的主要操纵子和启动子区，fd外壳蛋白的控制区，酵母的糖酵解启动子，例如3-磷酸甘油酸激酶的启动子，酵母酸性磷酸酶的启动子，例如Pho5，酵母α-交配因子的启动子，以及来源于多瘤病毒、腺病毒、逆转录病毒和猿猴病毒的启动子，例如SV40的早期和晚期启动子和已知控制原核或真核细胞及其病毒或其组合的基因表达的其它序列。
在第五方面，本申请提供了宿主细胞，其包含三方面所述的核酸分子或第四方面所述的表达载体。
在一些实施方案中，本文所述的宿主细胞为哺乳动物细胞。哺乳动物细胞可以包括但不限于CHO细胞、NS0细胞、SP2/0细胞、HEK293细胞、COS细胞和PER.C6细胞。本领域技术人员能够根据需要选择适合的宿主细胞。
本文公开的抗hNKG2D单克隆抗体的制备方法可包括：在表达条件下培养宿主细胞，从而表达抗hNKG2D单克隆抗体；分离和纯化表达的抗hNKG2D单克隆抗体。利用上述方法，可以获得粗抗hNKG2D单克隆抗体。然后通过纯化方法，包括基于hNKG2D的亲和纯化、非变性凝胶纯化、HPLC或RP-HPLC、分子排阻、在蛋白A柱上纯化、或这些技术的任何组合，将抗hNKG2D单克隆抗体纯化为基本均一的物质，例如在SDS-PAGE电泳上为单一条带。
在第六方面，本申请提供了第一方面所述的抗体或其抗原结合部分、第二方面所述的药物组合物、第三方面所述的核酸分子，第四方面所述的表达载体、或者第五方面所述的宿主细胞在制备用于预防和/或治疗诸如肿瘤、炎症性疾病或自身免疫性疾病等相关疾病的药物中的用途。
在第七方面，本申请提供了预防和/或治疗诸如肿瘤、炎症性疾病或自身免疫性疾病等相关疾病的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的第一方面所述的抗体或其抗原结合部分、第二方面所述的药物组合物、第三方面所述的核酸分子，第四方面所述的表达载体、或者第五方面所述的宿主细胞。
在一些实施方案中，所述方法还包括施用预防和/或治疗诸如肿瘤、炎症性疾病或自身免疫性疾病等相关疾病如肿瘤的第二药剂。
在第八方面，本申请提供了第一方面所述的抗体或其抗原结合部分、第二方面所述的药物组合物、第三方面所述的核酸分子，第四方面所述的表达载体、或者第五方面所述的宿主细胞用于预防和/或治疗诸如肿瘤、炎症性疾病或自身免疫性疾病等相关疾病的用途。
在第六至第八方面的任一实施方案中，所述相关疾病为肿瘤、炎症性疾病或自身免疫性疾病等疾病。
在一些实施方案中，本文所述的肿瘤，可以是任何肿瘤，包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、输卵管癌、胆囊癌、胃肠癌、头颈癌、血液癌、喉癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、间皮瘤、卵巢癌、原发性腹膜癌、唾液腺癌、肉瘤、胃癌、甲状腺癌、胰腺癌和前列腺癌。所述炎症性疾病或自身免疫疾病包括但不限于多发性硬化症、类风湿性关节炎、I型糖尿病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、重症肌无力、系统性红斑狼疮、硬皮病、强直性脊柱炎、移植物抗宿主病、器官移植、干燥综合征或自身免疫性肝炎。
在任一方面的实施方案中，本文所述的方法、用途和药物组合物还可包括向个体施用第二药剂和/或治疗，例如作为联合疗法的一部分。第二药剂和/或治疗的非限制性实例可包括放射疗法、手术、吉西他滨、西司他丁、紫杉醇、卡铂、硼替佐米、AMG479、伏立诺他、利妥昔单抗、替莫唑胺、雷帕霉素、苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤(6-thioguanine)；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，诸如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春碱；长春地辛；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺肖林(novantrone)；替尼泊苷；依达曲沙(edatrexate)；正定霉素(daunomycin)；氨基蝶呤；希罗达(xeloda)；降低细胞增殖的PKC-α、Raf、H-Ras、EGFR(例如，埃罗替尼
Figure BDA0003386027840000111
)和VEGF-A的抑制剂以及上述任何的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
在第九方面，本申请提供了检测试剂或试剂盒，其包含第一方面所述的抗体或其抗原结合部分。
本文所述的抗体或其抗原结合部分可与可检测部分结合。示例性的可检测部分包括但不限于放射性同位素例如碘125、碘-131、铯-137、铱192和钴60、辣根过氧化物酶、异硫氰酸荧光素、生物素、碱性磷酸酶、化学发光剂如鲁米诺类等。本领域技术人员可以根据需要选择适合的可检测部分与本申请的抗体或其抗原结合部分结合，从而实现不同的检测目的。
本说明书和权利要求书中，词语“包括”、“包含”和“含有”意指“包括但不限于”，且并非意图排除其他部分、添加物、组分、或步骤。
应该理解，在本申请的特定方面、实施方案或实施例中描述的特征、特性、组分或步骤，可适用于本文所描述的任何其他的方面、实施方案或实施例，除非与之矛盾。
本发明公开了特异性结合哺乳动物(人、灵长类动物等)NKG2D的抗体，本发明提供此类蛋白质在治疗、筛选和检测等方面的应用，如在癌症治疗中的用途。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明的范围内。本领域技术人员能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明。
以下实施例用于说明本申请，但不用来限制本申请的范围。在不背离本申请精神和实质的情况下，对本申请方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本申请的范围。
若未特别指明，实施例中所用的化学试剂均为常规市售试剂，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例不包括对传统方法的详细描述，如那些用于构建载体和质粒的方法，将编码蛋白的基因插入到载体和质粒的方法或将质粒引入宿主细胞的方法。这样的方法对于本领域具有普通技术的人员来说是众所周知的，并且在许多出版物中都有所描述，例如参见Sambrook,J.,Fritsch,EF.and Maniais，T.(1989)Molecular Cloning：A LaboratoryManual，2nd edition，Cold spring Harbor Laboratory Press。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1.hNKG2D高表达细胞株的构建
通过稳定细胞株构建平台构建hNKG2D/DAP10的高表达细胞株，具体步骤如下：
质粒pcDNA3.1-Hygro-hNKG2D和pcDNA3.1-G418-DAP10的构建：分别以hNKG2DcDNA(UniProtKB/Swiss-Prot:P26718.1，Pro72-Val216)和DAP10 cDNA(GenBank:AAH35931.1，Met1-Gly93)(通用生物系统(安徽)有限公司合成)为模板，用引物扩增得到两种约800bp的小片段，胶回收；将pcDNA3.1-Hygro和pcDNA3.1-G418质粒分别用NheI/XbaI酶切，胶回收大片段7450bp；将上述所得的两种小片段分别连接入胶回收的用NheI/XbaI酶切的pcDNA3.1-Hygro和pcDNA3.1-G418质粒大片段，挑阳性克隆送测序，测序正确的质粒分别命名为pcDNA3.1-Hygro-hNKG2D和pcDNA3.1-G418-DAP10。
将293T细胞(协和细胞库)接种于两个T25培养瓶，每个培养瓶接种的细胞数为2×106。第二天将293T细胞培养液更换为4mL Opti-MEM(Thermofisher ScientificCat31985070)。将分别克隆有人hNKG2D和人DAP10的质粒pcDNA3.1-Hygro-hNKG2D和pcDNA3.1-G418-DAP10各5μg分别加入到Opti-MEM中，终体积为500μL，另准备500μL Opti-MEM，并在其中加入7μL转染试剂PEI(3μg/mL)，将二者混匀并室温静置20min后，加入到上述培养好的4ml 293T细胞中。第三天将细胞培养液更换为5mL DMEM高糖培养基。第四天加入100μg/mLHygro和200μg/mLG418进行筛选。2-3天后细胞大量死亡，更换新鲜培养基至细胞稳定生长后，进行单克隆筛选，扩增培养并冻存保种。将构建的稳定表达目的基因的细胞株命名为293T-hNKG2D细胞。
实施例2.产生抗hNKG2D抗体的杂交瘤的制备
1.取8-10周大的Balb/c小鼠，皮下注射hNKG2D蛋白(50μg/剂/只)。hNKG2D蛋白胞外区(DNA序列为UniProtKB/Swiss-Prot:P26718.1，蛋白序列为胞外区Phe78-Val 216，C末端含有His标签)，通过SDS-PAGE验证其分子量在16.1kDa。在3-8周内，重复此剂量5-7次。进行融合前4天，给予小鼠腹腔注射hNKG2D蛋白，连续3天。
2.进行融合前1天，取普通昆明小鼠腹腔内巨噬细胞作为滋养层，接种于96孔板中。
3.取来自经免疫接种的小鼠的脾与非分泌性骨髓瘤SP2/0细胞系融合，将细胞加入到提前铺有滋养层的96孔板中，对融合的细胞进行HAT选择(Galfre and Milstein,Methods Enzymol 1981；73：3-46)。
4.回收一组均分泌抗hNKG2D特异性抗体的杂交瘤细胞。初次筛选是利用酶联免疫分析法(ELISA)确定杂交瘤分泌的抗hNKG2D抗体的表达情况。表1显示了获得5个候选杂交瘤上清的检测结果，克隆号为1E8,4A3,9D6,9D9,7C5。
表1抗hNKG2D杂交瘤初筛结果(ELISA)
Figure BDA0003386027840000121
Figure BDA0003386027840000131
5.抗hNKG2D杂交瘤复筛(FACS)
收集293T-hNKG2D细胞，用FACS缓冲液洗涤一次，以2-5×105个/孔细胞铺到96孔深孔板，每孔加入50μL杂交瘤上清，孵育1个小时。选用免疫接种的小鼠血清作为阳性对照抗体，FACS缓冲液洗涤两次。加入APC抗小鼠IgG Fc二抗(Biolegend)，孵育1小时后FACS缓冲液洗涤两次，上流式细胞仪检测。
结果如表2所示，获得5个候选单克隆抗体，分别标记为1E8、4A3，9D9，7E10，7C5。优选与293T-hNKG2D结合活性最强(染色质数最高)的两株单克隆4A3和7C5。
表2抗hNKG2D杂交瘤复筛结果(FACS)
初始杂交瘤克隆号 染色指数
1E8 0.00
4A3 7.96
9D6 0.00
9D9 0.02
7C5 2.99
实施例3.4A3和7C5杂交瘤分泌的抗hNKG2D单克隆抗体和hNKG2D阳性细胞的结合活性
从4A3和7C5杂交瘤上清中，使用亲和纯化方法纯化获得相应抗体。取含有293T-hNKG2D细胞的T75细胞培养瓶各一瓶，FACS缓冲液洗涤一次，用FACS缓冲液重悬计数，将2×105个细胞分别与1μg的抗体混合于100μL的FACS缓冲液体系，室温孵育1小时，FACS缓冲液洗涤两次。加入APC抗小鼠IgG Fc二抗，孵育1小时，FACS缓冲液洗涤两次，上流式细胞仪检测，结果见表3和图1。表3的结果显示，抗hNKG2D单克隆抗体4A3、7C5和阳性对照抗体(APC标记的抗hNKG2D抗体，购自Biolegend)均与293T-hNKG2D细胞有结合活性，染色指数分别为5.53、2.11和4.23，表明我们筛选的阳性克隆4A3和7C5与表达有NKG2D的细胞具有结合活性。
表3抗hNKG2D抗体与hNKG2D阳性细胞结合活性
Figure BDA0003386027840000132
Figure BDA0003386027840000141
实施例4.4A3和7C5杂交瘤分泌的抗hNKG2D单克隆抗体的配体竞争结合实验
收集293T-hNKG2D细胞，用PBS缓冲液洗涤一次，将2×105个细胞分别与1μg的抗体4A3或7C5和1μg配体hMICA-hFc(human Fc融合蛋白)混合于100μL的FACS缓冲液体系，设置空白、二抗对照和单配体MICA对照组，孵育1h。FACS缓冲液洗涤两次，加入APC抗人IgG Fc二抗(Biolegend)，孵育1小时后上流式细胞仪检测。
结果如表4和图2所示，当hMICA-hFc单独与293T-hNKG2D细胞孵育，检测到结合活性，染色指数为3.22。当抗体4A3或7C5与hMICA-hFc同时与293T-hNKG2D细胞孵育，hMICA-hFc不能与293T-hNKG2D细胞结合，染色指数为0.21或0.04，表明抗体4A3和7C5能特异阻断配体MICA蛋白与293T-hNKG2D的结合，证明该两种抗hNKG2D的抗体是阻断型抗体。
表4抗hNKG2D抗体与hNKG2D阳性细胞结合活性
初始杂交瘤克隆号 染色指数
空白对照 -0.02
二抗对照 0.00
hMICA-hFc组 3.22
抗体4A3与hMICA-hFc混合组 0.21
抗体7C5与hMICA-hFc混合组 0.04
实施例5.抗hNKG2D嵌合抗体和hNKG2D阳性细胞的结合活性(FACS检测)
抗hNKG2D嵌合抗体的制备:
获取4A3和7C5杂交瘤细胞cDNA，用本实验室保存的抗体引物通过PCR扩增测序，最终获得鼠源抗hNKG2D抗体4A3和7C5编码重链可变区和轻链可变区的核苷酸序列。将上述可变区序列的PCR扩增产物通过同源重组无缝克隆方法连入表达载体，重链可变区连入pQKX1LALA，轻链可变区连入pQKX2，获得重链表达载体pQK ChimAb 4A3-NKG2D-H、pQKChimAb 4A3-NKG2D-L、pQK ChimAb 4A3-NKG2D-H和pQK ChimAb 4A3-NKG2D-L。
将FreeStyleTM293-F细胞(Thermo Fisher)稀释到1.5×106个细胞/mL，终体积为200ml，37℃摇床培养24h。用转染体积10％的新鲜培养基稀释质粒pQK Ab 4A3-NKG2D-H和pQK Ab 4A3-NKG2D-L，按转染细胞体积计算，至浓度为1μg/mL。向稀释后质粒中按细胞体积的1/1000加入3mg/mL的PEI 200μl，立即涡旋震荡10秒，室温放置15分钟，将质粒/PEI混合物滴加到细胞培养基中，边滴加边轻轻摇动培养瓶，放入摇床培养，7天后收集培养上清，0.4μm的滤膜过滤后，使用ProA纯化柱从培养上清中捕获抗体，流速设定为3ml/min，用5个柱体积的20mM PB+150mM Nacl,PH7.4平衡液平衡纯化柱，柱平衡稳定后上样，上样结束选择20mM PB+150mM Nacl,PH7.4淋洗，淋洗结束使用50mM柠檬酸pH3.0洗脱液进行洗脱，收集用1M Tris-HCl,pH9.0中和洗脱的鼠源抗体Chim-Ab-NKG2D-4A3(其重链和轻链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:19所示),用同样的方法获得抗NKG2D嵌合抗体Chim-Ab-NKG2D-7C5(其重链和轻链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:20所示)。
收集一个T75细胞培养瓶的293T-hNKG2D细胞，FACS缓冲液洗涤一次，用FACS缓冲液重悬计数，将2×105个细胞分别与1μg的抗体混合于100μL的FACS缓冲液体系，室温孵育1小时。
FACS缓冲液洗涤两次，加入APC抗人IgG Fc二抗(Biolegend)，孵育1小时，FACS缓冲液洗涤两次，上流式细胞仪检测，结果见表5和图3。表5结果显示，抗hNKG2D嵌合抗体Chim-Ab-NKG2D-4A3和Chim-Ab-NKG2D-7C5均与293T-hNKG2D细胞特异性结合，染色指数分别为3.77和3.71，证明嵌合型的抗体对表达NKG2D的细胞仍具有结合活性。
表5抗hNKG2D嵌合抗体和hNKG2D阳性细胞结合活性
样品 染色指数
空白对照 0.00
阳性对照 4.23
二抗对照 0.00
Chim-Ab-NKG2D-4A3 3.77
Chim-Ab-NKG2D-7C5 3.71
实施例6.抗体的动力学参数测定
使用Fortebio分子相互作用仪测定hNKG2D与抗hNKG2D嵌合抗体(4A3和7C5)结合的动力学参数。用ProA传感器捕获固定各单克隆抗体，在PBS中平衡后，与梯度稀释的抗原hNKG2D结合。参数检测结果如表6所示，所有候选抗体的KD值均1nM以下，证明抗体4A3和7C5与hNKG2D具有较高亲和力。
表6 hNKG2D与抗hNKG2D嵌合抗体结合的动力学参数
抗体编号 KD(M) KD误差 kon(1/Ms) Kon误差 kdis(1/s) R^2
4A3 <1.0E-12 3.52E-09 9.40E+03 2.47E+02 <1.0E-07 0.9938
7C5 <1.0E-12 3.44E-09 1.01E+04 2.77E+02 <1.0E-07 0.9925
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 北京免疫方舟医药科技有限公司
<120> 抗hNKG2D抗体及其应用
<130> MP21001078
<160> 20
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 3
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr
1 5
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Ile Ser Asp Gly Gly Arg Tyr Thr
1 5
<210> 5
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Ala Arg His Tyr Tyr Gly Tyr Val Asp Phe Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 6
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Ala Arg Asp Gly Arg Leu His Asp Gly Tyr Tyr Gly Arg Phe Ser Tyr
1 5 10 15
<210> 7
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Gln Glu Ile Ser Gly Tyr
1 5
<210> 8
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Ser Ser Val Ser Tyr
1 5
<210> 9
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Ala Ala Ser
1
<210> 10
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Asp Thr Ser
1
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Leu Gln Tyr Val Ala Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Gln Gln Trp Ile Ser Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 13
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Tyr Tyr Gly Tyr Val Asp Phe Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asp Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Arg Leu His Asp Gly Tyr Tyr Gly Arg Phe Ser Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 15
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Val Ala Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg
100 105
<210> 16
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
Glu Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ile Ser Tyr Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 17
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
caggtgcagc tgcagcagcc tggggctgag ctggtgaggc ctggagcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggcta ctccttcacc agttactgga tgaactgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggcatg attcatcctt ccgatagtga aactaggtta 180
aatcagaagt tcaaggacaa ggccacattg actgtagaca aatcctccag tacagtctac 240
atgcaactca gcagcccgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagacattac 300
tacggctacg tggattttat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360
<210> 18
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
gaggtccagc ttgtcgagtc agggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gactattata tgtattgggt tcgccagact 120
ccggaaaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtgatg gtggtcgtta cacctactat 180
tcagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cgacctgtac 240
ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgc aagagatggg 300
aggctccatg atggttacta cgggaggttt tcttactggg gccaagggac tctggtcact 360
gtctctgca 369
<210> 19
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
gatattcaga tgacccagag tccatcctcc ttatctgcct ctctgggaga aagagtcagt 60
ctcacttgtc gggcaagtca ggaaattagt ggttacttaa gctggcttca gcaaaaacca 120
gatgggacta ttaaacgcct gatctacgcc gcatccactt tagattctgg tgtcccaaaa 180
aggttcagtg gcagtaggtc tgggtcagat tattctctca ccatcagcag ccttgagtct 240
gaagattttg tagactatta ctgtctacaa tatgttgctt atccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa ccgg 324
<210> 20
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
gagctccaga tgacacagtc tccagcaacc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60
atgacctgca gtgccagctc aagtgtcagt tacatgtatt ggtaccagca gaagccagga 120
tcctccccca gactcctgat ttatgacaca tccaacctgg cttctggagt ccctgttcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagccgact ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg attagttacc cacccacgtt cggctcgggg 300
acaaagttgg aaataaaa 318

Claims (10)

1.特异性结合hNKG2D的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，其包含重链可变区，所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2或HCDR3中的任意一项或多项；
(I).所述HCDR1序列包含如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的氨基酸序列；和/或
所述HCDR2序列包含如SEQ ID No.3或SEQ ID No.4所示的氨基酸序列；和/或
所述HCDR3序列包含如SEQ ID No.5或SEQ ID No.6所示的氨基酸序列；
或
(II).如(I)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加1个、2个、3个、4个或5个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(I)所述氨基酸序列功能相同的氨基酸序列；
或
(III).与(I)或(II)所述氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2或LCDR3中的任意一项或多项，
(I).所述LCDR1序列包含如SEQ ID No.7或SEQ ID No.8所示的氨基酸序列；和/或
所述LCDR2序列包含如SEQ ID No.9或SEQ ID No.10所示的氨基酸序列；和/或
所述LCDR3序列包含如SEQ ID No.11或SEQ ID No.12所示的氨基酸序列；
或
(II).如(I)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(I)所述氨基酸序列功能相同的氨基酸序列；
或
(III).与(I)或(II)所述氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。
3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述抗原结合部分选自：Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段或单域抗体。
4.编码如权利要求1～3任一项所述的抗体或其抗原结合部分的核酸分子。
5.表达载体，其特征在于，包括如权利要求4所述的核酸分子。
6.宿主细胞，转染或转化有如权利要求5所述的表达载体。
7.药物或药物组合物，其特征在于，包含如权利要求1～3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分。
8.如权利要求1～3任一项所述的抗体或其抗原结合部分、如权利要求4所述的核酸分子、如权利要求5所述的表达载体、如权利要求6所述的宿主细胞和/或如权利要求7所述的药物或药物组合物在制备用于预防和/或治疗疾病的药物中的用途；
所述疾病包括肿瘤、炎症或自身免疫性疾病；
所述肿瘤选自以下中的一种或多种：膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、输卵管癌、胆囊癌、胃肠癌、头颈癌、血液癌、喉癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、间皮瘤、卵巢癌、原发性腹膜癌、唾液腺癌、肉瘤、胃癌、甲状腺癌、胰腺癌和前列腺癌；
所述炎症或自身免疫性疾病选自以下中的一种或多种：多发性硬化症、类风湿性关节炎、I型糖尿病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、重症肌无力、系统性红斑狼疮、硬皮病、强直性脊柱炎、移植物抗宿主病、器官移植、干燥综合征或自身免疫性肝炎。
9.如权利要求1～3任一项所述的抗体或其抗原结合部分在制备检测hNKG2D的产品中的应用；
所述产品包括检测试剂、检测试剂盒、检测芯片或检测装置。
10.检测试剂、检测试剂盒、检测芯片或检测装置，包括如权利要求1～3任一项所述的抗体或其抗原结合部分以及检测中可接受的助剂。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010017103A2 (en) * 2008-08-04 2010-02-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Servic Fully human anti-human nkg2d monoclonal antibodies
CN110003338A (zh) * 2019-04-16 2019-07-12 北京免疫方舟医药科技有限公司 抗ox40抗体及其应用
JP2019528285A (ja) * 2016-08-19 2019-10-10 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｎｋｇ２ｄ抗体を用いたクローン病の治療方法
CN110698561A (zh) * 2007-12-14 2020-01-17 诺沃—诺迪斯克有限公司 抗人nkg2d抗体及其用途
CN112368012A (zh) * 2018-02-08 2021-02-12 蜻蜓疗法股份有限公司 靶向nkg2d受体的抗体可变结构域
CN117396220A (zh) * 2021-05-04 2024-01-12 免疫里森公司 抗nkg2d抗体及其用途
WO2024035662A2 (en) * 2022-08-10 2024-02-15 Merck Sharp & Dohme Llc Proteins binding nkg2d, cd16, and ceacam5

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110698561A (zh) * 2007-12-14 2020-01-17 诺沃—诺迪斯克有限公司 抗人nkg2d抗体及其用途
WO2010017103A2 (en) * 2008-08-04 2010-02-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Servic Fully human anti-human nkg2d monoclonal antibodies
JP2019528285A (ja) * 2016-08-19 2019-10-10 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｎｋｇ２ｄ抗体を用いたクローン病の治療方法
CN112368012A (zh) * 2018-02-08 2021-02-12 蜻蜓疗法股份有限公司 靶向nkg2d受体的抗体可变结构域
CN110003338A (zh) * 2019-04-16 2019-07-12 北京免疫方舟医药科技有限公司 抗ox40抗体及其应用
CN117396220A (zh) * 2021-05-04 2024-01-12 免疫里森公司 抗nkg2d抗体及其用途
WO2024035662A2 (en) * 2022-08-10 2024-02-15 Merck Sharp & Dohme Llc Proteins binding nkg2d, cd16, and ceacam5

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALLEZ 等: "Anti-NKG2D monoclonal antibody (NNC0142-0002) in active Crohn’s disease: a randomised controlled trial", GUT, no. 0, 3 August 2016 (2016-08-03), pages 1 - 8 *
STEIGERWALD 等: "Human IgG1 antibodies antagonizing activating receptor NKG2D on natural killer cells", MABS, vol. 1, no. 2, 30 April 2009 (2009-04-30), pages 115 - 127, XP009126762 *
刘映霞 等: "抗NKG2D 多克隆抗体抑制NK 和LAK 细胞细胞毒效应的研究", 细胞与分子免疫学杂志, vol. 19, no. 3, 30 June 2003 (2003-06-30), pages 257 - 265 *

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