CN102898492B

CN102898492B - 一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺

Info

Publication number: CN102898492B
Application number: CN201210412877.2A
Authority: CN
Inventors: 刘代成
Original assignee: Shandong Normal University
Current assignee: Shandong Normal University
Priority date: 2012-10-25
Filing date: 2012-10-25
Publication date: 2014-10-15
Anticipated expiration: 2032-10-25
Also published as: CN102898492A

Abstract

本发明公开了一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺，其特征在于：步骤如下：（1）向南极磷虾虾油中加入乙醇，加热回流，趁热过滤，滤液冻放8～14h，倒出上清液得沉淀；（2）向沉淀中加入乙醇，加热回流，冻放8～14h，倒出上清液得沉淀；（3）向沉淀中加入乙醇洗涤两次，冻放8～14h，倒出上清得白色絮状物沉淀；（4）向白色絮状物沉淀中加入乙醇，水浴加热至40～50℃后，停止加热，缓慢冷却、挥发，得白色胆固醇结晶。所述南极磷虾虾油是通过疏水性溶剂或丙酮提取得到的。本发明的工艺成功地从南极磷虾虾油中提取得到了胆固醇，所得到的胆固醇纯度高，达98.2～99％，为开发相关的南极磷虾虾油及胆固醇产品做出了贡献。

Description

一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺

技术领域

本发明涉及一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺。

背景技术

胆固醇是细胞膜的成分，是体内固醇类激素、维生素D及胆酸的前体。是药物制剂良好的表面活性剂。也是天然牛黄和人工牛黄的重要成分，具有重要药用价值。胆固醇因为是激素类合成的原料，价格昂贵，每公斤600元以上。并可大量出口创汇。胆固醇加入牙膏，有润滑、增白、止血的作用，胆固醇也常用于化妆品中。胆固醇因不溶于水，在血液中沉下粘附血管壁，堵塞血管造成心脏病、脑血管等各种疾病。胆固醇在人体内处于较高水平对人体是不利的。

南极磷虾资源丰富，目前，世界各国对南极磷虾的利用较少，主要是加工成南极磷虾虾油，有的则作为饵料或饲料，日本则将其作为料理添加。现有的提取南极磷虾虾油的方法一般是用疏水性溶剂如正己烷、石油醚等或丙酮提取，其提取得到的虾油中含有较多的胆固醇，怎样降低虾油中胆固醇的含量、将胆固醇从虾油中分离出来，使其得到更为充分的利用，是当前急需解决的问题。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺，步骤如下：

（1）向南极磷虾虾油中加入8～12倍（指质量体积倍数，即1g物料加入8～12ml液体，下同）的85～95％乙醇（体积分数），加热（83～90℃）回流0.5～1h，趁热过滤，滤液在-20℃～-26℃下冻放8～14h，倒出上清液得沉淀；

（2）向步骤（1）得到的沉淀中加入6～10倍的90～95％乙醇（体积分数），该乙醇液中含H₂SO₄4～6％（体积分数），加热（83～87℃）回流6～8h，加水调乙醇浓度至75～85％（体积分数），然后置-20℃～-26℃下冻放8～14h，倒出上清液得沉淀；

（3）向步骤（2）得到的沉淀中加入8～12倍的75～85％乙醇（体积分数），置-20℃～-26℃下冻放8～14h，倒出上清液得沉淀，向沉淀中再次加入8～12倍的75～85％乙醇（体积分数），置-20℃～-26℃下冻放8～14h，倒出上清得白色絮状物沉淀；

（4）向步骤（3）得到的白色絮状物沉淀中加入4～8倍的75～85％乙醇（体积分数），水浴加热至40～50℃后，停止加热，缓慢冷却、挥发，得白色胆固醇结晶，胆固醇纯度为98.2～99％。

所述南极磷虾虾油是通过疏水性溶剂（正己烷、石油醚）或丙酮提取得到的：取100g干南极磷虾（含水量約为8%～10%），加入到500～600ml疏水性溶剂或丙酮中，20～35℃下提取干南极磷虾3次，每次提取1h，每提取一次，过滤将干南极磷虾滤出；合并提取液，在45～55℃，-0.07～0.09Mpa下旋转蒸发除去疏水性溶剂或丙酮，即得虾油。

本发明的工艺成功地从南极磷虾虾油中提取得到了胆固醇，所得到的胆固醇纯度高，达98.2～99％，为开发相关的南极磷虾虾油及胆固醇产品做出了贡献。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1从南极磷虾虾油中提取胆固醇

步骤为：

（1）向南极磷虾虾油（5g）中加入60ml 95％乙醇（体积分数），加热（83℃）回流1h，趁热过滤，滤液在-26℃下冻放过夜（12h）,倒出上清得沉淀4g（因操作的原因，并不能将上清液全部倒出，故沉淀中含部分液体，下同）。

所述南极磷虾虾油是通过正己烷提取得到的：取100g干南极磷虾，加入到550ml正己烷中，25℃下提取干南极磷虾3次，每次提取1h，每提取一次，过滤将干南极磷虾滤出；合并提取液，在50℃，-0.08Mpa下旋转蒸发除去正己烷，即得虾油。

（2）向步骤（1）所得沉淀中加入40ml 95％乙醇，该乙醇溶液中含2.4mlH₂SO₄，加热（温度85℃）回流8h，加水调乙醇浓度至85％，置-26℃下冻存过夜（12h），倒出上清得白色沉淀3g（含部分液体）。

（3）向步骤（2）所得沉淀中加入36ml 85％乙醇洗2次，每次加入乙醇后均置-26℃下过夜（12h），倒出上清得白色絮状沉淀1.5g（含部分液体）。

（4）向步骤（3）所得白色絮状物沉淀中加入12ml的85％乙醇溶液，加热使样品液体温度达50℃，缓慢冷却,挥发,得白色胆固醇结晶0.3g，经检测，胆固醇纯度为98.6％。

胆固醇含量检测采用如下方法：

A硫酸铁铵显色剂：溶解4.463g硫酸铁铵[FeNH₄(SO₄)₂·12H₂O]于100ml 85％磷酸中，从中取80ml用浓H₂SO₄稀释至100ml。

B标准曲线绘制：准确称取100mg胆固醇标准品，溶于冰醋酸中，稀释至100ml，即胆固醇1mg/ml（作为贮备液）；从中取10ml，用冰醋酸稀释至100ml，即100μg胆固醇/ml标准使用液；

吸取胆固醇标准使用液0.0、0.4、0.8、1.0、1.2ml，置于25ml带塞比色管中；在各管中加入冰醋酸，使总体积达4ml，再加入2ml硫酸铁铵显色剂，立即摇匀，在30～60min内，于分光光度计560nm波长处测定光密度，绘制标准曲线。

C样品测定：称取制备样品100mg，加入石油醚5ml溶解，然后将石油醚溶液移入另一干燥试管内，在65℃水浴中通氮气吹干；加入4ml冰醋酸溶解残渣，加入2ml硫酸铁铵显色剂，混匀，30min后在分光光度计560nm波长处比色测定，按测得光密度，从标准曲线查得相应的胆固醇含量，进而计算出单位样品中胆固醇的含量。

实施例2从南极磷虾虾油中提取胆固醇

步骤为：

（1）向石油醚提取的南极磷虾虾油（提取方法除所用提取液为石油醚外，其它同实施例1）（5g）中加入40ml的85％乙醇，加热（90℃）回流0.5h，趁热过滤，滤液在-20℃下冻放过夜（12h），倒出上清液得沉淀4g（含部分液体）。

（2）向步骤（1）所得沉淀中加入24ml的95％乙醇（体积分数），该乙醇中含有0.96mlH₂SO₄，加热（87℃）回流6h，加水调乙醇浓度至75％，置-20℃下过夜（12h），倒出上清液得白色沉淀3g（含部分液体）。

（3）向步骤（2）所得沉淀中加入24ml的75％乙醇（体积分数）洗2次，每次加入乙醇后均置-20℃下过夜（12h），倒出上清得白色絮状沉淀1.2g（含部分液体）。

（4）向步骤（3）所得白色絮状沉淀中加入6ml的75％乙醇（体积分数），加热使样品液体温度达40℃，缓慢冷却,挥发,得胆固醇结晶0.35g，经检测，胆固醇纯度为98.2％。

实施例3从南极磷虾虾油中提取胆固醇

步骤为：

（1）向丙酮提取的南极磷虾虾油（提取方法除所用提取液为丙酮外，其它同实施例1）（5g）中加入50ml的90%乙醇，加热（87℃）回流45分钟，趁热过滤，滤液在-23℃下冻放过夜（12h），倒出上清得沉淀4g（含部分液体）。

（2）向步骤（1）所得沉淀中加入32ml的95％乙醇（体积分数），该乙醇溶液中含有1.6mlH2SO4，加热（83℃）回流7h，加水调乙醇浓度至80％，置-23℃下过夜（12h），倒出上清液得白色沉淀3g（含部分液体）。

（3）向步骤（2）所得沉淀中加入30ml的80％乙醇洗2次，每次加入乙醇后均置-23℃下过夜（12h），倒出上清得白色絮状物1.3g（含部分液体）。

（4）向步骤（3）所得白色絮状物中加入7.8ml的80％乙醇（体积分数），加热使样品液体温度为45℃，缓慢冷却，挥发，得白色胆固醇结晶0.32g，经检测，胆固醇纯度为99％。

Claims

1.一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺，其特征在于：步骤如下：

(1)向南极磷虾虾油中加入8～12倍的85～95％乙醇，加热回流0.5～1h，趁热过滤，滤液在-20℃～-26℃下冻放8～14h，倒出上清液得沉淀；

(2)向步骤(1)得到的沉淀中加入6～10倍的90～95％乙醇，该乙醇液中含H₂SO₄4～6％，加热回流6～8h，加水调乙醇浓度至75～85％，然后置-20℃～-26℃下冻放8～14h，倒出上清液得沉淀；

(3)向步骤(2)得到的沉淀中加入8～12倍的75～85％乙醇，置-20℃～-26℃下冻放8～14h，倒出上清液得沉淀，向沉淀中再次加入8～12倍的75～85％乙醇，置-20℃～-26℃下冻放8～14h，倒出上清得白色絮状物沉淀；

(4)向步骤(3)得到的白色絮状物沉淀中加入4～8倍的75～85％乙醇，水浴加热至40～50℃后，停止加热，缓慢冷却、挥发，得白色胆固醇结晶；

步骤(1)至(4)中，乙醇的加入倍数是指质量体积倍数，g/mL；

步骤(1)至(4)中，乙醇的浓度是指体积分数；步骤(2)中，H₂SO₄的浓度是指体积分数。

2.根据权利要求1所述的一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺，其特征在于：所述南极磷虾虾油是通过疏水性溶剂或丙酮提取得到的：取100g干南极磷虾，加入到500～600ml疏水性溶剂或丙酮中，20～35℃下提取干南极磷虾3次，每次提取1h，每提取一次，过滤将干南极磷虾滤出；合并提取液，在45～55℃，-0.07～0.09Mpa下旋转蒸发除去疏水性溶剂或丙酮，即得虾油。

3.根据权利要求2所述的一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺，其特征在于：所述疏水性溶剂为正己烷或石油醚。