CN102274185A - 抗肿瘤pH敏感脂质体、其冻干粉针制剂及它们的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种抗肿瘤pH敏感脂质体、其冻干粉针制剂及它们的制备方法，抗肿瘤pH敏感脂质体，主要由下列重量份比的原料组成：抗肿瘤活性药成分1份、磷脂1-20份、胆固醇1-20份和油酸0.5-10份，所述的磷脂为磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、氢化磷脂中的一种。本发明利用磷脂酰乙醇胺作磷脂，这种磷脂在酸性环境下极性基团发生质子化，从而引起脂质体结构的变化，通过和油酸的协同作用，大大提高了pH敏感性，同时具有较好缓释效果。

Description

抗肿瘤pH敏感脂质体、其冻干粉针制剂及它们的制备方法

技术领域：

本发明涉及一种抗肿瘤pH敏感脂质体，特别涉及酒石酸长春瑞滨pH敏感脂质体、其冻干粉针制剂及它们的制备方法。

背景技术：

酒石酸长春瑞滨(Vinorelbine Bitartrate，VB)，是一种半合成的长春花生物碱，其作用机理与长春花碱(VLB)和长春新碱(VCR)基本相同，主要通过阻滞细胞有丝分裂过程中的微管形成，使细胞分裂停滞于有丝分裂中期，为细胞周期特异性药物。和其他长春碱一样，酒石酸长春瑞滨也可以抑制氨基酸前后的循环和谷胱甘肽的代谢；依赖钙调素的Ca-ATP酶的活性；细胞的生物氧化作用及核酸与油脂的生物合成；临床主要用于非小细胞肺癌、转移性乳腺癌、晚期卵巢癌、恶性淋巴瘤等。但是该药物经静脉注射后，毒副作用比较大，常见的为骨髓抑制、胃肠道毒性及脱发等，除此之外，长期用药会出现下肢无力。这些毒副作用使长春瑞滨的临床应用受到了很大限制。急需寻求一种有效的方法，可以在不增加药物剂量的情况下，延长药物的半衰期，提高药物的抗肿瘤效果，减少药物的毒副作用，增强药物的临床应用性。

脂质体是一种定向药物载体，属于靶向给药系统的一种新剂型。它可以将药物由巨噬系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

中国专利CN1839800A公开了一种“重酒石酸长春瑞滨脂质体及其冻干粉针与制备方法”，重酒石酸长春瑞滨的脂质体含有以下成分：重酒石酸长春瑞滨、磷脂、胆固醇、维生素E，它们之间的重量比为1份∶5-100份∶1-15份∶0.01-0.05份。该种脂质体有利于提高药物的抗肿瘤作用，但未发现其对环境pH值变化的敏感性。

肿瘤组织在局部缺血时，肿瘤间质液出现异常酸化现象，利用肿瘤组织pH5.0-6.5比正常组织低的特性，设计和研究在生理范围内稳定的pH敏感型脂质体，使其在偏酸环境下实现药物的突释，不但可以进一步提高脂质体的靶向性，而且可以实现药物的智能控制释放。

发明内容：

本发明的目的是提供一种抗肿瘤pH敏感脂质体、其冻干粉针制剂及它们的制备方法。

抗肿瘤pH敏感脂质体，主要由下列重量份比的原料组成：抗肿瘤活性药成分1份、磷脂1-20份、胆固醇1-20份和油酸0.5-10份，所述的磷脂为磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、氢化磷脂中的一种。

所述的抗肿瘤pH敏感脂质体，优选由下列重量份比的原料组成：抗肿瘤活性药成分1份、磷脂1-10份、胆固醇1-10份和油酸0.5-2份，所述的磷脂为磷脂酰乙醇胺。

上述的抗肿瘤活性药成分选自酒石酸长春瑞滨、长春瑞滨、盐酸阿霉素、盐酸表阿霉素和紫杉醇中的一种或者几种，优选酒石酸长春瑞滨。

所述的抗肿瘤pH敏感脂质体的冻干粉针制剂，包括抗肿瘤pH敏感脂质体及其可接受的载体。所述的可接受的载体包括缓冲溶液、冻干支持剂和注射用溶剂。

所述的抗肿瘤pH敏感脂质体的冻干粉针制剂的制备方法，步骤如下：

1)称取抗肿瘤活性药成分、磷脂、胆固醇、油酸，溶于有机溶剂，混合均匀；

2)将混合液于旋转蒸发仪上，减压除去有机溶剂，然后加入pH为6-8的磷酸盐缓冲液混匀，得脂质体混悬液；或者将混合液加入pH为6-8的磷酸盐缓冲液，乳化，然后在旋转蒸发仪上减压除去有机溶剂，得脂质体混悬液；

3)将所得脂质体混悬液进行高压乳匀，减小粒径即得，将适量的冻干支持剂溶解在脂质体中，无菌过滤。

4)检验合格，装瓶，封盖，冻干，即得成品。

上述抗肿瘤pH敏感脂质体的冻干粉针制剂的制备方法中，有机溶剂用量为每100mg脂质材料用有机溶剂20ml(脂质材料是指磷脂、胆固醇和油酸)；缓冲溶液的用量为每100mg脂质材料用缓冲溶液20ml，冻干支持剂的用量为脂质材料总质量的5％。所述有机溶剂为氯仿与甲醇的混合物，所述冻干支持剂选自甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖中的一种。

本发明所述的抗肿瘤pH敏感脂质体可制成注射液、冻干粉针剂。

本发明的有益效果是：

(1)利用磷脂酰乙醇胺作磷脂，这种磷脂在酸性环境下极性基团发生质子化，从而引起脂质体结构的变化，通过和油酸的协同作用，大大提高了pH敏感性，同时具有较好缓释效果；

(2)脂质体药物包封率较高(包封率为60-90％)、性能稳定，粒径均匀，为100-1000nm；

(3)制备的脂质体具有被动靶向性、智能控释等显著特征，而且具有储存稳定性好，药物治疗指数高、毒副作用低等特点，可用于治疗各种肿瘤性疾病；

(4)制备的冻干粉针制剂能使脂质体中药物持续释放，提高血药浓度、延长药物在血液中循环时间，提高药物的生物利用度，同时又可以降低药物的毒副作用，增强病人的顺应性的有效的药物配方；

(5)制备工艺简单。

附图说明

图1为本发明抗肿瘤pH敏感脂质体的电镜照片；

图2为本发明抗肿瘤pH敏感脂质体的粒径分布图；

图3为本发明抗肿瘤pH敏感脂质体经高压均质后的电镜照片；

图4为本发明抗肿瘤pH敏感脂质体经高压均质后的粒径分布图；

图5为本发明抗肿瘤pH敏感脂质体在不同pH的PBS缓冲液中酒石酸长春瑞滨的渗漏曲线。

具体实施方式

下面通过实验实例对本发明进行具体描述，有必要指出的是本实施例只用于对本发明做进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员可以根据上述说明的内容做出一些非本质的改进和调整。药物原料均可以从市场上买的。

实施例1

称取30mg磷脂酰乙醇胺、30mg胆固醇、10mg油酸溶于10ml有机溶剂(V_氯仿∶V_甲醇＝9∶1)中，加压蒸干混合溶液至形成一层均匀的脂质薄膜。加2ml pH＝7.4的酒石酸长春瑞滨的药物溶液(药物浓度为5mg/ml)溶解超声形成均匀悬液，用pH7.4的PBS缓冲液补充使最终体积为20ml，37℃水浴条件下水合30min后即得酒石酸长春瑞滨pH敏感脂质体，加入甘露醇3.5mg作为冻干保护剂，-80℃预冻12h之后冻干即得酒石酸长春瑞滨的冻干粉，临用前用生理盐水复溶。所制得的酒石酸长春瑞滨pH敏感脂质体平均粒径为290nm，透射电镜照片如附图1所示，粒径分布如附图2所示。

实施例2

称取90mg磷脂酰乙醇胺、90mg胆固醇、30mg油酸溶于30ml有机溶剂(V_氯仿∶V_甲醇＝9∶1)中，加压蒸干混合溶液至形成一层均匀的脂质薄膜。加6ml pH＝7.4的酒石酸长春瑞滨的药物溶液(药物浓度为5mg/ml)溶解超声形成均匀悬液，用pH7.4的PBS缓冲液补充使最终体积为60ml，进行高压乳匀减小粒径，37℃水浴条件下水合30min后即得酒石酸长春瑞滨pH敏感脂质体，加入甘露醇10.5mg作为冻干保护剂，-80℃预冻12h之后冻干即得酒石酸长春瑞滨的冻干粉，临用前用生理盐水复溶。所制得的酒石酸长春瑞滨pH敏感脂质体平均粒径为232nm，透射电镜照片如附图3所示，粒径分布如附图4所示。

实施例3

称取150mg磷脂酰乙醇胺、150mg胆固醇、15mg油酸溶于30ml有机溶剂(V_氯仿∶V_甲醇＝9∶1)中，加压蒸干混合溶液至形成一层均匀的脂质薄膜。加6ml pH＝7.4的酒石酸长春瑞滨的药物溶液(药物浓度为5mg/ml)溶解超声形成均匀悬液，用pH7.4的PBS缓冲液补充使最终体积为60ml，进行高压乳匀减小粒径，37℃水浴条件下水合30min后即得酒石酸长春瑞滨pH敏感脂质体，加入甘露醇15.75mg作为冻干保护剂，-80℃预冻12h之后冻干即得酒石酸长春瑞滨的冻干粉，临用前用生理盐水复溶。所制得的酒石酸长春瑞滨pH敏感脂质体平均粒径为252nm。

实施例4

称取300mg磷脂酰乙醇胺、300mg胆固醇、60mg油酸溶于30ml有机溶剂(V_氯仿∶V_甲醇＝9∶1)中，加压蒸干混合溶液至形成一层均匀的脂质薄膜。加6ml pH＝7.4的酒石酸长春瑞滨的药物溶液(药物浓度为5mg/ml)溶解超声形成均匀悬液，用pH7.4的PBS缓冲液补充使最终体积为60ml，进行高压乳匀减小粒径，37℃水浴条件下水合30min后即得酒石酸长春瑞滨pH敏感脂质体，加入甘露醇33mg作为冻干保护剂，-80℃预冻12h之后冻干即得酒石酸长春瑞滨的冻干粉，临用前用生理盐水复溶。所制得的酒石酸长春瑞滨pH敏感脂质体平均粒径为270nm。

性能测试

按上述实施例2制得酒石酸长春瑞滨pH敏感脂质体，利用动态膜透析法，考察制剂在不同pH PBS中的释放规律，所得释放曲线如附图5所示。

Claims (9)

1.抗肿瘤pH敏感脂质体，其特征是，它主要由下列重量份比的原料组成：

抗肿瘤活性药成分1份、磷脂1-20份、胆固醇1-20份和油酸0.5-10份，所述的磷脂为磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、氢化磷脂中的一种。

2.根据权利要求1所述的抗肿瘤pH敏感脂质体，其特征是，它由下列重量份比的原料组成：抗肿瘤活性药成分1份、磷脂1-10份、胆固醇1-10份和油酸0.5-2份，所述的磷脂为磷脂酰乙醇胺。

3.根据权利要求1或2所述的抗肿瘤pH敏感脂质体，其特征是，抗肿瘤活性药成分选自酒石酸长春瑞滨、长春瑞滨、盐酸阿霉素、盐酸表阿霉素和紫杉醇中的一种或者几种。

4.根据权利要求3所述的抗肿瘤pH敏感脂质体，其特征是，抗肿瘤活性药成分为酒石酸长春瑞滨。

5.权利要求1所述的抗肿瘤pH敏感脂质体的冻干粉针制剂，包括抗肿瘤pH敏感脂质体及其可接受的载体。

6.根据权利要求5所述的抗肿瘤pH敏感脂质体的冻干粉针制剂，其特征是，所述的可接受的载体包括缓冲溶液、冻干支持剂和注射用溶剂。

7.权利要求5所述的抗肿瘤pH敏感脂质体的冻干粉针制剂的制备方法，其特征是，步骤如下：

1)称取抗肿瘤活性药成分、磷脂、胆固醇、油酸，溶于有机溶剂，混合均匀；

2)将混合液于旋转蒸发仪上，减压除去有机溶剂，然后加入pH为6-8的磷酸盐缓冲液混匀，得脂质体混悬液；或者将混合液加入pH为6-8的磷酸盐缓冲液，乳化，然后在旋转蒸发仪上减压除去有机溶剂，得脂质体混悬液；

3)将所得脂质体混悬液进行高压乳匀，减小粒径即得，将适量的冻干支持剂溶解在脂质体中，无菌过滤。

4)检验合格，装瓶，封盖，冻干，即得成品。

8.根据权利要求7所述的抗肿瘤pH敏感脂质体的冻干粉针制剂的制备方法，其特征是，有机溶剂用量为每100mg脂质材料用有机溶剂20ml；缓冲溶液的用量为每100mg脂质材料用缓冲溶液20ml，冻干支持剂的用量为脂质材料总质量的5％。

9.根据权利要求7或8所述的抗肿瘤pH敏感脂质体的冻干粉针制剂的制备方法，其特征是，所述有机溶剂为乙醚、氯仿或者两者混合，所述冻干支持剂选自甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖中的一种。

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