CH653039A5

CH653039A5 - Tri-, tetra- et pentapeptides, leur preparation et les medicaments qui les contiennent.

Info

Publication number: CH653039A5
Application number: CH8119/81A
Authority: CH
Inventors: Jean Bouchaudon; Gilles-Rosset Dutruc; Daniel Farge; Claude James
Original assignee: Rhone Poulenc Sante
Priority date: 1980-12-19
Filing date: 1981-12-18
Publication date: 1985-12-13
Also published as: AU7859081A; ZA818737B; SE454699B; FR2496654B1; DE3150295A1; JPH0337560B2; CA1250398A; IE52113B1; LU83843A1; BE891539A; GB2089816A; US4401658A; NL8105587A; AU555294B2; DK154436C; FR2496654A1; IT1142148B; NZ199310A; SE8107634L; GB2089816B

Description

La présente invention concerne de nouveaux tri-, tètra- ou pentapeptides de formule générale:

rco-nhchco-nhchco-r,

I I 1

ch, choch_c0-hhch-e„ 3 2 2 | 2

F (D

Wb h--hh ch-r,

3 4

éventuellement leurs sels, leur préparation et les médicaments qui les contiennent.

Dans la formule générale (I) RCO- représente un reste d'acide gras dans lequel R représente un radical alcoyle contenant 1 à 44 atomes de carbone (substitué ou non par un radical hydroxy, phényle ou cyclohexyle), alcényle contenant 2 à 29 atomes de carbone et pouvant contenir plus d'une double liaison ou un reste d'acide mycolique,

Ri représente un radicai hydroxy, amino, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy,

les symboles R2 et R-j, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle est érifié ou non par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle, étant entendu que R2 et R4 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène,

R3 représente un atome d'hydrogène ou un reste glycyle ou D alanyle, étant entendu que, lorsque R2 et R4, identiques ou différents, représentent chacun un radical N-carbonylglycyle (-CONHCH2COOH) ou N-carbonyl D alanyle

(-c0nhchc00h),

ch3

R3 représente un atome d'hydrogène, X représente un atome de soufre ou un radical méthylène, m et n, identiques ou différents, représentent chacun un nombre entier égal à 1 ou 2, étant entendu que, lorsque X représente un radical méthylène, m et n ne peuvent pas être simultanément égaux à 1, étant entendu que l'alanine liée à l'acide glutamique est sous forme L, l'acide glutamique est sous forme D, la lanthionine, 25 lorsque X représente un atome de soufre et m et n sont égaux à 1, la cystathionine, lorsque X représente un atome de soufre et m et n sont différents, l'homolanthionine, lorsque X représente un atome de soufre et m et n sont égaux à 2, l'acide diamino-2,7 subérique, lorsque X représente un radical méthylène et l'un des symboles m ou n est égal à 1 et l'autre est égal à 2, sont sous forme D, D; L, L; DD, LL (racémique) ou D, L (méso) ou sous forme des mélanges L, méso ou D, méso, et la thialysine, lorsque l'un des symboles R2 ou R4 représente un atome d'hydrogène, X représente un atome de 35 soufre et m et n sont égaux à 1, est sous forme L ou D ou D,

L.

Selon la présente invention, les nouveaux peptides de formule générale (I) peuvent être obtenus selon les méthodes généralement utilisées en chimie peptidique. Les différentes 40 réactions sont mises en jeu après blocage, par des groupements protecteurs convenables, des fonctions aminés ou acides qui ne doivent pas participer à la réaction et sont suivies éventuellement du déblocage de ces fonctions.

Selon la présente invention, les nouveaux produits de formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un dipeptide de formule générale:

30

45

55

e co - uh ch co - hh ch co - e.

50

ch,

chgchgcooh

(ii)

dans laquelle R est défini comme précédemment et Rs représente un radical amino, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, sur un produit de formule générale:

60

H2H fH-R2

<K>n

Rg - HH CH-R4

(III)

65

dans laquelle R2, R4, X, m et n sont définis comme précédemment et Re représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un radical glycyle ou D alanyle dont la

9

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fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine, suivie du remplacement du groupement protecteur représenté ou porté par Rs par un atome d'hydrogène et éventuellement du remplacement du radical Rs, lorsqu'il représente un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, par un radical hydroxy et des radicaux alcoyloxycarbonyles contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle, représentés ou portés par R2 et/ou R4, par des radicaux carboxy.

Lorsque les symboles R2 et R4 sont différents d'un radical carboxy ou ne contiennent pas un radical carboxy, la condensation du dipeptide de formule générale (II) est effectuée généralement en présence d'un agent de condensation tel que le dicyclohexylcarbodiimide en opérant dans un solvant organique tel que le chlorure de méthylène ou le diméthylforma-mide, à une température comprise entre — 10 et 30°C.

Généralement il est nécessaire d'activer la fonction acide libre du dipeptide de formule générale (II) préalablement à son action sur le produit de formule générale (III). De préférence, le dérivé activé du dipeptide de formule générale (II) est un anhydride mixte, préparé in situ par action d'un halo-génoformiate d'alcoyle tel que le chloroformiate d'isobutyle. La condensation du dérivé activé s'effectue dans un solvant organique tel que le dioxanne, le tétrahydrofuranne, le chloroforme, le toluène ou le diméthylformamide ou en milieu hydro-organique, en présence d'une base (minérale, telle que la soude, ou organique, telle que la triéthylamine), à une température comprise entre — 10 et +30°C.

Le remplacement du groupement protecteur de la fonction amine représenté ou porté par Rs par un atome d'hydrogène, du radical Rs par un radical hydroxy et des radicaux représentés ou portés par Ra et/ou R4 par des radicaux carboxy peut être effectué selon les méthodes connues en fonction de la nature de ces groupements. II est particulièrement avantageux de choisir les radicaux R2, R4, Rs, et Rs de telle manière que leur remplacement puisse s'effectuer en une seule étape. Par exemple, Rs peut représenter ou contenir un radical t.butyloxycarbonyle, Ri peut représenter un radical t.butyloxy et R2 et/ou R4 peuvent représenter ou contenir un radical t.butyloxycarbonyle et, dans ces conditions, le remplacement de ces radicaux s'effectue par hydrolyse acide. L'hydrolyse peut être effectuée en opérant dans l'acide acétique en présence d'acide chlorhydrique à une température voisine de 20 °C.

Par exemple encore, le groupement protecteur d'une fonction acide pouvant être un radical benzyle et celui de la fonction amine un radical benzyloxycarbonyle, l'élimination simultanée de ces groupements protecteurs peut être effectuée au moyen d'acide bromhydrique dans l'acide trifluoroacéti-que ou bien en utilisant le sodium dans l'ammoniac liquide. Cependant, il peut être nécessaire d'éliminer un ou plusieurs de ces groupements protecteurs sans toucher aux autres. Dans ce cas les groupements protecteurs seront choisis, par exemple, de telle manière que leur remplacement s'effectue dans des conditions différentes d'hydrolyse. Ainsi le groupement protecteur d'une fonction acide pourra être un radical t.butyle éliminable par action de l'acide chlorhydrique dans l'acide acétique et le groupement protecteur de la fonction amine un radical benzyloxycarbonyle éliminable par action de l'acide bromhydrique dans l'acide trifluoroacétique.

Selon la présente invention, les nouveaux peptides de formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un dérivé de la L alanine de formule générale:

eco - nhph co - oh dans laquelle R est défini comme précédemment, sur un di-, tri- ou tétrapeptide de formule générale:

h2nchco-e1

CHgCHgCO-MHCHrEg

<?V.

? (V)

Hg-"NH

dans laquelle Ri, R2, R4, X, m et n sont définis comme précédemment, suivie du remplacement du groupement protecteur représenté ou porté par Rs par un atome d'hydrogène et éventuellement du remplacement du radical Ri, lorsqu'il représente un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, par un radical hydroxy, et des radicaux alcoyloxycarbonyles contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyl-oxycarbonyles représentés ou portés par R2 et/ou R4 par des radicaux carboxy, dans les conditions décrites ci-dessus pour l'action d'un produit de formule générale (II) sur un produit de formule générale (III).

Selon la présente invention, les nouveaux peptides de formule générale (I) peuvent également être obtenus par action d'un acide de formule générale:

RCO-OH (VI)

dans laquelle R est défini comme précédemment sur un tri-, tètra- ou pentapeptide de formule générale:

hgnjihco-hhçhco-h^

CHj CHgCHgCO-HHjJH-Rg

(py.

X (TU)

(ps'n Rg-tracH-R,

dans laquelle Ri, R2, R4, Rs, X, m et n sont définis comme précédemment, suivie du remplacement du groupement protecteur représenté ou porté par Rs par un atome d'hydrogène et éventuellement du remplacement du radical Ri, lorsqu'il représente un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, par un radical hydroxy et des radicaux alcoyloxycarbonyles contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyles représentés ou portés par R2 et/ou R4 par des radicaux carboxy, en opérant dans les conditions données précédemment pour la condensation du dipeptide de formule générale (II) sur le produit de formule générale (III). Il est également possible d'utiliser l'acide de formule générale (VI) sous forme d'halogénure d'acide, de préférence le chlorure, en effectuant la réaction dans un solvant organique tel que l'éther diéthylique ou le chlorure de méthylène, en présence d'une base (minérale, telle que la soude, ou organique, telle que la triéthylamine) à une température comprise entre 0 et 30 °C.

Selon la présente invention, les nouveaux peptides de formule générale (I) dans laquelle les symboles R2 et/ou R4 représentent un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle peuvent également

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10

15

20

25

30

35

40

45

50

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60

65

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10

être obtenus par action d'un aminoacide libre ou estérifié de formule générale:

cyle ou D alanyle peuvent également être obtenus par action d'un aminoacide de formule générale:

H2NpC0-H8

»7

(7III) 5

dans laquelle Rj représente un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, l'aminoacide étant dans ce cas sous forme D, et Rs représente un radical hydroxy ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, sur un peptide de formule générale :dans laquelle R, Rs, Re, X, m et n sont définis

RC0-]

•HHpHCO-HH^HCO-Ej-

CH, CH9CH_C0-NHCH-Rq 2 - / ' » '

<pv»

-HH-CH-H^q comme précédemment et, l'un des symboles R? ou Rio représentant un radical carboxy, l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle, étant entendu que lorsque Re et Rio représentent chacun un radical carboxy, Rs représente un groupement protecteur de la fonction amine, suivie éventuellement du remplacement des radicaux Rs et/ou Rs, lorsqu'ils représentent un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, par un radical hydroxy, et/ou des radicaux alcoyloxycarbonyles contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle représentés ou portés par R9 ou Rio par un radical carboxy, et du remplacement du groupement protecteur représenté ou porté par Rs par un atome d'hydrogène, dans les conditions décrites précédemment pour l'action d'un produit de formule générale (II) sur un produit de formule générale (III).

Pour obtenir un produit de formule générale (I) dans lequel R2 et R4 sont identiques et représentent un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié, il est possible d'utiliser un produit de formule générale (IX) dans laquelle R9 et Rio représentent chacun un radical carboxy.

Pour obtenir un produit de formule générale (I) dans lequel les symboles R2 et R4 sont identiques ou différents et représentent un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié, il est possible d'utiliser un produit de formule générale (IX) dans laquelle l'un des symboles R9 ou Rio représente un radical carboxy et l'autre représente un radical alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle. Dans ses conditions, on fait réagir le produit de formule générale (VIII) sur le produit de formule générale (VIII) sur le produit de formule générale (XV), puis, après remplacement du radical alcoyloxycarbonyle ou benzyloxycarbonyle représenté par R9 ou Rio par un radical carboxy, on fait réagir à nouveau le produit de formule générale (VIII) identique au (ou différent du) produit de formule générale (VIII) utilisé lors de la première condensation.

Selon la présente invention, les nouveaux peptides de formule générale (I) dans laquelle Rj représente un radical gly-

R^-HHCH C00H

00

dans laquelle R7 et défini comme précédemment et Rn représente un groupement protecteur de la fonction amine, sur un 10 tri- ou tétrapeptide de formule générale:

HC 0-NHCHC0-NHCHC0-S

CH,

&H

1

(IX)

2CH2C0-NHpE-H2

(pvm

X

"°2>n h2n-ch>e4

(XI)

(p dans laquelle R, Ri, R2, R4, X, m et n sont définis comme précédemment, R2 et R4 ne pouvant pas être simultanément un 25 radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié, suivie du remplacement de Rn par un atome d'hydrogène et éventuellement du remplacement de Ri, lorsqu'il représente un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, par un radical hydroxy et des 30 radicaux alcoyloxycarbonyles contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyles représentés ou portés par R: et/ou R4 par des radicaux carboxy, dans les conditions décrites ci-dessus pour l'action d'un produit de formule générale (II) sur un acide de formule générale (III).

35 Le dipeptide de formule générale (II) peut être obtenu par action d'un dérivé activé de la L alanine de formule générale:

R

12

-NH<j!HC0

-OH

40

CH,

(XII)

dans laquelle R12 représente un radical RCO- dans lequel R est défini comme précédemment, ou un groupement protecteur de la fonction amine, sur un dérivé de l'acide D glutami-45 que de formule générale.

h2uçhco-r5

50

ÌH2ch2 CO-OH

(XIII)

dans laquelle Rs est défini comme précédemment et la fonction carboxy est éventuellement protégée, dans les condi-55 tions décrites ci-dessus pour l'action d'un produit de formule générale (II) sur un produit de formule générale (III), suivie le cas échéant, après remplacement du radical R12, lorsqu'il représente un groupement protecteur de la fonction amine, par un atome d'hydrogène, de l'action d'un acide de formule 60 générale (VI) puis du remplacement du groupement carboxy protégé par un radical carboxy.

Les dérivés de la lanthionine, c'est-à-dire les produits de formule générale (III) dans laquelle X représente un atome de soufre et m et n sont égaux à 1 peuvent être préparés de la 65 manière suivante:

a) Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III), dans laquelle R2 et R4 représentent un radical carboxy et Rs représente un radical benzyloxycarbonyle, peut être préparé

11

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selon la méthode de I. Photaki et coll., J. Chem. Soc. Perkin I, 2599 (1979).

b) Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dans laquelle Rj représente un radical carboxy, R.4 représente un radical carbamoyle et Re représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine, sous forme D, D ou L, L peut être préparé à partir de la lanthionine correspondante dont la préparation est décrite par J. Greenstein et M. Winitz, «Chemistry of the Amino Acids», John Wiley and Sons, 1961, p. 2675. A cet effet, on prépare selon les méthodes connues l'ester dibenzylique de la dibenzyloxy-carbonyllan-thionine qui est monosaponifïé selon la méthode décrite par A. Arendt et coll., Roczniki Chemii Ann. Soc. Chim. Polono-rum, 48,1305 (1974), [Chem. Abstr., 82,31497 g (1975)] puis transformé par action du méthanol ammoniacal en mono-amide de formule générale:

Z-NHCHCOOH

K

s (XIV-)

Z-HHCHC0NH2

(dans laquelle Z représente un radical benzyloxycarbonyle) qui, après hydrolyse acide ou hydrogénolyse, fournit le monoamide de la lanthionine.

Par action d'un sel de cuivre, tel que le bromure cuivrique ou le carbonate basique de cuivre, sur le monoamide de la lanthionine, il se forme un complexe qui peut être représenté par la formule:

HgH pH GOHHg

HJ CH-COO (X7)

N- ^

/ \

OCO-CH NHg

CH-I 2

S

K

IgïJCO CH' HH2

dans laquelle le reste amino en a du groupement carbamoyle peut être acylé au moyen d'un aminoacide de formule générale (X) ou protégé par action d'un halogénoformiate d'alcoyle ou de benzyle. Le complexe ainsi formé est déplacé par action de l'hydrogène sulfuré pour donner l'amino acide ou le dipeptide de formule générale (III) dans laquelle R2 représente un radical carboxy, R4 représente un radical carbamoyle et Ró est défini comme ci-dessus.

c) Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dans laquelle R2 représente un radical carboxy, R4 représente un radical carbamoyle, Rs représente un groupement protecteur de la fonction amine, sous forme méso, l'atome de carbone portant la fonction carbamoyle étant sous forme D, peut

être préparé à partir de la mésolanthionine selon la méthode décrite dans le brevet belge 821 385 pour préparer l'acide diaminopimélamique.

d) Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dans laquelle R2 représente un radical carbamoyle, R.4 représente un radical carboxy et Ró représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est protégée par un groupement protecteur de la fonction amine peut être obtenu en protégeant la fonction amine en a du groupement carbamoyle du produit de formule générale (XV) par action d'un halogénoformiate d'alcoyle ou de benzyle. Le complexe ainsi formé est déplacé par action de l'hydrogène sulfuré pour donner le dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dans laquelle R4 représente un radical carbamoyle, R2 représente un radical carboxy et Ró représente un groupement protecteur de la fonction amine. Le radical amino en a du groupement carboxy peut être protégé par un groupement protecteur ou acylé par action d'un dérivé activé d'un aminoacide de formule générale (X). Après remplacement du radical Ró par un atome d'hydrogène, par des méthodes qui ne touchent pas au reste de la molécule, on obtient le dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dans laquelle R.4 représente un radical carboxy, R2 représente un radical carbamoyle et Re représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine.

e) Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dans laquelle R4 représente un radical carbamoyle, R.2 représente un radical alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle ou N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifiés par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle et Ró représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine, peut être obtenu, par action d'un aminoacide de formule générale (VIII), ou d'un alcool aliphatique contenant 1

à 4 atomes de carbone ou de l'alcool benzylique, sur un aminoacide ou un dipeptide de formule générale:

y-hhjjhcooh p CX7I)

ch2

r6-hhchcohh2

dans laquelle Ró est défini comme ci-dessus et Y représente un groupement protecteur de la fonction amine, en opérant dans les conditions habituelles, suivie du remplacement du groupement protecteur Y par un atome d'hydrogène et éventuellement du groupement ester (porté par le reste glycyle ou D alanyle) par un radical hydroxy, sans toucher au reste de la molécule. En particulier, il importe de choisir Y de telle manière que son remplacement par un atome d'hydrogène s'effectue sans toucher au groupement protecteur représenté ou porté par Ró.

0 Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III), dans laquelle R4 représente un radical carbamoyle, R2 représente un radical alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle ou un reste N-carbonyl-glycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié et Ró représente un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine, peut être obtenu par action d'un aminoacide

5

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25

30

35

40

45

50

55

60

65

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de formule générale (X) sur un produit de formule générale:

12

noacide ou un dipeptide de formule générale:

Y-HHCH-H„ 1

ch2

s 1

fEZ

ch conh-

(xvtl)

H2H

dans laquelle R.2 est défini comme ci-dessus et Y représente un groupement protecteur de la fonction amine, en opérant dans les conditions habituelles, suivie du remplacement de Y par un atome d'hydrogène sans toucher au reste de la molécule.

g) Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dans laquelle R.2 représente un radical carbamoyle, R4 représente un radical alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle ou N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifiés par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle et R6 représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine peut être obtenu par action, d'un aminoacide de formule générale (VIII) ou d'um alcool aliphatique contenant 1 à 4 atomes de carbone ou de l'alcool benzylique sur un aminoacide ou un dipeptide de formule générale:

y -

hhchcohhg ce„

1 2 S I

jJH2

h^-iihch-cooh

15

20

(mu)

dans laquelle Rs est défini comme ci-dessus et y représente un groupement protecteur de la fonction amine, en opérant dans les conditions habituelles, suivie du remplacement du groupement protecteur Y par un atome d'hydrogène et éventuellement du groupement ester porté par le reste glycyle ou D alanyle par un radical hydroxy, sans toucher au reste de la molécule. En particulier, il importe de choisir Y de telle manière que son remplacement par un atome d'hydrogène s'effectue sans toucher au groupement protecteur représenté ou porté par R6.

Lorsque l'on fait réagir l'aminoacide de formule générale (VIII) sur l'aminoacide de formule générale (XVI) ou (XVIII), on opère dans les conditions qui permettent la création d'une liaison peptidique sans toucher au reste de la molécule. Lorsque l'on fait réagir un alcool (aliphatique ou benzylique), on opère dans des conditions douces d'estérifica-tion afin de ne pas toucher aux groupements protecteurs Y et Râ et plus particulièrement selon la méthode de V. Bocchi, Synthesis, p. 961 (1979).

h) Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III), dans laquelle R2 représente un radical carbamoyle, R4 représente un radical alcoyloxycarbonyle ou benzyloxycarbonyle ou un reste N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié et Rs représente un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine, peut être obtenu, par action d'un aminoacide de formule générale (X) sur un ami-

50

55

y - nhchconh-I 2

pHjf

S

h

HjrCHR, 2 4

(XIX)

dans laquelle R4 est défini comme ci-dessus et Y représente un groupement protecteur de la fonction amine en opérant dans les conditions habituelles, suivie du remplacement du groupement Y par un atome d'hydrogène sans toucher à Ru.

Les produits de formule générale (XVII) et (XIX) peuvent être obtenus selon les méthodes habituelles utilisées en chimie peptidique pour l'introduction d'un groupement protecteur de la fonction amine à partir d'un dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dans laquelle l'un des radicaux R2 et R4 représente un radical carbamoyle, et l'autre représente un radical alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle, ou un reste N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié et 25 Rs représente un groupement protecteur de la fonction amine, suivies du remplacement du groupement protecteur Rs par un atome d'hydrogène sans toucher au reste de la molécule. En particulier les groupements protecteurs des fonctions aminés du monoamide de la lanthionine sont différents et choisis de 30 telle manière que le remplacement de R6 n'entraîne pas celui de Y.

i) Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dans laquelle R2 et R4 représentent chacun un radical carbamoyle et Ró représente un groupement protecteur de la 35 fonction amine peuvent être obtenus par action de l'ammoniac sur l'anhydride mixte, préparé in situ par action d'un halogénoformiate d'alcoyle sur un dérivé de la lanthionine de formule générale:

40

45

Y-HHCHCOOH.

K

S

h

Hg-ÎJHCHCOOH

(XX)

dans laquelle Y représente un groupement protecteur différent de Rs, suivie de l'élimination du groupement protecteur Y sans toucher au reste de la molécule.

j) Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dans laquelle R2 et R4 représentent chacun un radical carbamoyle et Rs représente un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur peut être obtenu pr action d'un aminoacide de formule générale (X) sur le dérivé de la lanthionine de formule générale:

60

65

y-hhchc0nïï2

K

HgîfCHCOMHg

(XXI)

dans laquelle Y représente un groupement protecteur de la

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fonction amine, suivie de l'élimination du groupement Y sans toucher au groupement protecteur porté par Ró.

k) Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III), dans laquelle Ra et R4 représentent chacun un radical alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle et Ró représente un groupement protecteur de la fonction amine, peut être obtenu par estérification d'un dérivé de la lanthionine de formule générale:

y-îjhchcooh h

s (XXII)

fH2

rg-nhchcooh dans laquelle Y représente un groupement protecteur différent de Ró défini comme ci-dessus, suivie de l'élimination de Y sans toucher au reste de la molécule.

1) Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III), dans laquelle R2 et R4 représentent chacun un radical alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle et Ró représente un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine, peut être obtenu par action d'un aminoacide de formule générale (X) sur un dérivé de la lan-tionine de formule générale:

y-hhçhcooe15 çh2

s (XXIII)

I

fh2

HgN CH-C00B13

dans laquelle Rn représente un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle et Y représente un groupement protecteur de la fonction amine, suivie de l'élimination de Y sans toucher au reste de la molécule.

Les dérivés de la L lanthionine utilisables pour la préparation des produits selon la présente invention peuvent également être préparés à partir du diester éthylique de la dibenzyloxycarbonyl-L lanthionine dont la préparation est décrite par D. Harpp et coll., J. Org. Chem., 36,73 (1971).

Les dérivés de la lantionine de formule générale (III),

dans laquelle l'un des symboles R2 ou R4 représente un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle, N-carbonylgly-cyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié et l'autre représente un radical carboxy, alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle et Re représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur, peuvent être obtenus par action d'un dérivé de la cystéine de formule générale:

x-nhçhco-y (3qav)

chgsh dans laquelle X représente un atome d'hydrogène ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur et Y représente un radical hydroxy, amino.

alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone, benzyloxy, N-glycyle ou N-D alanyle éventuellement estérifié, sur un produit de formule générale:dans laquelle X' représente un x'-hhçhco-y1 (ot)

2~^1

atome d'hydrogène ou un groupement protecteur de la fonction amine, Y' a la même définition que le symbole Y ci-dessus, et peut être différent de Y, et Zi représente un atome d'halogène, autre que le fluor, ou un reste d'ester réactif tel qu'un radical toluènesulfonyle ou méthanesulfonyle, ou sur un produit de formule générale:

x'-hhc co-Y' (XXVI)

dans laquelle X' et Y' ont les définitions données ci-dessus, suivie de l'élimination éventuelle de l'un des groupements protecteurs X ou X' de la fonction amine du dérivé de la lanthionine ainsi obtenu.

Généralement la condensation du produit de formule générale (XXIV) sur un produit de formule générale (XXV) ou (XXVI) s'effectue dans un milieu hydro-organique, tel qu'un mélange eau-tétrahydrofuranne en présence d'une base (minérale, telle que la soude ou la potasse, ou organique, telle qu'un hydroxyde d'ammonium quaternaire) à une température voisine de 0°C. La condensation peut aussi être effecutée dans l'ammoniac liquide.

La condensation du dérivé de la cystéine de formule générale (XXIV) sur le produit de formule générale (XXV) peut s'accompagner d'une racémisation au niveau de l'atome de carbone asymétrique du produit de formule générale (XXV).

Plus particulièrement, la racémisation ne se produit pas lorsque, dans les formules générales (XXIV) et XXV), Zi représente un atome d'halogène, Y' représente un radical hydroxy, Y représente un radical hydroxy ou amino, X représente un atome d'hydrogène ou un radical benzyloxycarbonyle, t.butyloxycarbonyle, t.butyloxycarbonyl glycyle ou t.butyloxycarbonyl D alanyle et X' représente un atome d'hydrogène ou un radical benzyloxycarbonyle. Pour éviter ou limiter la racémisation, il est avantageux d'opérer dans l'ammoniac liquide.

Les dérivés de la thialysine, c'est-à-dire les produits de formule générale (III) dans laquelle l'un des symboles R2 ou R4 représente un atome d'hydrogène, X représente un atome de soufre et m et n sont égaux à 1 peuvent être obtenus à partir de la thialysine, dont la préparation est décrite par D. Hope et coll., J. Chem. Soc. (C), 1098 (1966), selon les méthodes données ci-dessus pour la préparation des dérivés de la lanthionine.

Les dérivés de la cystathionine, c'est-à-dire les produits de formule générale (III) dans laquelle X représente un atome de soufre, m est égal à 1 et n est égal à 2, les symboles R2 et R4 étant différents d'un atome d'hydrogène, peuvent être obtenus à partir des dérivés de la cystathionine dont la préparation est décrite en particulier par K. Jost et coll., Coll. Czech. Chem. Comm., 32,2485 (1967) et par Z. Prochazka et coll., Coll. Czech. Chem. Comm., 45, 1982 (1980), selon les méthodes données ci-dessus pour la préparation des dérivés de la lanthionine.

Les dérivés de l'acide diamino-2,7 subérique, C'est-à-dire les produits de formule générale (III) dans laquelle X représente un radical méthylène et l'un des symboles m et n est égal à 1 et l'autre est égal à 2, les symboles R2 et R4 étant différents d'un atome d'hydrogène, peuvent être obtenus à partir

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10

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des dérivés de l'acide diamino-2,7 subérique, dont la préparation est décrite dans J. Org. Chem., 45,3078 (1980), selon les méthodes données ci-dessus pour la préparation des dérivés de la lanthionine.

L'aminoacide de formule générale (IV) peut être obtenu par action d'un acide de formule générale (VI) ou d'un dérivé activé de cet acide sur la L alanine dont la fonction acide est éventuellement protégée sous forme d'ester, suivie éventuellement du remplacement de la fonction ester par la fonction carboxy, en opérant dans les conditions indiquées ci-dessus pour l'action de l'acide de formule générale (VI) sur le peptide de formule générale (VII).

Le peptide de formule générale (V) peut être obtenu par action, dans les conditions habituelles, d'un dérivé de l'acide D glutamique de formule générale (XIII) dont la fonction amine est protégée, et dans laquelle Rs représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, sur un produit de formule générale (III) dans laquelle R2, R.4, Re, X, m et n sont définis comme précédemment, suivie du remplacement éventuel du radical Rs,

lorsqu'il représente un radical alxoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, par un radical hydroxy et des radicaux alcoyloxycarbonyles contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyles représentés ou portés par R2 et/ou R4 par des radicaux carboxy sans toucher au reste de la molécule. Toutefois lorsque Rs forme avec le groupement car-bonyle auquel il est lié une fonction ester, et R2 et/ou R4 représentent ou contiennent une fonction ester, il peut être nécessaire que les fonctions esters représentées ou portées par Rs, R2 et/ou R4 soient différentes et choisies de telle manière que le remplacement de l'un des radicaux Rz ou R4 par un radical carboxy s'effectue sans toucher au radical Rs et à l'autre radical R2 ou R4.

Le peptide de formule générale (VII) peut être obtenu par action, dans les conditions habituelles, d'un dérivé activé de la L alanine de formule générale :

bonyle auquel il est lié une fonction ester et R2 et/ou R4 représentent une fonction ester, il peut être nécessaire que les radicaux Rs, R2 et R» soient différents et choisis de telle manière que le remplacement des radicaux R2 et/ou R4 par 5 un radical carboxy s'effectue sans toucher au radical Rs et éventuellement à l'un des radicaux R2 ou R4.

Le peptide de formule générale (XI), dans laquelle Ri représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy et les symboles R2 et R4 10 sont définis comme précédemment, peut être obtenu par action, dans les conditions habituelles, d'un dipeptide de formule générale (II) dans laquelle R et Rs sont définis comme ci-dessus sur un aminoacide de formule générale (III) dans laquelle R2 et Ri sont définis comme précédemment et R6 15 représente un groupement protecteur de la fonction amine, suivie du remplacement de ce groupement protecteur par un atome d'hydrogène sans toucher au reste de la molécule.

Selon l'invention les produits de formule générale (I) peuvent également être obtenus par action d'un produit de for-20 mule générale:

H.--UHCHCO-E-15 1 5

25

CH-CH-COtHHCHCO-Y 2 2 1

CVZ2

(X3CVTII)

dans laquelle Rs est défini comme précédemment, Ris représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un 30 reste L alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine ou par un reste d'acide gras, Y est défini comme précédemment et Z2 représente un groupement -S H ou un atome d'halogène, autre que fluor, ou un reste d'ester réactif tel qu'un radical toluènesul-35 fonyle ou méthanesulfonyle, sur un produit de formule générale:

R14-HHpH-C00H CH,

(XXVII)

40

xl-hhchco-y1

ch2-z'2

(XXIX)

dans laquelle Ru représente un groupement protecteur de la fonction amine sur un peptide de formule générale (V) dans laquelle Ri, R2, R4, Re, X, m et n sont définis comme précédemment, suivie du remplacement du radical Rm par un atome d'hydrogène et du remplacement éventuel du radical Ri, lorsqu'il représente un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, par un radical hydroxy et des radicaux alcoyloxycarbonyles contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle par des radicaux carboxy sans toucher au reste de la molécule.

Lorsque Ri, R2 et R4 forment ou contiennent une fonction ester, il est possible que ces fonctions soient différentes et choisies de telle manière que le remplacement d'un des radicaux R2 ou R4 par un radical carboxy s'effectue sans toucher au radical Ri et à l'autre radical R2 ou R4.

Le peptide de formule générale (IX), dans laquelle R, Rs, Re, R9, Rio, X, m et n sont définis comme précédemment, peut être obtenu par action, dans les conditions habituelles, d'un dipeptide de formule générale (II) dans laquelle R et Rs sont définis comme précédemment, sur un produit de formule générale (III) dans laquelle Rs est défini comme précédemment et R2 et R4 ont les définitions données pour R9 et Rio, suivie du remplacement, le cas échéant, des radicaux R2 et/ou R4, lorsqu'ils représentent un radical alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle, par un radical carboxy sans toucher au reste de la molécule.

En particulier, lorsque Rs forme avec le groupement cardans laquelle Xi représente un atome d'hydrogène ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est éventuellement 4s substituée par un groupement protecteur de la fonction amine, Yt représente un radical hydroxy, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone, benzyloxy, N-glycyle ou N-D alanyle éventuellement estêrifiés et Z'2 a la même définition que Z2, étant entendu que l'un des symboles Z2 ou Z'2 repré-50 sente un radical -SH et que, lorsque Z'2 représente un radical toluènesulfonyle ou méthanesulfonyle, Xi est différent d'un reste glycyle ou D alanyle, dans les conditions décrites précédemment pour l'action d'un produit de formule générale (XXIV) sur un produit de formule générale (XXV), suivie, 55 lorsque Ris représente un groupement protecteur de la fonction amine, du remplacement de ce groupement protecteur par un atome d'hydrogène sans toucher au reste de la molécule, et de l'action d'un dérivé de la L alanine dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou un 6" groupement protecteur de la fonction amine et, dans ce dernier cas, de l'action de l'acide de formule générale (VI) après élimination de ce groupement protecteur,

et lorsque Ris représente un reste L alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur 65 de la fonction amine, de l'action d'un acide de formule générale (VI) après élimination de ce groupement protecteur,

puis élimination, le cas échéant, des groupements protecteurs représentés ou portés par Rs, Y, Xi et Yi sans toucher au

15

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reste de la molécule.

La présente invention concerne également un procédé de préparation des produits de formule générale (I) par synthèse peptidique de Merrifield en phase solide.

Le procédé consiste essentiellement à fixer sur un support approprié un aminoacide ou un peptide de formule générale:

s17-nhçh-s2

w»

x lsJ,

(XXX)

<F

2'n Er6-NHCH-E4

dans laquelle X, m et n sont définis comme précédemment, l'un des symboles R2 ou R4 représente un radical carboxy ou N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D Alanyle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle, Rió représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine et Rn représente un groupement protecteur de la fonction amine, étant entendu que les groupements protecteurs de la fonction amine représentés ou portés par Rn et Ris sont différents, puis après déblocage de la fonction amine protégée par Ri7, à condenser:

soit l'acide D glutamique dont les fonctions amine et a-carboxy sont convenablement protégées, c'est-à-dire le produit de formule générale:

b18-îjhchco-r5

ch2ch2co-oh

E1g-NÏÏÇHC0-raCHC0-E5

|}HoCH„C0-0H

ch,

"■2 2

dans laquelle Rs est défini comme précédemment et Ri 9 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, étant entendu que, lorsque Ri? représente un groupement protecteur de la fonction amine, celui-ci est différent du groupement protecteur Ri 6 du produit de formule générale (XXX), et ensuite à faire éventuellement réagir l'acide de formule générale (VI), après déblocage de la fonction amine protégée par le radical R19, puis à séparer le produit obtenu de son support et à éliminer si nécessaire les groupements protecteurs des fonctions aminés et carboxy.

Selon une variante du procédé, il est possible de fixer sur un support approprié le peptide de formule générale:

BgQ-NHpHCO-Ej io

CH2CH2C0-NHp-E2 x

R,| g- NH-CÏÏ-R^

(XXXIII)

(p

(XXXI)

dans laquelle Rs, Ris, X, m et n sont définis comme précé-15 demment, l'un des symboles r2 ou R4 représente un radical carboxy, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl 20 D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle et r20 représente un groupement protecteur de la fonction amine, étant entendu que les groupements protecteurs de la fonction amine représentés ou portés par R16 et r20 sont différents, puis, après déblocage de la 25 fonction amine protégée par r20, de condenser:

soit un dérivé de la L alanine de formule générale (XXVII), puis après déblocage de la fonction amine protégée par Ri4, l'acide gras de formule générale (VI),

soit un dérivé de la L alanine de formule générale (IV), 3o puis à séparer le produit obtenu de son support et à éliminer, si nécessaire, les groupements protecteurs des fonctions amine et carboxy.

Selon une autre variante du procédé, il est possible de fixer sur un support approprié le peptide de formule géné-35 raie:

B_>-HHCHCO-HHCHCO-Er

21 1 L 5

CH_CH_C0-HHCH-H.

CH,

2 2

dans laquelle Ris représente un groupement protecteur de la fonction amine différent de Ris et Rs représente un radical amino ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par le radical Ris sans toucher à Ris,

soit un dérivé de la L alanine de formule générale (XXVII), puis, après déblocage de la fonction amine protégée par R14, étant entendu que Rm est différent de Ris, l'acide de formule générale (VI),

soit un dérivé de la L alanine de formule générale (IV)

soit le dipeptide de formule générale:

2*m t

(ch.) 2 n h, r-he-ch-e,

(XXXIV)

(XXXII)

16

45

dans laquelle Rs, Ris, X, m et n sont définis comme précédemment, l'un des symboles r2 ou R4 représente un radical carboxy, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carba-50 moyle, alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle, et r21 représente un groupement protecteur de la fonction amine différent du groupement pro-55 tecteur de la fonction amine représenté ou porté par Ris, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par r21, de condenser l'acide de formule générale (VI), puis de séparer le produit obtenu de son support et d'éliminer, si nécessaire, les groupements protecteurs des fonctions amine et carboxy. 60 La synthèse peptide de Marrifield peut aussi être mise en œuvre en fixant sur un support approprié un produit de formule générale (XXXI) ou (XXXII) dans lesquelles Rs représente un radical hydroxy, les symboles Ris et R19 sont respectivement définis comme précédemment et le radical y-car-65 boxy est protégé, puis, après déblocage de ce groupement protecteur puis activation de la fonction acide, en faisant réagir le produit de formule générale (XXX) dont les fonctions aminés et carboxy sont convenablement protégées, puis, le

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cas échéant selon les significations de Ris et Ru, un acide de formule générale (VI) ou le dérivé de la L alanine de formule générale (XXVII) et, selon la signification de Rm, éventuellement l'acide de formule générale (VI).

Lorsque dans la formule générale (I), l'un des symboles R2 ou R4 représente un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle, il est possible de fixer sur un support convenable la glycine ou la D alanine dont la fonction amine est protégée, puis, après déblocage de la fonction amine, de condenser un aminoacide ou un peptide de formule générale:

e22-mch-e2

(pn2)

J

m

E,rBE CH-E4

dans laquelle Ri 6, X, m et n sont définis comme précédemment, l'un des symboles R2 ou R4 représente un radical carboxy et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle, et R22 représente un groupement protecteur de la fonction amine différent de Ru ou un reste d'un D aminoacide de formule générale:

e23-hhçhco-r5

chgchgco—oh

(xxx71)

dans laquelle Rs est défini comme précédemment et R23 représente un groupement protecteur de la fonction amine différent de Ria ou un reste d'un L aminoacide de formule générale:

h_.-hhch-cooh 24 I ch,

(XXXVTl)

dans laquelle R24 représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste d'acide gras défini précédemment, étant entendu que les groupements protecteurs représentés par R22, R23 et R24 sont différents de Ri 6 et peuvent être sans toucher à ce dernier, puis lorsque R22 représente un groupement protecteur de la fonction amine, d'éliminer ce groupement protecteur, puis de condenser:

soit un dérivé de l'acide D glutamique de formule générale (XXXVI) dans laquelle R23 représente un groupement protecteur de la fonction amine, puis, après élimination de R23, de condenser un dérivé de la L alanine de formule générale (XXXVII) dans laquelle R24 est défini comme précédemment et, lorsque R24 représente un groupement protecteur de la fonction amine, d'éliminer le radical R24, puis de condenser l'acide de formule générale (VI),

soit un dérivé de l'acide D glutamique de formule générale (XXXVI) dans laquelle R23 représente un reste d'un L aminoacide de formule générale (XXXVII) dans laquelle R24 est défini comme précédemment, et, lorsque R24 représente un groupement protecteur de la fonction amine, d'éliminer le radical R24 puis de condenser l'acide gras de formule générale (VI),

lorsque R22 représente un reste d'un aminoacide de for-5 mule générale (XXXVI) dans laquelle R23 représente un groupement protecteur de la fonction amine, d'éliminer ce groupement protecteur, puis de condenser un dérivé de la L alanine de formule générale (XXXVII) dans laquelle R24 est défini comme précédemment et, lorsque R24 représente un 10 groupement protecteur de la fonction amine, d'éliminer le radical R24, puis de condenser l'acide gras de formulé générale (VI), et lorsque R22 représente un reste d'aminoacide de formule générale (XXXVI) dans laquelle R23 représente un reste d'un 15 L aminoacide de formule générale (XXXVII) dans laquelle R24 représente un groupement protecteur de la fonction amine, d'éliminer le radical R24 puis de condenser l'acide gras de formule générale (VI).

Lorsque dans la formule générale (I), R3 représente un 20 reste glycyle ou D alanyle, l'introduction d'un tel radical peut être effectuée à n'importe quel stade de la synthèse de Merri-field. Par exemple il est possible dë fixer sur un support approprié le produit de formule générale (XX) dans laquelle Ru représente un groupement protecteur de la fonction 25 amine différent de Rn, puis d'éliminer Ri6 sans toucher à Rn et de condenser un dérivé de la glycine ou de la D alanine dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine différent de Rn puis, après élimination de Rn, de condenser le produit de formule générale 30 (XXXI) ou (XXXII) dans les conditions indiquées précédemment, ou bien il est possible de fixer sur un support approprié le produit de formule générale (XXX) dans laquelle Rió représente un groupement protecteur de la fonction amine, puis de condenser un produit de formule générale (XXXI) ou 35 (XXXII) dans les conditions indiquées précédemment, puis après élimination de Ris de condenser la glycine ou la D alanine dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur.

Les supports qui conviennent particulièrement bien sont io les copolymères styrène-divinylbenzène chlorométhylés ou hydroxyméthylés. De préférence le copolymère styrène-divi-nylbenzène (98-2 ou 99-1 : chlorométhylé est utilisé.

La fixation des peptides de formule générale (XXX), (XXXI), (XXXII), (XXXIII) ou (XXXIV) sur le support 45 chlorométhylé s'effectue selon les méthodes habituelles, en particulier en faisant réagir le peptide de formule générale (XXX), (XXXI), (XXXII), (XXXIII) ou (XXXIV) en solution dans un solvant organique tel que l'éthanol et en présence d'une accepteur d'acide tal que la triéthylamine. Il est 50 particulièrement avantageux de chauffer le mélange réaction-nel jusqu'à une température voisine de la température d'ébul-lition du mélange réactionnel.

Les groupements protecteurs des fonctions aminés des peptides de formule générale (XXX), (XXXI), (XXXII), 55 (XXXIII) ou (XXXIV) doivent être choisis de telle manière que leur élimination s'effectue sans toucher à la liaison pep-tide-support. En particulier les radicaux Rn, Ris, Rio, R20 et R21 doivent être différents du radical Ri 6 et être tels que leur élimination s'effectue sans toucher au groupement protecteur so Ri a et à la liaison peptide-support.

Généralement les fonctions esters représentées ou portées par R2, R4 ou Rs sont choisies de telle manière que, lors de la coupure de la liaison peptide-support, les radicaux R2, R4 ou Rs puisssent être soit conservés, soit transformés en radicaux 65 carboxy ou carbamoyle selon que la coupure est une hydrolyse acide, une alcoolyse ou une ammonolyse.

Plus particulièrement la liaison peptide-support, qui est de nature benzylique, est coupée par traitement au moyen

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d'un mélange acide bromhydrique-acide trifluoroacétique en régénérant une fonction acide.

Les nouveaux peptides de formule générale (I) peuvent être éventuellement purifiés par des méthodes physiques (telles que la cristallisation ou la Chromatographie) ou chimiques (telles que formation d'un sel, cristallisation de celui-ci puis décomposition).

Les nouveaux produits selon l'invention peuvent être transformés en sels d'addition avec les acides ou en sels métalliques ou en sels d'addition avec les bases organiques selon la nature des substituants.

Les sels d'addition avec les acides peuvent être obtenus par action des nouveaux produits sur des acides dans un solvant approprié. Gébéralement on solubilise le produit dans l'eau par addition de la quantité théorique d'acide puis on lyophilise la solution obtenue.

Les sels métalliques ou les sels d'addition avec les bases organiques peuvent être obtenus par action des nouveaux composés sur des bases minérales ou organiques dans un solvant approprié. Généralement on solubilise le produit dans l'eau par addition de la quantité théorique de base puis on lyophilise la solution obtenue.

Les nouveaux composés selon la présente invention sont des adjuvants et des stimulants de l'immunité: ils augmentent les réactions d'hypersensibilité et/ou la production d'anticorps circulants vis-à-vis des antigènes avec lesquels ils sont administrés et ils stimulent de manière non spécifique des réactions de défense contre certaines infections (par exemple l'infection de la souris par la bactérie intracellulaire Listeria monocytogenes).

D'un intérêt tout particulier sont les produits de formule générale (I) dans laquelle RCO- représente un reste d'acide gras dans lequel R représente un radical alcoyle contenant 2 à 21 atomes de carbone, éventuellement substitué par un radical hydroxy, Ri représente un radical hydroxy ou amino, les symboles R2 et R4, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle, étant entendu que R: et R4 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène, R3 représente un atome d'hydrogène ou un reste glycyle ou D alanyle, étant entendu que, lorsque R2 et R4, identiques ou différents, représentent chacun un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle, R3 représente un atome d'hydrogène, X représente un atome de soufre, m et n, identiques ou différents, représentent chacun un nombre entier égal 1 ou 2, étant entendu que l'alanine liée à l'acide glutamique est sous forme L, l'acide glutamique est sous forme D, la lanthionine, lorsque m et n sont égaux à 1, la cystathionine, lorsque m et n sont différents, l'homolanthionine, lorsque m et n sont égaux à 2, sont sous forme D, D; L, L; DD, LL (racémique) ou D, L (méso) ou sous forme des mélanges L, méso ou D, méso, et la thialysine, lorsque l'un des symboles R2 ou R4 représente un atome d'hydrogène, est sous forme L ou D ou D, L.

In vitro, ils sont actifs à des concentrations molaires généralement comprises entre 10"3 et 10~8, en particulier dans les tests suivants :

stimulation de la synthèse de l'ADN (pouvoir mitogène) selon la technique de G. Marchai, Ann. Immunol. (Inst. Pasteur), 125 C, 519 (1974)

stimulation de la production d'anticorps selon la technique de P.H. Klesius, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. (N.Y.), 135, 155 (1970) et H. van Dijk et N. Bloksma, J. Immunol. Methods, 14, 325 (1977)

augmentation du nombre de macrophages phagocytaires selon la technique de J. Michl et coll., J. exp. Med., 144, 1465 (1976)

augmentation de l'activité cytostatique des macrophages d'un exsudât péritonéal vis-à-vis des cellules tumorales.

In vivo, chez la souris, à des doses comprises entre 1 et 30 mg/kg, ils augmentent l'hypersensibilité retardée et la production d'anticorps en particulier selon la technique de T.E. Miller et coll., J. Nat. Cancer Inst., 51, 1669 (1973).

Chez la souris, ils stimulent les réactions de défense contre l'infection soit à Listeria monocytogenes, soit à Klebsiella pneumoniae à des doses comprises entre 1 et 100 mg/kg selon la technique de R.M. Fauve et B. Hevin, C.R. Acad. Sci. (D), 285,1589 (1977).

Chez la souris, ils stimulent le pouvoir d'élimination du carbone colloïdal par le système réticulo-endothélial suivant la technique de B.N. Halpern et coll., Ann. Institut Pasteur, 80, 582 (1951).

Les exemples suivants, donnés à titre non limitatif, illustrent la présente invention.

Les produits selon la présente invention peuvent former des complexes avec les métaux alcalins ou alcalino-terreux; il en résulte que les résultats de l'analyse élémentaire des produits peuvent sensiblement s'écarter des valeurs théoriques. Cependant la structure des produits est confirmée par le rapport C/N ou C/S qui est en accord avec la théorie, par la teneur en acides aminés, et par leur homogénéité en Chromatographie sur couche mince de silicagel.

Les conditions d'hydrolyse utilisées pour déterminer le rapport des acides aminés entre eux [acide chlorhydrique concentré-acide acétique anhydre (1-1 en volumes) à 96 °C pendant 5 heures selon la méthode de I. Photaki, J ; Chem. Soc., Perkin 1,2599 (1979)] sont des conditions qui ne racémi-sent pas la lanthionine mais sont insuffisantes pour rompre entièrement la liaison amide entre l'acide gras et l'alanine.

Exemple 1

On ajoute 1 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 5 °C, de 3,9 g de N-(N-lauroyl L alanyl) a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 200 cm3 de tétrahydrofuranne et de 1,1 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 40 minutes à — 5°C, puis on ajoute une solution refroidie à 0°C de 2,7 g de Na-benzyloxycarbonyl L lanthionine dans 158 cm3 de soude 0,1 N. Le mélange réac-tionnel est agité pendant 20 minutes à 0°C, puis pendant 16 heures à 20 °C environ. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C; le concentrât est acidifié à pH 2 par addition d'environ 30 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N, extrait 3 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées avec 50 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur sulfate de sodium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 40 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 200 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 200 C. On obtient ainsi 2,25 g de poudre amorphe à laquelle on ajoute 0,45 g d'un produit similaire obtenu dans une autre préparation. Ce mélange est chromatographié sur 50 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,3 cm de diamètre, pour cela, on dissout les 2,70 g de produit dans 200 cm3 d'acétate d'éthyle bouillant et à la solution obtenue, on ajoute 5 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec 300 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane (2-8 en volumes), 150 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane (1-1 en volumes), 750 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane (3-1 en volumes), 1,2 litre d'acétate d'éthyle, 850 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 51 à 70 sont réunies,

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concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le résidu est trituré dans 200 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé 2 fois par 100 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 1,86 g d'acide N2-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl) y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélique.

Rf=0,45 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)]

Dans une solution de 1,8 g d'acide N2-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alany) y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélique dans 50 cm3 d'acide trifluoracé-tique, on envoie un courant d'acide bromhydrique pendant 5 heures Vi. Ensuite, le mélange réactionnel est purgé avec de l'azote pendant 10 minutes, débarrassé d'un léger insoluble par filtration et concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration et lavé 2 fois par 60 cm3 au total d'éther. On obtient ainsi 1,06 g d'une poudre amorphe très hygroscopique que l'on dissout dans 50 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,9 N dans l'acide acétique. Cette solution est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le résidu est dissous dans 5 cm3 d'acide acétique anhydre et jeté dans 1 litre d'éther. Le précipité ainsi formé est séparé par filtration, lavé avec 100 cm3 d'éther, séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20°C et dissoud dans 10 cm3 d'eau. La solution ainsi obtenue se gélifie au bout de Vi heure; elle est alors diluée par 500 cm3 d'eau. Le précipité ainsi formé est séparé par filtration, dissout dans 5 cm3 d'acide acétique et jeté dans 800 cm3 d'éther. Le nouveau précipité ainsi formé est séparé par filtration, lavé 3 fois avec 300 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 380 mg d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L, L diamino-2,6 thia-4 pimélique contenant 2,1% d'eau.

Rf = 0,25 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse; Cale. % C 52,87 H 7,85 N 9,48 S 5,43 Tr. C 49,5 H 7,9 N 8,7 S 5,2

Cendres sulfuriques: 2,1%

Après hydrolyse dans un mélange acide chlorhydrique concentré-acide acétique anhydre (1-1 en volumes) pendant 5 heures à 96 °C, l'analyse sur autoanalyseur BIOTRONIK révèle la présence des acides aminés suivants :

Lan 1,00 (théorie = 1)

méso Lan 0 (théorie = 0)

Glu 1,02 (théorie = 1)

La Na-benzyloxycarbonyl L lanthionine peut être préparée selon la méthode de I. Photaki et coll., J. Chem. Soc. Perkin I, 2599(1979).

Le N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé selon l'une des deux méthodes suivantes :

a) A une solution de 12,75 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans 75 cm3 de soude 1 N, on ajoute simultanément en 37 minutes, 8 g de chlorure de lau-royle dissous dans 75 cm3 d'éther et 37,4 cm3 de soude 1 N de façon à maintenir le pH du mélange réactionnel compris entre 8 et 9. Le mélange est agité pendant 1 heure 20 minutes. Après décantation, la phase aqueuse est acidifiée à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 1 N (60 cm3) et extraite 3 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques réunis sont lavés par 25 cm3 d'eau, séchés sur du sulfate de sodium anhydre et concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 45 ° C. On obtient ainsi 7,4 g d'un solide blanc que l'on Chromatographie sur 80 g de gel de silice neutre contenus dans une colonne de 2 cm de diamètre.

On élue successivement par 100 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes) et 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes), en recueillant des fractions de 50 cm3. La fraction est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45 °C. On obtient ainsi 2 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle fondant à 130°C. Les fractions 2 à 4 sont de même concentrées à sec et chromatographiées sur 100 g de gel de silice neutre (0,063-0,20 mm) contenus dans une colonne de 2 cm de diamètre. On élue par 250 cm3 d'acétone en recueillant des fractions de 25 cm3. Les fractions 1 et 2 sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45 °C. On obtient ainsi 4,07 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle fondant à 130°C dont les caractéristiques sont les suivantes:

Rf=0,9 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Cale. % C 66,10 H 8,63' N5,71 Tr. C 66,3 H 8,8 N 5,6

b) On ajoute 31 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à une température voisine de 10 °C, de 47,75 g d'acide laurique dans 3 litres de dioxanne et 33,3 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 10 °C, puis on ajoute en 10 minutes une solution, refroidie à 10 "C, de 88,95 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle, dans un mélange de 1 litre de dioxanne, de 476 cm3 d'eau et de 476 cm3 de soude 1 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à 10°C, puis pendant 18 heures à une température voisine de 20°C; il est ensuite dilué par addition de 4 litres d'eau, acidifié à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 1 N (environ 475 cm3) et conservé pendant 2 heures à 0°C. Le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé successivement par 500 cm3 d'eau et 500 cm3 d'éther, puis séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20 °C. Le produit est mis en suspension dans 800 cm3 d'éther, agité pendant 1 heure, séparé par filtration et lavé 2 fois par 200 cm3 au total d'éther. Après séchage sous pression réduite (10 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C, on obtient 71,79 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle fondant à 130°C.

Rf = 0,77 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (4-1 en volumes)].

Le chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 97,16 g de N-t.butyloxycarbonyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans 970 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures, puis on ajoute rapidement 3,8 litres d'éther anhydre et on laisse reposer pendant 2 heures à 0°C. Le précipité huileux qui s'est formé, séparé du surnageant par décantation, est dissout dans 500 cm3 d'acétone; la solution ainsi obtenue est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 88,9 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle.

Le N-t.butyloxycarbonyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé selon la méthode de E. Bricas et coll., Biochemistry 9, 823 (1970).

Exemple 2

On ajoute 2,6 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à -5°C, de 9,12 g de N-(N-lauroyl L alanyl) a-D glutamate de t.butyle dans un mélange de 440 cm3 de tétrahydrofuranne et de 2,8 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5°C, puis on ajoute une solution refroidie à 2°C de 6,82 g d'acide N6-benzyloxycarbo-nyl diamino-2 (L), 6 (D, L) thia-4 pimélamique dans un mélange de 20 cm3 de soude N et 172 cm3 d'eau.

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Le mélange réactionnel est agité pendant 5 minutes à 0°C, puis pendant 20 heures à 20 °C environ. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C; le concentrât est refroidi à 0°C, acidifié à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 1 N (23 cm3 environ). Le précipité formé est séparé par filtration, lavé par 100 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1 N puis 2 fois par 400 cm3 au total d'eau et séché à l'air libre. On obtient ainsi 11,8 g d'une poudre légèrement colorée en vert que l'on Chromatographie sur 250 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 4 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 11,8 g de poudre dans 150 cm3 d'acide acétique et à la solution obtenue, on ajoute 20 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50° C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec 1 litre d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (98-2 en volumes) et 3,2 litres d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 17 à 42 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 150 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 6,3 g d'acide N2-[0'-t.butyl N-(N-lau-royl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 6 (D, L) thia-4 pimélamique.

RF = 0,83 [silicagel; acide acétique-acétate d'éthyle (3-1 en volumes)]

Rf=0,63 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Spectrométrie de masse = M = 779 (théorie = 779) On dissout 6,3 g d'acide N2-[0'-t.butyl N-(N-lauroyI L alanyl)-y D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique dans un mélange refroidi à 0°C de 27,5 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 35% dans l'acide acétique, 9 cm3 de diéthylphosphite et 14 cm3 de di-éthylsulfure. On agite le milieu réactionnel pendant 1 heure '/4, puis on le verse dans 2 litres d'éther anhydre refroidi à 0°C. On agite le mélange pendant 2 heures ; le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé 4 fois par 1,2 litre au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa). On obtient ainsi 7,5 g d'une poudre beige clair, hygroscopi-que, que l'on Chromatographie sur 300 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 4 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 7,5 g de poudre dans un mélange de 100 cm3 de méthanol et 4 cm3 d'ammoniaque (d = 0,92) et, à la solution ainsi obtenue, on ajoute 16 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue avec 1,53 litre d'un mélange méthanol-acétate d'éthyle (8-2 en volumes) en recueillant des fractions de 30 cm3. Les fractions 35 à 51 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché à 40 °C sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa). On obtient ainsi 4,05 g d'acide N2-[N-(N-lauroyI L aIanyl)-y-D glutamyl] diamino-2(L), 6 (D, L) thia-4 pimélamique.

Rf=0,41 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Spectrométrie de masse: M = 589 (théorie = 589)

Analyse: Cale % C 52,95 H 8,03 NI 1,88 S 5,44 Tr. C 48,6 H 7,4 N 10,9 S 4,9

Le N-(N-lauroyl L alanyl) a-D glutamate de t.butyle peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 55 g de N-(N-lauroyl L alanyl)-D glutamate de «-t.butyle et de y-benzyle dans 4,7 litres de t.butanol. On ajoute 55 g de palladium sur noir (à 3% de palladium), puis on fait passer un lent courant d'hydrogène pendant 7 heures. Après filtration, on concentre à sec le milieu réactionnel sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa - puis 0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 47,1 g d'huile épaisse que l'on dissout dans 500 cm3 d'une solution saturée de bicarbonate de sodium. Cette solution est extraite 2 fois par 500 cm3 au total d'acétate d'éthyle, la phase acétate d'éthyle est lavée avec 200 cm3 d'une solution saturée de bicarbonate de sodium. Les phases aqueuses réunies sont acidifiées à pH 3-4 par addition d'acide citrique, extraites 3 fois par 600 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Cette dernière phase organique est séchèe sur sulfate de sodium et concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 36,5 g de N-(N-lauroyl L alanyl) a-D glutamate de t.butyle sous forme d'une huile cristallisant à 20 °C.

Rf: 0,67 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)]

Spectrométrie de masse: M = 456 (théorie = 456)

Le N-(N-lauroyl L alanyl) D glutamate de a-t.butyle et de y-benzyle peut être préparé de la façon suivante :

On ajoute 23,2 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue vers - 7°C, de 48 g de N-lauroyl L alanine dans un mélange de 300 cm3 de tétrahydrofuranne et de 24,9 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes vers - 7°C, puis on ajoute une solution de 80 g de D glutamate de a-t.butyle et de y-benzyle dans 330 cm3 de tétrahydrofuranne. Le mélange réactionnel est agité pendant 30 minutes à une température voisine de 0°C, puis pendant 16 heures à une température voisine de 20 °C ; il est ensuite filtré. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à45°C. L'huile résiduelle obtenue est reprise par 1,5 litre d'acétate d'éthyle, refroidi vers 5°C, lavé successivement par 400 cm3 d'une solution saturée et glacée d'acide citrique, 4 fois par 1,2 litre au total d'une solution saturée de bicarbonate de sodium et 300 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium. Après séchage sur sulfate de sodium, la phase organique est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45°C. On obtient 79 g d'huile jaune pâle qui est chromatographiée sur une colonne de 8 cm de diamètre contenant 2,4 kg de silice neutre (0,063-0,2 mm). On élue successivement par 3 litres d'un mélange de cyclohexane-acétate d'éthyle (85-15 en volumes), 2,4 litres d'un mélange de cyclohexane-acétate d'éthyle (80-20 en volumes), 15,6 litres d'un mélange de cyclohexane-acétate d'éthyle (75-25 en volumes), 2,4 litres d'un mélange de cyclohexane-acétate d'éthyle (70-30 en volumes), 2,4 litres d'un mélange de cyclohexane-acétate d'éthyle (65-35 en volumes), 3 litres d'un mélange de cyclohexane-acé-tate d'éthyle (60-40 en volume), 4,2 litres d'un mélange de cyclohexane-acétate d'éthyle (50-50 en volumes) et 4,2 litres d'un mélange de cyclohexane-acétate d'éthyle (40-60 en volumes) en recueillant des fractions de 600 cm3. Les fractions 34 à 60 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 40°C. On obtient ainsi 55 g de N-(N-lauroyl L alanyl)-D glutamate de a-t.butyle et de y-benzyle sous forme d'huile jaune.

Rf=0,55 [silicagel; cyclohexane-acétate d'éthyle (1-1 en volumes)]

Le D-glutamate de a-t.butyle et de y-benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute en 15 minutes, 49 cm3 d'acide sulfurique (d= 1,83) à une suspension, refroidie vers 13 °C, de 64 g de D glutamate de y-benzyle dans 500 cm3 de dioxanne. A la solution ainsi obtenue, maintenue vers 13 °C, on fait passer un courant d'isobutène pendant 40 minutes; ensuite le milieu réactionnel est conservé à 20 °C pendant 16 heures, puis de nouveau, on y fait passer un courant d'isobutène pendant 4

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heures et on laisse au repos pendant 20 heures. On ajoute alors, en 10 minutes, le mélange réactionnel à un mélange de 2,6 litres de soude N et de 4,15 litres d'éther, refroidi vers 0°C. On sépare la phase organique, on extrait la phase aqueuse avec 1 litre d'éther. Les phases organiques ainsi obtenues sont réunies, séchées sur sulfate de sodium et concentrées sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 32 °C. On obtient ainsi 80 g de D glutamate de a-t.butyle et de y-benzyle, contenant environ 20% de dioxanne et 10%

d'alcool benzylique. Une concentration sous pression plus faible ou à température plus élevée diminue le rendement. Ce produit ainsi obtenu doit être utilisé dans les quelques jours qui suivent l'isolement.

Le N-lauroyl L alanine peut être préparé selon la méthode de E. Jungermann et coll., J. amer. Chem. Soc. 78, 172 (1956).

Le D glutamate de y-benzyle peut être préparé selon la méthode de P. Lefrancier et E. Bricas, Bull. soc. Chim.

France, 1965,3668.

L'acide N6-benzyloxycarbonyI diamino-2(l), 6(D, L) thia-4 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 24,3 g de potasse en pastilles dissous dans 280 cm3 d'éthanol anhydre dans une solution de 25,35 g de L cystéine, chlorhydrate, hydrate, dans 280 cm3 de diméthylfor-mamide. A la bouillie ainsi obtenue, on ajoute 56,65 g de N-benzyloxycarbonyl O-p.toluènesulfonyl D, L sérinamide dissous dans 280 cm3 d'éthanol anhydre. On agite le mélange réactionnel pendant 5 heures à 20 °C, ensuite on filtre l'insoluble, on le lave 2 fois par 60 cm3 au total d'éthanol. Les filtrats réunis sont concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 60°C. Le résidu semi-cristal-lisé ainsi obtenu est repris par 300 cm3 d'eau tiédie à 50 °C, l'insoluble est séparé par filtration, le filtrat est refroidi à 0°C, acidifié à pH 6-7 par addition de 5,5 cm3 d'acide acétique anhydre et conservé à 0°C pendant 20 heures. L'insoluble est séparé par filtration, lavé successivement 2 fois par 200 cm3 au total d'eau, 2 fois par 120 cm3 au total d'éthanol et 100 cm3 d'oxyde d'isopropyle, séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient 27 g d'acide N6-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique fondant avec décomposition vers 185°C.

Rf = 0,50 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Spéctrométrie de masse: M = 341 (théorie = 341)

[a]20 436= +6° (acide chlorhydrique N; c= 1)

Après hydrolyse dans un mélange acide chlorhydrique concentré-acide acétique anhydre (1-1 en volumes) pendant 5 heures à 96 °C, l'analyse sur autoanalyseur BIOTRONIK révèle la présence des acides aminés suivants:

Lan 0,45 (théorie = 0,5)

méso Lan 0,55 (théprie = 0,5)

Le N-benzyloxycarbonyl O-p.toluènesulfonyl D, L sérinamide peut être préparé selon la méthode de L.Benoiton et coll., J. Chem. Soc. p. 824 (1964).

Exemple 3

On ajoute 0,53 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à - 5 ° C, de 720 mg de N-t.butyloxycar-bonylglycine dans un mélange de 60 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,57 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 0°C de 2,55 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl) -y-D glutamyl] diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique dans 50 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant quelques minutes à 0°C, puis pendant 18 heures à 15°C environ. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45°C; le concentrât est acidifié à pH 2 par addition de 1 cm3 d'acide acétique, extrait 3 fois par 90 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées par 10 cm3 d'eau, séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45°C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 2,72 g de poudre organée que l'on Chromatographie sur 115g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,5 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 2,72 g de poudre dans 40 cm3 d'acide acétique et, à la solution obtenue, on ajoute 12 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 55 °C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec 1,68 litre d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes) et 1,5 litre d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) en recueillant des fractions de 60 cm3. Les fractions 14 à 53 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché sous pression réduite (20 cm3 de mercure; 2,7 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 1,8 g d'acide N2-[N-(N-lau-royl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-t.butyloxycarbonylglycyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique.

Rf=0,43 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

On dissout 1,8 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl Lalanyl)-y-D glutamyl] N6-t.butyloxycarbonylglycyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique dans 36 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. On agite le mélange réactionnel pendant 2 heures, puis on le débarrasse d'un très léger insoluble par filtration; dans le filtrat, on ajoute 15 cm3 d'éther et on agite pendant Va d'heure. Le précipité apparu est séparé par filtration, lavé 3 fois par 60 cm3 au total d'éther, séché sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 1,44 g de poudre que l'on dissout dans 25 cm3 d'eau. On ajoute successivement 0,5 cm3 de triéthylamine et 0,5 cm3 d'acide acétique. Après Va d'heure de repos dans un bain à 0°C, on sépare le précipité formé par filtration, le lave 2 fois par 10 cm3 au total d'eau et le sèche sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 1,18 g de poudre que l'on Chromatographie sur 42 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,5 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 1,18 g de poudre dans 50 cm3 de méthanol contenant 0,25 cm3 d'ammoniaque concentrée et à la solution obtenue, on ajoute 5 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50° C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue avec du méthanol en recueillant des fractions de 30 cm3. Les fractions 14 à 26 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 630 mg d'acide N2-[n-(N-lauroyl L ala-nyl)-y-D glutamyl] N6-glycyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique.

Rf = 0,30 [silicagel ; n. butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Cale % C 52,00 H 7,79 N 12,99 S 4,96 Tr. C 49,1 H 7,7 N 12,0 S 4,6

Glu = 0,92 (théorie = 1 )

Gly= 1,03 (théorie= 1)

Lan = 0,55 (théorie = 0,5)

méso Lan = 0,45 (théorie = 0,5)

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

21

653 039

Exemple 4

On ajoute 0,3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à -5°C, de 1,05 g de N-(N-lauroyl L alanyl)-a-D glutamate de t.butyle dans un mélange de 45 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,32 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5°C, puis on ajoute une solution refroidie à 0°C de 1 g de chlorhydrate de N6-benzyloxycarbonyl diamino-2 (mélange D et L), 6(L)

thia-4 pimélamoyl-glycine dans un mélange de 4,6 cm3 de soude 1 N, 23 cm3 d'eau et 17 cm3 de tétrahydrofuranne. Le mélange réactionnel est agité pendant quelques minutes à 0°C, puis pendant 20 heures à 20 °C environ, ensuite on acidifie à pH 3 par addition de 2,5 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure ; 20 mm de mercure) à 50°C. Le concentrât est dilué par addition de 25 cm3 d'eau; le précipité apparu est séparé par filtration, lavé 3 fois par

15 cm3 au total d'eau distillée et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 1,82 g de poudre que l'on Chromatographie sur 91 g de gel de silice (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,5 cm de diamètre. On élue successivement par 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) et 200 cm3 d'acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions

16 à 21 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 510 mg de N2-[0'-t.butyl N-(N-lauroyI L alanyl)-y-D glutamyl] N-benzyloxycarbonyl diamino-2 (mélange D et L), 6(L) thia-4 pimélamoyl-glycine.

Rf=0,76 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

On dissout 470 mg de N2-[0'-t.butyl N-(N-lauroyl L ala-nyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyI diamino-2 (mélange D et L), 6(L) thia-4-pimélamoyl-glycine dans 5 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 33% dans l'acide acétique. On agite le mélange réactionnel pendant 40 minutes à 20°C, le purge pendant 10 minutes par un barbotage d'azote et le concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa puis 0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans 20 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé par 5 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 530 mg de poudre orangée que l'on dissout dans 20 cm3 d'eau. A cette solution, on ajoute 0,2 cm3 de triéthylamine puis 0,2 cm3 d'acide acétique. On refroidit le milieu réactionnel à 0°C pendant 15 minutes. Le précipité ainsi formé est séparé par filtration, lavé 5 fois par 10 cm3 au total d'eau et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20°C. On obtient 360 mg de poudre que l'on chromtographie sur 36 g de gel de silice (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,5 cm de diamètre. On élue avec du méthanol en recueillant des fractions de 5 cm3. Les fractions 5 à 16 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50 °C. On obtient ainsi 160 mg de N2[N-(N-lau-royl L alanyl)-y-D glutamyl] diamino-2 (mélange D et L), 6(L) thia-4 pimélamoyl-glycine.

Rf = 0,26 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Cale. % C 52,00 H 7,79 N 12,99 S 4,96 Tr. 47,1 H 7,3 N 11,4 S 4,6

Après hydrolyse dans un mélange acide chlorhydrique concentré-acide acétique anhydre (1-1 en volumes) pendant 5 heures à 96°C, l'analyse sur autoanalyseur BIOTRONIK révèle la présence des acides aminés suivants:

Glu = 1,00 (théorie = 1 )

Gly= 1,02 (théorie = 1)

Lan = 0,60

méso Lan = 0,37, (théorie = 1)

Une fraction supplémentaire de 90 mg de N2-[N-(N-lau-royl L alanyl)-y-D glutamyl] diamino-2 (mélange D et L), 6 (L)thia-4 pimélamoyl-glycine peut être obtenue de la façon suivante: les fractions 3 et 4 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C et chromatographiées sur 22 g de gel de silice (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,5 cm de diamètre. Un élue avec du méthanol en recueillant des fractions de 5 cm3. On réunit les fractions 7 à 18, les concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C et les sèche sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50°C.

Le N6-benzyloxycarbonyl diamino-2 (mélange D et L), 6(L) thia-4 pimélamoyl-glycine peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 2 g de N2-t.butyloxycarbonyl N-benzyloxycarbonyl diamino-2 (mélange D et L), 6(L) thia-4 pimélamoyl-glycinate de t.butyle dans 20 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,65 N dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures à 20 °C. Ensuite, on ajoute au mélange réactionnel 50 cm3 d'éther. On obtient un précipité blanc que l'on sépare par filtration, lave 2 fois par 20 cm3 au total d'éther et sèche sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 1,13 g de chlorhydrate de N-benzyloxycarbonyl diamino-2 (mélange D et L), 6(L) thia-4 pimélamoyl-glycine.

Rf=0,38 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Lan = 0,59, méso Lan = 0,34 (théorie = 1)

Gly = 1,00 (théorie = 1)

Le N2-t.butyloxycarbonyl N6-benzyloxycarbonyl diamino-2 (mélange D et L), 6(L) thia-4 pimélamoyl-glycinate de t.butyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 253 mg de potasse en pastilles dissous dans 9 cm3 d'éthanol anhydre dans une solution de 1,14 g de N-benzyloxycarbonyl L cystéinamide dans 9 cm3 de diméthyl-formamide. Cette solution ainsi obtenue est ajoutée dans une suspension de 1,98 g de N-t.butyloxycarbonyl O-p.toluènesulfonyl L séryl-glycinate de t.butyle dans 9 cm3 d'éthanol. On agite le mélange réactionnel pendant 4 heures à 20 °C. On obtient ainsi une solution jaune pâle que l'on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 60°C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'eau, conservé à 5°C pendant 48 heures, séparé par filtration, lavé par 10 cm3 d'eau et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 2,1 g de N2-t.butyloxycarbonyl N6-benzyloxycarbonyl diamino-2 (mélange D et L), 6(L)

thia-4 pimélamoyl-glycinate de t.butyle sous forme de poudre blanche.

Rf = 0,72 [silicagel ; acétate d'éthyle].

Spectrométrie de masse = M = 554 (théorie = 554)

Lan = 0,59

méso Lan = 0,34, (théorie = 1)

Gly= 1,00, (théorie = 1)

Le N-t.butyloxycarbonyl O-p.toluènesulfonyl L sérylglyci-nate de t.butyle peut être préparé de la façon suivante:

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

653 039

22

En 3 minutes, on ajoute par petites portions 3,09 g de chlorure de p.toluènesulfonyle à une solution refroidie à — 6°C de 2,58 g de N-t.butyloxycarbonyl L séryl-glycinate de t.butyle dans 9 cm3 de pyridine. On maintient le mélange réactionnel pendant 2 heures à — 6°C, ensuite on le verse sur 60 g de glace pilée et conserve le mélange pendant 20 heures à 4°C. Le précipité ainsi obtenu est séparé par filtration, lavé 5 fois par 100 cm3 au total d'eau, séché sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20° C et recristallisé dans 100 cm3 d'éthanol. On obtient ainsi 2,54 g de N-t.butyloxycarbonyl O-p.toluènesulfonyl L sérylglycinate de t.butyle fondant à 180-182°C.

Rf=0,91 [silicagel; acétate d'éthyle]

Le N-t.butyIoxycarbonyl L séryl-glycinate de t.butyle peut être préparé de la façon suivante:

Dans uns solution refroidie à 5 °C, de 6,16 g de N-t.buty-loxycarbonyl L sérine et de 3,93 g de glycinate de t.butyle dans 100 cm3 de chlorure de méthylène, on ajoute 6,81 g de . dicyclohexylcarbodiimide. On agite le mélange réactionnel pendant 30 minutes à 5°C, puis pendant 18 heures à 20°C environ. Le précipité de dicyclohexylurée formé est séparé par filtration, lavé 2 fois par 40 cm3 au total de chlorure de méthylène. Les phases organiques réunies sont lavées successivement 3 fois par 90 cm3 au total d'une solution saturée de bicarbonate de sodium, 2 fois par 60 cm3 au total d'eau, séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 10,22 g d'huile que l'on Chromatographie sur 100 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3,4 cm de diamètre. On élue successivement avec 500 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (1-1 en volumes) et 600 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (1-3 en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 5 à 8 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 2,64 g de N-t.butyloxycarbonyl L séryl-glycinate de t.butyle sous forme d'huile cristallisant lentement.

Rf= 0,68 [silicagel; acétate d'éthyle]

Exemple 5

On ajoute 1,3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 10°C, de 4,56 g de N-(N-lauroyl L alanyl)-a-D glutamate de t.butyle dans un mélange de 230 cm3 de tétrahydrofuranne et de 1,4 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 25 minutes à — 10 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 0°C de 3,78 g de chlorhydrate d'acide N2-benzyloxycarbonyl diamino-2 (L), 6 (D, L) thia-4 pimélamique dans 100 cm3 de soude 0,1 N.

Le mélange réactionnel est agité pendant 5 minutes à 0°C, puis pendant 18 heures à 20 °C environ. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C; le concentrât est acidifié à pH 2 par addition d'environ 15 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. On sépare par décantation l'huile formée dans le mélange réactionnel et la triture dans 200 cm3 d'éther. On obtient un solide amorphe que l'on sépare par filtration, lave 3 fois avec 600 cm3 au total d'éther. On agite très fortement le produit obtenu dans 100 cm3 d'acétate d'éthyle bouillant, puis après refroidissement à 20 °C, on ajoute 100 cm3 d'éther, refroidit la suspension à 0°C pendant XU d'heure, sépare l'insoluble par filtration. Après lavage avec 100 cm3 d'éther, séchage sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20 °C, on obtient 5,15 g d'acide N2-benzyloxycarbonyl N6-[0'-t.butyl (N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] diamino-2 (L), 6(D, L) thia-4 pimélamique.

Rf=0,69 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)]

Spectrométrie de masse = M = 779 (théorie = 779)

On dissout 5 g d'acide N2-benzyloxycarbonyl N6-[0'-t.butyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] diamino-2 (L), 6(D, L) thia-4 pimélamique dans 30 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 28% dans l'acide acétique. On agite le mélange réactionnel pendant 3 heures, le filtre pour le débarrasser d'un léger insoluble et le concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa, puis 0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50°C. Le résidu ainsi obtenu est trituré dans 400 cm3 d'éther, séparé par filtration et repris dans 1,5 litre d'eau sous forte agitation ; il se solubilise instantanément dns l'eau, puis au bout de quelques minutes, il précipite. On le sépare par filtration, le lave successivement avec 50 cm3 d'eau, 50 cm3 d'éther, 50 cm3 d'acétate d'éthyle et 50 cm3 d'éther et le sèche sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 3,2 g d'acide N6-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] diamino-2(L), 6(D, 1) thia-4 pimélamique fondant avec décomposition vers 176°C.

Rf=0,32 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Cale. % C 52,95 H 8,03 N 11,87 S 5,44 Tr. C 49,7 H 7,7 NI 1,0 S 5,1

Cendres sulfuriques: 3,9%

Lan = 0,55 (théorie = 0,5)

méso Lan = 0,50 (théorie = 0,5)

Glu= 1,00 (théorie = 1)

Le chlorhydrate de l'acide N2-benzyloxycarbonyl diamino-2 (L), 6(D, L) thia-4 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

A une solution de 37 g d'acide N2-benzyloxycarbonyl N6-t.butyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique dans 100 cm3 d'acide acétique anhydre, on ajoute 500 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,65 N dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures à une température voisine de 20 °C. Ensuite, on concentre à sec le mélange réactionnel sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa, puis 0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré 4 fois dans 2 litres au total d'éther, séparé par filtration, lavé 3 fois par 600 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 19,1 g de chlorhydrate de l'acide N-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D,L) thia-4 pimélamique.

Rf=0,48 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

[«]d = —22,8° (acide chlorhydrique N; c= 1)

Après hydrolyse dans un mélange acide chlorhydrique concentré-acide acétique anhydre (1-1 en volumes) pendant 5 heures à 96 °C, l'analyse sur autoanalyseur BIOTRONIK révèle la présence des acides aminés suivants: Lan = 0,5 (théorie = 0,5)

méso Lan = 0,5 (théorie = 0,5)

L'acide N2-benzyloxycarbonyl N6-t.butyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 16,8 g de potasse en pastilles dissout dans 190 cm3 d'éthanol anhydre dans une solution de 25,5 g de N-benzyl-oxycarbonyl L cystéine dans 190 cm3 de diméthyl-formamide. A la solution ainsi obtenue, on ajoute 35,8 g de N-t.butyloxycarbonyl O-p.toluènesulfonyl DL sêrinamide dissout dans 190 cm3 de diméthylformamide. On agite le mélange réactionnell pendant 18 heures à 20°C; ensuite on le concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa, puis 0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 60°C. Le résidu

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

23

653 039

ainsi obtenu est repris par 250 cm3 d'eau, extrait 3 fois par 600 cm3 au total d'acétate d'éthyle, acidifié à pH 3 par environ 40 g d'acide citrique. La phase aqueuse ainsi obtenue est extraite 3 fois par 600 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées par 100 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. On obtient ainsi 37 g d'acide N-benzyloxycarbonyl N6-t.butyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D), L) thia-4 pimélamique sous forme d'huile orangée.

Rf=0,49 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)]

Rf = 0,52 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Le N-benzyloxycarbonyl L cystéine peut être préparé selon la méthode de W. Foye et coll., J. Am. Pharm. Ass. 46, 273 (1957).

Le N-t.butyloxycarbonyl O-p.toluènesulfonyl DL sérina-mide peut être préparé de la façon suivante:

En 20 minutes, on ajoute par petites portions 67,5 g de chlorure de p.toluènesulfonyle à une solution refroidie entre -20°C et - 10°C de 67 g N-t.butyloxycarbonyl DL sérin-amide dans 280 cm3 de pyridine. On maintient le mélange réactionnel pendant 1 heure Vi à une température comprise entre — 10°C et —5°C, puis on l'abandonne à 20°C pendant 2 heures Vi. On le verse ensuite sur 550 g d'un mélange eau-glace. Le précipité blanc ainsi obtenu est séparé par filtration, lavé 4 fois par 1,2 litre au total d'eau, séché à l'air, lavé 2 fois par 400 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 73,3 g de N-t.butyloxycarbonyl O-p.toluènesulfonyl DL sérienamide fondant à 161 °C.

Rf=0,82 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)]

Le N-t.butyloxycarbony DL sérinamide peut être préparé de la façon suivante:

Dans une solution de 217 g de N-t.butyloxycarbonyl DL sérinate de méthyle dans 2,17 litres de méthanol, refroidie à 0°C, on fait passer un courant d'ammoniac pendant 7 heures; on laisse ensuite le mélange réactionnel au repos pendant 15 heures à 20 °C, puis de nouveau parés avoir refroidi vers 0°C, on fait passer un courant d'ammoniac pendant 6 heures et on laisse au repos à 20 °C pendant 18 heures. On concentre le mélange réactionnel sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le résidu ainsi obtenu est repris par 1,5 litre d'éther. Les cristaux obtenus sont séparés par filtration, lavés 3 fois par 1,5 litre au total d'éther et séchés à l'air. On obtient ainsi 158 g de N-t.butyloxycarbonyl DL sérinamide fondant à 115-116°C.

Le N-t.butyloxycarbonyl DL sérinate de méthyle peut être préparé selon la méthode de N. BOGGS et coll., J. Org.

Chem., 44, 2262(1979).

Exemple 6

On ajoute 0,28 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à - 10°C, de 382 mg de N-t.butyloxycarbonyl glycine dans un mélange de 32 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,3 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 10°C, puis on ajoute une solution refroidie à 0°C de 1,28 g d'acide N6-[N-(N-Iauroyl L alanyl) -y-D glutamyl] diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique dans un mélange de 4,34 cm3 de soude 1 N et 32 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 5 minutes à 0°C,

puis pendant 70 heures à 20 °C environ. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C, le concentrât est acidifié à pH 2 par addition d'environ 5 cm3 d'acide chorhydrique 1 N,

extrait 3 fois par 90 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. On obtient ainsi 1,7 g de poudre blanche que l'on Chromatographie sur 50 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,4 cm de diamètre. On élue successivement avec 120 cm3 d'acétate d'éthyle, 560 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes), 1,12 litre d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (90-10 en volumes) et 480 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (80-20 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 25 à 57 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré 3 fois dans 90 cm3 au total d'éther, séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient 490 mg d'acide N2-(t.butyloxycarbonylglycyl) N6-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique.

Rf = 0,24 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)]

On dissout 490 mg d'acide N2-(t.butyloxycarbonylglycyl) N6-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique dans 10 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,65 N dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures Z* à une température voisine de 20 °C. Ensuite, le mélange réactionnel est filtré pour le débarrasser d'un léger insoluble et est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu ainsi obtenu est trituré dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration, lavé 3 fois par 150 cm3 au total d'éther. On obtient ainsi 0,42 g de poudre blanche que l'on Chromatographie sur 24 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 1,6 cm de diamètre. On élue avec de l'acide acétique en recueillant des fractions de 10 cm3. Les fractions 24 à 45 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration, lavé 3 fois par 90 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 200 mg de chlorhydrate d'acide N2-glycyl N6-[N-(N-lau-royl L alanyl)-v-D glutamyl) diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique.

Rf = 0,29 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Cale. % C 49,22 H 7,62 Cl 5,19 N 12,30 S 4,69 Tr. C 45,6 H 7,5 Cl 4,6 NI 1,5 S 4,6

Spectrométrie de masse: M = 646 (théorie pour la base = 646).

Après hydrolyse dans un mélange acide chlorhydrique concentré-acide acétique anhydre (1-1) en volumes) pendant 5 heures à 96°C, l'analyse sur autoanalyseur BIOTRONIK révèle la présence des acides aminés suivants:

Lan = 0,59 (théorie = 0,5)

méso Lan = 0,43 (théorie = 0,5)

Glu = 0,97 (théorie = 1)

Gly = 1,00 (théorie = 1)

Exemple 7

On ajoute 0,65 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à - 10°C, de 2,28 g de N-(N-lauroyl L alanyl)-a-D glutamate de t.butyle dans un mélange de 125 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,7 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 40 minutes à — 10°C, puis on ajoute une solution refroidie à 0°C de 1,9 g de chlorhydrate de N2-benzyloxycarbonyl L lanthioninediamide dans un

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mélange de 5 cm3 de soude 1 N et 50 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 minutes vers 0°C, puis pendant 70 heures à 20 °C environ. Le précipité apparu dans le mélange réactionnel est séparé par filtration, lavé successivement par 25 cm3 d'eau, 25 cm3 d'éthanol et 50 cm3d'oxyde d'isopropyle et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 2,9 g de N2-[0'-t.butyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl L lanthioninediamide.

Rf=0,41 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)

On dissout 4,4 g de N2-[0'-t.butyl N-(N-lauroyl L alanyl) -y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl L lanthioninediamide dans 44 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 35% dans l'acide acétique. On agite le mélange réactionnel pendant 4 heures à 20 °C, ensuite on le purge pendant Zi heure avec de l'azote et on le concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu ainsi obtenu est trituré dans 50 cm3 d'oxyde d'isopropyle et séparé par filtration. Cette opération est répétée 2 fois, puis on agite le solide dans 50 cm3 d'acétone pendant une heure, le sépare par filtration, le lave 2 fois par 10 cm3 au total d'acétone et le sèche sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 3,24 g de bromhydrate de N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lanthioninediamide sous forme de poudre crème.

Rf = 0,47 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Cale. % C 46,63 H 7,38 Br 11,93 N 12,55 S 4,79 Tr. % C 42,0 H 7,0 Br 10,1 N 11,1 S 4,4

Glu = 0,87 (théorie = 1)

Lan = 0,88 (théorie = 1)

méso Lan = 0,12 (théorie = 0)

Le chlorhydrate de N2-benzyloxycarbonyl L lanthioninediamide peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 9,56 g de N2-benzyloxycarbonyl N-t.butyloxycarbonyl L lanthioninediamide dans 190 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. On agite le mélange réactionnel pendant 1 heure à 20 °C, le purge pendant V2 heure avec un courant d'azote et le verse sur 950 cm3 d'oxyde d'isopropyle. Après 1 heure Vi d'agitation, on sépare le précipité blanc apparu par filtration, le lave 2 fois par 200 cm3 au total d'oxyde d'isopropyle et le sèche sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 7,95 g de chlorhydrate de N2-benzyloxycarbonyl L lanthioninediamide.

Le N2-benzyloxycarbonyl N6-t.butyloxycarbonyl L lanthioninediamide peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 14,4 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à — 10°C, de 27,7 g de N-benzyloxycarbonyl N6-t.butyloxycarbonyl L lanthionine dans 480 cm3 de tétrahydrofuranne et 13,5 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 20 minutes à — 10 °C, puis on fait passer un courant d'ammoniac dans le mélange réactionnel pendant environ 3 heures vers — 10°C. On concentre à sec le mélange réactionnel sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45 °C. Le résidu pâteux est repris par un mélange de 500 cm3 de solution aqueuse à 7% de carbonate de potassium et 250 cm3 d'acétate d'éthyle. L'insoluble est séparé par filtration, la phase organique est séparée par décantation, la phase aqueuse est extraite par 50 cm3 d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées 3 fois par 150 cm3 au total d'eau, séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45 °C. Le résidu obtenu est agité pendant Vi heure dans 50 cm3 d'oxyde d'isopropyle, séparé par filtration, lavé 2 fois par 50 cm3au totl d'oxyde d'isopropyle et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 9,1 g de N2-benzyloxycarbonyl N6-t.butyloxycar-bonyl L lanthioninediamide fondant à 120°C.

Rf=0,61 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)]

Le N2-benzyloxycarbonyl N6-t.butyloxycarbonyl L lanthionine peut être préparé de la façon suivante:

A une suspension de 16,5 g de N2-benzyloxycarbonyl L lanthionine et de 10,2 g de carbonate de sodium dans un mélange de 100 cm3 d°eau et 300 cm3 de dioxanne, on ajoute 11,6 g de carbonate de di t.butyle en solution dans 100 cm3 de dioxanne. Le mélange réactionnel est agité pendant 69 heures à une température voisine de 20 °C. L'insoluble est séparé par filtration et le dioxanne du filtrat est éliminé par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45 °C. A la solution aqueuse résiduelle, on ajoute 150 cm3 d'une solution saturée d'acide citrique et 150 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est séparée par décantation puis la phase aqueuse et extraite 2 fois par 150 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont réunies, lavées par 100 cm3 d'eau, séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45 °C. On obtient ainsi 27,7 g de N2-benzyloxycarbonyl N''-t.butyloxycarbonyl L lanthionine sous forme d'huile jaune.

Exemple 8

On ajoute 0,4 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à -8°C, de 1,41 g de N-(N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de t.butyle dans un mélange de 67 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,43 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 25 minutes à — 7°C, puis on ajoute une solution refroidie à 0°C de 1,1 g d'acide N7-benzyloxy-carbonyl L, L diamino-2,7 thia-4 subéramique dans un mélange de 3,1 cm3 de soude 1 N et 27 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes à — 7°C, puis pendant 20 heures à 20 °C environ. Ensuite, il est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45°C. Le résidu obtenu est dissous dans 30 cm3 d'eau, acidifié à pH 2 par addition de 3,8 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 2 fois par 100 cm3 au total d'eau et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa, puis 0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 2,9 g de poudre que l'on Chromatographie sur 90 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,5 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 2,9 g de poudre dans un mélange de 30 cm3 d'acide acétique et 15 cm3 d'acétate d'éthyle et à la solution obtenue, on ajoute 9 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50° C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue avec 2,9 litres d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 17 à 55 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé 2 fois par 10 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 1,2 g d'acide N2-[0'-t.butyl N-(N-lau-royl L alanyl)-y-D glutamyl] N7-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,7 thia-4 subéramique.

Rf=0,59 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (4-1 en volumes)]

On dissout 1,2 g d'acide N2[0'-t.butyl N-(N-lauroyl L ala-

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nyl)-y-D glutamyl]N7-benzyloxycarbonyl L, L-diamino-2,7 thia-4 subéramique dans 12 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 33% dans l'acide acétique. On agite le mélange réactionnel pendant 2 heures à 20 °C, le concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C, le reprend par 20 cm3 d'acétate d'éthyle, le concentre à nouveau à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C, le triture dans un mélange de 100 cm3 d'éther et 10 cm3 d'acétate d'éthyle, le sépare par filtration et le lave 4 fois par 80 cm3 au total d'éther. Après séchage sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C, on obtient 950 mg de poudre brune que l'on Chromatographie sur 40 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de

2 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 950 mg de poudre dans un mélange de 30 cm3 de méthanol et 0,4 cm3 d'ammoniaque concentré (d = 0,92) et à la solution obtenue, on ajoute

3 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50° C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec 260 cm3 d'un mélange n.butanol-acide acétique (4-1 en volumes) et 320 cm3 de méthanol en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 14 à 29 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 55 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé 3 fois par 60 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 450 mg d'acide N2-[N-lauroyl L analy)-y-D glutamyl] L, L diamino-2,7 thia-4 subéramique.

Rf = 0,33 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Spectrométrie de masse: M = 603 (théorie = 603)

Analyse: Cale. % C 53,71 H 8,18 N 11,60 S 5,31 Tr. % C 49,5 H 7,6 N 10,3 S 4,93

L'acide N7-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 7(L) thia-4 subéramique peut être préparé de la façon suivante:

A une solution refroidie à -40°C de 720 mg de L cystine dans 90 cm3 d'ammoniac, on ajoute du sodium jusqu'à ce que l'on ait une solution bleue persistante (environ 360 mg de sodium). Ensuite, on ajoute successivement quelques mg de chlorure d'ammonium pour décolorer le milieu réactionnel et 2 g de N-benzyloxycarbonyl L a-amino-y-bromobutyrate de méthyle. On agite le mélange réactionnel pendant Vi d'heure à -35°C, puis on y ajoute 25 cm3 de méthanol refroidi vers -35°C et on l'abandonne pendant 18 heures à 20°C. On le concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. Le résidu obtenu est dissous dans 50 cm3 d'eau. Cette solution est acidifiée à pH 5-6 par addition de 6,5 cm3 d'acide acétique 1 N. Le précipité formé est séparé par filtration,

lavé 3 fois par 60 cm3 au total d'eau et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 600 mg d'acide N7-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 7(L) thia-4 subéramique fondant à 240-244 °C.

Rf=0,40 [silicagel; n.butanol.pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Spectrométrie de masse: M = 355 (théorie = 355)

Un deuxième jet de 600 mg d'acide N7-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 7(L) thia-4 subéramique peut être obtenu de la façon suivante: le filtrat obtenu ci-dessus est concentré à 5 cm3 sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le précipité apparu dans le concentrât est séparé par filtration, lavé 2 fois par 4 cm3 au total d'eau et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20°C.

Le N-benzyloxycarbonyl L a-amino y-bromobutyrate de méthyle peut être préparé selon la méthode de Z. Prochazka et coll., Coll. Czech.Chem. commun. 45, 1982 (1980).

Exemple 9

On ajoute 2,64 cm3 de chloroformiate d'isobutle à une solution, maintenue à — 5°C, de 8 g de N-(N-lauroyl L alanyl) D isoglutamine dans un mélange de 200 cm3 de tétrahydrofuranne, de 400 cm3 de dimêthylformamide et de 2,8 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5°C, puis on ajoute une solution refroidie à 5°C de 7,56 g de chlorhydrate d'acide N2-benzyloxycarbonyl diamino-2 (L), 6(D, L) thia-4 pimélamique dans un mélange de 20 cm3 de soude N et de 80 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant quelques minutes vers 0°C, puis pendant 18 heures à 20 °C environ. Ensuite, le tétrahydrofuranne est éliminé par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le concentrât est débarrassé d'un léger insoluble par filtration et dilué par 2 litres d'eau et 45 cm3 d'acide chlorhydrique N. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 2 fois par 400 cm3 au total d'eau et séché à l'air libre. On obtient ainsi 16,1 g de poudre crème que l'on Chromatographie sur 450 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 5 cm3 de diamètre. Pour cela, on dissout les 16,1 g de poudre dan 100 cm3 d'acétate d'éthyle diédi à 50° C et à la solution obtenue, on ajoute 30 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec 1,5 litre d'un mélange acétate d'éthyle -acide acétique (1-1 en volumes), 750 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (4-6 en volumes) et 750 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (3-7 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 20 à 60 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans 500 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration et lavé par de l'éther. On obtient ainsi 7,1 g d'acide N6-[N-(N-lauroyl L alanyl) D isoglutaminyl] N2-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 6 (D, L) thia-4 pimélamique.

Rf=0,24 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (7-3 en volumes)].

On dissout 7 g d'acide N6-[N-(N-lauroyl L alanyl) D iso-glutminyl] N2-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique dans un mélange de 50 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 33% dans l'acide acétique et de 50 cm3 d'acide acétique. On agite le mélange réactionnel pendant 1 heure à 20 °C, le concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45°C. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration, lavé 2 fois par 100 cm3 au total d'acétate d'éthyle et 3 fois par 150 cm3 au total d'éther. Après séchage sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20 °C, on obtient 8,14 g de poudre rose que l'on dissout dans 500 cm3 d'eau. Après Vi heure d'agitation, le précipité apparu est séparé par filtration, lavé successivement 2 fois par 100 cm3 au total d'eau, 5 fois par 250 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 5,47 g d'acide N6-[N-(N-lauroyl L alanyl) D isoglutaminyl] diamino-2(L), 6 (D, L) thia-4 pimélamique.

Rf = 0,39 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Spectrométrie de masse : M = 588 (théorie = 588)

Analyse: Cale. % C 53,0 H 8,22 N 14,27 S 5,45 Tr. % C 50,0 H 8,1 N 13,1 S 5,0

Le N-lauroyl L alanyl-D isoglutamine peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 6,6 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle dans 330 cm3 d'acide acétique. On ajoute 6,6 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) puis on fait passer un lent courant d'hydrogène pendant 2 heures. Après filtration

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du mélange réactionnel, on verse le filtrat dans 3 litres d'eau. Après 2 heures de repos à 0°C, le précipité apparu est séparé par filtration, lavé 2 fois par 80 cm3 au total d'eau, puis séché. On obtient ainsi 5,16 g de produit auquel on ajoute 0,5 g d'un produit obtenu dans des conditions analogues. Ce mélange est dissous dans 90 cm3 de méthanol bouillant et à la solution obtenue on ajoute 45 cm3 d'eau. Après 2 heures de repos à une température voisine de 20 °C, les cristaux apparus sont séparés par filtration, lavés 2 fois par 60 cm3 au total d'eau et séchés sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa). On obtient ainsi 5,1 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutamine fondant à 163°C.

Rf=0,18 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (4-1 en volumes)]

Analyse: Cale. % C 60,12 H 9,33 N 10,52 Tr. C 60,2 H 9,5 N 10,9

Le N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 2,54 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à 0°C, de 3,9 g d'acide laurique dans 156 cm3 de toluène anhydre et 2,7 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 0°C, puis on ajoute une solution, refroidie à 0°C, de 6,7 g chlorhydrate de L ala-nyl-D isoglutaminate de benzyle dans 52 cm3 d'eau et 2,7 cm3 de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité pendant 65 heures à une température voisine de 20 °C. On obtient une masse réactionnnelle d'aspect gélatineux à laquelle on ajoute 150 cm3 d'acétate d'éthyle. Le précipité est séparé par filtration, lavé par 30 cm3 d'eau puis séché. On obtient 7,6 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle sous forme d'une poudre blanche. La phase aqueuse du filtrat précédent est extraite 2 fois par 100 cm3 au total d'acétate d'éthyle, cette phase acétate d'éthyle est réunie avec la phase organique du filtrat, lavée par 125 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1 N, 120 cm3 d'eau, séchée sur sulfate de magnésium puis concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient à nouveau 1,5 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle. Le produit (7,6 g et 1,5 g) est recristallisé dans 120 cm3 de méthanol. On obtient ainsi 6,6 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle fondant à 169°C.

Rf=0,13 [silicagel; acétate d'éthyle]

Le chlorhydrate de L alanyl-D isoglutaminate de benzyle peut être préparé selon le procédé de S. Kusumoto, Bull. Chem. Soc. Japon 49, 533 (1976).

Exemple 10

En opérant comme à l'exemple 2, mais à partir de N-(N-lauroyl L alanyl) a-D glutamate de t.butyle et d'acide N6-ben-zyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique, on obtient l'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique qui, en opérant des les conditions de l'exemple 3, fournit l'acide N2-[N-(N-lauroyl L ala-nyl)-y-D glutamyl] N6-glycyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

L'acide N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

A une solution de 3 cm3 d'éthanol et 0,33 cm3 de soude 4 N, on ajoute 250 mg de chlorhydrate de N-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamate de méthyle. On agite le mélange réactionnel pendant 1 heure Vi; ensuite, on ajoute 0,65 cm3 d'acide chlorhydrique N et 3 cm3 d'eau pour amener le pH à la neutralité. Après 2 heures de repos à 20 °C, le précipité apparu est séparé par filtration, lavé successivement par 2 cm3 d'éthanol et 2 cm3 d'acétone et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 60 mg d'acide N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf=0,53 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Spectrométrie de masse: M = 341 (théorie = 341) Le N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamate de méthyle peut être préparé de la façon suivante:

A une solution de 1,4 g de N2-trityl N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamate de méthyle dans 6 cm3 d'acétone, on ajoute 0,25 cm3 d'acide chlorhydrique concentré (d= 1,19) et on agite pendant 2 minutes. Ensuite, on ajoute 12 cm3 d'oxyde d'isopropyle. L'huile relarguée est séparée par décantation, dissoute dans 5 cm3 d'acétone et relarguée par addition de 20 cm3 d'oxyde d'isopropyle. Cette huile, séparée par décantation est redissoute dans 5 cm3 de méthanol. A cette solution, on ajoute de l'acétate d'éthyle jusqu'à ce que l'on obtienne un louche persistant. Le précipité ainsi formé, est séparé par filtration, lavé 2 fois par 10 cm3 au total d'acétate d'éthyle et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 400 mg de chlorhydrate de N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamate de méthyle.

Rf=0,70 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Spectrométrie de masse: M = 355 (théorie = 355) Le N2-trityl N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamate de méthyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 0,56 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à — 6°C, de 2,6 g d'acide O'-mêthyl N2-trityl N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélique dans un mélange de 26 cm3 de chloroforme et de 0,6 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes vers - 6°C, puis on ajoute une solution refroidie à 0°C de 31 cm3 de chloroforme ammoniacal (1,4 N). Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure vers 0°C, puis pendant 25 heures à 20 °C environ, puis lavé par 50 cm3 d'eau et séché sur sulfate de sodium. Après concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 40°C, on obtient 2,9 g de N2-trityI N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamate de méthyle souf forme d'huile jaune.

Rf = 0,82 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

L'acide O'-méthyl N2-trityl N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélique peut être préparé selon la méthode de I. Photakt et coll., J.C.S. Perkin I 2599 (1979).

Exempel 11

On ajoute 0,91 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à — 7°C, de 3,43 g de N-(N-lauroyl L alanyl) a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 140 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,98 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 7°C, puis on ajoute une solution refroidie à 2°C de 2,64 g de chlorhydrate d'acide N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 14 cm3 de soude N et 53 cm3 d'eau.

Le mélange réactionnel est agité pendant 2 minutes à — 5°C, puis pendant 20 heures à 20°C environ. Le mélange réactionnel est acidifié par addition de 5 cm3 d'acide chlorhydrique 4 N. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le concentrât est extrait 5 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées par 20 cm3 d'eau et 20 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 5,58 g d'une poudre blanche que l'on Chromatographie sur 100 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,5 m de diamètre. Pour cela, on dissout les 5,58 g de poudre dans 50 cm3 d'acide acétique et à la solution obtenue, on

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ajoute 15 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50° C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec 360 cm3 d'acétate d'éthyle, 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (98-2 en volumes), 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes), et 880 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (90-10 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 27 à 49 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure;/ à 50 °C. Le résidu huileux obtenu est trituré dans un mélange de 45 cm3 d'éther et 15 cm3 d'éther de pétrole, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 2,52 g d'acide N6-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf = 0,50 [silicagel ; acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)]

On dissout 2,5 g d'acide N6-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 7 cm3 de méthanol et 6,75 cm3 de soude 1 N.

On agite le mélange réactionnel pendant 80 minutes. On élimine un léger insoluble par filtration. Au filtrat, on ajoute 10 cm3 d'eau et on acidifie par addition de 8 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. Il se forme un précipité huileux. On extrait l'ensemble 4 fois avec 80 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées par 3 cm3 d'eau, séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. On obtient ainsi une huile que l'on triture dans 50 cm3 d'éther, sépare par filtration et sèche sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 2,18 g d'acide N6-[N-(N-lauroyI L alanyl)-y-D glutamyl] N-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf = 0,47 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Spectre de masse: M = 723 (théorie = 723)

On dissout 2,13 g d'acide N6-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 8,5 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 33% dans l'acide acétique et 8,5 cm3 d'acide acétique. On agite le mélange réactionnel pendant 2 heures, le concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le résidu ainsi obtenu est trituré dans 100 cm3 d'éther, séparé par filtration et repris dans 600 cm3 d'eau sous forte agitation; il se solubilise instantanément dans l'eau, puis au bout de quelques minutes, il précipite. Après 1 heure, on le sépare par filtration, le lave 5 fois avec 250 cm3 au total d'eau et le sèche sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 60° C. On obtient ainsi 1,33 g d'acide N6-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf = 0,30 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)

Rf = 0,43 [silicagel ; acide acétique]

Analyse: Cale. % C 52,95 H 8,03 NI 1,88 S 5,44 Tr. C 51,1 H 8,0 N 11,1 S 4,8

Spectre de masse: M = 589 (théorie = 589)

L'acide N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique peut être préparé selon l'une des méthodes suivantes:

a) On dissout 5,48 g d'acide N2-benzyloxycarbonyl NM.butyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans 50 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. On agite pendant 1 heures, puis on ajoute 500 cm3 d'éther anhydre et on agite pendant d'heure. Le précipité qui s'est formé est séparé par filtration,

lavé 2 fois par 60 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 2,98 g de chlorhydrate de l'acide N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf=0,47 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Après hydrolyse, dérivatisation et Chromatographie sur colonne capillaire optiquement active, on obtient: L lanthionine 95,7% (théorie = 1)

D lanthionine <0,5% (théorie = 0)

méso lanthionine 4,3% (théorie = 0)

L'acide N2-benzyloxycarbonyl N6-t.butyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique peut être préparé de la manière suivante:

A une solution maintenue vers — 75 ° C de 4 g de di t.butyloxycarbonyl L cystinamide dans 200 cm3 d'ammoniac, on ajoute par petites portions du sodium jusqu'à l'obtention d'une coloration bleue persistante pendant quelques minutes. Ensuite, on ajoute successivement du chlorure d'ammonium jusqu'à décoloration du milieu réactionnel et 4,7 g d'acide L a-benzyloxyearbonylamino ß-chloropropionique. Le mélange réactionnel est abandonné pendant 18 heures à 20 °C environ. Le solide crème ainsi obtenu est repris par 80 cm3 d'eau; la solution aqueuse est acidifiée à pH 2 par addition d'une solution saturée d'acide citrique, extraite 5 fois par 150 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées avec 20 cm3 d'eau, séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. On obtient ainsi 7,5 g d'huile jaune que l'on Chromatographie sur 125 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue avec de l'acétate d'éthyle en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 7 à 16 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. L'huile obtenue est dissoute dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle, extraite 4 fois par 200 cm3 au total d'une solution décinormale de soude. Les phases aqueuses réunies sont acidifiées à pH 2 par addition d'une solution saturée d'acide citrique, extraites 4 fois par 100 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 2,5 g d'acide N2-benzyloxycarbonyl N6-t.butyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf=0,62 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)]

Le di t.butyloxycarbonyl L cystinamide peut être préparé de la manière suivante:

On ajoute 16,6 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à — 5°C de 25 g de di t.butyloxycarbonyl L cystine dans un mélange de 500 cm3 de tétrahydrofuranne et de 15,9 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5°C, puis on ajoute 125 cm3 d'une solution de chloroforme ammoniacal 1,4 N en 'A heure. Ensuite en maintenant la température du mélange réactionnel vers - 5°C, on sature pendant 'A heure par un courant de gaz ammoniac anhydre, puis on agite pendant 20 heures à 20 °C environ. On ajoute 100 cm3 de tétrahydrofuranne, on filtre l'insoluble, on le lave 6 fois par 2,25 litres au total d'eau, puis par 1 litre d'acétate d'éthyle et sèche à l'air libre. On obtient ainsi 16,98 g de di t.butyloxycarbonyl L cystinamide.

Rf=0,85 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Rf=0,77 [silicagel; méthanol].

b) On ajoute 950 mg de chlorhydrate d'acide O'-méthyl N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélique dans 11 cm3 d'éthanol ammoniacal 2,3 N et la solution obtenue est conservée pendant 70 heures vers 20 °C. Ensuite, on élimine un léger insoluble par filtration et concentre à sec le

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filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 20 cm3 d'acétone, séparé par filtration et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 0,18 g d'acide N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf=0,62 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Spectrométrie de masse: M = 341 (théorie = 341)

L'acide O'-méthyl N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-

2.6 thia-4 pimélique peut être préparé de la façon suivante:

A une solution de 3 g d'acide O'-méthyl N2-trityl N6-ben-

zyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélique dans 13 cm3 d'acétone, on ajoute 0,52 cm3 d'acide chlorhydrique concentré (d= 1,19) et on agite pendant 2 minutes. Ensuite on verse le mélange réactionnel dans 25 cm3 d'éther. L'huile relarguée est séparée par décantation et triturée dans un mélange de 5 cm3 d'acétone et 25 cm3 d'éther. Le solide blanc formé est séparé par filtration, dissous dans 5 cm3 de méthanol et précipité à nouveau par addition de 50 cm3 d'acétate d'éthyle et 25 cm3 d'éther. Après filtration, lavage par 20 cm3 d'éther et séchage sous pression réduite (20 mm de mercure ;

2.7 kPa) à 20 °C, on obtient 1 g de chlorhydrate d'acide O'-méthyl N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélique.

Rf = 0,64 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Exemple 12

En opérant comme dans l'exemple 3 mais à partir de N-t. butyloxycarbonylglycine et d'acide N6-[N-(N-lauroyl L ala-nyl)-y-D glutamyl] L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique, on obtient l'acide N6-[N-(N-lauroyl L alanyl)-Y-D glutamyl] N2-glycyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Exemple 13

On ajoute 1,95 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à — 7°C, de 6,84 g de N-(N-lauroyl L alanyl) a-D glutamate de t.butyle dans un mélange de 330 cm3 de tétrahydrofuranne et de 2,1 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 7 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 10 °C de 5,11 g d'acide N-benzyloxycarbonyl diamino-2(D), 6(L) thia-4 pimélamique dans un mélange de 15 cm3 de soude N et 130 cm3 d'eau.

Le mélange réactionnel est agité pendant 5 minutes à 0°C, puis pendant 24 heures à 20 °C environ. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C; le concentrât est refroidi à 0°C, acidifié à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 1 N. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1 N puis 2 fois par 200 cm3 au total d'eau et séché à l'air libre. On obtient ainsi 10 g d'acide N2-[0'-t.butyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-ben-zyloxycarbonyl diamino-2(D), 6(L) thia-4 pimélamique.

Rf=0,65 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Rf=0,72 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)]

On dissout 5 g d'acide N2-[0'-t.butyl N-(N-lauroyl L ala-nyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl diamino-2(D), 6(L) thia-4 pimélamique dans 22 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 35% dans l'acide acétique. On agite le mélange réactionnel pendant Vi heure avec un agitateur à ultra sons, puis on le verse dans 1 litre d'éther anhydre refroidi à 0°C. On agite le mélange pendant 1 heure ; le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé 4 fois par 400 cm3 au total d'éther, et dissous dans 100 cm3 de méthanol. A la solution obtenue, on ajoute 5 cm3 d'ammoniaque (d = 0,92). On concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C.

On obtient ainsi 4,36 g de poudre blanche, que l'on Chromatographie sur 200 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3,5 m de diamètre. On élue avec un mélange mêthanol-ammoniaque (d = 0,92) (999,5-0,5 en volumes) en recueillant des fractions de 30 cm3. Les fractions 25 à 39 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 2,8 g de poudre blanche que l'on Chromatographie sur 100 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 2,8 g de poudre dans 50 cm3 de méthanol contenant 0,5 cm3 d'ammoniaque (d = 0,92) par litre et, à la solution ainsi obtenue, on ajoute 3 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 500 C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne di silice. On élue avec un mélange mêthanol-ammoniaque (d = 0,92) (999,5-0,5 en volumes) en recueillant des fractions de 15 cm3. Les fractions 13 à 23 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 0,71 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L ala-nyl)-y-D glutamyl)] diamino-2(D), 6(L) thia-4 pimélamique.

Rf = 0,35 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Cale. % C 52,95 H 8,03 NI 1,87 S 5,44 Tr. C 50,2 M 7,8 NI 1,6 S 5,3

Cendres sulfuriques = 7,3%

Spectre de masse: M = 589 (théorie = 589).

L'acide N6-benzyloxycarbonyl diamino-2(D), 6(L) thia-4 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

A une solution maintenue vers — 70° C de 17,93 g de N-benzyloxycarbonyl L cystéinamide dans 570 cm3 d'ammoniac, on ajoute 12,6 cm3 d'une solution méthanolique 5,6 N de méthyiate de sodium et ensuite par petites portions en l'espace de 10 minutes, 11,3 g de chlorhydrate d'acide D a-amino ß-chloropropionique. Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes vers -60°C, puis abandonné pendant 20 heures à 20 °C environ. Le résidu ainsi obtenu est repris par 200 cm3 d'eau ; la phase aqueuse est débarrassée d'un insoluble par filtration, extraite 2 fois par 400 cm3 au total d'acétate d'éthyle, acidifiée à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 10 N, extraite 2 fois par 400 cm3 au total d'acétate d'éthyle, concentrée à un volume de 170 cm3 sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C, amenée à pH 5-6 par addition de triéthylamine et refroidie à 0°C pendant 2 heures. L'insoluble apparu dans la phase aqueuse est séparé par filtration, lavé 3 fois par 150 cm3 au total d'eau et séché successivement à l'air libre et sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 8,88 g d'acide N6-benzyloxycarbonyl diamino-2(D), 6(L) thia-4 pimélamique.

Rf = 0,48 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

[a]r? = -20° (soude N; c = 1)

Spectrométrie de masse: M = 341 (théorie = 341)

Après hydrolyse, dérivatisation et Chromatographie sur colonne capillaire optiquement active, on obtient:

mésoLan 100% (théorie =1)

L Lan <0,5% (théorie = 0)

D Lan <0,5% (théorie = 0)

Exemple 14

On ajoute 1,92 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à — 10°C, de 6,66 g de N-(N-lauroyl L alanyl) a-D glutamate de t.butyle dans un mélange de 320 cm3 de tétrahydrofuranne et de 2 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 10°C, puis on ajoute une solution refroidie à 10°C de 5 g d'acide N6-benzy-

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653 039

loxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 14,6 cm3 de soude N et 120 cm3 d'eau.

Le mélange réactionnel est agité pendant 5 minutes à 0°C, puis pendant 20 heures à 20 °C environ. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C; le concentrât est dilué avec 200 cm3 d'eau, acidifié à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 1N (25 cm3 environ). A la suspension ainsi obtenue, on ajoute 500 cm3 d'acétate d'éthyle. Après agitation du mélange, on sépare l'insoluble par filtration et on le sèche sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 2,55 g de poudre auxquels on joint 4,45 g obtenus de la façon suivante: dans le filtrat, on sépare la phase organique, on la sèche sur sulfate de sodium et la concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le résidu obtenu est repris par 200 cm3 d'acétate d'éthyle. La solution jaune pâle ainsi obtenue est refroidie à 0°C pendant 1 heure. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 2 fois par 200 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20 °C. Les 7 g de poudre ainsi obtenus sont chromatographiés sur 140 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3,2 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 7 g de poudre dans 50 cm3 d'acide acétique et à la solution obtenue, on ajoute 14 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec 2,15 litres d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 0,3 litre d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 10 à 49 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C.

Le résidu huileux obtenu est repris par 100 cm3 d'acétate d'éthyle. La solution obtenue est refroidie à 0°C pendant 1 heure. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 2 fois par 100 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 3,4 g d'acide N2-[0'-t.butyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf=0,63 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes).

On dissout 3,4 g d'acide N2-[0'-t.butyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 17 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 35% dans l'acide acétique et 10 cm3 d'acide acétique. On agite le milieu réactionnel pendant 2 heures et le concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 55°C. Le résidu huileux obtenu est trituré dans 30 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration, lavé 2 fois par 60 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 4 g de poudre beige que l'on Chromatographie sur 90 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 4 g de poudre dans 50 cm3 de méthanol auquel on ajoute 7 cm3 d'ammoniaque (d = 0,92) et 8 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue avec un mélange mêthanol-ammoniaque (d = 0,92) (999,5-0,5 en volumes) en recueillant des fractions de 10 cm3. Les fractions 13 à 24 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le résidu pâteux est trituré dans 100 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 2,4 g de poudre que l'on Chromatographie sur 90 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 2,4 g de poudre dans 30 cm3 de méthanol auquel on ajoute 4 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue avec un mélange mêthanol-ammoniaque (d = 0,92) (999,5-0,5 en volumes) en recueillant des fractions de 5 cm3. Les fractions 22 à 30 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 1,54 g de poudre. 1 g de cette poudre est mis en suspension dans 50 cm3 d'eau. On dissout la poudre en amenant le pH du mélange à 1,8 par addition d'acide chlorhydrique 0,1 N (40 cm3). Ensuite, on amène le pH à 3,6 par addition de 20 cm3 de soude 0,1 N. Le précipité apparu est séparé par filtration, lavé par 30 cm3 d'eau et séché à l'air libre, puis sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50 °C. On obtient ainsi 0,66 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf = 0,36 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Cale. % C 52,95 H 8,03 N 11,87 S 5,44 Tr. C 52,0 H 8,2 NI 1,5 S 5,4

Spectre de masse : M = 589 (théorie = 589)

L'acide N6-benzyIoxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

A une solution maintenue vers — 75 °C de 2,54 g de N-benzyloxycarbonyl L cystéinamide dans 80 cm3 d'ammoniac, on ajoute 1,72 cm3 d'une solution 5,8 N de méthylate de sodium dans le méthanol. Ensuite, on ajoute 1,6 g de chlorhydrate d'acide L a-amino ß-chloropropionique. Le milieu réactionnel est abandonné pendant 18 heures à 20 °C environ. Le résidu solide obtenu est repris par 50 cm3 d'eau, la phase aqueuse est débarrassée d'un insoluble par filtration, extraite 3 fois par 60 cm3 au total d'acétate d'éthyle, acidifiée à pH 3-4 par addition d'acide citrique et refroidie à 0°C. Après 2 heures de repos à 0°C, le précipité apparu est séparé par filtration, lavé par 10 cm3 d'eau, 3 fois par 30 cm3 au total d'acétate d'éthyle et 3 fois par 30 cm3 au total d'éther, séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 0,83 g d'acide N6-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf=0,54 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

L Lan: 99,2% (théorie: 1)

Méso Lan: 0,8% (théorie: 0)

D Lan : < 0,5% (théorie : 0)

Exemple 15

On ajoute 0,53 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à -5°C, de 1,88 g N-(N-lauroyl L alanyl) a-D glutamate de t.butyle dans un mélange de 100 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,58 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 2°C de 1,5 g d'acide N6-t.butyloxy-carbonylglycyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 4,1 cm3 de soude N et 35 cm3 d'eau.

Le mélange réactionnel est agité pendant 5 minutes à 10°C, puis pendant 20 heures à 20°C environ. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C; le concentrât est refroidi à 0°C, acidifié à pH2 par addition d'acide chlorhydrique 1 N (7 cm3 environ).

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15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

653 039

30

Le mélange réactionnel est extrait 3 fois par 200 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi une huile qui, triturée dans 100 cm3 d'éther, donne une poudre (2,1 g) que l'on Chromatographie sur 60 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,2 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 2,1 g de poudre dans 20 cm3 d'acide acétique et à la solution obtenue, on ajoute 4 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue avec un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 13 à 42 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans 200 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 1,3 g d'acide N2-[0'-t.butyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-t.butyloxycarbonyl-glycyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf=0,49 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes)]

On dissout 1,3 g d'acide N2-[0'-t.butyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-t.butyloxycarbonylglycyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans 30 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. On agite le mélange réactionnel pendant 1 heure, puis on le débarrasse d'un très léger insoluble par filtration, le concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le résidu ainsi obtenu est trituré dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration, lavé successivement par 30 cm3 d'acétate d'éthyle et 2 fois par 60 cm3 au total d'éther et séché. On obtient ainsi 0,9 g de poudre que l'on Chromatographie sur 30 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,1 cm de diamètre. On élue avec de l'acide acétique en recueillant des fractions de 10 cm3. Les fractions 13 à 20 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration, lavé par 30 cm3 d'éther et séché. On obtient ainsi 0,79 g de poudre que l'on dissout dans 40 cm3 d'eau. On amène la phase aqueuse à pH 3,5 par addition de 6 cm3 de soude 0,1 N. Le précipité apparu est séparé par filtration,

lavé par 20 cm3 d'eau et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 0,59 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-glycyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf=0,34 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Cale. % C 51,99 H 7,79 N 12,99 S 4,96 Tr. C 49,9 H 8,0 N 12,8 S 4,9 Cendres sulfuriques: 0,9%

L'acide NM.butyloxycarbonylglycyl diamino-2(L), 6(L) thia-4 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

A une solution maintenue vers - 75 °C de 4,6 g de dì t.butyloxycarbonylglycyl L cystinamide dans 400 cm3 d'ammoniac, on ajoute par petites portions du sodium jusqu'à l'obtention d'une coloration bleue persistante pendant quelques minutes. Ensuite on ajoute successivement du chlorure d'ammonium jusqu'à décoloration du mélange réactionnel et 2,66 g de chlorhydrate d'acide L a-amino ß-chloro-propionique. Le mélange réactionnel est agité pendant 2 heures vers -75°C, puis abandonné pendant 18 heures à 20 °C environ. La pâte blanche ainsi obtenue est triturée dans 100 cm3 d'éthanol et filtrée. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu huileux est trituré dans 50 cm3 d'acide acétique et filtré. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Cette opération est répétée 2 fois avec 60 cm3 au total de méthanol. On obtient ainsi 10,5 g de résidu huileux que l'on Chromatographie sur 250 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3,5 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 10,5 g de résidu dans 50 cm3 de méthanol et à la solution obtenue, on ajoute 20 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50° C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec 1,15 litre d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes), 850 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (2-8 en volumes), en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 26 à 33 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration, lavé par 20 cm3 d'acétate d'éthyle et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 5Ö°C. On obtient ainsi 2 g d'acide N6-t.butyloxycarbonylglycyl diamino-2(L), 6(L) thia-4 pimélamique.

[ci]?? = —9° (soude N ; c = 1)

L Lan: 95,5% (théorie = 1)

D Lan: <0,5% (théorie = 0)

Méso Lan: 4,5% (théorie = 0)

Le di-t.butyloxycarbonylglycyl L cystinamide peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 13 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 5 °C, de 17,6 g de t.butyloxycarbonyl-glycine dans un mélange de 1,7 litre de tétrahydrofuranne et de 14 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes vers — 5°C, puis on ajoute une solution refroidie vers 5°C de 20 g de bromhydrate de L cystinamide dans un mélange de 100 cm3 de soude 1 N et de 1 litre d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant quelques minutes vers 0°C, puis pendant 18 heures à 20 °C environ. Ensuite le tétrahydrofuranne est éliminé par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le concentrât est acidifié à pH3 par addition d'acide citrique et extrait 3 fois par 1,5 litre au total d'acétate d'éthyle. La phase acétate d'éthyle est séchèe sur sulfate de sodium et concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est repris par 700 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé 2 fois par 200 cm3 au total d'éther. On obtient ainsi 19 g de poudre. 15 g de cette poudre sont chromatographiés sur 600 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 4,8 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 15 g de produit dans 100 cm3 de méthanol et à la solution obtenue, on ajoute 15 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec 2,1 litres d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (97-3 en volumes), 1,9 litres d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (96-4 en volumes), 850 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes), 1,7 litre d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (94-6 en volumes), 850 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 900 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) et 950 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 150 à 182 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. La résidu huileux obtenu est trituré dans 400 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé 2 fois par

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200 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 7,5 g de di-t.butyloxycarbonyiglycyl L cystinamide.

Rf=0,38 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)]

Exemple 16

On ajoute 1,15 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à — 6°C de 3,51 g de N-(N-lauroyl L alanyl) D isoglutamine dns un mélange de 260 cm3 de diméthyl-formamide et de 1,23 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 6°C, puis on ajoute une solution refroidie à 5°C de 3 g d'acide N6-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique dans un mélange de 8,8 cm3 de soude N et 70 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes à 5°C, puis pendant 24 heures à 20 °C environ. On le débarrasse d'un léger insoluble par filtration, le dilue avec 700 cm3 d'eau et l'acidifie à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 4 N (environ 6 cm3). Le précipité apparu est séparé par filtration, lavé successivement par 100 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1 N et 3 fois par 600 cm3 au total d'eau et séché à l'air libre. On obtient ainsi 5,6 g de poudre blanche que l'on Chromatographie sur 168 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3,5 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 5,6 g de poudre dans 30 cm3 d'acide acétique et à la solution obtenue, on ajoute 12 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50° C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (7-3 en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 13 à 38 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 3,3 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl) D isoglutaminyl] N6-ben-zyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique.

On dissout 2,25 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] N6-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique dans 16 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 35% dans l'acide acétique. On agite le mélange réactionnel pendant 35 minutes avec un agitateur à ultra-sons, puis on le verse dans 1,5 litre d'éther. On agite le mélange pendant 2 heures. Le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé 3 fois par 150 cm3 au total d'éther, et dissous dans 350 cm3 d'eau. La phase aqueuse est neutralisée à pH 7 par addition d'ammoniaque 0,1 N. Après 16 heures de repos à 20 °C, le précipité apparu est séparé par filtration, lavé successivement 2 fois par 100 cm3 au total d'eau, par 100 cm3 d'éther, 50 cm3 d'acétone, 50 cm3 d'acétate d'éthyle, 50 cm3 de méthanol et 50 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 0,8 g de poudre auquel on joint 0,3 g de poudre obtenue dans un essai similaire et que l'on Chromatographie sur 55 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,5 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 1,1 g de poudre dans 20 cm3 d'acide acétique et à la solution obtenue, on ajoute 3 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50° C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue avec un mélange méthanol-acétate d'éthyle-ammoniaque (d = 0,92) (65-35-0,25 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 7 à 13 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans 30 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé successivement par 5 cm3 d'eau, 3 fois par 15 cm3 au total de méthanol et 3 fois par 30 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite

(0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 0,41 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl) D isoglutaminyl] diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique.

Rf=0,60 [silicagel ; pyridine-acétate d'éthyle-acide acé-tique-eau-méthanol (30-40-6-10-10 en volumes)]

Analyse: Cale. % C 53,04 H 8,21 N 14,27 S 5,44 Tr. C 51,1 H 7,9 N 13,6 S 5,4

Spectre de masse: M = 588 (théorie = 588)

Exemple 17

On ajoute 0,55 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 8°C, de 73,2 mg de N-t.butyloxycarbonyl glycine dans un mélange de 120 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,58 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 8°C, puis on ajoute une solution refroidie à 4°C de 2,46 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl) D isoglutaminyl] diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique dans un mélange de 4,18 cm3 de soude 1 N et 120 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 5 minutes à 0°C, puis pendant 20 heures à 20 °C environ. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le concentrât est acidifié à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 4 N. Le précipité apparu est séparé par filtration, lavé successivement 4 fois par 200 cm3 au total d'eau et 3 fois par 150 cm3 au total d'acétate d'éthyle et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 2,25 g de poudre blanche que l'on Chromatographie sur 112 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3,2 cm de diamètre. On élue successivement avec 1 litre d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (20-80 en volumes) et 1 litre d'acide acétique en recueillant des fractions de 25 cm3. Les fractions 41 à 80 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'éther, séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient 1,04 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl) D isoglutaminyl] N6-(t.butyloxycarbonylglycyl) diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique.

Rf = 0,57 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Rf = 0,69 [silicagel ; acétate d'éthyle-acide acétique (2-8 en volumes)]

On dissout 0,88 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl D isoglutaminyl] N6-t.butyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique dans 12 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,6 N dans l'acide acétique. On agite pendant 35 minutes. On verse le milieu réactionnel dans 120 cm3 d'éther, on agite pendant 1 heure. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 3 fois par 60 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. La poudre ainsi obtenue est dissoute dans 70 cm3 d'eau. On amène le pH de cette solution à 5-6 par addition d'ammoniaque 0,1 N. Après Vi heure de repos, on sépare le précipité formé par filtration, le lave successivement 3 fois par 60 cm3 au total d'eau, 3 fois par 60 cm3 au total d'éther, 2 fois par 40 cm3 au total d'acétate d'éthyle et 2 fois par 40 cm3 au total d'éther et le sèche sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 0,55 g de poudre blanche que l'on Chromatographie sur 25 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 1,6 cm de diamètre. On élue avec de l'acide acétique en recueillant des fractions de 10 cm3. Les fractions 58 à 72 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé 3 fois par 60 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure;

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0,04kPa) à 50°C. On obtient ainsi 300 mg d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl) D isoglutaminyl] N6-glycyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique.

Rf=0,33 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Cale. % C 52,07 H 7,96 N 15,18 S 4,96 Tr. C 50,5 H 8,0 N 14,1 S 4,9

Exemple 18

On ajoute 1 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à — 8°C, de 3,38 g de O-acétyl D lactoyl-L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 160 cm3 de tétrahydrofuranne et de 1,12 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 8 ° C, puis on ajoute une solution refroidie à 2°C de 3,02 g d'acide N-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 16 cm3 de soude N et 60 cm3 d'eau.

Le mélange réactionnel est agité pendant 5 minutes à - 8°C, puis pendant 20 heures à 20°C environ. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C; le concentrât est refroidi à 0°C, acidifié à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 4 N (6 cm3 environ), extrait 5 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées successivement par 40 cm3 d'eau et 20 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. On obtient ainsi 5,68 g d'huile que l'on Chromatographie sur 100 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3 cm de diamètre. On élue successivement avec 400 cm3 d'acétate d'éthyle, 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (98-2 en volumes), 320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes) et 280 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 23 à 34 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 5,06 g d'acide N6-[0!-benzyl N-(0-acétyl D lac-toyl L alanyl)-y-D glutamyl] N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique sous forme d'huile.

Rf=0,67 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Rf = 0,23 [silicagel ; acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)]

On dissout 3,16 g d'acide N6-[0'-benzyl N-(0-acétyl D lactoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 13 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 35% dans l'acide acétique et de 11 cm3 d'acide acétique. On agite le milieu réactionnel pendant 2 heures, puis on y ajoute 500 cm3 d'éther et on laisse reposer une nuit.Xe précipité apparu est séparé par filtration, lavé 3 fois par 150 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 2,22 g d'acide N6-[0'-benzyl N-(0-acétyl D lactoyl L alanyl) -y-D glutamyl] L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique sous forme de poudre hygroscopique.

Rf = 0,83 [silicagel ; isopropanol-eau (6-4 en volumes)]

On dissout 2,20 g d'acide N6-[0'-benzyl N-(0-acétyl D lactoyl L alanyl)-y-D glutamyl] L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 14 cm3 de méthanol et de 14 cm3 de soude 1 N. On agite le mélange réactionnel pendant 2 heures. On le neutralise à pH 7 par addition d'acide chlorhydrique 1 N, on le concentre sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C, on le reprend par 3 cm3 d'eau et on l'acidifie avec 3,5 cm3 d'acide chlorhydrique 4 N. La solution ainsi obtenue est chromatographiée sur une colonne de Sephadex G-10 de 2 mètres de hauteur et 2,2 cm de diamètre.

On élue avec de l'eau en recueillant des fractions de 5 cm3. Les fractions 57 à 69 sont réunies, lyophilisées et séchées sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 60 °C. On obtient ainsi 900 mg d'acide N6-[N-(N-D lactoyl L alanyl) y-D glutamyl] L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf=0,75 [silicagel; isopropanol-eau (6-4 en volumes)] Analyse: Cale. % C 42,58 H 6,10 N 14,60 S 6,69 Tr. C 39,7 H 6,4 N 13,2 S 6,4

L'O-acétyl D lactoyl-L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 5,5 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à -6°C, de 5,61 g d'acide O-acétyl D lactique dans un mélange de 425 cm3 de tétrahydrofuranne et de 6 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 6°C, puis on ajoute une solution refroidie à 3°C de 14,66 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 85 cm3 de soude N et 42 cm3 d'eau.

Le mélange réactionnel est agité pendant quelques minutes à 0°C, puis pendant 18 heures à 20°C environ. On acidifie le mélange à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 1 N (50 cm3 environ). On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Au concentrât, on ajoute 100 cm3 d'acétate d'éthyle et 35 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. La phase organique est séparée, la phase aqueuse est extraite 3 fois par 150 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Toutes les phases organiques sont réunies, lavées par 50 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient une huile que l'on Chromatographie sur 550 g de gel de silice neutre (0,03-0,2 mm) contenus dans une colonne de 5 cm de diamètre. On élue successivement avec 500 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (98-2 en volumes), 700 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (95-5 en volumes), 400 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 600 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 13 à 22 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. On obtient ainsi 8,78 g de O-acétyl D lactoyl-L alanyl-a-D glutamate de benzyle sous forme d'huile.

Rf=0,63 [silicagel; acide acétique-acétate d'éthyle (9-1 en volumes)]

Exemple 19

On ajoute 0,91 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à — 80 C, de 3,04 g de N-(N-octanoyl L alanyl) a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 140 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,98 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à - 8°C, puis on ajoute une solution refroidie à 2°C de 2,64 g d'acide N-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 14 cm3 de soude N et 53 cm3 d'eau.

Le mélange réactionnel est agité pendant 5 minutes à 0°C, puis pendant 4 heures à 20 °C environ. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C; le concentrât est refroidi à 0°C, acidifié à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 4 N (5 cm3 environ), extrait 5 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées successivement par 25 cm3 d'eau et 25 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 5,18 g d'une poudre beige clair que l'on Chromatographie sur 100 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3 cm de diamètre. On élue successivement avec 160 cm3 d'acétate d'éthyle, 360 cm3 d'un

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mélange acétate d'éthyle-acide acétique (97-3 en volumes), 720 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes) et 680 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 15 à 48 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 3,33 g d'acide N6-[0'-benzyl N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf=0,37 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)]

Spectrométrie de masse: M = 757 (théorie = 757)

On dissout 3,33 g d'acide N6-[0'-benzyl N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 33 cm3 de méthanol et de 9,7 cm3 de soude 1 N. On agite le milieu réactionnel pendant 60 minutes. On évapore en partie le méthanol par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le concentrât est dilué par 30 cm3 d'eau, acidifié à pH 1 par addition d'acide chlorhydrique 1 N. On laisse reposer pendant 18 heures. Une huile décante sur les parois; elle est séparée par décantation, lavée 2 fois par 40 cm3 au total d'eau et séchée sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. On obtient ainsi 2,86 g d'huile que l'on Chromatographie sur 77 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 2,86 g d'huile dans 30 cm3 d'acide acétique et à la solution obtenue, on ajoute 8 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec 80 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 80 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), 280 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 5 à 11 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le résidu est trituré dans 40 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 1,94 g de poudre que l'on Chromatographie sur 80 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3,5 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 1,94 g de poudre dans 30 cm3 d'acide acétique et à la solution obtenue, on ajoute 6 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec 600 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) et 400 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (7-3 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 7 à 25 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure;>2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans 30 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 1,44 g d'acide N6-[N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

On dissout 1,4 g d'acide N6-[N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 5,6 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 33% dans l'acide acétique et de 5 cm3 d'acide acétique. On agite le mélange réactionnel pendant 2 heures à 28 °C, le concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 60 cm3 d'éther. Une huile décante sur les parois, elle est séparée par décantation, retriturée dans 50 cm3 d'éther,

séparée à nouveau par décantation, dissoute dans 200 cm3 d'eau. Cette phase aqueuse est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 55 °C. On obtient ainsi une huile que l'on Chromatographie sur 80 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3 cm de diamètre. On élue avec un mélange méthanol-acétate d'éthyle-ammoniaque (d = 0,92) (75-25-0,5 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 15 à 21 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 460 mg de poudre blanche. 360 mg de cette poudre sont dissous dans 5 cm3 d'eau et chromatographiés sur une colonne de Sephadex G-10 de 2 mètres de hauteur et 2,2 cm de diamètre. On élue avec de l'eau en recueillant des fractions de 5 cm3. Les fractions 68 à 84 sont réunies, lyophilisées et séchées sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 60°C. On obtient ainsi 300 mg d'acide N6-[N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Analyse: Cal. % C 49,52 H 7,37 N 13,12 S 6,01 Tr. C 45,3 H 7,4 NI 1,7 S 5,7

Cendres sulfuriques: 1%

Le N-octanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 3,6 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à — 1 °C, de 3,95 g d'acide octanoïque dans 140 cm3 de tétrahydrofuranne et 3,8 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 1 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 0°C, de 9,45 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 54,8 cm3 de soude 1 N et 30 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à — 1 °C puis pendant 20 heures à 20 °C environ. Il est ensuite acidifié à pH 1 par addition d'acide chlorhydrique 1 N. Le tétrahydrofuranne est évaporé sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45 °C, puis le concentrât est extrait par 100 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique ainsi obtenue est lavée 2 fois par 50 cm3 au total d'acide chlorhydrique 1 N et par 25 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium et concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45 °C. On obtient ainsi 10 g d'une huile jaune pâle qui est chromato-graphiée sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 200 g de gel de silice neutre (0,063-0,20 mm). On élue avec de l'acétate d'éthyle en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 7 à 9 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 45°C. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'un mélange éther - éther de pétrole (P.E. = 35-60° C) (1-4 en volumes), séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 3,27 g de N-octanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle sous forme d'une poudre blanche.

Rf = 0,56 [silicagel ; acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes)]

Exemple 20

On ajoute 1 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à 10°C, de 5,047 g de N-(N-docosanoyl L alanyl) a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 160 cm3 de tétrahydrofuranne et de 1,12 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 10 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 2°C de 3,023 g d'acide N-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 16 cm3 de soude N et 60 cm3 d'eau.

Le mélange réactionnel est agité pendant 16 heures à 20 °C environ. On acidifie le mélange réactionnel à pH 1 par addition de 6 cm3 d'acide chlorhydrique 4 N, on l'extrait 5 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases orga5

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niques réunies sont lavées successivement par 30 cm3 d'eau et 30 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C. On obtient ainsi 7,7 g de solide que l'on Chromatographie sur 150 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de

3.5 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 7,7 g de poudre dans 60 cm3 d'acide acétique et à la solution obtenue, on ajoute 20 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50° C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec 240 cm3 d'acétate d'éthyle, 320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (98-2 en volumes), 640 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes), 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 440 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) et 400 cm3 d'acide acétique en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 11 à 60 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 4,51 g d'acide N6-[0'-benzyl N-(N-docosanoxyl L alanyI)-y-D glutamyl] N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique impur.

Rf (tâche principale) = 0,72 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)]

On dissout 4,4 g d'acide N6-[0'-benzyI N-(N-docosanoyl L alanyl)-y-D glutamyl]N2-benzyloxycarbonyl L, L diamino-

2.6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 220 cm3 de méthanol et 10,1 cm3 de soude 1 N. On agite le mélange réactionnel pendant 2 jours, le verse sur un mélange de 670 cm3 d'eau et 13 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N; le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé 5 fois par 125 cm3 au total d'eau et séché sous pression réduite (20 mm de mercure;

2.7 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 2,1 g de poudre crème que l'on dissout dans un mélange de 8 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 33% dans l'acide acétique et de 8 cm3 d'acide acétique. On agite le mélange réactionnel pendant 3 heures à 20 °C. L'insoluble formé est séparé par filtration, lavé successivement 5 fois par 12,5 cm3 au total d'acide acétique, par

5 cm3 d'éther et par 5 cm3 d'éther de pétrole (P.E. = 35-600C), séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 1,66 g de poudre crème. Les filtrats sont réunies, concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C, repris 3 fois par 150 cm3 au total d'éther, concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 30°C et repris par un mélange de 25 cm3 d'éther et de 25 cm3 d'éther de pétrole (P.E. = 35-60°C). Le solide est séparé par filtration puis est lavé 2 fois par 20 cm3 au total d'éther de pétrole (P.E. = 35-60°C) et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20°C. La totalité de la poudre obtenue (1,66 g+ 0,55 g) est versée dans 500 cm3 d'eau fortement agitée. Après 1 heure d'agitation, le précipité est séparé par filtration, lavé 3 fois par 150 cm3 au total d'eau et séché sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 1,52 g de poudre crème que l'on Chromatographie sur 45 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2 cm de diamètre. Pour cela, on dissout 1,52 g de poudre dans 60 cm3 d'acide acétique tiédi à 60° C et, à la solution obtenue, on ajoute 5 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue avec de l'acide acétique en recueillant des fractions de 30 cm3. Les fractions 11 à 27 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de .mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 720 mg de poudre rosée que l'on Chromatographie sur 36 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 720 mg de poudre dans 30 cm3 d'acide acétique et à la solution obtenue, on ajoute 3 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50° C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue avec un mélange acétate d'éthyle-acide acéique (2-8 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 12 à 29 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. Le résidu obtenu est trituré dans un mélange de 25 cm3 d'éther et 25 cm3 d'éther de pétrole (P.E. = 35-60 °C), séparé par filtration et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 220 mg d'acide N6-[N-(N-docosanoyl L aIanyl)-y-D glutamyl] L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.

Rf = 0,32 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Rf=0,60 [silicagel; acide acétique]

Spectre de masse: M = 729 (théorie: 729)

Le N-docosanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 1,95 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 25°C, de 5,19 g d'acide docosanoïque dans un mélange de 150 cm3 de tétrahydrofuranne et de 2,1 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 25 ° C, puis on ajoute une solution de 5,69 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 33 cm3 de soude 1 N et 17 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 30 minutes vers 30 °C, puis pendant 18 heures vers 20 °C environ. On ajoute alors 100 cm3 d'eau et on acidifié à pH 1. On obtient un précipité que l'on sépare par filtration, lave 3 fois par 75 cm3 au total d'eau et sèche sous pression réduite (0,3 mm de mercure; 0,04 kPa) à 20 °C. On obtient ainsi 6,53 g d'une poudre blanche. On en dissout 6 g dans 50 cm3 de tétrahydrofuranne contenant 20 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 3,5 cm de diamètre contenant 180 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par:

1300 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (1-1

en volumes)

600 cm3 d'acétate d'éthyle

500 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne

(95-5 en volumes)

900 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne

(9-1 en volumes)

800 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne

(8-2 en volumes)

1000 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne

(6-4 en volumes)

900 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne

(4-6 en volumes)

500 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne

(2-8 en volumes) et 600 cm3 de tétrahydrofuranne en recueillant des fractions de 100 cm3.

Les fractions 17 à 68 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 50°C. On obtient ainsi 3,31 g de N-docosanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle.

Rf=0,54 [silicagel; acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne (8-2 en volumes)]

La présente invention concerne également les compositions pharmaceutiques qui contiennent au moins un composé selon l'invention en association avec un ou plusieurs diluants ou excipients compatibles et pharmaceutiquement

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

35

653 039

acceptables. Ces compositions peuvent être utilisées soit comme adjuvants de vaccins soit comme stimulants on spécifiques de l'immunité anti-infectieuse et anti-tumorale.

Utilisés comme adjuvants de vaccins, les produits selon l'invention sont administrés en même temps et par la même voie que l'antigène (viral, bactérien, parasitaire ou d'autre nature) contre lequel o souhaite augmenter chez le sujet immunisé (homme ou animal domestique) les réactions d'immunité cellulaire (hypersensibilité du type retardé) ou la production d'anticorps circulants ou locaux.

Les produits sont administrés à des doses relativement faibles (de l'ordre du mg), mélangés avec l'antigène et par la même voie (intramusculaire, sous-cutanée, intraveineuse, intranasale, buccale). Si nécessaire, le produit et l'antigène peuvent être émulsifîés dans un excipient huileux approprié ou incorporés dans des liposomes.

En tant qu'immunostimulants non spécifiques, ils sont administrés à des doses comprises entre 0,1 et 50 mg/kg par voie parentérale (intraveineuse, sous-cutanée, intramusculaire), intranasale, buccale, rectale, ou éventuellement intratu-morale.

Come compositions solides pour administration orale peuvent être utilisés des comprimés, des pilules, des poudres ou des granulés. Dans ces compositions le produit actif est mélangé à un ou plusieurs diluants tels que saccharose, lactose ou amidon. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un lubrifiant, tel que le stéarate de magnésium.

Comme compositions liquides pour administration orale, on peut utiliser des émulsions pharmaceutiquement acceptables, des solutions, des suspensions, des sirops ou des élixirs contenant des diluants inertes, tels que l'eau ou l'huile de paraffine. Ces compositions peuvent comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, édulcorants ou aromatisants.

Les compositions pour administration parentérale peuvent être des solutions stériles aqueuses, des suspensions ou des émulsions. Comme véhicule dans ces derniers cas, on peut employer le polyéthylèneglycol, un propylèneglycol, des huiles végétales, en particulier l'huile d'olive, et les esters organiques injectables, par exemple l'oléate d'éthyle. Ces compositions peuvent contenir également des adjuvants, en particulier des agents mouillants, émulsifiants ou dispersants.

La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple à l'aide d'un filtre bactériologique, en incorporant à la composition des agents stérilisants ou par chauffage. Elles peuvent être également préparées sous forme de compositions solides, rendues stériles par exemple par irradiation, qui peuvent être dissoutes dans de l'eau stérile ou dispersées dans tout autre milieu stérile injectable, éventuellement au moment de l'emploi.

Les compositions pour administration intra-nasale peu-5 vent être des solutions stériles aqueuses, des suspensions ou des émulsions qui peuvent être éventuellement associées à un agent propulseur compatible.

Les compositions pour administration rectale sont des suppositoires qui peuvent contenir, outre le produit actif, des io excipients, tels que le beurre de cacao ou un glycéride semi-synthétique.

Les exemples suivants, donnés à titre non limitatif, illustrent des compositions selon l'invention:

i5 Exemple A

On prépare selon la technique habituelle une solution administrable par voie intraveineuse ayant la composition suivante:

acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D 20 glutamyl] L, L diamino-2,6 thia-4 pimélique 0,5 g soluté injectable 5 cm3

Exemple B

On prépare selon la technique habituelle une solution 25 administrable par voie intraveineuse ayant la composition suivante:

acide N2-[N-(lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl]

N6-glycyl diamino-2(L), 6(D, L) thia-4 pimélamique 0,5 g

3o soluté injectable 5 cm3

Exemple C

On prépare selon la technique habituelle une solution administrable par voie intraveineuse ayant la composition 35 suivante:

acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique 0,5 g soluté injectable 5 cm3

40

Exemple D

45 acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-gIycyl L, L diamino-2,6 thia-4 pimélamique 0,5 g soluté injectable 5 cm3

Ci

Claims

653 039
2 2 1

60 ?

<Ps2'n

B-j g-HHCH-B^

65 dans laquelle R2, R4, Rs, Ri 6, X, m et n sont définis comme dans la revendication 14 et R21 représente un groupement protecteur de la fonction amine différent du groupement protecteur représenté ou porté par Ri6, puis, après déblocage de

-2-2—T-B2

X

,1Ea>»

2

2. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 pour lequel Ri représente un radical hydroxy, caractérisé en ce que l'on fait réagir un dipeptide de formule générale:

h2sçh-b2

<|V.

«h'»

dans laquelle R2, R4, X, m et n sont définis comme dans la revendication 1 et R« représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur, suivie du remplacement du groupement protecteur représenté ou porté par Ró par un atome d'hydrogène et du remplacement du radical Rs, et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

2

REVENDICATIONS 1. Tri-, tètra- ou pentapeptide caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale:

hco-hhchco-hhchco-r

<jh2ch2co-hhch-r2

r.-bs ch-h. 3 4

dans laquelle

RCO- représente un reste d'acide gras dans lequel R représente un radical alcoyle contenant 1 à 44 atomes de carbone substitué ou non par un radical hydroxy, phényle ou cyclohexyle, alcényle contenant 2 à 29 atomes de carbone et pouvant contenir plus d'une double liaison ou un reste d'acide mycolique,

Ri représente un radical hydroxy, amino, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy,

les symboles Rz et R4, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carba-moyle, alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle est érifié ou non par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle, étant entendu que R2 et R4 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène,

R3 représente un atome d'hydrogène ou un reste glycyle ou D alanyle, étant entendu que, lorsque R2 et R4, identiques ou différents, représentent chacun un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle, Rj représente un atome d'hydrogène, X représente un atome de soufre ou un radical méthylène, m et n, identiques ou différents, représentent chacun un nombre entier égal à 1 ou 2, étant entendu que, lorsque X représente un radical méthylène, m et n ne peuvent pas être simultanément égaux à 1, étant entendu que l'alanine liée à l'acide glutamique est sous forme L, l'acide glutamique est sous forme D, la lanthionine, lorsque X représente un atome de soufre et m et n sont égaux à 1, la cystathionine, lorsque X représente un atome de soufre et m et n sont différents, l'homolanthionine, lorsque X représente un atome de soufre et m et n sont égaux à 2, l'acide diamino-2,7 subérique, lorsque X représente un radical méthylène et l'un des symboles m ou n est égal à 1 et l'autre est égal à 2, sont sous forme D, D ; L, L; DD, LL (racémique) ou D, L (méso) ou sous forme des mélanges L, meso ou D, meso, et la thialysine, lorsque l'un des symboles R: ou R4 représente un atome d'hydrogène, X représente un atome de soufre et m et n sont égaux à 1, est sous forme L ou D ou D, L ainsi que leurs sels.
3

653 039

3. Procédé de préparation d'ut; produit selon la revendication 1 pour lequel Ri représente un radical amino, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, caractérisé en ce que l'on fait réagir un dipeptide de formule générale:

eco-hhchco-sechco-25

ch, chgchgcooh dans laquelle R est défini comme dans la revendication 1 et Rs représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 30 atomes de carbone ou benzyloxy, sur un produit de formule générale:

HgirÇH-Hg

40

dans laquelle R2, R4, X, m et n sont définis comme dans la revendication 1 et Re représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la 45 fonction amine est substituée par un groupement protecteur, suivie du remplacement du groupement protecteur représenté ou porté par Rs par un atome d'hydrogène, et isole le produit obenu éventuellement sous forme de sel.
4

un atome d'hydrogène et du radical Rs par un radical hydroxy, et isole le produit obtenu.

4. Procédé de préparation d'un produit selon la revendica-50 tion 1 caractérisé en ce que l'on fait réagir un dérivé de la L alanine de formule générale:

bco-hhchco-oh 55 CIÏj dans laquelle R est défini comme dans la revendication 1, sur un di-, tri- ou tétrapeptide de formule générale:

bco-hhçhco-hhchco-b,

i2ch2cooh dans laquelle R est défini comme dans la revendication 1 et Rs représente un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, sur un produit de formule générale:

60

65

H2ITCHC0-E1

CH2CH2C0-HHCa-E2

(PS,),

Wm (k}n

Eg-HHCH-E^
5

5

653 039

rco-hhchco-hhçhco-r k3

r ch2ch2co-nhch-r2

<K>. <k>„

h.s-ch-r, 2 4

dans laquelle R, Ri, R2, R4, X, m et n sont définis comme dans la revendication 1, étant entendu que r2 et R4 ne peuvent pas représenter simultanément un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié, puis remplace le radical Ri 1 par un atome d'hydrogène, puis isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

» 5

CHgCH^CO-HHCH-Bg

(k)

L2'm .)«

I 2 n

Bg-HH-CH-H10

dans laquelle Rs est défini comme ci-dessus et R'7 est identique au ou différent du radical R7 de l'aminoacide utilisé ci-dessus, suivi du remplacement du radical Ró par un atome 35 d'hydrogène et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

5

5. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on fait réagir un acide de formule générale: HC0-0H

dans laquelle R est défini comme dans la revendication 1, ou un dérivé activé de cet acide, sur un tri-, tètra- ou pentapep-tide de formule générale:

H2HJCHC0-HHCHC0-H1

CHj {jHgCHgCO-NÏÏÇHi-Rg

'h'»

Bg-HHCH-B^

dans laquelle Ri, R2, R4, X, m et n sont définis comme dans la revendication l et Re est défini comme dans la revendication 2, suivie du remplacement du groupement protecteur porté par Re par un atome d'hydrogène, puis isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.
6-hhch~s4

(?:

dans laquelle R2, R4, Rs, Rió, X, m et n sont définis comme dans la revendication 14 et R20 est défini comme dans la revendication 17, puis, après déblocage de la fonction amine 40 protégée par R20, on condense un dérivé de la L alanine de formule générale:

dans laquelle Rs est défini comme dans la revendication 14 et Ri9 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine différent de celui représenté ou porté par Ris, et que, lorsque R19 représente un groupement protecteur de la fonction amine, on fait réagir l'acide de formule générale:

RCO-OH

dans laquelle R est défini comme dans la revendication 1, après déblocage de la fonction amine protégée par R19, puis sépare le produit obtenu de son support et élimine les groupements protecteurs des fonctions amine et carboxy, et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

6

dans la revendication 14, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par R17, condense un dérivé de l'acide glutamique de formule générale:

R18-HH£HC0-E5

CHgUttgCO-OH

dans laquelle Rs et Ris sont définis comme dans la revendication 14, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par Ris, condense un dérivé de la L alanine de formule générale:

bc0-hhçhc0-0h CHj dans laquelle R2, R», Rs, Rió, X, m et n sont définis comme dans la revendication 14 et R20 représente un groupement protecteur de la fonction amine différent de celui représenté ou porté par Ri6, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par R20, on condense un dérivé de la L alanine de formule générale:

h14-hh^hco-oh

CHj dans laquelle Rh est défini comme dans la revendication 14, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par Rm, on condense l'acide de formule générale:

RCO-OH

dans laquelle R est défini comme dans la revendication l, puis sépare le produit obtenu de son support et élimine les groupements protecteurs des fonctions aminés et carboxy, et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

6. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 pour lequel les symboles R2 et/ou R4 représentent un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle estérifié ou non par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle et Ri représente un radical hydroxy caractérisé en ce que l'on fait réagir un aminoacide de formule générale:

HgSÇHCO-Hg dans laquelle R- représente un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, l'aminoacide étant dans ce cas sous forme D, et Rs représente un radical hydroxy ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, sur un peptide de formule générale:

BCO-HHpCO-HH^HCO-Hj

CH, CHg CO -BHCH-B_

<K>.

'h'»

B6-HH-CH-E10

dans laquelle R, Rs, Re, X, m et n sont définis comme précédemment et l'un des symboles R9 ou Rio représentant un radical carboxy, l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylgly-cyle ou N-carbonyl D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle, étant entendu que lorsque R9 et Rio représentent chacun un radical carboxy, Re représente un groupement protecteur de la fonction amine, suivie du remplacement du radical Rs lorsqu'il représente un radical alcoxy contenant de 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, par un radical hydroxy, et du remplacement du groupement protecteur représenté ou porté par Re par un atome d'hydrogène, puis isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.
7

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la fonction amine protégée par R21, on condense l'acide de formule générale:

RCO-OH

dans laquelle R est défini comme dans la revendication 1,

puis sépare le produit obtenu de son support, élimine les groupements protecteurs des fonctions aminés et carboxy, et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

*7

dans laquelle Rs est défini comme ci-dessus et R'7 est identique au ou différent du radical R7 de l'aminoacide utilisé ci-10 dessus, suivi du remplacement du radical Rs par un atome d'hydrogène et du radical Rs par un radical hydroxy, et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

«7

dans laquelle Rt et Rs sont définis comme dans la revendication 7, sur un produit de formule générale:

nyle ou benzyloxycarbonyle par un radical carboxy, fait réagir l'aminoacide de formule générale:

HgBpHCO-Bg

«7

dans laquelle Rt et Rs sont définis comme dans la revendication 6, sur un produit de formule générale:

BCO-NHpHCO-NHÇHCO-Bj

CH. CHgCHgCOHHCHCO-OH

W.

<K>a Eg-KHCHCO-OH

dans laquelle R, Rs, X, m et n sont définis comme dans la revendication I et Ró représente un groupement protecteur de la fonction amine, suivi du remplacement du radical Ró par

7. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 pour lequel les symboles R2 et/ou R4 représentent un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle estérifié ou non par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle et Ri représente un radical amino, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, caractérisé en ce que l'on fait réagir un aminoacide de formule générale:

HgVÇBCO-Hg dans laquelle R7 représente un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, l'aminoacide étant dans ce cas sous forme D, et Rs représente un radical hydroxy ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, sur un peptide de formule générale:

BCO-HHpHCO-NE^HCO-R,.

CH3 CH2CH2CO-NHCH-R9

(CH„)

v| 2'a

<h>»

B6-HH-ch-H10

dans laquelle R, Rs, Re, X, m et n sont définis comme précédemment et l'un des symboles R? ou Rio représentant un radical carboxy, l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle, étant entendu que lorsque Rs et Rio représentent chacun un radical carboxy, Re représente un groupement protecteur de la fonction amine, suivie du remplacement du groupement protecteur représenté ou porté par Ró par un atome d'hydrogène, puis on isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.
8

h22-hhch-r2

(pHg)

m

8. Procédé selon la revendication 6 pour la préparation d'un produit selon la revendication 1 pour lequel les symboles R: et R4 sont identiques et représentent un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle estérifié ou non et Rs représente un radical hydroxy, caractérisé en ce que l'on fait réagir un aminoacide de formule générale:

fl-H CHCO-R-2 » 8
(9=2^

I 2'n h16-heòh-e4

dans laquelle X, m et n sont définis comme dans la revendication 1, l'un des symboles R-> ou R4 représente un radical carboxy et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbo-nyl D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyle, Ria est défini comme dans la revendication 14 et R22 représente un groupement protecteur de la fonction amine différent de celui qui est représenté par Ri6, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par R22, condense un dipeptide de formule générale:

E19-HHpHCO-UHpCO-B5 ch,

9. Procédé selon la revendication 7 pour la préparation d'un produit selon la revendication 1 pour lequel les symboles R2 et Ra sont identiques et représentent un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle et Ri représente un radical amino, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, caractérisé en ce que l'on fait réagir un aminoacide de formule générale:

S.h CEC0-BB i 1 0
10

10 1 5

ch2ch2co-oh

35 dans laquelle Ris représente un groupement protecteur de la fonction amine et Rs représente un radical amino, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par Ris, condense un dérivé de la L alanine de formule générale:

x1 -nhpc0-t1 CHg-Z'g r..-nhchco-oh H I ch.

dans laquelle Xi représente un atome d'hydrogène ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée ou non par un groupement protecteur de la fonction amine, Yi représente un radical hydroxy, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone, benzyloxy, N-glycyle ou N-D alanyle estérifié ou non et Z'2 à la même définition que z2, étant entendu que l'un des symboles z2 ou Z'2 représente un groupement -SH et que lorsque Z'2 représente un reste toluènesulfonyle et méthanesulfonyle, Xi est différent d'un reste glycyle ou D alanyle, puis, lorsque Ris représente un groupement protecteur de la fonction amine, remplace ce groupement protecteur par un atome d'hydrogène et fait agir un dérivé de la L alanine dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine et, dans ce dernier cas, d'un acide gras de formule générale RCOOH dans laquelle R est défini comme dans là revendication 1, après élimination de ce groupement protecteur, ou, lorsque Ris représente un reste L alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine, fait agir un acide gras de formule RCOOH, après élimination de ce groupement protecteur et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

10

cation 1 caractérisé en ce que l'on fixe sur un support approprié un aminoacide ou un peptide de formule générale:

r17-nhçh-r2

W.

<PVn e1ä-m-ch-b4

dans laquelle X, m et n sont définis comme dans la revendication 1, l'un des symboles R2 ou R4 représente un radical caris boxy, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, alcoyloxcarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes 20 de carbone ou benzyle, Rió représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine et Ri 7 représente un groupement protecteur de la fonction amine, étant entendu que les grou-25 pements protecteurs représentés ou portés par Ri6 et R17 sont différents, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par Rn, condense l'acide D glutamique dont les fonctions amine et a-carboxy sont convenablement protégées, c'est-à-dire le produit de formule générale:

30

r, a-nhchco-r_

10. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 pour lequel les symboles R2 et R4 sont identiques ou différents et représentent un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle estérifié ou non et R, représente un radical hydroxy, caractérisé en ce que l'on fait réagir un aminoacide de formule générale:

HgHCHCO-Bg l,

dans laquelle R7 et Rs sont définis comme dans la revendication 5, sur un produit de formule générale:

HgHCHCO-Bg

25 dans laquelle R7 et Rs sont définis comme dans la revendication 7, sur un produit de formule générale:

BC0-HHCHC0-BHCHC0-B, I

ch,

I 5

CI^CHgCO-HHCH-Bg

'K'.

:

35

Bg-HH-CH-B10

dans laquelle R, Rs, X, m et n sont définis comme dans la 4" revendication 1 et Ró représente un groupement protecteur de la fonction amine, l'un des symboles R9 ou Rio représente un radical carboxy et l'autre représente un radical alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle, puis, après remplacement du radical alcoyloxycarbo-45 nyle ou benzyloxycarbonyle par un radical carboxy, fait réagir l'aminoacide de formule générale:

HgHpHCO-Bg H'

50 7

BC0-HHCHC0-HHCHC0-B,

I

CH,

10
11. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 pour lequel les symboles r2 et R4 sont identiques ou 15 différents et représentent un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié et Ri représente un radical amino, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, caractérisé en ce que l'on fait réagir un aminoacide de formule générale:

BCO-HHCHC0-HHCHC0-B

îpH< CH,

I 5

CHgCHgCOxiMÇiiCO-OH

<P2>.

lü2'"

Bg-HHCHCO-OH

dans laquelle R, Rs, X, m et n sont définis comme dans la revendication 1 et Rs représente un groupement protecteur de la fonction amine, suivi du remplacement du radical Ró par un atome d'hydrogène et isole le produit obtenu.
12. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 pour lequel R3 représente un radical glycyle ou D alanyle caractérisé en ce que l'on fait réagir un aminoacide de 60 formule générale:

dans laquelle R, Rs, X, m et n sont définis comme dans la revendication 1 et Rs représente un groupement protecteur de la fonction amine, l'un des symboles R« ou Rio représente un radical carboxy et l'autre représente un radical alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle, puis, après remplacement du radical alcoyloxycarbo-

H11-HHÇHC0-0H

65

dans laquelle R7 est défini comme dans la revendication 6 et Ru représente un groupement protecteur de la fonction amine sur un tri- ou tétrapeptide de formule générale:
13. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on fait réagir un produit de formule générale:

Rt j-HHCHCO-RJ

CHgCHgCO-KHpCO-Y

ch2-z2

dans laquelle Ri est défini comme dans la revendication 1, Ris représente un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste L alanyle dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine ou par un reste d'acide gras, Y représente un radical hydroxy, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone, benzyloxy, N-glycyle ou N-D alanyle estérifié ou non par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle et z2 représente un groupement -SH ou un atome d'halogène, autre que le fluor, ou un reste d'ester réactif tel qu'un radical toluènesulfonyle ou méthanesulfonyle, sur un produit de formule générale:
14. Procédé de préparation d'un produit selon la revendi-

« dans laquelle Rm représente un groupement protecteur de la fonction amine, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par Ri4, condense l'acide de formulé générale:

50

55

RCO-OH

dans laquelle R est défini comme dans la revendication 1, puis sépare le produit obtenu de son support et élimine les groupements protecteurs des fonctions aminés et carboxy, et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.
15

15. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on fixe sur un support approprié un aminoacide ou un peptide de formule générale:

60

65

R17-HHfH-R2

<py»

<?Vn b16-hhch-r4

dans laquelle r2, R4, Rió, R17, X, m et n sont définis comme

653 039

15
16. Procédé de préparation d'un produit selon la revendi-cationl caractérisé en ce que l'on fixe sur un support approprié un aminoacide ou un peptide de formule générale:

dans laquelle R est défini comme dans la revendication 1, puis sépare le produit obtenu de son support et élimine les 20 groupements protecteurs des fonctions aminés et carboxy, et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.
17. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on fixe sur un support approprié le peptide de formule générale:

e20-hhchco-e5

ch2ch2co-hhch-r2

W.

<fH2>n -ch-b.

45

hc0-nhchc0-0h

!:h,

dans laquelle R est défini comme dans la revendication 1, puis sépare le produit obtenu de son support et élimine les groupements protecteurs des fonctions aminés et carboxy, et 50 isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.
18. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on fixe sur un support approprié le peptide de formule générale:

h17-hhçh-h2

<?Vm

<h>»

hi6-hhch-h4

dans laquelle R2, R4, Rie, Rn, X, m et n sont définis comme dans la revendication 14, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par Rn, condense un dipeptide de formule générale:

e.j 9-hh^hgo-nhchco-h5

ch,

chgchgco-oh
19. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fixe sur un support approprié le peptide de formule générale:

55

b21-HHpHCO-HHpHCO-bj ch,

ch_ ch_ co-hhch-e-
20

ch2ch2c0-0h dans laquelle Rs est défini comme dans la revendication 14 et Ri9 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine différent de celui représenté ou porté par Ris, et que, lorsque Ris représente un groupement protecteur de la fonction amine, on fait réagir l'acide de formule générale:

RCO-OH

dans laquelle R est défini comme dans la revendication 1, après déblocage de la fonction protégée par Ris, puis sépare le produit obtenu de son support et élimine les groupements protecteurs des fonctions amine et carboxy, et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

653 039

20. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 pour lequel l'un des symboles R2 ou R4 représente un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyle caractérisé en ce que l'on fixe sur un support approprié la glycine ou la D alanine dont la fonction amine est protégée, puis, après déblocage de la fonction amine, condense un aminoacide ou un peptide de formule générale:

Wn dans laquelle X, m et n sont définis comme dans la revendication 1, l'un des symboles R2 ou R4 représente un radical carboxy et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyle, Ri6 est défini comme dans la revendication 14 et R22 représente un groupement protecteur de la fonction amine différent de celui qui est représenté par Rie, puis après déblocage de la fonction amine protégée par R22, condense l'acide D glutamique dont les fonctions amine et a-carboxy sont convenablement protégées, c'est-à-dire le produit de formule générale:

b. a-nhchc0-bc 10 I 5

chgchgco-oh dans laquelle Ris représente un groupement protecteur de la fonction amine et Rs représente un radical amino, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par Ris, condense un dérivé de la L alanine de formule générale:

b,,-nhchco-oh H 1

dans laquelle Ru représente un groupement protecteur de la fonction amine, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par R», condense l'acide de formule générale:

RCO-OH

dans laquelle R est défini comme dans la revendication 1, puis sépare le produit obtenu de son support et élimine les groupements protecteurs des fonctions aminés et carboxy, et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

20

-uhchco-sg ch_ch_c0-ï

35

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

653 039
21. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 pour lequel l'un des symboles R2 ou R4 représente un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyle caractérisé en ce que l'on fixe sur un support approprié la glycine ou la D alanine dont la fonction amine est protégée, puis, après déblocage de la fonction amine, condense un aminoacide ou un peptide de formule générale:

w.

al6-hhòh-.fi4 .

dans laquelle X, m et n sont définis comme dans la revendication 1, l'un des symboles R2 ou R4 représente un radical carboxy et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbo-nyle D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyle, Ris est défini comme dans la revendication 14 et R22 représente un groupement protecteur de la fonction amine différent de celui qui est représenté par Ri 6, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par R22, condense un dérivé de l'acide glutamique de formule générale :

b1s-heçhc0-b5

ch2ch2c0-0h dans laquelle Rs et Ris sont définis comme dans la revendication 14, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par Ris, condense un dérivé de la L alanine de formule générale:

eco-hhchco-oh I

dans laquelle Rest défini comme dans la revendication 1,

puis sépare le produit obtenu de son support et élimine les groupements protecteurs des fonctions aminés et carboxy, et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.
22. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 pour lequel l'un des symboles R2 ou R4 représente un radical N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle et l'autre représente un atome h'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyle caractérisé en ce que l'on fixe sur un support approprié la glycine ou la D alanine dont la fonction amine est protégée, puis, après déblocage de la fonction amine, condense un aminoacide ou un peptide de formule générale:
23. Médicament caractérisé en ce qu'il est constitué par le produit selon la revendication 1 à l'état pur ou en présence d'un ou plusieurs diluants compatibles et pharmaceutique-ment acceptables.